!
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UNIVERSITAT*POLITÈCNICA*DE*VALÈNCIA*
*
ESCOLA!TÈCNICA!SUPERIOR!D’ENGINYERIA!
AGRONÒMICA!I!DEL!MEDI!NATURAL!
!
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E ec o!de!ca bo i . i os a o!
sob e!la! unción!plaque a ia!
!
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TRABAJO!FIN!DE!GRADO!EN!BIOTECNOLOGÍA!
!
Ma ía*Ampa o*Blanch*Ruiz*
!
Tu o es:!D a.!Ángeles!Ál a ez!Ribelles,!
D .!Juan!Vicen e!Esplugues!Mo a!
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Tu o !académico:!Ma ía!Pila !López!G esa!
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Cu so!Académico:!2015/2016!
!
Valencia,!Julio!de!2016!
*
*
!
!
Alumno:!Ma ía!Ampa o!Blanch!Ruiz!
Tu o es:!D a.!Ángeles!Ál a ez!Ribelles!y!D .!Juan!V.!Esplugues!Mo a!
Fecha:!Valencia,!Julio!2016!!
Tí ulo:!E ec o!de!ca bo i i os a o!sob e!la! unción!plaque a ia!
!
Resumen:!
Abaca i !es!un! á maco!an i e o i al!ampliamen e!u ilizado!en!el! a amien o!del!
SIDA.!Se!me aboliza!en!el!ci oplasma!de!las!células!pa a!da !luga !a!ca bo i i os a o,!su!
me aboli o!ac i o.!Se!ha!obse ado!que!el!uso!de!abaca i !es á!asociado!con!la!apa ición!
de!e ec os!ad e sos!a!ni el!ca dio ascula ,!en!pa icula !con!un!mayo ! iesgo!de!su i !
in a o! de! mioca dio.! Sin! emba go,! se! desconoce! si! es os! e ec os! es án! p oducidos! po !
abaca i !o!po !ca bo i i os a o,!o!cuales!son!los!mecanismos! esponsables.!!
!
La! plaque a! iene! un! papel! undamen al! en! la! pa o isiología! del! in a o! de!
mioca dio,!siendo! undamen al!en!el!desa ollo!del! ombo!que!conduce!a!la!isquemia!y!al!
in a o.!En! es e! sen ido,! ecien emen e! se! ha! demos ado! que! abaca i ! induce! an o!
in e acción! plaque a endo elio! como!in e acción! plaque a leucoci o! sin! p oduci ! la!
ac i ación!plaque a ia.!
! !
Po ! an o,! el! obje i o! del! p esen e! abajo! ue! analiza ! el! e ec o! de! ca bo i
i os a o!en!la! unción!plaque a ia,!en!pa icula !sob e:!
• la! in e acción! plaque a endo elio:! empleando!un! sis ema! de! cáma a! pa alela! de!
lujo!que! ep oduce!la! elocidad!a!la!que! iaja!la!sang e!po !el! o en e!sanguíneo,!
• la! in e acción! plaque a! leucoci o:! u ilizando!la! ci ome ía! de! lujo! que! pe mi e!
sepa a ! las! di e en es! poblaciones! leucoci a ias! y! median e! un! an icue po!
especí ico!pa a!plaque as!(CD41),!de e mina !la!p esencia!de!plaque as!en!cada!
población!de!leucoci os,!
• la!ac i ación!plaque a ia:!de e minando!la!exp esión!de!P selec ina!en!la!población!
de!plaque as,!median e!la!ci ome ía!de! lujo.!
!
Es o!nos!pe mi i á!dilucida !si!los!e ec os!de!abaca i !sob e!la! unción!plaque a ia!
pod ían!se !o!no!p o ocados!po !ca bo i i os a o!y!ayuda ía!a!explica !el!mecanismo!
po !el!cual!abaca i !puede!p oduci ! oxicidad! ascula .!!
!
Del! mismo! modo! que! abaca i ,! ca bo i i os a o! induce! in e acción! plaque a
endo elio!y!plaque a leucoci o!y!no!induce!un!inc emen o!en!la!exp esión!de!P selec ina,!
po ! an o,! no! ac i a! las! plaque as.! La! única! di e encia! en e! los! e ec os! de! es os! dos!
compues os!es!el! ipo!celula !implicado!en!la!in e acción!plaque a endo elio:!en!el!caso!de!
la! in e acción! inducida! po ! abaca i !el! compues o! es a!eje ciendo! un! e ec o! sob e! las!
células!endo eliales!mien as!que!en!la!inducida!po !ca bo i i os a o,!és e!eje ce!una!
acción! an o!sob e!células!endo eliales!como!sob e!plaque as.!
!
Palab as! cla e:! Abaca i ,! ca bo i i os a o,! plaque a,! leucoci o,! endo elio,! in e acción!
plaque a leucoci o,!in e acción!plaque a endo elio.!
!
!
S uden :!Ma ía!Ampa o!Blanch!Ruiz!
P o esso s:!D a.!Ángeles!Ál a ez!Ribelles!y!D .!Juan!V.!Esplugues!Mo a!
Da e:!July!2016,!Valencia!!
Ti le:!E ec !o !ca bo i iphospha e!on!pla ele ! unc ion!
!
Abs ac :!!
Abaca i ! is! an! an i e o i al! d ug! widely! used! in! he! ea men ! o ! AIDS.! I ! is!
me abolized! in! he! ci oplasm! o ! he! cells! o! lead! o! ca bo i iphospha e,! i s! ac i e!
me aboli e.!Se e al!s udies!ha e! shown! he! associa ion! o ! abaca i !wi h! ca dio ascula !
ad e se!e ec s,!pa icula ly!wi h!an!inc eased! isk!o !myoca dial!in a c ion.!Howe e ,!i !is!
unknown! whe he ! hese! e ec s! a e! caused! by! abaca i ! o ! by! ca bo i iphospha e,!
nei he ! he!mechanisms!in ol ed.!!
!
Pla ele !plays!a!majo ! ole!in! he!pa hophysiology!o !myoca dial!in a c ion,!being!
impo an !in! he! h ombus!de elopmen !leading! o!ischemia!and!in a c ion.!In! his! ega d,!
i !has! ecen ly!demons a ed! ha !abaca i !induces!bo h!pla ele endo helium!and!pla ele
leukocy e!in e ac ions,!bu !doesn’ !induce!pla ele !ac i a ion.!
!
The e o e! he!aim!o ! his!s udy!was! o!analyze! he!e ec s!o !ca bo i iphospha e!
on!pla ele ! unc ion!by!cha ac e izing!i s!e ec !on:!
• pla ele endo helium!in e ac ion:!employing!a! low!chambe ! ha ! ep oduces! he!
low!shea ! a e!p esen !on! he! essel!wall,!
• pla ele leukocy e! in e ac ion:! using! low! cy ome y! ha ! will! di e en ia e!
leukocy e! subpopula ions! and! will! analyze! by! an! speci ic! an ibody! o ! pla ele s!
(CD41),! he!p esence!o !pla ele s!in!each!subpopula ion,!!
• pla ele ! ac i a ion:! measu ing! he! exp ession! o ! P selec in! in! he! popula ion! o !
pla ele s,!by! low!cy ome y.!
!
This!will!allow!us! o!de e mine!whe he ! he!e ec s!o !abaca i !on!pla ele ! unc ion!
coul!be!induced!o !no !by!ca bo i iphospha e!and!will!help! o!explain! he!mechanism!by!
which!abaca i !would!cause! ascula ! oxici y.!
!
In! he!same!way!o !abaca i ,!ca bo i ! iphospha e!induces!pla ele endo helium!
and! pla ele leukocy e! in e ac ions,! and! doesn´ ! induce! an! inc ease! on! P selec in!
exp ession,!so!i !doesn´ !ac i a e!pla ele s.!The!only!one!di e ence!be ween! he!e ec s!o !
hese! wo!compounds!is! he!cell! ype!in ol ed!on!!pla ele endo helium!in e ac ion:!in! he!
case! o ! he! in e ac ion! induced! by! abaca i ! his! compound! is! exe ing! an! e ec ! on!
endo helial!cells!whe eas!on! he!in e ac ion!induced!by!ca bo i iphospha e,! his!exe s!
an!e ec !on!bo h!endo helial!cells!and!pla ele s.!
!
!
Keywo ds:! Abaca i ,! ca bo i iphospha e,! pla ele ,! leukocy e,! endo helium,! pla ele
leukocy e!in e ac ion,!pla ele endo helium!in e ac ion.!
! !
!
!
Ag adecimien os!
En!p ime !luga ,!me!gus a ía!ag adece !a!Ángeles!Ál a ez!Ribelles!y!Juan!Vicen e!
Esplugues!Mo a!po !habe me!pe mi ido! ealiza !es e! abajo!bajo!su!di ección!y!po !su!
con ianza! en! mí.! Especialmen e! ag adece ! a! Ángeles! po ! su! ayuda,! su! iempo! y! po ! su!
in e és!en!mi! o mación!cien í ica.!
!
Da !las!g acias! ambién!a! oda!la!gen e!del!labo a o io!po !habe me!acogido!desde!
el!p ime !día,!po !el!ambien e!que!hay!en!el!labo a o io!y!po !la!compañía!que!han!hecho!
que! es os! úl imos! meses! hayan! sido! oda! una! expe iencia.! Sob e! odo,! a! Samu! po !
habe me!enseñado!cómo! unciona!el! abajo!en!el!labo a o io,!po !su!ayuda,!sus!consejos!y!
su!apoyo,!a!Nicole!po ! habe me! guiado!en!el! labo a o io!cuando!llegué,!y!a! Víc o ,!po !
es a !siemp e!pendien e!y!dispues o!a!ayuda me.!
!
Aunque!es os!úl imos!meses!no!nos!hayamos! is o!demasiado,!así!somos!noso as,!
ambién!que ía!da !las!g acias!a!mis!amigas!“bio ecs”!po que!después!de!habe !es ado!
jun as!es os!cua o!años!puedo!deci !que!sin! oso as!es e! iaje!no!hubie a!sido!lo!mismo,!
y! aunque! aho a! nues os! caminos! se! sepa an! siemp e! eco da emos! que! es o! lo!
empezamos!jun as.!
!
A!mi! amilia,!ag adece !que!cada!uno!a!su!modo! ambién!me!hayan!ayudado!en!
odo!lo!que!ha!es ado!en!sus!manos,!po !su!apoyo,!y!su!ánimo,!y!po !escucha me!aunque!la!
mayo ía!de! eces!no!supie an!de!que!es aba!hablando.!
Muchas'g acias'a' odos…'
!
*
*
*
*
!
!
ÍNDICE*
*
I. INTRODUCCIÓN*............................................................................................................*1!
1. INFECCIÓN!Y!CICLO!BIOLÓGICO!DEL!VIH!..........................................................................................!1!
2. FÁRMACOS!ANTIRRETROVIRALES!.....................................................................................................!3!
! !! 2.1!Abaca i !(ABC)!.......................................................................................................................!6!
! ! 2.2!!Ca bo i 9 i os a o!(CBV9TP)!...........................................................................................!7!
3. EFECTOS!DE!LA!TERAPIA!ANTIRRETROVIRAL!EN!EL!SISTEMA!CARDIOVASCULAR!....................!8!
4. PROCESO!INFLAMATORIO:!FUNCIÓN!PLAQUETARIA!.......................................................................!9!
! !! 4.1!In e acción!plaque a9endo elio!...................................................................................!10!
! !! 4.2!In e acción!plaque a9plaque a:!ag egación!..........................................................!11!
! ! 4.3!!In e acción!plaque a9leucoci o!....................................................................................!12!
II. OBJETIVOS*..................................................................................................................*14!
III. MATERIALES*Y*MÉTODOS*.....................................................................................*15!
1. MÉTODOS!............................................................................................................................................!15!
! !! 1.1!Aislamien o!y!cul i o!de!células!endo eliales!.........................................................!15!
! ! 1.2!!Ex acción!de!plasma! ico!en!plaque as!(PRP)!y!p epa ación!de!plaque as!
la adas!humanas!................................................................................................................!16!
! ! 1.3!!P o ocolo!expe imen al!de! a amien o!...................................................................!16!
! ! 1.4!!Ensayo!de!adhesión!en!cáma a!pa alela!de! lujo!.................................................!17!
! ! 1.5!!Análisis!de!la!in e acción!plaque a9leucoci o!........................................................!19!
! ! 1.6!!De e minación!de!la!ac i ación!plaque a ia!median e!el!análisis!de!la!
exp esión!de!la!molécula!de!adhesión!P9selec ina!...............................................!20!
2. MATERIALES!......................................................................................................................................!21!
3. COMITÉ!ÉTICO!....................................................................................................................................!21!
4. ANÁLISIS!ESTADÍSTICO!.....................................................................................................................!21!
IV. RESULTADOS*.............................................................................................................*22!
1. ESTUDIO!DEL!EFECTO!DE!CBV TP!SOBRE!LA!INTERACCIÓN!PLAQUETA ENDOTELIO!..........!22!
! ! 1.1!!!In e acción!plaque a9endo elio!...................................................................................!22!
! ! 1.2!!!De e minación!del! ipo!celula !implicado!en!la!in e acción!
! ! ! plaque a9endo elio!inducida!po !CBV9TP!................................................................!23!
2. ANÁLISIS!DEL!EFECTO!DE!CBV TP!SOBRE!LA!INTERACCIÓN!PLAQUETA LEUCOCITO!..........!24!
! !! 2.1!In e acción!plaque a9neu ó ilo!..................................................................................!24!
! !! 2.2!In e acción!plaque a9monoci o!...................................................................................!25!
! !! 2.3!In e acción!plaque a9lin oci o!......................................................................................!25!
3. DETERMINACIÓN!DEL!EFECTO!DE!CBV TP!SOBRE!LA!ACTIVACIÓN!PLAQUETARIA!..............!26!
! ! 3.1!!!Análisis!de!la!exp esión!de!P9selec ina!en!PRP!......................................................!26!
V. DISCUSIÓN*..................................................................................................................*27!
VI. CONCLUSIONES*..........................................................................................................*30!
VII. BIBLIOGAFÍA*..............................................................................................................*31!
*
* *

!
!
ÍNDICE*DE*TABLAS*
*
Tabla*1.*Combinaciones!de! a amien o!pa a!de e mina !el! ipo!celula !implicado!en!la!
in e acción!..............................................................................................................................................................!18!
!
Tabla*2.*Reac i os,!an icue pos!y! á macos!an i e o i ales!........................................................!21*
*
ÍNDICE*DE*FIGURAS*
*
Figu a*1.*Ciclo!biológico!del!VIH!.....................................................................................................................!2!
!
Figu a*2.*Ciclo!biológico!del!VIH!que!mues a!los!di e en es!si ios!de!acción!sob e!los!que!
pueden!ac ua !los!di e en es! á macos!an i e o i ales!......................................................................!3!
!
Figu a*3.*Fá macos!ITIAN!.....................................................................................................................!5*
*
Figu a*4.*Es uc u a!química!de!abaca i ,!guanosina!y!ca bo i i os a o!.................................!6!
*
Figu a*5.*Rep esen ación!esquemá ica!del!me abolismo!de!abaca i !y!el!mecanismo!de!
acción!de!ca bo i i os a o!sob e!la! eplicación!del!VIH!....................................................................!7!
*
Figu a*6.*E apas!de!la!adhesión!plaque a ia!sob e!el!endo elio!y!las!moléculas!de!adhesión!
que!pa icipan!en!cada!una!de!ellas!.............................................................................................................!10!
*
Figu a*7.!Recep o es,!moléculas!de!adhesión!y!mecanismos!molecula es!implicados!en!la!
ag egación!plaque a ia!......................................................................................................................................!12*
*
Figu a*8.*Moléculas!de!adhesión!implicadas!en!la!in e acción!plaque a leucoci o!...............!13!
*
Figu a*9.*Co dón!umbilical!humano!comple o!cuya! ena!se!encuen a!llena!de!!
colagenasa!...............................................................................................................................................................!15!
*
Figu a*10.*Mon aje!de!la!cáma a!pa alela!de! lujo!...............................................................................!17!
*
Figu a*11.*Mon aje!del!sis ema!de!cáma a!pa alela!de! lujo!en!mic oscopio!...........................!18!
*
Figu a*12.*Ci óme o!de! lujo!FACS!Calibu !.............................................................................................!19!
!
Figu a*13.*Iden i icación!de!las!di e en es!subpoblaciones!leucoci a ias!y!de!la!población!
de!plaque as!a! a és!del!ci óme o!de! lujo!............................................................................................!20!
*
Figu a*14.*E ec o!de!abaca i !y!ca bo i i os a o!sob e!la!adhesión!de!plaque as!sob e!
células!endo eliales!!..................................................................................................................!22!
*
Figu a*15.*De e minación!del! ipo!celula !implicado!en!la!adhesión!de!plaque as!al!
endo elio!inducida!po !abaca i !o!ca bo i i os a o!.........................................................................!23!
*
Figu a*16.*E ec o!de!abaca i !y!ca bo i i os a o!sob e!la!adhesión!de!plaque as!!
sob e!neu ó ilos!..................................................................................................................................................!24!
!
Figu a*17.*E ec o!de!abaca i !y!ca bo i i os a o!sob e!la!adhesión!de!plaque as!!
sob e!monoci os!...................................................................................................................................................!25!
!
Figu a*18.*E ec o!de!abaca i !y!ca bo i i os a o!sob e!la!exp esión!de!CD62P!!
(P selec ina)!en!plaque as!de!PRP!................................................................................................................!26!
!
!
ABREVIATURAS*
!
ABC:!Abaca i !
ADH:!Alcohol!deshid ogenasa*
ADK:!“Adenosine!kinase”!
ADN:!Ácido!desoxi ibonucleico!
ADNc:!Ácido!desoxi ibonucleico!complemen a io!
ADP:!Adenosina!di os a o!
AMP:!Adenosina!mono os a o!
ARN:!Ácido! ibonucleico!
ARNm:!Ácido! ibonucleico!mensaje o!
ATP:!Adenosina! i os a o!
AZT:!Zido udina!
cART:!Te apia!an i e o i al!combinada!
CBV]TP:!Ca bo i ! i os a o!
CCR5:!“C C!Chemokine!C C!Ligand!5”!
CD11b/CD18:!“Mac ophage!1!An igen”!
CD4:!“clus e !o !cuad uple!di e en ia ion”!
CD41:!“In eg in!alpha!chain!2b”!
CD62P:!P selec ina!
Cmax:!Concen ación!plásma ica!máxima!
CXCR4:!“C X C!Chemokine!Recep o !Type 4”!
ddI:!Didanosina!
dNTP:!Desoxi ibonucleó ido! i os a o!
d4T:!Es a udina!
E.E.M.:!E o !es ánda !de!la!media*
EBM]2:!“Endo helial!cell!basal!medium 2”!
eNOS:!Óxido!ní ico!sin asa!endo elial!
ERO:!Especies! eac i as!de!oxígeno!
FDA:!“Food!and!D ug!Adminis a ion”!
FITC:!Fluo esceína!iso iociana o!
FTC:!Em ici abina!
GA:!“Gen amicine!sul a e!ampho e icine!B”!
gp41:!“Glycop o ein!41”!
GPIbA:!“Glycop o ein!Ib!pla ele !alpha!subuni ”!
GPIIb]IIIa:!“Glycop o ein!IIb IIIa”!
!
!
GUK1:!Guanila o!quinasa!
HBSS:!“Hanks!Balanced!Sal !Solu ion”!
hFGF]B:!“Human! ib oblas !g ow h! ac o basic”!
HUVEC:!“Human!Umbilical!Vein!Endo helial!Cell”!
ICAM]1:!“In e cellula !Cell!Adhesion!Molecule 1”!
ICAM]2:!“In e cellula !Cell!Adhesion!Molecule 2”!
IF:!Inhibido es!de! usión!
InIn :!Inhibido es!de!la!in eg asa!
IP:!Inhibido es!de!p o easa!
ITIAN:!Inhibido es!de!la! ansc ip asa!in e sa!análogos!de!nucleós( )ido!
ITINAN:!Inhibido es!de!la! ansc ip asa!in e sa!no!análogos!de!nucleósido!
JAM]3:!“Junc ional!adhesion!molecule 3”!
Mac]1:!“Mac ophage!1!An igen”!
PAF:!“Pla ele !Ac i a ing! ac o ”!
PBS:!“Phospha e!bu e ed!saline”!
PCK1:!Fos oenolpi u a o!ca boxilasa!1!
PE:!Ficoe i ina!
PGK1:!Fos oglice a o!quinasa!1!
PPP:!Plasma!pob e!en!plaque as!
PRP:!Plasma! ico!en!plaque as!
PSGL]1:!“P selec in!glycop o ein!ligand 1”!
R3]IGF]1:”Recombinan !long!R3!Insuline like!g ow h! ac o 1”!
hEGF:”Recombinan !human!epide mal!g ow h! ac o ”!
SIDA:!Sínd ome!de!la!inmunode iciencia!adqui ida!
TDF:!Teno o i !
TNF]α:!“Tumo !Nec osis!Fac o !α”!
UGT:!u idina!di os a o!glucu onosil ans e asa!
VEGF:!“Vascula !endo helial!g ow h! ac o ”!
VIH:!Vi us!de!la!inmunode iciencia!humana!
3TC:!Lami udina
!
!
1!
I. INTRODUCCIÓN*
*
1. In ección*y*ciclo*biológico*del*VIH*
!
El! Vi us! de! la! Inmunode iciencia! Humana! (VIH)! pe enece! a! la! amilia! de! los!
e o i us!y!es!el!agen e!causan e!del!Sínd ome!de!la!Inmunode iciencia!Adqui ida!(SIDA),!
una!de!las!pandemias! i ales!más!impo an es!en!la!ac ualidad!(F eed,!2015).!Es e! i us!
in ec a!a!los!lin oci os!T!CD4+,!debido!a!que!la!en ada!del! i us!a!las!células!es á!mediada!
po ! la! unión! de! la! glicop o eína! En ! i al! a! CD4! y! al! co ecep o ! CCR5! o!CXCR4,! dos!
p o eínas!de!supe icie!de!la!célula!hospedado a!(Choe!e !al.,!1996;!Feng!e !al.,!1996).!!
!
El!ciclo!biológico!del!VIH!cons a!de!las!siguien es! ases!(Fig.!1)!(Laskey!&!Siliciano,!2014):!
!
• Fijación:! es! la! p ime a! e apa! en! la! in ección! de! las! células.! Se! basa! en! el!
econocimien o! y! acoplamien o! de! las! p o eínas! de! la! en ol u a! del! i ión,! la!
p o eína!En !con!sus! ecep o es!p esen es!en!los!lin oci os!T!CD4+,!los!CD4.!Es e!
econocimien o! se! p oduce! g acias! a! los! co ecep o es! p opios! de! las! células!
suscep ibles!de!se !in ec adas,!CCR5!y!CXCR4!que!in e accionan!con!las!p o eínas!
supe iciales!del! i us.!Po ! an o,!únicamen e! an!a!se !sensibles!a!la!in ección!
aquellas! células! que! exp esen!es os! ecep o es,! siendo! es e! econocimien o!
imp escindible!pa a!que!el! i us!llegue!a!pene a !en!la!célula!y!con inúe!con!el!
p oceso!de!in ección.!
!
• Fusión:!la!en ol u a!lipídica!del! i us!se! usiona!con!la!memb ana!plasmá ica!de!
la!célula!y!se!libe a!el!con enido!del! i ión!en!el!in e io !de!la!célula!hospedado a.!
Se!eliminan!las!cubie as!p o eicas,!la!cápside!y!la!nucleocápside!que!p o egen!el!
ARN,!que!cons i uye!el!genoma! i al,!y!sus!p o eínas!asociadas.!De!es a! o ma,!el!
ARN! i al! queda! lib e! en! el! ci oplasma! de! la! célula! es ando! lis o! pa a! se !
p ocesado.!
!
• T ansc ipción* in e sa* del* ARN* i al:! el! genoma! i al! se! ansc ibe! a! ADNc!
(ADN! complemen a io)! monoca ena io.! Finalmen e,! dos! moléculas! de! ADNc! se!
asocian!pa a! o ma !una!molécula!de!ADN.!
!
• In eg ación:!la!cadena!de!ADN!se! anspo a!al!núcleo!de!la!célula!hospedado a!y!
g acias!a!la!enzima!in eg asa,!que!p ocede!del! i ión,!se!in eg a!en!el!ADN!celula !
donde! se! puede! eplica ! de! o ma! masi a,! de! o ma! con olada! o! pe manece !
la en e.*
*
• T ansc ipción*del*ADN* í ico:!se!p oduce!po !los!mecanismos!no males!de!la!
célula.! El! esul ado! es! un! ARNm! (ARN! mensaje o)! complejo! que! debe! se !
p ocesado!an es!de!que!la!in o mación!que!con iene!pueda!se i !pa a!p oduci !
las!p o eínas! i ales!co espondien es.!Una! ez!p ocesado,!el!ARNm!puede!sali !
del!núcleo!hacia!el!ci oplasma!a! a és!de!los!po os!nuclea es.*
!
!
8!
Es e! compues o! eme gió! como! el! más! ac i o! de! una! se ie! de! nucleósidos!
ca bólicos,!ca ac e izado!po ! ene !un!g upo!me ileno!en!luga !del!anillo!unido!a!un!g upo!
alcohol,!na u al!de!los!nucleósidos.!Es a!sus i ución!le!hace! esis en e!a!la!hid ólisis!del!
enlace! glicosídico! conse ando! su! po encial! como! inhibido ! de! la! ansc ip asa! in e sa!
(Ande son!&!Chiang,!1990).!
!
Ca bo i i os a o! (CBV TP)! es! un! sus a o! en! la! sín esis! de! ADN! de! la!
ansc ip asa!in e sa!del!VIH!ya!sea!de!una!heb a!de!ARN!o!de!una!heb a!de!ADN!y!la!
inco po ación! de! ca bo i ! 5’! mono os a o! en! una! cadena! de!ADN! po ! la! ansc ip asa!
in e sa!del!VIH! esul a!en!la! e minación!de!la!sín esis!de!la!heb a!(Fig.!5C)!(Pa ke !e !al.,!
1991).!Una!ca ac e ís ica!impo an e!de!CBV TP!es!la!ausencia!de!ac i idad! en e!a!ADN!
polime asas!humanas!α,!β,!ϒ!(Pa ke !e !al.,!1991;!Whi e!e !al.,!1989).!
!
!
3. E ec os*de*la* e apia*an i e o i al*en*el*sis ema*
ca dio ascula *
!
Aunque!la!espe anza!de! ida!de!las!pe sonas!in ec adas!con!VIH!ha!aumen ado!
desde!que!se!in odujo!la!cART,!la!supe i encia!aún!es á!lejos!de!la!población!gene al!
("The! An i e o i al! The apy! Coho ! Collabo a ion",! 2008).! En! la! p ác ica,! los!
p ome edo es!a ances!que!se!espe aban!de!cART!han!sido!di íciles!de!consegui !debido!a!
los!e ec os!ad e sos!de!los! á macos!en!ó ganos!como!el!co azón!y!el! iñón!(Choi!e !al.,!
2011).!
!
La! mo alidad! en! pacien es! con! VIH! no! asociada! a! SIDA! es á! causada!
p incipalmen e! po ! cánce ! (23,5%),! en e medades! ca dio ascula es! (15,7%)! y!
en e medades! hepá icas! (14,1%)! (Maa ens! e ! al.,! 2014).! Po ! an o,! la! en e medad!
ca dio ascula !es!una!de!las!p incipales!causas!de!mue e!en e!los!pacien es!in ec ados!
con!VIH!(Hooshya !e !al.,!2007).!El!aumen o!del! iesgo!de!en e medad!ca dio ascula !en!
pacien es!con!VIH!ha!sido!comúnmen e!a ibuido!a!una!mayo !p e alencia!de! ac o es!de!
iesgo! adicionales! y! a! e ec os! in lama o ios! del! p opio! i us! (G inspoon! e ! al.,! 2008;!
T ian ,!2012).!Sin!emba go,!dado!que!la!adminis ación!de!la! e apia!an i e o i al!es!de!
po ! ida!y!el!p og esi o!aumen o!de!la!espe anza!de! ida!de!la!población!in ec ada!con!
VIH,!exis e!un!c ecien e!in e és!en!escla ece !el!impac o!de!los! á macos!empleados!en!el!
a amien o! de! la! in ección! po ! VIH! en! el! sis ema! ca dio ascula .! El!deba e! p incipal!
in oluc a! a! ABC,! análogo! de! guanosina,! pe enecien e!a! la! amilia! de! los! ITIAN,!
ampliamen e! empleado! en! la! e apia! an i e o i al.! En! 2005,! empeza on! a! apa ece !
es udios!que! asociaban!el!uso! de! es e! á maco! con! una! mayo ! incidencia! de! in a o! de!
mioca dio.!Sin!emba go,! ue!después!de!la!publicación!en!2008!po !“The!Da a!collec ion!
and! Ad e se! e en s! o ! an i HIV! D ugs! s udy! g oup”!(D:A:D)! cuando! se! elacionó!
di ec amen e!la!exposición!a!ABC!con!un!aumen o!en!la!incidencia!de!in a o!de!mioca dio,!
de! o ma!que!el! iesgo!se! econoció!y!se!amplió!incluyendo!la!ddI!(o o!ITIAN!análogo!de!
pu ina! que! compa e! una! es echa! semejanza! química! con! ABC)!como! o o! á maco!
causan e.! Es udios! pos e io es! con i ma on! es a! elación! (F iis Molle ! e ! al.,! 2003;!
Lundg en!e !al.,!2008;!Sabin!e !al.,!2016),!mien as!que!o os!no!lo!hicie on!(!Cu ell!e !al.,!
2008;!B o he s!e !al.,!2009;!Bedimo!e !al.,!2011;!C uciani!e !al.,!2011;!Ribaudo!e !al.,!2011).!

!
!
9!
Sin! emba go,! y! a! pesa ! de! la! ausencia! de! un! consenso,! las! p incipales! guías! clínicas!
ac ualmen e! desca an!el! uso! de! ABC! cuando! hay! cualquie ! posibilidad! de! en e medad!
ca dio ascula !(Panel! de! expe os! de! GeSIDA! y! Plan! Nacional! sob e! el! Sida,! 2015).! El!
deba e! an e io men e! mencionado! ha! sido! ue emen e! impulsado! po ! la! al a! de! un!
mecanismo!de!acción!que!pueda!explica !la! oxicidad!ca dio ascula !que!p oduce!ABC.!!
!
Se! ha! demos ado! ambién! que! ABC! p oduce! disminución! en! la! exp esión! de! la!
enzima!óxido!ní ico!sin asa!endo elial!(eNOS)!y!un!aumen o!de!la!p oducción!de!especies!
eac i as! de! oxígeno! (ERO)! en! células! endo eliales! pulmona es! humanas! (Wang! e ! al.,!
2009).!Es as!si uaciones!pueden!da !luga !a!dis unción! ascula !y!acumulación!lin oci a ia.!
El!aumen o!de!ERO!inicia!y!ampli ica!la! espues a!in lama o ia!a! a és!del! eclu amien o!
de!leucoci os!y!del!aumen o!de!la!exp esión!de!P selec ina!y!de!β2!in eg inas,!así!como!del!
aumen o! de! la! libe ación! del! ac o ! ac i ado ! de! plaque as! (PAF)! (Ál a ez! e !al.,! 2002;!
Ál a ez!&!Sanz,!2001).!
!
Nues o! g upo! de! in es igación! ha! demos ado! an o! in! i o!como! in! i o!la!
capacidad!de!ABC!pa a!p o oca !la!acumulación!de!leucoci os!sob e!el!endo elio! enula !y!
a e ial,!acción! ep oducida!po !ddI,!pe o!no!po !los!ITIAN!análogos!de!pi imidína!(3TC,!
AZT,!FTC)!o!po !TDF!(De!Pablo!e !al.,!2010,!De!Pablo!e !al.,!2012,!De!Pablo!e !al.,!2013).!
Mediado es!pu iné gicos! ales!como!ATP!y!algunos!de!sus!me aboli os!(ADP,!AMP,!e c.)!
son! las! p incipales! moléculas! de! señalización! pa ac ina! capaces! de! desencadena !
mecanismos! ascula es! p o ombó icos! y! p oin lama o ios,! que! implican! el! á ico! de!
leucoci os,!la!ac i ación!plaque a ia!y!la! o mación!de!la!placa!a e oscle ó ica,!median e!la!
in e acción! con! ecep o es! de! nucleó idos! P2 ! si uados! en! las! células! endo eliales,!
leucoci os!y!plaque as.!Dada!la!simili ud!es uc u al!en e!ABC!y!pu inas!endógenas,!se!
sugi ió!que!la!in e e encia!con!las! ías!de!señalización!de!pu inas!a! a és!de! ecep o es!
de! ATP P2X7,! si uados! p incipalmen e! en! los! leucoci os,! pod ía! se ! esponsable! de! los!
e ec os! ascula es!de!ABC!(Esplugues!e !al.,!2016).!
!
Las! in e acciones! leucoci o endo elio! son! el! p ime ! paso! en! la! in lamación!
ascula ,!aunque!las!plaque as!son!necesa ias!pa a!la!inducción!de!la! ombosis.!Po !lo!
an o,!las!plaque as!pueden!se !cla e!en!el!mecanismo!po !el!cual!ABC!p oduce! oxicidad!
ascula !y!aumen a!el! iesgo!de!padece !una!en e medad!ca dio ascula .!!
!
!
4. P oceso*in lama o io:* unción*plaque a ia*
!
La! o mación! de! ombos! dependien e! de! plaque as! es! un! e en o! cla e! en! la!
pa ogénesis!del!in a o!de!mioca dio.!Las! plaque as! ci culan es!no!in e accionan!con!la!
supe icie! in ac a! de! los! asos,! sin! emba go! és as! se! adhie en! ápidamen e! a! células!
endo eliales! dañadas,! y! ápidamen e! eclu an! nue as! plaque as,! p oduciéndose! la!
ag egación,! y! di e en es! ipos! leucoci a ios.! De! es a! o ma! se! inicia! el! p oceso! de!
obs ucción! ombó ico!que!conduce!a!la!isquemia!e!in a o!de!mioca dio!(Gawaz,!2004).!
!
Además!de!su! papel!en!la! ombosis!las!plaque as! ienen!un! papel!c í ico!en!la!
in lamación! (Klinge ! &! Jelkmann,! 2002).! La! quimio axis! es! un! mecanismo! cen al! pa a!
!
!
10!
eclu a ! células! in lama o ias! a! los! si ios! de! daño! isula ! o! de! epa ación.! Du an e!la!
adhesión! las! plaque as! se! ac i an!y! libe an! en! el! ci oplasma! una! a iedad! de! ac o es!
quimio ác icos!que!se!encuen an!almacenados!en!sus!g ánulos!o!que!se!han!sin e izado!
después!de!la!es imulación!de!las!plaque as!(Rendu!&!B oha d Bohn,!2001).!De!es a! o ma!
se!es imula!la!exp esión!de!moléculas!de!adhesión!en!la!supe icie!de!las!plaque as,!que!
son!capaces!de! a ae !a! o as!células!sanguíneas! en!ci culación,!y! ambién!modula !las!
p opiedades!quimio ác icas!de!o as!células!incluyendo!leucoci os!(Wey ich!e !al.,!1996)!y!
endo elio!(Gawaz!e !al.,!1998;!Henn!e !al.,!1998).!!
!
*
4.1 In e acción*plaque a]endo elio*
!
El! endo elio! no mal! en! eposo! iene! una! supe icie! no! adhe en e! y! no!
ombogénica! que! p e iene! la! ex a asación! de! las! células! sanguíneas! en! ci culación.,!
mien as! que! las! células! del! endo elio! ac i adas! son! p o adhesi as! y! p omue en! la!
adhesión!de!las!plaque as!ci culan es.!La!adhesión!de!las!plaque as!al!endo elio!in ac o!
pe o! ac i ado! implica! que! en! la! supe icie!de! las! células! haya! unos! ecep o es!
dependien es! del! p oceso! que! pe mi en! cap u a ! las! plaque as! en! ci culación! hacia! la!
pa ed! de! los! asos! incluso! bajo! un! al o! es és! debido! a! la! ci culación! sanguínea.! La!
adhesión! de! las! plaque as! a! la! supe icie! del! endo elio! ascula ! es! un! p oceso! con!
di e en es!pasos,!en!los!que!las!plaque as!se!si úan!sob e!la!pa ed! ascula ,!seguido!del!
odamien o!de!las!plaque as!y!la!subsiguien e!adhesión! i me!al!endo elio!(Fig.!6)!(Gawaz,!
2004).!!!
!
El!con ac o!débil!inicial!en e!las!plaque as!ci culan es!y!el!endo elio!es a!mediado!
po !selec inas,!p esen es! an o!en!las!células!endo eliales!como!en!las!plaque as!(Johnson!
e !al.,!1995).!P selec ina!(CD62P)!se!exp esa! ápidamen e!en!la!supe icie!endo elial!en!
espues a! a! un! es ímulo! in lama o io! po ! anslocación! desde! las! memb anas! de! los!
g ánulos! de! almacenaje! (cue pos! Weibel Palade)! a! la! memb ana! plasmá ica.! Además,!!!!!!!
P selec ina! se! almacena! en! los! g ánulos α! de! las! plaque as! y! puede! ápidamen e!
ansloca se!a!la!supe icie!de!las!plaque as!bajo!ac i ación!de!las!mismas!(Gawaz,!2004).!
Figu a'6.!E apas!de!la!adhesión!plaque a ia!sob e!el!endo elio!y!moléculas!de!adhesión!que!pa icipan!
en!cada!una!de!ellas.!
!
!
11!
La!glicop o eína!que!se!asocia!con!P selec ina,!PSGL 1!(“P selec in!glycop o ein!ligan 1”),!
es á! p esen e! an o! en! células! endo eliales! como! en! plaque as! y! leucoci os,! po ! lo! que!
media! las! in e acciones! plaque a endo elio,! plaque a leucoci o! y! ambién!leucoci o
endo elio!in! i o!e!in! i o!(F ene e!e !al.,!2000,!Wagne !&!F ene e,!2008).!
!
Las!in e acciones!selec ina ligando!no!son!su icien es!pa a!p omo e !la!adhesión!
i me!de!las!plaque as!en!el! o en e!sanguíneo.!Es o!implica!que!du an e!el! odamien o,!
se! ienen!que! o ma !nue as!uniones!que!se!ca ac e icen!po ! ene ! asas!de!disociación!
bajas!pa a!p omo e !la!adhesión!i e e sible.!Es as!in e acciones!más!es echas!en e!las!
plaque as!y!la!pa ed! ascula !implican!la!in e acción!con!las!in eg inas!del!endo elio,!como!
ICAM 1!(“In e cellula !Cell!Adhesion!Molecule 1”)!(Gawaz,!2004).!
!
!
4.2 In e acción*plaque a]plaque a:*ag egación*
!
La! ag egación! implica! la! adhesión! plaque a plaque a.! T as! la! adhesión,! las!
plaque as! se! ac i an! po ! una! se ie! de! agonis as! como! ADP,! colágeno,! omboxano,!
ombina!y!epine ina!p esen es!en!los!si ios!de!daño! ascula .!!
!
La! acción! de! esos! agonis as,! mediada! po ! sus! espec i os! ecep o es! con! la!
consecuen e! ac i ación! de! sus! mecanismos! molecula es! especí icos! e mina!
desencadenando,!si!el!es ímulo!es!impo an e!y/o!múl iple,!un!único!conjun o!de!sucesos;!
inc emen o!de!calcio!in acelula ,!libe ación!del!con enido!de!los!g ánulos!y!el!cambio!de!
o ma!de!las!plaque as,!en! esumen!la!ag egación!plaque a ia!
!
La!molécula! de! adhesión! p incipal! implicada! en! la! ag egación! plaque a ia! es! la!
p o eína!de!memb ana!denominada! complejo!glicop o eína!IIb IIIa! (GPIIb IIIa)!(Fig.! 7).!
GPIIb IIIa!es!un! ecep o !de!in eg ina!p esen e!en!al a!densidad!en!las!plaque as,! an o!en!
la!memb ana!plasmá ica!como!en!los!g ánulos α!(Niiya!e !al.,!1987).!El! ib inógeno!ac úa!
como!un!puen e!de!unión!en e!dos!moléculas!de!GPIIb IIIa!en!las!plaque as!adyacen es!
(Va ga Szabo!e !al.,!2008).!Es a!es!la! ía! inal!común!de!la!ag egación!plaque a ia!inducida!
po !agonis as!químicos!de!plaque as.!
!
El! ADP! es! un! mediado ! plaque a io! que! bien! de! o ma! ex e na! a! la! plaque a! o!
in e na! como! pa e! del! con enido! de! los! gánulos! densos! iene! un! papael! cla e! en! la!
ac i ación!plaque a ia!y!consecuen e!ag egación.!Se!conocen!dos! ecep o es!pa a!el!ADP!
en!la!plaque a,!uno!acoplado!a!la!p o eína!Gq!(P2Y1)!y!o o!acoplado!a!Gi!(P2Y12),!que!es!
esencial!pa a!la!hemos asia!p ima ia!(Kahne !e !al.,!2006).!Ambos! ecep o es!ac úan!de!
modo!siné gico!en!la!ac i ación!de!las!plaque as!(Fig.!7).!!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
12!
!
!
4.3** In e acción*plaque a]leucoci o*
!
La! adhesión! de! las! plaque as! al! endo elio! o! a! la! ma iz! subendo elial!induce! la!
ac i ación!plaque a ia!y!la!libe ación!de!sus ancias!que!son!capaces!de!causa !quimio axis!
y! mig ación! de! leucoci os! en! ci culación! hacia! el! luga ! donde! se! ha! p oducido! la!
acumulación!plaque a ia!(Sp inge ,!1994).!!
!
La!adhesión!de!los!leucoci os!a!las!plaque as!implica!la!exp esión!en!la!supe icie!
de!P selec ina!en!las!plaque as!ac i adas!y!su!unión!a!PSGL 1,!p esen e!en!neu ó ilos!y!
monoci os! (Ga dine ! e ! al.,! 2001).! Se! ha! demos ado! que!la! unión! de! los! leucoci os,! y!
pos e io men e! la! adhesión! de! los! leucoci os! sob e! monocapas! de! plaque as! ac i adas!
(Fig.!7)!se!p oduce!a! a és!de!la!acción!secuencial!de!P selec ina!e!ICAM 2!(“In e cellula !
Cell!Adhesion!Molecule 2”)!!de!las!plaque as!po !la!unión!a!sus!ligandos!en!los!leucoci os,!
PSGL 1!y!“Mac ophage!1!An igen”!(Mac 1,!CD11b/CD18)! espec i amen e!(Diaco o!e !al.,!
1996).! Es o! sugie e! que! las! plaque as! ancladas! a! la! pa ed! de! los! asos! pueden! es a !
p omo iendo!el! eclu amien o!de!los!leucoci os.!Además,!la!in e acción!plaque a leucoci o!
dependien e!de!P selec ina/PSGL 1!lle a!a!las!plaque as!a!es a !en!con ac o!es echo!con!
los! neu ó ilos! y! puede! es a ! acili ando! su! ac i ación! po ! los! mediado es! p o
in lama o ios!libe ados!de!las!plaque as!(Gawaz,!2004).!
!
!
!
!
Figu a' 7.!Recep o es,! moléculas! de!adhesión!y! mecanismos! molecula es! implicados! en! la! ag egación!
plaque a ia.!(Adapa ado(de(PLATELETS(|(PLATELETS.SE,(2016).!
!
!
13!
Po !lo! an o,!las!plaque as!ya!sea!inmo ilizadas!en!una!supe icie!o!ac i adas!en!
suspensión!exp esan!una!maquina ia!comple a!pa a! eclu a !leucoci os!(Gawaz,!2004):!
!
a) P selec ina!de!plaque as!es!un!mediado !del!con ac o!inicial!(débil)!
b) La! in e acción! de! P selec ina!de! plaque as! con! su! ligando! PSGL 1! en! los!
leucoci os!induce!e en os! ele an es!pa a!la!ac i ación!de!Mac 1.!
c) Mac 1!ac i ado!en!los!leucoci os!pe mi e!la!señalización!y! e ue za!la!adhesión!
i me! plaque a leucoci o! median e! la! unión! de! los! ligandos! (ICAM 2,!
ib inógeno!unido!a!GPIIb IIIa,!glicop o eína!IbA!(GPIbA),!JAM 3)!p esen es!en!
la!supe icie!de!las!plaque as!(Fig.!8).!
!
!
!
!
! !
Figu a'8.!Moléculas!de!adhesión!en!la!in e acción!plaque a leucoci o.!(
!

!
!
14!
II. OBJETIVOS*
!
Nues o!g upo!de!in es igación!ha!ca ac e izado!los!e ec os!de!ABC!sob e!la! unción!
plaque a ia,! es! deci ,! la! acción! del! á maco! en! las! di e en es! ases! de! la! o mación! del!
ombo! que! dependen! de! plaque as.! Así,! se! ha! obse ado! que! el! a amien o! con! ABC!!!!!!!!
(5! μg/mL)! induce! la! in e acción! plaque a endo elio! y! que! el! ipo! celula ! sob e! el! que!
ac ua ía!ABC!son!las!células!endo eliales.!También!se!ha!obse ado!que!ABC!p oduce!la!
in e acción! de! plaque as! a! neu ó ilos! y! a! monoci os.! Sin! emba go,! ABC! no! induce!
ac i ación!plaque a ia!(no!p oduce!aumen o!de!la!exp esión!de!P selec ina).!
!Una!posibilidad!es!que!es os!e ec os!sean!debidos!a!la!acción!del!me aboli o!ac i o!
de! ABC,! CBV TP.! Po ! an o,! el! obje i o! gene al! del! p esen e! abajo! es! ca ac e iza ! los!
e ec os!de!CBV TP!sob e!las!di e en es! ases!de!la! unción!plaque a ia!con!la! inalidad!de!
dilucida !si!los!e ec os!que!se!ha!obse ado!que!p o oca!ABC!sob e!la! unción!plaque a ia!
pod ían!se !debidos!a!CBV TP,!lo!que!ayuda ía!a!explica !el!mecanismo!po !el!cual!ABC!
puede!p oduci ! oxicidad! ascula .!
En!pa icula ,!se!abo dan!los!siguien es!obje i os!especí icos:!
1. E alua !los!e ec os!de!CBV TP!sob e!la!in e acción!plaque a endo elio!in! i o,!así!
como!el! ipo!celula !implicado!en!dicho!p oceso.!!
!
2. Es udia !las!acciones!de!CBV TP!sob e!la!in e acción!plaque a leucoci o!in! i o.!!
!
3. Analiza !los!e ec os!de!CBV TP!sob e!la!ac i ación!plaque a ia!in! i o.!En!conc e o,!
sob e!la!exp esión!de!P selec ina!(CD62P)!en!plaque as.!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
15!
III. MATERIALES*Y*MÉTODOS*
!
1. Mé odos*
1.1 Aislamien o*y*cul i o*de*células*endo eliales**
!
Se!emplean!células!de! enas!de!co dón!umbilical!humano!(HUVEC).!!Las!HUVEC!se!
ex aen! de! enas! de! co dones! umbilicales! humanos! escos! p oceden es! de! donan es!
sanos!del!Hospi al!Clínico!Uni e si a io!de!Valencia.!
!
!Pa a!la!ex acción!de!es as!células!se! abaja!con!el!co dón!umbilical!comple o!(Fig.!
9)!y!se!ob ienen!po ! a amien o!con!colagenasa,!como!se!ha!desc i o!p e iamen e!(O den!
e !al.,!2013).!Se!la an!los! asos!pa a!elimina !los! es os!de!sang e!median e!una!solución!
calien e!de! ampón!de! os a o!salino!(PBS).!Se!in oduce!en!la! ena!del!co dón!colagenasa!
(1! mg/mL)! y! se! man iene! en! el! incubado ! a! 37ºC! du an e! 17! minu os.! Una! ez! ha!
anscu ido!es e!pe íodo!de! iempo,!los!co dones!se!masajean!sua emen e!pa a!sepa a !
las!células!endo eliales!de!la!pa ed!del! aso!y!el!con enido!se! ecoge!y!se!cen i uga.!El!
p ecipi ado! ob enido! se! esuspende! en! “Endo elial!Cell! Basal! Medium 2”! (EBM 2)!
[suplemen ado! con! Sue o! Fe al! Bo ino! (2%! / ),! Hid oco isona! (0,4%! / ),! “Human!
Fib oblas !G ow h!Fac o Basic”!(hFGF B,!0,4%! / ),!“Vascula !Endo elial!G ow h!Fac o ”!
(VEGF,!0,1%! / ),!“Recombinan !Long!R3!Insulin Like!G ow h!Fac o 1”!(R3 IGF 1,!0,1%!
/ ),! Ácido! ascó bico! (0,1%! / ),! “Human! Recombinan ! Epide mal! G ow h! Fac o ”!
( hEGF,!0,1%! / ),!“Gen amicine!Sul a e!Ampho e icine!B”!(GA 1000,!0,1%! / ),!Hepa ina!
(0,1%! / ),! Penicilina! (50! unidades/mL),! Es ep omicina! (50! μg/mL)! y! Fungizona!!!!!!!!!!!!
(2,5!μg/mL)]!y!se!deposi a!en!un! asco!de!cul i o!celula !T25!donde!las!HUVEC!se!cul i an!
has a!alcanza !el!100%!de!con luencia.!
Los!cul i os!p ima ios!se!despegan!con! ipsina!y!se! ans ie en!a!placas!de!cul i o!
de!6!pocillos!con!cub e obje os!de!c is al!de!25!mm!con!un! e es imien o!de! ib onec ina!
(5!μg/mL)!donde!se!cul i an!has a!alcanza !el!100%!de!con luencia!(~48!ho as)!pa a!los!
expe imen os!de!adhesión!in! i o!en!cáma a!pa alela!de! lujo!(Ve !1.4!Ensayo!de!adhesión!
en!cáma a!pa alela!de! lujo).!
!
Las! células! se! man ienen! en! el! incubado ! de! cul i o! celula ! a! 37ºC,! en! una!
a mós e a!húmeda!de!95%!ai e/!5%!CO2.!
Figu a'9.!Co dón!umbilical!humano!comple o!cuya! ena!se!encuen a!llena!de!colagenasa.
!
!
16!
1.2**Ex acción*de*plasma* ico*en*plaque as*(PRP)*y*
p epa ación*de*plaque as*la adas*humanas*
!
Se!emplea!sang e!de!donan es!sanos!p oceden e!del!Hospi al!Clínico!Uni e si a io!
de! Valencia! que! no! han! omado! ningún! á maco! conocido! que! a ec e! a! la! unción!
plaque a ia!en!los!14!días!an e io es!a!la!donación.!!!
!
El!plasma! ico!en!plaque as!(PRP)!y!las!plaque as!la adas!se!p epa an!a!pa i !de!la!
sang e!en e a! ecogida!en! ubos!con!ci a o!de!sodio!como!an icoagulan e,!median e!un!
mé odo!de!ex acción!con!p os aciclina!(Radomski!&!Moncada,!1983).!!
Es os! ubos! se! cen i ugan! a! 220! g! du an e! 10! minu os! (con! acele ación! y!
desacele ación!sua e)!pa a!ob ene !el!PRP.!Pa a!ob ene !las!plaque as!la adas,!el!PRP!se!
cen i uga!a!700!g!du an e!10!min!y!el!plasma!pob e!en!plaque as!(PPP)!se!elimina.!El!
p ecipi ado! de! plaque as,! después! de! la a ! 2! eces! con! ampón! salino,! se! esuspende!
sua emen e! con! ampón! salino! has a! alcanza ! una! concen ación! inal! de!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
1x107!plaque as/mL.!
!
Todos!los!pasos!de!la!ex acción!se!lle an!acabo!en!p esencia!de!p os aciclina!pa a!
e i a !la!ac i ación!mecánica!de!las!plaque as.!
!
!
1.3**P o ocolo*expe imen al*de* a amien o*
!
En!pacien es!adul os!la!pau a!posológica!de!ABC!es!de!300!mg/12h!o!600!mg/24h,!
o iginándose!una!concen ación!plásma ica!máxima!(Cmax)!de!4,85!μg/mL.!Debido!a!es o!
se!seleccionó!una!concen ación!de!ABC!de!5!μg/mL!y!concen aciones!de!CBV TP!en e!!!!
1!–!25!μg/mL,! alo es!que!mime izan!las!concen aciones!de!ABC!y!CBV TP!en!pacien es!
que! eciben!es e! a amien o!(Pilie o,!2004;!Yuen!e !al.,!2008).!Teniendo!en!cuen a!que!la!
con e sión!de!ABC!a!CBV TP!es!in e io !al!100%!la!concen ación!compa able!con!ABC!!!!!!
5!μg/mL!se ía!CBV TP!10!μg/mL.!
Se! a an!los!di e en es! ipos!celula es!(HUVEC,!leucoci os!y/o!plaque as)!de! o ma!
independien e! con! ABC! (5! μg/mL),! con! concen aciones! c ecien es! de! CBV TP! (1! –! 25!
μg/mL),!o!con!el! ehículo!con ol!(agua!es é il)!du an e!4!h!(HUVEC)!y!1!h!(plaque as!y!
leucoci os),!a!37ºC.!Como!con ol!posi i o!se!empleó!TNF α!(25!ng/mL,!4h)!pa a!células!
endo eliales!y!ADP!(5!μmol/L,!1h)!pa a!plaque as!y!leucoci os.!En!el!caso!de!los!leucoci os!
se! a a!la!sang e!en e a!y!en!el!caso!de!las!plaque as!se! a a!el!PRP!o!la!sang e!en e a.!
!
!
!
!
!
17!
1.4** Ensayo*de*adhesión*en*cáma a*pa alela*de* lujo*
!
Se! emplean! células! HUVEC! semb adas! en! cub e obje os! de! c is al! ci cula es! de!!!!
25!mm!de!diáme o!p e a ados!con! ib onec ina!(5!μg/mL)!y!plaque as!la adas!ex aídas!
de!sang e!de!donan es!sanos.!
!
El! modelo! in! i o!de! cáma a! pa alela! de! lujo! ya! ha! sido! desc i o! en! de alle!
(Lagadec! e ! al.,! 2003;! O den! e ! al.,! 2013).! Los! cub e obje os! de! id io! que! con ienen!
monocapas!con luen es!de!HUVEC!se!colocan!en!un!hueco!ci cula !en!la!placa!in e io !de!la!
cáma a! de! lujo! (man enido! a! 37ºC)! donde! una! pa e! de! la! monocapa! (5! x! 25! mm)! se!
expone! al! lujo! (Fig.! 10).! La! cáma a! en e a! se! mon a! sob e! un! mic oscopio! in e ido!
(Nikon!Eclipse!TE!2000 S)!equipado!con!un!sis ema!de!Epi Fluo escencia!y!conec ado!a!
una! cáma a! de! ídeo! (Sony! Exwa e! HAD)! (Fig.! 11).! Los! expe imen os! se! lle an!a! cabo!
empleando!el!obje i o!x40,!pudiéndose!así!obse a !el! lujo!de!plaque as!y!su!in e acción!
con!la!monocapa!endo elial.!
!
Pa a!la! isualización!di ec a!de!las!in e acciones!de!las!plaque as!con!las!células!
endo eliales,! las! plaque as! la adas! se! incuban! du an e! 30! minu os! a! 37ºC! con! un!
an icue po! an i CD41! (que! ma ca! especí icamen e! las! plaque as)! conjugado! con!
Alexa®488! siguiendo! las! ins ucciones! del! ab ican e! y! se! esuspenden! pa a! consegui !
una!concen ación! inal!de!2,5!x!106!plaque as/mL.!Las!plaque as!la adas!se!pe unden!
sob e! la! monocapa! de! HUVEC! a! una! elocidad! con olada! de! 0,36! mL/min! (con! una!
ensión!de!cizalla!es imada!de!0,7!dinas/cm2).!Una! en ana!de!c is al!en!la!placa!supe io !
de!la!cáma a!pe mi e!el!examen!mic oscópico!di ec o!de!la!monocapa!expues a!al! lujo.!
Pasados! 5! minu os! de! pe usión! de! plaque as,! los!cub e obje os! se! la an! con! 4! mL!de!
ampón! de! solución! salina! pa a! elimina ! las! plaque as! no! adhe idas! de! la! cáma a.! Se!
egis an!las!imágenes!de!al!menos!5!campos!independien es!po !expe imen o,!en!campo!
cla o! y! en! luo escencia!y! se! analizan! median e! el! ecuen o! del! núme o! de! plaque as!
unidas!a!la!supe icie!del!endo elio.!!
!
!
!
!
!
A
B
Figu a' 10.!
Mon aje!de!la!cáma a!pa alela!de! lujo,!A:!cáma a!abie a,!B:!cáma a!ce ada.!La!cáma a!
posee!una!hendidu a!ci cula !en!la!que!se!inse a!el!cub e obje os!ci cula !con!las!células!endo eliales.!
Las!conexiones!pe mi en!que!se!pe undan!las!plaque as!a! a és!de!la!cáma a!de! lujo.
!
!
24!
2. Análisis*del*e ec o*de*CBV]TP*sob e*la*in e acción*plaque a]
leucoci o*
*
Se!e aluó!el!e ec o!de!CBV TP!sob e!la!in e acción!plaque a leucoci o,!como!uno!de!
los! pasos! implicados! en! el! desa ollo! de! en e medades! ca dio ascula es.! Se! empleó! la!
ci ome ía!de! lujo!pa a!e alua !la!adhesión!de!plaque as!a!leucoci os!en!sang e!en e a!de!
donan es!sanos!y!se!iden i ica on!las!di e en es!subpoblaciones!de!leucoci os!(neu ó ilo,!
monoci os! y! lin oci os)! g acias!a! sus! ca ac e ís icas! di e enciales! en! amaño! y!
g anulosidad.! La! p esencia! de! plaque as! en! cada! subpoblación! celula ! se! de e minó!
analizando!la!exp esión!de!CD41!(ma cado !especí ico!de!plaque as)!en!cada!una!de!ellas.!
*
2.1*In e acción*plaque a]neu ó ilo*
!
ABC! (5! μg/mL)! p odujo! un! aumen o! signi ica i o! en! la! can idad! de! plaque as!
adhe idas!a!neu ó ilos.!Del!mismo!modo!se!obse ó!es a! espues a!con!concen aciones!
c ecien es!de!CBV TP!(1!–!25!μg/mL)!(Fig.!16).*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
Figu a' 16.!E ec o! de! abaca i ! y! ca bo i ! i os a o!sob e! la! adhesión! de! plaque as! sob e!
neu ó ilos.! La! sang e! humana! ue! a ada! con! ehículo,! abaca i !(5! μg/mL),! ca bo i
i os a o! (1! ! 25! μg/mL)! o! el! con ol! posi i o! (ADP! 5! μmol/L)! (1! h).! Los! alo es! de!
luo escencia! (PE)! ep esen an! el! %! de! la! mediana! de! la! in ensidad! de! la! luo escencia!
espec o! del! 100%! del! g upo! con ol! ( ehículo).! Los! esul ados! ue on! exp esados! como!
media!±!E.E.M.!(n!=!10).!*p<0,05,!**p<0,01,!***p<0,001! espec o!del! alo !co espondien e!
al!g upo!con ol.!Análisis!de! a ianza!ANOVA!seguido!del!pos es !Newman Keuls.!!

!
!
25!
2.2*In e acción*plaque a]monoci o*
*
ABC! (5! μg/mL)! p odujo! un! inc emen o! signi ica i o! del! núme o! de! plaque as!
adhe idas!a!monoci os.!Es a! espues a! ambién!se!obse ó!con!concen aciones!c ecien es!
de!CBV TP!(1!–!25!μg/mL)!(Fig.!17).*
*
*
2.3*In e acción*plaque a]lin oci o*
*
Tan o! el! a amien o! con! ABC! (5! μg/mL)! como! el! a amien o! con! CBV TP!!!!!!!!!!!!!!!
(1! ! 25! μg/mL)! no! es imula on! la! adhesión! de! plaque as! a! lin oci os,! ya! que! no! se!
obse a on!inc emen os!signi ica i os! espec o!al!con ol!(da os!no!mos ados).*
*
*
*
*
*
*
Figu a'17.!E ec o! de! abaca i ! y! ca bo i ! i os a o!sob e! la! adhesión! de! plaque as! sob e!
monoci os.! La! sang e! humana! ue! a ada! con! ehículo,! abaca i ! (5! μg/mL),! ca bo i
i os a o! (1! ! 25! μg/mL)! o! el! con ol! posi i o! (ADP! 5! μmol/L)! (1! h).! Los! alo es! de!
luo escencia! (PE)! ep esen an! el! %! de! la! mediana! de! la! in ensidad! de! la! luo escencia!
espec o! del! 100%! del! g upo! con ol! ( ehículo).! Los! esul ados! ue on! exp esados! como!
media!±!E.E.M.!(n!=!10).!*p<0,05,!**p<0,01,!***p<0,001! espec o!del! alo !co espondien e!
al!g upo!con ol.!Análisis!de! a ianza!ANOVA!seguido!del!pos es !Newman Keuls.!!
!
!
26!
3. De e minación*del*e ec o*de*CBV]TP*sob e*la*ac i ación*
plaque a ia*
!
El! e ec o! de! CBV TP! sob e! la! ac i ación! plaque a ia! se! e aluó! analizando! la!
exp esión!de!la!molécula!de!adhesión!P selec ina!en!PRP!ex aído!de!sang e!de!donan es!
sanos.!Median e!la!ci ome ía!de! lujo!se!iden i icó!la!población!de!plaque as!g acias!a!sus!
ca ac e ís icas!de! amaño!y!g anulosidad!y!empleando!el!an icue po!CD62P!se!analizó!la!
exp esión!de!P selec ina.!
!
3.1***Análisis*de*la*exp esión*de*P]selec ina*en*PRP*
!
!
Se!puede!obse a !que!el! a amien o!de!PRP!con!ABC!(5!μg/mL)!o!con!CBV TP!!!!
(1! !25!μg/mL)!no!indujo!la!exp esión!de!P selec ina!(CD62P)!en!plaque as!(Fig.!18),!es!
deci ,!no!se!obse a on!aumen os!signi ica i os! espec o!al!con ol.!
!
!
!
!
!
!
!
!
*
*
*
*
*
*
*
!
!
!
!
!
!
!
!
Figu a'18.!E ec o!de!abaca i !y!ca bo i = i os a o!sob e!la!exp esión!de!CD62P!(P=selec ina)!
en!plaque as!de!PRP.!El!PRP! ue! a ado!con! ehículo,!abaca i !(5!μg/mL),!ca bo i i os a o!
(1! !25!μg/mL)!o!el!con ol!posi i o!(ADP!5!μmol/L)!(1!h).!Los! alo es!de! luo escencia!(FITC)!
ep esen an!el!%!de!la!mediana!de!la!in ensidad!de!la! luo escencia! espec o!del!100%!del!
g upo!con ol!( ehículo).! Los! esul ados! ue on! exp esados!como! media!±! E.E.M.! (n! =!10).!
***p<0,001! espec o!del! alo !co espondien e!al!g upo!con ol.!Análisis!de! a ianza!ANOVA!
seguido!del!pos es !Newman Keuls.!!
!
!
27!
V. DISCUSIÓN*
!
La! e apia!an i e o i al!se! desa olló!en! 1980!y! pe mi ió!que! la!espe anza! de!
ida!de!las!pe sonas!in ec adas!con!VIH!y!con!SIDA!inc emen a a!conside ablemen e.!Sin!
emba go,! ac ualmen e! es a! cob ando! especial! impo ancia! el! es udio! de! los! e ec os!
ad e sos! asociados! al! uso! de! es a! e apia.! Los! di e en es! ipos! de! á macos!
an i e o i ales!se!han!asociado!con!di e sos!e ec os!ad e sos.!En e!los!e ec os!que!se!
pueden! desa olla ! a! co o! plazo! apa ecen! al e aciones! cu áneas,! hipe sensibilidad,!
as o nos! gas oin es inales! y! neu osiquiá icos! (Reus ,! 2011).! A! la go! plazo,! los!
pacien es!pueden!su i !al e aciones!me abólicas,!anomalías!en!la!dis ibución!de!la!g asa!
co po al! y! lipidodis o ia,! daño! mi ocond ial,! ne o oxicidad! e! insu iciencia! enal,!
os eopenia,!os eopo osis,!nec osis!ósea!(Mon esso i!e !al.,!2004;!Reus ,!2011)!y! ambién!
in a o!de!mioca dio!(F iis Molle !e !al.,!2003;!Sabin!e !al.,!2016;!Sabin!e !al.,!2008).!!
!
En e! las! causas! de! mo alidad! en! pacien es! in ec ados! con! VIH! no! asociados! a!
SIDA! se! encuen a! el! cánce ! (23,5%),! las! en e medades! ca dio ascula es! (15,7%)! y! las!
en e medades! hepá icas! (14,1%)! (Maa ens! e ! al.,! 2014).! Las! en e medades!
ca dio ascula es! se! han! asociado! al! uso! p olongado! de! la! e apia! an i e o i al.! Sin!
emba go,!no!se!conoce!si!es o!se!debe!al!aumen o!de!la!espe anza!de! ida!de!los!pacien es,!
a!la! in ección! del! VIH,!po ! si!misma,! ya! que! se!han! apo ado!di e sos!a gumen os! que!
indican!que!el!VIH!inc emen a! el! iesgo!ca dio ascula !(Abe g,!2009;! T ian ,!2012)!o!a!
posibles! e ec os! ad e sos! de! es a! e apia! an i e o i al! (F iis Molle ! e ! al.,! 2003).!
Di e sos! es udios! han! asociado! la! e apia! an i e o i al! con! la! en e medad!
ca dio ascula .!Inicialmen e!se!apun aba!a!los!IP!ya!que!aumen an!los!ni eles!de!lípidos,!
pe o!el! es o!de!g upos!no!se!desca a on!ya!que!se!adminis an!en!combinación.!
!
ABC!es!uno!de!los! á macos!más!empleados!en!la! e apia!an i e o i al.!Exis en!
e idencias! c ecien es! que! co elacionan! el! uso! de! los! ITIAN! análogos! de! pu ina,! y! más!
conc e amen e!ABC!y!ddI,!con!la!apa ición!de!e ec os!ca dio ascula es!(F iis Molle !e !al.,!
2003;!Sabin!e !al.,!2016).!Sin!emba go,!ha!habido!mucha!con o e sia!con! espec o!a!la!
asociación!o!no!de!ABC!con!en e medades!ca dio ascula es,!debido!en e!o as!cosas!a!
que!a!día!de!hoy!no!hay!ninguna!e idencia!cla a!sob e!cual!pod ía!se !el!mecanismo!po !el!
que!p oduce!es a! oxicidad!ca dio ascula .!
!
Algunos!es udios!clínicos!indican!que!el!mecanismo!pod ía!debe se!a!un!p oceso!
de!in lamación! ascula !(Sabin!e !al.,!2008).! En! nues o! labo a o io! hemos! analizado!el!
e ec o!de!ABC! sob e!la!in e acción!leucoci o endo elio,!p ime !paso! en! el!desa ollo!de!
en e medades!ca dio ascula es!que!cu san!con!componen e!in lama o io.!Así,!ABC!indujo!
un!aumen o!signi ica i o!en!las!in e acciones!leucoci o endo elio! an o!in! i o!como! in!
i o!(De!Pablo!e !al.,!2013).!
!
Sin! emba go,! la! plaque a! es! necesa ia! pa a! que! es e! p oceso! in lama o io!
desemboque!en!la! o mación!de!un! ombo.!Las!plaque as!se!ac i an!y!en!consecuencia!
pueden! o ma ! ag egados! plaque a ios! y! ombos! que! pueden! lle a ! a! oclui ! la! a e ia!
co ona ia! esul ando!en!isquemia!e!in a o!de!mioca dio!(Da ì!&!Pa ono,!2007;!Hansson,!
2005).!En!es e!sen ido,!en!es udios!p e ios!se!ha!obse ado!que!el! a amien o!con!ABC!
!
!
28!
induce! la! in e acción! plaque a endo elio,! in e acción! plaque a neu ó ilo! e! in e acción!
plaque a monoci o,! sin! causa ! ac i ación! plaque a ia! (aumen o! de! P selec ina).! El!
mecanismo!po !el!cual!ABC!posee!es os!e ec os!no!se!conoce.!Una!posibilidad!se ía!que!el!
esponsable! ue a!CBV TP!ya!que! iene!g an!analogía!es uc u al!con!ATP!y!ADP.!
!
ABC! se! me aboliza! en! el! o ganismo! pa a! da ! luga ! a! su! me aboli o!
a macológicamen e! ac i o,! CBV TP! que! in e ie e! en! el! ciclo! del! i us! ac uando! como!
sus a o! en! la! sín esis! del! ADN! i al! median e! la! ansc ip asa! in e sa! de! o ma! que!
p o oca!la! e minación!de!la!sín esis!de!la!heb a!de!ADN!(Ba ba ino!e !al.,!2014;!Pa ke !e !
al.,!1991).!
!
Po ! an o,! el! obje i o! de! es e! abajo! consis e! en! ca ac e iza ! los! e ec os! y! los!
mecanismos!p o in lama o ios!de!CBV TP!sob e!la! unción!plaque a ia.!Es!deci ,!es udia !
el!e ec o!de!es e! á maco!en!la!in e acción!plaque a endo elio,!en!la!in e acción!plaque a
leucoci o!y!sob e!la!exp esión!de!P selec ina,!empleada!como!ma cado !de!la!ac i ación!
plaque a ia.!
!
En!pacien es!adul os!la!pau a!posológica!de!ABC!es!de!300!mg/12h!o!600!mg/24h,!
o iginándose!una!concen ación!plasmá ica!máxima!(Cmax)!de!4,85!μg/mL.!Teniendo!en!
cuen a! las! concen aciones! plasmá icas! de! ABC! an e io men e! ci adas! ob enidas! en!
pacien es!seleccionamos!la!concen ación!de!ABC!5!μg/mL!y!concen aciones!de!CBV TP!
en e! 1! ! 25! μg/mL,! alo es! que! mime izan! las! concen aciones! de! ABC! y! CBV TP!
alcanzadas!en!pacien es!que! eciben!es e! a amien o!(Yuen!e !al.,!2008).!
!
En!p ime !luga ,!pa a!e alua !la!in e acción!plaque a endo elio!hemos!empleado!
un!modelo!in! i o!de!adhesión!dinámica,!median e!un!sis ema!de!cáma a!pa alela!de! lujo!
en! el! que! las! plaque as! luyen! sob e! la! monocapa! endo elial! con! un! lujo! simila ! al!
obse ado! in! i o.! Así,! concen aciones! clínicas! de! CBV TP! (5! ! 25! μg/mL)! inducen!
adhesión! de! plaque as! al! endo elio,! mien as! que! CBV TP! 1! μg/mL! no! induce! es a!
adhesión.! Tan o! ABC! como! CBV TP!son! capaces! de! induci ! la! adhesión! de! plaque as! al!
endo elio!y!con!ello!pod ían!p omo e !el!inicio!de!la! o mación!del! ombo.!
!
Una! ez! es ablecido! que! CBV TP! induce! in e acción! plaque a endo elio! se!
de e minó!el! ipo!celula !implicado!en!la!adhesión!de!plaque as!al!endo elio!inducida!po !
ABC!y!CBV TP.!En!el!caso!de!ABC,!únicamen e!hay!e ec o!cuando!se! a an!los!dos! ipos!
celula es!o!cuando!se! a an!sólo!las!células!endo eliales.!En!el!caso!de!CBV TP,!el!e ec o!se!
obse ó!en! odos!los!casos,!cuando!se! a a on!los!dos! ipos!celula es,!sólo!las!plaque as!o!
sólo!las!células!endo eliales.!
!
Po ! o o! lado,! se! ha! e aluado! la! in e acción! plaque a leucoci o,! median e!
ci ome ía!de! lujo,!de! o ma!que!empleando!un!an icue po!que! econoce!especí icamen e!
plaque as! (CD41)! se! ha! analizado! su! exp esión! en! las! poblaciones! de! leucoci os,!
conc e amen e! en! neu ó ilos,! monoci os!y! lin oci os.! Se! ha! obse ado! que!
concen aciones!clínicamen e! ele an es!de!CBV TP!es imulan!la!adhesión!de!plaque as!
an o!a!neu ó ilos!como!a!monoci os! al!y!como!se!había!obse ado!con!el!e ec o!de!ABC!
en!los!es udios! ealizados!p e iamen e.!
!
!
!
29!
También! se! ha! e aluado! la! exp esión! de! moléculas! de! adhesión! empleando! la!
écnica!de!ci ome ía!de! lujo.!La!molécula!de!adhesión!analizada! ue!P selec ina!(CD62P)!
implicada! en! la! in e acción! plaque a endo elio,! plaque a leucoci o! e! indicado a! de! la!
ac i ación! plaque a ia.! Sin! emba go,! al! y! como! se! había! obse ado! p e iamen e! en! el!
a amien o!de!PRP!con!ABC,!CBV TP! ampoco!induce!ningún!aumen o!en!la!exp esión!de!
es e! ma cado ,! y! po ! an o! podemos! a i ma ! que! CBV TP! no! es imula! la! ac i ación!
plaque a ia.!
!
En!conclusión,!se!ha!obse ado!que!CBV TP!es imula!la!adhesión!de!plaque as!al!
endo elio,! ambién!la!in e acción!plaque a leucoci o,!en!conc e o!la!adhesión!de!plaque as!
a! neu ó ilos! y! monoci os,! pe o! no! iene! e ec o! sob e! el! aumen o! de! la! exp esión! de!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
P selec ina!y!po ! an o,!sob e!la!ac i ación!plaque a ia.!Al!compa a !los!e ec os!de!los!dos!
compues os!sob e!la! unción!plaque a ia!obse amos!que!ambos! ienen!e ec os!simila es.!
Sin! emba go,! sí! que! se! ha! obse ado! una! di e encia! en e! los! e ec os! de! es os! dos!
compues os.!Es a!di e encia!indica!que!ABC!es á!eje ciendo!un!e ec o!únicamen e!sob e!
células!endo eliales!mien as!que!CBV TP!eje ce!su!acción! an o!sob e!células!endo eliales!
como! sob e! plaque as.! No! obs an e,! es o! no! es! su icien e! pa a! pode ! a i ma ! que! los!
e ec os!obse ados!asociados!a!ABC!es én!debidos!a!su!me aboli o!ac i o,!CBV TP!y!ha ían!
al a!expe imen os!adicionales!que!pe mi ie an!alcanza !una!conclusión!de! o ma!di ec a!
adminis ando!ABC!e!inhibiendo!su! ans o mación!a!CBV TP.!
!
Dada! la! impo ancia! de! es os! á macos! en! la! e apia! an i e o i al! ac ual,! la!
con o e sia! gene ada! en! o no! a! ellos! y! eniendo! en! cuen a! la! limi ación! que! supone!
habe ! u ilizado! células! de! pacien es! sin! VIH,! las! di e encias! obse adas! en! el! pe il! de!
oxicidad!ca dio ascula !apoyan!la!asociación!clínica! an o!en e!ABC!y!el!desa ollo!de!
en e medades!ca dio ascula es!como!en e!CBV TP!y!la!en e medad!ca dio ascula .!
!*

!
!
30!
VI. CONCLUSIONES*
*
Concen aciones!clínicamen e! ele an es!de!CBV TP:!
!
1. Inducen! in e acción! plaque a endo elio! in! i o.!La! es imulación! selec i a! de!
plaque as!o!de!células!endo eliales!po !pa e!de!CBV TP!es!su icien e!pa a!que!se!
de!es a!in e acción.!
!
2. Inducen! in e acción! plaque a leucoci o! in! i o,! especí icamen e! plaque a
neu ó ilo!y!plaque a monoci o,!no!p oduciendo!in e acción!plaque a lin oci o.!
!
3. No! inducen! un! aumen o! de! la! exp esión! de! P selec ina,! es! deci ,! no! causan!
ac i ación!plaque a ia!in! i o.!
! !
!
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31!
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