Actividad farmacológica de la fracción de esteroles y alcoholes triterpenicos aislada del aceite de oliva virgen.

G asas y Acei es Vol. 48. Fase. 2 (1997), 93-95 93 Comunicación b e e Ac i idad a macológica de la acción de es e óles y alcoholes i e pénicos aislada del acei e de oli a i gen Po R. de la Pue a2, R, Maes o-Du áni y V, Ruiz-Gu ié ezi 1 Ins i u o de la G asa (C.S.I.C.). Apa ado 1078, 41012 Se illa. 2 Dp o. Fa macia, Tecnología Fa macéu ica y Fa macología, Facul ad de Fa macia, 41012 Se illa. RESUMEN Ac i idad a macológica de la acción de es e óles y alcoholes i e pénicos aislada del acei e de oli a i gen La acción de es e óles y dialcoholes i e pénicos ob enida po c oma og a ía en capa ina a pa i del insaponi icable del acei e de oli a i gen ha sido ensayada pa a e alua su posible ac i idad a macológica en elación a su e ec o an iin lama o io. La adminis ación ópica de es os p oduc os p odujo un po en e e ec o an iedema oso, en el edema au icula p o ocado po la aplicación de TPA (ace a o de e adecanoil o bol) en animales de expe imen ación. Es e es ha sido ampliamen e u ilizado pa a e alua la acción an iin lama o ia de inhibido es de la enzima os- olipasa A2. La medida de la mielope oxidasa, enzima ma cado- a del acumulo de neu ó ilos en el ejido dé mico in lamado, mos ó un al o pode inhibi o io sob e la in il ación celula eje ci- da po la acción ensayada. PALABRAS-CLAVE: Acei e de oli a i gen - Ac i idad an iin- lama o ia - Alcohol i e pénico - Es e ol. SUMMARY Pha macological ac i i y o he ac ion isola ed om i gin oli e oil con aining he s e ols and i e penic alcohols The ac ion o s e ols and i e penic dialcohols om unsaponi iable o i gin oli e oil has been es ed o I s possible an iin lama o y ac i i y. The opical adminis a ion o hese p oduc s p oduced a po en an ioedema ous e ec , in he au icula oedema induced by TPA (12-0- e adecanoylpho bol ace a e) in expe imen al animals. This es has been widely used o de e mine he an iin lama o y ac ion o phospholipase A2 inhibi o s. The measu e o myelope oxidase, ma ke enzyme o he accumula ion o neu ophils in he in lamed issue, demons a ed a signi ican educ ion o he cellula in il a ion p oduced by assayed ac ion. KEY-WORDS: An iin lama o y ac i i y • alcohol - Vi gin oli e oil. S e ol - T i e pene 1. INTRODUCCIÓN La acción insaponi icable de los acei es ege ales se conside a mino i a ia con espec o a la acción gli- ce ídica, sin emba go puede eje ce una g an in luencia en las p opiedades biológicas de cada acei e. De hecho, la e apia inmunosup esi a en nume osas en e - medades in lama o ias se asocia, no exclusi amen e al e ec o de los ácidos g asos que se libe an as la mani- pulación de la die a con acei e icos en ácidos g asos poliinsa u ados, sino a o os componen es, p obable- men e los componen es meno es o insaponi icables (Calde , 1994). P ueba de ello, el e i odiol (alcohol i- e pénico que se encuen a en el insaponi icable del acei e de oli a) ha sido desc i o ecien emen e con un inhibido de la enzima elas asa lisosomal de leucoci o humano (Ying, 1994). Con es e abajo, hemos que ido demos a el e ec- o a macológico que sob e p ocesos in lama o ios, p e- sen an cie os componen es mino i a ios ca ac e ís icos de la acción insaponi icable del acei e de oli a i gen, como son los es e óles y los dialcoholes i e pénicos. El análisis de la acción de es e óles es muy impo an- e ya que su con enido a ía de un acei e a o o. En el oli a i gen, el con enido en es e óles no es mayo de 160 mg/kg, y el compues o mayo i a io de es a acción es el B-si os e ol, cons i uyendo en e el 76-86% del insaponi icable. Los dioles i e pénicos p esen es en la acción son e i odiol y u aol cuyas concen aciones espec i as son 6-10 y 18 mg/kg de acei e. 2. PARTE EXPERIMENTAL 2.1 Mues as F acción de es e óles y dialcoholes i e pénicos ob enidos del insaponi icable de acei e de oli a i gen po c oma og a ía en capa ina. (c) Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas Licencia C ea i e Commons 3.0 España (by-nc) h p://g asasyacei es. e is as.csic.es 94 G asas y Acei es 2.2 Ma e ial y Reac i os Aislamien o dei insaponi icable Ma e ial y eac i os desc i os en la no ma UNE 55004, necesa io pa a la sepa ación del insaponi ica- ble po el mé odo del óxido die ílico (capí ulo 4 de la no ma). C oma og a ía en capa ina C oma o olios de sílice G Me ck, cube a de id io pa a el desa ollo de placas, es u a de desecación, mic oje ingas, lámpa as ul a iole a. Re elado : solu- ción 2-7-diclo o- luo esceína al 0,1% en e anol del 90%; é e e ílico y hexano de calidad «pa a análisis». Animales de expe imen ación Se u iliza on a ones Swiss de unos 25-20 g de peso, que se ag upa on en lo es de 6. Reac i os químicos Indome acina (Sigma), ace a o de e adecanoil o - bol (Sigma). 2.3 P ocedimien o de ob ención de la acción ue on sac i icados y se p ocedió a secciona (6 mm) y pesa la po ción cen al de las o ejas. El alo del edema se calculó po di e encia de peso en e las o e- jas a adas (de echas) y las no a adas (izquie das), así mismo se calculó la inhibición del edema (exp e- sado en %) en e al g upo con ol. 2.5 Inhibición de la enzima mielope oxidasa La ac i idad de la enzima mielope oxidasa (MPO) ue ensayada u ilizando los homogenizados de las o ejas in lamadas, según écnica de Susuki (1983), modi icada po De Young (1989). Las medidas de abso bancia se ealiza on a 665nm de longi ud de onda, en un espec o o óme o Pe kin Elme Lambda 3. La inhibición enzimá ica (exp esada en %) se con- esponde con las di e encias de abso bancias obse - adas espec o al g upo con ol. 2.6 Análisis es adís icos Los esul ados se p esen an como la media de los alo es ob enidos en cada lo e de animales ±e o es ánda . La signi icación es adís ica se ealizó con el es de la « » de S uden . Las placas c oma og á icas se ac i an en es u a de desecación a 105-110°C, du an e 1 h. En la placa ac i- ada se deposi an go i as inas del ¡nsaponi icable ob enido disuel o en é e insop opílico, con ayuda de una mic oje inga, cub iendo una línea si uada a unos 2 cm del bo de in e io de la placa. La dis ibución debe á hace se uni o memen e, e ec uando las pasa- das que sean necesa ias pa a deposi a la o alidad del insaponi icable. El sol en e de desa ollo ue hexa- no-é e e ílico 2:1 ( / ). Una ez e ec uado el desa o- llo se pul e iza la placa con el eac i o de e elado y se examina a la luz ul a iole a (366 nm). La banda ho izon al co espondien e a la mezcla de es e óles y alcoholes i e pénicos, se asca con una espá ula, el pol o de sílice se coloca en minico- lumnas de id io y el con enido o gánico se eluye con alcohol isop opílico. El p oduc o ob enido una ez e a- po ado el disol en e cons i uyó la acción a ensaya . 2.4 Edema au icula p oducido po TPA Seguimos la écnica de De Young (1989). El edema ue inducido en la o eja de echa del a ón, po la aplicación ópica de 2.5Mg de TPA po o eja disuel- o en ace ona. Las dis in as dosis u ilizadas: 0,25, 0,50 y 1,0 mg de la acción a ensaya ue on disuel as en e anol del 70%, y ue on aplicadas ópicamen e, inme- dia amen e después de la aplicación de TPA. Las o e- jas izquie das (con oles) ue on a adas con el ehí- culo (e anol 70%). Gomo pa ón de e e encia se empleó indome acina a una dosis de 0,5 mg/o eja. Pasadas 4 ho as de la aplicación ópica, los animales 3. RESULTADOS La acción de es e óles y alcoholes i e pénicos mos ó una po en e ac i idad an ün lama o ia ópica en el es del edema au icula p oducido po TPA en o eja de a ón, obse ándose una cla a inhibición del edema en una elación dosis-dependien e (Tabla I). Los alo es de inhibición ob enidos son simila es a los p oducidos con la indome acina u ilizada como pa ón de e e encia. La ac i idad de la enzima mielope oxidasa, indicado a de la in il ación leucoci a ia ue signi ica i amen e inhibi- da (p<0,001) a las es dosis ensayadas (Tabla II). Tabla I Inhibición del edema au icula p oducido po TPA Edema (I (mg/aplicaclón) Inhibición (%) Edema Con ol (TPA) Pa ón (Indome acina) F acción F acción F acción 0.0025 0.50 0.25 0.50 1.00 20.56±0.78 2.28±0.73 *** 7.56±1.15 88.91 63.23 3.52±0.63 82.87 1.84±0.73 91.05 *p<0,05, **p<0,01,***p<0,001; « » de S uden en e al con ol (c) Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas Licencia C ea i e Commons 3.0 España (by-nc) h p://g asasyacei es. e is as.csic.es Vol.48. Fase. 2(1997) 95 Tabla II Inhibición de la enzima mielope oxidasa en el es del edema p oducido po TPA Dosis Di e encia Abs. (mg/aplicación) ¡nm) Inhibición (%) Con ol (TPA) 0.0025 0.928±0.09 Pa ón (Indome acina) 0.50 0.043±0.02 95.36 F acción 0.25 0.312±0.03 66.38 desc i a pa a á macos ipo co icos e oides (De Young, 1989). Es o concue da con nues os esul a- dos, ya que los es e óles y i e penos ienen una es uc u a elacionada, y a menudo han sido u ilizados como p ecu so es en la sín esis de es os á macos. Po an o, el e ec o an iin lama o io ópico obse a- do con es a sub acción es e ólica/ h e pénica del insaponi icable p oceden e de acei e de oli a i gen, nos pone de mani ies o la acción bene iciosa que es os componen es mino i a ios pueden eje ce sob e de e minados es ados pa ológicos. F acción 0.50 0.217±0.03 76.61 AGRADECIMIENTOS F acción 1.00 O.OOO O.OO 100.00 *** *p<0,05, **p<0,01,***p<0,001; « » de S uden en e al con ol 4. DISCUSIÓN Una espues a posi i a en el es del TPA indica ía que la inhibición del edema pod ía se esencialmen e debida a un bloqueo de la p o eína quinasa C(PKC). El TPA es imula la acción de es a p o eína quinasa de una mane a simila a aquella p oducida po diacilgli- ce ol endógeno, libe ado de los os olípidos de mem- b ana (Nishizuka, 1984). Como consecuencia de la es imulación de la PKC se ac i an o as enzimas como la os olipasa Ag, que induce la libe ación del ácido a aquidonico, o iginando un aumen o de los ni eles de p os aglandinas Eg y la apa ición de edema (Ca lson, 1985). Po lo an o, la inhibición p oducida po la ac- ción ensayada sob e la in lamación inducida po es e agen e i i an e, pod ía se debida al bloqueo de una o a ias de las enzimas elacionadas con la libe ación y me abolismo del ácido a aquidonico. Di e en es compues os de es uc u a i e pénica de o igen na u al, como be ulina y ácidos be ulínico y u sólico, han demos ado posee un e ec o an iin la- ma o io ópico, p esen ando un mecanismo de acción elacionado con el que poseen los glucoco icoides (Recio, 1994). Po o o lado, la acción inhibió muy signi ica i a- men e la ac i idad de la enzima mielope oxidasa, indi- cado a de la in il ación de neu ó ilos en el ejido in la- mado. Es a po en e inhibición sob e el edema y ambién sob e la ac i idad de mielope oxidasa ha sido Es e abajo ha sido inanciado con ondos del p o- yec o ALI-95-0073, de la Comisión In e minis e ial de Ciencia y Tecnología. G acias po la ayuda écnica a D. Manuel Rod íguez-Aguila y a Dña. Fe nanda Leone. BIBLIOGRAFÍA Calde , P. C, Yaqoob, P., Newsholme, E. A. (1994). -«T iacylglyce ol me abolism by lymphocy es and he e ec o iacylglyce ol on lymphocy e p oli e a ion».- Biochem. J. 298, 605-611. Ca lson, R. P., O'Neill-Da is, L., Chang, J., Lewis, A. J. (1985). -«Modula ion o mouse, ea edema by cyclooxygenase and lipoxygenase inhibi o s and o he pha macological agen s».- Agen s and Ac ions 17, 197- 204. De Young, L. M., Khei e s, J. B., Baila on, S. J., Young, J. M. (1989). -«Edema and cell in il a ion in he pho bol es e - ea ed mouse ea a e empo ally sepa a e and can be di e en ially modula ed by pha macologic agen s».- Agen s Ac ions 26, 335-341. Nishizuka, Y. 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