FACULTADE DE CIENCIAS
GRAO EN BIOQUÍMICA
D.ª Ca la Muyo Sanz
CARACTERIZACIÓN LONGITUDINAL DE LA
COMPOSICIÓN DE MEMBRANA DE LAS CÉLULAS
SANGUÍNEAS DEL GANADO BOVINO
T aballo Fin de G ao
Xuño 2024
1
Índice
Índice de igu as ........................................................................................................... 3
Índice de ablas ............................................................................................................. 5
Ab e ia u as ................................................................................................................. 6
Resumen ...................................................................................................................... 7
Resumo ........................................................................................................................ 8
Abs ac ........................................................................................................................ 9
1. In oducción ............................................................................................................ 10
1.1 Componen es celula es de la sang e ................................................................ 10
1.2 Ácidos g asos de memb ana ............................................................................. 11
1.3 Función de los ácidos g asos en las memb anas .............................................. 13
1.3.1 Fluidez de memb ana ................................................................................. 13
1.3.2 Enzimas unidas a memb anas .................................................................... 14
1.3.3 E ec os en los ecep o es de memb ana ..................................................... 14
1.3.4 Fusión de memb ana .................................................................................. 14
1.4 Fac o es que a ec an al me abolismo de los ácidos g asos en ganado bo ino .. 15
1.4.1 Aumen o de la empe a u a ambien al ........................................................ 15
1.4.2 Momen o de lac ación y ges ación .............................................................. 16
1.4.3 T a amien os e e ina ios ............................................................................ 16
1.4.4 Die a del ganado bo ino ............................................................................. 17
1.5 Ácidos g asos de las memb anas de los e i oci os ........................................... 17
1.6 Ácidos g asos de las memb anas de los leucoci os ........................................... 18
2
2. Obje i os ................................................................................................................. 20
3. Ma e ial y mé odos .................................................................................................. 21
3.1 Es udio animal y ecolección de mues as ......................................................... 21
3.2 Aislamien o de glóbulos ojos y blancos ............................................................ 22
3.3 Ex acción de ácidos g asos de memb ana ....................................................... 23
3.4 De e minación de ácidos g asos median e GC-FID ........................................... 24
3.5 Análisis es adís ico ............................................................................................ 25
4. Resul ados y discusión ........................................................................................... 26
4.1 Composición de ácidos g asos de la memb ana de las células sanguíneas bo inas
................................................................................................................................ 27
4.1.1 E i oci os .................................................................................................... 27
4.1.2 Lin oci os .................................................................................................... 31
4.2 E olución empo al de los ácidos g asos de memb ana de células sanguíneas
bo inas .................................................................................................................... 33
4.2.1 E i oci os .................................................................................................... 33
4.2.2 Lin oci os .................................................................................................... 38
4.2.3 Compa ación en e e i oci os y lin oci os .................................................... 43
4.3 In luencia del a amien o con bST en los ácidos g asos de memb ana de células
sanguíneas bo inas ................................................................................................ 44
5. Conclusión .............................................................................................................. 49
6. Bibliog a ía .............................................................................................................. 50
3
Índice de igu as
Figu a 1: Di e encias en e las células sanguíneas analizadas. Elabo ado con
bio ende .com. ............................................................................................................ 11
Figu a 2: Memb ana plasmá ica o mada po lípidos y p o eínas. Elabo ado con
bio ende .com. ............................................................................................................ 11
Figu a 3: Clasi icación de los ácidos g asos. Elabo ado con bio ende .com a pa i de
(T zicka e al., 2011) ................................................................................................. 12
Figu a 4: a) G á ico de pun uación del PCA ealizado con la abundancia ela i a de los
g asos de la memb ana de e i oci os bo inos (1=con ol; 2= a adas con bST). b)
G á ico de ca gas de cada componen e g aso pa a la dis ibución del PCA en e i oci os.
................................................................................................................................... 27
Figu a 5: a) G á ico de pun uación del PCA ealizado con la abundancia ela i a de los
g asos de la memb ana de e i oci os bo inos (1=con ol; 2= a adas con bST). b)
G á ico de ca gas de cada componen e g aso pa a la dis ibución del PCA en e i oci os.
................................................................................................................................... 31
Figu a 6: E olución ácidos g asos sa u ados (a), poliinsa u ados (b) y ω-6 (c) en la
memb ana de los e i oci os en ganado bo ino de leche. ........................................... 33
Figu a 7: E olución ácidos g asos monoinsa u ados en la memb ana de los e i oci os
en ganado bo ino de leche. ........................................................................................ 36
Figu a 8: E olución ácidos g asos ω-3 en la memb ana de los e i oci os en ganado
bo ino de leche. .......................................................................................................... 37
Figu a 9: E olución ácidos g asos CLAs en la memb ana de los e i oci os en ganado
bo ino de leche. .......................................................................................................... 37
Figu a 10: E olución ácidos g asos sa u ados en la memb ana de los lin oci os del
ganado bo ino de leche. ............................................................................................. 39
Figu a 11: E olución ácidos g asos monoinsa u ados en la memb ana de los lin oci os
en ganado bo ino de leche. ........................................................................................ 39
Figu a 12: E olución ácidos g asos poliinsa u ados en la memb ana de los lin oci os en
ganado bo ino de leche. ............................................................................................. 40
4
Figu a 13: E olución ácidos g asos ω-3 en la memb ana de los lin oci os en ganado
bo ino de leche. .......................................................................................................... 41
Figu a 14: E olución ácidos g asos ω-6 en la memb ana de los lin oci os en ganado
bo ino de leche. .......................................................................................................... 41
Figu a 15: E olución ácidos g asos CLAs en la memb ana de los lin oci os en ganado
bo ino de leche. .......................................................................................................... 42
Figu a 16: Compa ación de la e olución de los di e en es ácidos g asos en las
memb anas plasmá icas de e i oci os y lin oci os en ganado bo ino de leche. .......... 43
Figu a 17: Compa ación del po cen aje de los dis in os ácidos g asos en la memb ana
de los e i oci os en e las acas con ol y las a adas con soma o opina ecombinan e.
................................................................................................................................... 46
Figu a 18: Compa ación del po cen aje de los dis in os ácidos g asos en la memb ana
de los lin oci os en e las acas con ol y las a adas con soma o opina ecombinan e.
................................................................................................................................... 47
5
Índice de ablas
Tabla 1: Composición alimen a ia analí ica del ganado bo ino obje o de es udio (da os
cedidos po la explo ación). ........................................................................................ 21
Tabla 2: Tempe a u a egis ada du an e los días del es udio. In o mación ob enida de
la AEMET. .................................................................................................................. 22
Tabla 3: Valo es medios de cada g upo de ácidos g asos en la memb ana de las células
sanguíneas ob enidas de acas lac an es. .................................................................. 26
Tabla 4: Compa ación de alo es medios de los ácidos g asos en la memb ana de los
RBCs y de los alo es de los ácidos g asos de los RCB del con ol ex e no di e enciado.
................................................................................................................................... 30
Tabla 5: Compa ación alo es medios en e lin oci os y e i oci os del ganado bo ino de
leche y signi icación de sus di e encias....................................................................... 44
Tabla 6: Compa ación alo es medios ácidos g asos de los e i oci os de las acas
con ol y de las acas a adas con Lac o opina y signi icación de sus di e encias. ... 46
Tabla 7: Compa ación alo es medios ácidos g asos de lin oci os de las acas con ol y
de las acas a adas y signi icación de sus di e encias. ............................................. 48
6
Ab e ia u as
- AA: Ácido a aquidónico.
- ACAT: Acil-CoA Coles e ol Acil-T ans e asa.
- AEMET: Agencia Es a al de Me eo ología.
- ANOVA: Análisis de la Va ianza.
- CLA: Ácido linoleico conjugado.
- DHA: Ácido docosahexaenoico.
- FAME: És e Me ílico de los Ácidos G asos.
- FID: De ec o de Ionización de Llama.
- GC: C oma og a ía de Gases.
- MHC: Complejo Mayo de His ocompa ibilidad.
- MUFA: Ácido g aso monoinsa u ado.
- NK: Células na u al kille .
- PBS.
- PCA: Análisis de Componen es P incipales.
- PEG: Polie ilenglicol.
- PUFA: Ácido g aso poliinsa u ado.
- RBC: Glóbulos ojos o e i oci os ( ed blood cells).
- bST: Soma o opina bo ina ecombinan e.
- SFA: Ácido g aso sa u ado.
- WBC: Glóbulos blancos o leucoci os (whi e blood cells).
7
Resumen
Ca ac e ización longi udinal de la composición de memb ana de las células sanguíneas
del ganado bo ino.
La sang e es un ipo especializado de ejido conec i o compues o de elemen os
celula es y una ma iz líquida denominada plasma. Es os componen es celula es
sanguíneos es án expues os a los cambios me abólicos que se p oducen en el plasma
y en el cue po. En cuan o a su abundancia en la sang e, los e i oci os cons i uyen el
mayo olumen, seguidos de una acción mucho meno de leucoci os y plaque as. Su
in e acción con el medio ex e no es á mediada po una memb ana plasmá ica de
con enido pa icula , en el que des acan los ácidos g asos como componen es
indicado es del es ado de salud de es os elemen os y del o ganismo po el que ci culan.
La composición de la memb ana es dependien e del medio, que depende de múl iples
ac o es an o endógenos como exógenos. En es e abajo expe imen al se analiza la
composición de ácidos g asos de la memb ana de dos componen es celula es
sanguíneos, los e i oci os y los leucoci os, en ganado bo ino leche o en égimen
in ensi o. Se u iliza un equipo de c oma og a ía de gases acoplado a un de ec o de
ionización en llama (GC-FID). El obje i o es ealiza la ca ac e ización longi udinal de
los ácidos g asos de memb ana de e i oci os y leucoci os bo inos, a in de comp ende
su na u aleza y a iabilidad. Se ha obse ado que los p incipales ac o es que p oducen
cambios en la memb ana de los e i oci os son la empe a u a ambien al y el es ado de
ges ación del animal. Así mismo, se puede conclui que an o los pe iles como el pa ón
de cambio longi udinal de los ácidos g asos en las memb anas son dis in os en e los
dos ipos de células sanguíneas, debido posiblemen e a las di e encias en su ida media
y en su unción celula . Po úl imo, se ha obse ado que los a amien os e e ina ios
po enciado es de la p oducción lác ea basados en soma o opina ecombinan e no
in luyen signi ica i amen e en la composición de memb ana, a pesa de ene un impac o
demos ado en el me abolismo lipídico del animal.
Palab as cla e: bo ino, célula sanguínea, e i oci o, leucoci o, e olución, iempo, ácidos
g asos, memb ana.
8
Resumo
Ca ac e ización lonxi udinal da composición de memb ana das células sanguíneas do
gando bo ino.
O sangue é un ipo especializado de ecido conec i o compos o de elemen os celula es
e una ma iz líquida denominada plasma. Es es compoñen es celula es sanguíneos
es án expos os aos cambios me abólicos que se p oducen no plasma e no co po. En
can o á súa abundancia no sangue, os e i oci os cons i úen o maio olume, seguidos
dunha acción moi o meno de leucoci os e plaque as. A súa in e acción co medio
ex e no es á mediada po una memb ana plasmá ica de con ido pa icula , no que
des acan os ácidos g axos como compoñen es indicado es do es ado de saúde des es
elemen os e do o ganismo polo que ci culan. A composición da memb ana é
dependen e do medio, que depende á súa ez de múl iples ac o es an o endóxenos
como esóxenos. Nes e aballo expe imen al analízase a composición de ácidos g axos
da memb ana de dous compoñen es celula es sanguíneos, os glóbulos e mellos e
b ancos, en gando bo ino lei ei o en éxime in ensi o. U ilízase un equipo de
c oma og a ía de gases combinado cun de ec o de ionización en chama (GC-FID). O
obxec i o é ealiza a ca ac e ización lonxi udinal dos ácidos g axos de memb ana de
e i oci os e leucoci os bo inos, co in de comp ende a súa na u eza e a iabilidade.
Obse ouse que os p incipais ac o es que p oducen cambios na memb ana dos
e i oci os son a empe a u a ambien al e o es ado de xes ación do animal. Así mesmo,
pódese concluí que an o os pe ís como o pa ón de cambio lonxi udinal dos ácidos
g axos nas memb anas é dis in o en e os dous ipos de células sanguíneas, debido
posiblemen e ás di e enzas na súa ida media e na súa unción celula . Po úl imo,
obse ouse que os a amen os e e ina ios p omo o es da p odución lác ea baseados
en soma o opina ecombinan e, non in lúen signi ica i amen e na composición de
memb ana, a pesa de e un impac o demos ado no me abolismo lipídico do animal.
Palab as cla e: bo ino, célula sanguínea, e i oci o, leucoci o, e olución, empo, ácidos
g axos, memb ana.
15
La posibilidad de analiza los ácidos g asos de la memb ana celula de las células
sanguíneas, como los e i oci os y lin oci os, en luga de los que es án lib es en el
plasma, es que apo an una in o mación más es able sob e los cambios me abólicos
que se han p oducido en el indi iduo, y que se p oducen bajo unas condiciones
conc e as, como un cambio de die a o de a amien o con algún á maco (Fe e i e al.,
2016).
1.4 Fac o es que a ec an al me abolismo de los ácidos g asos en
ganado bo ino
Debida a la impo ancia del ganado bo ino en la alimen ación humana, es impo an e
es udia la e olución longi udinal de sus células sanguíneas pa a conoce los ac o es
que p o ocan cambios en ellas y así es udia el es ado de salud del animal.
Exis e una se ie de ac o es que a ec a al me abolismo de los ácidos g asos del ganado
bo ino y que po an o cambia su concen ación en sang e. Es os ac o es son: los
genes, la edad, el géne o, el es ado de salud, los cambios epigené icos y su in e acción
con los genes y la in e acción en e los dis in os genes (Lankinen e al., 2018). Además
de odos es os ac o es, ambién encon amos algunos ambien ales como el calo
es acional o aumen o de empe a u a (Joo e al., 2021), el momen o de lac ación
(Veshkini e al., 2023) y el es ado de ges ación en el que se encuen e el animal
(Gheb emeskel e al., 2000), la die a que sigue el animal (Re skij, e al., 2019) y,
posiblemen e, el e ec o de a amien os e e ina ios exógenos.
1.4.1 Aumen o de la empe a u a ambien al
Los aumen os de empe a u a pueden causa es és al ganado p oduciendo así una
disminución de la inges a dia ia de comida. Es o a ec a ambién a la p oducción lác ea
del ganado bo ino, la cual se e á disminuida en can idades cla amen e ap eciables
(Joo e al., 2021). Al educi su inges a alimen a ia, las acas pueden llega a
expe imen a un balance ene gé ico nega i o, ya que no ingie en la can idad de comida
su icien e como pa a cub i su p oducción lác ica, lo que supone una mo ilización de
g asas de las ese as co po ales. Los adipoci os libe an su con enido haciendo que
aumen en los ácidos g asos no es e i icados en sang e. La mayo ía de es os ácidos
g asos libe ados son ácidos g asos sa u ados. Al aumen a su concen ación en plasma,
las células sanguíneas cap an más ácidos g asos sa u ados en sus memb anas que en
épocas más escas (Joo e al., 2021).
16
1.4.2 Momen o de lac ación y ges ación
Du an e el pe íodo de lac ación ocu e una si uación pa ecida a la que se p oduce con
el aumen o de empe a u a ambien al en la que el animal ambién expe imen a un
balance ene gé ico nega i o en la p ime a ase de la p oducción (Veshkini e al., 2023).
T as el pa o, las acas expe imen an una mo ilización de las ese as ene gé icas,
haciendo que se pie da una pa e impo an e de su masa g asa. Es a mo ilización g asa
p oduce la libe ación de ácidos g asos al o en e sanguíneo, de donde las células
sanguíneas an a cap a los ácidos g asos pa a inco po a los a su composición. A pa i
de la semana 14, las ese as g asas comienzan a ecupe a se muy len amen e has a
que en o no a la semana 40 después del pa o, ecupe an los alo es p e ios al pa o
(Nielsen e al., 2003).
El momen o de ges ación ambién in luye en la composición de la memb ana de las
células sanguíneas de la línea oja (RBC), ya que el e o necesi a inco po a
mayo i a iamen e ácido a aquidónico (AA) y ácido docosahexaenoico (DHA), po lo que
la concen ación de ácidos g asos ω-3 y ω-6 en las memb anas se en a ec ados po la
ges ación (Gheb emeskel e al., 2000).
1.4.3 T a amien os e e ina ios
O o ac o a ene en cuen a espec o a la mo ilización de g asas en el ganado leche o
es el uso de á macos e e ina ios, como po ejemplo la soma o opina ecombinan e o
Lac o opina ( bST), un á maco e e ina io que adminis an algunos p oduc o es de
leche a sus animales y que iene la misma unción que la ho mona del c ecimien o o
soma o opina na u al. Es a ho mona egula muchos p ocesos isiológicos elacionados
con el c ecimien o, el me abolismo y la ep oducción (Robe e al., 2017). En es e
sen ido, se ha demos ado que en las acas p oduce un aumen o en la p oducción lác ea
debido a su pa ecido es uc u al con la p olac ina (ho mona enca gada de la sín esis de
leche en mamí e os), de mane a que es capaz de uni se a su ecep o p oduciendo el
mismo e ec o isiológico (Chil on & Hewe son, 2005).
Exis en o os a amien os e e ina ios que mejo an el endimien o animal en la
p oducción leche a, como los an ibió icos, que se adminis an al ganado cuando su e
mas i is, la en e medad más común en el ganado bo ino. Con la adminis ación de los
an ibió icos se consigue una eacción de in lamación menos p onunciada y una mayo
p oducción lác ea sin que la composición lipídica de la leche se ea a ec ada. Las
p incipales especies de bac e ias asociadas a la mas i is que pueden causa
17
al e aciones en la composición lipídica de la leche son: Bi idobac e ium, U eaplasma,
A opococcus, Mycoplasma, Psych obac e , Ruminobac e y T epome, que cambian la
composición lác ea median e la al e ación del me abolismo del ácido a aquidónico, del
ácido α-linolénico y de los glice o os olípidos (Luo e al., 2023).
1.4.4 Die a del ganado bo ino
La die a del ganado in luye en el pe il lipídico de las memb anas plasmá icas de los
e i oci os de los animales. Se ha demos ado que en unción de la die a que sigan, la
a io de ácidos g asos ω-6/ω-3 de las acas se e a ec ado. La a iación de es a a io
in luye sob e la libe ación de ATP de es e ipo celula , haciendo que se eduzca (Re skij,
e al., 2019).
1.5 Ácidos g asos de las memb anas de los e i oci os
Debido a su unción en el cue po, los e i oci os deben euni unas ca ac e ís icas
únicas, y, como es lógico, su memb ana ambién debe euni las: debe se una
memb ana muy elás ica, capaz de esponde a las ensiones aplicadas de luidos y
posee una inmensa esis encia es uc u al. Po o o lado, un glóbulo ojo debe se
capaz de de o ma se has a un 250 %, pe o siemp e sin modi ica su supe icie de
memb ana, ya que una pequeña modi icación de su supe icie (de en e un 3 o un 4 %)
conduce a la lisis celula . Lle a a cabo es as de o maciones es posible g acias a la
asociación en e una ed elás ica bidimensional de p o eínas esquelé icas unidas a
p o eínas ancladas en la memb ana plasmá ica o a os olípidos aniónicos (aunque es as
úl imas uniones son menos ecuen es) (Mohandas & Gallaghe , 2008).
En el caso de los hema íes, la bicapa lipídica es á o mada en la misma p opo ción po
coles e ol y os olípidos. El coles e ol se dis ibuye en ambas ca as de la bicapa en
p opo ciones simila es, sin emba go, los os olípidos se disponen de o ma asimé ica
(Mohandas & Gallaghe , 2008).
Po o o lado, en es e ipo de células, la luidez es una ca ac e ís ica cla e, ya que a ec a
a la ag egación de los glóbulos ojos y al compo amien o ísico, en gene al, de las
células, de mane a que, si hay algún p oblema en las memb anas celula es de los
e i oci os, pod ían da se p oblemas anémicos po ag egación de los glóbulos ojos
(Fe lazzo e al., 2011).
Los e i oci os son células que ienen una ida media de 120 días (Nguyen e al., 2023)
y eponen sus lípidos de memb ana g acias a los ácidos g asos lib es que encuen an
18
en plasma. Po an o, en unción de los ácidos g asos p esen es en sang e de mane a
p olongada en el iempo, los e i oci os cap a án dichos ácidos g asos pa a o ma pa e
de sus memb anas. Así, se puede sabe la p opo ción es able de ácidos g asos que
ci culan en sang e. Además, se debe ene en cuen a que los RBC son células
ci culan es, y, po es a azón es án en con ac o con odos los ejidos co po ales, lo que
les con ie e la capacidad de adqui i los ácidos g asos de memb ana de o os ejidos
además de los p esen es en la sang e.
La composición g asa de la memb ana de los e i oci os a ía en e unas especies y
o as. Se pueden obse a cambios en la composición dependiendo del animal que se
analice (Plasenzo i e al., 2007).
1.6 Ácidos g asos de las memb anas de los leucoci os
El mo i o po el que en es e abajo se analizan los lin oci os y no los leucoci os en
gene al, es que los lin oci os son unos glóbulos blancos muy abundan es en sang e
bo ina (1,700-5,600 células/μL) (O akpogheno e al., 2019), como la ob ención de los
leucoci os en gene al, es bas an e compleja, el es udio se desa olla sob e las células
más abundan es: los lin oci os.
Los ácidos g asos de memb ana de los lin oci os a ec an a sus ca ac e ís icas, es a ez
no solo a la luidez de su memb ana, sino que ambién in e ienen en o os p ocesos
impo an ísimos como la adhe encia del lin oci o a los ejidos o a su mig ación (Pompéia
e al., 2000).
Los lin oci os, cuando madu an, aumen an conside ablemen e su amaño, po an o,
necesi an aumen a supe icie de memb ana inco po ando ácidos g asos en ellas, que,
ob iamen e a ec an a su es uc u a y a su unción. En es udios in i o se obse ó que
cambiaba la adhe encia de los lin oci os al endo elio dependiendo de en qué
ca ac e ís icas se incubaban los lin oci os, es deci , si es aban odeados de unos ácidos
g asos u o os, pues o que cambiaba su memb ana plasmá ica. Es cie o, que,
incubados in i o, los lin oci os siguen pa ones de inco po ación de ácidos g asos a su
memb ana que no siguen in i o, pues o que, si incubamos lin oci os en un medio
en iquecido con ácido α-linolénico, su p opo ción en la memb ana alcanza á el 12 %,
mien as que in i o, su p opo ción en la memb ana de los lin oci os no supe a el 3 %
(Calde e al., 1994).
La mig ación a los lin oci os desde la sang e a los ó ganos lin á icos, y ice e sa, puede
debe se a a ias causas, como las condiciones hemodinámicas y ísicas del cue po o el
19
es ado bioquímico de las células. Sin emba go, las al e aciones de las memb anas
celula es cambian el pa ón no mal de mig ación de los lin oci os debido a su in luencia
sob e la de o mabilidad de las células (muy elacionada con la luidez), la adhesión
celula , y, en gene al la composición lipídica, que puede in e eni en la ac i idad
enzimá ica de las células (Pompéia e al., 2000).
La adhe encia de los lin oci os a los ejidos es un paso c ucial pa a el co ec o desa ollo
de la unción de es as células, la cual es á di ec amen e elacionada con la luidez de la
memb ana, ya que, pa a uni se a los ejidos, son necesa ios unos ecep o es que es án
embebidos en la memb ana plasmá ica de los lin oci os. Cuan o más luida es una
memb ana, más ácilmen e se adhie en los lin oci os a los ejidos, po que más
ácilmen e se inse an los ecep o es en la memb ana celula (Twisk e al., 1991). Sin
emba go, en su abajo, No o e al., (1987) ie on que no había una elación lineal en e
el aumen o de la concen ación de ácidos g asos insa u ados y el aumen o de la
adhe encia de los lin oci os, sino que la adhe encia dependía más de las p opiedades
especí icas de los ácidos g asos poliinsa u ados que se encon aban en la memb ana.
Los lin oci os desempeñan la impo an e unción de la p esen ación de an ígenos, y su
unción se e a ec ada po los ácidos g asos que componen su memb ana. Se ha
demos ado que los ácidos g asos sa u ados no in luyen de mane a di ec a en la unción
inmuni a ia, sin emba go, los PUFA sí que in e ienen en di e en es p ocesos de
p oducción de in e leucinas (IL-2) y en algunas unciones de las células NK, mejo ando
así la espues a inmuni a ia. Pa a consegui la mejo a inmuni a ia, las concen aciones
de ácidos g asos poliinsa u ados deben man ene se ele adas en el iempo, y, a a és
de una die a no mal, es di ícil adqui i las (Calde e al., 2002).
20
2. Obje i os
El obje i o de es e abajo expe imen al es ealiza una ca ac e ización longi udinal de
la memb ana de las células sanguíneas del ganado bo ino de leche, en pa icula ,
alo ando la composición de los glóbulos ojos (RBC) y los glóbulos blancos (WBC) en
cuan o a su con enido en ácidos g asos de memb ana.
Pa a alcanza es e obje i o, se han es ablecido los siguien es obje i os especí icos:
- Analiza los pe iles de ácidos g asos de memb ana de RBC y WBC en hemb as
bo inas en lac ación median e GC-FID.
- De e mina la e olución longi udinal de los ácidos g asos de memb ana de RBC y WBC
en hemb as bo inas en lac ación, en égimen in ensi o.
- De e mina el impac o de ac o es exógenos ( empe a u a, a amien os e e ina ios)
en la composición de los ácidos g asos de memb ana de RBC y WBC en hemb as
bo inas en lac ación.
21
3. Ma e ial y mé odos
3.1 Es udio animal y ecolección de mues as
Es e es udio incluyó nue e acas de aza Hols ein de p ime a o segunda lac ación
seleccionadas de una g anja de p oducción leche a de la p o incia de Lugo en égimen
in ensi o, con edades comp endidas en e 1,5 y 4 años. Es os animales se aloja on
sepa ados del es o del ganado bo ino de la g anja, con acceso al agua ad libi um, y
dos eces al día ecibie on una ación op imizada pa a acas leche as. La ación de
comida con enía: al al a, maíz, cásca a de soja, ha ina de ex acción de simien e de
colza, cebada, paja de ce eal, melaza, igo, sales cálcicas de ácidos g asos palma,
ha ina de ex acción de soja os ada, ca bona o cálcico, bica bona o de sodio, clo u o
sódico y óxido de magnesio. Los componen es analí icos se mues an en la Tabla 1
ep esen ada a con inuación:
Tabla 1: Composición alimen a ia analí ica del ganado bo ino obje o de es udio (da os cedidos po la
explo ación).
Componen e analí ico
Can idad (%)
P o eína b u a
14.5
Celulosa b u a
13.6
Cenizas
7.3
G asa b u a
3.9
Sodio
0.4
Pa a ob ene las mues as de sang e de los animales, se u iliza on se s de ecolección
de sang e Vacue e® con adap ado Lue . La sang e se ecogió en ubos con EDTA en
los días 1, 7, 50, 95 y 214 de es e es udio, conside ándose el inicio del seguimien o de
los animales como iempo 0. A iempo 0 las acas seleccionadas lle aban lac ando
75±15 días.
La empe a u a egis ada du an e los días de es udio de la mues a según la Agencia
Es a al de Me eo ología (AEMET) se ecoge en la Tabla 2 que se mues a a
con inuación.
22
Tabla 2: Tempe a u a egis ada du an e los días del es udio. In o mación ob enida de la AEMET.
Día de es udio
Tempe a u a egis ada (máxima/mínima) (ºC)
1
19.4º/11.4º
7
16.1º/8.6º
50
24.4º/12.7º
95
20.9ºC/9.2ºC
214
12.9º/4.3º
De las nue e acas seleccionadas, es de ellas no se some ie on a ningún ipo de
a amien o e e ina io, es deci , se u iliza on como acas con ol en cuan o a es e ac o ,
mien as que las o as seis acas es an es se a a on con 500 mg de bST
(Lac o opina, Elanco, Eli Lilly, México) cada 14 días pa a aumen a su p oducción
leche a. El p ime día de a amien o con Lac o opina ue a iempo 0, coincidiendo con
10 semanas de lac ación (75±15 días) al y como indica el ab ican e. Se adminis a on
un o al de 12 dosis de Lac o opina a cada aca a ada, cub iendo así, p ác icamen e,
odo el pe íodo de lac ación, con un in e alo de 168 días en e la p ime a y la úl ima
dosis. En e la quin a y la sex a dosis, hubo un pe íodo de descanso de 28 días sin
a amien o (en ez de 14 días) pa a comp oba si la p oducción de leche disminuía
debido a la e i ada del medicamen o.
Todos los p ocedimien os con los animales se ealiza on de acue do con la Di ec i a
2010/63/UE sob e la p o ección de los animales u ilizados pa a ines cien í icos, y su
ansposición a la legislación nacional. En pa icula , odos los p ocedimien os se
ealiza on espe ando el bienes a animal y sin causa más dolo , su imien o, angus ia
o daño du ade o que el equi alen e al causado po la in oducción de una aguja, de
acue do con la buena p ác ica e e ina ia. Los animales ue on supe isados en odo
momen o po pe sonal e e ina io, quienes se enca ga on de ecoge las mues as de
sang e.
3.2 Aislamien o de glóbulos ojos y blancos
Los glóbulos blancos y los glóbulos ojos se aisla on y ecolec a on en cinco pun os
empo ales di e en es del es udio. Se ecogie on po igual da os de las memb anas de
las células sanguíneas de las acas a adas, y de las acas con ol en los días 1, 7, 50,
95 y 214. Po úl imo, ambién se oma on da os de los componen es g asos de las
23
memb anas de las células sanguíneas de dos acas (10 y 11) de la misma g anja el día
98, que ac ua ían como animales de con ol pa a alidación de los esul ados ob enidos.
Pa a sepa a las células sanguíneas se aplicó un p o ocolo de accionamien o basado
en la cen i ugación de la sang e ecogida en ubos con EDTA. Se u ilizó una adap ación
del p o ocolo desc i o po Chamo o López e al. (2013).
Las mues as de sang e ue on cen i ugadas a 2000 xg du an e 15 minu os a
empe a u a ambien e. Con es o, se di iden po capas las dis in as acciones
sanguíneas. En la pa e supe io queda el plasma sanguíneo, como un líquido
anspa en oso o, lige amen e ama illen o, ya que quien apo a el colo a la sang e son
los glóbulos ojos. La segunda capa que se puede ap ecia son los glóbulos blancos o
lin oci os, siendo es a una capa muy ina de colo blanco y de apa iencia iscosa. Po
úl imo, en la capa in e io se ecogen los glóbulos ojos, mucho más abundan es que los
lin oci os po lo que c ean una capa mucho más g uesa.
T as el accionamien o de la sang e, se p ocede a la sepa ación de los dis in os
componen es con una pipe a Pas eu de plás ico de 2 mL. El p ime paso es la e i ada
del plasma sanguíneo, y a con inuación se sepa an los glóbulos blancos de los
e i oci os pa a deposi a los en un mic o ubo Eppendo de 1.5 mL. Una ez ans e idos
los lin oci os al mic o ubo, se añade 1 mL de PBS (pH 7,4, sin ARNasa de la línea de
p oduc os Ambion™, The moFishe Scien i ic) pa a su la ado y eliminación de posibles
es os de glóbulos ojos que hayan sido a as ados en el paso an e io (Ba ei o e al.
2020).
T as añadi el PBS, se agi a y cen i uga el ubo, y con pipe a Pas eu se sepa an de
nue o los glóbulos blancos de los glóbulos ojos que pueda habe p esen es y se
ans ie en a un mic o ubo limpio. Cuando ya solo quedan glóbulos blancos en la
disolución, la acción se edisuel e en 200 μL de PBS y se congela a -20ºC has a su
análisis. Po úl imo, se ecolec a 1mL de la capa de e i oci os, se mezcla con 2 mL de
PBS y se conse a ambién a -20 ºC (Ba ei o e al. 2020).
3.3 Ex acción de ácidos g asos de memb ana
La ex acción de los ácidos g asos de las memb anas sanguíneas se lle ó a cabo
siguiendo el mé odo desc i o po Sanjulián e al. (2021). Se ealizó el mismo
p ocedimien o pa a glóbulos ojos y blancos.
24
El p ime paso consis e en mezcla 10 μL de la solución de células sanguíneas
p epa ada en el paso an e io con 2 mL de ácido sul ú ico (H2SO4) al 2,5 % en me anol
y un es ánda in e no C23:0. La mezcla se man u o du an e 18 ho as a una empe a u a
cons an e de 50ºC pa a que ocu iese así la anses e i icación de los ácidos g asos.
T as es o, se añade a la mezcla 1 mL de n-hexano, el cual pe mi e lle a a cabo la
ex acción de los és e es me ílicos de los ácidos g asos (FAMEs). Se sepa a el hexano
de la ase acuosa median e pipe a Pas eu de id io, y se ans ie e a un ial de inyección
pa a c oma og a ía de gases.
3.4 De e minación de ácidos g asos median e GC-FID
Pa a de e mina el pe il de ácidos g asos de las memb anas, se ealiza una
c oma og a ía de gases de al o endimien o u ilizando un sis ema de GC Agilen 6850
(Algien Technologies, Palo Al o, CA, USA). Es e sis ema es á equipado con una
columna capila DB-Wax (dimensiones: 60m x 0,25 μm x 0’25 μm) y con un de ec o de
llama (FID) de Agilen (San a Cla a, CA, USA).
T as la sepa ación y de ección GC-FID de los ácidos g asos (Ba ei o e al. 2020), cada
uno de los picos c oma og á icos se in eg an (p ime o au omá icamen e y después se
hacen comp obaciones y las co espondien es co ecciones pa a que el pico es é bien
in eg ado) ob eniendo así un núme o que equi ale al á ea del pico. Se ealiza después
una co ección median e pa ón in e no. El so wa e que se u ilizó pa a isualiza y
analiza los esul ados ob enidos ue GC ChemS a ion e sion B.03.02, de Agilen
Technologies. Los da os ob enidos de cada in eg ación se exp esa án como po cen aje
en peso de cada ipo de ácido g aso sob e el o al de ácidos g asos de la mues a (%
w/w del o al de ácidos g asos).
Finalmen e, se iden i ica on un o al de 34 ácidos g asos di e en es que podemos di idi
en es g upos: ácidos g asos sa u ados (SFA), que son: C14:0, C15:0, C16:0, C17:0,
C18:0, C20:0, C22:0 y C24:0; ácidos g asos monoinsa u ados (MUFA), que son:
C14:1n-5, C16:1n-9, C16:1n-7, C16:1n-5, C16:1n-13 , C17:1n-9, C18:1n-9, C18:1n-7,
C20:1n-11, C20:1n-9, C22:1n-11 y C22:1n-9; y los ácidos g asos poliinsa u ados
(PUFA), que son: C18:2n-6, C18:2n-6 9-12 , C18:2n-6 9 -12, CLA18:2n-7 9 -11 ,
CLA18:2n-6 10 -12, C18:3n-6, C20:2n-6, C20:3n-6, C20:4n-6, C18:3n-3, C18:4n-3,
C20:5n-3, C22:5n-3 y C22:6n-3.
31
ex e no es á ges ando, pues o que los ácidos g asos que poseen una impo ancia meno
son, como ya se mencionaba an e io men e, los ácidos ω-3 y ω-6 (Gheb emeskel e al.,
2000). Es e descenso p oducido en los PUFA es un impo an e indicado de que el
animal se encuen a en un es ado de emba azo (Gheb emeskel e al., 2000).
El segundo de los con oles ex e nos sí que iene un pe il simila al del es o de
animales, casi llegando a ag upa se con los animales obje os de es udio los días 50 y
95. Aunque se a e de un pe il lipídico ce cano a es os días, se e que hay un mayo
po cen aje de ácidos g asos sa u ados y monoinsa u ados en la memb ana de los
e i oci os de la aca con ol ex e no que en las acas del es udio. Es o demues a que
el hecho de que las acas no se encuen en en el mismo momen o pospa o, de
lac ación, de edad, e c., no ienen po qué expe imen a los mismos cambios en las
memb anas de los e i oci os, independien emen e de la empe a u a ambien al, ya que
hay o os ac o es que in e ienen en la inco po ación de ácidos g asos a las
memb anas plasmá icas de las células sanguíneas en gene al, y, en pa icula , de los
glóbulos ojos.
4.1.2 Lin oci os
Los es udios ambién se desa olla on en los ácidos g asos de memb ana de lin oci os,
que, como mues a la Figu a 5, en es a ocasión, no se encuen a una sepa ación cla a
en e los lin oci os en unción del iempo. Tampoco se ap ecia una ag upación en unción
del a amien o o no.
En el caso de los lin oci os, la sepa ación no es á cla a, es deci , apenas hay
di e enciación en e los días del es udio. Se puede deci que du an e los p ime os días
Figu a 5: a) G á ico de pun uación del PCA ealizado con la abundancia ela i a de los g asos de la
memb ana de e i oci os bo inos (1=con ol; 2= a adas con bST). b) G á ico de ca gas de cada
componen e g aso pa a la dis ibución del PCA en e i oci os.
a)
b)
32
hay una endencia posi i a en el eje Y, pe o no hay demasiada di e encia en e los días
1 y 7, ya que no encon amos una dis ibución homogénea pa a ninguno de los dos
g upos. Se puede in ui agamen e que el día 1 los animales enían una mayo
concen ación de ácidos g asos sa u ados y monoinsa u ados en la memb ana de sus
lin oci os. Po su pa e, los pun os del día 7, es án más p óximos en e sí, que los del
día 1, po an o, podemos deci que hay más uni o midad en la dis ibución de los ácidos
g asos de las memb anas de los lin oci os el día 7 que el día 1. Como de o ma gene al,
los pun os del día 7 apa ecen más p óximos al eje Y, se puede in ui que la
concen ación de ácidos g asos monoinsa u ados y sa u ados disminuye con espec o
al día an e io , y, como consecuencia, que los ácidos g asos poliinsa u ados y/o los ω-
6, aumen an su concen ación.
La dis ibución de los pun os de los ácidos g asos del día 50, ampoco es demasiado
uni o me, pe o sí se puede e que más o menos, se encuen an en e los p ime os (1 y
7) y los úl imos días (95 y 214) si se obse a el eje Y.
Po úl imo, en cuan o a los dos úl imos días de análisis (95 y 214 días), se e que apenas
hay di e encia en e ambos. Los dos ienen una dis ibución simila an o en el eje X
como en el Y. Si se quisie a p ecisa un poco, se pod ía deci que es p obable que en
el día 214 haya una p opo ción lige amen e mayo de ácidos g asos poliinsa u ados y
de ω-6, aunque las di e encias que se pueden ap ecia con es e análisis no son
e iden es.
T as el análisis del PCA de la línea oja y el de la línea blanca, se puede hace una
compa ación de ambos pa a e si las células sanguíneas de la línea oja y las de la
línea blanca siguen un pa ón simila de cap ación de ácidos g asos de memb ana. A
p io i, podemos obse a que los glóbulos ojos sí que siguen un pa ón de cap ación de
ácidos g asos en unción del iempo, mien as que los lin oci os, no siguen es e pa ón
an di e enciado. Es cie o que sí que se puede in ui una endencia a la adquisición de
ácidos g asos poliinsa u ados y ω-6 po pa e de los lin oci os con el paso del iempo,
mien as que se pie den ácidos g asos sa u ados y monoinsa u ados, pe o es a
endencia no es lo su icien emen e cla a como pa a sepa a po días los pe iles lipídicos
como en el caso an e io .
33
4.2 E olución empo al de los ácidos g asos de memb ana de células
sanguíneas bo inas
4.2.1 E i oci os
T as el p ime análisis, se es udia on los cambios de los seis g upos de los que se
hablaba an e io men e en unción del iempo (SFAs, MUFAs, PUFAs, ω-6, ω-3 y CLAs),
ya que, dependiendo del a amien o, ya se ha obse ado que los ácidos g asos de
memb ana de los dos ipos celula es u ilizados no cambian de mane a uni o me. Los
p ime os g upos de ácidos g asos de memb ana de los e i oci os que se some ie on al
análisis ue on los ácidos g asos sa u ados y poliinsa u ados, y con los poliinsa u ados,
los ω-6, que son los PUFAs con mayo p esencia. En la Figu a 6 se mues an los
cambios expe imen ados po es os g upos de ácidos en la memb ana de los e i oci os.
Si se analizan los cambios en unción del iempo de los ácidos g asos sa u ados en los
glóbulos ojos, se e cómo los p ime os días el po cen aje de ácidos g asos sa u ados
en la memb ana es mucho meno que el día 50, donde se de ec a un pico en el que el
po cen aje de ácidos g asos sa u ados en la memb ana supe a el 45 %. El día 95 sigue
habiendo en la memb ana un po cen aje de ácidos g asos sa u ados muy al o, ya que
alcanza el 40 %, pe o es meno que en el día 50. Po úl imo, el día 214, emos que la
impo ancia de los ácidos g asos sa u ados desciende conside ablemen e, alcanzando
su pun o más bajo en el es udio, con un po cen aje un poco supe io al 30 %.
En los g á icos de la Figu a 6, se puede obse a que los ácidos g asos sa u ados no
son los únicos que cambian su concen ación. Es o es lógico, ya que la memb ana de
los e i oci os, aunque sea muy lexible, debe man ene siemp e la misma supe icie, po
lo que si aumen a la concen ación de un ipo de ácidos g asos en la memb ana, debe
Figu a 6: E olución ácidos g asos sa u ados (a), poliinsa u ados (b) y ω-6 (c) en la memb ana de
los e i oci os en ganado bo ino de leche.
a)
b)
c)
34
disminui en la misma p opo ción el conjun o de ácidos g asos es an es. Los ácidos
g asos que ienen un pa ón in e so a los SFAs son los PUFAs y los ácidos g asos ω-
6. Los ácidos g asos ω-6, son un ipo de PUFAs, po lo que es no mal que cambien
siguiendo el mismo pa ón. En la Figu a 6b, se e la e olución del po cen aje de los
ácidos g asos poliinsa u ados en unción de los días de análisis, y, po an o, en unción
del iempo.
La p ime a obse ación que se puede hace en es e g á ico, es que es a ía de o ma
in e sa al g á ico de los ácidos g asos sa u ados, po an o cuando es os úl imos
aumen an su po cen aje, los PUFAs disminuyen su po cen aje, y ice e sa: cuando los
ácidos g asos poliinsa u ados aumen an su concen ación en la memb ana plasmá ica
de los e i oci os, los sa u ados disminuyen la suya. Como se p edecía en la Figu a 4, la
suma de es as dos a ian es di e encia la posición en la que se encon aban, ya que
son los g upos de ácidos g asos con mayo po cen aje en la memb ana plasmá ica de
los hema íes. Aun así, si se man u iesen es ables y no luc uasen, no se ían el elemen o
di e enciado .
T as la deducción ealizada con el PCA, se puede e que los esul ados p edichos e an
co ec os, ya que los ácidos g asos ω-6 siguen un pa ón muy simila al de los ácidos
g asos poliinsa u ados. La a iabilidad mos ada en el g á ico es la misma, lo único, que
los po cen ajes de ácidos g asos ω-6 son in e io es que los de los ácidos g asos
poliinsa u ados. Los ácidos g asos ω-6 son un ipo de ácido g aso poliinsa u ado,
conc e amen e, el que más peso iene en la memb ana celula de los e i oci os, po eso
sigue el mismo pa ón que los PUFAs.
La mayo ía de los ácidos g asos poliinsa u ados no pueden se si e izados po los
mamí e os, sino que, a pa i de la inco po ación de los ácidos linoleico y linolénico, los
animales son capaces de sin e iza el es o de ácidos g asos poliinsa u ados necesa ios
(Sa desai, V.M.,1992). Es os ácidos son ácidos g asos esenciales, po lo que al educi
la inges a dia ia, los ácidos g asos poliinsa u ados ambién disminuyen su concen ación
an o en sang e, como en las memb anas de las células sanguíneas de la línea oja.
En el caso de los e i oci os, se e cómo los pa ones de cambio en las memb anas
siguen los pa ones del calo a los que se some en los animales, pues o que los p ime os
días de es udio (día 1 y día 7) son los p ime os días de junio, época en la que comienza
a hace calo , pe o no demasiado.
En el día 50 se obse a un g an pico que indica un aumen o muy conside able de los
ácidos g asos sa u ados en sang e, es e día se co esponde con la echa del 26 de julio,
35
en la que hace mucho calo : ese día, según los egis os de la es ación me eo ológica
de Bece eá de la AEMET, hubo una empe a u a máxima de 25ºC, y los días an e io es
26 y 27ºC. No se a a de un calo excesi o en el que los animales se encuen en en
condiciones de es és se e o, sin emba go, al no es a acos umb ados a dichas
empe a u as, es muy p obable que expe imen asen un lige o es és du an e esos días
del e ano, y po eso, aumen ase la concen ación de ácidos g asos sa u ados en las
memb anas de sus glóbulos ojos. Lógicamen e, es e cambio no se p oduce po el
e ec o del calo en es días, sino los cambios se p oducen po odo el es és gene ado
du an e el e ano.
El día 95 los ni eles de SFA son más bajos que en pleno e ano, sin emba go, no es
una a iación demasiado g ande. Es o se debe a que las acas se han some ido du an e
odo el e ano a calo , y el pa ón de cambio de los ácidos g asos de las memb anas
e i oci a ias no es lo su icien emen e ápido como pa a que a íe demasiado en un
pe iodo de iempo an co o. El día 9 de sep iemb e de 2016 se egis a on unas
empe a u as máximas de 16ºC, po lo que los animales ya comenzaban a no su i
es és po las al as empe a u as.
Po úl imo, el úl imo día de egis o, se co esponde con la época in e nal, una época
ía del año en la es a mo ilización de g asas gene ada po la disminución de la inges a,
no se p oduce, y, en la que los ácidos g asos sa u ados de las memb anas e i oci a ias
alcanzan la concen ación mínima egis ada.
Es a a iación en los ácidos g asos sa u ados se debe a un aumen o de la mo ilización
de las ese as g asas del animal, expe imen ado debido a los cambios de empe a u a
asociados a la época del año. Los días en los que el animal se ha expues o a más calo ,
el balance ene gé ico de los animales es más nega i o, ya que ingie en una meno
can idad de comida. La ene gía necesa ia pa a ealiza odos los p ocesos isiológicos
p o iene de las ese as ene gé icas, haciendo así que aumen en las concen aciones
de ácidos g asos sa u ados en sang e, y, que los e i oci os, cap en es e ipo de ácidos
g asos en sus memb anas (Joo e al., 2021).
Los ácidos g asos poliinsa u ados ambién siguen el pa ón de cambio es acional que
se obse aba en los ácidos g asos sa u ados. Sin emba go, es os ácidos g asos
disminuyen su concen ación en la memb ana e i oci a i a ia du an e los pe íodos más
calu osos de año. Po an o, se puede deci que cuando los ácidos g asos
poliinsa u ados educen su concen ación en la memb ana plasmá ica, los ácidos g asos
36
que los sus i uyen son los sa u ados, pues o que son los más abundan es en las
ese as ene gé icas.
En segundo luga , los da os de los ácidos g asos monoinsa u ados y su e olución se
analiza án en unción del iempo. Los da os se mues an en la Figu a 7.
Como bien se ap ecia en la Figu a 7, y bien se dedujo a pa i de la Figu a 4, los ácidos
g asos monoinsa u ados, no luc úan demasiado en unción del iempo, se ap ecia que
a ían en e el 15 y el 18 % en la composición de la memb ana. Sí que se obse a una
lige a endencia a la disminución de es a amilia lipídica, ya que el día 1 el po cen aje de
MUFA es supe io al del úl imo día. Aun así, es e descenso no ocu e de una o ma
p onunciada y cons an e.
A di e encia de los ácidos g asos sa u ados, los monoinsa u ados no se en a ec ados
po los cambios de empe a u a p oducidos debido a la época del año, sino que se
man ienen es ables. En odos los días de es udio solo hay a iaciones del 3 %, y no hay
di e encia signi ica i a (p<0.05) en e los alo es ob enidos du an e los di e en es días
del es udio, po lo que se puede a i ma que es a amilia lipídica no adquie e alo es
di e en es ni en unción del iempo, ni en unción de si el animal se ha some ido a
a amien o o no, ni una combinación de ambas.
En pe íodos de iempo in e io es a un año en los que el animal adul o no su e cambios
die é icos, cambios ho monales asociados a la edad (mena quia, menopausia, es és
con inuado, e c.) ni cambios en las condiciones ex e nas más allá de la empe a u a
ambien al y el ciclo no mal de lac ación, los ácidos g asos monoinsa u ados se
man ienen es ables en las memb anas plasmá icas e i oci a ias.
Figu a 7: E olución ácidos g asos monoinsa u ados en la memb ana de los e i oci os en ganado bo ino de
leche.
37
El siguien e de los g upos en los que se di idió a los ácidos g asos de memb ana se
co esponde a los ácidos g asos ω-3, cuyo po cen aje en las memb anas de los
e i oci os en unción del iempo es á ep esen ada en la Figu a 8, que se p esen a a
con inuación:
En es a Figu a 8 se puede e cómo el po cen aje de ácidos g asos ω-3 no es muy
ele ado en gene al (si se compa a con la p esencia de o os ácidos g asos), aun así, se
ap ecia un cla o pa ón de disminución de los ácidos g asos ω-3 has a el día 50, donde
se alcanza el po cen aje mínimo. A pa i de es e pun o, el po cen aje de ácidos g asos
ω-3 en la memb ana de los e i oci os a a aumen a , pe o no has a los ni eles iniciales.
El úl imo de los g á icos ep esen a i os de la e olución de los ácidos g asos de la
memb ana de los e i oci os en unción del iempo se p esen a a con inuación, y mues a
la e olución de los CLAs.
La Figu a 9 mues a que los CLAs no son un ipo de ácido g aso que enga una
abundancia especialmen e no able en las memb anas de los e i oci os, pues o que el
po cen aje máximo alcanzado po es e g upo molecula es á po debajo del 2 %. En
Figu a 8: E olución ácidos g asos ω-3 en la memb ana de los e i oci os en ganado bo ino de leche.
Figu a 9: E olución ácidos g asos CLAs en la memb ana de los e i oci os en ganado bo ino de leche.
38
cuan o a su e olución empo al, se ap ecia que se man ienen es ables en el iempo
has a el día 95. Es cie o que su po cen aje a disminuyendo muy lige amen e has a el
cua o día de análisis, pe o la disminución no se p oduce de mane a b usca. Po o o
lado, el día 214 de análisis se e que el po cen aje de CLAs en la memb ana del glóbulo
ojo aumen a de mane a exage ada, llegando a alcanza casi el doble del alo del día
95.
Los CLAs y los ácidos g asos ω-3 son me aboli os que in e ienen en el es és oxida i o
gene ado po el balance ene gé ico nega i o. El hecho de que los CLAs se man engan
es ables en la memb ana de los e i oci os du an e odos los días de análisis excep o
du an e los úl imos, apun a a que los CLAs p esen es en sang e se es én u ilizando pa a
e i a daños impo an es en las células y el ADN, y solo se man enga en la memb ana
la concen ación mínima necesa ia su el co ec o uncionamien o. Cuando el es és
oxida i o es meno , debido a que es in ie no, las empe a u as son más bajas, y, po
an o, no exis e el ac o ex e no de balance ene gé ico nega i o causado po una
educción del consumo de comida, se e cómo la concen ación de CLAs alcanza
ni eles que doblan los egis ados an e io men e (Veshkini e al., 2023).
Los ácidos g asos monoinsa u ados, los CLAs y los ω-3 siguen un pa ón de cambio
di e en e al de los SFA, PUFA y ω-6. El hecho de que a íen siguiendo un pa ón
di e en e indica que es e ipo de lípidos p esen es en las memb anas e i oci a ias no se
en a ec ados po las a iaciones es acionales de la empe a u a.
El calo no es el único ac o que a ec a al balance ene gé ico nega i o, sino que el
momen o de la lac ación ambién in luye, y ambién supone un balance nega i o
ene gé icamen e hablando du an e la época de lac ancia (Nielsen e al., 2003). Sin
emba go, en los animales obje o de es udio no se ap ecia di e encia en e unos y o os
po que odos se encuen an en el mismo momen o de lac ación.
4.2.2 Lin oci os
A con inuación, se analizan los g á icos del po cen aje de ácidos g asos en las
memb anas de las células de la línea blanca en unción del iempo. Se pod án obse a
así los cambios que se p oducen en la memb ana plasmá ica de los lin oci os del ganado
bo ino a lo la go del iempo.
39
El p ime o de los g upos que se á comen ado es el de los ácidos g asos sa u ados,
cuyos esul ados se mues an en la Figu a 10.
En la Figu a 10 se e cómo el po cen aje de los ácidos g asos sa u ados de la memb ana
de los lin oci os se man iene ela i amen e es able du an e odo el iempo de análisis,
ya que sus alo es medios no luc úan mucho y se man ienen en e el 30 y el 38 % de
los ácidos g asos o ales. El pun o más bajo se obse a el día 7, donde el po cen aje
medio de ácidos g asos en la memb ana es un poco supe io al 30 %. Po o o lado, el
po cen aje más al o se encuen a el p ime día, en el que su alo medio ue casi del 40
%.
La Figu a 11 es la que se mues a bajo es e pá a o. En ella se ap ecia la e olución del
po cen aje de los ácidos g asos monoinsa u ados que con o man la memb ana celula
de los glóbulos blancos del ganado bo ino.
Al igual que en el caso de los e i oci os, el g á ico no luc úa demasiado, sino que más
bien se man iene cons an e en el iempo, pues odos los alo es en an en el ango de
en e el 15 y el 20 % de la composición o al de es e ipo lipídico. El alo más al o se
Figu a 10: E olución ácidos g asos sa u ados en la memb ana de los lin oci os del ganado bo ino de
leche.
Figu a 11: E olución ácidos g asos monoinsa u ados en la memb ana de los lin oci os en ganado
bo ino de leche.
40
si úa en o no a una composición del 17 %, y el mínimo, no es á muy cla o en qué día
se p oduce, aun así, los es posibles mínimos (días 7, 50 y 214) es án en o no al 15
%.
Si se compa a es e g á ico (Figu a 11) y el an e io (Figu a 10), se e que la o ma de
las luc uaciones es muy simila , po lo que se pod ía deci que es os dos ipos de ácidos
g asos a ían siguiendo el mismo pa ón. Es o se e en el día 1, donde en ambos
g á icos se si úa el máximo absolu o de la g á ica, los días siguien es de análisis
desciende el po cen aje de ambos ácidos g asos, aunque en es e pun o el pa ón di ie e
un poco, ya que el día 50 los ácidos g asos sa u ados aumen an su p esencia en la
memb ana, mien as que los monoinsa u ados se man ienen. Sin emba go, el día 95 se
uel e a ap ecia un máximo ela i o en ambos casos pa a que, inalmen e, el úl imo día
de análisis ambos po cen ajes desciendan. Po an o, se puede es ablece que la
e olución en e la concen ación de ácidos g asos sa u ados y monoinsa u ados en la
memb ana de los lin oci os sigue un pa ón e olu i o simila .
El siguien e g á ico que se mues a (Figu a 12) ep esen a la e olución del po cen aje
de los ácidos g asos poliinsa u ados en el mismo ipo celula que las dos igu as
an e io es: los lin oci os.
En el g á ico se obse a que los ácidos g asos poliinsa u ados con o man una pa e muy
impo an e de la memb ana celula de los lin oci os, ya que su p opo ción es á en e el
40 y el 55 % de los ácidos g asos o ales.
Los dos p ime os días de análisis, los ácidos g asos poliinsa u ados ienen los alo es
más bajos, ce ca del 40 %, sin emba go, a pa i del día 50, el po cen aje de PUFAs
Figu a 12: E olución ácidos g asos poliinsa u ados en la memb ana de los lin oci os en ganado bo ino
de leche.
47
Pa a asegu a que la in o mación obse ada en los g á icos de la Figu a 17 e a
es adís icamen e co ec a, se ealizó un es udio ANOVA en dos di ecciones pa a e si
en algún pun o del es udio había di e encias signi ica i as en e las acas con ol y las
acas a adas, y se es ableció de o ma es adís ica, que e ec i amen e, en las
memb anas e i oci a ias, los e ec os de la soma o opina no in luían en ninguno de los
casos.
El mismo es udio ealizado en los e i oci os, se epi ió pa a los lin oci os, con el mismo
obje i o, ya que, al se células di e en es, los pa ones de cambio y la cap ación de
lípidos es igual en los dos ipos celula es, y, aunque en los e i oci os no se hubiese
esul ados posi i os pa a la in luencia de la soma o opina, pod ía habe los en los
lin oci os.
En el caso de los lin oci os, simplemen e obse ando los g á icos que se mues an en la
Figu a 18, se puede obse a que las acas a adas su en más luc uaciones en
unción del iempo que las acas con ol, que de mane a gene alizada se man ienen
más es ables en cada uno de los ácidos g asos. Los ácidos g asos en los que se
obse an luc uaciones di e en es en e las acas a adas con Lac o opina y aquellas
Figu a 18: Compa ación del po cen aje de los dis in os ácidos g asos en la memb ana de los lin oci os
en e las acas con ol y las a adas con soma o opina ecombinan e.
48
que se u ilizan como con ol, son los ácidos g asos, sa u ados, los poliinsa u ados y los
ω-6. El es o de ácidos g asos a ían de una mane a muy simila , aunque no an
pa ecido como en el caso de los e i oci os.
Tabla 7: Compa ación alo es medios ácidos g asos de lin oci os de las acas con ol y de las acas
a adas con Lac o opina y signi icación de sus di e encias.
Tipo de
ácido
g aso
Con ol
T a adas
Valo es P
Media
(%w/w)
SD
Media
(%w/w)
SD
Tiempo
T a amien o
In e acción
SFA
34.89
1.94
34.54
1.94
0.005**
0.68
0.03*
MUFA
15.32
1.94
16.54
1.29
0.01*
0.03*
0.49
PUFA
48.62
2.33
47.25
2.78
0.002**
0.11
0.07
ω-3
4.05
2.31
3.83
0.95
0.02*
0.26
0.40
ω-6
43.12
2.5
42.03
2.92
<0.0001****
0.10
0.06
CLA
1.29
2.4
1.23
0.46
0.003**
0.47
0.97
Aunque a simple is a en la Figu a 18 se ap ecian di e encias apa en emen e g andes
en e las acas a adas y las con ol en los SFA, los PUFA y los ω-6, el es ANOVA,
ep esen ado en la Tabla 7, des eló que no había di e encia signi ica i a causada po el
a amien o en ninguno de los es casos, solo que en los ácidos g asos sa u ados in luía
signi ica i amen e (p < 0.05) la in e acción de iempo y a amien o.
O o da o ele an e que de eló el análisis ANOVA de los ácidos g asos
monoinsa u ados, es que, aunque apa en emen e en el g á ico mos ado en la Figu a
19 no se ea una di e encia e iden e en e las acas con ol y las a adas, sí que hay
una di e encia es adís ica en e ellas, pues o que el a amien o sí que in e iene en los
cambios p oducidos en los ácidos g asos monoinsa u ados de las memb anas
plasmá icas de los lin oci os, aunque es a di e encia signi ica i a es meno (p = 0.03)
que la di e encia signi ica i a p oducida po el paso del iempo (p = 0.01).
La p incipal conclusión que podemos saca de es os análisis es que la soma o opina
ecombinan e adminis ada de mane a exógena no iene in luencia sob e la composición
de la memb ana de las células sanguíneas de las acas, a pesa de ene in luencia
sob e el me abolismo lipídico del animal.
49
5. Conclusión
Las memb anas de las células sanguíneas expe imen an cambios en unción del iempo,
como se ha comp obado a lo la go del es udio. Es os cambios son debidos a múl iples
ac o es como pueden se la lac ancia, la empe a u a ex e na, la in luencia de las
ho monas o la ges ación.
En es e es udio, el ac o más ele an e a la ho a de p oduci cambios en las memb anas
de los e i oci os en unción del iempo ha demos ado se la empe a u a ambien al.
Debido al es és oxida i o gene ado po el calo expe imen ado en la época es i al, las
acas aumen an su po cen aje de ácidos g asos sa u ados en la memb ana de los RBC,
mien as que se obse a un cla o descenso de los ácidos g asos ω-6, lo que cla amen e
a ec a a la p opo ción de PUFAs en la memb ana e i oci a ia. Los cambios
expe imen ados en las memb anas de las células de la línea oja no se han p oducido
a una g an elocidad, pues o que siemp e han ido de la mano con la es ación del año (y
la empe a u a asociada a ella).
Es os cambios asociados a la ges ación se elacionan con una concen ación de SFA
muy al a y una concen ación de PUFA exage adamen e baja, disminuyendo, sob e
odo, su concen ación de ω-3 y ω-6.
Po el con a io, no se ha obse ado un pa ón de cambio cla o en las células blancas,
en compa ación con los e i oci os. Al hace un es udio compa a i o en e ambos ipos
de células sanguíneas, se obse ó que los cambios p oducidos en las memb anas de
los lin oci os e an mucho meno es, y, po an o, que sus memb anas e an más es ables
a lo la go del iempo.
Finalmen e, se comp obó que la po enciación de la lac ación con soma o opina bo ina
ecombinan e no a ec a a la composición g asa de las memb anas de glóbulos ojos y
blancos del ganado bo ino de leche, a pesa de ene es a ho mona un e ec o
demos ado sob e el me abolismo lipídico del animal.
50
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