ES 2 402 477 B1
19 OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
ESPAÑA 11
21
Núme o de publicación: 2 402 477
Núme o de solici ud: 201101162
51 In . CI.:
A61K 31/198 (2006.01)
A23K 1/18 (2006.01)
A23K 1/16 (2006.01)
12 PATENTE DE INVENCIÓN B1
54 Tí ulo: USO DE N-ACETILCISTEÍNA PARA PROTEGER A LOS PECES DE LA INTOXICACIÓN POR
CILINDROSPERMOPSINA.
73 Ti ula /es:
UNIVERSIDAD DE SEVILLA (50.0%)
OTRI-PABELLÓN DE BRASIL, PASEO DE LAS
DELICIAS S/N
41012 SEVILLA (Se illa) ES y
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA (50.0%)
72 In en o /es:
CAMEÁN FERNÁNDEZ, Ana Ma ía;
GUTIÉRREZ PRAENA, Daniel;
JOS GALLEGO, Ángeles Mencía;
PICHARDO SÁNCHEZ, Sil ia;
MORENO NAVARRO, Isabel;
PRIETO ORTEGA, Ana Isabel;
PUERTO RODRÍGUEZ, Ma ía;
GUZMÁN GUILLÉN, Remedios;
MOYANO SALVAGO, Mª Rosa io y
BLANCO RODRÍGUEZ, Al onso
74 Agen e/Rep esen an e:
GONZÁLEZ CARVAJAL, Ramón
22 Fecha de p esen ación:
20.10.2011
43 Fecha de publicación de la solici ud:
06.05.2013
Fecha de la concesión:
04.03.2014
45 Fecha de publicación de la concesión:
11.03.2014
57 Resumen:
La p esen e in ención se e ie e al uso de una
composición que comp ende N-ace ilcis eína (NAC)
pa a el a amien o, p e ención y/o ecupe ación de
e ec os óxicos en peces expues os a
Cilind ospe mopsina (CYN). También se e ie e al uso
de la ci ada composición en la ecupe ación de las
al e aciones his opa ológicas p oducidas en los
ejidos de la lis a que comp ende hígado, iñón,
co azón, b anquias y/o ac o gas oin es inal.
Además, dicha composición se u iliza pa a la
ab icación de un alimen o uncional, un complemen o
i amínico, o un complemen o nu icional.
Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 37.3.8 LP.
A iso:
Uso de N-ace ilcis eína pa a p o ege a los peces de la in oxicación
po Cilind ospe mopsina
5
1O
La
p esen e in ención
se
e ie e
al
uso
de
una
composición que comp ende
N-
ace ilcis eína
(NAC)
pa a
el
a amien o, p e ención
y/o
ecupe ación
de
e ec os
óxicos
en
peces expues os a Cilind ospe mopsina
(CYN).
También
se
e ie e
al
uso
de
la
ci ada composición
en
la
ecupe ación
de
las
al e aciones
his opa ológicas p oducidas
en
los
ejidos
de
la
lis a que comp ende
hígado,
iñón,
co azón, b anquias y/o ac o gas oin es inal. Además, dicha composición
se
u iliza
pa a
la
ab icación
de
un
alimen o uncional,
un
complemen o
i amínico, o
un
complemen o nu icional.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
15
La
NAC,
de i ado ace ilado del aminoácido
an ioxidan e que con iene g upos iol.
L-cis eína, es
un
conocido
20
25
Las aplicaciones de
la
NAC se basan
en
que puede ac ua en e
al
es és
oxida i o po di e en es caminos.
Es
un
p ecu so de
la
sín esis de GSH
ac uando como p o eedo de cis eína y es imulando
la
ac i idad de
las
enzimas ci osólicas in oluc adas
en
el ciclo del GSH, ales como Glu a ión
educ asa (GR), que aumen a
la
asa de egene ación de GSH. Po o o
lado,
in
i o e in i o ac úa di ec amen e, a a és de
su
g upo iol, sob e
di e en es especies eac i as de oxígeno (ROS) ales como ácido
hipoclo oso, adical hid oxilo y pe óxido de hid ógeno (A uoma
0.1.
e
al.
(1989) F ee
Rad.
Biol. Med. 6:593-597).
30
35
Se
ha
desc i o que
la
inyección de NAC mejo a el es ado edox de
GSH
en
el
hígado de anguilas
(A.
anguil/a) in oxicadas con o gano os o ados
(diclo os), inc emen ando
su
ole ancia
al
es és oxida i o y
la
nec osis
p o ocadas po
inges ~
de pes icidas, pa icula men e
en
el caso de
o gano os o ados o pi e oides (ES2249167 A1).
En
el campo de las
ciano oxinas,
su
uso queda es ingido a
su
ac i idad p o ec o a en e
al
es és oxida i o y
la
e e sión de las lesiones his opa ológicas inducidas po
mic ocis inas (MCs)
en
peces (W02010061018 -A1, Caméan Fe nández
A,
e al.,
201
O)
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DESCRIPCIÓN
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10
15
20
25
30
35
Po o o lado,
la
CYN
es una oxina p oducida po cianobac e ias óxicas
p esen es
en
aguas supe iciales, pe enecien es
al
menos a seis géne os,
siendo las especies iden i icadas
en
los momen os ac uales
Cylind ospe mopsis acibo skii, Anabaena be gii, Aphanizomenon
o a/ispo un, Aphanizomenon los-aquae, Umezakia na ans, y Raphidiopsis
cu a a, en e o as.
CYN
se aisló po p ime ez de
un
cul i o de
Cylind ospe mopsis acibo skii, ob enido
de
los ese o ios de agua de
bebida que su ían a
la
población de Palm lsland, Queensland, Aus alia
(Oh ani
l.
e
al.,
(1992)
J.
Am. Chem. Soc. 144:7941-7942), Se ha
comp obado
su
acumulación
en
peces y c us áceos, a ec ando a
la
calidad y
segu idad
de
es e ipo de alimen os y suponiendo
un
iesgo po encial pa a
el
consumido .
En
compa ación
con
los mamí e os, los es udios sob e e ec os
óxicos de
CYN
en
peces
son
muy escasos, des acando que puede a ec a
no
sólo
al
hígado sino ambién
al
iñón, co azón, b anquias, y ac o
gas oin es inal.
Las
cianobac e ias cons i uyen pa e de
la
die a de di e sos
cip inídos y cíclidos, como es el caso, po ejemplo, de las Tilapias
(O ech omis, sp.).
La
Tilapia (O eoch omis sp.) es uno de los pescados que
más ápidamen e
se
ha
in oducido
en
acuicul u a, po
la
acilidad que
p esen a
su
manejo, g an capacidad de adap ación a condiciones ad e sas y
ácil ep oducción; sus dis in as a iedades son il ado as y consumido as
de cianobac e ias y
en
Eu opa
se
es á despe ando
un
g an in e és po
su
cul i o.
Como mecanismo de acción óxica más acep ado,
la
CYN
es á conside ada
un
ci o oxina gene al que bloquea
la
sín esis de p o eínas
en
células
euca io as de mamí e os y plan as (Te ao
K.,
e
al,
(1994) Toxican 32:833-
843; Runnega
M.T.
e
al.
(1995) Biochem. Pha macol. 49:219-225) y
disminuye los con enidos de Glu a ion (GSH).
La
disminución de
GSH
no
pa ece conlle a a
un
inc emen o del es és oxida i o
en
la
célula,
sugi iéndose que
no
es
un
mecanismo p ima io de
la
oxicidad de CYN.
Sin
emba go, ecien emen e,
se
ha
comp obado
la
pa icipación di ec a del
es és oxida i o
en
la
pa ogénesis de
CYN
en
peces (Gu ie ez-P aena
D.
e
al.
(2011) Aqua . Tox. 105:100-106; Pue o
M.
e
al., (2011) Eco oxicology,
acep ado,
en
p ensa), de ec ándose
un
aumen o en
la
p oducción de
especies eac i as de oxígeno (ROS), lipope oxidación (LPO) y oxidación de
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p o eínas, así como cambios
en
la
ac i idad de di e sas enzimas
an ioxidan es
en
peces.
Los
escasos es udios oxicológicos ealizados has a
la
ac ualidad
han
conducido
al
es ablecimien o de una lnges a Dia ia
Tole able (IDT) p o isional de 0,03 ¡Jg/Kg/día de
CYN,
y
la
p opues a de
un
alo guía p o isional de 1
¡Jg/L
de
CYN
en
aguas de bebida.
Ac ualmen e
no
exis e
un
a amien o an idó ico especí ico
en
casos de
in oxicación po
CYN
y sus epíme os p oceden es de cianobac e ias. Has a
la
echa
no
se
conoce ningún a amien o capaz de ecupe a a los humanos,
mamí e os y peces in oxicados
con
CYN. Teniendo
en
cuen a
la
ubicuidad
de es a oxina,
se
hace necesa io ecupe a peces que p esen en
al e aciones his opa ológicas con di e en es ni eles de a ección, que pueden
impedi el ciclo de ida no mal
de
los peces a ec ados.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La
p esen e in ención
se
e ie e
al
uso de
una
composición que comp ende
NAC
pa a
el
a amien o, p e ención y/o ecupe ación de e ec os óxicos
en
peces expues os a
CYN.
En
ilapias (O eoch omis sp.) expues as a dosis únicas y epe idas de
CYN
se
inducen es és oxida i o y al e aciones pa ológicas.
En
conc e o, se han
comp obado a iaciones dosis-dependien e
en
la
ac i idad de di e sas
enzimas an ioxidan es, disminución de los ni eles de Glu a ión (GSH),
aumen o de los ni eles de lipope oxidación (LPO), de oxidación de p o eínas
y del ADN,
en
di e en es ó ganos (hígado, iñón), y múl iples al e aciones
his opa ológicas
en
ó ganos di e sos como hígado, iñón, co azón, ac o
gas oin es inal y b anquias.
La
NAC adminis ada
en
es a in ención
se
mues a e ec i a man eniendo el
es ado de salud del pez, p e iniendo daños causados po
la
oxina y/o
mejo ando los e ec os óxicos inducidos po
CYN
en
di e sos ó ganos de
ilapias in oxicadas.
Además,
el
uso de
NAC
como adi i o alimen a io
no
sólo mejo a los ni eles
de
GSH
en
hígado y iñón, sino que po
su
p opia ac i idad an ioxidan e es
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capaz de disminui
la
lipope oxidación (LPO) (hígado, iñón),
la
oxidación de
p o eínas
en
iñón inducida po CYN, y ecupe a las lesiones
his opa ológicas inducidas en múl iples ó ganos como hígado, iñón,
co azón, ac o gas oin es inal y b anquias.
En
es e sen ido,
un
p ime aspec o de la p esen e in ención se e ie e al uso
de una composición que comp ende
NAC
pa a
la
elabo ación de
un
medicamen o ú il
en
el
a amien o, p e ención y/o ecupe ación de e ec os
óxicos
en
peces expues os a
CYN.
NAC
es
el
de i ado N-ace il del aminoácido L-cis eína.
La
NAC es
el
p ecu so
del glu a ión.
El
glu a ión iene
un
g upo iol (sul id ilo) que
le
con ie e e ec os
an ioxidan es po medio de
la
educción de adicales lib es.
La
composición de
la
p esen e in ención comp ende,
al
menos,
NAC.
El
medicamen o es á compues o,
al
menos, po
la
composición an e io .
La
NAC,
sus sales, de i ados a macéu icamen e acep ables o sus p o á macos, se
o mulan
en
una composición a macéu ica ap opiada,
en
la
can idad
e apéu icamen e e ec i a, jun o
con
uno o más ehículos, adyu an es o
excipien es a macéu icamen e acep ables.
El
medicamen o se emplea pa a
el
a amien o de
los
e ec os óxicos
en
peces expues os a
CYN.
Po
un
"de i ado a macéu icamen e acep able" se en iende cualquie sal,
a macéu icamen e acep able o cualquie o o compues o que después de
su
adminis ación, es capaz de p opo ciona (di ec a o indi ec amen e) NAC.
Un
" ehículo a macéu icamen e acep able" se e ie e a aquellas sus ancias,
o combinación de sus ancias, conocidas en
el
sec o a macéu ico, u ilizadas
en
la
elabo ación de o mas a macéu icas de adminis ación e incluye
sólidos o líquidos, disol en es, ensioac i os, e c.
El
é mino " a amien o" al como
se
en iende
en
la
p esen e in ención supone
comba i los e ec os óxicos pa a es abiliza
el
es ado de oxicidad de los
indi iduos.
El
medicamen o
se
emplea ambién pa a
la
p e ención de
los
e ec os
óxicos ocasionados a
los
peces expues os a
CYN.
El
é mino "p e ención" al
como
se
en iende
en
la
p esen e in ención consis e
en
e i a
la
apa ición de
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e ec os óxicos en peces expues os a CYN.
En
es e caso, p e iamen e a
la
in oxicación po CYN, los peces es án p o egidos po
un
aumen o de las
de ensas an ioxidan es p oducido po
la
acción de la NAC.
El
medicamen o
ambién se emplea pa a
la
ecupe ación de los e ec os óxicos ocasionados en
5 peces expues os a CYN.
El
é mino "e ec os óxicos" al como se en iende
en
la
p esen e in ención hace
e e encia a
la
consecuencia de i ada de
la
exposición del pez a
la
CYN, es
deci ,
la
apa ición de di e sos e ec os ad e sos, como po ejemplo,
un
daño
1 O celula que ocasiona
un
daño
en
los ejidos biológicos,
lo
que a
su
ez puede
p o oca
un
cambio en
las
unciones isiológicas y en el me abolismo celula .
La
CYN es una oxina de na u aleza alcaloide, en cuya es uc u a in e iene
un
g upo icíclico guanidinio unido a hid oxime ilu acilo.
Es
p oducida po
al
menos
15
seis géne os de cianobac e ias, que se encuen an ampliamen e dis ibuida en
aguas opicales y sub opicales. Pueden exis i dos posibles epíme os de o ma
na u al, cilind ospe mopsina (CYN) y 7-epicilind ospe mopsina, ambos óxicos;
la
comple a pé dida del g upo u acilo elimina
la
oxicidad de CYN.
En
ese as
na u ales de agua
se
ha desc i o o a a ian e, la 7 -desoxicilind ospe mopsina,
20
cuya oxicidad apenas es á es ablecida, siendo menos óxica en a ón que CYN.
Un
segundo aspec o de
la
p esen e in ención es el uso de una composición que
comp ende N-ace ilcis eína pa a la elabo ación de
un
medicamen o ú il en la
ecupe ación de e ec os óxicos
en
peces expues os a CYN.
El
é mino
25
" ecupe ación" hace e e encia a
la
desapa ición de los e ec os óxicos causados
po
la
in oxicación con CYN. Es a ecupe ación supone
la
e e sión o al de los
daños causados en los ejidos del
pez,
ecupe ando de es a o ma las unciones
no males de los ó ganos a ec ados.
30
En
una ealización p e e ida de
la
p esen e in ención, los e ec os óxicos son
al e aciones his opa ológicas.
El
é mino "al e aciones his opa ológicas" al como
se en iende
en
la
p esen e in ención son daños p oducidos
en
los ejidos
biológicos del
pez.
Es os daños son de ec ados po medio del análisis a ni el
mic oscópico de las es uc u as pa ológicas de las di e en es mues as
35
ob enidas, sin exclui o as écnicas de de ección.
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Una ealización
aún
más p e e ida de
la
in ención,
es
el
uso donde
las
al e aciones his opa ológicas son p oducidas
en
al
menos uno de los ejidos de
la
lis a que comp ende hígado,
iñón,
co azón, b anquias o ac o
gas oin es inal. Tal como
se
ha
mencionado an e io men e,
la
CYN
puede
5 acumula se
en
el
ejido hepá ico y ambién puede llega a o os ó ganos
u ilizando
la
sang e como medio de dispe sión, de es a o ma,
la
oxina puede
causa e ec os óxicos y/o al e aciones his opa ológicas
en
los
ci ados ó ganos.
La
ecupe ación de
los
ejidos a ec ados po
las
al e aciones his opa ológicas
es
un
aspec o des acable de
la
p esen e in ención ya que puede supone
la
1O cu ación de
los
peces cul i ados, peces seleccionados po di e sas
ca ac e ís icas pa a
la
c ía,
peces de especies
en
pelig o de ex inción o
cualquie o o ipo de pez que p esen e al e aciones his opa ológicas
en
un
g ado e e sible.
15
En
o a ealización más p e e ida de
la
p esen e in ención,
la
NAC
se
adminis a
en
una can idad dia ia de en e 400 y 880
mg
po
Kg
de peso del
pez.
Es a
adminis ación se lle a a cabo du an e
al
menos una semana. P e e iblemen e
la
can idad dia ia inco po ada a los peces es de en e 400 y 880
mg
po
Kg
de
peso (equi alen es a
22
y 45mgNAC/Kg/día).
20
Es a composición, se puede adminis a de dis in as o mas, en e ellas, pe o
sin limi a se, in ape i onealmen e, o almen e, bucalmen e,
in amuscula men e o de o ma subcu ánea. Más p e e iblemen e se
adminis a de o ma o al o in ape i oneal.
En
o a ealización más p e e ida
25
la
composición se p esen a en una o ma adap ada a la adminis ación o al o
in ape i oneal.
Los
peces in oxicados es án expues os a más de
10
¡Jg
CYN/L agua po día
du an e
14
días (in oxicación subc ónica). P e e iblemen e
los
peces es án
30
expues os a más de 200
¡Jg
CYN/
kg
de pez
en
exposición
única.
O a ealización p e e ida de
la
p esen e in ención, comp ende
el
uso de
la
compos1c1on
an e io men e desc i a que además incluye excipien es
a macológicamen e acep ables.
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El
é mino "excipien e" hace e e encia a una sus ancia que ayuda a
la
abso ción de
la
sus ancia ac i a
(en
la
p esen e in ención, NAC), es abiliza
dicha sus ancia ac i a o ayuda a
la
p epa ación del medicamen o
en
el
sen ido de da le consis encia o apo a sabo es que
lo
hagan más ag adable.
Así pues, los excipien es pod ían ene
la
unción de man ene los
ing edien es unidos como po ejemplo almidones, azúca es o celulosas,
unción de endulza , unción de colo an e, unción de p o ección del
medicamen o como po ejemplo pa a aisla lo del ai e y/o
la
humedad,
unción de elleno de una pas illa, cápsula o cualquie o a o ma de
p esen ación como po ejemplo el os a o de calcio dibásico, unción
desin eg ado a pa a acili a
la
disolución de
los
componen es y
su
abso ción
en
el in es ino sin exclui o o ipo de excipien es
no
mencionados
en
es e
pá a o.
El
é mino "excipien e a macológicamen e acep able" hace e e encia a que
el
excipien e es é pe mi ido y e aluado de modo que
no
cause daño a los
o ganismos a los que
se
adminis a.
En
una
ealización
más
p e e ida
de
la
in ención,
la
composición comp ende
además
o a
sus ancia
ac i a.
En
cada caso
la
composición
se
adap a á
al
ipo de adminis ación u ilizada,
po ello,
la
composición de
la
p esen e in ención
se
puede p esen a bajo
la
o ma de soluciones o cualquie o a o ma de adminis ación clínicamen e
pe mi ida y
en
una can idad e apéu icamen e e icaz.
O as ealizaciones p e e idas
son
el
uso
pa a
la
ab icación
de
un
alimen o
uncional,
el
uso
pa a
la
ab icación
de
un
complemen o i amínico y o a
más
es
el
uso
pa a
la
ab icación
de
un
complemen o nu icional.
La
NAC
puede
o ma pa e
de
un
alimen o uncional, complemen o i amínico,
complemen o nu icional o cualquie a de
sus
combinaciones.
Tal
como
se
en iende
en
la
p esen e in ención,
un
alimen o uncional cumple
una
unción
especí ica como
puede
se
la
de
mejo a
la
salud
de
los
peces.
Pa a
ello
al
alimen o uncional
se
le
puede ag ega
un
complemen o i amínico y/o
complemen o nu icional.
El
alimen o uncional,
los
complemen os desc i os o
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cualquie a de sus combinaciones pueden adminis a se jun o con
un
pienso,
o ma pa e de
la
composición del pienso o pueden adminis a se de o ma
independien e.
5
En
una ealización p e e ida, de
la
p esen e in ención,
los
peces
son
cul i ados.
Se en iende po "peces cul i ados" aquellos peces c iados
en
pisci ac o ías,
cha cas o cualquie con enedo de agua de cualquie amaño que pe mi a
la
c ía
de peces y/o
el
engo de.
Los
peces cul i ados pueden
se ,
sin limi a , peces
1o des inados a
la
alimen ación o a
la
c ía de peces o namen ales.
En
o a ealización p e e ida, de
la
p esen e in ención, los peces pe enecen
al
géne o O eoch omis
sp.
15
Los peces pe enecien es a es e géne o se conocen como Tilapias. Las
Tilapias c ecen en aguas cálidas dulces o saladas y ienen pocas exigencias
espi a o ias, ápido c ecimien o y acilidad pa a
la
pues a. Los peces se
pueden selecciona , sin limi a se, a
la
lis a que comp ende
O.
amphimelas,
O.
ande sonii,
O.
angolensis,
O.
au eus,
O.
chung u uensis ,
O.
esculen us,
20
O.
hun e i,
O.
ismailiaensis,
O.
jipe,
O.
ka omo,
O.
ka ongae,
O.
ko ogwe,
O.
Jepidu us,
O.
Jeucos ic us,
O.
/ido/e,
O.
mac ochi ,
O.
malaga asi,
O.
mo ime i,
O.
mossambicus,
O.
mwe uensis,
O.
nilo icus (Nile ilapia),
O.
Pan ani,
O.
pangani gi igan,
O.
pangani pan ani,
O.
p/acidus,
O.
placidus
placidus,
O.
placidus u umae,
O.
ukwaensis,
O.
saka,
O.
salinicola,
O.
25
schwebischi,
O.
shi anus,
O.
shi anus chilwae,
O.
shi anus shi anus,
O.
spi/u us,
O.
spi/u us nige ,
O.
spilu us pe ci ali,
O.
spi/u us spilu us,
O.
squamipinnis,
O.
anganicae,
O.
upembae,
O.
u olepis,
O.
u olepis
homo um,
O.
u olepis u olepis u
O.
a iabilis. Más p e e iblemen e los peces
pe enecen a
la
especie
O.
nilo icus (Nile ilapia).
30
A
lo
la go de
la
desc ipción y las ei indicaciones
la
palab a "comp ende" y
sus a ian es no p e enden exclui o as ca ac e ís icas écnicas, adi i os,
componen es o pasos. Pa a los expe os en
la
ma e ia, o os obje os,
en ajas y ca ac e ís icas de
la
in ención se desp ende án en pa e de
la
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desc ipción y en pa e de
la
p ác ica de
la
in ención. Las siguien es igu as y
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En
los peces a los que se les adminis ó
CYN
jun o
con
45
mg
NAC/pez/día se
obse ó es uc u almen e y ul aes uc u almen e una mo ología del pa énquima
enal o almen e no mal (FIG. 5
G,
H).
A,
8: Riñón de los peces con ol.
C,
D:
His ología de peces a ados con CYN.
C.
De alle de pa énquima enal
con glomé ulos a ó icos (cí culo) y dila ación de
la
capsula de 8owman
(es ella).
D.
Mic o ellosidades de los úbulos con o neados p oximales
ume ac os y pé dida de dichas mic o ellosidades ( lecha).
E,
F:
Tilapias expues as sólo a NAC (45
mg
NAC/pez/día).
E.
Pa énquima
enal con glomé ulo enal apa en emen e no mal.
F.
De alle del úbulo
con o neado p oximal apa en emen e no mal.
G,
H:
His ología del iñón de peces a ados con CYN+ NAC (45 mg
NAC/pez/día)
G.
Glomé ulos y úbulos con apa iencia no mal. H Memb ana
basal apa en emen e no mal.
Ejemplo
4.
NAC
mejo ó las al e aciones his opa ológicas inducidas en
co azón.
El
es udio his opa ológico ealizado sob e peces a ados
con
CYN
mos a on
es uc u almen e a ni el de co azón
un
p oceso de mio ib olisis, con pé dida de
mio ib illas, p esencia de edemas y hemo agias. Ul aes uc u almen e se
ap eció cla amen e es a mio ib olisis de
la
ib a ca diaca, ca ac e izada po una
pé dida de las mio ib illas (FIG. 6
C,
D).
El
co azón de los peces del lo e con ol
p esen ó una es uc u a apa en emen e no mal (FIG. 6
A,
8).
Los
peces a ados solo
con
NAC
(22
y 45
mg
NAC/pez/dia) p esen an una
mo ología de las ib as ca diacas simila es a
las
del g upo con ol (FIG. 6
E,
F).
Los
p ocesos degene a i os
en
co azón que se obse a on
en
los peces
a ados
con
CYN
ue on mucho más le es
en
aquellos peces a ados
con
suplemen o de
NAC
a
la
dosis más baja
(22
mg
NAC/pez/dia), obse ándose
cie a pé dida de mio ib illas y lige as hemo agias aisladas, de escaso in e és
(FIG. 6
G,
H).
No
se obse a on lesiones
en
los a ados
con
la
dosis más
ele ada (45
mg
NAC/pez/día) (FIG. 6
1,
J).
A,
8: Co azón de peces con ol.
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C,
D:
His ología del co azón de peces a ados con CYN.
C.
Mio ib olisis,
pé dida de mio ib illas (cí culo), cie os edemas (es ella).
D.
Pé dida y
desin eg ación de las mio ib illas (cí culo).
E,
F:
Co azón de peces a ados con NAC (dosis 45 mg NAC/pez/día)
E.
De alle de co azón con ib as muscula es apa en emen e no mal.
F.
Es uc u a de las mio ib illas p ác icamen e no mal.
G,
H:
His ología del co azón de peces a ados con CYN+NAC (22 mg
NAC/pez/día)
G.
De alle de mioca dio con ib as muscula es apa en emen e
no males pe o con cie as hemo agias (cí culo).
H.
De alle de mio ib illas
con escasa pé dida de ma e ial con ác il (cí culo).
1,
J:
His ología del co azón de peces a ados con CYN+NAC (45 mg
NAC/pez/dia)
l.
De alle de co azón con ib as muscula es apa en emen e
no mal. J. De alle de mio ib illas apa en emen e no mal.
Ejemplo
5.
NAC mejo ó las al e aciones his opa ológicas inducidas
en
in es ino.
A ni el de in es ino en los peces a ados con CYN se obse a on lesiones,
en e
al
lo e con ol (FIG. 7
A,
B),
ca ac e izadas po
un
p oceso de en e i is con
nec osis de en e oci os,
al
mic oscopio óp ico (FIG. 7C), y
al
mic oscopio
elec ónico, po una pé dida de mic o ellosidades muy mani ies a (FIG. 7D).
T as
la
adminis ación de las dos dosis de NAC (22 y
45
mg
NAC/pez/día,
equi alen es a 400, 880 mg/kg) solo se obse ó una ac i idad mani ies a de las
células calici o mes, sin in e és pa ológico (FIG. 7
E,
F).
Los peces a los que se les adminis ó NAC jun o con
la
oxina CYN mos a on
una p o ección con ambas dosis,
con
una es uc u a apa en emen e no mal
cuando ue on obse adas an o
al
mic oscopio óp ico como elec ónico (FIG. 7
G,
H).
A,
B:
In es ino de peces con ol. A Vellosidades apa en emen e no males con
en e oci os apa en emen e no males.
B.
En e oci os con abundan es
mic o ellosidades apa en emen e no males y células calici o mes.
C,
D:
His ología de in es ino de ilapias a adas con CYN.
C.
De alle de
ellosidades in es inales con en e oci os nec osados (cí culo)
D.
Al e ación de
los en e oci os con pé dida pa cial de las mic o ellosidades (cí culo).
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E,
F:
In es ino de peces a ados con NAC (dosis 45 mg NAC/pez/día)
E.
Vellosidades apa en emen e no males y abundan es células calici o mes
( lecha).
F.
En e oci os con abundan es mic o ellosidades (cí culo).
G,
H:
In es ino de Tilapias a adas con CYN + NAC (45 mg NAC/pez/día)
G.
De alle de ellosidades in es inales no males con en e oci os apa en emen e
no males y abundan es células calici o mes ( lecha).
J.
En e oci os con
abundan es mic o ellosidades (ci culo) y células calici o mes apa en emen e
no males ( lecha).
1o Ejemplo
6.
NAC
mejo ó las al e aciones his opa ológicas inducidas
b anquias.
en
15
Al mic oscopio óp ico las b anquias de los peces a ados con CYN p esen a on,
a ni el de las laminillas p ima ias y secunda ias, p ocesos de hipe emia y
pé dida de las p olongaciones !amela es (FIG. 8B). Es as lesiones no ue on
obse adas
en
el lo e con ol, que p esen ó una mo ología apa en emen e
no mal (FIG. 8A).
20
En
los lo es de peces a ados con CYN y ambas dosis de NAC se demues a
una ecupe ación de las lesiones p o ocadas (FIG. 8C).
25
Al mic oscopio elec ónico de ba ido (SEM) se obse ó una al e ación de la
mo ología con pé dida de con inuidad del a co b anquial, y p esencia de
un
in il ado celula (FIG. 9C), y
al
mic oscopio de ansmisión elec ónica (TEM) se
de ec ó una ue e hipe emia de los capila es con p esencia de células de
in il ado in lama o io (FIG. 9D). Los peces del g upo con ol (FIG. 9
A,
B)
no
p esen a on anomalías.
30
Los peces a ados con CYN y ambas dosis de NAC (22 y 45 mg NAC/pez/dia,
equi alen es a 400 y 800 mglkg de NAC, espec i amen e) mos a on
ecupe ación de las lesiones p o ocadas po
la
oxina, p esen ándose ilamen os
b anquiales y a cos b anquiales apa en emen e no males (FIG 9
E,
F).
35
FIG. 8 (Mic oscopia óp ica)
A:
B anquias de peces con ol.
B:
B anquias de peces a ados con CYN. De alle de ilamen o b anquial con
p esencia de hipe emia en laminillas secunda ias (ci culo).
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C:
B anquias de peces a ados con NAC (45 mg NAC/pez/día). De alle de
ilamen o b anquial apa en emen e no mal.
D:
His ología de b anquias de peces a ados con CYN+NAC (22 y 45 mg
NAC/pez/día) . De alle de ilamen o b anquial apa en emen e no mal.
5
FIG. 9
A,
B:
peces con ol.
C,
D:
B anquias de peces a ados con CYN pu a.
C.
A co b anquial con pé dida
de con inuidad, e osionado y p esencia de
un
in il ado celula (cí culo).
D.
De alle de laminilla con hipe emia de capila es (cí culo).
1 O
E,
F:
B anquias de peces a ados con CYN+NAC (45 mg NAC/pez/día,
equi alen e a 800 mg NAC/kg pez).
E.
Filamen o b anquial apa en emen e
no mal.
F.
A co b anquial apa en emen e no mal.
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REIVINDICACIONES
1.
Uso de una composición que comp ende N-ace ilcis eína pa a la elabo ación
de
un
medicamen o ú il en
el
a amien o y/o p e ención de e ec os óxicos
en peces expues os a cilind ospe mopsina.
2.
Uso de una composición que comp ende N-ace ilcis eína pa a
la
elabo ación
de
un
medicamen o ú il en
la
ecupe ación de e ec os óxicos en peces
expues os a cilind ospe mopsina.
3.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 ó
2,
donde los e ec os
óxicos son al e aciones his opa ológicas.
4.
Uso según
la
ei indicación
3,
donde las al e aciones his opa ológicas son
p oducidas
en
al
menos uno de los ejidos de
la
lis a que comp ende hígado,
iñón, co azón, b anquias o ac o gas oin es inal.
5.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a
4,
donde
la
N-ace ilcis eína
se adminis a
en
una can idad dia ia de en e 22 y 45
mg
NAC/pez/día
(equi alen es a 400 y 880
mg
po
Kg
de peso del
pez,
espec i amen e).
6.
Uso según la ei indicación
5,
donde la composición se p esen a en una
o ma adap ada a la adminis ación o al o in ape i oneal.
7.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a
6,
donde
la
composición
incluye excipien es a macológicamen e acep ables.
8.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a
7,
donde la composición
comp ende además o a sus ancia ac i a.
9.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 8 pa a
la
ab icación de
un
alimen o uncional.
1
O.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 9 pa a
la
ab icación de
un
complemen o i amínico.
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5
11.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 1 O pa a
la
ab icación de
un
complemen o nu icional.
12.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a
11,
donde los peces son
cul i ados.
13.
Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a
12,
donde los peces
pe enecen
al
géne o O ech omis sp.
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INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA
Nº de solici ud:
201101162
CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD
A61K31/198 (2006.01)
A23K1/18 (2006.01)
A23K1/16 (2006.01)
Documen ación mínima buscada (sis ema de clasi icación seguido de los símbolos de clasi icación)
A61K, A23K
Bases de da os elec ónicas consul adas du an e la búsqueda (nomb e de la base de da os y, si es posible, é minos de
búsqueda u ilizados)
INVENES, EPODOC, WPI, INTERNET, BIOSIS, HCAPLUS
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OPINIÓN ESCRITA
Nº de solici ud: 201101162
Fecha de Realización de la Opinión Esc i a: 01.10.2012
Decla ación
No edad (A . 6.1 LP 11/1986)
Rei indicaciones
1-13
SI
Rei indicaciones
NO
Ac i idad in en i a (A . 8.1 LP11/1986)
Rei indicaciones
1-13
SI
Rei indicaciones
NO
Se conside a que la solici ud cumple con el equisi o de aplicación indus ial. Es e equisi o ue e aluado du an e la ase de
examen o mal y écnico de la solici ud (A ículo 31.2 Ley 11/1986).
Base de la Opinión.-
La p esen e opinión se ha ealizado sob e la base de la solici ud de pa en e al y como se publica.
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OPINIÓN ESCRITA
Nº de solici ud: 201101162
1. Documen os conside ados.-
A con inuación se elacionan los documen os pe enecien es al es ado de la écnica omados en conside ación pa a la
ealización de es a opinión.
Documen o Núme o Publicación o Iden i icación Fecha Publicación
D01
GUTIÉRREZ-PRAENA, D. e al.
2011
D02
GUTIÉRREZ-PRAENA, D. e al.
2011
D03
ES 2249167 A1 (CONSEJO SUPERIOR INVESTIGACION)
16.03.2006
D04
ES 2340012 A1 (UNIV SEVILLA)
27.05.2010
D05
RUNNEGAR, M. e al.
1995
2. Decla ación mo i ada según los a ículos 29.6 y 29.7 del Reglamen o de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de
ma zo, de Pa en es sob e la no edad y la ac i idad in en i a; ci as y explicaciones en apoyo de es a decla ación
La in ención se e ie e, según las dos p ime as ei indicaciones, al uso de una composición que comp ende N-
ace ilcis eína (NAC) pa a la elabo ación de un medicamen o ú il en la p e ención, el a amien o y la
ecupe ación de e ec os óxicos en peces expues os a cilind oespe mopsina (CYN).
Las ei indicaciones dependien es ca ac e izan la composición y los e ec os óxicos a los que se e ie en las
dos p ime as ei indicaciones.
No edad y ac i idad in en i a (a . 6 y 8 de la ley de pa en es)
Los documen os D1 y D2 a an de los e ec os óxicos que
p oducen la cilind oespemopsina en peces. Los
peces in oxicados con CYN p esen an sín omas de es és oxida i o como demues an los bioma cado es
es udiados: descenso en los ni eles de glu a ión (GSH), aumen o de oxidación lipídica y p o éica, aumen o en
los ni eles de NADPH oxidasa, e c.
También se de ec an al e aciones his opa ológicas en el hígado y en el
iñón p oducidas po la exposición a CYN.
En los documen os D3 y D4 se desc ibe la u ilización de composiciones que con ienen NAC an o
pa a el
a amien o de peces
que p esen an es és oxida i o como pa a aumen a la de oxi icación celula de
con aminan es como cie os plaguicidas o gano os o ados y las mic ocis inas. La NAC es capaz de elimina el
es és oxida i o en am
bos casos así como de ecupe a las al e aciones his opa ológicas de p oducidas po las
mic ocis inas . La ac uación de la NAC se ealiza po di e en es caminos: po una
lado unciona como
an ioxidan e a a és de su g upo iol, pe o además es un p ecu so de la sín esis de GSH como p o eedo de
cis eína y es á in oluc ada
en el ciclo del glu a ión ya que ac i a la glu a ión educ asa, esponsable de la
egene ación del GSH y la glu a ión ans e asa, in oluc ada en la de oxi icación de g an núme o de
con aminan es a a és de la conjugación del óxico con el GSH.
El documen o D5 es udia el e ec o de La CYN en hepa oci os de a a.
Según es e documen o, el descenso de
GSH que se obse a en los hepa oci os a ados con CYN se debe no an o a su u ilización del GSH en los
hepa oci os
(en la de oxi icación con glu a ión ans e asa o en la oxidación del GSH a GSSG) como a la
inhibición en su sín esis. De hecho, el apo e de NAC, no impide la caída de GSH ni los e ec os óxicos
p oducidos po la CYN.
Po an o, s
e conside a que, si bien el es és oxida i o ha sido a ado con composiciones que con ienen NAC
(documen os D3 yD4) y se ía, po an o, uno de las posibles medicamen os, disponibles pa a a a el es és
oxida i o p oducido po CYN, no se ía ob io pa a un expe o en la ma e ia, que dichas composiciones uesen a
elimina o a p e eni el es és oxida i o p oducido po la CNY. El único documen o que desc ibe el empleo de
composiciones con NAC en in oxicación de hepa oci os de a a con CYN (D5) no log a e i a los e ec os óxicos
que la CYN p oduce.
En consecuencia, se conside a que ningún documen o desc ibe ni sugie e el uso de una composición que
con iene NAC pa a a a ni p e eni los e ec os óxicos que p oducen la cilind oespe mopsina (CYN) po lo que
se conside a que odas las ei indicaciones de la solici ud cumplen
el equisi o de no edad y de ac i idad
in en i a.
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