Análisis en la artritis reumatoide de anticuerpos atípicos frente a proteínas modificadas postraduccionalmente

ESCUELA DE DOCTORADO
INTERNACIONAL DE LA USC
Lo ena
Rod íguez Ma ínez
Tesis doc o al
Análisis en la a i is
euma oide de an icue pos
a ípicos en e a p o eínas
modi icadas
pos aduccionalmen e
San iago de Compos ela, 2022
P og ama de doc o ado en Medicina Molecula
TESIS DE DOCTORADO
ANÁLISIS EN LA ARTRITIS REUMATOIDE DE
ANTICUERPOS ATÍPICOS FRENTE A PROTEÍNAS
MODIFICADAS POSTRADUCCIONALMENTE
Lo ena Rod íguez Ma ínez
ESCUELA DE DOCTORADO INTERNACIONAL DE LA UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE COMPOSTELA
PROGRAMA DE DOCTORADO EN MEDICINA MOLECULAR
SANTIAGO DE COMPOSTELA
2022
DECLARACIÓN DE LA AUTORA DE LA TESIS
D./Dña. Lo ena Rod íguez Ma ínez
Tí ulo de la esis: Análisis en la a i is euma oide de an icue pos a ípicos en e a p o eínas
modi icadas pos aduccionalmen e
P esen o mi esis, siguiendo el p ocedimien o adecuado al Reglamen o y decla o que:
1) La esis aba ca los esul ados de la elabo ación de mi abajo.
2) De se el caso, en la esis se hace e e encia a las colabo aciones que u o es e abajo.
3) Con i mo que la esis no incu e en ningún ipo de plagio de o os au o es ni de abajos
p esen ados po mí pa a la ob ención de o os í ulos.
4) La esis es la e sión de ini i a p esen ada pa a su de ensa y coincide la e sión imp esa con
la p esen ada en o ma o elec ónico-
Y me comp ome o a p esen a el Comp omiso Documen al de Supe isión en el caso que el o iginal
no es é deposi ado en la Escuela.
En San iago de Compos ela, 22 de no iemb e de 2021.
Fdo. Lo ena Rod íguez Ma ínez

AUTORIZACIÓN DEL DIRECTOR / TUTOR DE LA TESIS
Análisis en la a i is euma oide de an icue pos a ípicos en e a p o eínas
modi icadas pos aduccionalmen e
D. An onio González Ma ínez-Ped ayo
Dª. Celia Ma ía Pombo Ramos
INFORMAN:
Que la p esen e esis, se co esponde con el abajo ealizado po Dª. Lo ena Rod íguez Ma ínez,
bajo mi di ección/ u o ización, y au o izo su p esen ación, conside ando que eúne los equisi os
exigidos en el Reglamen o de Es udios de Doc o ado de la USC, y que como di ec o de es a no
incu e en las causas de abs ención es ablecidas en la Ley 40/2015.
De acue do con lo indicado en el Reglamen o de Es udios de Doc o ado, decla a ambién que la
p esen e esis doc o al es idónea pa a se de endida en base a la modalidad de Monog á ica con
ep oducción de publicaciones, en los que la pa icipación de la doc o anda ue decisi a pa a su
elabo ación y las publicaciones se ajus an al Plan de In es igación.
En San iago de Compos ela, 19 de no iemb e de 2021
Fdo. An onio González Ma ínez-Ped ayo Fdo. Celia Ma ía Pombo Ramos
(di ec o ) ( u o a)
DECLARACIÓN DE CONFLICTOS DE INTERÉS
D./Dña. Lo ena Rod íguez Ma ínez
Tí ulo de la esis: Análisis en la a i is euma oide de an icue pos a ípicos en e a p o eínas
modi icadas pos aduccionalmen e
Decla o que no engo ningún con lic o de in e és en elación con es a esis doc o al.
En San iago de Compos ela, 22 de no iemb e de 2021.
Fdo. Lo ena Rod íguez Ma ínez
RESUMEN
La a i is euma oide es una en e medad muy compleja y he e ogénea que a pesa de una
in es igación in ensa sigue p esen ando muchas incógni as. Aquí, se ha a ado de esol e
algunas de las p egun as pendien es en elación con los au oan icue pos, en pa icula los
au oan icue pos que no se analizan en la clínica dia ia y que no es án bien ca ac e izados po
lo que se pueden denomina a ípicos. Es os an icue pos a ípicos siemp e se es udian
compa ados y elacionados con los an icue pos ípicos de la AR: el ac o euma oide y los
an icue pos an i-CCP. Es o es así po que los dos ipos de an icue pos es án muy bien
es ablecidos en la clínica como bioma cado es y se conoce bien su e olución y elación con la
pa ogenia de la AR. El es que ha mos ado más alo an o como bioma cado como en la
comp ensión de la en e medad ha sido el de an icue pos an i-CCP. Es e ensayo con iene una
ein ena de pép idos in en ando cub i odo el epe o io de an icue pos an i-p o eínas
ci ulinadas especí icos de la AR. El descub imien o de es os an icue pos ue el o igen de la
idea de que las modi icaciones pos aduccionales de las p o eínas podían se au oan ígenos
especí icamen e en los pacien es con AR. Una hipó esis que se ha con i mado al demos a de
o ma consis en e que hay o os an icue pos como los di igidos a las p o eínas ca bamiladas o
los pép idos ace ilados que es án p esen es en una acción signi ica i a de pacien es con AR
y son especí icos de la en e medad. Sin emba go, quedan dudas sin esol e en elación con
las p o eínas ci ulinadas, la u ilidad de los an icue pos an i-pép idos ace ilados y la ex ensión
de las modi icaciones pos aduccionales que son au oan ígenos especí icos de la AR. En es e
p oyec o hemos a ado de esponde a las cues iones an e io es pa a de e mina la ele ancia
de la his ona H4 ci ulinada como an ígeno de los an icue pos an i-p o eínas ci ulinadas,
conoce la u ilidad de los an icue pos an i-pép idos ace ilados pa a clasi ica pacien es con
a i is de ecien e comienzo como AR y de ini mejo los an icue pos a ípicos en e a
modi icaciones pos aduccionales con ele ancia en la AR.
La p ime a duda, e e ida a la na u aleza de las p o eínas ci ulinadas, es á sin esol e pues
aunque hay indicios que señalan a a ias p o eínas ci ulinadas como dianas no se conoce ni
su epe o io, ni su impo ancia ela i a. Po ello, hemos analizado un nue o au oan ígeno
ci ulinado p opues o con ca ac e ís icas muy llama i as, buscando los an icue pos que
econocen un pép ido ci ulinado de i ado de la his ona H4 (an i-cH4/39-40). Hemos
obse ado una p e alencia supe io a la de los an icue pos di igidos en e a o as
especi icidades inas ci ulinadas. Con es e esul ado con i mamos la inmunodominancia de
los an icue pos an i-cH4/39-40 en el epe o io o al de an icue pos an i-p o eínas ci ulinadas,
aunque no has a el ex emo de que los an icue pos an i-cH4/39-40 y los an i-CCP sean
eac i idades equi alen es. También hemos encon ado una asociación signi ica i a de los
an icue pos an i-cH4/39-40 con las e osiones independien e de los an icue pos an i-CCP y
con el alelo de iesgo de PTPN22, po lo que es posible que los an icue pos an i-cH4/39-40
engan una elación independien e con la pa ogenia y la e iología de la AR.
O a cues ión analizada es la u ilidad de los an icue pos an i-pép idos ace ilados pa a
clasi ica a los pacien es como AR, ya que exis en e idencias an o a a o como en con a.
Nues a con ibución ha consis ido en e alua los an icue pos an i-pép idos ace ilados
(AAPA), conc e amen e los que econocen la lisina (an i-AcLys) y la o ni ina (an i-AcO n)
ace iladas, en un es udio longi udinal de 1062 pacien es con a i is de ecien e comienzo del
Hospi al Uni e si a io La Paz y del Hospi al Uni e si a io La P incesa, ambos en Mad id, y
que ue on seguidos du an e dos años. Los esul ados mues an que los dos AAPA p esen an

un alo in e io al del FR y los ACPA en la clasi icación de los pacien es como AR. Además,
la inclusión indi idual de los AAPA en los c i e ios ACR/EULAR 2010 no mejo a la
clasi icación. En cambio, as conside a la iple posi i idad pa a los an icue pos an i-AcO n,
el FR y los ACPA hemos obse ado una mejo ía en la clasi icación incluso mayo que la que
se ob iene con la iple conco dancia conside ando los an icue pos an i-Ca P. Es a es la
p ime a e idencia con incen e de que los an icue pos an i-AcO n p esen an alo como
bioma cado cuando se conside an en conco dancia con FR y ACPA, esul ado que e ue za
la idea de inclui la iple posi i idad en los c i e ios de clasi icación.
O a pa e del es udio ha buscado de ini el epe o io de an icue pos a ípicos en e a
modi icaciones pos aduccionales. En es a cues ión hemos di e enciado po un lado los
an icue pos en e a aduc os de malondialdehído-ace aldehído (an i-MAA) o de
malondialdehído (an i-MDA), y po o o los an icue pos an i-p o eínas ca boniladas, an i-
p o eínas ni adas y an i-p o eínas homocis einiladas. En elación con los p ime os, hemos
de ec ado la p esencia de an icue pos an i-MAA y an i-MDA de di e en es iso ipos en los
pacien es con AR. Sin emba go, no hemos obse ado la ex ao dina ia sensibilidad que se
había desc i o en dos de los abajos p e ios pa a el conjun o de los pacien es y,
especialmen e, en los pacien es se onega i os, sin FR y sin ACPA. Es e esul ado, sumado a
su al a de especi icidad po la AR, cues iona la u ilidad de los an icue pos an i-MAA y an i-
MDA como bioma cado es diagnós icos. Nues os esul ados ambién mos a on la p ime a
e idencia de la independencia en es ado y en ni eles en e es os dos ipos de an icue pos
ob enida de su e aluación en los mismos pacien es. En cuan o al segundo g upo de
an icue pos analizados, solo hemos de ec ado eac i idad especí ica en e a colágeno ipo II
modi icado con ibosa, uno de los dos ipos de an icue pos an i-p o eínas ca boniladas
analizados. Como la eac i idad de ec ada ue muy baja y los análisis pa a an icue pos an i-
colágeno II ca bonilado con ácido hipoclo oso, an i-p o eínas ni adas y an i-p o eínas
homocis einiladas no han de ec ado eac i idad especí ica en nues os pacien es con AR,
concluimos que es as modi icaciones pos aduccionales no se pueden conside a como
au oan ígenos en la AR.
Conjun amen e, los hallazgos de es e p oyec o e ue zan la ele ancia de las his onas como
au oan ígenos ci ulinados en la AR, iden i ican a los an icue pos an i-AcO n como los AAPA
con mayo u ilidad como bioma cado es pa a la clasi icación de pacien es, mues an que los
an icue pos an i-MAA y an i-MDA son dos sis emas de an icue pos independien es que
ca ecen de u ilidad como bioma cado es, y con ibuyen a de ini mejo el pa ón de
an icue pos en e a modi icaciones pos aduccionales que son ele an es en la AR, en e los
que no se encuen an los an icue pos an i-p o eínas ca boniladas, an i-p o eínas ni adas y
an i-p o eínas homocis einiladas.
ÍNDICE
ABREVIATURAS ............................................................................................................ 1
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 7
1. LA ARTRITIS REUMATOIDE.QUÉ ES.............................................................................. 9
2. ETIOLOGÍA DE LA ARTRITIS REUMATOIDE.............................................................. 11
2.1. FACTORES GENÉTICOS ................................................................................................ 11
2.1.1. HLA ........................................................................................................................ 11
2.1.2. PTPN22 .................................................................................................................. 13
2.2. FACTORES AMBIENTALES ............................................................................................ 13
2.2.1. TABACO .................................................................................................................. 13
2.2.2. MUCOSAS ................................................................................................................ 14
3. PAPEL PATOGÉNICO DE LOS AUTOANTICUERPOS EN LA AR .............................. 16
3.1. AUTOINMUNIDAD HUMORAL EN LA ETAPA ASINTOMÁTICA DE LA AR ........................ 16
3.2. PROGRESIÓN RADIOLÓGICA ........................................................................................ 18
4. BIOMARCADORES DE DIAGNÓSTICO Y CLASIFICACIÓN ..................................... 19
5. BIOMARCADORES DE PRONÓSTICO ........................................................................... 23
6. SISTEMAS DE AUTOANTICUERPOS EN LA AR .......................................................... 25
6.1. FACTOR REUMATOIDE ................................................................................................. 27
6.2. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS CITRULINADAS .......................................................... 27
6.3. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS CARBAMILADAS ........................................................ 28
6.4. ANTICUERPOS ANTI-PÉPTIDOS ACETILADOS ................................................................ 28
6.5. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO-ACETALDEHÍDO .............. 30
6.6. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO ........................................ 32
6.7. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS CARBONILADAS ................................................. 32
6.8. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS NITRADAS ................................................................. 33
6.9. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS ................................................ 34
OBJETIVOS...................................................................................................................... 37
MATERIAL Y MÉTODOS ....................................................................................... 41
1. MUESTRAS DE PACIENTES Y CONTROLES ........................................................ 43
1.1. PACIENTES CON ARTRITIS DE RECIENTE COMIENZO ................................................. 43
1.2. PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE TEMPRANA ESTUDIADOS
TRANSVERSALMENTE ......................................................................................................... 43
1.3. PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE ESTABLECIDA ............................................ 43
1.4. CONTROLES ............................................................................................................. 44
2. CONSIDERACIONES ÉTICAS ................................................................................... 44
3. OBTENCIÓN DE PROTEÍNAS Y PÉPTIDOS MODIFICADOS
POSTRADUCCIONALMENTE .......................................................................................... 45
3.1. SÍNTESIS DE PÉPTIDOS CITRULINADOS Y NATIVOS ................................................... 46
3.2. OBTENCIÓN DE PÉPTIDOS ACETILADOS .................................................................... 46
3.3. GENERACIÓN DE ADUCTOS OXIDADOS CON MALONDIALDEHÍDO ............................. 47
3.4. GENERACIÓN DE ESPECIES CARBONILADAS DE COLÁGENO TIPO II .......................... 48
3.5. GENERACIÓN DE PROTEÍNAS NITRADAS ................................................................... 49
3.6. SÍNTESIS DE PÉPTIDOS NITRADOS Y NATIVOS ........................................................... 49
3.7. GENERACIÓN DE PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS ................................................. 51
4. VERIFICACIÓN DE LA MODIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y PÉPTIDOS ........... 51
4.1. VERIFICACIÓN DE LOS PÉPTIDOS SINTETIZADOS ...................................................... 53
4.2. VERIFICACIÓN DE LA ADUCCIÓN CON MALONDIALDEHÍDO Y ACETALDEHÍDO ......... 53
4.3. COMPROBACIÓN DE LA CARBONILACIÓN CON HOCL Y RIBOSA ................................ 55
4.4. VERIFICACIÓN DE LA NITRACIÓN CON PEROXINITRITO DE SODIO ............................. 56
4.5. EVALUACIÓN DE LA HOMOCISTEINILACIÓN CON HIDROCLORURO DE
L-HOMOCISTEÍNA TIOLACTONA .......................................................................................... 57
5. DETERMINACIÓN DE AUTOANTICUERPOS CLÁSICOS DE LA AR:
FACTOR REUMATOIDE Y ANTICUERPOS FRENTE A PÉPTIDOS CÍCLICOS
CITRULINADOS ................................................................................................................. 58
6. DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS FRENTE A NUEVAS
MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES ................................................................ 58
6.1. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS CARBAMILADAS ............................................. 61
6.2. ANTICUERPOS FRENTE A ANTÍGENOS CITRULINADOS ESPECÍFICOS .......................... 61
6.3. ANTICUERPOS FRENTE A PÉPTIDOS ACETILADOS ..................................................... 62
6.4. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO-ACETALDEHÍDO ........... 62
6.5. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO ..................................... 63
6.6. ANTICUERPOS FRENTE A ESPECIES CARBONILADAS DE COLÁGENO TIPO II .............. 63
6.7. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS NITRADAS ....................................................... 63
6.8. ANTICUERPOS FRENTE A PÉPTIDOS NITRADOS ......................................................... 64
6.9. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS ..................................... 64
7. GENOTIPADO ............................................................................................................. 64
8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO .......................................................................................... 65
8.1. ANÁLISIS DESCRIPTIVO ........................................................................................... 65
8.2. ANÁLISIS DE COMPONENTES PRINCIPALES ............................................................... 65
8.3. ANÁLISIS DE REGRESIÓN ......................................................................................... 66
8.4. ANÁLISIS DEL RENDIMIENTO DIAGNÓSTICO ............................................................. 67
8.5. ANÁLISIS DE LA MORTALIDAD DE LOS CONTROLES SANOS ...................................... 67
RESULTADOS ................................................................................................................ 71
CAPÍTULO 1. EVALUACIÓN DE LA PROPUESTA INMUNODOMINANCIA DE UN
PÉPTIDO CITRULINADO DE LA HISTONA H4 EN LOS PACIENTES CON AR QUE
TIENEN ANTICUERPOS ANTI-CCP ................................................................................ 73
1.1. ANTICUERPOS FRENTE A ESPECIFICIDADES FINAS CITRULINADAS EN PACIENTES CON
AR Y CONTROLES ............................................................................................................... 75
1.2. RELACIÓN ENTRE LOS AUTOANTICUERPOS ANTI-CH4/39-40 Y OTROS ANTICUERPOS
FRENTE A ESPECIFICIDADES FINAS CITRULINADAS .............................................................. 76
1.3. RELACIÓN DE LOS ANTICUERPOS FRENTE A PÉPTIDOS CITRULINADOS CON
CARACTERÍSTICAS DE LA AR .............................................................................................. 80
CAPÍTULO 2. POTENCIAL PARA UNA MEJOR CLASIFICACIÓN DE LOS
PACIENTES CON EA CON LOS ANTICUERPOS ANTI-PÉPTIDOS ACETILADOS .. 85
2.1. PREVALENCIA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-PÉPTIDOS ACETILADOS EN LOS PACIENTES
CON EA .............................................................................................................................. 87
2.2. RELACIÓN ENTRE LOS AUTOANTICUERPOS .............................................................. 92
2.3. PARÁMETROS DIAGNÓSTICOS DE LOS AAPA .......................................................... 93
2.4. MEJORA DE LA CLASIFICACIÓN SEROLÓGICA BASADA EN LA CONCORDANCIA DE
ANTICUERPOS ..................................................................................................................... 96
2.5. MEJORA DE LA CLASIFICACIÓN DE LA AR CON LOS ANTICUERPOS ANTI-ACORN .... 97
CAPÍTULO 3. PRESENCIA DE ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS OXIDADOS
CON MALONDIALDEHÍDO EN EL SUERO DE PACIENTES CON AR
ESTABLECIDA ................................................................................................................. 101
3.1. VERIFICACIÓN DE LA FORMACIÓN DE ADUCTOS DE MAA ..................................... 103
3.2. ANTICUERPOS ANTI-MAA EN PACIENTES CON AR Y CONTROLES ......................... 105
3.3. ANTICUERPOS ANTI-MAA DERIVADOS DE DOS PREPARACIONES DIFERENTES ....... 109
3.4. ANTICUERPOS ANTI-MDA EN PACIENTES CON AR Y CONTROLES ......................... 110
3.5. RELACIÓN ENTRE LOS ANTICUERPOS ANTI-MAA Y ANTI-MDA ............................ 113
3.6. RELACIÓN DE LOS ANTICUERPOS ANTI-MAA Y ANTI-MDA CON LAS
CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS Y SEROLÓGICAS ................................................................... 116
CAPÍTULO 4. PRESENCIA DE ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS
CARBONILADAS, NITRADAS Y HOMOCISTEINILADAS EN PACIENTES CON AR
TEMPRANA Y ESTABLECIDA .......................................................................................... 119
4.1. VERIFICACIÓN DE LA CARBONILACIÓN DE CII Y BSA ........................................... 121
4.2. VERIFICACIÓN DE LA NITRACIÓN ........................................................................... 123
4.3. VERIFICACIÓN DE LA HOMOCISTEINILACIÓN ......................................................... 125
4.4. PREVALENCIA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-CII CARBONILADO EN PACIENTES CON
AR TEMPRANA ................................................................................................................. 125
4.5. PREVALENCIA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS/PÉPTIDOS NITRADOS EN
PACIENTES CON AR ESTABLECIDA.................................................................................... 128
4.6. PREVALENCIA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS EN
PACIENTES CON AR ESTABLECIDA.................................................................................... 130
4.7. RELACIÓN DE LOS ANTICUERPOS ANTI-CII CARBONILADO CON EL
TRATAMIENTO .................................................................................................................. 132
DISCUSIÓN .................................................................................................................... 135
1. LOS ANTICUERPOS ANTI-cH4/39-40 MUESTRAN ELEVADA CONCORDANCIA
CON EL ENSAYO DE ANTI-CCP2 PERO NO SUFICIENTE COMO PARA
EXPLICARLO O REEMPLAZARLO .................................................................................. 139
2. VALOR DE LOS ANTICUERPOS ANTI-AcO n PARA MEJORAR LA
CLASIFICACIÓN DE LOS PACIENTES CON EA ............................................................ 145
3. POTENCIAL DE LOS ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS PROTEICOS
DERIVADOS DE LA OXIDACIÓN CON MALONDIALDEHÍDO EN EL ESTUDIO DE
LOS PACIENTES CON AR .................................................................................................. 149
4. RELEVANCIA DE LOS ANTICUERPOS FRENTE A ANTÍGENOS CARBONILADOS,
NITRADOS Y HOMOCISTEINILADOS EN PACIENTES CON AR ............................... 155
CONCLUSIONES ........................................................................................................ 167
BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................... 171
ANEXOS ........................................................................................................................... 199

ABREVIATURAS
1
ABREVIATURAS
1H-RMN
esonancia magné ica nuclea de p o ón
3-NT
3-ni o i osina
3-NT-pep
pép idos ni ados
3-NT-PS
p o eínas sino iales ni adas
AAPA
an icue pos an i-p o eínas/pép idos ace ilados
Ab
an icue po
Abs.máx
abso bancia máxima de medición
ACP
análisis de componen es p incipales
ACPA
an icue pos an i-p o eínas ci ulinadas
ACR
colegio ame icano de euma ología
AGEs
p oduc os de glicación a anzados
AIC
C i e io de In o mación de Akaike
AI
a i is indi e enciada
AMPA
an icue pos en e a p o eínas modi icadas pos aduccionalmen e
an i-AcLys
an icue pos en e a un pép ido de i ado de la imen ina mu ada
ci ulinada con lisina ace ilada
an i-AcO n
an icue pos en e a un pép ido de i ado de la imen ina mu ada
ci ulinada con o ni ina ace ilada
an i-Ca bo
an icue pos an i-p o eínas ca boniladas
an i-Ca P
an icue pos an i-p o eínas ca bamiladas
an i-CCP
an icue pos an i-pép idos cíclicos ci ulinados
an i-cH4/39-40
an icue pos en e a un pép ido de la his ona H4 ci ulinado en las
posiciones 39 y 40
an i-Hci
an icue pos an i-p o eínas homocis einiladas
an i-MAA
an icue pos en e a aduc os de malondialdehído-ace aldehído
an i-MDA
an icue pos en e a aduc os de malondialdehído
an i-Ni a
an icue pos an i-p o eínas/pép idos ni ados
AP
os a asa alcalina
AR
a i is euma oide
AUC
á ea bajo la cu a
AUC
á ea bajo la cu a
BCR
ecep o de lin oci os B
BSA
albúmina sé ica bo ina
Lo ena Rod íguez Ma ínez
2
CaFBS
sue o bo ino e al ca bamilado
Ccd.
conco dancia
CCP
pép idos cíclicos ci ulinados
CDAI
índice clínico de ac i idad de la en e medad
CEIC
comi é é ico de in es igación clínica
CII
colágeno ipo II
CTR
con ol
DAS28
índice de ac i idad de la en e medad
DNPH
dini o enilhid azina
DS
des iación es ánda
EA
a i is de ecien e comienzo
EC
epí opo compa ido
EIRA
epidemiological in es iga ion o heuma oid a h i is
ELISA
ensayo po inmunoabso ción ligado a enzima
EULAR
liga eu opea con a el euma ismo
FAME
á macos modi icado es de la en e medad
FBS
sue o bo ino e al
Fc
agmen o c is alizable
FcγR
ecep o Fc gamma
F
elación de en es
FR
ac o euma oide
GLI-CII
colágeno ipo II bo ino glicado
HAQ
cues iona io de e aluación de salud
Hci-PS
p o eínas sino iales homocis einiladas
hexil-MAA
1-hexil-4-me il-1,4-dihid o-3,5-pi idindica boxaldeído
HLA
an ígeno leucoci a io humano
HLA-DRB1
cadena be a 1 de la molécula HLA-DR
HOCl
ácido hipoclo oso
HOCl-CII
colágeno ipo II bo ino ca bonilado con ácido hipoclo oso
HPLC
c oma og a ía líquida de al a esolución
HRP
pe oxidasa de ábano
HSA
albúmina sé ica humana
IC
inmunocomplejo
ABREVIATURAS
3
IC 95%
in e alo de con ianza del 95%
IgA
inmunoglobulina del iso ipo A
IgG
inmunoglobulina del iso ipo G
IgM
inmunoglobulina del iso ipo M
IL-17F
in e leuquina 17F
IL-6
in e leuquina 6
IQR
ango in e cua ílico
L-Hci- iolac ona
hid oclo u o de L-homocis eína iolac ona
LPO
pe oxidación lipídica
m/z
elación masa/ca ga
MAA-HSA
aduc os de malondialdehído-ace aldehído de albúmina humana
MCV
imen ina mu ada ci ulinada
MDA-BSA
aduc os de malondialdehído de albúmina bo ina
MDS
escalado mul idimensional
MPO
mielope oxidasa
NaOCl
hipoclo i o de sodio
NaONO2
Pe oxini i o de sodio
NET
ampas ex acelula es de neu ó ilos
OCl-
anión hipoclo i o
OD
densidad óp ica
OEA
o as a i is de ecien e comienzo
OR
odds a io
PAD
pep idil a ginina deiminasa
PCR
p o eína C eac i a
PCR
eacción en cadena de la polime asa
PEARL
egis o de a i is emp ana del Hospi al Uni e si a io La P incesa
pNPP
p-ni o enil os a o
PS
p o eínas sino iales
PTM
modi icación pos aduccional
PTP
p oduc os de ipo pen osidina
PTPN22
gen de la p o eína i osina os a asa 22
ROC
cu a ope a i a del ecep o
RV-
azón de e osimili ud nega i a
Lo ena Rod íguez Ma ínez
4
RV+
azón de e osimili ud posi i a
SDAI
índice simpli icado de ac i idad de la en e medad
SDS-PAGE
elec o o esis en gel de poliac ilamida y dodecilsul a o de sodio
SEM
e o es ánda de la media
SNP
polimo ismo de nucleó ido único
TCR
ecep o de lin oci os T
TMB
3,3',5,5'-Te ame ilbencidina
TNF-α
ac o de nec osis umo al α
TMS
Te ame ilsilano
UA
unidades a bi a ias
VAMC
Ve e ans A ai s Medical Cen e s
VARA
Ve e ans A ai s Rheuma oid A h i is
VPN
alo p edic i o nega i o
VPP
alo p edic i o posi i o
VSG
elocidad de sedimen ación globula
ε
coe icien e de ex inción mola
λ máx.em.
longi ud de onda de máxima emisión
λexc
longi ud de onda de exci ación
INTRODUCCIÓN
11
de ine un subg upo de pacien es denominados se oposi i os que p esen an un eno ipo más
g a e de AR en compa ación con los pacien es se onega i os que ca ecen de ambos
an icue pos. Los ACPA y el FR son los dos ipos de an icue pos más es udiados en elación
con la AR y exis e una ex ensa bibliog a ía con e idencias con incen es de su ele ancia en la
en e medad y de su u ilidad como bioma cado es, cues iones que se comen a án más adelan e.
Además de los ACPA, se han desc i o o os sis emas de an icue pos di igidos en e a PTM.
Algunos han sido muy bien es udiados como los an icue pos an i-p o eínas ca bamiladas
(an i-Ca P) 43. O os ya se han con i mado de una o ma su icien e pe o oda ía no se ha
de inido su luga en la en e medad como los an icue pos an i-pép idos/p o eínas ace iladas
(AAPA) 44, los an icue pos en e a aduc os de malondialdehído-ace aldehído (an i-MAA) 32,
y los an icue pos en e a aduc os de malondialdehído (an i-MDA) 33, mien as que hay un
úl imo g upo que se han desc i o en algún es udio pe o oda ía no es án su icien emen e
con i mados como los an icue pos an i-p o eínas ca boniladas (an i-Ca bo) 37, los an icue pos
an i-p o eínas ni adas (an i-Ni a) 35 y los an icue pos an i-p o eínas homocis einiladas (an i-
Hci) 38. Si odo es e epe o io an amplio de au oan icue pos se con i ma, se á un e lejo de la
complejidad de la espues a inmune en la AR. Sin emba go, po el momen o se desconocen
muchos aspec os, incluyendo la necesidad de con i ma su p esencia y la especi icidad de su
asociación con la AR, y la posible elación con se e idad u o as ca ac e ís icas de la
en e medad. Tampoco conocemos cuáles son los ac o es e iológicos que p edisponen al
desa ollo de es os au oan icue pos a ípicos a di e encia de lo que ocu e con los ACPA, pa a
los que se conocen los ac o es gené icos y ambien ales que p edisponen a su desa ollo y que
se de alla án en el siguien e apa ado.
2. ETIOLOGÍA DE LA ARTRITIS REUMATOIDE
En la e iología de la AR pa icipan an o ac o es gené icos como ambien ales, aunque los
mecanismos que desencadenan la en e medad se desconocen po el momen o. Es posible que
los mecanismos in oluc ados en la apa ición de la AR se oposi i a y se onega i a sean
di e en es ya que los ac o es de iesgo gené icos y ambien ales que p edisponen al desa ollo
de la AR se oposi i a di ie en de los ac o es que p edisponen hacia la o ma se onega i a de
la en e medad 45–48. A con inuación se desc iben los ac o es de iesgo gené icos y
ambien ales más impo an es que se conocen de la AR.
2.1. FACTORES GENÉTICOS
2.1.1. HLA
La suscep ibilidad al desa ollo de la AR es á ue emen e in luenciada po ac o es
gené icos siendo el más impo an e el sis ema del an ígeno leucoci a io humano (HLA, human
leukocy e an igen) o complejo mayo de his ocompa ibilidad de clase II (MHC II, majo
his ocompa ibili y complex). La asociación más ue e con la AR se ha obse ado pa a las
posiciones de aminoácidos 11, 13, 71 y 74 de la cadena β de la molécula HLA-DR (HLA-
DRβ1) 49. El aminoácido que se encuen a en es as posiciones de e mina si la asociación es de
iesgo o de p o ección en e a la AR y di ie e en e la o ma se oposi i a y se onega i a 49,50.
Dos de esas posiciones, la 71 y la 74, se encuen an den o del epí opo compa ido (EC) que
hace e e encia a una ag upación de secuencias consenso de aminoácidos en las posiciones

Lo ena Rod íguez Ma ínez
12
70-74 de la molécula HLA-DRβ1, conc e amen e QRRAA, RRRAA y QKRAA 51. Es as
secuencias es án codi icadas po alelos pe enecien es p incipalmen e a los g upos *01 y *04,
aunque ambién es án incluidos algunos alelos de los g upos *10 y *14 51. En o al son 22 los
alelos iden i icados que codi ican pa a las secuencias del EC (Tabla 1). La iden i icación de
los aminoácidos en las posiciones 11, 13, 71 y 74 más asociados con la suscep ibilidad a la
AR concue da casi comple amen e con los alelos que codi ican el EC, luego solo supone un
e inamien o en la o ma de desc ibi la. Es os alelos p edisponen especí icamen e pa a el
desa ollo de la o ma ACPA posi i a 52–54.
Tabla 1. Alelos HLA-DRB1 que codi ican las secuencias de aminoácidos más comunes en las
posiciones 70-74 de la molécula HLA-DRβ1.
Posición de
aminoácidos
Alelos HLA-DRB1
70
71
72
73
74
EC
Q
K
R
A
A
*0401;*0409;*0413;*0416; *0421;*1419;*1421
Q
R
R
A
A
*0101;*0102;*0105;*0404;*0405;*0408;*0410;
*0419; *1402;*1406;*1409;*1413;*1417;*1420
R
R
R
A
A
*1001
No
EC
D
E
R
A
A
*0402;*0414;*0103;*1102;*1116;*1120;*1121;*1301;
*1302;*1304;*1308;*1315;*1317; *1319;*1322;*1416
Q
R
R
A
E
*0403;*0406;*0407;*0417;*0420
R
R
R
A
E
*09;*1401;*1404;*1405;*1407;*1408;*1410;
*1411;*1414;*1418
D
R
R
A
A
*0415;*0805;*11011;*11012;*11041;*11042; *1105;*1106;
*11081;*11082*1109;*1110;*1112; *1115;*1118;*1119;
*1122;*1201;*12021;*12022; *12031;*12032;*1305; *1306;
*1307;*1311;*1312; *1314;*1321;*1601;*1602;*1605
Q
A
R
A
A
*15;*1309
Q
K
R
G
R
*03; *0422;*1107
La suscep ibilidad hacia la AR no se es inge a los alelos del HLA-DRB1, sino que se han
iden i icado alelos en o as moléculas del HLA de clase II y de clase I: del HLA-A, HLA-B y
HLA-DP que es án asociados con la AR, aunque el e ec o de es as asociaciones con la AR
ACPA posi i a no es an ma cado 49,50. En el caso de la AR ACPA nega i a, el ac o gené ico
p edominan e es el HLA-B seguido del HLA-DP 50,55.
INTRODUCCIÓN
13
En elación con el es o de an icue pos en e a PTM, sólo se ha de inido una asociación
especí ica pa a los an icue pos an i-Ca P con el HLA-B, ya que la asociación con el HLA-DR
no se puede di e encia de la obse ada con los ACPA 56. Los ac o es de iesgo gené icos que
p edisponen a la p oducción de o os an icue pos en e a PTM elacionados con la AR
oda ía no se han iden i icado.
El HLA-DRB1 es el p incipal ac o gené ico que p edispone a la AR pe o po sí solo no
explica odo el componen e gené ico que con ibuye al desa ollo de la en e medad 57. Es a
obse ación ha mo i ado el es udio de ac o es gené icos de suscep ibilidad adicionales ue a
de la egión MHC llegando a iden i ica se más de 100 genes asociados con la AR, aunque con
un e ec o meno que el de la molécula HLA 58.
2.1.2. PTPN22
En e los ac o es de iesgo gené icos localizados ue a de la egión del MHC que
con ie en suscep ibilidad al desa ollo de la AR des aca el gen PTPN22, iden i icado como el
segundo más impo an e después del HLA-DRB1. Conc e amen e, el polimo ismo de
nucleó ido único (SNP, Single Nucleo ide Polymo phism) s2476601 de es e gen que codi ica
pa a la a ian e R620W de la p o eína os a asa de i osina no ecep o a de ipo 22 (PTPN22)
es el más ue emen e asociado con la AR 59, en especial con el eno ipo ACPA posi i o y con
un e ec o menos ma cado con el eno ipo ACPA nega i o 46,60,61.
La a ian e R620W p esen a una ac i idad os a asa al e ada espec o de la p o eína
na i a, pe o man iene la uncionalidad. Aunque el papel de es a a ian e en la suscep ibilidad
de la AR no es á comple amen e de inido, las e idencias ob enidas has a el momen o sugie en
que pod ía eje ce su e ec o a a és de a ios mecanismos complemen a ios 62. Po un lado,
la a ian e R620W aumen a ía la p oducción de ROS 63 y la NETosis 64, un p oceso de mue e
celula de los neu ó ilos en el que se libe an al medio ex acelula enzimas con capacidad
pa a gene a PTM 65,66. Po o o lado, es a a ian e R620W p omo e ía la expansión del
epe o io de células T y B au o eac i as en la pe i e ia al pe mi i que sob e i an a los
mecanismos de con ol de la ole ancia 67–69. Po el momen o, los an icue pos an i-Ca P han
sido los únicos apa e de los ACPA es udiados en elación con el polimo ismo PTPN22, pe o
no se ha de ec ado una asociación signi ica i a 70,71.
2.2. FACTORES AMBIENTALES
2.2.1. Tabaco
A la e iología de la AR con ibuye un componen e ambien al además de un componen e
gené ico. El ac o ambien al mejo es udiado y más econocido es el abaco. P incipalmen e
se asocia con la o ma se oposi i a de la AR 72,73. Se ha desc i o además una ue e
in e acción en e el abaco y los alelos del EC que po encia ía el iesgo de desa olla AR
ACPA posi i a en los pacien es umado es que ambién p esen an es os alelos 74,75.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
14
La elación del abaco con la AR se oposi i a se ha a ibuido especí icamen e a la
p esencia de ACPA. Sin emba go, a ios abajos ecien es han apo ado e idencias
con incen es que cues ionan la especi icidad de la asociación del abaco y los ACPA. Los
esul ados de es os abajos indican que el abaco se asocia con la p esencia conco dan e de
a ios au oan icue pos, especí icamen e FR, ACPA y an i-Ca P 47,48,76 y que cuando se
conside a únicamen e la posi i idad pa a un ipo de an icue po el abaco se asocia con la
p esencia de FR pe o no de ACPA 48,76. En o as palab as, el abaco p edispone
p incipalmen e al desa ollo de la AR ca ac e izada po la p esencia de múl iples
au oan icue pos más que a la AR ACPA posi i a. Es os hallazgos se suman al conjun o de
e idencias p e ias 77–82 que ponen en duda el modelo pa ogénico que elaciona el abaco con
los alelos de iesgo del EC y la p oducción de ACPA. Es e modelo p opone que la exposición
al humo del abaco p o oca la ci ulinación de p o eínas que son p esen adas en el con ex o
del EC con la consiguien e up u a de la ole ancia y p oducción de ACPA a ni el pulmona
83.
La ci ulinación de p o eínas no es la única PTM que puede e se po enciada po el
abaco. La ca bamilación de p o eínas ambién es á a o ecida po el abaquismo al aumen a
la disponibilidad del p ecu so iociana o necesa io pa a la eacción 84. De o ma análoga, la
ca bonilación, la ni ación o la aducción de p o eínas ambién pueden e se po enciadas po el
e ec o del humo del abaco, ya sea po su al o con enido de compues os eac i os o po su
capacidad pa a induci la p oducción de especies eac i as como HOCl, ONO2-, ace aldehído
y malondialdehído 84–88. A pesa de que el abaco es capaz de po encia di e sas PTM, su
elación con la p esencia de los an icue pos que econocen es as PTM ha sido poco es udiada
y cuando lo ha sido no pa ece es a asociado. Así, los an icue pos an i-Ca P no es án
asociados con el abaquismo 70,71. En el caso de los an icue pos an i-MAA, se ha obse ado
una asociación en e el iso ipo IgM y el abaquismo pe o únicamen e en los pacien es que
uman en el momen o del es udio 32. Sin emba go, es a asociación no se eplicó en un abajo
pos e io ealizado po los mismos au o es, siendo el iso ipo IgA el asociado con el
abaquismo 39. Po su pa e, los an icue pos an i-Hci no se asocia on con el hábi o abáquico
38, mien as que la elación con la p esencia de an icue pos an i-MDA, an i-Ca bo y an i-Ni a
no ha sido es udiada po el momen o.
2.2.2. Mucosas
Las mucosas han eme gido como un nue o ac o e iológico de la AR 89. La p incipal
e idencia que sugie e que la au oinmunidad en la AR se o igina en una localización di e en e
de las a iculaciones es la p esencia de ACPA, FR y an icue pos an i-Ca P en el sue o de
algunos pacien es años an es de que mani ies en sín omas a icula es 90,91. O as e idencias
que apoyan la idea an e io son la iden i icación del iso ipo IgA de ACPA y de FR, el
p incipal iso ipo p oducido en las mucosas 92, en la e apa p eclínica de la en e medad y su
asociación con el desa ollo de la AR 90,93,94. Los es udios se han cen ado en las mucosas
o al e in es inal en elación con la mic obio a, así como en la mucosa de las ías aé eas en
elación con el humo del abaco, el ac o ambien al más impo an e de la en e medad. Pa a
es a la hipó esis del pulmón como desencadenan e de la au oinmunidad en la AR se han
ealizado es udios en pacien es en iesgo de desa olla AR o con AR ecien e pe o sin
sín omas de a i is. Los esul ados de es os es udios han apo ado e idencias que apoyan la
hipó esis an e io . Una de ellas es la iden i icación de anomalías en la es uc u a pulmona en
INTRODUCCIÓN
15
pacien es ACPA y/o FR posi i os pe o sin a i is simila es a las que p esen an pacien es con
a i is 79. O a e idencia a a o es la p esencia de ni eles de ec ables de ACPA y FR en el
espu o inducido, pe o no en el sue o y el aumen o de los ni eles de ACPA en el espu o
inducido en compa ación con el sue o as no maliza po la can idad de Ig o al 82. Además,
se ha desc i o un aumen o de los ni eles de ACPA en mues as pulmona es espec o de los
ni eles sé icos en pacien es con AR de ecien e comienzo 80. Es os esul ados sugie en que la
p oducción de ACPA se inicia en el pulmón en la ase p eclínica de la AR y que pe sis e
du an e la e olución de la en e medad.
Como ya se ha comen ado, la exposición al abaco puede po encia la gene ación de
di e sas PTM sob e las p o eínas pulmona es más allá de la ci ulinación 95. La p esencia de
aduc os de MAA en mues as pulmona es de pacien es con AR concue da con una posible
p oducción de an icue pos an i-MAA a ni el pulmona 96. A pesa de las e idencias a a o
del pulmón como o igen de la p oducción de ACPA en la AR, ambién exis en e idencias en
con a. No odos los pacien es que desa ollan AR ACPA posi i a p esen an al e aciones en
los pulmones o ni eles de ec ables de ACPA o FR en luidos de mues as pulmona es ni
ienen un his o ial de exposición al abaco 79,80,82. Es os esul ados cues ionan el modelo
pa ogénico del pulmón como o igen de la au oinmunidad en la AR y sugie en que la up u a
de la ole ancia pod ía p oduci se en o as localizaciones.
La mucosa o al ambién se ha es udiado en elación con la e iología de la AR. Al igual
que se ha comen ado pa a el pulmón, las encías es án en con ac o di ec o con el humo del
abaco que p o oca la in lamación del ejido. Sin emba go, el én asis se ha si uado en la
elación en e pe iodon i is y AR ya que hay e idencias epidemiológicas de la asociación
en e las dos en e medades que, además, compa en ac o es de iesgo 97–100. También se ha
obse ado una asociación en e la p esencia de pe iodon i is y ACPA 101–103. Es a asociación
se ha hipo e izado que es a ía elacionada con que dos de las bac e ias implicadas en la
pa ogénesis de la pe iodon i is, conc e amen e Po phy omonas gingi alis (P.gingi alis) y
Agg ega ibac e ac inomyce emcomi ans (A. ac inomyce emcomi ans), son capaces de
p omo e la ci ulinación de p o eínas en las encías 104,105. Es a gene ación de au oan ígenos
ci ulinados pod ía desencadena la p oducción de ACPA en la mucosa o al dando luga al
inicio de la au oinmunidad en la AR 106. La ci ulinación no es la única PTM que se encuen a
aumen ada en los pacien es con pe iodon i is, sino que ambién se ha de ec ado un aumen o de
p o eínas ca bamiladas y modi icadas con MAA en compa ación con las encías de suje os
sanos 107,108. La p esencia de es as es PTM en las encías de los pacien es con pe iodon i is
concue da con el aumen o de la NETosis de ec ado en el mismo ejido 65,109, p oceso que es
capaz de p omo e la gene ación de di e en es PTM como ya se ha comen ado. Aunque es as
e idencias sugie en que la au oinmunidad en la AR pod ía o igina se en las encías como
consecuencia de la pe iodon i is, los esul ados de los abajos que han e aluado la elación
en e es as dos en e medades son inconsis en es con da os an o a a o como en con a 110 y
no pe mi en saca ninguna conclusión.
La mucosa in es inal ambién se ha p opues o como o igen de la au oinmunidad en la AR.
Es a hipó esis su ge de la al e ación del equilib io de la lo a in es inal (disbiosis) de ec ado
en los pacien es con AR en compa ación con suje os con ol 111–113. La causa de es e
desequilib io se ha a ibuido an o a un aumen o de la población de bac e ias po encialmen e
pa ogénicas114 como a una disminución de la población de bac e ias bene iciosas 115, aunque
las bac e ias implicadas en la disbiosis di ie en en e es udios. Po el momen o, las e idencias
Lo ena Rod íguez Ma ínez
16
que implican a la mucosa in es inal en la e iología de la AR son indi ec as o poco
concluyen es 89, po lo que son necesa ios más es udios que cla i iquen el papel del
mic obioma in es inal en el desa ollo de la au oinmunidad en la AR. Además, ninguno de los
es udios ha elacionado la disbiosis in es inal con la p oducción de au oan icue pos.
La implicación de las mucosas en la e iología de la AR oda ía no se ha de inido con
cla idad. En e las muchas posibilidades se incluyen el e ec o de las mucosas en la
di e enciación de las subpoblaciones de lin oci os T, la posibilidad de mime ismo molecula
en e las bac e ias y au oan ígenos y o as elacionadas con me aboli os bac e ianos y el
sis ema inmune inna o 116,117. Pe o ambién es posible que los ac o es ambien ales como el
abaco o la p esencia de bac e ias pa ogénicas p o oquen la in lamación del ejido pulmona ,
o al e in es inal y que como esul ado se gene en PTM que son econocidas po el sis ema
inmune de suje os suscep ibles iniciando la ase au oinmune de la AR. Sin emba go, oda ía
son muchas las incógni as que quedan po acla a como cuál es la localización en la que se
desencadena la p oducción de au oan icue pos en la AR y cuáles son los mecanismos
esponsables de di igi la espues a inmune a las a iculaciones.
3. PAPEL PATOGÉNICO DE LOS AUTOANTICUERPOS EN LA
AR
La p esencia de au oan icue pos no es su icien e pa a demos a que ienen una pa icipación
impo an e en la pa ogenia de la AR. Además, los au oan icue pos no son necesa ios en odos
los pacien es, pues hay una acción de pacien es que no ienen an icue pos y que,
indi idualmen e, son indis inguibles desde el pun o de is a clínico de los que los ienen. Sin
emba go, hay e idencias que indican que los au oan icue pos pod ían es a implicados. Su
p esencia en las ases iniciales de la AR en las que oda ía no exis e in lamación a icula se
in e p e a a a o de su papel pa ogénico. Además, las asociaciones desc i as pa a el FR y los
ACPA con el daño adiológico y el descub imien o de los mecanismos subyacen es e ue zan
la idea de que los au oan icue pos in e ienen ac i amen e en la pa ogenia de la AR. En las
siguien es secciones se desc iben con más de alle es os hallazgos.
3.1. AUTOINMUNIDAD HUMORAL EN LA ETAPA ASINTOMÁTICA DE LA AR
La AR es una en e medad con una e olución al amen e he e ogénea que puede p og esa de
o ma len a desde una e apa p eclínica asin omá ica hacia una sin omá ica sin p esencia de
a i is clínicamen e de ec able y inalmen e a una e apa clínica en la que ya se ha desa ollado
a i is. Cada una de es as ases del desa ollo de la AR se de inen empleando la e minología
es ablecida po la Liga Eu opea Con a el Reuma ismo (EULAR) pa a ob ene g upos
homogéneos de pacien es y así acili a la ep oducibilidad y la compa ación de los esul ados
en e es udios 118. En o al se han de inido 5 ases: ac o es de iesgo gené icos y ambien ales,
au oinmunidad sis émica asociada con la AR, sín omas en ausencia de a i is clínica, a i is
no clasi icable y inalmen e AR (Figu a 2). El p ime é mino hace e e encia a la ase en la
que los suje os p esen an una suscep ibilidad a desa olla AR debido a la p esencia de
ac o es de iesgo gené icos y ambien ales. Pos e io men e, apa ece la au oinmunidad

INTRODUCCIÓN
17
sis émica asociada con la AR en la que los indi iduos p esen an au oan icue pos pe o sin
signos ni sín omas a icula es 119. En la siguien e ase apa ecen los p ime os sín omas que
pueden consis i únicamen e en a algia, pe o no se obse a in lamación a icula
clínicamen e de ec able 120. A pesa de que no hay e idencia de a i is, en es a e apa puede
p oduci se la in il ación de células inmunes in lama o ias en la sino ia 121. A con inuación,
apa ecen las p ime as mani es aciones clínicas de a i is en los pacien es. Du an e el p ime
año de e olución desde la apa ición de a i is se habla de pacien es con a i is de ecien e
comienzo (EA) 122–125, aunque en algunos es udios el iempo de e olución de los pacien es
conside ados como EA se amplía has a los 2 años 126,127. Si los pacien es cumplen los c i e ios
de clasi icación de la AR 128 se les denomina como AR emp ana pa a dis ingui los de los que
ya ienen una AR es ablecida. La AR emp ana iden i ica pacien es con un iempo de
e olución meno de 6 meses según la de inición p opues a po el Colegio Ame icano de
Reuma ología (ACR) 129, aunque algunos abajos incluyen pacien es de inidos como AR
emp ana que p esen an iempos de e olución de has a 2 años 37,130.
Figu a 2. Fases del desa ollo de la AR. La imagen ep esen a las 5 ases de la e olución hacia AR
nomb adas según la e minología ecomendada po el EULAR jun o con los ac o es de iesgo de
desa olla AR asociados y los suje os que se encuen an en cada ase. El iesgo de AR en la p ime a
ase lo con ie en ac o es gené icos y ambien ales como el HLA, PTPN22, el abaco o la disbiosis en
las mucosas. En la segunda ase, la p esencia de los au oan icue pos FR y ACPA e leja el inicio de la
au oinmunidad sis émica. Los indi iduos que se encuen an en es as ases son asin omá icos. La
e ce a ase se de ine po la p esencia de sín omas en ausencia de a i is clínica: a algia con dolo
a icula . La cua a ase empieza con el inicio de la a i is. Mien as no es posible la clasi icación de
los pacien es se habla de pacien es con EA. La quin a ase se co esponde con pacien es que ya
cumplen los c i e ios clasi icación como AR. Imagen de au o ía p opia c eada con BioRende .com.
Los pacien es con EA o man un g upo he e ogéneo y solo una acción es án en una de las
ases de la AR. Po ello, es os pacien es p esen an una e olución muy a iable. En el caso
más a o able la in lamación puede esol e se de o ma espon ánea. O a posibilidad es que
la in lamación pe sis a pe o sin que los pacien es cumplan los c i e ios de clasi icación
es ablecidos pa a una o ma especí ica de a i is, en cuyo caso se dice que p esen an una
a i is indi e enciada (AI). Finalmen e, los pacien es pueden e oluciona hacia una
en e medad más de inida como la AR 131,132 pa a la que se han desa ollado c i e ios de
Lo ena Rod íguez Ma ínez
18
clasi icación especí icos. Iden i ica qué pacien es con EA desa olla án en el u u o AR es
complicado. Po un lado los sín omas clínicos que p esen an los pacien es con EA no son
especí icos de la AR, sino que se compa en con o as en e medades in lama o ias 1. Po o o
lado, la al a de p uebas diagnós icas supone una di icul ad añadida 133. También hay que
ene en cuen a que no odos los indi iduos que inalmen e desa ollan AR siguen el esquema
de ases de inido po el EULAR (Figu a 2) 118. Es e escena io an complejo hace necesa ia la
iden i icación de bioma cado es en las ases iniciales de la AR que pe mi an p edeci qué
pacien es an a desa olla AR con el iempo.
Los an icue pos, en conc e o el FR, los ACPA y los an i-Ca P, son excelen es candida os
pa a su uso como bioma cado es dado que los es se encuen an p esen es en las ases
iniciales de la AR. Se han encon ado an o en suje os asin omá icos has a una década an es la
apa ición de los p ime os sín omas clínicos 90,94,119,134–137, como en pacien es con a algia
90,136–139 y en pacien es con EA 140–142. O a ca ac e ís ica que compa en el FR, los ACPA y
los an icue pos an i-Ca P y que jus i ica su uso como bioma cado es es el aumen o que
expe imen an sus ni eles a medida que se p og esa hacia la AR, un aumen o que se e
in ensi icado dos años an es del inicio de la a i is 90,94,119,136. Du an e la e olución hacia la
AR se p oduce además la p opagación de epí opos de los ACPA, es deci , se expande el
pa ón de p o eínas ci ulinadas que pueden econoce es os an icue pos, mos ando una
expansión más ma cada de o ma pa alela al inc emen o de los í ulos 91,143–145. Po lo an o,
es os an icue pos se conside an ac o es de iesgo asociados a la AR de o ma que los suje os
que p esen an es os an icue pos ienen un iesgo mayo de desa olla AR en compa ación con
los indi iduos que ca ecen de ambos an icue pos 118 (Figu a 2).
O os an icue pos además del FR, los ACPA y los an i-Ca P es án p esen es en las e apas
p e ias al desa ollo de la AR, como los AAPA que se de ec an en pacien es con EA 44 o los
an icue pos an i-MAA p esen es en suje os asin omá icos que pos e io men e desa ollan AR
146. La p esencia de es os an icue pos en e a PTM en las ases iniciales de la AR indica que
pod ían se de u ilidad pa a iden i ica pacien es que an a e oluciona hacia AR. Sin
emba go, oda ía es necesa io con i ma la elación de los nue os an icue pos con la AR con
es udios independien es.
3.2. PROGRESIÓN RADIOLÓGICA
Los pacien es con AR desa ollan daño a icula y óseo de o ma p og esi a con
consecuencias cada ez más g a es a medida que a anza la en e medad y de o ma más
ma cada si no se adminis a a amien o. El daño a icula conlle a la apa ición de dolo ,
pé dida ósea, de o midades en las a iculaciones y inalmen e p o oca un al o g ado de
incapacidad ísica que a ec a nega i amen e a la calidad de ida de los pacien es 147. La
pé dida ósea en la AR es localizada y gene alizada. La pé dida local de hueso a ni el a icula
se denomina e osión ósea y se p oduce de o ma p e e en e en los si ios de con ac o di ec o
del hueso con la sino ia in lamada. Po su pa e, la pé dida de hueso gene alizada esul a en
una pé dida a ni el sis émico de densidad mine al ósea (DMO), lo que aumen a el iesgo de
ac u as y de os eopo osis 148.
En la sino ia in lamada se exp esan di e sos mediado es in lama o ios que al e an la
homeos asis del me abolismo óseo a o eciendo po un lado la di e enciación y la ac i ación
local de los os eoclas os y po o o la inhibición de los os eoblas os, lo que esul a en un
INTRODUCCIÓN
19
aumen o de la eso ción ósea 149–151. Además de la pa icipación de moléculas in lama o ias,
en la pé dida ósea ambién se han implicado a los au oan icue pos. Aunque los p ocesos
especí icos que inician y pe pe úan la des ucción ósea en la AR se desconocen po el
momen o149,152, se han p opues o dos posibles ías a a és de las cuales los an icue pos
pod ían eje ce su unción pa ogénica. En una, los an icue pos p omue en la di e enciación de
los p ecu so es de os eoclas os a os eoclas os madu os al in e acciona con p o eínas
ci ulinadas p esen es en la supe icie celula a a és de la egión de econocimien o
an igénico Fab, p o ocando un aumen o de la eso ción ósea an o in i o como in i o 153–
155. En la o a, la di e enciación a os eoclas os se induce as la in e acción de los ecep o es
FcγR exp esados en la supe icie de múl iples células incluyendo monoci os, que po encian la
in lamación, y los p ecu so es de os eoclas os con la egión Fc de los an icue pos que es án
o mando inmunocomplejos (IC) 156.
Las e osiones son el ipo de lesión más es udiada en elación con la AR. Su p esencia se
asocia con la posi i idad pa a el FR y con los ACPA, siendo es a asociación
signi ica i amen e supe io cuando se conside a la p esencia conco dan e de ambos
an icue pos espec o de la asociación que se ob iene de conside a cada an icue po
indi idualmen e 157. Es e hallazgo se ha explicado con una hipó esis que implica el
mecanismo de ac i ación de la os eoclas ogénesis a a és de los ecep o es pa a el Fc de las
inmunoglobulinas mencionado an es. Las señales de ac i ación son más in ensas y du ade as
cuando se p oduce en ec uzamien o de múl iples ecep o es Fc en la supe icie del
os eoclas o o del monoci o. A su ez, el en ec uzamien o se a o ece po la p esencia de
ag egados de IC. Los IC se o ma ían al uni se los ACPA con sus p o eínas diana y se
ag egan al uni se con el FR, ya que cada molécula de FR que puede econoce 5 moléculas de
IgG. Hay expe imen os in i o que apoyan es e mecanismo 158. El FR y los ACPA no solo
mues an una asociación con la p esencia de e osiones, sino que ambién mues an una
asociación con la p og esión hacia una a i is e osi a en es udios longi udinales, aunque aquí
el e ec o obse ado pa a los ACPA es mayo que pa a el FR 149,152. La ue e asociación del
FR y los ACPA con el daño óseo y la p og esión adiológica es una de las azones de que se
conside en bioma cado es de p edicción de una peo e olución de la AR y de que se
econozcan así po el EULAR 159.
La elación en e el daño adiológico y los nue os an icue pos en e a PTM desc i os en
la AR ha sido poco es udiada y p e ende amplia se como pa e del abajo de es e p oyec o.
4. BIOMARCADORES DE DIAGNÓSTICO Y CLASIFICACIÓN
La iden i icación p ecoz de pacien es con un al o iesgo de desa olla AR es de i al
impo ancia pa a su manejo clínico. Sin emba go, clasi ica a los pacien es en las e apas más
emp anas de su e olución esul a complicado debido a la al a de mani es aciones clínicas
disc imina o ias y p uebas diagnós icas 1,133. P ecisamen e du an e es as e apas iniciales en las
que se desa ollan los p ime os sín omas es donde el a amien o de los pacien es que
inalmen e se án clasi icados como AR apo a los mayo es bene icios 160,161. La necesidad de
iden i ica pacien es con AR en las ases iniciales pa a así inicia el a amien o lo an es
posible y mejo a su p onós ico impulsó la c eación de los nue os c i e ios de clasi icación de
la AR en el año 2010 po la ACR y po el EULAR 128. Es os c i e ios p escinden de las
Lo ena Rod íguez Ma ínez
20
ca ac e ís icas ípicas de una en e medad más es ablecida, como la p esencia de cambios
adiog á icos, incluidas en el c i e io de la ACR de 1987 cuyo obje i o e a di e encia los
pacien es con AR de o as en e medades eumá icas 162.
Los nue os c i e ios ACR/EULAR 2010 ponen más én asis en el diagnós ico p ecoz e
inco po an ca ac e ís icas p esen es en e apas emp anas de la en e medad a ibuyendo más
peso a cie as ca ac e ís icas sob e o as. Un ejemplo cla o es la pun uación asignada a la
se ología al y como se mues a en la Tabla 2, en la que se incluyen los au oan icue pos FR y
ACPA. La pun uación ecibida di ie e en unción de los í ulos de es os dos an icue pos 163.
Conc e amen e, los pacien es con í ulos al os de cualquie a de los dos an icue pos eciben 3
pun os mien as que los pacien es posi i os pe o con í ulos bajos eciben 2 pun os. Pa a
de e mina si el í ulo de un an icue po es al o o bajo se emplea como umb al el alo de 3
eces el lími e supe io no mal. Los í ulos al os es án po encima de ese alo mien as que
los í ulos bajos se conside an aquellos que es án po debajo de es e umb al pe o po encima
del lími e supe io no mal que de ine la posi i idad 164. La pun uación asignada a los
an icue pos ep esen a una acción impo an e de los 6 pun os o ales que se equie en pa a la
clasi icación como AR.
Tabla 2. C i e ios de clasi icación de la AR. A la izquie da se mues an los c i e ios de clasi icación
de 1987 y a la de echa los nue os c i e ios del 2010. Los eac an es de ase aguda son la p o eína C
eac i a (PCR) o la elocidad de sedimen ación globua (VSG).
C i e ios de Clasi icación de la AR
ACR 1987
ACR/EULAR 2010
1. Rigidez ma u ina: du ación ≥ 1
ho a an es de obse a mejo ía
1. A ec ación a icula
1 a iculación g ande: 0 pun os
2-10 a iculaciones g andes: 1 pun o
2. A i is en ≥ 3 a iculaciones
1-3 a iculaciones pequeñas: 2 pun os
4-10 a iculaciones pequeñas: 3 pun os
3. A i is en las a iculaciones de la
mano
> 10 a iculaciones pequeñas: 5 pun os
2. Se ología
4. A i is simé ica
FR y ACPA nega i os: 0 pun os
FR y/o ACPA posi i os bajos: 2 pun os
Los c i e ios 1-4 deben p esen a se
du an e ≥ 6 semanas.
FR y/o ACPA posi i os al os: 3 pun os
3. Reac an es de ase aguda
5. P esencia de nódulos euma oides
PCR o VSG no males: 0 pun os
PCR o VSG ele adas: 1 pun o
6. FR posi i o
4. Du ación de los sín omas
7. Cambios adiog á icos
< 6 semanas: 0 pun os
≥ 6 semanas: 1 pun o
AR si ≥ 4 c i e ios
AR si ≥ 6 pun os
INTRODUCCIÓN
27
6.1. FACTOR REUMATOIDE
El FR es un au oan icue po asociado con la AR que no es á di igido en e a una PTM, sino
que econoce las IgG a a és de la egión Fc 41. El iso ipo p edominan e de ec ado en el sue o
de los pacien es con AR es el IgM aunque ambién es án p esen es los iso ipos IgA e IgG 206.
El FR no es un an icue po de ec ado exclusi amen e en el sue o de pacien es con AR, sino
que se encuen a además en pacien es con o as en e medades au oinmunes o del ejido
conec i o y en suje os sanos, aunque con una p e alencia meno que en la AR, lo que se
aduce en una sensibilidad en o no al 70-90% 207 y una especi icidad del 85% 207. La ele ada
sensibilidad y especi icidad po la AR lo con ie en en un excelen e bioma cado de
diagnós ico mien as que su asociación con la p og esión adiológica y con una peo
e olución de la en e medad ha lle ado a su uso como bioma cado de p onós ico.
6.2. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS CITRULINADAS
La diana de los ACPA es la ci ulina 42 (Figu a 3) que su ge de la modi icación
pos aduccional de la a ginina en la secuencia pep ídica median e un p oceso denominado
ci ulinación y que es á ca alizado po las PAD 208. Los ACPA pueden econoce a ios
epí opos ci ulinados p esen es en di e en es egiones de la misma p o eína. Cada epí opo
ci ulinado se denomina especi icidad ina y en conjun o, con ibuyen al epe o io o al de
ACPA p esen e en los pacien es. Una acción muy impo an e de ese epe o io es lo que se
de ec a con las p uebas come ciales an i-CCP empleadas en la p ác ica clínica que incluyen
una ein ena de pép idos g acias a que exis e eac i idad c uzada en e dis in as
especi icidades inas 209–211. Se desconoce el conjun o o al de p o eínas ci ulinadas en e a
las que los pacien es con AR desa ollan ACPA, aunque el ib inógeno 212, la imen ina 213 y
la enolasa α 214 des acan en e las p o eínas ci ulinadas iden i icadas como po enciales
au oan ígenos. El pa ón de especi icidades inas que econocen los ACPA es al amen e
he e ogéneo 91,145,209 y su eac i idad se encuen a mayo i a iamen e en los pacien es ACPA
posi i os 209. Sin emba go, exis en pacien es que se de ec an como ACPA posi i os median e
el es an i-CCP pe o dan esul ados nega i os cuando se emplean como an ígenos
p o eínas/pép idos ci ulinados conc e os, lo que sugie e la exis encia de más au oan ígenos
ci ulinados 209.
Las his onas han su gido como nue os au oan ígenos en la AR. Es as p o eínas en su
e sión ci ulinada se de ec an en el ejido sino ial y en el líquido sino ial de pacien es con
AR 215–218. En es e pun o cabe des aca el abajo de Meng X y col. en el que las his onas
ci ulinadas ue on las p o eínas más ecuen emen e aisladas de los IC o mados po ACPA
p o enien es del líquido sino ial de pacien es con AR, especialmen e la his ona H4 (89%) 217.
La impo ancia de es e hallazgo eside en que de odos los au oan ígenos p opues os en la AR
has a el momen o, sólo la imen ina se aisló de los IC ob enidos de los líquidos sino iales en
es e abajo, aunque con una ecuencia conside ablemen e meno (5%) que la de las his onas.
Además, las his onas han sido iden i icadas como la diana p incipal de ACPA monoclonales
aislados de células B p o enien es de la sino ia de pacien es con AR 219. También se han
de ec ado ACPA di igidos en e a his onas ci ulinadas en el sue o de pacien es con AR,
an o en la ase p eclínica 91,220 como en la ase clínica de la en e medad 217,221–223 al igual que
se ha obse ado pa a los ACPA que econocen o as p o eínas ci ulinadas. Uno de los
esul ados más llama i os sob e la ele ancia de las his onas como au oan ígenos es la

Lo ena Rod íguez Ma ínez
28
ma cada inmunodominancia de los an icue pos que econocen un pép ido ci ulinado de i ado
de la his ona H4 (cH4/39-40) cuya p e alencia ue del 92 – 95% en los pacien es con AR
ACPA posi i os de dos colecciones di e en es 217, muy supe io a la desc i a pa a o os
au oan ígenos ci ulinados 209,224,225. Sin emba go, es a ecuencia an llama i a no ha sido
con i mada de o ma independien e. Tampoco se ha explo ado la posible asociación de los
an icue pos an i-cH4/39-40 con las ca ac e ís icas clínicas de la AR ni su elación con los
an icue pos an i-CCP ni con los an icue pos que econocen o as especi icidades inas
ci ulinadas a pesa de iden i ica se como un an icue po p edominan e. Todas es as cues iones
se abo da án en es e p oyec o de esis.
6.3. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS CARBAMILADAS
Los an icue pos an i-Ca P se de ec an con una sensibilidad ep oducible en coho es de
pacien es con AR de di e en e o igen, cuan i icada en o no al 30 – 40% 47,70,71,226,227 y
p esen an una ele ada especi icidad 228 . Sin emba go, la u ilidad de los an icue pos an i-Ca P
como bioma cado es en la AR no es á an cla a ya que se cues iona si añaden in o mación ú il
a la p opo cionada po el FR y los ACPA.
La diana de los an icue pos an i-Ca P es la homoci ulina (Figu a 3), un aminoácido que
su ge de la ca bamilación de p o eínas 43, una eacción no enzimá ica en la que el ciana o
(OCN-) in e acciona p e e en emen e con los g upos amino de las lisinas de las p o eínas pa a
o ma homoci ulina 229 O os aminoácidos y g upos uncionales son suscep ibles de
eacciona con el ciana o aunque en meno medida que la lisina 230,231. Las uen es isiológicas
de ciana o son la u ea y el iociana o (SCN-). El ciana o y la u ea se encuen an en equilib io
químico, po lo que un aumen o de la concen ación de u ea como el que se p oduce en los
pacien es u émicos con sínd ome enal c ónico 232 p o oca un aumen o en la concen ación de
ciana o. El iociana o ambién puede e se aumen ado po la die a y el abaco 229, lo que
a o ece su con e sión a ciana o a a és de la acción enzimá ica de la MPO 84 .
La homoci ulina econocida po los an icue pos an i-Ca P p esen a una ele ada simili ud
es uc u al con la ci ulina (Figu a 3). En is a de la homología en e homoci ulina y
ci ulina, no so p ende que los an icue pos an i-Ca P y los ACPA mues en un cie o ni el de
eac i idad c uzada 44,233,234. A pesa de ello, los an icue pos an i-Ca P con o man un sis ema
de au oan icue pos independien e de los ACPA como e idencian a ios abajos que mues an
que los ac o es de iesgo gené icos y ambien ales asociados con la AR an i-Ca P posi i a
di ie en de los asociados con la AR ACPA posi i a 56,70,71. Además, aunque los an icue pos
an i-Ca P se encuen an p e e en emen e en pacien es ACPA posi i os, su p esencia en
ap oximadamen e el 20% de los pacien es ACPA nega i os 43,70,137 e ue za la independencia
de los ACPA y los an icue pos an i-Ca P.
6.4. ANTICUERPOS ANTI-PÉPTIDOS ACETILADOS
Los AAPA econocen pép idos ace ilados en di e en es aminoácidos, en conc e o la lisina y la
o ni ina 44,235. La ace ilación es una eacción enzimá ica e e sible que in oduce un g upo
ace ilo en los aminoácidos, p e e en emen e en las lisinas, aunque o os esiduos que
con ienen aminas ambién son suscep ibles de modi ica se. A ni el isiológico la ace ilación
es á ca alizada po las ace il an e asas mien as que las deace ilasas ca alizan la eacción
INTRODUCCIÓN
29
in e sa 236. También puede p oduci se la ace ilación no enzimá ica de p o eínas en p esencia
de al as concen aciones de ace il coenzima A y a pH básico 237.
La de e minación de los AAPA se ha e aluado con un ELISA que emplea como an ígeno
un pép ido de i ado de la secuencia de la imen ina mu ada empleada en el ki MCV (Figu a
4) en el que la ci ulina en posición 7 se ha sus i uido po una lisina ace ilada (an i-AcLys) o
una o ni ina ace ilada (an i-AcO n) 44,235. Se han diseñado o os pép idos adicionales que
incluyen esas mismas PTM en la posición 2 del pép ido MCV, pe o la ace ilación en posición
7 es la que cap u a más eac i idad 130,235. Los an icue pos an i-AcLys p esen an ni eles bajos
de eac i idad c uzada con los ACPA y con los an icue pos an i-Ca P 44 a pesa de la al a
analogía es uc u al exis en e en e la lisina ace ilada, la ci ulina y la homoci ulina (Figu a
3), lo que indica que con o man un sis ema de au oan icue pos independien e. O a e idencia
a a o de la independencia de los AAPA es su p esencia en o no al 13 – 55% de pacien es
se onega i os 44,178,179,235.
Figu a 4. Pép idos ace ilados empleados como an ígenos pa a la de e minación de AAPA. La
ci ulina en posición 7 del pép ido MCV se ha sus i uido po una lisina ace ilada o po una o ni ina
ace ilada mien as que el es o de la secuencia es idén ica. En el pép ido MCV se mues a la es uc u a
del g upo amida p esen e en la ci ulina mien as que en los pép idos AcLys y AcO n se mues a la
es uc u a del g upo ace ilo. Los aminoácidos se ep esen an con el código de una le a excep o pa a la
o ni ina designada como O n 235 desde el ex emo amino e minal has a el C e minal. Los núme os
indican la posición de cada aminoácido en la secuencia del pép ido. MCV = pép ido de imen ina
mu ada ci ulinada, AcLys = pép ido con lisina ace ilada, AcO n = pép ido con o ni ina ace ilada,
H2N– = ex emo amino e minal, –OH = ex emo ca boxilo e minal. Imagen de au o ía p opia c eada
con BioRende .com.
Aunque los AAPA pa ecen se un nue o sis ema de an icue pos p esen es en la AR oda ía se
desconocen muchas de sus ca ac e ís icas, como las p o eínas endógenas ace iladas que
econocen, su elación con los ac o es gené icos de iesgo, su posible implicación en la
pa ogénesis de la en e medad, su ele ancia pa a el manejo de los pacien es o su u ilidad pa a
la clasi icación de la AR. Escla ece es a úl ima incógni a es uno de los obje i os p incipales
de es e p oyec o de esis.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
30
6.5. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO-ACETALDEHÍDO
Los an icue pos an i-MAA econocen aduc os de MAA gene ados po la oxidación no
enzimá ica de p o eínas con malondialdehído y ace aldehído. Es a modi icación ocu e
p incipalmen e en el g upo amina en posición ε de la lisina 238 y di ie en de los aduc os que se
o man en la eacción de cada aldehído po sepa ado 239. El análisis es uc u al y la
ca ac e ización química de los aduc os de MAA mues an que as la eacción in i o se
gene an dos es uc u as p edominan es (Figu a 5). Una de ellas es el compues o 4-me il-1,4-
dihid opi idina-3,5-dica baldehído ambién denominado aduc o MDHDC que esul a de la
eacción de dos moléculas de malondialdehído con una de ace aldehído y una lisina 240,241. El
anillo de pi idina le con ie e p opiedades luo escen es y su es uc u a cíclica le p opo ciona
una al a es abilidad. La o a es uc u a mayo i a ia es el compues o 2- o mil-3-
(alquilamino)bu anal o aduc o FAAB o mado a pa i de la eacción equimolecula de
malondialdehído con ace aldehído y una lisina (Figu a 5). Es e aduc o ca ece de p opiedades
luo escen es y es más lábil en compa ación con el aduc o MDHDC 241. La uen e isiológica
de malondialdehído y de ace aldehído es la LPO de ácidos g asos 242 ya que el
malondialdehído puede descompone se de o ma espon ánea pa a gene a ace aldehído 243. El
abaco ambién con ibuye al aumen o de los ni eles de aldehídos eac i os lo que aumen a la
disponibilidad an o de malondialdehído como de ace aldehído. No se ha de ec ado
eac i idad c uzada en e los an icue pos an i-MAA y los ACPA, p obablemen e po que los
epí opos que econoce cada au oan icue po no es án elacionados es uc u almen e (Figu a 3)
y se conside an an icue pos independien es.
Figu a 5. Fo mación de los dos aduc os mayo i a ios de MAA en las p o eínas. Se mues a una
ep esen ación simpli icada de las eacciones p opues as pa a la o mación de los dos aduc os de MAA
mayo i a ios, el aduc o FAAB y el aduc o MDHDC. La gene ación del aduc o FAAB se p oduce po
la eacción de la lisina de las p o eínas con una molécula de malondialdehído y una de ace aldehído,
mien as que la o mación del aduc o MDHDC se p oduce po la eacción de dos moléculas de
malondialdehído con una de ace aldehído. Una ez o mado, el aduc o FAAB menos es able puede
eacciona con o a molécula de malondialdehído pa a o ma el aduc o MDHDC más es able. R1 y R2
= cadena de aminoácidos de la p o eína. Imagen de au o ía p opia c eada con BioRende .com.
INTRODUCCIÓN
31
La p esencia de an icue pos an i-MAA en elación con la AR se ha desc i o po p ime a ez
en pacien es con una en e medad es ablecida p oceden es del egis o Ve e ans A ai s
Rheuma oid A h i is (VARA) que ecopila in o mación de e e anos de gue a de a ios
cen os médicos de Es ados Unidos 32. En es os pacien es, Thiele y col. de ec a on los iso ipos
IgG, IgM e IgA de los an icue pos an i-MAA con una sensibilidad so p enden emen e
supe io a la de los an icue pos desc i os has a el momen o en la AR, incluidos los ACPA 32.
Más del 90% de los pacien es p esen a on an icue pos del iso ipo IgG, mien as que la
p esencia de los iso ipos IgA e IgM ue meno , del 73% y 38% espec i amen e. Un hallazgo
de g an ele ancia po encial ue la no able p esencia de los an icue pos an i-MAA en los
pacien es ACPA nega i os: 88% pa a el iso ipo IgG, 63% pa a el iso ipo IgA y 29% pa a el
iso ipo IgM, de nue o muy supe io a la desc i a pa a o os an icue pos. Los mismos au o es
de es e abajo amplia on el es udio de los an icue pos an i-MAA en pacien es con a ias
en e medades eumá icas incluyendo pacien es con AR eclu ados de cua o cen os médicos
de e e anos es adounidenses (VAMC, Ve e ans A ai s Medical Cen e s) 39. En es os
pacien es ol ie on a obse a una ele ada sensibilidad de los an icue pos an i-MAA.
especialmen e de los iso ipos IgG e IgA 39. Sin emba go, no se eplicó la asociación con el
abaquismo desc i a con el iso ipo IgM en el es udio de Thiele y col. 32, siendo el iso ipo IgA
el asociado con el abaco en el es udio de Mikuls y col. 39. Los an icue pos an i-MAA de
iso ipo IgG ambién se han e aluado en pacien es con AR de la coho e Epidemiological
In es iga ion o Rheuma oid A h i is (EIRA) p oceden es de la población de Suecia 204,244.
Empleando un en oque algo dis in o pa a de ini la posi i idad, los au o es de es e abajo han
desc i o una sensibilidad pa a los an icue pos IgG an i-MAA del 44% en el conjun o de
pacien es con AR y del 33% en el subg upo an i-CCP nega i o, alo es no ablemen e
in e io es a los desc i os pa a el iso ipo IgG en los dos abajos p e ios.
La so p enden e sensibilidad desc i a en los pacien es se onega i os no sólo cambia la
pe spec i a ace ca de la exis encia de la AR sin au oan icue pos sino que ab e la posibilidad
de u iliza a los an icue pos an i-MAA como bioma cado es en ese subg upo de pacien es. Sin
emba go, los an icue pos an i-MAA no son especí icos de la AR de ec ándose además en
pacien es con o as en e medades eumá icas 39, en e medades ca dio ascula es 245–248, daño
hepá ico 249,250, daño pulmona 251–253 o diabe es 254, lo que pone en duda su u ilidad como
bioma cado . La al a de eplicación y de alidación independien e de los hallazgos en
elación con la sensibilidad unida a la al a de especi icidad de los an icue pos an i-MAA
impide saca conclusiones cla as ace ca del papel de es os an icue pos en la AR. Po ello, o o
de los obje i os enma cados en es e p oyec o de esis es el es udio de los an icue pos an i-
MAA en una colección independien e de pacien es con AR con el in de es ablece la
sensibilidad de es os an icue pos, iden i ica asociaciones ele an es con las ca ac e ís icas
clínicas de los pacien es y de e mina su posible u ilidad como bioma cado es, en especial en
los pacien es se onega i os.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
32
6.6. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO
Los an icue pos an i-MDA econocen aduc os de MDA gene ados en las p o eínas a a és de
la eacción de oxidación no enzimá ica con malondialdehído. La es uc u a mayo i a ia de
es os aduc os es la 2-(p openal)lisina (Figu a 3) o mada as modi icación de la lisina 255,
aunque o os aminoácidos ambién son suscep ibles de modi ica se 26,256. Los an icue pos
an i-MDA no econocen an ígenos ci ulinados mien as que su in e acción con p o eínas
ca bamiladas es mínima 33, po lo que los an icue pos an i-MDA se conside an independien es
de los ACPA y de los an icue pos an i-Ca P. Los an icue pos an i-MDA y los an i-MAA
econocen epí opos o mados a pa i de un p ecu so común, el malondialdehído, pe o es án
di igidos en e a epí opos poco elacionados es uc u almen e (Figu a 3) 239 po lo que no se
espe a que exis a eac i idad c uzada. E ec i amen e, exis e poca in e e encia en e los
an icue pos an i-MDA y los an i-MAA cuando se e alúa median e ensayos de compe ición
257. Además, ambién se ha obse ado que los an icue pos an i-MDA p esen es en el sue o de
pacien es con en e medad hepá ica inducida po alcohol econocen mayo i a iamen e los
aduc os de MDA mos ando un econocimien o mínimo de la es uc u a MAA 250. Sin
emba go, has a aho a ningún abajo ha e aluado es os an icue pos en la misma colección de
pacien es con AR y se desconoce con segu idad si son an icue pos independien es o no. Es a
incógni a p e ende esol e se como pa e de los obje i os de es e abajo. También se
p e ende alida la p e alencia desc i a pa a los an icue pos an i-MDA en pacien es con AR,
que es del 28% pa a el iso ipo IgG y algo in e io pa a el iso ipo IgM 33, así como iden i ica
posibles asociaciones con ac o es de iesgo de la en e medad y ca ac e ís icas clínicas de los
pacien es. O o de nues os obje i os es de e mina si es os an icue pos pod ían se de u ilidad
como bioma cado es en la AR, aunque su de ección en o as en e medades eumá icas 258–261
y en en e medades pulmona es 262 indica que no son especí icos.
6.7. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS CARBONILADAS
La ca bonilación de p o eínas se p oduce a a és de eacciones no enzimá icas en las que
in e ienen di e en es agen es ca bonilan es y como consecuencia aumen a el núme o de
g upos ca bonilos (C=O) p esen es en las p o eínas. Así, dos ipos de eacciones de
ca bonilación de p o eínas son las eacciones de oxidación con algunas ROS y las eacciones
de glicación con ca bohid a os educ o es como la ibosa 263. La ca bonilación de p o eínas
da luga a la o mación de un g upo he e ogéneo de compues os y en ec uzamien os
denominados en su conjun o p oduc os inales de glicación a anzada (AGEs, ad anced
glica ion end p oduc s) 8,264. La o mación de AGEs se p oduce p incipalmen e sob e la
lisina, aunque o os aminoácidos ambién son suscep ibles de modi ica se dependiendo de las
condiciones de eacción y del ipo de p o eína 265. Algunos AGEs han sido ampliamen e
ca ac e izados como es el caso de la pen osidina, un en ec uzamien o en e lisina y a ginina
cuya es uc u a es á bien de inida (Figu a 6). La pen osidina, así como o os compues os
es uc u almen e elacionados, p esen an p opiedades luo escen es idén icas, lo que ha
lle ado a nomb a los en conjun o como p oduc os de ipo pen osidina (PTP) 266. Bajo
condiciones de eacción ag esi as como una concen ación ele ada de agen es ca bonilan es o
una exposición p olongada, los enlaces pep ídicos de las p o eínas ambién pueden llega a
ompe se lo que esul a en la agmen ación de la p o eína 267.

INTRODUCCIÓN
33
Figu a 6. Es uc u a de la pen osidina. La pen osidina es un en ec uzamien o en e lisina y a ginina
que puede o ma se as la ca bonilación de p o eínas. Su es uc u a (somb eada en g is) es la que le
con ie e p opiedades luo escen es ca ac e ís icas. R1 y R2 = cadena de aminoácidos de la p o eína.
Imagen de au o ía p opia c eada con BioRende .com.
Algunos es udios han mos ado que los pacien es con AR p esen an en el sue o an icue pos
an i-Ca bo en e a di e sas p o eínas ca boniladas en e las que se encuen an la albúmina
sé ica humana (HSA) 268, la IgG 269–272 y el CII 30,37. Los es udios que emplean CII como
an ígeno ca bonilado han p opo cionado esul ados especialmen e llama i os. Des aca
especialmen e el abajo ealizado po S ollo y col. 37. Es os au o es es udia on pacien es con
AR emp ana en los que de ec a on la p esencia de an icue pos que econocen el CII
ca bonilado con HOCl (an i-HOCl) con una sensibilidad del 92.9% en el o al de los pacien es
y del 91.6% en los pacien es ACPA nega i os. Es e esul ado supone la desapa ición del
concep o de se onega i idad en la AR y p esen a a los an icue pos an i-HOCl-CII como
po enciales bioma cado es, especialmen e en los pacien es con AR que ca ecen de o os
au oan icue pos. Los au o es de es e abajo ambién de ec a on la p esencia de an icue pos
que econocen el CII modi icado con ibosa (an i-GLI-CII) aunque con una sensibilidad
in e io : 64.7% en los pacien es con AR emp ana y 55.5% en los pacien es ACPA nega i os
37. Además, los an icue pos an i-HOCl-CII y an i-GLI-CII no sólo p esen an una ele ada
sensibilidad sino que mues an especi icidad po la AR 30,37. Es os esul ados, aunque
p ome edo es, necesi an se con i mados y alidados de o ma independien e, po lo que uno
de los obje i os de es e abajo es e alua la p esencia de an icue pos an i-Ca bo,
conc e amen e los an i-HOCl-CII y los an i-GLI-CII.
6.8. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS NITRADAS
Los an icue pos an i-Ni a econocen la 3-ni o i osina (3-NT) gene ada a pa i de la
ni ación de la i osina con el ONO2- (Figu a 3), aunque o os aminoácidos como el ip ó ano,
la enilalanina y la cis eína ambién son suscep ibles de ni a se 273,274. Al igual que se ha
comen ado pa a las eacciones de ca bonilación con HOCl, unas condiciones ag esi as de
ni ación pueden p oduci la agmen ación de las p o eínas 274.
La p esencia de an icue pos an i-Ni a en elación con la AR se ha desc i o en dos
abajos di e en es en colecciones de pacien es que p oceden de la India u ilizando un
Lo ena Rod íguez Ma ínez
34
polipép ido de i osina en un caso y la his ona H2A en el o o. En ambos es udios, la
eac i idad en e a la 3-NT ue muy supe io en los pacien es con AR, pe o no se llegó a
especi ica su sensibilidad 35,275. Aunque es os esul ados sugie en que los an icue pos an i-
Ni a pod ían cons i ui un nue o sis ema de an icue pos en la AR, necesi an se alidados en
o as colecciones de pacien es. Po o a pa e, se han desc i o an icue pos an i-Ni a en
pacien es con o as en e medades eumá icas como el LES y la a osis a un ni el compa able
al de ec ado en pacien es con AR 35,276,277, además de de ec a se en pacien es con en e medad
co ona ia 278 y con daño pulmona 279. Es a baja especi icidad de los an icue pos an i-Ni a
po la AR cues iona su u ilidad como bioma cado en la en e medad. En consecuencia, uno de
los obje i os de es e p oyec o de esis consis e en analiza las ca ac e ís icas de los
an icue pos an i-Ni a en una colección independien e de pacien es con AR es ablecida.
6.9. ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS
La homocis einilación es una eacción no enzimá ica en la que la homocis eína lib e o su
ioés e cíclico homocis eína iolac ona se unen de o ma co alen e a las p o eínas 280. La
homocis eína iolac ona a o ece la eacción de N-homocis einilación sob e las lisinas,
mien as que la homocis eína lib e a o ece la eacción de S-homocis einilación sob e las
cis eínas, lo que da luga a la o mación de dos es uc u as di e en es, lisina homocis einilada
y cis eína homocis einilada, espec i amen e 280 (Figu a 7).
Figu a 7. Homocis einilación de p o eínas. Esquema simpli icado de la eacción de N-
homocis einilación sob e la lisina y de S-homocis einilación sob e la cis eína. La iolac ona de L-
homocis eína da luga a la eacción de N-homocis einilación mien as que la homocis eína da luga a
la S-homocis einilación. R1 y R2 = cadena de aminoácidos de la p o eína. Imagen de au o ía p opia
c eada con BioRende .com.
INTRODUCCIÓN
35
La homocis eína es un aminoácido que pa icipa en el me abolismo de la me ionina y a
di e encia de és e, no o ma pa e de la es uc u a de las p o eínas. Su con e sión a
homocis eína iolac ona e i a la inco po ación de la homocis eína a la secuencia de las
p o eínas que puede ene luga debido a su semejanza es uc u al con la me ionina 281.
Algunos ac o es que con ibuyen al aumen o de la concen ación isiológica de homocis eína
son la al e ación de las u as me abólicas en las que pa icipa, de ec os en su eliminación, la
die a y el consumo de abaco 282,283.
La p esencia de an icue pos an i-Hci se ha de ec ado en un abajo es udiando pacien es
con AR que mos a on un aumen o de los ni eles del 21 – 22% espec o de los ni eles
de ec ados en los con oles sanos, aunque no se ha de e minado el po cen aje de posi i os 38.
La es a i icación de los pacien es según su se oposi i idad pa a el FR o los an icue pos an i-
CCP no mos ó di e encias en los ni eles de los an icue pos an i-Hci. Aunque es os esul ados
elacionan a los an icue pos an i-Hci con la AR, p o ienen de un único es udio y necesi an se
alidados. Además, exis en e idencias que indican que los an icue pos an i-Hci no son
especí icos de la AR, de ec ándose ambién en pacien es con LES 284, en e medades enales
285,286, en e medades ca dio ascula es 287 y en e medades ce eb o ascula es 288. Po ello, o o
de los obje i os enma cados en es e abajo es con i ma de o ma independien e la p esencia
de an icue pos an i-Hci en pacien es con AR y ob ene in o mación adicional que con ibuya a
de ini la impo ancia de es os an icue pos en la en e medad.
Aunque el FR y los ACPA han mos ado se de g an u ilidad clínica, oda ía exis e una
acción impo an e de pacien es con AR se onega i os que equie en de bioma cado es
adicionales. La iden i icación de nue os an icue pos en e a PTM puede con ibui a esol e
la necesidad de bioma cado es de diagnós ico, de p onós ico y de espues a al a amien o en
la AR. En es e sen ido, los an icue pos an i-MAA y los an i-Ca bo son al amen e
p ome edo es dada la ele ada p e alencia desc i a en los pacien es se onega i os. O os
an icue pos como los an i-MDA, los an i-Hci y los an i-Ni a ambién pod ían mos a
u ilidad clínica. Sin emba go, oda ía es indispensable esol e las incógni as ace ca de la
p e alencia de es os an icue pos en la AR. Po el momen o, se desconoce si los an icue pos
a ípicos o nue os en e a PTM se de ec an en o as colecciones de pacien es con AR con la
ele ada sensibilidad desc i a, ni ampoco se ha e aluado su asociación con los ac o es de
iesgo o las ca ac e ís icas clínicas de la AR. La única excepción se aplica a los AAPA, cuya
p esencia se ha con i mado en a ias colecciones. Sin emba go, una cues ión impo an e aún
sin espues a de los AAPA es si ienen alo pa a mejo a la clasi icación de los pacien es con
EA. El único es udio que ha abo dado es a cues ión indica que ca ecen de po encial pa a
mejo a la clasi icación, aunque algunas e idencias de o os abajos apun an hacia una
posible mejo ía de la clasi icación de los pacien es se onega i os. En elación con los
an icue pos an i-cH4-39/40 son a ias las cues iones oda ía po acla a , como su
ex ao dina ia inmunodominancia, con g an solapamien o con los an i-CCP, su elación con
o os an icue pos en e a p o eínas ci ulinadas y su posible asociación con ac o es de iesgo
de la AR. Todas es as incógni as se abo da án en el p esen e p oyec o.
MATERIAL Y MÉTODOS
43
1. MUESTRAS DE PACIENTES Y CONTROLES
Se han incluido mues as de sue o de pacien es p oceden es de dos hospi ales de Mad id,
pacien es de la coho e de EA del Hospi al Uni e si a io La Paz 122 y pacien es del egis o
longi udinal de a i is ecien e del Hospi al Uni e si a io La P incesa 123. También se han
incluido sue os de pacien es con AR emp ana y AR es ablecida del Hospi al Clínico
Uni e si a io de San iago que ue on es udiados de o ma ans e sal 70. Los suje os sanos
conside ados como con oles p ocedie on del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago. En
el apa ado de esul ados se de alla án las ca ac e ís icas de los pacien es.
1.1. PACIENTES CON ARTRITIS DE RECIENTE COMIENZO
Los pacien es con EA empleados en el p oyec o p o ienen de dos cen os di e en es, el
Hospi al Uni e si a io La Paz y el Hospi al Uni e si a io La P incesa, ambos si uados en
Mad id. Los pacien es se han eclu ado de mane a p ospec i a desde julio del 2001 has a
diciemb e del 2014 en el es udio PEARL (P incesa Ea ly A h i is Regis e Longi udinal
s udy, po sus siglas en inglés) 123 en el Hospi al Uni e si a io La P incesa y desde ene o del
1993 has a diciemb e del 2013 en el Hospi al Uni e si a io La Paz 122. Es os pacien es
p esen a on dos o más a iculaciones in lamadas du an e un pe iodo in e io a un año y no
ecibie on a amien o con á macos modi icado es de la en e medad (FAME) en el momen o
de la p ime a isi a. En las dos coho es se ha ealizado un seguimien o p o ocolizado de los
pacien es de al menos dos años, con isi as p og amadas cada 6 meses.
Pa a el es udio del papel de los an icue pos an i-pép idos ace ilados en el diagnós ico de
la AR se u iliza on 525 mues as de la coho e de La Paz y 537 de la coho e PEARL. Es os
pacien es se selecciona on po habe comple ado dos años de seguimien o y po dispone de
mues a de sue o de la isi a basal. Al inal del seguimien o, se clasi ica on los pacien es de
acue do con los c i e ios ACR de 1987 pa a la clasi icación de la AR 162.
1.2. PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE TEMPRANA ESTUDIADOS TRANSVERSALMENTE
Es os pacien es p o ienen del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago y ue on
examinados po un euma ólogo expe imen ado que los clasi icó de acue do a los c i e ios
ACR de 1987 pa a la clasi icación de la AR 162. Un o al de 182 pacien es eclu ados an es de
que hubiesen pasado dos años desde el inicio de los sín omas ue on u ilizados pa a el es udio
de los an icue pos an i-colágeno II. Los pacien es seleccionados p esen a on una edad de
inicio de los sín omas de 58 años y el 61.5% e an muje es.
1.3. PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE ESTABLECIDA
La colección de pacien es con AR es ablecida del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago
se ob u o de o ma ans e sal e incluye pacien es con AR clasi icados de acue do con los
c i e ios ACR de 1987 162. Es a colección es á o mada po 520 pacien es que al diagnós ico
enían 48.6 años, el 76.7% son muje es y al se eclu ados lle aban 12.1 años de e olución.
Es os pacien es se incluye on en los análisis pa a e alua la p esencia de an icue pos en e a

Lo ena Rod íguez Ma ínez
44
a ias modi icaciones pos aduccionales de las p o eínas: los an icue pos an i-MAA y an i-
MDA di igidos en e a aduc os de malondialdehído-ace aldehído y de malondialdehído
espec i amen e; los an icue pos an i-cH4/39-40 en e a un pép ido ci ulinado de la his ona
H4; y los an icue pos an i-Hci y an i-Ni a en e a p o eínas sino iales homocis einiladas y
ni adas y con a pép idos ni ados.
1.4. CONTROLES
Los con oles se eclu a on en el Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago. Se emplea on un
o al de 272 suje os sin en e medades in lama o ias o au oinmunes. Es os suje os p esen a on
una edad de eclu amien o de 69.8 años, siendo el 48.2% muje es. Los sue os se emplea on
pa a es ablece el pun o de co e pa a de ini la posi i idad pa a los di e en es an icue pos
es udiados en es e p oyec o.
2. CONSIDERACIONES ÉTICAS
El abajo de es a esis doc o al ha sido ealizado de acue do con la Decla ación de Helsinki y
al in o me Belmon , y de acue do a ley biomédica española (Ley Española de In es igación
Biomédica nº 14/2007). En consecuencia, odas las mues as u ilizadas se han ob enido con
consen imien o in o mado y en el ma co de p oyec os cuyo p o ocolo ha sido ap obado po el
Comi é É ico de In es igación Clínica (CEIC) de Galicia (código de egis o nº 2014/387 y nº
2017/514; Anexos 2 y 3).
MATERIAL Y MÉTODOS
45
3. OBTENCIÓN DE PROTEÍNAS Y PÉPTIDOS MODIFICADOS
POSTRADUCCIONALMENTE
Pa a la ealización de es e abajo se han empleado una g an a iedad de p o eínas y pép idos
así como de agen es modi ican es. Es os agen es se han u ilizado pa a gene a las dis in as
modi icaciones pos aduccionales median e eacciones químicas in i o en el caso de las
p o eínas. Los pép idos se han ob enido ya modi icados bajo demanda. Es os an ígenos se
emplea on en su o ma modi icada y en su o ma na i a sin modi ica en ensayos ELISA con
el obje i o de e alua si las modi icaciones pos aduccionales son econocidas de o ma
especí ica po los an icue pos p esen es en el sue o de los pacien es con AR. En es a sección
se desc iben con de alle los p o ocolos empleados pa a la ob ención de cada una de las
modi icaciones pos aduccionales, in o mación que se encuen a esumida en la Tabla 3.
Tabla 3. Modi icaciones pos aduccionales es udiadas. Se mues a la modi icación, el eac i o
u ilizado, la p o eína diana modi icada, la ab e ia u a empleada pa a e e i se a cada uno de los
an ígenos (p o eínas/pép idos) modi icados y la e e encia de la que se ha ob enido la me odología
pa a gene a las modi icaciones pos aduccionales. Los pép idos se ob u ie on modi icados de o ma
come cial. c(pép ido): pép ido ci ulinado, Ac(aminoácido): aminoácido ace ilado en la posición 7 de
la secuencia del pép ido MCV, MAA-HSA: aduc os de malondialdehído-ace aldehído de albúmina
humana, MDA-BSA: aduc os de malondialdehído de albúmina bo ina, HOCl-CII: colágeno ipo II
bo ino ca bonilado con HOCl, GLI-CII: colágeno ipo II bo ino glicado, 3-NT-PS: p o eínas
sino iales ni adas, 3-NT-(pép ido): pép ido ni ado, Hci-PS: p o eínas sino iales homocis einiladas.
MCV = imen ina mu ada ci ulinada. Los pép idos ci ulinados u ilizados se encuen an en la Tabla 4
y los pép idos ni ados en la Tabla 5.
Modi icación
Agen e modi ican e
P o eína / pép ido
Ab e ia u a
Ci ulinación 144,217,289,290
-
Pép idos seleccionados
c(pép ido)
Ace ilación 44,235
-
Pép idos de MCV
Ac(aminoácido)
Aducción oxida i a 32
Malondialdehído y
ace aldehído
Albúmina humana (HSA)
MAA-HSA
Malondialdehído
Albúmina bo ina (BSA)
MDA-BSA
Ca bonilación 30
Ácido hipoclo oso (HOCl)
Colágeno ipo II bo ino
(CII)
HOCl-CII
Ribosa
Colágeno ipo II bo ino
(CII)
GLI-CII
Ni ación 35
Pe oxini i o de sodio
(NaONO2)
P o eínas sino iales
3-NT-PS
-
Pép idos seleccionados
3-NT-(pép ido)
Homocis einilación 38
L-homocis eína iolac ona
(L-Hci- iolac ona)
P o eínas sino iales
Hci-PS
Lo ena Rod íguez Ma ínez
46
3.1. SÍNTESIS DE PÉPTIDOS CITRULINADOS Y NATIVOS
La p esencia de an icue pos en e a la his ona H4 ci ulinada se e aluó empleando un pép ido
sin é ico ci ulinado y el co espondien e pép ido con a ginina a modo de con ol. Los
esul ados se compa a on con los an icue pos en e a o os pép idos ci ulinados econocidos
como au oan ígenos en la AR: la enolasa, el ib inógeno y la imen ina. Es os an icue pos han
sido de e minados p e iamen e en nues o g upo 291, pe o algunos esul ados no han sido
publicados (A. Mon es, no publicado). Las ca ac e ís icas de los pép idos empleados se
ecogen en la Tabla 4. Todos los pép idos se sin e iza on bio inilados en el ex emo ca boxilo
e minal po Scha e -N (Copenhagen, Denma k) con una pu eza supe io al 90%, a excepción
del pép ido cíclico ci ulinado de la enolasa (CEP-1) que se ob u o de Abcam (Camb idge,
UK) sin bio inila y con una pu eza supe io al 95%.
Tabla 4. Ca ac e ís icas de los pép idos ci ulinados empleados. Los pép idos ci ulinados
con ienen ci ulina (ci ) en ez de las a gininas (R) p esen es en los pép idos na i os.
Pép ido
P o eína
Es uc u a
Secuencia de aminoácidos
cH4/39-40 217
His ona H4
Lineal
AIRRLA(ci )(ci )GGVKRIS
H4/39-40 217
His ona H4
Lineal
AIRRLARRGGVKRIS
CEP-1 289
α-enolasa
Cíclico
CKIHA(ci )EIFDS(ci )GNPTVECK
cVim60-75 290
Vimen ina
Lineal
VYAT(ci )SSAV(ci )L (ci )SSVP
cVim2-17 144
Vimen ina
Lineal
ST(ci )SVSSSSY(ci ) (ci )MFGG
cFibβ36-52 290
Fib inógeno, cadena β
Lineal
NEEGFFSA(ci )GHRPLDKK
cFibα27-43 144
Fib inógeno, cadena α
Lineal
FLAEGGGV(ci )GPRVVERH
3.2. OBTENCIÓN DE PÉPTIDOS ACETILADOS
Los an icue pos en e a pép idos ace ilados se e alua on usando un ki no come cializado
acili ado po O gen ec (O gen ec Diagnos ika GmbH, Mainz, Ge many) en el que se
p opo cionaban placas de ELISA con cada uno de los pép idos conjugados po sepa ado. Los
dos pép idos ace ilados incluidos en el ki p esen an una secuencia de amino ácidos de i ada
de la imen ina mu ada empleada en el ensayo MCV 292. La a ginina en la posición 7 del
pép ido de la imen ina mu ada (GRVYATRSSAVR) se encuen a modi icada pa a ob ene
los dos pép idos ace ilados, uno de los cuales con enía una lisina ace ilada (AcLys) y el o o
una o ni ina ace ilada (AcO n) en la misma posición 44,235.
MATERIAL Y MÉTODOS
47
3.3. GENERACIÓN DE ADUCTOS OXIDADOS CON MALONDIALDEHÍDO
3.3.1. Aduc os de malondialdehído
Los an icue pos en e a aduc os de MDA se de e mina on median e un ELISA case o
siguiendo el p o ocolo que se de alla en el abajo o iginal en el que se desc iben es os
an icue pos en pacien es con AR 33. Como an ígeno se u ilizó albúmina bo ina sé ica
modi icada con malondialdehído in i o (MDA-BSA) come cial (#20P-MD-BS110,
Academy Bio-medical Company, Hous on, Texas, USA).
3.3.2. Aduc os de malondialdehído-ace aldehído
La de e minación de an icue pos en e a aduc os de MAA se ealizó empleando
albúmina humana sé ica (HSA) modi icada in i o químicamen e en el labo a o io al y como
se desc ibe a con inuación. En p ime luga se ob u o el malondialdehído en o ma de sal de
sodio, p epa ado en esco siguiendo el p o ocolo desc i o en Kikugawa y col. 293 con algunas
modi icaciones 294. En una campana de ex acción de gases se añadie on 5 mL de 1,1,3,3-
e ame oxip opano (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA) en un ma az y sob e ese
olumen se adiciona on len amen e 2.5 mL de 1 M ácido clo híd ico (HCl) (Sigma-Ald ich,
S .Louis, Missou i, USA) en una p opo ción mola de 1:1. El ma az se apó, se selló con
pa a ilm y se man u o en agi ación du an e 30 minu os a empe a u a ambien e. La solución
se dejó en ia en hielo du an e 15 minu os y se ajus ó a pH 10 con 6 M hid óxido de sodio
(NaOH) (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA) moni o izando el cambio de pH con un
pHme o C ison basic20 (Hach, Lo eland, Colo ado, USA). A con inuación, se p ecipi ó el
malondialdehído con la adición de 100 mL de ace ona ía dejando en ia la mezcla du an e 1
ho a en hielo. Los c is ales de malondialdehído se ob u ie on po il ación y se man u ie on
a -20 ºC du an e 1.5 ho as an es de su pu i icación median e ec is alización con agua-ace ona
en una p opo ción 1:1 en olumen ( / ). T as su pu i icación, el malondialdehído pu i icado
se dejó 24 ho as en un desecado p o egido de la luz pa a elimina el líquido es an e y se
almacenó en es ado sólido a -20 ºC p o egido de la luz has a un máximo de 1 semana.
La o mación de aduc os de MAA se lle ó a cabo empleando HSA lio ilizada (Sigma-
Ald ich, S .Louis, Missou i, USA). La p o eína (2 mg/mL) se incubó con 2 mM
malondialdehído y 1 mM ace aldehído (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA) en un a io
mola de 2:1 (MAA-HSA) y en p esencia de 2 mM ácido die ilen iaminopen aacé ico
(DTPA) y 2 mM ácido í ico (PA) (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA) en 0.1 M bu e
os a o pH 7.2 du an e 72 ho as a 37 ºC en ubos p o egidos de la luz y sellados con pa a ilm.
Simul áneamen e se p epa ó un ubo con HSA en las mismas condiciones, pe o en ausencia de
malondialdehído y ace aldehído a modo de an ígeno con ol (CTR-HSA). Además, se empleó
o a uen e de HSA (Albuno m 5%) ya disuel a en disolución acuosa (Oc apha ma, Lachen,
Swi ze land) que se modi icó de o ma simila , pe o empleando una concen ación de 4 mM
malondialdehído y man eniendo la concen ación de ace aldehído en 1 mM ( a io mola 4:1).
En es e caso ambién se p epa ó un ubo con HSA a modo de con ol. T as la eacción, las
p o eínas se dializa on en 0.1 M bu e os a o pH 7.2 du an e 24 ho as a 4ºC con al menos
es cambios de bu e pa a elimina los es os de aldehídos sin eacciona , así como los
ácidos incluidos en la eacción. T as la diálisis, los aduc os se concen a on empleando el
sis ema Amicon (Me ck Millipo e, Da ms ad , Ge many) usando il os de 30 kDa como
Lo ena Rod íguez Ma ínez
48
pun o de co e siguiendo las especi icaciones del manual. Al e na i amen e, las p o eínas se
pu i ica on con el sis ema Amicon en luga de dializa se. De es a o ma, se ealizó la
pu i icación y la concen ación de los aduc os de o ma simul ánea. Los posibles ag egados
p o eicos o mados du an e la eacción se elimina on median e il ación a a és de un il o
de 0.22 mic as con memb ana de polie e sul ona (PES). Es a il ación es e ilizó las
p epa aciones. Las p o eínas se cuan i ica on median e el mé odo colo imé ico de B ad o d
(Bio-Rad, He cules, Cali o nia, USA) de acue do con las ins ucciones del ab ican e. En
algunos expe imen os, se u iliza on los aduc os de o ma inmedia a, man eniéndose siemp e a
4ºC y p o egidos de la luz. En caso con a io, se almacena on a -20 ºC p o egidos de la luz
has a su uso.
3.4. GENERACIÓN DE ESPECIES CARBONILADAS DE COLÁGENO TIPO II
Las eacciones de ca bonilación se ealiza on empleando dos agen es oxidan es de dis in a
na u aleza química, el HOCl y la ibosa, siguiendo la me odología desc i a p e iamen e 30. El
HOCl es una especie al amen e oxidan e, con una ciné ica de eacción ápida, mien as que la
ibosa es una especie oxidan e más sua e, con una ciné ica más len a y cuyo mecanismo de
eacción con las p o eínas di ie e del mecanismo del HOCl. Pa a la modi icación con D-(-)-
ibosa (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA) se p epa ó un s ock a 4 M en PBS pH 7.4
que se almacenó p o egido de la luz a 4 ºC. Pa a la modi icación con HOCl se p epa ó
inmedia amen e an es de su uso un s ock a 10 mM en PBS pH 7.4 (100 mM monohid ógeno
os a o de sodio [Na2HPO4], 140 mM clo u o de sodio [NaCl], 3 mM clo u o de po asio
[KCl]) (Ac os O ganics, The mo Fishe Scien i ic, Wal ham, Massachuse s, USA) a pa i de
una solución concen ada de hipoclo i o de sodio (NaOCl) (Me ck Millipo e, Da ms ad ,
Ge many) 295. La concen ación del anión OCl- se midió po espec o o ome ía empleando el
coe icien e de ex inción mola a 292 nm (ε292) de 350 M-1 cm-1 en la ecuación de la ley de
Bee -Lambe 296. El ango lineal en el que se puede aplica la ecuación se de e minó
median e diluciones se iadas de NaOCl en PBS pH 7.4, seleccionando la dilución 1:1000
como óp ima al encon a se en la zona in e media del ango lineal. A con inuación, se midió
la abso bancia po iplicado de la dilución 1:1000 del NaOCl ecien p epa ado en un
espec o o óme o Ul ospec 1100p o (Ame shan Biosciences, GE Heal hca e, Chicago,
Illinois, USA) ob eniendo la concen ación del ión OCl- a pH 7.4. Es e pH es necesa io
po que dependiendo del pH el anión OCl- se encuen a o mando di e en es especies en
disolución acuosa: a pH ácido o ma mayo i a iamen e HOCl mien as que a pH básico se
encuen a disociado en su o ma aniónica. La cons an e de disociación ácida (Ka) del HOCl es
de 7.5 297 po lo que según la ecuación de es a cons an e (ecuación 1), a pH 7.4 se puede
asumi que la concen ación de las especies HOCl y OCl- que se encuen an en disolución es
idén ica (ecuación 3). Po lo an o, la concen ación ob enida espec o o omé icamen e de la
especie OCl- a pH 7.4 es equi alen e a la concen ación de HOCl.
𝐾𝑎=[H+]·[OCl−]
[HOCl] (ecuación 1)
Si aplicamos el –log10 a los dos é minos de la ecuación:
𝑝𝐾𝑎=pH·(−log[OCl−])
(−log[HOCl]) (ecuación 2)

MATERIAL Y MÉTODOS
49
Si pH ≈ pKa en onces: [HOCl] ≈[OCl−] (ecuación 3)
La ca bonilación se ealizó sob e colágeno ipo II (CII) come cial lio ilizado y de al a pu eza
ob enido a pa i de ca ílago bo ino (#804001, MDbiop oduc s, Oakdale, Minneso a, USA).
En p ime luga , el CII se econs i uyó según las ins ucciones del p o eedo en 50 mM ácido
acé ico du an e 24 ho as a 4 ºC en condiciones es é iles y se almacenó p o egido de la luz a 4
ºC. Pos e io men e se p epa a on alícuo as en PBS pH 7.4 en condiciones es é iles y se
almacena on a -20 ºC has a su uso. El CII ca bonilado se ob u o median e su eacción (2
mg/mL en PBS pH 7.4) con 1 mM HOCl p epa ado en esco a pa i del s ock a 10 mM
(HOCl-CII), o con 2 M ibosa a pa i del s ock a 4 M (GLI-CII). Es as eacciones se
incuba on du an e 24 ho as a 37 ºC en condiciones es é iles y en oscu idad. En pa alelo se
incubó CII en ausencia de los agen es ca bonilan es pa a emplea lo como an ígeno con ol
(CTR-CII). También se modi icó BSA (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA) en las
mismas condiciones que el CII pa a un uso compa a i o 30. T as las eacciones, los p epa ados
se dializa on en PBS pH 7.4 a 4 ºC du an e 24 ho as con al menos es cambios de PBS. La
concen ación de las p o eínas se de e minó median e el mé odo de B ad o d (Bio-Rad,
He cules, Cali o nia, USA) según las ins ucciones del ab ican e y los an ígenos se u iliza on
a con inuación man eniéndolos a 4 ºC y p o egidos de la luz.
3.5. GENERACIÓN DE PROTEÍNAS NITRADAS
La eacción de ni ación pa a p oduci 3-ni o i osina (3-NT) se ealizó sob e alícuo as de las
mismas p epa aciones de PS empleadas pa a la eacción de homocis einilación. En p ime
luga , las PS se diluye on a 3-5 mg/mL en PBS 1X y se ajus a on a pH 3.5 u ilizando 6 M y
0.6 M ácido acé ico. A con inuación, se añadió 10 mM pe oxini i o de sodio (NaONO2)
(Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA), concen ación de e minada como óp ima en
expe imen os p e ios y se dejó eacciona du an e 24 h a 37 ºC 35 pa a ob ene PS ni adas (3-
NT-PS). Se incubó además una mues a de PS sin el agen e ni an e pa a ob ene an ígeno
con ol (CTR-PS). También se ni ó sue o e al bo ino (FBS) (Gibco, The mo Fishe
Scien i ic, Wal ham, Massachuse s, USA) pa a usa como con ol de la eacción de ni ación.
Las p o eínas se il a on con un sis ema Amicon (Me ck Millipo e, Da ms ad , Ge many)
usando il os de 3 kDa pa a las PS y de 30 kDa pa a el FBS a 5000 pm du an e 30 min y a 4
ºC pa a elimina el NaONO2 sin eacciona y o os subp oduc os de la eacción.
Pos e io men e se ealizó el cambio de bu e de las p o eínas po PBS 1X pH 9, se
cen i uga on como se indica an e io men e y se almacena on a -20 ºC as de e mina su
concen ación usando el mé odo de B ad o d (Bio-Rad, He cules, Cali o nia, USA).
3.6. SÍNTESIS DE PÉPTIDOS NITRADOS Y NATIVOS
La de e minación de an icue pos an i-Ni a que econocen la 3-NT ambién se ealizó
empleando pép idos ni ados en luga de p o eínas comple as, como ya se ha hecho en un
es udio p e io 278. Los pép idos se selecciona on a pa i de p o eínas desc i as como
ele an es en la AR. La búsqueda se cen ó en p o eínas con un peso molecula en el ango de
20-80 kDa ya que se han obse ado esiduos ni ados en p o eínas sino iales de ese ango
aisladas de pacien es con AR 28. Además, conside ando que la ni ación in i o ocu e
Lo ena Rod íguez Ma ínez
50
p incipalmen e en los esiduos de i osina sólo se selecciona on pép idos que con enían
i osinas suscep ibles de se ni adas. Pa a la selección de pép idos se emplea on dos
p og amas in o má icos que p edicen los si ios en los que exis e mayo p obabilidad de
encon a i osinas ni adas: el p og ama iNi o-Ty 298 y el p og ama GPS-YNO2 1.0 299,
ambos disponibles de o ma g a ui a. Se conside ó que la p edicción e a de con ianza cuando
apa ecía el mismo si io con la i osina ni ada en ambos p og amas y además ese si io
p esen aba un alo Δ > 0.5 en iNi o-Ty y una pun uación > 1.0 pa a un umb al medio en
GPS-YNO2, pa áme os cuyo alo es di ec amen e p opo cional a la p obabilidad de
encon a 3-NT en un si io especí ico. En o al se selecciona on 10 pép idos con una longi ud
de 21 esiduos basándonos en hallazgos p e ios 300. La secuencia de los pép idos se
seleccionó de o ma que la posición de la 3-NT se encon aba en el medio de la secuencia de
aminoácidos. Se sin e iza on en una e sión na i a y o a ni ada en un único esiduo de
i osina. Todos se sin e iza on bio inilados en el ex emo amino e minal po Scha e -N
(Copenhagen, Denma k) con una pu eza supe io al 80%. Dos pép idos ni ados, uno de i ado
de la peo eína BiP y o o de la enascina, no se ob u ie on con la su icien e pu eza y ue on
desca ados del es udio jun o con los pép idos na i os co espondien es. La Tabla 5 mues a
las ca ac e ís icas de los pép idos, así como los alo es de los pa áme os indica i os de la
p obabilidad de ni ación ob enidos de cada p og ama.
Tabla 5. Pép idos de i ados de p o eínas ele an es en la AR que con ienen una i osina
suscep ible de encon a se ni ada in i o. Las secuencias de los pép idos ni ados en los esiduos de
i osina (3-NO2-Y) se mues an desde el ex emo amino hacia el ca boxilo e minal indicando la
posición en la p o eína del pép ido. Los pép idos na i os con ienen una i osina (Y) en la misma
posición que la 3-NO2-Y en la e sión ni ada. El pa áme o Δ se ob iene del p og ama iNi o-Ty
mien as que el p og ama GPS-YNO2 1.0 p opo ciona la pun uación indicada en la úl ima columna.
Cuan o mayo es el alo de cualquie a de es os pa áme os mayo es la p obabilidad de ni ación.
Pép ido
Secuencia de aminoácidos
Pu eza (%)
ni ado/na i o
Δ
Pun uación
Enolasa 1
247AASEFFRSGK(3-NO2-Y)DLDFKSPDDP267
>90 / >90
0.999
2.881
Enolasa 2
34AVPSGASTGI(3-NO2-Y)EALELRDNDK54
>85 / >90
0.584
1.498
Fib inógeno
312GKNYCGLPGE(3-NO2-Y)WLGNDKISQL332
>90 / >95
0.903
1.611
Vimen ina
20TASRPSSSRS(3-NO2-Y)VTTSTRTYSL40
>90 / >87
0.963
2.693
14-3-3 η
206AELDTLNEDS(3-NO2-Y)KDSTLIMQLL226
>90 / >90
1.061
1.695
BiP
165VTHAVVTVPA(3-NO2-Y)FNDAQRQATK185
>66 / >90
3.237
2.824
Tenascina
1676DITGLREATE(3-NO2-Y)EIELYGISKG1696
>46 / >90
0.457
0.912
His ona H3
32ATGGVKKPHR(3-NO2-Y)RPGTVALREI52
>90 / >90
1.319
1.679
His ona H4 1
63LENVIRDAVT(3-NO2-Y)TEHAKRKTVT83
>90 / >90
0.731
1.866
His ona H4 2
42GGVKRISGLI(3-NO2-Y)YEETRGVLKVF62
>90 / >80
0.546
1.448
MATERIAL Y MÉTODOS
51
3.7. GENERACIÓN DE PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS
La homocis einilación se lle ó a cabo median e la eacción del hid oclo u o de L-
homocis eína iolac ona (L-Hci- iolac ona) (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i, USA) con
p o eínas ex aídas de ejido sino ial (PS). Las mues as de ejido sino ial se ecolec a on de
es pacien es con a osis du an e ope aciones de eemplazo de la a iculación de la odilla
ealizadas en el Hospi al P o incial de Conxo o en el Hospi al Clínico Uni e si a io de
San iago, ambos en San iago de Compos ela. Es a pa e del es udio ambién ue ap obada po
el Comi é É ico de In es igación de Galicia y se con ó con el consen imien o in o mado po
esc i o de los pacien es. La sino ia se diseccionó del ejido conec i o y se homogeneizó
empleando un equipo Poly on PT 1200 E (Kinema ica AG) median e la adición de bu e
lisis (1 mM o o anada o de sodio [Na3VO4], T i ón X-100 1X, 50 mM
is(hid oxime il)aminome ano-HCl [T is-HCl], 250 mM NaCl, 30 mM pi o os a o de sodio
[Na4P2O7], 5 mM ácido e ilendiamino e aacé ico [EDTA], 100 mM luo u o de sodio [NaF],
1 mM di io ei ol [DTT], cóc el inhibido de p o easas [PIC] 1X) empleando 3 mL po
milig amo de ejido sino ial. Pos e io men e las p epa aciones se incuba on en hielo du an e
30 minu os y se cen i uga on a 10000 x g a 4 ºC. Las PS se ecogie on del sob enadan e, se
de e minó su concen ación median e el mé odo de B ad o d (Bio-Rad, He cules, Cali o nia,
USA) y se almacena on en alícuo as a -80 ºC.
La concen ación de las PS se ajus ó a 10 mg/mL en 0.05 M bu e os a o de po asio pH
7.4 con 0.2 mM EDTA an es de la adición de 1 mM L-Hci- iolac ona, concen ación
de e minada como óp ima pa a la homocis einilación en expe imen os p e ios. La eacción se
lle ó a cabo du an e 16 h a 37 ºC 285 pa a gene a PS N-ε-homocis einiladas (Hci-PS). En
pa alelo se incubó una mues a de PS siguiendo la me odología an e io , pe o en ausencia de
L-Hci- iolac ona pa a su uso como an ígeno con ol (CTR-PS). También se modi icó HSA de
o ma simila a las PS pe o empleando 0.4 mM L-Hci- iolac ona (Hci-HSA) 285,287,
concen ación a la cual se gene ó un ni el de homocis eínas simila al obse ado en las PS. La
Hci-HSA se u ilizó como p o eína con ol de la modi icación. Las p epa aciones se il a on
median e un sis ema Amicon (Me ck Millipo e, Da ms ad , Ge many) usando il os de 3 kDa
como pun o de co e pa a las PS y de 30 kDa pa a la HSA a 5000 e oluciones po minu o
( pm) du an e 30 min y a 4 ºC pa a elimina la L-Hci- iolac ona sin eacciona . Finalmen e, se
cambió el bu e de las p o eínas po PBS 1X pH 9, se cen i uga on de nue o como se ha
desc i o y se midió su concen ación con el mé odo de B ad o d (Bio-Rad, He cules,
Cali o nia, USA) an es de almacena se a -20 ºC.
4. VERIFICACIÓN DE LA MODIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y
PÉPTIDOS
T as la gene ación de las modi icaciones pos aduccionales mencionadas en la sección
an e io se p ocedió a e i ica la co ec a o mación de las es uc u as co espondien es a
cada modi icación. En la Tabla 8 apa ece un b e e esumen de los p o ocolos u ilizados pa a
la ca ac e ización de la o mación de las es uc u as co espondien es a cada modi icación
pos aduccional. Además, en casos seleccionados se modi icó y se ca ac e izó una p o eína
es ánda a modo de con ol de calidad de la eacción.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
52
Tabla 6. Me odología empleada en la e i icación de la o mación de las es uc u as co espondien es pa a cada modi icación pos aduccional
es udiada. m/z = elación masa/ca ga, hexil-MAA = 1-hexil-4-me il-1,4-dihid o-3,5-pi idindica boxaldeído, 1H-RMN = esonancia magné ica nuclea de p o ón,
λexc = longi ud de onda de exci ación, Abs.máx = abso bancia máxima de medición, PTP = p oduc os de ipo pen osidina, AGEs = p oduc os de glicación
a anzados. El es o de ab e ia u as es án disponibles en la Tabla 3. * Es as de e minaciones han sido ealizadas po los p o eedo es
An ígeno
modi icado
Técnicas
Pa áme os
Resul ado
Re .
c(pép ido)
Espec ome ía de
masas*
-
Cambio m/z modi icado s. con ol indica i o de
la p esencia de ci ulina
Ac(aminoácido)
Espec ome ía de
masas*
-
Cambio m/z modi icado s. con ol indica i o de
la p esencia de lisina/o ni ina ace ilada
MAA-HSA
Fluo escencia
Es ánda hexil-MAA ca ac e izado po
1H-RMN
Es uc u a MAA: λexc = 398 nm
Cu a calib ado con hexil-MAA pa a calcula
a io modi icado s. con ol indica i o de
o mación de MAA
32,294
HOCl-CII y
GLI-CII
SDS-PAGE
4%-8% condiciones educ o as
Cambio mig ación y pa ón de bandas in o ma i o
de la in eg idad es uc u al y del peso molecula
30
Fluo escencia
T ip ó ano: λexc = 295nm
PTP: λexc = 335 nm
AGEs: λexc = 370 nm
Ra io modi icado s. con ol indica i o de pé dida
de es uc u a ( ip ó ano), o mación de PTP,
o mación de AGEs
Espec o o ome ía
Abs.máx = 370 nm
Ni el de g upos ca bonilo
3-NT-PS
Fluo escencia
Es ánda 3-NT come cial: λexc = 275 nm
Pé dida de i osina
35,301
Espec o o ome ía
Es ánda 3-NT come cial: Abs.máx = 420
nm
Ni el de i osina ni ada
Inmunoensayo
Come cial
Ni el de i osina ni ada
3-NT-(pép ido)
Espec ome ía de
masas*
-
Cambio m/z modi icado s. con ol indica i o de
la p esencia de i osina ni ada
Hci-PS
Inmunoensayo
Come cial
Ni el de homocis eína
302
MATERIAL Y MÉTODOS
59
Las condiciones de cada ELISA case o a ia on en unción de la modi icación
pos aduccional en e a la cual se de e mina on los an icue pos de acue do con la
me odología publicada y con las a iaciones in oducidas en la pues a a pun o con el obje i o
de aumen a la sensibilidad del ensayo. En la Tabla 7 se ecogen los pa áme os más
ele an es de cada ELISA empleado en es e abajo. Los p o ocolos de ELISA especí icos
pa a cada au oan icue po se de allan en el apa ado co espondien e.
Todas las de e minaciones de an icue pos incluye on sue os de pacien es y con oles
analizados po duplicado. En una misma placa se e alua on an o sue os de pacien es como de
con oles pa a e i a posibles sesgos en las de e minaciones. Además, se empleó el mismo
lo e de p o eína modi icada y p o eína con ol pa a e i a posibles sesgos de i ados de la
p epa ación del an ígeno. En cada placa se incluyó ambién un con ol posi i o y un con ol
nega i o especí icos pa a cada an ígeno modi icado y pa a cada iso ipo de an icue po
secunda io ob enidos de los análisis p e ios de eac i idad, así como un blanco. Los
coe icien es de a iación (CV) in aensayo e in e ensayo con un alo < 15% se conside a on
acep ables. En los ensayos ELISA pa a los an icue pos an i-cH4/39-40, an i-MAA y an i-
MDA se incluye on en cada placa dos diluciones de la cu a de calib ado cons uida a pa i
de diluciones se iadas de una mezcla de sue os posi i os que p esen aban una eac i idad
ele ada pa a cada an icue po secunda io y pa a cada PTM como pun o de con ol adicional
pa a e alua posibles sesgos en las de e minaciones a lo la go del iempo. La OD especí ica
de cada PTM se calculó es ando el alo ob enido pa a la p o eína no modi icada del alo
ob enido pa a la p o eína modi icada. Las OD especí icas se ans o ma on en í ulos de
an icue po exp esados como UA as su in e polación en una cu a de calib ado como se
de alla en la sección de análisis es adís ico. La eac i idad en e a CII ca bonilado, PS
ni adas, pép idos ni ados y PS homocis einiladas se analizó empleando las OD en luga de
u iliza í ulos de an icue pos al y como han hecho los abajos p e ios 35,37,38.

Lo ena Rod íguez Ma ínez
60
Tabla 7. Pa áme os de los ELISA empleados pa a la de e minación de an icue pos en e a modi icaciones pos aduccionales. An i-CCP: an icue pos
an i-pép idos cíclicos ci ulinados, an i-Ca P: an icue pos an i-p o eínas ca bamiladas, an i-pép idos ci ulinados: an icue pos en e a los pép idos ci ulinados
incluidos en la Tabla 4, an i-pép idos ace ilados: an icue pos en e a un pép ido de i ado de MCV con lisina ace ilada u o ni ina ace ilada en la posición 7, an i-
MAA: an icue pos an i-malondialdehído-ace aldehído, an i-MDA: an icue pos an i-malondialdehído, an i-Ca bo: an icue pos an i-p o eíans ca boniladas, an i-
Ni a: an icue pos an i-p o eínas/pép idos ni ados, an i-Hci: an icue pos an i-p o eínas homocis einiladas. MCV = imen ina mu ada ci ulinada. AP = os a asa
alcalina. HRP = pe oxidasa de ábano. An i-IgG (H+L) = an icue po en e a las cadenas pesadas y lige as de las IgG humanas, an i-IgG Fcγ = an icue po en e a
la egión Fc de la cadena γ especí ica de IgG humana, an i-IgM 5μ Fc = an icue po en e a la egión 5μ Fc especí ica de IgM humana, an i-IgA cadena α =
an icue po en e a la cadena α especí ica de IgA humana, (Fab’)2 an i-IgG = an icue po en e a IgG humana compues o únicamen e po la egión (Fab’)2. *Los
eac i os pa a es os ELISA ue on cedidos po la casa come cial pe o oda ía no se come cializan.
An icue po
Tipo ELISA
An ígeno modi icado
An ígeno con ol
Bloqueo
Dilución sue o
An icue po secunda io
Dilución
Ab 2º
Pun o de
co e
An i-CCP
come cial
CCP2
-
-
1:100
An i-IgG-AP
-
>5 UA/mL
An i-Ca P
case o
Ca P-FBS
CTR-FBS
1% BSA
1:50
An i-IgG (H+L)-AP
1:5000
Pe cen il 98
An i-pép idos
ci uilnados
case o
cH4/39-40
H4/39-40
2% BSA
1:100
An i-IgG (H+L)-AP
1:5000
Media+2DS
case o
cFibβ36-52
-
2% BSA
1:50
An i-IgG (H+L)-AP
1:10000
Media+2DS
case o
cFibα27-43, CEP-1,
cVim60-75, cVim2-17
-
2% BSA
1:100
An i-IgG (H+L)-AP
1:10000
Media+2DS
An i-pép idos
ace ilados
come cial*
AcLys, AcO n
-
BSA
1:100
An i-IgG-HRP
-
Pe cen il 98
An i-MAA
case o
MAA-HSA
CTR-HSA
2% BSA
1:100
An i-IgG (H+L)-AP
An i-IgM 5μ Fc-AP
An i-IgA cadena α-AP
1:5000
1:8000
1:1000
Pe cen il 98
An i-MDA
case o
MDA-BSA
CTR-BSA
3% BSA
1:100
(Fab’)2 an i-IgG (H+L)-AP
An i-IgM 5μ Fc-AP
1:1000
1:2000
Pe cen il 98
An i-Ca bo
case o
HOCl-CII, GLI-CII
CTR-CII
2% leche
1:100
An i-IgG Fcγ-AP
1:2000
-
An i-Ni a
case o
3-NT-PS
CTR-PS
1% BSA
1:100
(Fab’)2 an i-IgG (H+L)-AP
1:10000
-
case o
Mezcla 3-NT-pep
Mezcla CTR-pep
1% BSA
1:100
An i-IgG (H+L)-AP
1:5000
-
An i-Hci
case o
Hci-PS
CTR-PS
0.5% gela ina
1:200
(Fab’)2 an i-IgG (H+L)-AP
1:5000
-
MATERIAL Y MÉTODOS
61
6.1. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS CARBAMILADAS
Los da os de an i-Ca P pa a los pacien es del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago, del
Hospi al Uni e si a io La Paz y del Hospi al Uni e si a io La P incesa es aban disponibles de
es udios p e ios ealizados po nues o g upo 70,176. Es os an icue pos se de e mina on con el
ELISA case o que emplea como an ígeno sue o e al de e ne o (FBS) ca bamilado in i o
(CaFBS). B e emen e, se añadie on 50 µL po pocillo de CaFBS o de FBS no modi icado a
una concen ación de 10 µg/mL en bu e 0.1 M ca bona o pH 9.6 a placas de 96 pocillos con
el ondo plano Nunc Maxiso p y se incuba on oda la noche a 4ºC en agi ación. Se ealiza on
3 la ados con 200 µL de PBS-Tween20 0.05% (PBS-T) an es de bloquea con 100 µL po
pocillo de 1% BSA en PBS (1% BSA+PBS) du an e 6 h a 4ºC en agi ación. T as un paso de
la ado se añadie on 50 μL de sue o diluido 1:50 en 1% BSA+PBS-T. Las placas se incuba on
en hielo du an e oda la noche, se la a on 3 eces con PBS-T y a con inuación se añadie on
50 μL del an icue po secunda io en e a IgG humana (cadenas pesadas y lige as, H+L, #109-
055-003) conjugado con AP a una dilución 1:5000 en 1% BSA+PBS-T. Después de 3.5 h de
incubación en hielo, se ealizó un úl imo paso de la ado an es de añadi 100 μL del sus a o.
6.2. ANTICUERPOS FRENTE A ANTÍGENOS CITRULINADOS ESPECÍFICOS
6.2.1. An icue pos en e a un pép ido ci ulinado de la his ona H4
Pa a e alua la eac i idad en e al pép ido cH4/39-40 de la his ona H4 se empleó el
p o ocolo desc i o 217 con mínimas modi icaciones. Se añadie on 100 μL del pép ido
ci ulinado cH4/39-40 o del pép ido con ol H4/39-40 disuel os en bu e 50 mM ca bona o
pH 9.6 a 25 μg/mL. Las placas se incuba on a 4ºC du an e oda la noche, se la a on 3 eces
con 200 μL de PBS-T y se bloquea on con 200 μl de 2% BSA+PBS du an e 2 h a empe a u a
ambien e. Los sue os se diluye on 1:100 en 1% BSA+ PBS y se añadie on 100 μL/pocillo
seguido de una incubación de 2 h a empe a u a ambien e. T as 3 la ados se añadie on 100 μL
de un an icue po secunda io en e a IgG (H+L) conjugado con AP (#109-055-003) diluido
1:5000 en 1% BSA+PBS y se incubó 1 h a empe a u a ambien e. Finalmen e las placas se
la a on 5 eces an es de añadi 100 μL de pNPP.
6.2.2. An icue pos en e a pép idos ci ulinados de enolasa, imen ina y
ib inógeno
Los da os de es ado pa a los an icue pos que econocen los pép idos CEP-1, cVim60-75,
cVim2-17, cFibβ36-52 y cFibα27-43 es aban disponibles an es de la ealización de es a esis
doc o al. La de e minación de an icue pos en e a los pép idos CEP-1 y cVim60-75 se ha
desc i o en abajos p e ios ealizados po el g upo 291,317. La de e minación de an icue pos
en e a los pép idos cVim2-17, cFibβ36-52 y cFibα27-43 se ealizó median e ELISAs
siguiendo la me odología p e iamen e publicada 144 y se desc ibe aquí b e emen e (A.
Mon es, no publicado). Los pép idos se u iliza on a 10 μg/mL en 100 μL/pocillo. Los sue os
se diluye on 1:50 en el ensayo con el pép ido cFibβ36-52 y 1:100 pa a el es o de pép idos en
bu e de adioinmunoensayo (RIA: 1% BSA, 350 mM NaCl, 10 mM T is-HCl pH 7.6, 1%
T i on X-100, 0.5% desoxicola o de sodio, 0.1% SDS) (Sigma-Ald ich, S .Louis, Missou i,
USA) y 100 μL de es a dilución se incuba on 2 h a empe a u a ambien e. El an icue po
secunda io u ilizado e a an i-IgG (H+L) conjugado con AP (#109-055-003) diluido 1:10000
Lo ena Rod íguez Ma ínez
62
en bu e RIA. El pun o de co e se calculó pa a cada pép ido ci ulinado po sepa ado como
el alo medio del í ulo de an icue pos (UA) pa a los con oles sanos más 2 eces la
des iación es ánda (DS).
6.3. ANTICUERPOS FRENTE A PÉPTIDOS ACETILADOS
La de ección de au oan icue pos del iso ipo IgG en e a los pép idos de AcLys (an i-AcLys) y
de AcO n (an i-AcO n) se ealizó siguiendo el p o ocolo de O gen ec (O gen ec Diagnos ika
GmbH, Mainz, Ge many) 44 y empleando los eac i os p o enien es de dos lo es, que
incluyen bu e de la ado y de dilución de mues as, an icue po secunda io en e a IgG
humana conjugado con HRP, sus a o 3,3′,5,5′- e ame ilbencidina (TMB) y disolución de
pa ada de la eacción enzimá ica. No se incluye on pép idos con ol sin la modi icación en los
espec i os aminoácidos dada la baja eac i idad encon ada en e a ellos en un es udio
p e io 44. B e emen e, las placas que con enían cada uno de los pép idos ace ilados y el es o
de eac i os se deja on a empe a an es de su uso. Los sue os se diluye on 1:100 en el bu e
de dilución p opo cionado y se añadie on 100 μL a la placa jun o con los pun os de la cu a
de calib ado y los con oles del ki . T as una incubación de 30 min a empe a u a ambien e las
placas se la a on 3 eces con 300 μL del bu e de la ado y se añadió el an icue po
secunda io en e a IgG conjugado con HRP (100 μL) seguido de una incubación de 15 min a
empe a u a ambien e. Las placas se la a on de nue o an es de añadi 100 μL del sus a o
TMB, que se dejó ac ua du an e 15 min a empe a u a ambien e. Finalmen e se añadie on
100 μL de la disolución de pa ada y as 5 min se p ocedió a la lec u a de las placas.
El pun o de co e del ki iene es ablecido en 20 UA/mL. Pues o que se u o que
modi ica la calib ación, se decidió emplea el sue o de con oles ecogidos en el Hospi al
Clínico Uni e si a io de San iago pa a ob ene un nue o pun o de co e al y como se ealizó
pa a el es o de au oan icue pos. Usando el pe cen il 98 de la eac i idad de los con oles se
es ableció un pun o de co e de 64 UA/mL pa a los an icue pos an i-AcLys y de 55 UA/mL
pa a los an icue pos an i-AcO n.
6.4. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO-ACETALDEHÍDO
Los an icue pos an i-MAA se de e mina on median e un ELISA indi ec o ealizando odos los
pasos en agi ación siguiendo el p o ocolo p e iamen e desc i o 32. En cada pocillo, se
añadie on 100 μL de MAA-HSA modi icada ( eacción de modi icación con a io 2:1) o HSA
no modi icada a 20 μg/mL en 0.1 M bu e ca bona o pH 9.6 oda la noche a 4ºC. Las placas
se la a on 3 eces con 200 μL de PBS-T y se bloquea on con 200 μL de 2% BSA+PBS
du an e 2 h a 4 ºC. Después de o o paso de la ado se añadie on 100 μL de sue o diluido
1:100 en 1% BSA+PBS-T, incubándose oda la noche a 4 ºC. T as o o la ado, se añadie on
100 μL de uno de los an icue pos secunda ios conjugados con AP di igidos en e a: IgG
(H+L, #109-055-003), IgM (especí ico de las cadenas pesadas μ de la egión cons an e Fc, 5μ
Fc, #109-055-043) o IgA (especí ico de las cadenas α, #109-055-011) diluidos 1:5000, 1:8000
y 1:1000 espec i amen e en 1% BSA+PBS-T. T as 1 h de incubación a empe a u a
ambien e, se ealizó un úl imo paso de la ado an es de añadi 100 μL del sus a o.
Los sue os se conside a on posi i os pa a alo es de í ulos de an icue po en UA
supe io es al pe cen il 98 de los í ulos ob enidos pa a los con oles.
MATERIAL Y MÉTODOS
63
Se p oba on o as condiciones pa a analiza los an icue pos en e a aduc os MAA:
u iliza como an ígeno MAA-HSA modi icada con un a io 4:1, bloquea con caseína 2% en
agua ul apu a ob enida de un sis ema de pu i icación de agua MilliQ Ad an age A10 To al
O ganic Ca bon (Me ck KGaA, Da ms ad , Alemania) du an e 1.5 ho as a empe a u a
ambien e; dilui los sue os en caseína 1% seguidos de una incubación de 1.5 h a empe a u a
ambien e; y u iliza como an icue po secunda io un an icue po en e a IgG especí ico de la
cadena γ de la egión cons an e, (Fcγ, #109-055-008) conjugado con AP y diluído 1:5000 en
caseína 2%.
6.5. ANTICUERPOS FRENTE A ADUCTOS DE MALONDIALDEHÍDO
Los an icue pos an i-MDA se de e mina on median e un ELISA indi ec o empleando como
an ígeno MDA-BSA come cial y siguiendo el p o ocolo desc i o en un abajo p e io 33 con
pequeñas a iaciones. La BSA modi icada o na i a se añadió (50 μL) a una concen ación de
3 μg/mL en PBS 1X pH 7.4 y se dejó incuba oda la noche a 4ºC. T as un la ado con 200 μL
de PBS-T se bloquea on las placas con 150 μl de 3% BSA+PBS du an e 1 h a empe a u a
ambien e sin agi ación. Después de o o la ado se añadie on los sue os (50 μL) a una dilución
1:100 en 1% BSA+PBS y se incuba on 1.5 h a empe a u a ambien e en agi ación. Las placas
se la a on de nue o 3 eces an es de añadi 50 μL de un an icue po o mado po el agmen o
que con iene las dos egiones de unión a an ígeno, (Fab’)2 di igido en e a IgG (H+L) (#309-
056-003) o de un an icue po comple o en e a IgM (5μ Fc, #109-055-043), ambos
conjugados con AP, a una dilución de 1:1000 y 1:2000 en 1% BSA+PBS, espec i amen e.
T as 1 h de incubación a empe a u a ambien e sin agi ación se ealiza on 4 la ados an es de
añadi 100 μL de pNPP, que se incubó du an e 60 min an es de la lec u a de las placas.
El pun o de co e pa a de ini la posi i idad se es ableció en pe cen il 98 de los í ulos en
UA ob enidos pa a los con oles.
6.6. ANTICUERPOS FRENTE A ESPECIES CARBONILADAS DE COLÁGENO TIPO II
La de e minación de an icue pos en e a CII ca bonilado siguió el p o ocolo de ELISA
indi ec o desc i o p e iamen e 30,37. En b e e, se incuba on 100 μL/pocillo de HOCl-CII, GLI-
CII o CTR-CII a una concen ación de 5 μg/mL en PBS pH 7.4 du an e oda la noche a 4 ºC.
Después de ealiza 3 la ados con 200 μL de PBS-T las placas se bloquea on con leche
desg asada al 2% en PBS du an e 2 h a empe a u a ambien e. T as o o paso de la ado, se
añadie on los sue os a una dilución 1:100 en 100 μL de bu e de bloqueo y se incuba on 2 h a
37 ºC. Después de la a las placas, se añadie on 100 μL de un an icue po secunda io en e a
IgG Fcγ conjugado con AP (#109-055-008) a una dilución 1:2000 en bu e de bloqueo. Al
inaliza la incubación de 2 h a 37 ºC, se la a on de nue o las placas an es de añadi 100 μL
de pNPP.
6.7. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS NITRADAS
La e aluación de an icue pos an i-Ni a se ealizó con un ELISA case o 35. A cada pocillo se
añadie on 50 μL de 3-NT-PS o CTR-PS a una concen ación de 2.5 μg/mL en bu e 0.1 M
ca bona o pH 9.6 y las placas se incuba on du an e oda la noche a 4 ºC. El bloqueo se ealizó
as la a 3 eces con PBS-T añadiendo 100 μL de 1% BSA+PBS-T y dejando incuba
Lo ena Rod íguez Ma ínez
64
du an e 2 h a empe a u a ambien e. Pos e io men e se la a on las placas y se añadie on 50 μL
de sue o diluido 1:100 en bu e bloqueo que se dejó incuba o as 2 h a empe a u a
ambien e. Después de un paso adicional de la ado se añadie on 50 μL de un an icue po
secunda io F(ab’)2 en e a IgG (H+L) conjugado con AP (#309-056-003) a una dilución
1:10000 en bu e bloqueo. T as incuba 1 h a empe a u a ambien e se la a on las placas y se
añadió a cada pocillo 100 μL de pNPP.
6.8. ANTICUERPOS FRENTE A PÉPTIDOS NITRADOS
La p esencia de an icue pos an i-Ni a se e aluó ambién empleando pép idos ni ados como
an ígeno en un ELISA case o 278. En p ime luga , se mezcla on los 8 pép idos ni ados po un
lado y los 8 pép idos na i os co espondien es po o o lado, odos a la misma concen ación
en la mezcla. A cada pocillo se añadie on 50 μL de la mezcla de pép idos ni ados o na i os
diluidos a 20 μg/mL (2.5 μg/mL de cada pép ido en la mezcla) en bu e 0.1 M ca bona o pH
9.6 dejando incuba las placas a 4 ºC du an e oda la noche. El bloqueo y la adición de los
sue os se ealiza on como se desc ibe en el p o ocolo que emplea PS ni adas y con ol.
Pos e io men e se añadie on 50 μL de un an icue po secunda io en e a IgG (H+L) conjugado
con la AP (#109-055-003) a una dilución 1:5000 en bu e bloqueo y se dejó incuba a 2 h a
empe a u a ambien e an es de ealiza el úl imo paso de la ado y de añadi 100 μL de pNPP.
6.9. ANTICUERPOS FRENTE A PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS
La p esencia de an icue pos an i-Hci que econocen la N-ε-homocis eína se de e minó
median e un ELISA case o 38. P ime o, se añadie on 100 μL de Hci-PS o CTR-PS diluidas a
10 μg/mL en bu e 0.1 M ca bona o pH 9.6 y se incuba on a 4 ºC du an e oda la noche. A
con inuación, se la a on las placas 3 eces con PBS-T y se bloquea on con 200 μL de gela ina
de pez 0.5% en PBS du an e 6 h a 4 ºC. T as o o paso de la ado se añadie on 100 μL de
sue o diluido 1:200 en 1% BSA+PBS-T a 4 ºC du an e oda la noche. Después de o o la ado,
se adiciona on 100 μL de un an icue po secunda io F(ab’)2 en e a IgG (H+L) conjugado con
AP (#309-056-003) a una dilución 1:20000 en 1% BSA+PBS-T. Las placas se incuba on a 4
ºC du an e 3.5 h y se la a on de nue o an es de añadi 100 μL de pNPP.
7. GENOTIPADO
Los da os de ipado de las mues as del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago es aban
disponibles con an e io idad a la ealización de es a esis doc o al 317. Los alelos del HLA-
DRB1 se de e mina on median e un mé odo de ipado basado en secuenciación u ilizando el
ki AlleleSEQR HLA–DRB1 Typing Ki (Abbo Diagnos ics, Abbo Pa k, Illinois, USA).
Es e ki disc imina los alelos median e la secuenciación del exón 2 del locus DRB1 u ilizando
el so wa e Assign-SBT 3.2.7 (Abbo Diagnos ics, Abbo Pa k, Illinois, USA) pa a la
in e p e ación de los esul ados. Los alelos que no se esol ie on en es e paso se ol ie on a
secuencia as ampli icación con cebado es especí icos de g upo (GSSP, g oup-speci ic
sequencing p ime s). El ipado del SNP s2476601 en el que se in oduce el cambio C1858T
en el gen PTPN22 se ealizó con un ensayo TaqMan (Applied Biosys ems, Fos e Ci y,
Cali o nia, USA).

MATERIAL Y MÉTODOS
65
8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Los análisis es adís icos se ealiza on con el so wa e S a is ica 7.0 (S a So Inc., Tulsa,
Oklahoma, USA) excep o donde se indica o o so wa e especí ico. Los alo es de P
in e io es a 0.05 se conside a on es adís icamen e signi ica i os. La ep esen ación g á ica de
las a iables cuan i a i as se ealizó empleando S a is ica 7.0 o G aphPad P ism 5.01 (La
Jolla, Cali o nia, USA).
8.1. ANÁLISIS DESCRIPTIVO
Las a iables cuan i a i as se ep esen a on como el alo medio y la des iación es ánda
(DS) cuando los da os se ajus a on a una dis ibución no mal o como la mediana y el ango
in e cua ílico (IQR) si los da os no se ajus a on a dicha dis ibución. Po su pa e, las
a iables cuali a i as se ep esen a on a pa i de su ecuencia (%). La compa ación de las
a iables cuan i a i as se ealizó con la p ueba de S uden si cumplían c i e ios de
no malidad o con la p ueba U de Mann-Whi ney en caso de no cumpli con esos c i e ios. La
p ueba chi-cuad ado (χ2) se empleó pa a compa a las ecuencias de las a iables cuali a i as
en mues as independien es, mien as que pa a mues as pa eadas se empleó la p ueba
McNema . La eac i idad de los an icue pos medida como OD en el ELISA se ans o mó en
UA de í ulos de an icue po in e polando los alo es en una cu a de eg esión logís ica de 4
pa áme os empleando el paque e d c 318 del so wa e R 3.4.1 (R Founda ion o S a is ical
Compu ing, Vienna, Aus ia). La co ección de la a iabilidad de ec ada en e los lo es del ki
pa a de e mina los an icue pos en e a pép idos ace ilados se ealizó median e una
no malización po cuan iles de las OD.
Las elaciones en e los di e en es an icue pos se e alua on empleando el coe icien e de
co elación ho (ρ) de Spea man y el coe icien e de conco dancia gamma (γ) de Goodman y
K uskal. El coe icien e ρ mues a el g ado de co elación en e los í ulos de los an icue pos
mien as que el coe icien e γ indica el g ado de conco dancia en el es ado pa a cada
an icue po de inido como posi i o o nega i o. Ambos coe icien es pueden oma alo es
desde +1 si la asociación en e las a iables es posi i a, has a -1 si la asociación es nega i a.
8.2. ANÁLISIS DE COMPONENTES PRINCIPALES
El análisis de componen es p incipales (ACP) se empleó pa a educi el núme o de
an icue pos al combina aquellos que poseen in o mación edundan e en una nue a a iable
(componen e) no co elacionada con el es o. El núme o de componen es gene ados en el ACP
es po lo an o meno que el núme o de a iables iniciales. Al educi el núme o de a iables
que explican la a ianza de una mues a se educe ambién la dimensionalidad de los da os
acili ando su manejo. El es a us pa a cada uno de los seis an icue pos en e a an ígenos
ci ulinados especí icos (especi icidades inas) se in odujo como a iable en el análisis.
Además, los an icue pos an i-CCP se analiza on como a iable suplemen a ia. Po o a pa e,
la ma iz de conco dancias de los an icue pos se empleó pa a ep esen a cada an icue po en
un g á ico bidimensional empleando el escalado mul idimensional (MDS, Mul idimensional
Scaling po sus siglas en inglés) en el que la dis ancia que sepa a dos an icue pos ( a iables)
es á in e samen e elacionada con su g ado de co elación. Adicionalmen e, la ep esen ación
de la elación en e los ni eles de los an icue pos se ob u o con MDS a pa i de la ma iz de
co elaciones ob enida de los pacien es posi i os pa a los dos an icue pos analizados.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
66
8.3. ANÁLISIS DE REGRESIÓN
La asociación de la p esencia de los an icue pos con las ca ac e ís icas clínicas de los
pacien es o con los geno ipos se analizó median e eg esión logís ica mul i a ian e con
a iables de con usión. En es os análisis se conside a on sólo los e ec os p incipales (sin
in e acciones). Se p esen an la odds a io (OR) de los an icue pos y su in e alo de con ianza
del 95% (IC 95%). Las a iables de con usión conside adas no ue on las mismas en odos los
apa ados del es udio, lo que es á indicado al p esen a los esul ados. Habi ualmen e, se
incluye on la edad de inicio de los sín omas, el iempo de e olución de la en e medad, el sexo
y el hospi al o coho e de o igen. El iempo de e olución se conside a el iempo desde la
p ime a isi a al euma ólogo has a la inclusión en el es udio. Además, el es ado (posi i o o
nega i o) pa a los an icue pos an i-CCP o el FR se incluyó como co a iables pa a e alua la
independencia de las asociaciones de los o os au oan icue pos. En los análisis de los ac o es
gené icos se conside a on dos ni eles pa a el alelo o alelos de iesgo, po ado o no po ado ,
sin di e encia en e homocigo os y he e ocigo os.
La mayo ía de los análisis conside a on dos ni eles pa a el es ado de cada an icue po,
nega i o o posi i o, aunque en o os análisis se conside a on 3 ni eles siguiendo el p o ocolo
usado en el desa ollo de los c i e ios ACR/EULAR del 2010 pa a la clasi icación de la AR
128. Es os es ni eles se de inie on como posi i o po encima de 3 eces el pun o de co e del
ensayo pa a ese an icue po (posi i o al o), posi i o po debajo de 3 eces el pun o de co e
(posi i o bajo) y nega i o. El es ado nega i o pa a el an icue po o combinaciones de
an icue pos se omó siemp e como e e encia en los análisis.
Algunos de los análisis pa a e alua el papel de los an icue pos an i-AcO n se hicie on
median e eg esión logís ica. Las a iables ue on las pun uaciones o o gadas a los
an icue pos según los c i e ios de clasi icación ACR/EULAR 2010 (2 o 3 pun os), o una
pun uación igual al núme o de an icue pos (p esencia de 1, 2 o 3 an icue pos conside ando
an i-CCP, FR y an i-AcO n), o una combinación de los dos modelos. Como e e encia en
es os es modelos se ológicos se omó la ausencia simul ánea de an icue pos an i-CCP, FR y
an i-AcO n. Además, el impac o en la clasi icación de los es modelos se e aluó eniendo en
cuen a el componen e no se ológico de los c i e ios de clasi icación ACR/EULAR 2010. Pa a
ello se emplea on dos es a egias dis in as. La p ime a consis ió en suma las pun uaciones no
se ológica y se ológica. En es e análisis, los c i e ios ACR/EULAR del 2010 se compa a on
con una pun uación basada en la conco dancia: 5 pun os pa a la p esencia de 3 an icue pos, 3
pun os pa a 2 an icue pos, 1 pun o pa a 1 an icue po y 0 pun os pa a la ausencia de
an icue pos; y o a pun uación con una combinación de conco dancia con los c i e ios del
2010: 5 pun os pa a la p esencia de 3 o 2 an icue pos con í ulos al os de an i-CCP o FR, 3
pun os pa a 3 o 2 an icue pos con í ulos bajos de an i-CCP o FR, 1 pun o pa a la p esencia de
1 an icue po independien emen e de los í ulos y 0 pun os pa a el es o. La segunda es a egia
consis ió en clasi ica los pacien es median e eg esión logís ica empleando como a iables la
pa e se ológica de cada modelo y cada uno de los componen es de la pa e no se ológica
(a iculaciones implicadas, eac an es de ase aguda y du ación de los sín omas) y ijando la
sensibilidad en el 80%.
El ni el de ajus e de los modelos de eg esión logís ica se e aluó empleando dos
es adís icos, la R2 de Nagelke ke y el C i e io de In o mación de Akaike (AIC). La R2 de
Nagelke ke es ima el alo p edic i o del modelo como la educción p opo cional del e o de
MATERIAL Y MÉTODOS
67
la a ianza, de o ma que cuan o mayo es su alo mayo es la educción del e o y po lo
an o mejo es el ajus e del modelo a los da os. El AIC ealiza una es imación ela i a de la
in o mación que se pie de en cada modelo po lo que alo es más pequeños indican un mejo
modelo. Una di e encia >2 en el alo de AIC indica que un modelo se ajus a mejo a los
da os en compa ación con el o o, pe o la di e encia no se conside a no able has a que es >10
319.
Es os análisis se ealiza on empleando el so wa e S a is ica 7.0 (S a So Inc., Tulsa,
Oklahoma, USA) o empleando la aplicación Jamo i de R 320,321.
8.4. ANÁLISIS DEL RENDIMIENTO DIAGNÓSTICO
Los pa áme os u ilizados pa a e alua la u ilidad de los an icue pos o combinaciones de
an icue pos en la clasi icación de los pacien es con EA ue on la sensibilidad, la especi icidad,
el alo p edic i o posi i o (VPP), el alo p edic i o nega i o (VPN), la azón de
e osimili ud posi i a (RV+), la azón de e osimili ud nega i a (RV-) y el á ea bajo la cu a
(AUC) de la cu a ope a i a del ecep o (ROC). La sensibilidad indica la capacidad de la
p ueba diagnós ica pa a de ec a un suje o que padece la en e medad, mien as que la
especi icidad es la capacidad de la p ueba diagnós ica pa a de ec a un suje o sin la
en e medad. Los alo es p edic i os indican la p obabilidad de padece o no una en e medad
una ez que se conoce el esul ado de la p ueba diagnós ica. Es os alo es miden la e icacia
eal de una p ueba diagnós ica y dependen de la p e alencia de la en e medad en la población.
La azón de e osimili ud combina la sensibilidad y la especi icidad de una p ueba
diagnós ica. Se de ine como la elación de la p obabilidad de ob ene un esul ado posi i o o
nega i o en suje os en e mos y la p obabilidad de ob ene ese mismo esul ado en suje os sin
la en e medad. Una p ueba diagnós ica ú il debe ene un alo de RV- ce cano a 0 y un alo
de RV+ al o. La cu a ROC se cons uye median e la ep esen ación de la sensibilidad de una
p ueba diagnós ica en el eje de las o denadas y el alo 1-especi icidad en el eje de abscisas
pa a di e en es pun os de co e de la p ueba diagnós ica. La ep esen ación de es os alo es es
una cu a que con iene un á ea de e minada denominada AUC. Una AUC de 0.5 indica que la
p ueba no iene alo diagnós ico, mien as que una AUC de 1 indica un alo diagnós ico
pe ec o. Las cu as ROC de las que se ob u ie on los alo es de AUC se ealiza on el
p og ama SPSS 15.0 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA).
Los esul ados de la clasi icación de pacien es a pa i de modelos de clasi icación que
combinan un componen e se ológico y no se ológico se exp esa on como sensibilidad
( e dade os posi i os/pacien es con AR obse ados), especi icidad ( e dade os
nega i os/pacien es sin AR obse ados) y exac i ud ([ e dade os posi i os + e dade os
nega i os]/ odos los pacien es). Los alo es de sensibilidad y especi icidad se compa a on con
la p ueba de McNema pa a ablas de con ingencia pa eadas.
8.5. ANÁLISIS DE LA MORTALIDAD DE LOS CONTROLES SANOS
Se u ilizó la alo ación del es ado de salud de los con oles median e un análisis de la
mo alidad como una ga an ía adicional 322. Pa a ello se calculó la asa de mo alidad
es anda izada (SMR, S anda dized Mo ali y Ra e po sus siglas en inglés) que co esponde a
la elación en e las de unciones obse adas en los con oles y las de unciones espe adas en
Lo ena Rod íguez Ma ínez
68
una población de e e encia según la asa de mo alidad es a i icada po sexo y edad. Una
SMR >1 indica que la mo alidad de los con oles es supe io a la de la población de
e e encia, y po lo an o su es ado de salud es peo que el es ado de salud gene al y pod ían
no se conside ados como suje os sanos. Como población de e e encia se seleccionó la de la
p o incia de A Co uña, donde la mayo ía de los con oles incluidos en es e p oyec o enían su
esidencia. Los con oles se eclu a on desde el 2001 has a el 2009 y la alo ación del es ado
inal se ealizó en no iemb e de 2015. Como pun o inal pa a cada indi iduo se conside ó el
año de allecimien o o la echa de la úl ima isi a o análisis médico ecopilada en la base de
da os del JANUS (da os censu ados). No se analiza on las causas especí icas de allecimien o
ya que la inalidad de es e análisis e a ob ene una idea gene al del es ado de salud. El año de
e e encia pa a e alua la SMR ue 2013, calculado como el p omedio del úl imo año en el
que se disponían da os de los con oles. Las asas de mo alidad de la población de A Co uña
se ob u ie on del Ins i u o Nacional de Es adís ica (INE), exp esadas como de unciones po
cada 1000 habi an es en unción del sexo y de la edad ag upada en ca ego ías de 5 años.
RESULTADOS
75
1.1. ANTICUERPOS FRENTE A ESPECIFICIDADES FINAS CITRULINADAS EN PACIENTES CON AR
Y CONTROLES
Los an icue pos en e a un pép ido ci ulinado de i ado de la his ona H4 (cH4/39-40) se
e alua on en pacien es con AR y con oles p o enien es del Hospi al Clínico Uni e si a io de
San iago de los que se disponía de mues a de sue o su icien e. Los pacien es con AR
p esen aban algunas ca ac e ís icas di e en es de las de los pacien es de las dos colecciones
es udiadas en el abajo que desc ibió la inmunodominancia del pép ido cH4/39-40 (Tabla 8):
nues os pacien es e an más jó enes que los pacien es de la colección INA y la ecuencia de
umado es e a no ablemen e más baja en compa ación con las o as dos colecciones Además,
nues os pacien es pe enecen a un g upo é nico di e en e de los pacien es de la colección
INA.
Tabla 8. Compa ación de las ca ac e ís icas clínicas de los pacien es con AR u ilizados pa a
es udia los an icue pos an i-cH4/39-40 en San iago y en Mani oba. Las a iables de edad y
iempo de e olución se ep esen an como la media y la DS mien as que el es o de a iables se
ep esen an como po cen aje (%). Los da os de las colecciones de Mani oba e INA (Indigenous No h
Ame ican) se ob u ie on del abajo de Meng y col. 217. Da o disponible pa a < 98% de los pacien es
de la colección de San iago: iempo de e olución 95.6%, umado es 92.1%, e osiones 95.2% y FR
96.0%. El p ime alo de P co esponde a la compa ación en e los pacien es con AR de las
colecciones de San iago y de Mani oba. El segundo alo de P mues a la compa ación de los
pacien es de la colección de San iago y los de la colección INA.
Ca ac e ís icas clínicas
San iago
(n = 520)
Mani oba
(n = 116)
INA
( n = 130)
PSan iago s
Mani oba
PSan iago s
INA
Edad, años
61 (14)
59 (13)
46 (13)
0.16
<1.0x10-4
Tiempo de e olución de la
en e medad, años
14 (11)
-
-
-
-
G upo é nico
Eu opeos
Eu opeo-
Ame icanos
Indígenos
No eame icanos
-
-
Muje es
77
80
84
0.42
0.08
Fumado es
20
57
77
2.0x10-15
1.7x10-34
E osiones
66
-
-
-
-
An i-CCP posi i o
64
67
69
0.54
0.28
FR posi i o
60
-
-
-
-
La eac i idad en e al pép ido con ol (H4/39-40, el mismo pép ido sin ci ulina ) ue
mínima an o en los pacien es con AR como en los con oles (Figu a 8). En cambio, la
eac i idad en e el pép ido ci ulinado cH4/39-40 ue signi ica i amen e supe io en los
pacien es con AR en compa ación con los con oles ( í ulo de an icue pos an i-cH4/39-40:
mediana [IQR] = 3.01 [0.82-17.4] s. 0.60 [0.33-1.07] en pacien es con AR y con oles
espec i amen e; P = 2.5x10-38, Figu a 8). Los ni eles de an icue pos an i-cH4/39-40 ue on
no ablemen e más ele ados en los pacien es an i-CCP posi i os en compa ación con los
pacien es an i-CCP nega i os ( í ulo de an icue pos an i-cH4/39-40: mediana [IQR] = 11.67
[3.11-29.30] s. 0.68 [0.36-1.27] en pacien es an i-CCP+ y an i-CCP- espec i amen e; P =

Lo ena Rod íguez Ma ínez
76
2.8x10-55), y no se obse a on di e encias en e los í ulos de ec ados en los pacien es an i-
CCP nega i os y los con oles.
Figu a 8. Ni eles de an icue pos en e al pép ido con ol H4/39-40 y ci ulinado cH4/39-40 en
los pacien es con AR es a i icados en unción a su es ado pa a los an icue pos an i-CCP y en los
con oles de la colección de San iago. La línea oja ep esen a la mediana de los í ulos (UA) en cada
g upo.
La sensibilidad de ec ada pa a los an icue pos an i-cH4/39-40 en los pacien es con AR de
San iago ue del 48.1% en el o al y del 72.8% en el subg upo de pacien es con an icue pos
an i-CCP. Es as ci as son in e io es a las desc i as p e iamen e. Especialmen e impo an e es
el po cen aje en los an i-CCP posi i os, in e io al 94.9% y al 92.2% desc i os en los
pacien es de la colección de Mani oba e INA espec i amen e (P <1.1x10-4 pa a la
compa ación s. San iago) y que es la base pa a su p opues a inmunodominancia.
1.2. RELACIÓN ENTRE LOS AUTOANTICUERPOS ANTI-CH4/39-40 Y OTROS ANTICUERPOS
FRENTE A ESPECIFICIDADES FINAS CITRULINADAS
Los pacien es con AR de la colección de San iago ambién disponían de in o mación sob e el
í ulo y es ado de o os an icue pos en e a di e en es pép idos ci ulinados (Tabla 9).
Ap oximadamen e la mi ad de los pacien es p esen a on an icue pos an i-cFibB36-52 y an i-
cVim60-75, una acción simila a la de ec ada pa a los an icue pos an i-cH4/39-40. Los
an icue pos que econocen el pép ido ci ulinado de la enolasa CEP-1 es u ie on p esen es en
un e cio de los pacien es, mien as que los an icue pos an i-cFibA27-43 y an i-cVim2-17
ue on posi i os en menos del 20% de los pacien es. La eac i idad de los an icue pos en e a
RESULTADOS
77
las especi icidades inas ci ulinadas se encon ó p e e en emen e en el subg upo an i-CCP
posi i o (Tabla 9). Los an icue pos más p e alen es en es e subg upo ue on los que
econocían el pép ido cH4/39-40, pe o es u ie on seguidos de ce ca po los que econocían
cFibB36-52. Los demás an icue pos p esen a on ecuencias meno es en es e subg upo de
pacien es siguiendo la misma dis ibución que en el conjun o o al de los pacien es (Tabla 9).
Tabla 9. P e alencia de los an icue pos en e a di e en es especi icidades inas en odos los
pacien es con AR y en los pacien es an i-CCP posi i os de la colección de San iago. La
p e alencia se ep esen a como po cen aje (%). Los an icue pos se mues an en o den descenden e de
p e alencia en el subg upo AR an i-CCP posi i o. El p ime alo de P se ha calculado con la p ueba
de McNema en odos los pacien es con AR, mien as que el segundo alo de P se ha calculado en los
pacien es con AR an i-CCP posi i os.
AR
An icue pos
Todos
an i-CCP+
P
P
an i-cH4/39-40
247 (48.1)
238 (72.8)
e
e
an i-cFibB36-52
249 (48.0)
216 (64.9)
0.9
6.4x10-3
an i-cVim60-75
252 (48.6)
196 (58.9)
0.9
3.0x10-5
an i-CEP-1
169 (32.9)
157 (47.7)
1.6 x10-10
2.0 x10-12
an i-cFibA27-43
79 (15.2)
62 (18.6)
8.1 x10-33
2.4 x10-38
an i-cVim2-17
41 (7.9)
37 (11.1)
1.9 x10-43
3.9 x10-43
Los análisis p e ios no con i maban de o ma cla a la inmunodominancia de los an icue pos
an i-cH4/39-40 en compa ación con las o as especi icidades inas. Pa a comple a el es udio
se explo ó la elación de los seis an icue pos en e a pép idos ci ulinados en e sí y con los
an icue pos an i-CCP es un análisis de componen es p incipales (ACP). Es e análisis mos ó
que los dos p ime os componen es e an capaces de explica ce ca del 60% de la a iabilidad
o al. El núme o de componen es necesa ios pa a explica el 80% de a iabilidad ue cua o.
Po lo an o, la educción de 6 an icue pos a 4 componen es p incipales indica que los
an icue pos no son edundan es.
O a ep esen ación g á ica de la elación en e los dis in os ACPA más inexac a pe o más
sencilla de in e p e a se ob u o median e MDS de la ma iz de conco dancias de los
an icue pos (Tabla 10). En es e g á ico (Figu a 9), los an icue pos en e a pép idos
ci ulinados mos a on una dispe sión conside able, sin subg upos cla amen e de inidos. Ni
siquie a en e los an icue pos que econocen pép idos ci ulinados de i ados de la misma
p o eína, como los di igidos en e a los pép idos cFibB36-52 y cFibA27-43 del ib inógeno o
los pép idos cVim2-17 y cVim60-75 de la imen ina, a pesa de que odos mos a on
conco dancias signi ica i as. Cabe des aca que los an icue pos en e a pép idos ci ulinados
más ce canos a los an i-CCP en la ep esen ación ue on los an icue pos an i-cH4/39-40
Lo ena Rod íguez Ma ínez
78
(Figu a 9), lo que concue da con la no able conco dancia de los an i-cH4/39-40 (γ = 0.96) con
los an i-CCP sob e la del es o de los an icue pos.
Tabla 10. Ma iz de conco dancias de los an icue pos en e a especi icidades inas ci ulinadas
y los an i-CCP. La conco dancia se ha e aluado con el coe icien e γ de Goodman y K uskal.
cH4/39-40
cFibB36-52
cVim60-75
CEP-1
cFibA27-43
cVim2-17
CCP
cH4/39-40
1.00
cFibB36-52
0.85
1.00
cVim60-75
0.60
0.52
1.00
CEP-1
0.80
0.64
0.49
1.00
cFibA27-43
0.67
0.91
0.53
0.32
1.00
cVim2-17
0.70
0.84
0.61
0.35
0.80
1.00
CCP
0.96
0.79
0.54
0.86
0.39
0.70
1.00
Figu a 9. Rep esen ación de la conco dancia de los an icue pos en e a seis pép idos
ci ulinados y los an icue pos an i-CCP en pacien es con AR de la colección de San iago. Pa a
acili a la in e p e ación de la igu a se mues a el nomb e del an ígeno que econocen los an icue pos.
Un hallazgo simila se ob u o al emplea la ma iz de co elaciones en la ep esen ación MDS
en luga de la ma iz de conco dancias (Tabla 11 y Figu a 10). La co elación en e los í ulos
de los an icue pos an i-cH4/39-40 y an i-CCP ue simila a la obse ada en e es os úl imos y
Sca e plo 2D
Final Con igu a ion, dimension 1 s. dimension 2
cH4/39-40
CEP1
cFibB36-52
cVim60-75
cFibA27-43
cVim2-17
CCP
-1.2 -0.8 -0.4 0.0 0.4 0.8 1.2 1.6
Dimension 1
-1.2
-0.8
-0.4
0.0
0.4
0.8
1.2
1.6
Dimension 2
RESULTADOS
79
los an icue pos an i-cFibB36-52 ( ho = 0.40 y 0.41, espec i amen e) aunque ambas ue on
supe io es a las obse adas en el análisis de los o os an icue pos.
Tabla 11. Ma iz de co elaciones de los an icue pos en e a especi icidades inas ci ulinadas y
los an i-CCP. Las co elaciones se han e aluado con el coe icien e de co elación ρ de Spea man en
los pacien es con AR posi i os pa a cada pa de an icue pos. En neg i a se esal an las co elaciones
signi ica i as.
cH4/39-40
cFibB36-52
cVim60-75
CEP-1
cFibA27-43
cVim2-17
CCP
cH4/39-40
1.00
cFibB36-52
0.43
1.00
cVim60-75
0.21
0.33
1.00
CEP-1
0.24
0.24
0.18
1.00
cFibA27-43
0.01
0.13
0.29
0.00
1.00
cVim2-17
-0.31
0.17
-0.04
-0.18
0.45
1.00
CCP
0.40
0.41
0.13
0.21
0.03
0.18
1.00
Figu a 10. Rep esen ación de la co elación en e los í ulos de los an icue pos en e a seis
pép idos ci ulinados y los an icue pos an i-CCP en pacien es con AR de la colección de
San iago. La dis ancia en e dos pun os en la ep esen ación iene una elación in e sa con la
co elación de los dos an icue pos. Pa a acili a la in e p e ación de la igu a se mues a el nomb e del
an ígeno que econocen los an icue pos.
Sca e plo 2D
Final Con igu a ion, dimension 1 s. dimension 2
cH4/39-40
CEP1
cFibB36-52
cVim60-75
cFibA27-43
cVim2-17
CCP
-1.2 -0.8 -0.4 0.0 0.4 0.8 1.2 1.6
Dimension 1
-1.2
-0.8
-0.4
0.0
0.4
0.8
1.2
1.6
Dimension 2
Lo ena Rod íguez Ma ínez
80
Un análisis adicional consis ió en compa a la p e alencia de los an icue pos an i-CCP y
en e a especi icidades inas ci ulinadas en los pacien es con AR de la colección de San iago
con las de o as colecciones de pacien es pa a e alua la ep esen a i idad de los esul ados
an e io es (Tabla 12). En es e análisis se obse ó que aunque exis e a iabilidad en e
es udios, las es especi icidades inas más comunes en nues os pacien es son las más
comunes en las demás colecciones, pe o ninguna de ellas mues a un papel des acado
ep oducible.
Tabla 12. P e alencia de los an icue pos an i-CCP y los an icue pos en e a pép idos
ci ulinados incluidos en el p esen e es udio en a ias colecciones de pacien es con AR. La
p e alencia de los an icue pos se ep esen a como po cen aje (%). Colecciones de pacien es con AR en
las que se han e aluado alguno de los an icue pos en e a especi icidades inas ci ulinadas de es e
abajo: STG, Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago (España); CCH, Cha ing C oss Hospi al
(Reino Unido) 289; UUH, Umeå Uni e si y Hospi al (Suecia) 323; WTCCC, Wellcome T us Case
Con ol Conso ium (Reino Unido) 323; NARAC, No h Ame ican Rheuma oid A h i is Conso ium
(E.E.U.U) 323; LEAC, Leiden Ea ly A h i is Clinic (Países Bajos) 324; MB, Medical Biobank (Suecia)
143; EIRA, Epidemiological In es iga ion o Rheuma oid A h i is (Suecia) 325.
An icue pos
STG
520
CCH
102
UUH
538
LEAC
661
MB
199
EIRA
2825
WTCCC
1948
NARAC
1866
an i-CCP
64
71
69
53
75
64
78
72
an i-CEP-1
33
37
51
-
67
47
55
55
an i-cFibB36-52
48
-
34
36
65
46
46
48
an i-cVim60-75
49
-
46
26
29
44
64
60
an i-cFibA27-43
15
-
-
14
-
-
-
-
an i-cVim2-17
8
-
12
6
11
31
30
51
1.3. RELACIÓN DE LOS ANTICUERPOS FRENTE A PÉPTIDOS CITRULINADOS CON
CARACTERÍSTICAS DE LA AR
Los an icue pos an i-CCP se de ec a on con mayo ecuencia en los pacien es con AR con
e osiones en compa ación con los que no enían e osiones, así como en los po ado es de
algún alelo del EC espec o de los no po ado es (Tabla 13 y Tabla 15). Sin emba go, la
ecuencia ue simila independien emen e del hábi o abáquico (Tabla 14) o de la p esencia o
ausencia del alelo de iesgo PTPN22 (Tabla 16). En cuan o a los an icue pos en e a los
pép idos ci ulinados especí icos, su ecuencia ambién ue en gene al signi ica i amen e
mayo en los pacien es con e osiones y con EC (Tabla 13 y Tabla 15). Solo la ecuencia de
los an icue pos an i-cVim2-17 no es u o signi ica i amen e aumen ada en los pacien es con
e osiones, y la de los an icue pos an i-cFibA27-43 en los pacien es po ado es del EC. La
elación de los an icue pos con el hábi o abáquico y con alelo de iesgo PTPN22 ue
di e en e, siendo los an icue pos an i-cFib36-52 los únicos que mos a on una p e alencia

RESULTADOS
81
signi ica i amen e supe io en los pacien es umado es en compa ación con los no umado es
(Tabla 14) y los an icue pos an i-cH4/39-40 en los pacien es po ado es en compa ación con
los no po ado es (Tabla 16). Los an icue pos an i-CCP ue on los más ue emen e asociados
con la p esencia de e osiones y EC an o en alo nominal como en signi icación, seguidos de
los an icue pos an i-cH4/39-40 y an i-CEP-1 en el caso de las e osiones y en el o den in e so
en el caso del EC (Tabla 13 y Tabla 15). La asociación con las e osiones en el análisis
condicional con los an icue pos an i-CCP se man u o signi ica i a pa a los an icue pos an i-
cH4/39-40 (OR = 1.87, IC 95% = 1.11 – 3.16; P = 0.02) y an i-CEP-1, aunque con un alo
nominal y una signi icación meno . En cambio, la asociación con el EC se man u o pa a los
an icue pos an i-CEP-1, pe o no pa a los an icue pos an i-cH4/39-40 (OR = 1.06, IC 95% =
0.66 – 1.71; P = 0.8). La asociación de los an icue pos an i-cH4/39-40 con el alelo de iesgo
PTPN22 ozó la signi icación en el análisis condicional con los an icue pos an i-CCP (OR =
1.69, IC 95% = 0.99 – 2.88; P = 0.056), mien as que la asociación con el abaco siguió sin
se signi ica i a (OR = 0.87, IC 95% = 0.48 – 1.59; P = 0.7).
Tabla 13. Asociación de los an icue pos an i-CCP y de los an icue pos en e a pép idos
ci ulinados con la p esencia de e osiones en pacien es con AR. Las ecuencias de los an icue pos
se ep esen an como po cen aje (%).
Posi i idad
Sin e osiones
(n = 170)
Con e osiones
(n = 325)
OR (IC 95%)
P
an i-CCP
42.4
75.7
4.24 (2.85-6.30)
9.0x10-13
an i-cH4/39-40
28.4
58.6
3.57 (2.39-5.34)
5.4x10-10
an i-CEP-1
17.9
39.6
3.01 (1.91-4.75)
1.9x10-6
an i-cFibB36-52
34.7
54.3
2.24 (1.52-3.29)
4.0x10-5
an i-cVim60-75
39.4
52.8
1.72 (1.18-2.51)
4.9x10-3
an i-cFibA27-43
10
17.2
1.87 (1.05-3.34)
0.03
an i-cVim2-17
5.3
8.7
1.70 (0.78-3.69)
0.2
Tabla 14. Asociación de los an icue pos an i-CCP y de los an icue pos en e a pép idos ci ulinados
con el abaquismo en pacien es con AR. Las ecuencias de los an icue pos se ep esen an como
po cen aje (%).
Posi i idad
No umado es
(n = 382)
Fumado es
(n = 97)
OR (IC 95%)
P
an i-CCP
64.4
60.8
0.86 (0.54 - 1.36)
0.5
an i-cH4/39-40
49.1
44.8
0.84 (0.54 - 1.32)
0.5
an i-CEP-1
32.8
29.2
0.84 (0.52 - 1.38)
0.5
an i-cFibB36-52
45.7
58.8
1.70 (1.08 - 2.67)
0.02
an i-cVim60-75
47.8
47.4
0.99 (0.62 - 1.58)
0.95
an i-cFibA27-43
13.6
20.6
1.65 (0.93 - 2.93)
0.09
an i-cVim2-17
6.6
12.4
2.00 (0.97 - 4.16)
0.06
Lo ena Rod íguez Ma ínez
82
Tabla 15. Asociación de los an icue pos an i-CCP y de los an icue pos en e a pép idos ci ulinados
con la p esencia de algún alelo del EC en pacien es con AR. Las ecuencias de los an icue pos se
ep esen an como po cen aje (%).
Posi i idad
EC no po ado
(n = 221)
EC po ado
(n = 299)
OR (IC 95%)
P
an i-CCP
51.6
73.6
2.61 (1.81-3.78)
3.2x10-7
an i-cH4/39-40
39.0
54.9
1.91 (1.33-2.72)
3.8x10-4
an i-CEP-1
22.4
40.7
2.38 (1.60-3.53)
1.6x10-5
an i-cFibB36-52
41.4
52.8
1.59 (1.12-2.26)
7.3x10-3
an i-cVim60-75
39.8
55.0
1.85 (1.30-2.64)
6.4x10-4
an i-cFibA27-43
14.0
16.1
1.17 (0.72-1.91)
0.5
an i-cVim2-17
5.0
10.1
2.13 (1.04-4.35)
0.04
Tabla 16. Asociación de los an icue pos an i-CCP y de los an icue pos en e a pép idos ci ulinados
con la p esencia del alelo PTPN22 en pacien es con AR. Las ecuencias de los an icue pos se
ep esen an como po cen aje (%).
Posi i idad
PTPN22 no po ado
(n = 380)
PTPN22 po ado
(n = 137)
OR (IC 95%)
P
an i-CCP
62.6
68.6
1.30 (0.86-1.98)
0.2
an i-cH4/39-40
44.9
56.6
1.60 (1.08-2.38)
0.02
an i-CEP-1
32.4
33.6
1.06 (0.69-1.61)
0.8
an i-cFibB36-52
45.4
54.0
1.41 (0.95-2.09)
0.08
an i-cVim60-75
47.5
51.8
1.19 (0.80-1.76)
0.4
an i-cFibA27-43
16.3
11.7
0.68 (0.38-1.22)
0.2
an i-cVim2-17
7.4
8.8
1.21 (0.60-2.46)
0.6
RESULTADOS
91
o os au oan icue pos. Po el con a io, los an icue pos an i-AcO n pe manecie on asociados
con la AR cuando se incluye on los an icue pos an i-CCP y FR en el modelo de eg esión
logís ica, incluso cuando se añadie on los an icue pos an i-Ca P (Tabla 20), lo que indica que
los an icue pos an i-AcO n con ienen in o mación es adís icamen e independien e de los o os
au oan icue pos. En el análisis más comple o incluyendo cua o au oan icue pos, la ue za de
la asociación con la AR ue en o den dec ecien e desde los an icue pos an i-CCP (OR=10.0)
has a el FR (OR=2.9), los an icue pos an i-AcO n (OR=1.6) y los an icue pos an i-Ca P
(OR=1.6). La combinación de los dos AAPA sólo mos ó una asociación ma ginalmen e más
ue e que la de los an icue pos an i-AcO n po sepa ado (Tabla 20).
Tabla 20. Análisis de eg esión logís ica de la asociación de los an icue pos an i-pép idos
ace ilados con la AR. Todos los modelos de eg esión incluye on como a iables de ajus e
adicionales la edad, el géne o y la coho e de los pacien es con EA.
Ajus ado po
An icue pos an i-
pép idos ace ilados
OR
IC 95%
P
Ningún an icue po
an i-AcLys
4.4
2.9-6.7
7.0 x10-12
an i-AcO n
6.5
4.5-9.3
2.3 x10-24
AAPA
6.8
4.8-9.6
3.8 x10-27
an i-CCP/FR
an i-AcLys
1.4
0.8-2.5
0.2
an i-AcO n
1.7
1.1-2.8
2.1 x10-02
AAPA
1.8
1.1-2.8
1.2 x10-02
an i-CCP/FR/an i-Ca P
an i-AcLys
1.4
0.8-2.4
0.3
an i-AcO n
1.6
1.0-2.6
4.5 x10-02
AAPA
1.7
1.1-2.7
2.5 x10-02
También se explo ó si la es a i icación de los AAPA po sus í ulos pod ía aumen a su alo
disc imina o io. Pa a ello se de inie on es ni eles pa a los í ulos como se desc ibe en los
c i e ios de clasi icación ACR/EULAR del 2010: nega i o y po encima o po debajo de 3
eces el pun o de co e de los pacien es posi i os (Tabla 21). A di e encia de lo obse ado
pa a los an icue pos an i-CCP y el FR, los í ulos al os de los AAPA no es aban más asociados
con la AR que los í ulos bajos. Es os esul ados excluyen la es a i icación po el í ulo de los
AAPA de las eglas de clasi icación.

Lo ena Rod íguez Ma ínez
92
Tabla 21. Asociación de los an icue pos an i-pép idos ace ilados es a i icados po el í ulo con la
clasi icación como AR. Los í ulos de los an icue pos se di idie on en al o y bajo ela i o a es eces
el pun o de co e pa a de ini pacien es posi i os. Los análisis de eg esión logís ica incluye on la
edad, el géne o y la coho e como a iables adicionales.
OR
IC 95%
P
an i-CCP o FR
bajo s. nega i o
2.2
1.4-3.4
4.6x10-4
al o s. nega i o
30.4
20.5-45.2
1.5 x10-64
al o s. bajo
12.5
7.3-21.3
1.4 x10-20
an i-AcLys
bajo s. nega i o
3.4
1.9-6.0
3.8x10-5
al o s. nega i o
5.7
3.1-10.4
1.2x10-8
al o s. bajo
2.0
0.9-4.9
0.1
an i-AcO n
bajo s. nega i o
7.1
3.9-13.0
1.9x10-10
al o s. nega i o
6.3
4.1-9.6
2.0 x10-17
al o s. bajo
0.9
0.4-1.8
0.7
2.2. RELACIÓN ENTRE LOS AUTOANTICUERPOS
Los dos AAPA mos a on una conco dancia no ablemen e al a en el es ado, an o en los
pacien es con AR (γ = 0.89, P = 8.9 x10-70) como en los no AR (γ = 0.98, P = 1.5 x10-119).
Como consecuencia, sus elaciones con los an icue pos an i-CCP y FR ue on simila es
(Figu a 12). Pa a los an icue pos an i-AcO n, los dos subg upos más g andes en los pacien es
con AR es aban o mados po los iple posi i os y po los doble posi i os pa a an i-CCP y
FR (Figu a 12A). El subg upo de pacien es posi i os únicamen e pa a los an icue pos an i-
AcO n, que es pa icula men e impo an e pa a aumen a la sensibilidad de la clasi icación de
pacien es con AR, ep esen ó sólo el 2.3% del o al (o el 9.3% de los pacien es con AR
se onega i os pa a FR y an icue pos an i-CCP). En cambio, en los pacien es no AR se
obse ó una dis ibución comple amen e di e en e (Figu a 12B) en los que el subg upo más
g ande se co espondía con el de pacien es nega i os pa a los es an icue pos, seguidos po
los pacien es posi i os pa a un único an icue po: FR, an i-AcO n o an i-CCP.
El análisis de la elación de los an icue pos empleando los an icue pos an i-AcLys mos ó
una dis ibución idén ica a la obse ada con los an icue pos an i-AcO n en los pacien es del
subg upo no AR (Figu a 12D). Po el con a io, la dis ibución de los an icue pos an i-AcLys
en los pacien es con AR no se asemejó a la de los an icue pos an i-AcO n: es aba dominada
po el subg upo de pacien es doble posi i os pa a los an icue pos an i-CCP y FR seguido de
los pacien es iple nega i os y un educido subg upo de pacien es iple posi i os (Figu a
12C). Cabe des aca que los dos subg upos c í icos pa a mejo a la clasi icación como AR
RESULTADOS
93
ue on menos ecuen es al e alua los an icue pos an i-AcLys en compa ación con los an i-
AcO n (Figu a 12A y Figu a 12C): los pacien es posi i os sólo pa a el AAPA y los pacien es
iple posi i os que con ibuyen a la clasi icación basada en la conco dancia de an icue pos.
Figu a 12. Relaciones de los AAPA con FR y an icue pos an i-CCP en los pacien es con EA. Las
elaciones de los an icue pos an i-AcO n se mues an en las igu as A y B, mien as que las elaciones
de los an icue pos an i-AcLys se mues an en las igu as C y D. Las igu as A y C ep esen an los
pacien es con AR, mien as que las igu as B y D mues an los pacien es no AR. Los po cen ajes
mos ados en los g á icos se e ie en al o al de pacien es.
2.3. PARÁMETROS DIAGNÓSTICOS DE LOS AAPA
La capacidad de los AAPA pa a iden i ica los pacien es con EA que inalmen e desa olla án
AR se e aluó empleando pa áme os u ilizados comúnmen e pa a alo a ma cado es
diagnós icos. Los dos pa áme os más impo an es, sensibilidad y especi icidad, se
compa a on con el es ánda ac ual de los c i e ios de clasi icación ACR/EULAR 2010 que
combina la posi i idad pa a los an icue pos an i-CCP y/o FR (“an i-CCP o FR”) 164 (Tabla
22). Es e análisis mos ó que los AAPA ue on no ablemen e menos sensibles en compa ación
con el es ánda ac ual cuando se conside a on odos los pacien es con AR. Además, los
AAPA es u ie on p esen es en menos del 11% de los pacien es an i-CCP nega i os o an i-
CCP/FR doble nega i os. Po el con a io, los AAPA mos a on una ele ada especi icidad
(Tabla 22). Su alo ue supe io al de la especi icidad de la combinación “an i-CCP o FR” y
se man u o en los dos subg upos de pacien es se onega i os. Es a ele ada especi icidad
Lo ena Rod íguez Ma ínez
94
sugi ió la posibilidad de ob ene una mejo clasi icación al inclui un nue o an icue po con el
ope ado o en la combinación “an i-CCP o FR”.
Las combinaciones de es y cua o an icue pos mos a on un aumen o modes o, aunque
signi ica i o en la sensibilidad (Tabla 22). El aumen o ue de 1.4% pa a los an icue pos an i-
AcLys, 2.2% pa a los an icue pos an i-AcO n y 2.5% pa a los AAPA (P < 0.015 pa a odas
las compa aciones empleando como e e encia el c i e io “an i-CCP o FR”). Es as mejo as se
asocia on con un descenso en la especi icidad de 3.7% pa a los an icue pos an i-AcLys, 4.9%
pa a los an icue pos an i-AcO n y 5.4% pa a los AAPA (P < 2.5x10-5 pa a odas las
compa aciones empleando como e e encia el c i e io “an i-CCP o FR”). En o as palab as, la
elación cos e-bene icio de las combinaciones de an icue pos ue de 1:2.2 pa a la combinación
“an i-CCP o FR o an i-AcO n” y “an i-CCP o FR o an i-AcO n o an i-AcLys”. Es e a io
indica que po cada nue o pacien e co ec amen e clasi icado como AR se clasi ica án
inco ec amen e 2.2 pacien es sin AR como si u ie an AR. Po su pa e, el a io cos e-
bene icio con la combinación “an i-CCP o FR o an i-AcLys” ue de 1:2.6 y el a io
ecien emen e desc i o pa a la combinación “an i-CCP o FR o an i-Ca P” ue de 1:3.7 176.
Es os alo es no ue on signi ica i amen e di e en es en e ellos.
Tabla 22. Sensibilidad y especi icidad de los AAPA pa a la clasi icación como AR de los
pacien es con EA. Los an icue pos se conside a on po sepa ado y en combinaciones con el ope ado
o. Los pa áme os de sensibilidad, especi icidad se e alua on en odos los pacien es con EA ( odos),
en el subg upo de pacien es an i-CCP nega i o (an i-CCP-) y en subg upo de pacien es an i-CCP y FR
doble nega i os (an i-CCP-/FR-). na = no aplicable.
an i-
AcLys
an i-
AcO n
AAPA
an i-CCP
o FR
An i-CCP
o FR o
an i-AcLys
An i-CCP
o FR o
an i-AcO n
an i-CCP
o FR o
AAPA
Sensibilidad
odos
21.1
36.1
39.7
75.7
77.1
77.9
78.2
an i-CCP-
5.6
8.4
9.6
27.9
32.6
34.6
35.4
an i-CCP-/FR-
6.3
9.3
10.2
na
6.3
9.3
10.2
Especi icidad
odos
94.2
91.5
90.6
79.5
75.8
74.6
74.1
an i-CCP-
95.1
93.4
92.6
87
82.9
81.7
81.1
an i-CCP-/FR-
95.3
93.9
93.1
na
95.3
93.9
93.1
Como al e na i a, se e aluó el alo de la combinación de los AAPA con el FR y los
an icue pos an i-CCP empleando el ope ado y, pe o es e en oque esul ó en una disminución
conside able en la sensibilidad, el pa áme o que necesi a se mejo ado pa a de ec a pacien es
con AR (Tabla 23). Ninguno de los o os pa áme os analizados (VPP, VPN, RV+, RV- y
AUC) mos ó una mejo ía signi ica i a al inclui los AAPA espec o del es ánda “an i-CCP o
FR” (Tabla 24).
RESULTADOS
95
Tabla 23. Sensibilidad y especi icidad de los AAPA en las combinaciones con el FR y los
an icue pos an i-CCP usando el ope ado y pa a la clasi icación como AR de los pacien es con
EA. La sensibilidad y la especi icidad se e alua on en odos los pacien es con EA ( odos) y en el
subg upo de pacien es an i-CCP nega i os (an i-CCP-).
an i-CCP o FR
(FR o an i-CCP)
y an i-AcLys
(FR o an i-CCP)
y an i-AcO n
(FR o an i-CCP)
y AAPA
Sensibilidad
odos
75.7
19.6
33.8
37.2
an i-CCP-
27.9
1.1
1.7
2.2
Especi icidad
odos
79.5
97.9
96.4
96.1
an i-CCP-
87.0
99.2
98.8
98.6
Tabla 24. Pa áme os pa a e alua el alo diagnós ico de los AAPA y sus combinaciones. Los
an icue pos se conside a on po sepa ado y en las combinaciones con el ope ado o. Los pa áme os de
alo p edic i o posi i o (VPP) y nega i o (VPN), azón de e osimili ud posi i a (RV+) y nega i a
(RV-) y á ea bajo la cu a (AUC) se e alua on en odos los pacien es con EA ( odos), en el subg upo
de pacien es an i-CCP nega i os (an i-CCP-) y en el subg upo de pacien es an i-CCP y FR doble
nega i os (an i-CCP-/FR-). na = no aplicable.
an i-AcLys
an i-AcO n
an i-CCP o
FR
An i-CCP
o FR o
an i-AcLys
An i-CCP
o FR o
an i-AcO n
VPP
odos
78.2
80.9
78.6
75.8
75.3
an i-CCP-
29.4
31.9
44.2
41.1
41.1
an i-CCP-/FR-
28.6
31.6
na
28.6
31.6
VPN
odos
54.8
59.0
76.6
77.1
77.2
an i-CCP-
73.3
73.5
76.6
77.1
77.2
an i-CCP-/FR-
77.1
77.2
na
77.1
77.2
RV+
odos
3.6
4.3
3.7
3.2
3.1
an i-CCP-
1.1
1.3
2.2
1.9
1.9
an i-CCP-/FR-
1.3
1.5
na
1.3
1.5
RV-
odos
0.8
0.7
0.3
0.3
0.3
an i-CCP-
1.0
1.0
0.8
0.8
0.8
an i-CCP-/FR-
1.0
1.0
na
1.0
1.0
AUC
odos
0.58
0.64
0.78
0.77
0.76
an i-CCP-
0.50
0.51
0.58
0.58
0.58
an i-CCP-/FR-
0.51
0.52
na
0.51
0.52
Lo ena Rod íguez Ma ínez
96
2.4. MEJORA DE LA CLASIFICACIÓN SEROLÓGICA BASADA EN LA CONCORDANCIA DE
ANTICUERPOS
Las elaciones de los an icue pos an i-CCP, FR y an i-AcO n p esen adas an e io men e
(Figu a 12A y Figu a 12B) sugi ie on que su conco dancia pod ía se ú il pa a la clasi icación
de la AR. Es a hipó esis es aba apoyada además po la disc iminación que o ece el núme o
de an icue pos posi i os en elación con el componen e se ológico de los c i e ios de
clasi icación ACR/EULAR del 2010 (Tabla 25). Po lo an o, se compa ó di ec amen e el
componen e se ológico de los c i e ios del 2010 con la conco dancia de an icue pos en
elación con su asociación con la AR en dos modelos de eg esión logís ica sepa ados y en un
modelo que combinaba los dos componen es (Tabla 26). En las eg esiones logís icas
ealizadas po sepa ado, el alo más al o de OR (48.7) ue pa a la p esencia conco dan e de
es an icue pos (FR, an i-CCP y an i-AcO n). El siguien e alo más ele ado ue pa a la
p esencia conco dan e de dos an icue pos (OR = 28.5) y a un ni el simila pa a los í ulos
al os de an icue pos an i-CCP o FR (OR = 25.9). Es e mismo o den se obse ó en el modelo
de eg esión que combinaba los dos componen es se ológicos (OR = 11.4, 7.9 y 4.4
espec i amen e, Tabla 26). Es a je a quía indica que la conco dancia de an icue pos iene un
peso mayo que el ni el más al o de la se ología de los c i e ios del 2010, po lo que la
conco dancia pod ía mejo a la clasi icación que se ob iene con el componen e se ológico del
2010.
Tabla 25. Tabla de con ingencia de los pacien es con EA según la pun uación se ológica de los
c i e ios de clasi icación del 2010 y el núme o de an icue pos posi i os conco dan es (FR, an i-
CCP y an i-AcO n). Cada celda de la abla con iene el núme o de pacien es con EA y, en e
pa én esis, el po cen aje del o al de la ila que ep esen an.
Conco dancia de an icue pos
pun uación
0Ab
1Ab
2Ab
3Ab
C i e io
se ológico
2010
3
0 (0)
57 (14.5)
169 (43.1)
166 (42.3)
2
0 (0)
90 (80.4)
19 (17.0)
3 (2.7)
0
514 (93.1)
38 (6.9)
0 (0)
0 (0)

RESULTADOS
97
Tabla 26. Compa ación de los modelos de eg esión logís ica pa a la clasi icación de la AR
basados en el componen e se ológico de los c i e ios del 2010, la conco dancia de an icue pos y
la combinación de los dos. Se mues a la OR y el in e alo de con ianza del 95%. Los es a os en
cu si a no con ibuye on de o ma signi ica i a a la clasi icación de la AR. 2010 ACR/EULAR:
componen e se ológico de los c i e ios ACR/EULAR de clasi icación de la AR del 2010; Ccdc. an i-
AcO n: conco dancia de an icue pos an i-CCP, FR y an i-AcO n; 2010 + Ccdc. An i-AcO n:
combinación de los dos componen es se ológicos an e io es.
2010 ACR/EULAR
Ccdc. an i-AcO n
2010 + Ccdc. an i-AcO n
Ca ego ía
OR (IC 95%)
OR (IC 95%)
OR (IC 95%)
3
25.9 (17.9-37.6)
-
4.4 (1.9-10.4)
2
2.5 (1.6-3.8)
-
1.2 (0.5-2.6)
3Ab
-
48.7 (25.5-93.0)
11.4 (4.0-32.9)
2Ab
-
28.5 (17.1-47.4)
7.9 (3.0-20.4)
1Ab
-
2.7 (1.9-3.9)
1.6 (0.8-3.2)
Pa a demos a que ealmen e se ob iene una mejo ía se compa ó la calidad del ajus e de los
modelos de eg esión con los pa áme os R2 y AIC. El alo de R2 es mejo cuando es más
al o, como en el modelo de la conco dancia (0.451) compa ado con el componen e se ológico
del 2010 (0.422). Po el con a io, el AIC es mejo cuando su alo es meno , como sucede de
nue o en el modelo de la conco dancia (1037) en elación con el c i e io se ológico del 2010
(1067). Es a úl ima di e encia (>10) indica que se puede conside a sin ninguna duda que el
modelo del 2010 se ajus a peo a los da os. En el modelo que combina los dos c i e ios se
ob u o una mejo ía de es os pa áme os oda ía mayo (R2 = 0.456, AIC = 1027). Po el
con a io, ninguno de los modelos basados en la conco dancia con o os an icue pos, an i-
AcLys (R2 = 0.446, AIC = 1038) o an i-Ca P (R2 = 0.442, AIC = 1048), ue mejo que el
modelo que incluyó a los an icue pos an i-AcO n.
2.5. MEJORA DE LA CLASIFICACIÓN DE LA AR CON LOS ANTICUERPOS ANTI-ACORN
La p ueba inal pa a e i ica la con ibución a la clasi icación de la AR consis e en la
combinación de los modelos se ológicos con los componen es no se ológicos de los c i e ios
ACR/EULAR de la clasi icación de la AR del 2010 (Tabla 27). Es e análisis sólo ue posible
en los pacien es de la coho e PEARL (537 pacien es con EA) que disponían de odos los
da os. Los esul ados mos a on una mejo a en la especi icidad y la exac i ud con la
conco dancia de an icue pos an i-CCP, FR y an i-AcO n. Con más de alle, la especi icidad
ue signi ica i amen e mayo que con los c i e ios del 2010 (77.6% s. 72.6%, P = 0.003).
Es e aumen o se io acompañado de una sensibilidad nominalmen e mayo (80.2% s. 78.8%,
P = 0.25) y una exac i ud signi ica i amen e mejo (79.0% s.75.8%, P = 0.002). Es a mejo a
no ue a ibuible a la pun uación especí ica empleada ya que se eplicó con los modelos de
eg esión logís ica en los que no se u ilizan pun uaciones p ede e minadas (Tabla 27;
especi icidad: 79.2% s. 73.8%, P = 9.5 x10-6; exac i ud: 80.0% s. 77.1%, P = 0.007). O o
esul ado a des aca de es os análisis es que la clasi icación que inco po a la combinación de
Lo ena Rod íguez Ma ínez
98
los c i e ios se ológicos del 2010 y la conco dancia (Ccdc. an i-AcO n + 2010 en la Tabla 27)
no ue mejo que la basada únicamen e en la conco dancia (Ccdc. An i-AcO n en la Tabla
27).
La mejo ía en la clasi icación de la AR con los an icue pos an i-AcO n ue
signi ica i amen e mayo que la que se ob u o con los an icue pos an i-Ca P desc i a
ecien emen e en un abajo ealizado en nues o labo a o io 176 y que se mues a aquí pa a
acili a una compa ación di ec a (Tabla 27; pun uación especi icidad: 77.6% s. 75.3%, P =
0.03 y exac i ud: 79.0% s. 77.1%, P = 0.01; eg esión logís ica especi icidad: 79.2% s.
75.7%, P = 0.002 y exac i ud: 80.0% s. 77.8%, P = 0.01).
Tabla 27. Clasi icación de los pacien es con AR empleando di e en es componen es se ológicos.
2010 ACR/EULAR = FR o an icue pos an i-CCP como se indica en los c i e ios de clasi icación
ACR/EULAR de la AR del 2010; Ccdc. An i-AcO n = conco dancia pa a los an icue pos an i-CCP,
FR y an i-AcO n; Ccdc. An i-Ca P = conco dancia pa a los an icue pos an i-CCP, FR y an i-Ca P. La
pun uación pa a cada ni el ue la que se indica en los c i e ios de clasi icación ACR/EULAR de la AR
del 2010 pa a el componen e se ológico 2010 ACR/EULAR y como se desc ibe en Reguei o C y
col.176 dependiendo del núme o de an icue pos conco dan es: 5 pun os pa a 3 an icue pos, 3 pun os
pa a 2 an icue pos y 1 pun o pa a 1 an icue po pa a los componen es se ológicos basados en la
conco dancia; o 5 pun os pa a 3 o 2 an icue pos con í ulos al os de an icue pos an i-CCP o FR, 3
pun os pa a 3 o 2 an icue pos con í ulos bajos y 1 pa a 1 an icue po independien emen e de los í ulos
pa a la combinación de los componen es se ológicos del 2010 y la conco dancia. La clasi icación con
los modelos de eg esión se ealizó incluyendo cada componen e indi idual: a ec ación a icula ,
se ología, du ación de los sín omas y eac an es de ase aguda con un pun o de co e ajus ado pa a
ob ene un 80% de sensibilidad. Es e análisis es lige amen e di e en e al que se indica en Reguei o C y
col.176 donde los ac o es del componen e no se ológico se ag upa on en una única a iable.
Componen e se ológico
Pun uación
Reg esión logís ica
especi icidad
sensibilidad
exac i ud
especi icidad
exac i ud
2010 ACR/EULAR
72.6
78.8
75.8
73.8
77.1
Ccdc. an i-AcO n
77.6
80.2
79.0
79.2
80.0
Ccdc. an i-AcO n + 2010
77.6
81.3
79.5
80.3
80.6
Ccdc. An i-Ca P
75.3
78.8
77.1
75.7
77.8
Ccdc. An i-Ca P + 2010
76.4
80.6
78.8
79.5
80.0
RESULTADOS
107
T ein a y un pacien es con AR (6.0%) ue on posi i os pa a los an icue pos an i-MAA del
iso ipo IgG, 76 (14.8%) pa a el IgM y 37 (7.2%) pa a el IgA. Es as ecuencias son in e io es
a las desc i as en los pacien es con AR del egis o VARA 32 y en los pacien es con AR de la
colección VAMC 39. Las ecuencias de los es iso ipos en es a úl ima colección 39 ambién
ue on in e io es a las desc i as en el egis o VARA, aunque la magni ud de la di e encia ue
más ma cada en nues os pacien es (Tabla 29). En la coho e EIRA sólo se e aluó el iso ipo
IgG de los an icue pos an i-MAA, que ambién mos ó una p e alencia supe io en
compa ación con la obse ada en nues a colección. Las ca ac e ís icas clínicas de los
pacien es con AR de la colección de San iago, del egis o VARA, de la colección VAMC y de
la coho e EIRA se mues an en la Tabla 29. Cabe des aca que las cua o colecciones de
pacien es con AR mues an di e encias conside ables en las ca ac e ís icas clínicas y
se ológicas. La colección de San iago es aba con o mada p incipalmen e po muje es y no
umado es de ascendencia eu opea (españoles) con una meno ecuencia de alelos del
epí opo compa ido y un mayo iempo de e olución de la en e medad. Además, la ecuencia
de se oposi i os pa a el FR ue meno que la desc i a en las o as colecciones, mien as que la
ecuencia de se oposi i os pa a los an icue pos an i-CCP ue meno en compa ación con las
dos colecciones es adounidenses, pe o compa able a la obse ada en la coho e EIRA (Tabla
29). La coho e EIRA mos ó ca ac e ís icas más simila es a las de la colección de San iago:
mayo ía de muje es y de pacien es con ascendencia eu opea aunque no se dispone del da o
exac o pa a los pacien es incluidos en el es udio de los an icue pos an i-MAA. Po el
con a io, el egis o VARA y la colección VAMC es aban o madas p edominan emen e po
homb es umado es con un signi ica i o componen e de mino ías é nicas de o igen no
eu opeo (Tabla 29).

Lo ena Rod íguez Ma ínez
108
Tabla 29. Ca ac e ís icas clínicas y se ológicas de los pacien es con AR de cua o colecciones en los que se han e aluado los an icue pos an i-MAA. Las
a iables edad y iempo de e olución se ep esen an como la media y la DS mien as que el es o de a iables se ep esen an como po cen aje (%). La ecuencia
de pacien es con AR conside ados posi i os pa a cada iso ipo de los an icue pos an i-MAA se de e minó empleando el pun o de co e es ablecido en cada es udio:
nues o es udio (San iago) pe cen il 98; en el es udio de Thiele y col. 32 (VARA) alo medio más 2.5 eces la DS; en el es udio de Mikuls y col. 39 (VAMC)
pe cen il 95; en el es udio de G önwall y col. 204 (EIRA) pe cen il 85. Los da os de hábi o abáquico, ecuencia de an icue pos an i-CCP y FR y ecuencia del EC
pa a la colección VAMC se ob u ie on del abajo ealizado po Mikuls y col. 103 de 287 pacien es con AR. Da o disponible pa a <98% de los pacien es con AR
del p esen e es udio: iempo de e olución 95.7%, umado es 92.3%, e osiones 95.2% y FR 95.9%. El p ime alo de P se mues a pa a la compa ación en e las
colecciones de San iago y VARA, el segundo alo de P pa a la compa ación en e San iago y VAMC, el e ce alo de P pa a la compa ación en e San iago y
EIRA y el cua o alo de P pa a la compa ación en e VARA y VAMC.
Ca ac e ís icas
San iago
(n = 517)
VARA
(n = 1720)
VAMC
(n = 285)
EIRA
(n = 403)
P San iago s. VARA
P San iago s. VAMC
P San iago s. EIRA
P VARA s. VAMC
Ascendencia eu opea
100
78
75
-
1.9x10-32
4.6x10-33
-
0.30
Edad, años
61 (14)
63 (11)
59 (12)
50 (13)
7.0x10-4
0.04
<1.0x10-4
<1.0x10-4
Tiempo de e olución, años
14 (11)
12 (12)
13 (10)
-
9.0x10-4
0.21
-
0.18
Muje es
77
9
37
70
2.1x10-214
4.6x10-29
0.02
7.8x10-38
Fumado es
Nunca
80
20
38
28
e
e
e
e
P e io
11
53
43
72
5.0x10-65
9.0x10-27
6.1x10-53
1.0x10-3
Ac ual
10
26
19
5.5x10-13
1.0x10-3
9.1x10-3
EC, po ado
58
-
76
77
-
2.1x10-7
7.6x10-10
-
FR posi i o
60
80
77
71
1.1x10-18
2.4x10-6
1.0x10-3
0.27
an i-CCP posi i o
64
78
85
69
3.3x10-10
6.9x10-10
0.13
6.3x10-4
IgG an i-MAA posi i o
6
92
80
44
1.1x10-319
4.4x10-102
5.4x10-42
2.6x10-10
IgM an i-MAA posi i o
15
38
18
-
5.3x10-23
0.24
-
4.3x10-11
IgA an i-MAA posi i o
7
73
52
-
1.9x10-154
1.5x10-46
-
6.1x10-13
RESULTADOS
109
En nues o es udio, los an icue pos IgM an i-MAA se de ec a on con mayo ecuencia en el
subg upo de pacien es con AR an i-CCP posi i o en compa ación con el subg upo an i-CCP
nega i o, mien as que el iso ipo IgA mos ó una endencia hacia una mayo p e alencia en el
subg upo an i-CCP posi i o (P = 0.06, Tabla 28). En línea con lo obse ado en odos los
pacien es con AR, la p e alencia de los an icue pos an i-MAA desc i a en los pacien es an i-
CCP posi i os a ió conside ablemen e en e las cua o colecciones, con los alo es más bajos
obse ados en la colección de San iago (Tabla 30, P <1.0x10-12 pa a odas las compa aciones
s. San iago excep o pa a la compa ación del iso ipo IgM de VAMC s. San iago; P = 0.38).
Una si uación simila se obse ó en el subg upo an i-CCP nega i o en el que la necesidad de
encon a bioma cado es es más u gen e. Mien as que la p e alencia de los an icue pos an i-
MAA en los pacien es an i-CCP nega i os del egis o VARA ue del 29-88%, en la colección
VAMC del 18-66% dependiendo del iso ipo e aluado y en la colección de EIRA ue del 33%
pa a el iso ipo IgG, en nues os pacien es ninguno de los es iso ipos se encon ó en una
ecuencia supe io al 10% (Tabla 30, P <0.02 pa a odas las compa aciones s. San iago).
Tabla 30. P e alencia de los an icue pos an i-MAA en cua o colecciones de pacien es con AR
es a i icados en unción de la p esencia de los an icue pos an i-CCP. Las a iables se ep esen an
como po cen aje (%). La ecuencia de pacien es con AR conside ados posi i os pa a cada iso ipo de
los an icue pos an i-MAA se de e minó como de desc ibe en la Tabla 29. Los da os de ecuencia de
an icue pos an i-CCP pa a la colección VAMC se ob u ie on del abajo ealizado po Mikuls y col. 103
de 287 pacien es con AR.
3.3. ANTICUERPOS ANTI-MAA DERIVADOS DE DOS PREPARACIONES DIFERENTES
La baja p e alencia de los an icue pos an i-MAA en los pacien es con AR de San iago pod ía
debe se a un ni el subóp imo de modi icación. Aunque el an ígeno MAA-HSA (2:1) mos ó
un a io F/M su icien e pa a conside a lo co ec amen e modi icado, se p obó a u iliza una
p epa ación con un mayo ni el de aducción. Po lo an o, se modi icó la HSA aumen ando la
can idad de malondialdehído a 4 mM y man eniendo el ace aldehído a 1 mM, lo que esul ó
en un a io F/M = 1.68 ± 0.07 294. Empleando como an ígeno es a nue a p epa ación [HSA-
MAA (4:1)] se de e mina on los an icue pos an i-MAA del iso ipo IgG con un an icue po
secunda io en e a IgG (H+L) en el sue o de pacien es con AR y con oles sanos
seleccionados al aza en los que se habían de e minado los an icue pos empleando el an ígeno
modi icado 2:1. No se encon ó ninguna di e encia en el po cen aje de pacien es con AR
posi i os pa a los an icue pos an i-MAA del iso ipo IgG (8.3% con ambos an ígenos), po lo
An i-CCP posi i o
An i-CCP nega i o
Ca ac e ís icas
San iago
(n = 332)
VARA
(n = 1340)
VAMC
(n = 244)
EIRA
(n = 278)
San iago
(n = 185)
VARA
(n = 380)
VAMC
(n = 41)
EIRA
(n = 125)
IgG an i-MAA
posi i o
5
93
83
49
7
88
66
33
IgM an i-MAA
posi i o
20
41
17
-
6
29
18
-
IgA an i-MAA
posi i o
9
76
52
-
4
63
52
-
Lo ena Rod íguez Ma ínez
110
que un mayo ni el de aducción del an ígeno no aumen ó su habilidad pa a cap u a los
an icue pos IgG an i-MAA.
El e ec o del ni el de aducción en la de ección de an icue pos an i-MAA ambién se
e aluó pa a los iso ipos IgM e IgA, dando luga a esul ados di e en es. Po un lado, la
p e alencia de los an icue pos IgM an i-MAA se io disminuida conside ablemen e cuando se
empleó como an ígeno la MAA-HSA (4:1), pasando de un 12.5% con la MAA-HSA (2:1) a
un 2.1%. En cambio, los an icue pos IgA an i-MAA mos a on una p e alencia simila (6.3%)
independien emen e del an ígeno u ilizado en el ELISA, al y como se obse ó pa a el iso ipo
IgG.
3.4. ANTICUERPOS ANTI-MDA EN PACIENTES CON AR Y CONTROLES
En el p esen e abajo ambién se ha es udiado la p esencia de an icue pos IgG e IgM que
econocen o os aduc os de i ados de la modi icación con malondialdehído (an icue pos an i-
MDA) que habían sido desc i os p e iamen e en pacien es con AR 33. Pa a ello se emplea on
las mismas mues as de sue o de pacien es con AR y con oles del Hospi al Clínico de
San iago en las que se e alua on los an icue pos an i-MAA. Los an icue pos an i-MDA
mos a on ni eles supe io es pa a los dos iso ipos e aluados en los pacien es con AR en
compa ación con los mos ados en los con oles sanos (Figu a 16 y Tabla 31). Los ni eles de
an icue pos an i-MDA es aban inc emen ados en los pacien es con AR del subg upo an i-CCP
posi i o en compa ación con el subg upo an i-CCP nega i o. Sin emba go, es o no se adujo
en una mayo p e alencia de an icue pos an i-MDA en los pacien es se oposi i os (Tabla 31).
A pesa de es a endencia, an o el í ulo como la ecuencia de los iso ipos IgG e IgM ue on
supe io es en los pacien es con AR an i-CCP nega i os que en los con oles sanos.
De nues os pacien es con AR, 43 (8.3%) ue on posi i os pa a el iso ipo IgG y 86
(16.6%) pa a el iso ipo IgM de los an icue pos an i-MDA. La sensibilidad del iso ipo IgM ue
compa able al obse ado en los 162 pacien es con AR de un es udio p e io 33. Po el
con a io, los an icue pos an i-MDA de iso ipo IgG mos a on una ecuencia
conside ablemen e meno en los pacien es de San iago en compa ación con el 28% de ec ado
en el es udio an e io .
La compa ación di ec a de las ca ac e ís icas clínicas de nues os pacien es y de los 162
pacien es con AR del es udio p e io no ue posible po que los da os no se encuen an
disponibles 33.
RESULTADOS
111
Figu a 16. Tí ulos de los an icue pos an i-MDA es a i icados po el iso ipo en pacien es con AR
y con oles sanos incluidos en el p esen e es udio empleando MDA-BSA como an ígeno. Los
í ulos se mues an en escala loga í mica. Los pacien es con AR se han di idido en unción del es ado
pa a los an icue pos an i-CCP. Las líneas ho izon ales ojas ep esen an la mediana de los í ulos de
an icue po en cada g upo.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
112
Tabla 31. F ecuencia y ni eles de los an icue pos IgG e IgM an i-MDA en los con oles sanos, en odos los pacien es con AR y en los pacien es
es a i icados en unción de la p esencia de los an icue pos an i-CCP. Los í ulos (UA) de los dos iso ipos de an icue pos an i-MDA se exp esan como la
mediana (IQR) mien as que la ecuencia de pacien es posi i os se exp esa en po cen aje (%). El p ime alo de P co esponde a la compa ación en e odos los
pacien es con AR y los con oles sanos. El segundo alo de P esul a de la compa ación de los dos subg upos an i-CCP de pacien es con AR y el e ce o mues a
los alo es ob enidos pa a la compa ación en e los pacien es an i-CCP nega i os y los con oles.
Iso ipo an i-MDA
Con oles
AR
PCon oles s. AR
AR an i-CCP-
AR an i-CCP+
Pan i-CCP+ s. an i-CCP-
Pan i-CCP- s. con oles
Tí ulo
IgG
24.1 (16.3-36.5)
38.7 (25.6-55.1)
3.4x10-22
36.8 (24.4-51.3)
40.1 (26.9-56.7)
4.8x10-2
6.1x10-11
IgM
8.4 (3.9-16.5)
26.2 (13.9-46.2)
4.9x10-41
24.4 (10.9-40.8)
27.8 (16.8-49.1)
1.2x10-2
6.9x10-20
F ecuencia
IgG posi i o
6/271 (2.2)
43/517 (8.3)
7.5x10-4
12/185 (6.5)
31/332 (9.3)
0.26
0.03
IgM posi i o
6/271 (2.2)
86/517 (16.6)
2.1x10-9
26/185 (14.1)
60/332 (18.1)
0.24
1.2x10-6

RESULTADOS
113
3.5. RELACIÓN ENTRE LOS ANTICUERPOS ANTI-MAA Y ANTI-MDA
La elación en e los an icue pos an i-MAA y an i-MDA no ha sido di ec amen e explo ada a
pesa de que los dos ienen como diana aduc os o mados po ías compa idas. Po ello
analizamos su conco dancia en es ado y co elación en í ulos conside ando odos los iso ipos
analizados en nues as mues as.
Las conco dancias más ele adas en la compa ación po sepa ado de los an icue pos an i-
MAA y los an i-MDA se obse a on en e iso ipos de an icue pos con la misma especi icidad.
Así, una acción impo an e de los pacien es con AR mos ó el mismo es ado pa a los dos
iso ipos, IgG e IgM, de los an icue pos an i-MDA (γ = 0.76, Tabla 32) y en e los iso ipos IgG
e IgA de los an icue pos an i-MAA (γ = 0.78). Cuando se compa ó el es ado de los
an icue pos an i-MDA y an i-MAA, se obse ó una conco dancia no able en e aquellos que
p esen aban el mismo iso ipo (Tabla 32). En la compa ación de an icue pos con iso ipos
dis in os hubo menos pacien es con el mismo es ado, aunque la mayo ía de es as
compa aciones alcanza on alo es de conco dancia es adís icamen e signi ica i os Sin
emba go, es e solapamien o en es ado no ue supe io al mos ado en e o os an icue pos
especí icos de la AR, como los an icue pos an i-CCP y el FR (γ = 0.82) o con los an icue pos
an i-Ca P.
El análisis de la co elación de los í ulos se es ingió a los pacien es posi i os lo que
edujo no ablemen e el núme o de pacien es incluido en cada compa ación. Aun así, los dos
iso ipos de los an icue pos an i-MDA se encon a on posi i amen e co elacionados de o ma
signi ica i a, al igual que los í ulos de los an icue pos IgG an i-MDA e IgA an i-MAA. Sin
emba go, el es o de las compa aciones de an icue pos no esul a on en co elaciones
signi ica i as, incluso aquellas que mos a on mayo conco dancia en es ado (Tabla 32). Es a
al a de co elación en los í ulos en e los an icue pos an i-MDA y an i-MAA y especialmen e
la endencia a co elaciones in e sa en e IgG an i-MDA y an i-MAA indica que se a an de
dos sis emas de au oan icue pos independien es y no c os- eac i os.
En elación con o os au oan icue pos de la AR, los dos iso ipos de los an icue pos an i-
MDA mos a on conco dancia con el FR y los an icue pos an i-Ca P pe o no con los an i-
CCP. Po su pa e, los iso ipos IgM e IgA de los an icue pos an i-MAA mos a on
conco dancias signi ica i as con los es au oan icue pos, FR, an i-CCP y an i-Ca P, mien as
que los de iso ipo IgG no ue on conco dan es con ninguno de ellos (Tabla 32). A pesa de la
p esencia de alo es de conco dancia signi ica i os en algunas de es as compa aciones, los
í ulos de los an icue pos an i-CCP y an i-Ca P no se co elaciona on con los í ulos de los
an icue pos an i-MDA ni de los an i-MAA.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
114
Tabla 32. Relaciones en e los an icue pos an i-MDA y an i-MAA, y de és os con los au oan icue pos
FR, an i-CCP y an i-Ca P. Los an icue pos se han conside ados en pa es e aluando la conco dancia de
es ado y la co elación de í ulos. El pa áme o γ se e ie e al coe icien e gamma de Goodman y K uskal
mien as que ρ es el coe icien e de co elación de Spea man. No se dispone de alo de í ulo pa a FR po lo
que no se ha podido calcula el coe icien e ρ. Ab = an icue po. na = no aplicable.
1e Ab
2º Ab
n
γ
P
n
ρ
P
An i-MDA
IgG
IgM an i-MDA
517
0.76
4.0x10-24
23
0.64
1.1x10-3
IgG
IgG An i-MAA
517
0.57
9.2x10-6
7
-0.64
0.12
IgM
IgM An i-MAA
515
0.56
1.0x10-12
27
0.00
0.99
IgG
IgM An i-MAA
515
0.49
3.9x10-6
13
-0.19
0.54
IgG
IgA An i-MAA
512
0.42
4.3x10-3
6
0.94
4.8x10-3
IgM
IgA An i-MAA
512
0.39
8.7x10-4
11
-0.05
0.87
IgM
IgG An i-MAA
517
0.20
0.17
7
0.07
0.88
An i-MAA
IgM
IgA An i-MAA
512
0.78
1.1x10-22
19
0.10
0.69
IgG
IgM An i-MAA
515
0.52
9.9x10-6
10
0.21
0.56
IgG
IgA An i-MAA
512
0.48
2.1x10-3
5
0.10
0.87
An icue pos en la AR
An i-CCP
FR
496
0.82
4.0x10-63
-
na
na
An i-CCP
An i-Ca P
517
0.60
2.2x10-19
131
0.09
0.29
FR
An i-Ca P
496
0.55
6.9x10-17
-
na
na
An i-MDA
An icue pos en la AR
IgM
FR
496
0.39
4.6x10-6
-
na
na
IgG
An i-Ca P
517
0.36
3.3x10-4
20
-0.31
0.18
IgM
An i-Ca P
517
0.32
2.9x10-5
37
-0.05
0.77
IgG
FR
496
0.30
9.5x10-3
-
na
na
IgG
An i-CCP
517
0.20
0.09
31
0.12
0.52
IgM
An i-CCP
517
0.15
0.08
60
-0.03
0.82
An i-MAA
An icue pos en la AR
IgM
An i-CCP
515
0.59
2.8x10-10
65
-0.01
0.91
IgM
FR
494
0.55
1.3x10-9
-
na
na
IgM
An i-Ca P
515
0.53
3.7x10-13
41
0.20
0.20
IgA
An i-Ca P
512
0.50
1.0x10-6
20
-0.15
0.52
IgA
FR
491
0.47
2.2x10-4
-
na
na
IgA
An i-CCP
512
0.36
4.9x10-3
29
0.10
0.59
IgG
An i-Ca P
517
0.20
0.12
12
-0.14
0.66
IgG
An i-CCP
517
-0.14
0.27
18
0.11
0.66
IgG
FR
496
-0.15
0.25
-
na
na
RESULTADOS
115
A con inuación, se explo ó po sepa ado la elación en e los iso ipos de los an icue pos an i-
MAA y an i-MDA en los pacien es con AR se oposi i os y se onega i os en unción de an i-
CCP y FR. En el subg upo de pacien es se oposi i os (an i-CCP+ y/o FR+) se de ec ó un
modes o ni el de solapamien o (< 30% de los posi i os) en e los iso ipos de los an icue pos
an i-MAA (Figu a 17A). Los pacien es posi i os sólo pa a el iso ipo IgM con o ma on el
g upo más g ande, ep esen ando ce ca del 50% de odos los pacien es an i-MAA posi i os,
seguido del subg upo de pacien es IgM/IgA doble posi i os, lo que e leja la ele ada
conco dancia de ec ada pa a es os dos iso ipos. En los pacien es se onega i os, la dis ibución
ue bas an e di e en e, con escaso solapamien o y una ecuencia más igualada de los es
iso ipos (Figu a 17B).
Figu a 17. F ecuencia ela i a de los es iso ipos de los an icue pos an i-MAA y de los dos
iso ipos de los an icue pos an i-MDA en los pacien es con AR. Los diag amas de Venn
ep esen ando los iso ipos IgG, IgM e IgA de los an icue pos an i-MAA se mues an en las igu as A
y B, mien as que los de los iso ipos IgG e IgM de los an icue pos an i-MDA se mues an en las
igu as C y D. Las igu as A y C ep esen an los pacien es con AR se oposi i os (an i-CCP+ y/o FR+),
mien as que las igu as B y D mues an los pacien es con AR se onega i os (an i-CCP- y FR-). Las
á eas de las elipses y los po cen ajes son p opo cionales a la acción de pacien es posi i os, mien as
que en el ma gen in e io se mues a el po cen aje del o al de pacien es que e an nega i os pa a odos
los an icue pos conside ados.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
116
Los iso ipos de los an icue pos an i-MDA mos a on una dis ibución simila en los pacien es
con AR se oposi i os y se onega i os (Figu a 17C y D). En ambos subg upos, los pacien es
posi i os sólo pa a el iso ipo IgM con o ma on el es a o mayo i a io (60.7% y 53.8% en los
pacien es con AR se oposi i os y se onega i os espec i amen e), seguidos son simila
ecuencias po los que p esen aban solo el iso ipo IgG o los dos iso ipos.
Po úl imo, se analizó de o ma especí ica la p esencia de los an icue pos an i-MAA y
an i-MDA en los pacien es se onega i os (an i-CCP-/FR-). Los an icue pos an i-MAA (iso ipo
IgG y/o IgM y/o IgA) ue on más abundan es, 16.5%, que los an i-MDA (iso ipo IgG y/o
IgM), 10.2%, aunque es a di e encia no ue signi ica i a (P McNema = 0.2). En conjun o, los
dos ipos de an icue pos se de ec a on en el 25.2% de los pacien es se onega i os, una
acción signi ica i amen e mayo que la de ec ada únicamen e con los an icue pos an i-MAA
(P McNema = 0.003).
3.6. RELACIÓN DE LOS ANTICUERPOS ANTI-MAA Y ANTI-MDA CON LAS CARACTERÍSTICAS
CLÍNICAS Y SEROLÓGICAS
Pa a comple a el análisis se ha explo ado la posible co elación y asociación de los
an icue pos an i-MAA y an i-MDA con algunas ca ac e ís icas de la AR. El único esul ado
signi ica i o ha sido que la p esencia de los an icue pos IgM an i-MAA se asoció con el
abaquismo (OR = 2.81; 95% CI = 1.39-5.72; P = 4.1x10-3) en el análisis incluyendo sexo,
edad de diagnós ico y iempo de e olución como co a iables. Además, los pacien es con AR
umado es p esen a on una p e alencia y unos í ulos más al os de es os an icue pos IgM an i-
MAA que los no umado es (25.8% s. 12.2% espec i amen e; P = 8.0x10-4; mediana [IQR]
= 27.3 [17.8-48.7] s. 20.3 [13.3-31.9]; P = 2.2x10-4). La magni ud de la asociación se
inc emen ó cuando se conside a on los pacien es que seguían umando (OR = 3.04; 95% CI =
1.22-7.56; P = 1.7x10-2) en compa ación con los habían dejado de uma (OR = 1.95; 95% CI
= 1.22-3.12; P = 5.4x10-3), aunque los ni eles y la p e alencia de los an icue pos IgM an i-
MAA no ue on signi ica i amen e di e en es en e es os dos subg upos de pacien es. Po o a
pa e, no se obse a on asociaciones en e la p esencia de los an icue pos an i-MAA o an i-
MDA y la p esencia del EC, el alelo de iesgo PTPN22 o la p esencia de e osiones.
RESULTADOS
123
Finalmen e, el ensayo con DNPH pe mi ió cuan i ica la p esencia de g upos ca bonilo en las
p o eínas modi icadas. El con enido de ca bonilos del CII na i o ue de 12.6 nmol/mg
p o eína. T as su modi icación, es e con enido se inc emen ó has a 40.5 nmol/mg pa a el
HOCl-CII y 121.6 nmol/mg pa a el GLI-CII. Po su pa e, el ni el de g upos ca bonilo en la
BSA na i a ue bas an e in e io al del CII, 3.0 nmol/mg, aumen ando conside ablemen e
has a 21.1 nmol/mg y 35.6 nmol/mg al modi ica se con HOCl y ibosa espec i amen e.
Aunque la can idad absolu a de g upos ca bonilo (en nmol/mg) medidos en el CII modi icado
e an mayo es que en la BSA modi icada, es la BSA la que mos ó un mayo aumen o espec o
de su es ado na i o (Figu a 20). El al o con enido de g upos ca bonilos obse ado en el CII
na i o pod ía explica se po la p esencia de en ec uzamien os in amolecula es 329, de g upos
amino glicosilados 330 y de PTP que con ienen ca bonilos y que es án ausen es en la BSA.
Figu a 20. Concen ación de g upos ca bonilo en el CII y la BSA modi icados con HOCl y
ibosa y con ol. Las ba as ep esen an la media y el SEM de al menos 4 expe imen os
independien es.
4.2. VERIFICACIÓN DE LA NITRACIÓN
La p esencia de 3-NT en las PS ni adas se e i icó median e es écnicas complemen a ias:
espec o o ome ía, ELISA y análisis de luo escencia. El ensayo espec o o omé ico del
es ánda come cial mos ó un pico ancho de máxima abso ción a 420 nm. El espec o del
FBS ni ado y de las PS ni adas ambién mos ó un pico a 420 nm aunque és e no es aba an
de inido como el del es ánda 3-NT, p obablemen e en elación con la mayo complejidad de
es as mues as. El FBS se modi icó con a ias concen aciones de agen e ni an e (5, 10, 20
and 40 mM NaONO2) y pos e io men e se cuan i ica on los ni eles de 3-NT in e polando en
la ec a pa ón cons uida con el es ánda come cial 3-NT. Los ni eles de 3-NT en el FBS
ni ado aumen a on al emplea 10 mM en ez de 5 mM de NaONO2 (13 ug 3-NT/mg s. 5 ug
3-NT/mg, espec i amen e). En cambio, concen aciones mayo es de NaONO2 no esul a on
en una mayo o mación de 3-NT, lo que indica que con una concen ación de 10 mM la
ni ación del FBS es óp ima. Los ni eles de 3-NT en el CTR-FBS ue on de 1 ug 3-NT/mg,
conside ablemen e meno es que en las mues as ni adas. Po lo an o se u ilizó es a
concen ación de NaONO2 pa a modi ica las PS esul ando en una concen ación de 17.0 ug

Lo ena Rod íguez Ma ínez
124
3-NT/mg en compa ación con los 5.5 ug 3-NT/mg de las PS sin a a . La cuan i icación
ealizada con el ELISA come cial que es más especí ico de la modi icación mos ó una
mayo di e encia en e las PS a adas y sin a a , con un ni el de 3-NT en las PS ni adas de
22.0 ug 3-NT/mg y de 1.9 ug 3-NT/mg en las PS sin ni a .
El análisis de luo escencia ealizado p opo cionó in o mación complemen a ia sob e el
p oceso de ni ación ya que e leja la p esencia de i osinas no modi icadas (Figu a 21). La
in ensidad de luo escencia emi ida po el FBS no modi icado ue conside ablemen e supe io
a la egis ada pa a el 3-NT-FBS, cuya emisión de luo escencia ue simila a la del blanco.
Es a comple a disminución de la in ensidad de luo escencia indica que la mayo ía de las
i osinas del FBS se han ni ado. Po el con a io, la ni ación de las PS no p odujo una
disminución an comple a de la señal luo escen e co espondien e a la i osina (Figu a 21B).
La p esencia de es e pico de emisión en las PS ni adas indica que una acción signi ica i a
de las i osinas no se modi icó, p obablemen e po que se encuen an en un en o no químico
no a o able.
Figu a 21. Espec os de emisión de luo escencia especí ica de la i osina de las mues as de FBS
y de PS ni adas y na i as. El g á ico A mues a los espec os de emisión supe pues os del 3-NT-
FBS, el CTR-FBS y el blanco. El g á ico B mues a los espec os de emisión supe pues os de las 3-
NT-PS, el CTR-PS y el blanco. Se mues a un espec o ep esen a i o de cada mues a. Las mues as
se analiza on po duplicado.
RESULTADOS
125
4.3. VERIFICACIÓN DE LA HOMOCISTEINILACIÓN
La can idad de Hci inco po ada a la HSA o a las p o eínas sino iales (PS) se e aluó po
cuan i icación de la S-adenosil-L-homocis eína (SAH). Las mues as con ol de HSA y PS
es u ie on po debajo del lími e de de ección del ensayo. Las p o eínas se incuba on con 0.4,
1.0 y 10 mM de L-Hci- iolac ona du an e 16 h y con 0.4 mM L-Hci- iolac ona po 32 h.
Ninguna condición ue mejo que la de 0.4 mM po 16 h pa a la HSA que inco po ó 0.81
nmol Hci/mg sin deg adación signi ica i a. Sin emba go, las PS mos a on el máximo sin
deg adación al incuba con L-Hci- iolac ona a 1 mM dando luga a 2.26 nmol Hci/mg. Es a
p epa ación de PS ue la seleccionada como an ígeno pa a los ELISA.
4.4. PREVALENCIA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-CII CARBONILADO EN PACIENTES CON AR
TEMPRANA
Pa a el es udio de an icue pos en e a especies ca boniladas de CII (an i-CII ca bonilado) se
selecciona on 182 pacien es con AR emp ana y 164 con oles del Hospi al Clínico
Uni e si a io de San iago. La inclusión únicamen e de pacien es con AR emp ana se debe a
que los an icue pos se desc ibie on po p ime a ez en es e ipo de pacien es 37. Además se
comp obó que las ca ac e ís icas de las dos colecciones de pacien es e an bas an e simila es
(Tabla 33).
Tabla 33. Ca ac e ís icas clínicas de los pacien es con AR emp ana incluidos en el es udio de los
an icue pos an i-CII ca bonilado. El iempo de e olución y la edad de diagnós ico se ep esen an
como la mediana y el IQR. El es o de a iables se ep esen an como po cen aje (%). El alo de P se
mues a pa a la compa ación en e las dos colecciones de pacien es. Da o disponible pa a < 98% de los
pacien es del es udio ac ual: FAME p e io 73%, e osiones 68.7%, FR 91.8% y an i-Ca P 85.2%. El
alo de P se mues a pa a la compa ación en e las dos colecciones. na = no aplicable
Ca ac e ís icas clínicas
Es udio ac ual
(n = 182)
S ollo y col.
(n = 85)
P
Edad, años
58 (48 – 71)
51 (22 – 70)
na
Tiempo de e olución, años
0 (0 – 1)
<1
na
Sin FAME p e io
109 (82)
85 (100)
3.3x10-5
Muje es
112 (62)
61 (72)
0.1
Fumado es
54 (30)
-
-
E osiones
17 (14)
-
-
An i-CCP, posi i o
119 (65)
49 (58)
0.5
FR, posi i o
94 (56)
-
-
An i-Ca P, posi i o
63 (41)
-
-
Lo ena Rod íguez Ma ínez
126
Como ya se ha desc i o, se busca on an icue pos en e a CII ca bonilado con HOCl (an i-
HOCl-CII) o con ibosa (an i-GLI-CII) y se compa a on con la inmuno eac i idad en e a
CII sin modi ica (an i-CTR-CII) (Figu a 22 y Tabla 34). Los esul ados mos a on una
ecuen e eac i idad en e al CII sin modi ica que ue simila a la obse ada en e a HOCl-
CII an o en los con oles como en los pacien es con AR y solo lige amen e in e io a la
obse ada en e a GLI-CII. Además, la eac i idad an i-CTR-CII ue signi ica i amen e
mayo en los con oles que en los pacien es. Es as ca ac e ís icas de la eac i idad en e a
CTR-CII a ec a a la in e p e ación de las señales ob enidas en e a las dos o mas
ca boniladas de CII. Po una pa e, la eac i idad en e a HOCl-CII ue un me o e lejo de la
eac i idad en e al CII sin modi ica en la g an mayo ía de las mues as es udiadas como se
e idenció as es a los alo es en e a CTR-CII pa a ob ene la señal especí ica. En cuan o a
la eac i idad en e a GLI-CII, se obse ó una cie a eac i idad especí ica as es a la
eac i idad en e a CTR-CII. Es a eac i idad especí ica an i-GLI-CII ue signi ica i amen e
mayo en los pacien es con AR que en los con oles. Sin emba go, es a di e encia debe
oma se con mucha cau ela po la pequeña magni ud de la señal y po que la eac i idad en e
a an i-GLI-CII sin co ección no ue di e en e en pacien es y con oles. Es os esul ados
con as an conside ablemen e con los desc i os po S ollo y col. 37: 92.9% pacien es posi i os
pa a los an icue pos an i-HOCl-CII y 64.7% pa a los an icue pos an i-GLI-CII.
Tabla 34. Ni eles de an icue pos an i-CII ca bonilado en pacien es con AR emp ana y con oles
sanos. La eac i idad se de e minó empleando como an ígeno HOCl-CII o GLI-CII y se exp esa como
la mediana de la señal en OD y el IQR. La co ección de la eac i idad se ealizó es ando a la
eac i idad del an ígeno modi icado la eac i idad del an ígeno na i o CTR-CII. El alo de P se
mues a pa a la compa ación en e los con oles sanos y los pacien es con AR emp ana.
Con oles
AR emp ana
An ígeno
Co ección
OD mediana
IQR
OD mediana
IQR
P
CTR-CII
-
0.174
0.147 – 0.201
0.143
0.128 – 0.169
5.0x10-9
HOCl-CII
no
0.160
0.142 – 0.187
0.141
0.127 – 0.173
3.1x10-5
HOCl-CII
sí
-0.004
-0.020 – 0.005
-0.003
-0.011 – 0.008
0.01
GLI-CII
no
0.221
0.163 – 0.305
0.234
0.171 – 0.285
0.5
GLI-CII
sí
0.027
-0.010 – 0.099
0.072
0.016 – 0.115
3.1x10-4
RESULTADOS
127
Figu a 22. Reac i idad en e a CII ca bonilado en pacien es con AR emp ana y con oles. La
eac i idad se de e minó como se indica en la Tabla 34. El g á ico A mues a la eac i idad medida
como OD an es de co egi y el g á ico B mues a la eac i idad especí ica después de co egi po la
eac i idad basal en e a CTR-CII. La línea oja ep esen a la mediana del alo OD en cada g upo.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
128
4.5. PREVALENCIA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS/PÉPTIDOS NITRADOS EN
PACIENTES CON AR ESTABLECIDA
Pa a el es udio de los an icue pos an i-p o eínas/pép idos ni ados (an i-Ni a) del iso ipo IgG
que econocen la 3-NT se selecciona on 57 con oles sanos y 143 pacien es con AR
es ablecida del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago cuyas ca ac e ís icas se ecogen en
la Tabla 35. La mayo ía de los pacien es e an muje es, p esen aban e osiones y e an
se oposi i os pa a los au oan icue pos an i-CCP o FR. La p e alencia de umado es ue baja,
asgo ca ac e ís ico de los pacien es con AR de San iago.
Tabla 35. Ca ac e ís icas clínicas de los 143 pacien es con AR es ablecida seleccionados pa a
es udia los an icue pos an i-p o eínas/pép idos ni ados y an i-p o eínas homocis einiladas. Las
a iables de edad de diagnós ico y iempo de e olución se ep esen an como la mediana y el IQR
mien as que el es o de a iables se ep esen an como po cen aje (%). Da o disponible pa a <98% de
los pacien es: umado es 90.9% y FR 96.5%.
Ca ac e is icas clínicas
AR
Edad, años
61 (50 – 72)
Tiempo de e olución de la en e medad, años
11 (5 – 21)
Muje es
112 (78)
Fumado es
23 (18)
E osiones
92 (66)
Po ado EC
87 (61)
An i-CCP posi i o
97 (68)
FR posi i o
84 (61)
An i-Ca P, posi i o
48 (34)
La eac i idad en e a las PS ni adas (3-NT-PS) ue escasa, (Figu a 23A y Tabla 36). Más en
de alle, los ni eles de an icue pos en e a 3-NT-PS de ec ados en los pacien es con AR no
ue on signi ica i amen e di e en es de los ni eles de ec ados en los con oles (Tabla 36).
Además, la co ección po la señal en e al an ígeno na i o (CTR-PS) esul ó su p ác ica
anulación (Figu a 23B). En is a de es os esul ados, se comple ó el es udio con el análisis de
la eac i idad en e a pép idos ni ados sin é icos (3-NT-pep). Los esul ados mos a on algo
de eac i idad que ue más ele ada en los pacien es que en los con oles, an o en e a los
pép idos ni ados como en e a los pép idos con ol (Figu a 23 y Tabla 36). La di e encia de
eac i idad en e a 3-NT-pep desapa eció después de co egi po la señal en e a CTR-pep
(Tabla 36). Po lo an o, ampoco se obse ó eac i idad especí ica en e a la ni ación en el
sue o de los pacien es AR, eplicando los hallazgos ob enidos con las PS ni adas.

RESULTADOS
129
Figu a 23. Reac i idad en e a p o eínas y pép idos ni ados en pacien es con AR y con oles
sanos incluidos en el p esen e es udio empleando 3-NT-PS o 3-NT-pep como an ígenos. Los
g á icos A y B mues an la eac i idad medida como OD empleando como an ígeno PS ni adas in
i o mien as que los g á icos C y D mues an la eac i idad empleando como an ígeno una mezcla de
pép idos sin é icos ni ados. Los g á icos A y C mues an la eac i idad an es de co egi po la
eac i idad basal de los co espondien es an ígenos na i os. Los g á icos B y D mues an la
eac i idad especí ica después de co egi po la eac i idad basal co espondien e. La línea oja
ep esen a la mediana del alo OD en cada g upo.
Lo ena Rod íguez Ma ínez
130
Tabla 36. Ni eles de an icue pos an i-Ni a en pacien es con AR es ablecida y con oles sanos. La
eac i idad de los an icue pos an i-Ni a se de e minó empleando como an ígeno 3-NT-PS o una
mezcla de pép idos sin é icos ni ados (3-NT-pep) y se exp esa como la mediana de la OD y el IQR.
La co ección de la eac i idad se ealizó es ando a la eac i idad del an ígeno ni ado la eac i idad
del an ígeno na i o co espondien e. El alo de P se mues a pa a la compa ación en e los con oles
sanos y los pacien es con AR.
Con oles
AR
An ígeno
Co ección
OD mediana
IQR
OD mediana
IQR
P
CTR-PS
-
0.020
0.008 – 0.026
0.022
0.009 – 0.033
0.1
3-NT-PS
no
0.011
0.008 – 0.035
0.018
0.009 – 0.028
0.1
3-NT-PS
sí
0.009
0.008 – 0.021
0.008
0.001 – 0.018
0.03
CTR-pep
no
0.097
0.090 – 0.106
0.111
0.089 – 0.150
0.02
3-NT-pep
no
0.209
0.190 – 0.230
0.250
0.201 – 0.329
0.02
3-NT-pep
sí
0.113
0.100 – 0.133
0.137
0.097 – 0.185
0.1
4.6. PREVALENCIA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-PROTEÍNAS HOMOCISTEINILADAS EN
PACIENTES CON AR ESTABLECIDA
Pa a el es udio de los an icue pos an i-p o eínas homocis einiladas (an i-Hci) del iso ipo IgG
se emplea on los mismos con oles sanos y pacien es con AR del es udio de los an icue pos
an i-Ni a (Tabla 35).
Se analizó la eac i idad en e a las PS homocis einiladas (Hci-PS) y na i as (CTR-PS)
en el sue o de los pacien es con AR y de los con oles. Los ni eles de los an icue pos ue on
supe io es en los pacien es en compa ación con los con oles an o en e al an ígeno
modi icado como en e al na i o (Figu a 24A y Tabla 37), po lo que es imp escindible
conside a los dos an icue pos de o ma conjun a. O a ca ac e ís ica no able es que la
eac i idad en e a CTR-PS ue mayo que en e a Hci-PS, an o en los con oles como en
los pacien es, indicando que la eac i idad de ec ada no es especí ica de la
homocis einilación.
RESULTADOS
131
Figu a 24. Reac i idad en e a PS homocis einiladas en pacien es con AR y con oles sanos. El
g á ico A mues a la eac i idad medida como OD an es de co egi po la eac i idad en e a CTR-
PS y el g á ico B mues a la eac i idad especí ica después de la co ección. La línea oja ep esen a la
mediana del alo OD en cada g upo.
Tabla 37. Ni eles de an icue pos an i-Hci-PS en pacien es con AR es ablecida y con oles sanos.
La eac i idad de los an icue pos an i-Hci-PS se exp esa como la mediana de la OD y el IQR. La
co ección de la eac i idad se ealizó es ando a la eac i idad del an ígeno modi icado la eac i idad
del an ígeno na i o. El alo de P se mues a pa a la compa ación en e los con oles sanos y los
pacien es con AR.
Con oles
AR
An ígeno
Co ección
OD mediana
IQR
OD mediana
IQR
P
CTR-PS
-
0.186
0.171 – 0.221
0.211
0.181 – 0.229
0.04
Hci-PS
no
0.145
0.130 – 0.155
0.160
0.145 – 0.178
1.1x10-4
Hci-PS
sí
-0.038
-0.069 – -0.020
-0.041
-0.074 – -0.015
0.5
Lo ena Rod íguez Ma ínez
132
4.7. RELACIÓN DE LOS ANTICUERPOS ANTI-CII CARBONILADO CON EL TRATAMIENTO
Finalmen e, hemos analizado si el a amien o p e io con FAME de los pacien es con AR
emp ana ha enido una in luencia sob e los ni eles de an icue pos an i-Ca bo dado que la al a
sensibilidad de es os an icue pos se ha desc i o en pacien es con AR emp ana que no es aban
a ados con FAME. La eac i idad en e a HOCl-CII es u o signi ica i amen e aumen ada
en los pacien es sin a amien o con FAME (OD mediana [IQR] = 0.141 [0.129-0.169] s.
0.137 [0.121-0.178]; P = 0.02, pacien es no a ados con FAME s. a ados). Sin emba go,
después de co egi po la eac i idad en e a CTR-CII la si uación ue la in e sa,
obse ándose una eac i idad más al a en los pacien es a ados (OD mediana [IQR] = -0.005
[-0.014–0.004] s. 0.004 [-0.005–0.012]; P = 0.004, pacien es no a ados con FAME s.
a ados). Con a iamen e, no se obse a on di e encias en la eac i idad en e a GLI-CII
an es y después de co egi en e los pacien es a ados con FAME y los no a ados (OD an i-
GLI-CII sin co egi : mediana [IQR] = 0.245 [0.191-0.288] s. 0.223 [0.160-0.274]; P = 0.2;
OD an i-GLI-CII co egida: mediana [IQR] = 0.086 [0.026-0.123] s. 0.073 [0.031-0.133]; P
= 1.0, no a ados con FAME s. a ados en odas las compa aciones).
Adicionalmen e, hemos compa ado la eac i idad en e al CII ca bonilado en e los
pacien es sin a amien o con FAME y los con oles sanos. Es e análisis mos ó que la
eac i idad en e a HOCl-CII ue signi ica i amen e más al a en los con oles que en los
pacien es no a ados (OD an i-HOCl-CII sin co egi : mediana [IQR] = 0.160 [0.142-0.187]
s. 0.141 [0.129-0.169]; P = 3.2x10-4, con oles s. pacien es no a ados con FAME),
eplicando los esul ados ob enidos en odos los pacien es con AR emp ana (Tabla 34). Sin
emba go, es a di e encia desapa eció después de co egi po la eac i idad en e a CTR-CII
(P = 1.0). En cambio, la eac i idad en e a GLI-CII ue signi ica i amen e mayo en los
pacien es no a ados con FAME en compa ación con los con oles sanos al conside a an o
los alo es sin co egi como los co egidos (OD an i-GLI-CII sin co egi : mediana [IQR] =
0.221 [0.163-0.305] s. 0.245 [0.191-0.288]; P = 0.02; OD an i-GLI-CII co egida: mediana
[IQR] = 0.027 [-0.010–0.099] s. 0.086 [0.026-0.123]; P = 2.4x10-5, con oles sanos s. no
a ados con FAME en odas las compa aciones). De nue o, es e esul ado eplica los
hallazgos ob enidos en odos los pacien es con AR emp ana e indica que la al a de
di e encias en la eac i idad en e a GLI-CII de ec ada en e los con oles sanos y el conjun o
de pacien es con AR emp ana (Tabla 34) es a ibuible, al menos en pa e, a la meno
eac i idad mos ada po los pacien es a ados.