ES 2 529 265 B1
19 OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
ESPAÑA 11
21
Núme o de publicación: 2 529 265
Núme o de solici ud: 201300685
51 In . CI.:
A01N 1/02 (2006.01)
A61B 6/03 (2006.01)
12 PATENTE DE INVENCIÓN B1
54 Tí ulo: Moni o ización median e TAC de p ocesos de p ese ación en ío y c iop ese ación de
ma e ial biológico
73 Ti ula /es:
UNIVERSIDAD DE SEVILLA (100.0%)
Pabellón de B asil, Pº de las Delicias s/n
41013 Se illa (Se illa) ES
72 In en o /es:
CORRAL SOUSA , A iadna ;
OLMO FERNÁNDEZ , Albe o ;
BALCERZYK , Ma cin ;
REGALADO LAMPREA , Da id ;
COBOS SABATÉ , Joaquín y
RISCO DELGADO , Ramón
22 Fecha de p esen ación:
18.07.2013
43 Fecha de publicación de la solici ud:
18.02.2015
Fecha de la concesión:
30.09.2015
45 Fecha de publicación de la concesión:
07.10.2015
56 Se emi e a la solici ud in e nacional:
PCT/ES2014/000121
57 Resumen:
La in ención obje o de la p esen e memo ia se e ie e
al uso no edoso de la omog a ía axial compu a izada
(TAC) pa a la moni o ización de p ocesos de
p ese ación en ío y c iop ese ación de ma e ial
biológico. El uso del TAC pe mi e mejo a
signi ica i amen e dichos p ocesos debido a su
capacidad de de ección de la concen ación de
c iop o ec o en los p ocesos de c iop ese ación y
de ección de la o mación de hielo en mues as
biológicas.
La p esen e in ención se enma ca den o del sec o
de la in es igación o análisis de ma e iales po
de e minación de sus p opiedades químicas o ísicas,
y den o de és e, es de in e és an o en la
conse ación con encional de alimen os, como en
c iop ese ación de ma e ial biológico de odo ipo
( an o en congelación len a, i i icación ápida u
o os).
Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 37.3.8 LP.
A iso:
Moni o izacion
median e
TAG
de
p ocesos
de
p ese acion
en
io
y
c iop ese acion
de
ma e ial
biolOgico
5
Obje o
de
la
in encion
La
in encion
obje o
de
la
p esen e
memo ia
se
e ie e
al
uso
no edoso
de
la
omog a ia
axial
compu a izada
(TAG)
pa a
la
moni o izacion
de
p ocesos
de
p ese acion
en
io
y
c iop ese acion
de
ma e ial
biologic°.
El
uso
del
TAG
pe mi e
mejo a
signi ica i amen e
dichos
p ocesos
debido
a
su
capacidad
de
10
de ecci6n
de
la
concen acion
de
c iop o ec o
en
los
p ocesos
de
c iop ese acion
y
de ecci6n
de
la
o med&
de
hielo
en
mues as
biologicas.
La
p esen e
in encion
se
enma ca
den o
del
sec o
de
la
in es igacion
o
analisis
de
ma e iales
po de e minaci6n
de
sus
p opiedades
quimicas
o
isicas,
y
den o
de
es e,
es
de
in e es
an o
en
la
conse aciOn
con encional
de
alimen os,
como
15
en
c iop ese acion
de
ma e ial biologic°
de
odo
ipo
( an o
en
congelacion
len a,
i i icaciOn
apida
u
o os).
Es ado
de
la
ecnica
El
almacenamien o
de
ma e ial biologic°
(celulas,
ejidos,
e c.)
juega
un
papel
20
esencial
den o
de
muchas
pa celas
de
la
ac i idad
humana:
ag icul u a
(semillas)
y
ganade ia
(semen),
asplan es
(piel,
co neas,
huesos,
al ulas,
O ganos),
inje os,
ejidos
a i iciales,
sang e,
medicamen os,
ma e ial
ep oduc o
en
casos
de
in e ilidad,
alimen os,
e c.
Las
p incipales
ecnicas
empleadas
pa a consegui
la
conse aciOn del
ma e ial
biologic°
se
basan
en
la
u ilizacion
de
bajas
25
empe a u as
pa a
alen iza
y
de ene
las
eacciones
quimicas esponsables
del
en ejecimien o
y
de e io o
celula .
El
almacenamien o
a la go
plazo equie e
de
muy
bajas
empe a u as,
ipicamen e
en e
-140°C
y
-180°C.
La
apa icion
de
hielo
du an e la
p ese acion
y
30
c iop ese acion
es
un
p oblema,
ya
sea
in acelula ,
causando
danos
i epa ables
en
los
dis in os
o ganulos
celula es,
o
ex a-celula ,
ompiendo
y
des-
es uc u ando
el
ejido
u
6 gano
en
cues iOn.
Pa a
e i a
la
o macion
de
hielo
suelen
u iliza se
los
agen es
c iop o ec o es,
aunque
una
concen acion
ele ada
de
es os
supone
un
p oblema
igualmen e
g a e
pa a
la
supe i encia
celula .
35
ES 2 529 265 A1

2
ES 2 529 265 B1
2
DESCRIPCIÓN
En
el
caso
de
celulas
aisladas,
exis en
dos
ecnicas
que
consiguen
la
c iop ese acion
de
o ma
sa is ac o ia:
el
en iamien o
len o
y
la
i i icacion.
El
en iamien o
len o
es
has a
aho a
el
p ocedimien o
mas
usado.
Se
basa
en
el
con ol
de
la
asa
de
en iamien o,
y
po
an o del
i mo
de
c ecimien o
de
hielo
5
ex acelula con
el
obje i o
de
c ea
un
delicado
equilib io
en e
los
dis in os
ac o es
que
causan
den°
celula ,
en e
los
que
se
encuen an
la
o med&
de
hielo
in acelula ,
ac u as
y una
excesi a
deshid a aci6n
de
la
celula.
La
i i icacion
es un
p oceso
median e
el
cual
un
liquido
se
solidi ica
en
una
ase
no
c is alina
( ase
i ea)
con
un
apido
descenso
de
la
empe a u a
y
un
aumen o
en
10
la
iscosidad.
La
i i icacion
elimina
comple amen e
la
o maci6n
de
c is ales
de
hielo,
mejo ando
en
g an
medida
los
esul ados
ob enidos
po
el
en iamien o
len o
pa a
de e minados
ipos
celula es
di iciles
de
c iop ese a .
En
lo
que
se
e ie e
a
la
conse acion
de
ejidos
y
o ganos,
los
p incipios
de
15
conse ed&
en
ilo
son
los
mismos
que
los
aplicables al
caso
de
celulas
aisladas.
Sin
emba go,
aqui
el
p oblema
es
mucho
mas
complejo,
debido
sob e
odo
al
mayo
amano
de
la
mues a,
lo
que
di icul a
la
ans e encia
de
masa
(c iop o ec o )
y
calo
( io).
20
En
1957
se
pe unde
po
p ime a
ez
un
O gan°
de
mami e o
con
glice ol,
en iado
y
p ese ado
a -20°C,
en
un
abajo
publicado
po
Aud ey
Smi h
(A.Smi h,
1957)
[1].
En
es os
expe imen os
pione os
un
co azon
de
hams e
ue
pe undido
con
2M
de
glice ol
y
expues o
a -20°C.
T as
el
ecalen amien o
y
la ado
del
c iop o ec o ,
algunas
con acciones debiles
podian
ap ecia se
en
el
6 gano,
pe o
el
25
uncionamien o
de
es e
es aba
oda ia
bas an e
lejos
del
deseado.
En
el
ano
1965,
Fa an
y
Huggins
/2/
ambos
de
mane a
independien e,
idea on
un
nue o
camino
hacia
la
c iop ese acion
de
o ganos
que
in oluc aba
una
ue e
sup esion
o
incluso
o al
eliminacion
de
la
o macion
de
hielo,
sin
la
necesidad de
30
un
en iamien o
apid°.
El
me odo
de
Fa an
consis ia
en
i
aumen ando
la
concen acion
del
agen e
c iop o ec o
a
la
ez
que
en iando
en
mill iples
pasos,
de
mane a
que
la
mues a
siemp e
es u ie a
sob e
la
cu e
del
pun o
de
usion
del
diag ama
de
ases
e na io
del
sis ema
DMSO-agua-NaCI.
En
sus
expe imen os
Fa an
u ilizo
ejido
de musculo
liso
de
a e °
de
conejo.
Las
mues as
ue on
35
almacenadas
a
-79°C
u ilizando
DMSO
como
agen e
c iop o ec o .
La
adicion
de
las
soluciones
c iop o ec o as
du an e
el
en iamien o
y
calen amien o
ue on
ES 2 529 265 A1

3
ES 2 529 265 B1
3
Ile adas
a
cabo
po
pasos.
T as
la
ecupe acion
de
las
mues as
obse O
que
no
solo
se
habia
e i ado
la
o macion
de
hielo
sino
que
se
ob enia
una
uncionalidad
del
mOsculo
mucho
mayo
que
las
en iadas
po
el
me odo
de
en iamien o
len o.
5
En
1970,
en
colabo acion
con
Fa an ,
el
equipo de
Mill
Hill
en
Lond es,
y
Adem
y
Ha ness
cons uye on
el
p ime
equipo
capaz
de
pe undi
un
O gan°
en e o
con
un
agen e
c iop o ec o
y
elimina lo
pos e io men e
de
una
o ma
adecuada
y
bien
documen ada.
Aim
asi,
pa a
un
sis ema
e na io
DMSO-agua-NaCI,
el
me odo
de
Fa an
esul aba
de
di icil
manejo
expe imen al,
debido
al
cuidado
que
se
equie e
10
en
el
diag ama
de
ases,
ya
que
las
pe u baciones
debidas
al
cambio
de
condiciones
de
con o no
en
concen acion
y
empe a u a
pueden
Ile a
a
una
des iacion
signi ica i e
de
la
cu e
del
pun o
de
usion.
No
obs an e,
el
g upo
del
p o eso
Da id
E.
Pegg
en
la
Uni e sidad
de
Yo k
ha
15
mejo ado
es e
me odo,
ob eniendo
un
mejo
con ol
y
es udiando
las
dis in as
ole ancias a
las
que
un
o gan°
puede
p es a se
an e
un
dano
osmO ico
debido
al
c iop o ec o .
El abajo
p esen ado
po
Pegg
en
2006
(Pegg
2006)
(
3
,
4
,
5
)
ob u o
excelen es
esul ados
en
c iop ese aciOn
de
ca ilago
con
el
me odo
llamado
Liquidus-T acking.
El
obje i o
de
es e
e a
segui
ap opiadamen e
la
cu e
de
20
liquid°
del
sis ema
DMSO-agua-NaCI
con
un
aumen o
con inuo
de
la
concen acion
al
mismo
iempo
que
disminula
la
empe a u a.
Es o
ha
conducido
a
un
mejo
en endimien o
del
concep °
de
i i icaciOn
de
un
o gan°,
o
p ese acion
lib e
de
hielo
en un
es ado
amo o.
Pa a
inc emen a
la
concen acion
de
c iop o ec o
u ilizaba
dos
bombas
(una
pa a
el
medio
iso onic°
y
o a
pa a
el
25
c iop o ec o )
conec adas
a
un
in e cambiado
de
calo
den o
de
la
maquina
de
en iamien o.
El
p og ama
de
con ol
es aba
basado en
expe imen os
p e ios,
donde
e mopa es
y
un
conduc i ime o
e an
empleados
pa a
medi
la
empe a u a
y
concen aciOn
de
c iop o ec o
espec i amen e.
En
es os
expe imen os
el
conduc i ime o
media
sOlo
la
concen acion
del
lujo
de
pe usion
30
esidual,
y
no
la
concen acion
de
c iop o ec o
den o
del ma e ial
biologic°,
lo
cual
supond ia
una
necesa ia
y
c ucial
mejo a
del
me odo.
Po
o a
pa e,
en
1998
G ego y
Fahy
empezo
a
es udia
co m
ob ene
mejo as
en
el
con ol
de
la
oxicidad
de
los
c iop o ec o es y
del
p oceso de
nucleacion
y
del
35
c ecimien o
de
c is ales
de
hielo.
Sus
es udios
se
basan
en
la
ole ancia
de
las
mues as
de
dis in as
mezclas
de
c iop o ec o es
pe undidas
a
dis in as
ES 2 529 265 A1

4
ES 2 529 265 B1
4
empe a u as,
siemp e
p obando
la
oxicidad
en
i iones
de
conejo.
Una
de
sus
soluciones
i i ican es
con
mejo es
esul ados
es
la
denominada
M22,
donde
el
n ame o
hace
e e encia
a
la
con eniencia
de
incuba
los
i iones
con
es a solucion
a
-22°C
(Fahy
e
a
l
,
2004)
[
6
]
.
En
un
ecien e
abajo
(Fahy
e
a
l
.
2009)
[7],
Fahy
5
p esen o
los
esul ados
de un
ill&
de
conejo
i i icado
que
ue
pos e io men e
asplan ado
sin
p esen a
echazo alguno
y
con
e idencias
de
uncionalidad.
En
cualquie
caso,
ya sea
con
la
u ilizacion
de
los
c iop o ec o es
p esen ados
po
Fahy,
con
el
me odo
de
Liquidus-T acking
de
Pegg,
o
como
pa e
de
o os
10
p o ocolos
de
c iop ese acion,
conoce
la
concen acion
de
c iop o ec o
du an e
el
p oceso
de
en iamien o
es
muy
impo an e,
ya
que
nos
p opo ciona
in o maciOn
undamen al
pa a
op imiza
dichos
p o ocolos,
ajus ando
los
iempos
de
pe usion
y
minimizando
de
es a
o ma
an o
la
oxicidad
causada
pa
el
c iop o ec o
coma
la
posibilidad
de
o maciOn de
hielo.
De
igual
o ma,
ob ene
in o macion
ace ca
de
15
la
e en ual
o macion
de
hielo
en
el
o gan°
es
undamen al,
al
se
los
danos
p oducidos
pa
es e
uno
de
los
mayo es
p oblemas
a
soluciona
pa a
consegui
la
co ec a c iop ese acion
(Pegg
2006)
[
3
,
4
,
5
]
.
Di e en es
me odos han
sido
desa ollados
con
el
in
de
pode
moni o iza
la
20
concen acion
de
c iop o ec o
jun o
a
la
empe a u a.
D .
Pegg,
en
su
abajo
de
c iop ese acion
de
ca ilago,
comenzo
midiendo
la
concen acion
de
c iop o ec o
basdndose
en
el
abajo
de
El o d
de
1969
/8/
que
mues a que
cuando
una
pieza
de
ejido
es
sume gida
en
una
solucion
de
c iop o ec o ,
los
iempos de
cambio
de
peso
sume gido
pueden
se
usados
pa a
moni o iza
el
p oceso
de
pe meacion
de
25
c iop o ec o
en
el
ejido.
En
2007,
D .
Pegg
(Pegg
2007)
[
9
]
mejo o
su
medida
de
c iop o ec o
median e
olume ia
y
c oma og a ia.
Pa a
de e mina
el
con enido
de
agua
us6
la
eaccion
de
Ka l
Fische
(KF).
Colocaba
el
ejido
en
un
exceso
de
eac i o
KF
y,
una
ez
30
que
oda
el
agua
habia
eaccionado,
el
exceso
e a alo ado
con
una
solucion
conocida
de
agua
en
me anol.
Cada
dia
es anda izaba
el
sis ema
anadiendo una
can idad
conocida de
agua,
sob e
10
mg,
al
mismo
olumen
de
eac i o
de
KF.
El
con enido
de
DMSO
se
media
median e
HPLC
(High
P essu e
Liquid
C oma og aphy).
Los
da os
e an
exp esados
en
e minos
del
peso
de
ejido
y
la
35
concen acion
del
CPA
enia
dada
po
la
siguien e o mula:
ES 2 529 265 A1

5
ES 2 529 265 B1
5

p
e
s
o
.
no
m
a
l
i
z
a
d
o
.
M
e
2
S
0
x
1
00
p
e
s
o
.
no
m
a
l
i
z
a
d
o
.
a
g
u
a
+
p
e
s
o
.
n
o
m
a
l
i
z
a
d
o
.
M
e
2
S
0
%
w
/
w
5
Fulle
(Fulle ,
Busza
and
P oc o
1989)
1
1
0
]
u ilizO
ecnicas
de
esonancia
nuclea
magne ica
(NMR)
pa a
la
medida
de
concen acion
de
c iop o ec o
en
higado
de
a a
y
Taylo
y
Busza
(1992)
(11]
pa a
la
medida
en
co nea.
Poco
despues,
en
1994,
Ba eson
(
1
2
)
y
su
g upo
usa on
el
NMR
pa a
medi
la
concen acion
de
DMSO
al
pene a
en
la
a e ia
ca O ida
de
un
conejo.
10
Es e
me odo
ha
sido
ambien
u ilizado
con
o os
c iop o ec o es,
po
ejemplo
po
Po-Wah
y
Fulle
en
2001
(Fulle ,
Takahashi and
Hu ell
2001)
1
1
3
]
pa a
de e mina
la
di usion
de
solu os
en
higado
de
a a
du an e
almacenamien o
hipo e mico
(his idina y
ca nosina).
Los
p o ones
a oma icos
de
la
his idina
y
las
ecuencias
de
15
esonancia
del
g upo
his idilo
de
la
ca nosina e an
obse ados
en
el
espec o.
La
in eg acion
de
las
esonancias
pe mi ia
es ablece
la
can idad
de
solu o
p esen e
en
la
mues a,
aunque
el
p incipal
incon enien e
del
NMR
p o Onico
es a
en
su
ela i amen e
baja
p ecision,
ya
que
los
e o es
son
del
mismo
o den de
magni ud
que
las
medidas.
20
Los
me odos
an e io men e
desc i os
sOlo
dan
una
idea
global
sob e
la
can idad
de
c iop o ec o
que ha
en ado
en
la
mues a,
pe o
no
dan
ninguna
in o maciOn
sob e
la
dis ibucion
de
es e
c iop o ec o
den o
del
ejido.
Es a
in o macion
es
undamen al,
pues o
que
pod ia
habe
egiones
del
ejido
ca gadas
con
un
exceso
25
de
c iop o ec o ,
mien as
que
o as
pod ian
es a
ca gadas
con
una
concen acion
insu icien e.
Po
an o,
ninguno
de
es os
me odos
desc i os
has a
aho a
alcanza
la
p ecision
necesa ia
pa a
un
con ol
de
la
concen aciOn
del
c iop o ec o
eque ido
pa a
una
i i icacion
con
exi °.
El
p oceso
de
la
e en ual
o macion
de
hielo
ampoco
ha
sido
medido
has a
aho a
con
p ecision
en
el
in e io
de
O ganos,
30
educiendose
es a
medida
a
inspecciones
isuales
a
pos e io i
y
poco
cuan i a i as.
D
O
CU
M
E
N
T
O
S
R
E
L
E
V
A
N
T
E
S
35
[
1
]
A
.
U
.
S
m
i
h
,
P
o
c
e
e
d
i
n
g
s
o
h
e
R
o
y
a
l
S
o
c
i
e
y
S
e
i
e
s
B
1
4
7
(1
9
5
7
)
533
-
5
44
.
ES 2 529 265 A1

6
ES 2 529 265 B1
6
[
2
]
J
.
F
a
a
n
,
N
a
u
e
205
( 1
9
6
5
)
1
28
4
-
1
28
7
.
[
3
]
D
.
E
.
P
e
gg
,
M
.
C
.
W
u
s
e
m
a
n
,
L
.
W
a
n
g
,
C
y
o
b
i
o
l
o
g
y
52
(
20
0
6
)
3
35
-
3
4 6
.
[
4
]
D
.
E
.
P
e
gg
e
a
l
,
C
y
ob
i
o
l
o
gy
5
2
(
2
0
0
6
)
3
4 7
-
3
59
.
[
5
]
D
.
E
.
P
e
gg
,
L
.
W
a
n
g
,
D
.
V
a
u
g
h
a
n
,
C
y
o
b
i
o
l
o
gy
5
2
(
200
6
)
36
0
-
3
6
8
.
5
[
6
]
G
.
M
.
F
a
h
y
e
a
l
,
C
y
ob
i
o
l
o
g
y
4
8
(
2
00
4
)
1
5
7
.
[
7
]
G
.
M
.
F
ah
y
e
a
l
,
O
g
a
n
o
g
O
n
e
s
i
s
5
:
3
(
20
0
9
)
1
6
7
-
1
7
5
.
[
8
]
B
.
C
.
E
l
o
d
e
a
l
,
N
a
u
e
N
e
w
B
i
o
l
o
g
y
236
( 1
9 7
2
)
5
8
.
[
9
]
D
.
E
.
P
e
gg
e
a
l
,
C
y
ob
i
o
l
o
g
y
(
200
7
)
55
:
1
38
-
1
4 7
.
10
[
1
0
]
B
.
J
.
F
u
ll
e
,
A
.
L
.
B
u
s
za
a
n
d
E
.
P
o
c
o
,
C
y
o
b
i
o
l
o
gy
2
6
( 1
98
9
)
1
1
2
.
[
1
1
]
M
.
J
.
T
a
y
l
o
a
n
d
A
.
L
.
B
u
sz
a
,
C
y
o
-
Le
.
1
3
( 1
99
2
)
2
7
3
.
[
1
2
]
E
.
A
.
B
a
e
s
o
n
e
a
l
,
C
y
o
b
i
o
l
o
gy
3
1
,
( 1
994
)
3
9
3
.
[
1
3
]
P
.
W
a
h
a
n
d
B
.
J
.
F
u
ll
e
,
C
y
ob
i
o
l
o
g
y
4
2
(
200
1)
30
7
-
3
1
3
.
15
[
1
4
]
N
a
i
o
n
a
l
I
n
s
i
u
e
o
S
a
n
d
a
d
s
a
n
d
T
e
c
h
n
o
l
o
g
y
:
h p://physics.nis .00 /PhysRe Da a/Xcom/h ml/xcoml.h ml
20
Desc ipcion
del
con enido
de
las
igu as
Figu a
1.
En
es a
g a ica
se
mues a
la
a enuaci6n
de
masa
(cm2/g)
en
el
eje
de
o denadas
pa a
una
soluciOn
50%
/
de
DMSO
en
PBS
debido
a
los
di e en es
ipo
de
sca e ing
(Fo oelec ico,
Rayleigh
y
Comp on)
y
debido
a
la
suma
de
25
odos
los
e ec os
(To al),
en
unci6n
de
la
ene gia
u ilizada
en
KeV(eje
de
abscisas).
En
el
caso de
la
ene gia
ca ac e is ica
de
nues os expe imen os,
en
omb
a
20 KeV,
la
p ime a cu a
(de
mayo
coe icien e
de
a enuacion
de
masa)
co esponde
al
o al
de
odos
los
e ec os,
muy
seguido
del
sca e ing
co espondien e
al
e ec o
o oelec ico,
siendo
es e
el
e ec o
con
mas
ele ancia
30
en
el
caso
de
las
ene gias
u ilizadas
en
nues o
TAC.
Figu a
2.
Rep esen aci6n
en
escala
loga i mica
(Figu a
2
a)
y
en
escala
lineal
(Figu a
2
b)
de
la
a enuaciOn
de
nnasa
(cm2/g)
espec o
a
la
ene gia
(KeV)
pa a
dis in as
soluciones:
5%
/
y
70%
/
de
DMSO
en
PBS,
5%
/
y
70%
/
de
35
Glice ol
en
PBS,
5%
/
y
70%
/
de
E ilenglicol
en
PBS,
y
agua
pu a
(H20).
En
el
ango
de
ene gias co espondien e
a nues os
expe imen os,
en
omb
a
20 KeV,

ES 2 529 265 B1
7
se
obse a
una
mayo
a enuaci6n
de
masas
pa a
el
caso de
la
solucion
70%
/
de
DMSO,
seguida
de
la
solucion
5%
/
de
DMSO.
Pa a
el
es o
de
las
soluciones
la
a enuacion
es
del
mismo
o den
que
la
a enuaci6n
de
masa
debido
a
H20.
Ambas
g a icas
mues an
la
in luencia del
a om°
de
azu e
del
DMSO
en
la
5
a enuacion
de
los
ayos
X.
Las
cu as pa a
el
glice ol
5%
y
el
e ilenglicol
5%
se
solapan.
Tambien
las
cu as
pa a
el
glice ol
70%
y
el
e ilenglicol
70%
se
solapan.
Po
ello
esul an
di iciles
de
dis ingui
en
la
igu a.
Figu a
3.
Valo es
de
TAO
en
unidades
Hounse ields
(HU)
ob enidos
pa a
las
10
siguien es
soluciones,
de
izquie da
a
de echa:
PBS,
2, 4,
6
y
8
M
de
DMSO
en
PBS.
El
eje
x ep esen a
la
dis ancia
en
mm
del
co e
a
lo
la go
del
eje
z
de
la
camilla
del
TAC
donde
es an
dispues as
las
mues as.
La
g a ica
mues a
unos
alo es de
TAO
c ecien es
pa a
mayo es
concen aciones
de
DMSO.
15
Figu a
4.
Valo es
de
TAO
(HU)
ob enidos
pa a
soluciones,
de de echa
a
izquie da,
de
PBS,
1,
3,
5
y
7
M
de
DMSO
en
PBS.
El eje
x
mues a
la
dis ancia
en
mm
del
cone
a
lo
la go
del
eje
z
de
la
cannilla
del
TAO
donde
es an
colocadas
las
mues as.
La
g a ica
uel e
a
mos a
alo es
de
TAC
mas
ele ados
pa a
mayo es
concen aciones
de
c iop o ec o
(DMSO).
20
Figu a
5.
Rep esen acion
del
n°
de
pixeles
(es e as
de
2
cm
de
diame o)
que
ienen
el
mismo
alo
de
TAO
(eje
de
o denadas)
pa a
cada
una
de
las
concen aciones
PBS,
10%
/ ,
20% / ...
has a
80% /
de
DMSO
en
PBS.
El
eje
de
abscisas
mues a
el
alo
de
TAO
pa a
las
dis in as
soluciones
desde
la
cu a
25
de
PBS
(meno
alo
de
TAO)
has a
la
de
80% /
DMSO
(mayo
alo
de
TAO).
Es a
g a ica
mues a
ade nas
la
dispe sion
de
los
da os,
siendo
mayo
en
las
soluciones de
mayo
concen acion
de
c iop o ec o
(cu a
de
mas
anchu a).
Figu a
6.
Rep esen aciOn
del
nume o
de
pixeles
(es e as
de
2
cm
de
diame o)
30
que
ienen
el
mismo
alo
de
TAO
pa a
es
soluciones
dis in as
de
PBS.
La
g a ica
mues a
como
pa a
la
misma
soluciOn
las
cu as
ienen
la
misma
o ma
y
se
man ienen
en e
los
mismos
alo es
de
TAO,
e lejando
la
ep oducibilidad
del
TAO
como
me odo
de
medida.
Figu a
7.
Rep esen acion
de
la
cu a
de
calib acian
que
elaciona
la
35
concen acion
de
DMSO
(M)
en e
al
alo
de
TAO
calculada
a
pa i
de
los
esul ados
de
los
expe imen os
p e ios
( igu a
3
y
igu a
4).
La
g a ica
mues a una

ES 2 529 265 B1
8
linealidad
en e
la
concen acion
del
c iop o ec o
y
las
se iales
ob enidas
en
el
TAC
con
un
coe icien e
de
co elaciOn
de
=
0,990.
Es a
cu a
pe mi e
calcula
la
concen aciOn
de
c iop o ec o
pa a
cualquie
mues a
de
concen aci6n
desconocida
a
pa i
de
una
medida
de
TAC
sob e
la
mues a
con
los
5
co espondien es
alo es
de
TAC
ob enidos
en
la
medida.
Desc ipcion
de
la
in encion
Se
ha
desa ollado
un
sis ema
basado
en
la
omog a ia
axial
compu a izada
(TAC)
pa a
la
de eccion
de
hielo
den o
del
ma e ial
biologic°,
asi
como
pa a
la
medida
de
la
concen acion
de
c iop o ec o
pe undido
en
los
p ocesos
de
10
c iop ese aciOn
en
iempo
eal.
Con encionalmen e
la
omog a a
axial
compu e izada
es
una
ecnica
de
imagen
medica
que
u iliza
adiaci6n
X
pa a
ob ene
p oyecciones
o
secciones
de
obje os
ana Omicos
con
ines
diagnOs icos.
Los
ayos
X
son
la
adiaciOn
del
espec o
15
elec omagne ic°
comp endido
en
el
ango
ap oximado
de
3x1016
Hz
a
3x1019
Hz
(i.e.,
ene gias
de
en e
120
eV
y
120
keV).
A
pa i
de
12
keV
la
capacidad
de
pene acion
de
es a
adiacian los
hacen
adecuados
pa a
el
es udio
de
ejidos
i os.
El
TAC
es a
basado
en
la
medida
de
la
pe dida
de
in ensidad
de
ayos
X
a
a es
de
dis in as
di ecciones
en
el
obje o,
lo
que
pe mi e
econs ui
el
ac o
de
20
a enuaci6n
idimensionalmen e
en
odo
el
olumen
a
pa i
de
ecnicas
de
econs uccion.
Dicho
ac o
de
a enuaciOn
pe mi e
disce ni
que
ipo
de
ma e ial
exis e
en
cada
pun o.
Las
sena es
del
TAC
e lejan
la
a enuaciOn
de
las
sus ancias
y
se
exp esan
en
unidades
Hounse ields (HU).
Se
oma
como
e e encia
la
densidad
del
agua
o
alo
de
TAC,
ob eniendo
cada
pixel
un
alo
de e minado
25
(HU)
que
se
co esponde
con
un
colo
en
la
escala
de
g ises
(de
blanco
a
neg o),.
El
uso
no edoso
del
TAG
pa a
la
ca ac e izaciOn
de
la concen aci6n
de
c iop o ec o
y
de eccion
de
hielo
den °
de
ma e ial
biologic°
se
desc ibe
a
con inuacion.
Cuando
un
haz
de
ayos
X
incide
en
un
obje o,
a
una
dis ancia
d,
la
30
in ensidad
del
haz
se
ha
educido
de
la
mane a:
I
=
lo
exp(-
p
=
lo
exID(-
(pip)
p
d),
donde
lo
es
la
in ensidad
del
haz
a
la
en ada,
p
es
una
ca ac e is ica del
ma e ial
denominada
a enuacion,
y
p
es
la
densidad
(masica)
del
ma e ial.
La
cons an e
35
p/p
se
denomina
a enuaci6n
de
masa
del
ma e ial.
Es a a enuacion
puede
debe se

ES 2 529 265 B1
9

ES 2 529 265 B1
16


ES 2 529 265 B1
17

ES 2 529 265 B1
18

ES 2 529 265 B1
19