G asas
y
Acei es
Vol.
48. Fase. 2 (1997), 93-95 93
Comunicación b e e
Ac i idad a macológica de la acción de es e óles y alcoholes i e pénicos
aislada del acei e de oli a i gen
Po R. de la Pue a2, R, Maes o-Du áni y V, Ruiz-Gu ié ezi
1 Ins i u o de la G asa (C.S.I.C.). Apa ado 1078, 41012 Se illa.
2 Dp o. Fa macia, Tecnología Fa macéu ica y Fa macología, Facul ad de Fa macia, 41012 Se illa.
RESUMEN
Ac i idad a macológica de la acción de es e óles y
alcoholes i e pénicos aislada del acei e de oli a i gen
La acción de es e óles y dialcoholes i e pénicos ob enida
po c oma og a ía en capa ina a pa i del insaponi icable del
acei e de oli a i gen ha sido ensayada pa a e alua su posible
ac i idad a macológica en elación a su e ec o an iin lama o io.
La adminis ación ópica de es os p oduc os p odujo un po en e
e ec o an iedema oso, en el edema au icula p o ocado po la
aplicación de TPA (ace a o de e adecanoil o bol) en animales
de expe imen ación. Es e es ha sido ampliamen e u ilizado pa a
e alua la acción an iin lama o ia de inhibido es de la enzima os-
olipasa
A2.
La medida de la mielope oxidasa, enzima ma cado-
a del acumulo de neu ó ilos en el ejido dé mico in lamado,
mos ó un al o pode inhibi o io sob e la in il ación celula eje ci-
da po la acción ensayada.
PALABRAS-CLAVE:
Acei e de oli a i gen - Ac i idad an iin-
lama o ia - Alcohol i e pénico - Es e ol.
SUMMARY
Pha macological ac i i y o he ac ion isola ed om
i gin oli e oil con aining he s e ols and i e penic
alcohols
The ac ion o s e ols and i e penic dialcohols om
unsaponi iable o i gin oli e oil has been es ed o I s possible
an iin lama o y ac i i y. The opical adminis a ion o hese
p oduc s p oduced a po en an ioedema ous e ec , in he
au icula oedema induced by TPA (12-0- e adecanoylpho bol
ace a e) in expe imen al animals. This es has been widely used
o de e mine he an iin lama o y ac ion o phospholipase A2
inhibi o s. The measu e o myelope oxidase, ma ke enzyme o
he accumula ion o neu ophils in he in lamed issue,
demons a ed a signi ican educ ion o he cellula in il a ion
p oduced by assayed ac ion.
KEY-WORDS: An iin lama o y ac i i y •
alcohol - Vi gin oli e oil. S e ol - T i e pene
1.
INTRODUCCIÓN
La acción insaponi icable de los acei es ege ales
se conside a mino i a ia con espec o a la acción gli-
ce ídica, sin emba go puede eje ce una g an in luencia
en las p opiedades biológicas de cada acei e. De
hecho, la e apia inmunosup esi a en nume osas en e -
medades in lama o ias se asocia, no exclusi amen e al
e ec o de los ácidos g asos que se libe an as la mani-
pulación de la die a con acei e icos en ácidos g asos
poliinsa u ados, sino a o os componen es, p obable-
men e los componen es meno es o insaponi icables
(Calde , 1994). P ueba de ello, el e i odiol (alcohol
i-
e pénico que se encuen a en el insaponi icable del
acei e de oli a) ha sido desc i o ecien emen e con un
inhibido de la enzima elas asa lisosomal de leucoci o
humano (Ying, 1994).
Con es e abajo, hemos que ido demos a el e ec-
o a macológico que sob e p ocesos in lama o ios, p e-
sen an cie os componen es mino i a ios ca ac e ís icos
de la acción insaponi icable del acei e de oli a i gen,
como son los es e óles y los dialcoholes i e pénicos.
El análisis de la acción de es e óles es muy impo an-
e ya que su con enido a ía de un acei e a o o. En el
oli a i gen, el con enido en es e óles no es mayo de
160 mg/kg, y el compues o mayo i a io de es a acción
es el B-si os e ol, cons i uyendo en e el 76-86% del
insaponi icable. Los dioles i e pénicos p esen es en la
acción son e i odiol y u aol cuyas concen aciones
espec i as son 6-10 y 18 mg/kg de acei e.
2.
PARTE EXPERIMENTAL
2.1 Mues as
F acción de es e óles y dialcoholes i e pénicos
ob enidos del insaponi icable de acei e de oli a i gen
po c oma og a ía en capa ina.
(c) Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas
Licencia C ea i e Commons 3.0 España (by-nc)
h p://g asasyacei es. e is as.csic.es
94 G asas y Acei es
2.2 Ma e ial y Reac i os
Aislamien o dei insaponi icable
Ma e ial y eac i os desc i os en la no ma UNE
55004,
necesa io pa a la sepa ación del insaponi ica-
ble po el mé odo del óxido die ílico (capí ulo 4 de la
no ma).
C oma og a ía en capa ina
C oma o olios de sílice G Me ck, cube a de id io
pa a el desa ollo de placas, es u a de desecación,
mic oje ingas, lámpa as ul a iole a. Re elado :
solu-
ción 2-7-diclo o- luo esceína al 0,1% en e anol del
90%;
é e e ílico y hexano de calidad «pa a análisis».
Animales de expe imen ación
Se u iliza on a ones Swiss de unos 25-20 g de
peso,
que se ag upa on en lo es de 6.
Reac i os químicos
Indome acina (Sigma), ace a o de e adecanoil o -
bol (Sigma).
2.3 P ocedimien o de ob ención de la acción
ue on sac i icados y se p ocedió a secciona (6 mm)
y pesa la po ción cen al de las o ejas. El alo del
edema se calculó po di e encia de peso en e las o e-
jas a adas (de echas) y las no a adas (izquie das),
así mismo se calculó la inhibición del edema (exp e-
sado en %) en e al g upo con ol.
2.5 Inhibición de la enzima mielope oxidasa
La ac i idad de la enzima mielope oxidasa (MPO)
ue ensayada u ilizando los homogenizados de las
o ejas in lamadas, según écnica de Susuki (1983),
modi icada po De Young (1989). Las medidas de
abso bancia se ealiza on a 665nm de longi ud de
onda,
en un espec o o óme o Pe kin Elme Lambda
3. La inhibición enzimá ica (exp esada en %) se con-
esponde con las di e encias de abso bancias obse -
adas espec o al g upo con ol.
2.6 Análisis es adís icos
Los esul ados se p esen an como la media de los
alo es ob enidos en cada lo e de animales ±e o
es ánda . La signi icación es adís ica se ealizó con el
es de la « » de S uden .
Las placas c oma og á icas se ac i an en es u a de
desecación a 105-110°C, du an e
1
h. En la placa
ac i-
ada se deposi an go i as inas del ¡nsaponi icable
ob enido disuel o en é e insop opílico, con ayuda de
una mic oje inga, cub iendo una línea si uada a unos
2 cm del bo de in e io de la placa. La dis ibución
debe á hace se uni o memen e, e ec uando las pasa-
das que sean necesa ias pa a deposi a la o alidad
del insaponi icable. El sol en e de desa ollo ue hexa-
no-é e e ílico 2:1 ( / ). Una ez e ec uado el desa o-
llo se pul e iza la placa con el eac i o de e elado y
se examina a la luz ul a iole a (366 nm).
La banda ho izon al co espondien e a la mezcla
de es e óles y alcoholes i e pénicos, se asca con
una espá ula, el pol o de sílice se coloca en minico-
lumnas de id io y el con enido o gánico se eluye con
alcohol isop opílico. El p oduc o ob enido una ez e a-
po ado el disol en e cons i uyó la acción a ensaya .
2.4 Edema au icula p oducido po TPA
Seguimos la écnica de De Young (1989). El
edema ue inducido en la o eja de echa del a ón, po
la aplicación ópica de 2.5Mg de TPA po o eja disuel-
o en ace ona. Las dis in as dosis u ilizadas: 0,25, 0,50
y 1,0 mg de la acción a ensaya ue on disuel as en
e anol del 70%, y ue on aplicadas ópicamen e, inme-
dia amen e después de la aplicación de TPA. Las o e-
jas izquie das (con oles) ue on a adas con el ehí-
culo (e anol 70%). Gomo pa ón de e e encia se
empleó indome acina a una dosis de 0,5 mg/o eja.
Pasadas 4 ho as de la aplicación ópica, los animales
3. RESULTADOS
La acción de es e óles y alcoholes i e pénicos
mos ó una po en e ac i idad an ün lama o ia ópica en
el es del edema au icula p oducido po TPA en o eja
de a ón, obse ándose una cla a inhibición del edema
en una elación dosis-dependien e (Tabla I). Los alo es
de inhibición ob enidos son simila es a los p oducidos
con la indome acina u ilizada como pa ón de e e encia.
La ac i idad de la enzima mielope oxidasa, indicado a
de la in il ación leucoci a ia ue signi ica i amen e inhibi-
da (p<0,001) a las es dosis ensayadas (Tabla II).
Tabla I
Inhibición del edema au icula p oducido po TPA
Edema
(I
(mg/aplicaclón) Inhibición (%)
Edema
Con ol (TPA)
Pa ón (Indome acina)
F acción
F acción
F acción
0.0025
0.50
0.25
0.50
1.00
20.56±0.78
2.28±0.73
***
7.56±1.15
88.91
63.23
3.52±0.63
82.87
1.84±0.73
91.05
*p<0,05, **p<0,01,***p<0,001; « »
de
S uden en e
al
con ol
(c) Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas
Licencia C ea i e Commons 3.0 España (by-nc)
h p://g asasyacei es. e is as.csic.es
Vol.48.
Fase. 2(1997) 95
Tabla II
Inhibición de la enzima mielope oxidasa en el es
del edema p oducido po TPA
Dosis
Di e encia
Abs.
(mg/aplicación)
¡nm)
Inhibición
(%)
Con ol (TPA) 0.0025 0.928±0.09
Pa ón (Indome acina)
0.50
0.043±0.02 95.36
F acción 0.25 0.312±0.03 66.38
desc i a pa a á macos ipo co icos e oides (De
Young,
1989). Es o concue da con nues os esul a-
dos,
ya que los es e óles y i e penos ienen una
es uc u a elacionada, y a menudo han sido u ilizados
como p ecu so es en la sín esis de es os á macos.
Po an o, el e ec o an iin lama o io ópico obse a-
do con es a sub acción es e ólica/ h e pénica del
insaponi icable p oceden e de acei e de oli a i gen,
nos pone de mani ies o la acción bene iciosa que
es os componen es mino i a ios pueden eje ce sob e
de e minados es ados pa ológicos.
F acción 0.50 0.217±0.03 76.61 AGRADECIMIENTOS
F acción 1.00 O.OOO O.OO 100.00
***
*p<0,05, **p<0,01,***p<0,001; « »
de
S uden en e
al
con ol
4. DISCUSIÓN
Una espues a posi i a en el es del TPA indica ía
que la inhibición del edema pod ía se esencialmen e
debida a un bloqueo de la p o eína quinasa C(PKC).
El TPA es imula la acción de es a p o eína quinasa de
una mane a simila a aquella p oducida po diacilgli-
ce ol endógeno, libe ado de los os olípidos de mem-
b ana (Nishizuka, 1984). Como consecuencia de la
es imulación de la PKC se ac i an o as enzimas como
la os olipasa Ag, que induce la libe ación del ácido
a aquidonico, o iginando un aumen o de los ni eles de
p os aglandinas Eg y la apa ición de edema (Ca lson,
1985). Po lo an o, la inhibición p oducida po la ac-
ción ensayada sob e la in lamación inducida po es e
agen e i i an e, pod ía se debida al bloqueo de una o
a ias de las enzimas elacionadas con la libe ación y
me abolismo del ácido a aquidonico.
Di e en es compues os de es uc u a i e pénica
de o igen na u al, como be ulina y ácidos be ulínico y
u sólico, han demos ado posee un e ec o an iin la-
ma o io ópico, p esen ando un mecanismo de acción
elacionado con el que poseen los glucoco icoides
(Recio, 1994).
Po o o lado, la acción inhibió muy signi ica i a-
men e la ac i idad de la enzima mielope oxidasa,
indi-
cado a de la in il ación de neu ó ilos en el ejido in la-
mado. Es a po en e inhibición sob e el edema y
ambién sob e la ac i idad de mielope oxidasa ha sido
Es e abajo ha sido inanciado con ondos del p o-
yec o ALI-95-0073, de la Comisión In e minis e ial de
Ciencia y Tecnología.
G acias po la ayuda écnica a D. Manuel
Rod íguez-Aguila y a Dña. Fe nanda Leone.
BIBLIOGRAFÍA
Calde , P. C, Yaqoob, P., Newsholme, E. A. (1994).
-«T iacylglyce ol me abolism by lymphocy es and he
e ec o iacylglyce ol on lymphocy e p oli e a ion».-
Biochem.
J. 298,
605-611.
Ca lson,
R. P., O'Neill-Da is, L., Chang, J., Lewis, A. J.
(1985). -«Modula ion o mouse, ea edema by
cyclooxygenase and lipoxygenase inhibi o s and o he
pha macological agen s».- Agen s and
Ac ions
17, 197-
204.
De
Young,
L. M., Khei e s, J. B., Baila on, S. J., Young, J. M.
(1989). -«Edema and cell in il a ion in he pho bol es e -
ea ed mouse ea a e empo ally sepa a e and can be
di e en ially modula ed by pha macologic agen s».-
Agen s Ac ions
26,
335-341.
Nishizuka, Y. (1984). -«The ole o p o ein kinase C in cell
su ace signal asduc ion and umou p omo ion».-
Na u e
308, 693-698.
Recio, M. C, Gine , R. M., Mañez, S., Gueho, J. Julien, H. R.,
Hos e mann, K., Ríos, J. L. (1995). -«In es iga ions on
he s e oidal an iin lama o y ac i i y o i e penoids om
Diospy os
leucomelas».-
Plan a
Med. 61,
9-12.
Susuki,
K., O a, H., Sasaga a, S., Saka ani, T, Fujiku a, T,
(1983). -«Assay me hod o myelope oxidase in
polymo phonuclea leukocy es».- Anal. Biochem. 132,
345-352.
Ying,
Q. L, Rineha , A. R., Simon, S. R., Che onis, J. C.
(1991). -«Inhibi ion o human leucocy e elas ase by
u solic acid».-
Biochem
J. 277, 521-526.
Recibido: No iemb e 1996
Acep ado: Ene o 1997
(c) Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas
Licencia C ea i e Commons 3.0 España (by-nc)
h p://g asasyacei es. e is as.csic.es