Identificación mediante proteómica de nuevas adipoquinas y mioquinas implicadas en la obesidad

Iden i icación median e p o eómica
de nue as adipoquinas y mioquinas
implicadas en la obesidad
A u o Roca Ri ada
2013
D . Felipe Casanue a F eijo, Ca ed á ico del Depa amen o de Medicina de la
Uni e sidad de San iago de Compos ela y Je e del Se icio de Endoc inología y
Nu ición del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago de Compos ela.
D a. Ma ía Pa do Pé ez, In es igado a del Sis ema Nacional de Salud Miguel Se e ,
Ins i u o de In es igaciones Sani a ias de San iago de Compos ela (IDIS)/SERGAS.
CERTIFICAN:
Que la p esen e Tesis Doc o al i ulada: “Iden i icación median e p o eómica de
nue as adipoquinas y mioquinas implicadas en la obesidad” que p esen a A u o
Roca Ri ada ha sido ealizada bajo su di ección en el g upo Obesidómica (IDIS) del
Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago de Compos ela, es imando que se encuen a
concluida y en condiciones de se p esen ada pa a op a al g ado de Doc o en la
Uni e sidad de San iago de Compos ela.
Pa a que así cons e a los e ec os opo unos, i man la p esen e au o ización:
Fdo. Felipe Casanue a F eijo
Fdo. Ma ía Pa do Pé ez
Fdo. A u o Roca Ri ada
San iago de Compos ela, 2013
Us edes me dicen, en onces, que engo que pe ece
como ambién las lo es que cul i é pe ece án.
¿De mi nomb e nada queda á,
nadie mi ama eco da á?
Pe o los ja dines que plan é, son jó enes y c ece án...
Las canciones que can é, ¡can ándose segui án!
HUEXOTZÍNCATZIN
P íncipe de Texcoco, 1484
Dedicado a Álex,
Po que la inmo alidad
eside en la memo ia.

Ab e ia u as
9
9
Ab e ia u as
1-DE
Elec o o esis en una dimensión/monodimensional
2-DE
Elec o o esis en dos dimensiones/bidimensional
ABA
Ano exia basada en la ac i idad
ACBP
P o eína de unión a acil-CoA
AgRP
P o eína -agou i
ARC
Núcleo a cua o
ARNm
ARN mensaje o
bFGF
Fac o de c ecimien o básico de ib oblas os
BMP-1
P o eína mo ogénica ósea 1
BNDF
Fac o neu o ó ico de i ado del ce eb o
CART
T ansc i o egulado po cocaína y an e amina
CABA
Con ol ano exia basada en la ac i idad
CCK
Colecis oquinina
CDIO
Con ol obesidad inducida po la die a
CILAIR
Compa ación de a ios de inco po ación de aminoácidos ma cados con isó opos es ables
CRH
Ho mona libe ado a de co ico opina
DDP4
Dipep idil pep idasa 4
DIO
Obesidad inducidad po la die a
DMEM
Medio de cul i o Eagle modi icado po Dulbecco
DMN
Núcleo do somedial
DTT
Di io ei ol
ELISA
Ensayo po inmunoabso ción ligado a enzimas
ERKs
Quinasas egulado as de la señal ex acelula
FABP
P o eína de unión a ácidos g asos
FBS
Sue o e al bo ino
FDG
18F- luo odeoxiglucosa
FFAs
Ácidos g asos Lib es
FGF-21
Fac o de c ecimien o de ib oblas os 21
FNDC5
Fib onec ina ipo III con 5 dominios
FSH
Ho mona olículo es imulan e
GH
Ho mona de c ecimien o
GHS-R
Recep o de sec e agogos de la ho mona de c ecimien o
Glu 4/SLC2A4
T anspo ado de glucosa 4 dependien e de insulina
GREM1
G emlina 1
hASC
Células mad e mesenquimales de i adas de TA humano
HOMA-IR
Modelo homeos á ico de e aluación de la esis encia a insulina
HPLC-MS/MS; LC-MS/MS
C oma og a ía bidimensional acoplada a un espec óme o de masas
Ab e ia u as
10
10
IEF
Isoelec oen oque
IFNG
In e e ón gamma
IL
In e leuquina
IMC
Índice de masa co po al
INHBB
Inhibina be a B
iTRAQ
Ma caje isobá ico pa a la cuan i icación absolu a y ela i a
KRH
Tampón K ebs-Ringe -Hepes
LEPR
Recep o de lep ina
LH
Ho mona lu einizan e
MALDI
Ionización láse asis ida po ma iz
MCH
Ho mona concen ado a de melanina
MCP-1
P o eína quimioa ayen e de monoci os-1
MGP
P o eína gla de la ma iz
MMP-2
Me alop o einasa 2 de ma iz
MS
Espec ome ía de masas
MS/MS
Espec ome ía de masas en ándem
MVECS
Células endo eliales mic o ascula es
my -5
Fac o de ansc ipción miogénico 5
Mw
Masa molecula
NFkB
Fac o nuclea po enciado de las cadenas lige as kappa de las células B ac i adas
NPY
Neu opép ido Y
PAI-1
Inhibido del ac i ado del plasminógeno-1
PBS
Tampón os a o salino
PCA
Análisis de los componen es p incipales
PEDF
Fac o de i ado del pigmen o epi elial
PET-CT
Tomog a ía po emisión de posi ones - omog a ía compu e izada
PGC-1α
Coac i ado -1α del ecep o ac i ado de p oli e ación de los pe oxisomas γ
pI
Pun o isoeléc ico
POMC
p oopiomelanoco ina
PP
Polipép ido panc eá ico
PTN
Pleio o ina
PVN
Núcleo pa a en icula
PYY
Pép ido i osina- i osina
qRT-PCR
PCR a iempo eal cuan i a i a
RE
Re ículo endoplasmá ico
RIPA
Tampón de adioinmunop ecipi ación
ROS
Especies eac i as del oxígeno
RP-HPLC
C oma og a ía líquida de al a esolución en ase e e sa
SDS
Dodecilsul a o sódico
SELDI
Deso ción/ionización po láse de supe icie a ian e mejo ada
SILAC
Aminoácidos ma cados con isó opos es ables en cul i os celula es
SLPI
Inhibido de la pep idasa sec e o ia de los leucoci os 1
SNC
Sis ema ne ioso cen al
SNF2-α
Ac i ado p obable de la ansc ipción global 2 alpha
Ab e ia u as
11
11
SPARC
P o eína ácida sec e ada ica en cis eína
TA
Tejido adiposo
TAB
Tejido adiposo blanco
TAP
Tejido adiposo pa do
TAS
Tejido adiposo subcu áneo
TASa
Tejido adiposo subcu áneo abdominal
TAS
Tejido adiposo subcu áneo emo al
TASg
Tejido adiposo subcu áneo glu eal
TAV
Tejido adiposo isce al
TAVg
Tejido adiposo isce al gonadal
TAVm
Tejido adiposo isce al mesen é ico
TAVo
Tejido adiposo isce al omen al
TAV
Tejido adiposo isce al e ope i oneal
TGF-β
Fac o de c ecimien o ans o man e β
TNF-α
Fac o de nec osis umo al al a
TOF
Tiempo de uelo
TZD
Tiazolidinediona
UCP-1
P o eína desacoplado a ipo 1
VLDL
Lipop o eínas de muy baja densidad
VMN
Núcleo en omedial
ZDF
Modelo de a as Zucke diabé icas
Índice de igu as
18
18
3. Validación y ca ac e ización de la e uina A como nue a adipoquina. ________ 174
3.1 La e uina A de ejido adiposo es sec e ada de o ma exclusi a po los adipoci os
madu os. _________________________________________________________ 174
3.2 El ejido adiposo sec e a a ias o mas os o iladas de e uina A. __________ 174
3.3 Validación de la exp esión de e uina A en animales bajo di e en es condiciones
isiológicas o pa ológicas. ____________________________________________ 175
3.4 Ca ac e ización de la p esencia de e uina A en sue o y sec e omas de animales
bajo di e en es condiciones isiológicas o pa ológicas. _____________________ 178
4. Ca ac e ización del sec e oma de ejido muscula pa a la iden i icación de nue as
miokinas ___________________________________________________________ 180
4.1 Es ablecimien o y op imización de la incubación de explan es de ejido muscula
de a a pa a el análisis de su sec e oma y su al e ación as el eje cicio. _______ 180
4.2 Mapas 2-DE de e e encia de los sec e omas de ejido muscula gucolí ico- ápido
y oxida i o-len o. __________________________________________________ 184
4.3 Es udio di e encial en e los sec e omas del ejido muscula esquelé ico
gucolí ico- ápido y oxida i o-len o bajo condiciones ad libi um. _____________ 188
4.4 Es udio del e ec o del eje cicio en los sec e omas del ejido muscula gucolí ico-
ápido y oxida i o-len o. _____________________________________________ 190
5. Ca ac e ización de la ho mona FNDC5/i isina. ___________________________ 195
5.1 FNDC5/i isina como mioquina. _____________________________________ 195
5.1.1 Validación de las mues as pa a su análisis e iden i icación de la banda de
inmunode ección pe enecien e a FNDC5/i isina________________________ 195
5. 1.2 La sec eción y exp esión de FNDC5/i isina en el ejido muscula esquelé ico
se e a ec ada po la es icción caló ica y po el eje cicio. ________________ 197
5.1.2.1 Sec eción de FNDC5/i isina _________________________________ 197
5.1.2.2 Exp esión de FNDC5 in acelula y ARNm ______________________ 198
5.1.3 La sec eción y exp esión de FNDC5/i isina en el ejido muscula esquelé ico
ambién se encuen a al e ada en si uaciones pa ológicas. _______________ 199
5.1.3.1 Sec eción de FNDC5/i isina _________________________________ 199
5.1.3.2 Exp esión de FNDC5 in acelula y ARNm ______________________ 201
5.2 FNDC5/i isina como adipoquina ____________________________________ 203
5.2.1 El ejido adiposo blanco ambién sec e a FNDC5/i isina. _____________ 203
5.2.2 La sec eción y exp esión de FNDC5/i isina en el ejido adiposo es á
modulada po el eje cicio y el es ado nu icional. _______________________ 205
5.2.2.1 Sec eción de FNDC5/i isina _________________________________ 205

Índice de igu as
19
19
5.2.2.2 Exp esión de FNDC5 in acelula y ARNm ______________________ 207
5.2.3 La sec eción y exp esión de FNDC5/i isina en el ejido adiposo ambién se
encuen a al e ada en si uaciones pa ológicas. _________________________ 209
5.2.3.1 Sec eción de FNDC5/i isina _________________________________ 209
5.2.3.2 Exp esión de FNDC5 in acelula y ARNm ______________________ 210
5.2.4 Los ni eles de FNDC5/i isina ci culan es e lejan la modulación obse ada en
los sec e omas de ejido muscula esquelé ico y adiposo. ________________ 212
5.2.5 La exp esión de PGC1-α en el ejido adiposo no se co esponde en la mayo ía
de los casos con los ni eles de FNDC5 obse ados. ______________________ 213
5.2.6 Capacidad de b owning del ejido adiposo ________________________ 215
5.2.7 La sec eción de FNDC5/i isina la lle an a cabo los adipoci os madu os de a a
y en el ejido adiposo humano ambién apa ece exp esión y sec eción.______ 217
V. Discusión __________________________________________________ 219
1. Es ablecimien o y ca ac e ización de modelos animales en di e en es si uaciones
isiológicas y pa ológicas. _____________________________________________ 222
1.1 Res icción caló ica, eje cicio y ano exia basada en la ac i idad (ABA) ______ 222
1.2 Obesidad inducida po la die a (DIO) ________________________________ 226
2. Ca ac e ización del sec e oma del ejido adiposo blanco en unción de su
localización ana ómica. _______________________________________________ 228
2.1 Es ablecimien o y alidación de los sec e omas a pa i de explan es de TA _ 229
2.2 Los mapas 2-DE de e e encia de los sec e omas de TAVo, TAS y TAVg ea i man
la hipó esis de que el ejido adiposo p esen a di e en es unciones dependiendo de
su localización ana ómica. ___________________________________________ 230
2.3 El análisis di e encial del sec e oma de los es depósi os de TA mues a la
exis encia de g andes di e encias con espec o a su capacidad sec e o a. ______ 231
3. Validación y ca ac e ización de la e uina A como nue a adipoquina. ________ 232
3.1 La sec eción de e uina A en el TA se p oduce exclusi amen e po los adipoci os y
los ni eles sé icos es án a ec ados po la obesidad y la es icción caló ica. ____ 233
3.2 El TAVo pa icipa en mayo medida que el TAS en la modulación de la exp esión y
sec eción de e uina A. ______________________________________________ 234
4. Ca ac e ización del sec e oma de ejido muscula pa a la iden i icación de nue as
miokinas____________________________________________________________235
Índice de igu as
20
20
4.1 Desa olló de una me odología de cul i o de explan es pa a la iden i icación de
p o eínas sec e adas po el ejido muscula esquelé ico. ___________________ 236
4.2 Los músculos sóleo y g as ocnemio p esen an di e encias en su pe il de
sec eción según la composición de ib as mayo i a ia y el eje cicio ísico. ______ 238
5. Ca ac e ización de la ho mona FNDC5/i isina. ___________________________ 240
5.1 La FNDC5/i isina como mioquina ___________________________________ 241
5.1.1 Validación de las mues as pa a su análisis e iden i icación de la banda de
inmunode ección pe enecien e a FNDC5/i isina________________________ 241
5.1.2 La sec eción y exp esión de FNDC5/i isina en el ejido muscula esquelé ico
se e a ec ada po la es icción caló ica y po el eje cicio. ________________ 242
5.1.3 La sec eción y exp esión de FNDC5/i isina en el ejido muscula esquelé ico
ambién se encuen a al e ada en si uaciones pa ológicas. _______________ 243
5.2 FNDC5/i isina como adipoquina ____________________________________ 245
5.2.1 El ejido adiposo blanco ambién sec e a FNDC5/i isina. _____________ 245
5.2.2 La sec eción y exp esión de FNDC5/i isina en el ejido adiposo es á
modulada po el eje cicio y el es ado nu icional, así como en si uaciones
pa ológicas. _____________________________________________________ 245
VI. Conclusiones _____________________________________________ 249
VII. Apéndice _________________________________________________ 255
VIII. Bibliog a ía _____________________________________________ 273
Índice de igu as
21
21
Índice de igu as
Página
Figu a 1 . ................................................................................................................................. 29
Figu a 2. .................................................................................................................................. 32
Figu a 3. .................................................................................................................................. 33
Figu a 4. .................................................................................................................................. 35
Figu a 5 ................................................................................................................................... 37
Figu a 6. .................................................................................................................................. 39
Figu a 7 ................................................................................................................................... 40
Figu a 8 ................................................................................................................................... 42
Figu a 9 ................................................................................................................................... 48
Figu a 10 ................................................................................................................................. 50
Figu a 11 ................................................................................................................................. 53
Figu a 12 ................................................................................................................................. 54
Figu a 13 ................................................................................................................................. 59
Figu a 14 ................................................................................................................................. 62
Figu a 15 ................................................................................................................................. 66
Figu a 16. ................................................................................................................................ 68
Figu a 17 ................................................................................................................................. 70
Figu a 18 ................................................................................................................................. 71
Figu a 19 ................................................................................................................................. 73
Figu a 20 ................................................................................................................................. 76
Figu a 21 ................................................................................................................................. 77
Figu a 22 ................................................................................................................................. 81
Figu a 23 ................................................................................................................................. 84
Figu a 24 ................................................................................................................................. 87
Figu a 25 ................................................................................................................................. 90
Figu a 26 ................................................................................................................................. 99
Figu a 27 ............................................................................................................................... 100
Figu a 28 ............................................................................................................................... 104
Figu a 29 ............................................................................................................................... 105
Figu a 30 ............................................................................................................................... 106
Figu a 31 ............................................................................................................................... 107
Figu a 32 ............................................................................................................................... 122
Figu a 33 ............................................................................................................................... 124
Figu a 34 ............................................................................................................................... 126
Figu a 35 ............................................................................................................................... 127
Índice de igu as
22
22
Figu a 36 ............................................................................................................................... 128
Figu a 37 ............................................................................................................................... 129
Figu a 38 ............................................................................................................................... 130
Figu a 39 ............................................................................................................................... 131
Figu a 40 ............................................................................................................................... 132
Figu a 41 ............................................................................................................................... 134
Figu a 42. .............................................................................................................................. 140
Figu a 43 ............................................................................................................................... 142
Figu a 44 ............................................................................................................................... 143
Figu a 45 ............................................................................................................................... 144
Figu a 46 ............................................................................................................................... 147
Figu a 47 ............................................................................................................................... 149
Figu a 48 ............................................................................................................................... 150
Figu a 49 ............................................................................................................................... 151
Figu a 50 ............................................................................................................................... 151
Figu a 51 ............................................................................................................................... 153
Figu a 52 ............................................................................................................................... 154
Figu a 53 ............................................................................................................................... 155
Figu a 54 ............................................................................................................................... 156
Figu a 55 ............................................................................................................................... 158
Figu a 56 ............................................................................................................................... 166
Figu a 57 ............................................................................................................................... 167
Figu a 58 ............................................................................................................................... 168
Figu a 59 ............................................................................................................................... 169
Figu a 60 ............................................................................................................................... 170
Figu a 61. .............................................................................................................................. 172
Figu a 62 ............................................................................................................................... 174
Figu a 63 ............................................................................................................................... 175
Figu a 64 ............................................................................................................................... 176
Figu a 65. .............................................................................................................................. 177
Figu a 66 ............................................................................................................................... 178
Figu a 67 ............................................................................................................................... 179
Figu a 68 ............................................................................................................................... 181
Figu a 69 ............................................................................................................................... 182
Figu a 70 ............................................................................................................................... 183
Figu a 71 ............................................................................................................................... 185
Figu a 72 ............................................................................................................................... 186
Figu a 73 ............................................................................................................................... 187
Figu a 74 ............................................................................................................................... 189
Figu a 75. .............................................................................................................................. 191
Figu a 76 ............................................................................................................................... 194
Figu a 77. .............................................................................................................................. 196
Figu a 78. .............................................................................................................................. 198
Figu a 79 ............................................................................................................................... 200
Figu a 80 ............................................................................................................................... 201
Índice de igu as
23
23
Figu a 81 ............................................................................................................................... 202
Figu a 82 ............................................................................................................................... 204
Figu a 83 ............................................................................................................................... 206
Figu a 84 ............................................................................................................................... 208
Figu a 85 ............................................................................................................................... 210
Figu a 86 ............................................................................................................................... 211
Figu a 87 ............................................................................................................................... 212
Figu a 88 ............................................................................................................................... 213
Figu a 89. .............................................................................................................................. 214
Figu a 90. .............................................................................................................................. 216
Figu a 91 ............................................................................................................................... 217
Figu a 92 ............................................................................................................................... 248

Índice de ablas
25
25
Índice de ablas
Página
Tabla 1 .................................................................................................................................... 31
Tabla 2. ................................................................................................................................... 31
Tabla 3 .................................................................................................................................... 45
Tabla 4 .................................................................................................................................... 47
Tabla 5 .................................................................................................................................... 63
Tabla 6 .................................................................................................................................... 74
Tabla 7 .................................................................................................................................... 78
Tabla 8 .................................................................................................................................. 113
Tabla 9 .................................................................................................................................. 115
Tabla 10 ................................................................................................................................ 116
Tabla 11 ................................................................................................................................ 117
Tabla 12 ................................................................................................................................ 121
Tabla 13 ................................................................................................................................ 125
Tabla 14 ................................................................................................................................ 125
Tabla 15 ................................................................................................................................ 159
Tabla 16 ................................................................................................................................ 162
Tabla 17 ................................................................................................................................ 163
Tabla 18 ................................................................................................................................ 164
Tabla 19. ............................................................................................................................... 173
Tabla 20. ............................................................................................................................... 187
Tabla 21 ................................................................................................................................ 190
Tabla 22 ................................................................................................................................ 192
Tabla 23. ............................................................................................................................... 193
Tabla suplemen a ia 1 ........................................................................................................... 260
Tabla suplemen a ia 2. .......................................................................................................... 262
Tabla suplemen a ia 3 ........................................................................................................... 264
Tabla suplemen a ia 4 ........................................................................................................... 265
Tabla suplemen a ia 5 ........................................................................................................... 267
Tabla suplemen a ia 6 ........................................................................................................... 269
Tabla suplemen a ia 7 ........................................................................................................... 270
Tabla suplemen a ia 8. .......................................................................................................... 271
Tabla suplemen a ia 9 ........................................................................................................... 272
I. In oducción
In oducción
34
34
eno me gas o económico calculado en e el 2 y el 8 po cien o del gas o sani a io
[10][10][10][10][10][10][10][10][10][10].
2.1 Ac ualidad: incidencia y cómo a a la obesidad.
Los p incipales mé odos de ac uación pa a comba i el sob epeso son la die a y el
eje cicio, y cuando es os allan se combinan con la e apia a macológica. En casos más
ex emos, o en casos en donde la obesidad iene asociada a una diabe es ipo II, la
solución más e icaz es la ci ugía [11].
2.1.1 Die a
A lo la go de los úl imos años han ido su giendo dis in os ipos de die as, unas más
e ec i as que o as, sin emba go la mayo ía de ellas se basan en dos p incipios: la
es icción caló ica y la educción del ape i o. Se han abo dado es a egias que an
desde el inc emen o en el po cen aje de p o eínas consumidas, las comidas bajas en
ca bohid a os o la sus i ución en la die a de los ácidos g asos de cadena la ga po
ácidos g asos de cadena media/co a [12]. Uno de los p incipales p oblemas a los que
se en en a es e ipo de es a egia de educción de peso co po al es la baja adhesión
de los pacien es a con inua las die as a lo la go del iempo, los bene icios e iden es
que se obse an du an e los p ime os meses de die a, se educen e incluso empeo an
en un g an po cen aje de pacien es debido a su incapacidad de cumpli es ic amen e
con la die a p esc i a, ya que la modi icación de la die a iene que implica ambién un
cambio en su es ilo de ida. Se es ima que la e ec i idad de es e a amien o a la go
plazo supone una educción del 10% del peso inicial, lo que implica una mayo
p e ención de en e medades elacionadas con la obesidad como pueden se la
diabe es ipo 2 y la hipe ensión [13].
2.1.2 Eje cicio
El eje cicio ha demos ado se un po en e aliado pa a comba i la obesidad, en
nume osos es udios se ha obse ado que incluso un pequeño aumen o de la ac i idad
ísica del indi iduo puede de i a en la mejo a de las condiciones gene ales, y como es
de espe a , un mayo inc emen o del mismo conlle a unos mayo es bene icios [14],
po lo que los especialis as ecomiendan man ene u inas de eje cicio ísico
independien emen e de padece obesidad, incluso en ancianos [15]. El eje cicio ísico
no con ibuye únicamen e a aumen a el gas o ene gé ico y la pé dida de ejido
adiposo, ambién p o ege en e a la pé dida de masa muscula , mejo a las
condiciones ca dio espi a o ias, educe los iesgos de su i en e medades

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ca diológicas y me abólicas elacionadas con la obesidad, e incluso apo a al indi iduo
una mayo sensación de bienes a . Al igual que ocu e con las die as, el eje cicio pa a
una pe sona habi uada al seden a ismo implica un cambio en su es ilo de ida, po lo
que es muy impo an e moni o iza el es ado psicológico del indi iduo y es imula y
po encia median e di e en es mecanismos las u inas de eje ci ación ísica [16].
2.1.3 T a amien o a macológico
En los úl imos años se han p oducido nume osos a ances en el ámbi o del es udio
de la egulación del peso co po al, sin emba go el p og eso en la e apia a macológica
pa a comba i la obesidad es á siendo muy len o [11].
Los escasos a amien os exis en es en la ac ualidad, así como las in es igaciones
que se encuen an en cu so; se cen an en cinco es a egias p incipales pa a log a la
pé dida de peso ( igu a 4) [17]:
 Reducción de la inges a de comida median e la es imulación del e ec o de las
señales ano exigénicas o el bloqueo de las señales o exigénicas.
 Bloquea la abso ción de nu ien es en el es ómago, especialmen e la g asa.
 Aumen a la e mogénesis pa a disipa el exceso de ene gía almacenada en
o ma de calo .
 La modulación del me abolismo o el almacenamien o de g asas y p o eínas.
 Modulación del sis ema cen al de egulación del peso co po al.
Figu a 4: Diag ama de las dis in as moléculas diana a macológicas según la es a egia seguida pa a
comba i la obesidad. Modi icado de [17].
In oducción
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36
2.1.4 Ci ugía ba iá ica
La ci ugía ba iá ica es la opción más e icaz ac ualmen e pa a el con ol del peso
co po al en pacien es en los que las demás es a egias han acasado y/o que debido a
su peso co po al su en en e medades elacionadas con la obesidad como la diabe es
ipo 2 o en e medades ca dio ascula es [18]. La ci ugía ba iá ica se puede clasi ica en
dos ipos, es ic i a y/o malabso i a.
Los p ocedimien os es ic i os limi an el diáme o luminal del es ómago, pe o no
econducen el paso de la comida a a és del ac o gas oin es inal median e la
eliminación de segmen os in es inales; se basan en la in oducción de cie os
ma e iales exógenos o bandas como po ejemplo la banda gás ica ajus able po
lapa oscopia. Po o o lado, los p ocedimien os malabso i os es án diseñados pa a
educi el á ea de mucosa in es inal que se enca ga de la abso ción de los nu ien es
median e la gas ec omía pa cial de esa zona [19].
La ci ugía ba iá ica no sólo p oduce una impo an e pé dida de peso del pacien e,
sino que mejo a os ensiblemen e el con ol del peso co po al a la go plazo. Di e sos
es udios ealizados sob e pacien es some idos a es e ipo de ci ugía han demos ado
además o os ipos de bene icios al ma gen del peso co po al, como los e ec os
posi i os sob e la diabe es, iesgo ca dio ascula y calidad de ida, disminuyendo
incluso el iesgo a padece cánce . El da o más posi i o de es e ipo de in e ención es
la baja asa de mo alidad que p esen a es e p ocedimien o [20].
2.2 En e medades asociadas
2.2.1 Inc emen o de ejido adiposo co po al
Exis en un ele ado núme o de complicaciones médicas se e as elacionadas con el
inc emen o excesi o de ejido adiposo blanco que conlle a la obesidad. Es as
complicaciones a ec an en mayo o meno medida an o a la calidad de ida como a la
asa de mo alidad p ema u a de los indi iduos que las padecen. El sínd ome
co ona io agudo, la diabe es ipo 2, hipe ensión, sínd ome espi a o io, dislipemia,
sínd ome me abólico, es ea osis hepá ica o incluso cie os ipos de cánce son sólo un
ejemplo de la la ga lis a de en e medades di ec a o indi ec amen e elacionadas con la
obesidad ( igu a 5) [21-23].
In oducción
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Figu a 5: Conjun o de complicaciones que pueden su gi como p oduc o del inc emen o de ejido
adiposo co po al. Modi icada de [24]
La obesidad se ca ac e iza po p esen a ele ados ni eles de insulina plasmá ica en
ayuno y una espues a exage ada a la sob eca ga o al de glucosa. La adiposidad
gene al y la dis ibución de los depósi os de ejido adiposo co po al in luyen en el
me abolismo de la glucosa a a és de una se ie de mecanismos independien es pe o
adi i os. A medida que aumen a el peso co po al ambién se obse a un inc emen o
p og esi o de los ni eles medidos de glucosa e insulina as la p ueba de sob eca ga
o al de glucosa, con una co elación posi i a en e la adiposidad abdominal o cen al y
la esis encia a insulina.
La esis encia a la insulina conlle a la inhibición del e ec o an ilipolí ico de la
insulina en el ejido adiposo, lo que esul a en un inc emen o de los ácidos g asos
lib es (FFAs) libe ados en especial po los adipoci os del ejido adiposo isce al al
sis ema po a hepá ico. El inc emen o de FFAs en el hígado educe la espues a de es e
ó gano a la insulina plasmá ica ac i ando su p og ama de gluconeogénesis e
inc emen ando la libe ación de glucosa hepá ica, lo que con ibuye a los ni eles de
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glucosa an ele ados obse ados en obesidad. La al a de acción de la insulina sob e el
hígado induce como espues a un inc emen o en la libe ación de la misma; así los
ni eles muy ele ados de insulina plasmá ica e minan po ocasiona una egulación
nega i a de sus ecep o es en los ejidos diana. La esis encia a la insulina no se
p oduce sólo en los adipoci os, el mismo p oceso se p oduce ambién en el ejido
muscula esquelé ico, po lo que el p oceso se uel e sis émico [5].
En la ac ualidad, la obesidad y la diabe es se conside a que es án es echamen e
elacionadas a a és de un es ado de in lamación c ónica sis émica y de bajo g ado. Se
ha is o, que los ni eles ci culan es de a ios ma cado es de in lamación (Ej. IL-6,
hap oglobina o la p o eína C- eac i a) se encuen an muy ele ados en obesidad y
educidos en pacien es no mopeso. La hipó esis más plausible es que los ac o es
in lama o ios de i ados del ejido adiposo pod ían se los esponsables de la
esis encia a la insulina y o as en e medades asociadas a es e es ado como el
sínd ome me abólico [25].
2.2.2 Ausencia de eje cicio ísico
El eje cicio ísico se puede de ini como cualquie ac i idad ísica que implique un
gas o ene gé ico del indi iduo. A ni el isiológico el é mino eje cicio incluye el
conjun o de espues as adap a i as que se p oducen en el o ganismo du an e el
es ue zo ísico [26]. Las adap aciones al eje cicio ocu en en casi odos los ó ganos y
sis emas, como el espi a o io, neu onal, endoc ino, músculo-esquelé ico o
gas oin es inal. Es as adap aciones con ie en impo an es bene icios como esis encia
a padece en e medades ca dio ascula es, diabe es, ib omialgia, os eopo osis,
dep esión e incluso obesidad, po lo que ambién p o ege ía en e a las en e medades
asociadas a es a ( igu a 6) [27-29].
Las bases del e ec o p o ec o del eje cicio es án elacionadas di ec amen e con la
isiología p opia del ejido muscula esquelé ico. La ac i idad muscula es un po en e
es imulado del me abolismo y la sín esis p o eica; con i iendo al músculo la capacidad
de adap a se con inuamen e a las ac i idades que ealice el indi iduo p oduciéndose
desde hipe o ia muscula a cambios en el ipo de ib as, esul ando en un mayo
endimien o ene gé ico al se un ejido capaz de modi ica su p e e encia po una
uen e ene gé ica u o a.
La inac i idad ísica induce el desa ollo de ib as más ápidas que consumen
p e e en emen e glucosa en de imen o de ib as len as que p esen an un
me abolismo más oxida i o; es a dinámica p oduce cambios en el me abolismo
hepá ico con un inc emen o en la gluconeogénesis. Po o o lado, el músculo se
con ie e en un ejido capaz de ealiza mo imien os de g an in ensidad y de co a
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du ación a expensas de a iga se más ápido. Es os cambios en el ipo de ib as y en la
isiología del músculo in luyen de mane a de e minan e en el me abolismo ene gé ico
gene al, y en especial en el desa ollo de en e medades elacionadas con la
señalización de la insulina y el me abolismo de la glucosa y ácidos g asos [30].
Figu a 6: Algunas consecuencias obse adas po el e ec o de la inac i idad ísica. Modi icada de [26].
Recien emen e se ha p opues o la hipó esis de que la inac i idad ísica pod ía
conduci a un inc emen o en la adiposidad cen al, en especial de ejido adiposo
isce al, p oduciéndose una in il ación de mac ó agos que ac i a ían una se ie de
u as que de i a ían en un es ado de in lamación c ónica sis émica y que en úl ima
ins ancia se ía la causan e de la mayo ía de en e medades elacionadas con la
ausencia de eje cicio ísico ( igu a 7) [31]. Con espec o a es e ema, el ejido muscula
esquelé ico se ha des acado como un po en e sis ema de de ensa en e a la
in lamación a a és de la sec eción de una se ie de p o eínas (como las p o eínas de
shock é mico) con e ec os an iin lama o ios, además de juga un papel undamen al

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en la señalización que se p oduce du an e la in lamación sis émica así como en la
modulación de la espues a in lama o ia.
Figu a 7: Esquema de los p ocesos in lama o ios de i ados de la inac i idad ísica. Modi icada de [31].
Ac ualmen e se desconocen los mecanismos conc e os esponsables de los e ec os
bene iciosos p oducidos po el eje cicio ísico; se c ee que el mecanismo undamen al
se encuen a en la comunicación bidi eccional que exis e en e el ejido muscula
esquelé ico y ó ganos pe i é icos como el ejido adiposo. Así, en los úl imos años se ha
abie o un nue o pa adigma al demos a que el músculo puede compo a se como un
ó gano endoc ino sec e ando una se ie de p o eínas denominadas mioquinas. Es as
p o eínas de señalización o ma ían pa e del sis ema de comunicación en e el ejido
muscula y o os ejidos pe i é icos y/o cen ales, y es a ían elacionadas di ec amen e
con los e ec os del eje cicio. An e es a nue a si uación, el es udio de es as p o eínas
en los p óximos años se á undamen al pa a en ende muchas de las en e medades
de i adas de la ausencia del eje cicio ísico y su papel en la obesidad y as o nos
elacionados [32].
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3. Regulación de la inges a
La mo ilización y almacenamien o de ene gía en o ma de ácidos g asos o
glucógeno es un p oceso esencial y dinámico que pe mi e al o ganismo pode
esponde ápidamen e a la demanda ene gé ica y que se egula de una mane a
compleja con el in de asegu a un es ado de homeos asis ene gé ica co ec o. Es a
egulación se lle a a cabo po un lado median e sis emas o exigénicos que p omue en
el ape i o y el consumo de alimen os a o eciendo un balance ene gé ico posi i o,
mien as que po o o lado es án los sis emas ano exigénicos, que p omue en la
saciedad limi ando el consumo de alimen os y ac i ando sis emas de consumo
ene gé ico, con lo cual a o ecen un balance ene gé ico nega i o [33].
El ce eb o ecibe con inuamen e in o mación median e una se ie de ecep o es que
moni o izan las ese as ene gé icas p esen es en los ó ganos c í icos y su mo ilización
a a és del o en e sanguíneo, lo que asegu a un con ol cen al de las necesidades
ene gé icas de cada ejido. Es a in o mación es apo ada po cie os ó ganos
pe i é icos implicados en la homeos asis ene gé ica, como el es ómago o el ejido
adiposo, a a és de un complejo sis ema de señales libe adas a la sang e
ca ac e ís icas de cada uno de los ó ganos implicados [34].
En é minos gene ales la inges a se egula po un lado a a és del sis ema ne ioso
cen al (SNC), siendo el hipo álamo la egión undamen al; y po o o lado a a és del
complejo sis ema de señales pe i é icas que in o man al sis ema ne ioso cen al
( igu a 8).
3.1 Sis ema ne ioso cen al: El hipo álamo
El á ea p incipal y más impo an e del ce eb o implicada en la egulación del ape i o
y en la homeos asis ene gé ica es el hipo álamo, aunque ambién se encuen an
implicadas egiones del onco ce eb al y del ce ebelo [35]. El hipo álamo consis e en
una pequeña á ea de la egión mediobasal del ce eb o localizada jus o debajo del
álamo, que se di ide en a ios núcleos in e conec ados: el núcleo a cua o, el núcleo
pa a en icula , el á ea hipo alámica la e al, el núcleo en omedial y el núcleo
do somedial.
Es a egión del ce eb o comenzó a cap a la a ención de los in es igado es as los
da os clínicos obse ados en pacien es con sínd ome de F öhlich, los cuales
p esen aban una se ie de umo es pi ui a ios asociados a hipogonadismo y a un exceso
de ejido adiposo subcu áneo [36]. Más a de, median e una se ie de expe imen os en
los que se des uían cie os núcleos del hipo álamo, se p o undizó en el papel
egulado de la inges a de es e ó gano. Se comp obó como las lesiones en el núcleo
en omedial p oducían un inc emen o de la inges a y obesidad, mien as que las
lesiones en el á ea hipo alámica la e al p oducían una disminución de la inges a y
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ano exia. Po lo que se empezó a habla de un “modelo de doble cen o” compues o
po un “cen o de la saciedad” y un “cen o del hamb e” [37].
Figu a 8: Rep esen ación esquemá ica de los múl iples sis emas que egulan el ape i o. Modi icada de
[38].
Ana ómicamen e el núcleo a cua o (ARC) se si úa en una zona donde la ba e a
hema oence álica es más débil, pe mi iendo el paso de ho monas y nu ien es, es e
hecho con ie e a es e núcleo en el á ea ecep o a p incipal de las señales me abólicas
pe i é icas. El núcleo a cua o se ca ac e iza po posee dos ci cui os neu onales
opues os, un ci cui o o exigénico, que sec e an los neu opep idos Y (NPY) y la p o eína
-agou i (AgRP); y un ci cui o ano exigénico, que exp esan neu opép idos como la
p oopiomelanoco ina (POMC) y el ansc i o egulado po cocaína y an e amina
(CART) [38].
El núcleo do somedial (DMN) ecibe nume osas e minaciones ne iosas
p oceden es de las neu onas del núcleo a cua o y es á implicado en di e sos
mecanismos de egulación del sueño y de los i mos ci cadianos, así como de la
modulación en la sec eción de gonado opinas. A pesa de que se ha comp obado que
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lesiones en es a egión p oducían un aumen o en la inges a, oda ía no se conocen
bien los mecanismos que implican a es e núcleo en la homeos asis ene gé ica [39].
Las neu onas del núcleo pa a en icula (PVN) sec e an una se ie de neu opép idos
que es imulan una espues a ca abólica, como es el caso de la ho mona libe ado a de
co ico opina (CRH), la soma os a ina, asop esina o la oxi ocina. Es e núcleo libe a
es as señales a a és del sis ema ne ioso simpá ico en ó ganos pe i é icos como el
hígado o el ejido adiposo, es imulando la oxidación de ácidos g asos y la lipólisis. [40].
El núcleo en omedial (VMN) p esen a neu onas sensibles a la glucosa y a la
lep ina, sec e ando el ac o neu o ó ico de i ado del ce eb o (BDNF), que iene
ca ác e ano exigénico. En é minos gene ales, es e núcleo se conside a un á ea
imp escindible en la gene ación de la sensación de saciedad y en el man enimien o de
la homeos asis de la glucosa.
El á ea hipo isa ia la e al p esen a dos poblaciones neu onales que sec e an
neu opép idos o exigénicos, una población que exp esa la ho mona concen ado a de
melanina (MCH) y o a población que exp esan las hipoc e inas. Es a á ea se conside a
“el cen o del hamb e” y es á implicada en la inges a de alimen os, así como en la
sensibilidad a la glucosa y en la egulación de los ciclos del sueño [38].
3.2 Ó ganos pe i é icos
3.2.1 T ac o gas oin es inal
El ac o gas oin es inal es conside ado el ó gano endoc ino más g ande del
cue po, se exp esan más de 30 genes ho monales y se p oducen más de 100 pép idos
bioac i os. La an icipación y la p esencia de comida en el es ómago e in es ino delgado
es imulan la sec eción de muchas de es as ho monas a a és de es ímulos mecánicos
y químicos, po ejemplo, la dis ensión del es ómago p oduce una se ie de señales que
inducen la sensación de saciedad. En gene al se conside a que el ac o
gas oin es inal se enca ga de la egulación del ape i o a ni el pe i é ico [41].
El ac o gas oin es inal sec e o es á di idido en a ias zonas y glándulas
acceso ias con unciones an o exoc inas como endoc inas y que egulan la inges a de
o ma pe i é ica. Sus zonas endoc inas p incipales son el es ómago y cie as egiones
del in es ino delgado; y las glándulas implicadas son el pánc eas y el hígado [38, 42].
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células muscula es, mien as que es os genes a su ez no se exp esaban en los
adipoci os blancos [71]. Más adelan e, en es udios con a ones se con i mó que las
células que exp esaban el ac o de ansc ipción miogénico 5 (my -5) du an e su
desa ollo, podían de i a an o en células muscula es como en adipoci os ma ones,
pe o nunca en adipoci os blancos. Po lo que se es ableció la exis encia de dos linajes
celula es dis in os y bien di e enciados: un linaje celula que da ía luga a los
adipoci os blancos; y o o linaje, ca ac e izado po la exp esión de my -5, que da ía
luga an o a los p ecu so es muscula es como a los adipoci os ma ones ( igu a 10)
[72].
Figu a 10: Esquema del p oceso de di e enciación de los adipoci os blancos y ma ones. Modi icada de
[72].
4.1.1 Adipoci o blanco
El adipoci o blanco, ambién llamado célula unilocula po la ca ac e ís ica go a
lipídica que ocupa la mayo pa e de su ci oplasma, es el único ipo celula
especialmen e adap ado pa a almacena lípidos sin comp ome e su in eg idad
uncional; posee oda la maquina ia necesa ia pa a sin e iza ácidos g asos, almacena
iglicé idos en pe iodos de abundancia ene gé ica y a mo iliza los median e lipólisis
en casos de dé ici caló ico [68]. Es a célula ambién p esen a una impo an e unción
sec e o a, sin e izando ho monas y moléculas bioac i as, como la lep ina y la
adiponec ina, que ac úan an o de o ma au oc ina/pa ac ina como endoc ina pa a
egula el ejido adiposo y el me abolismo sis émico. A pa e de los adipoci os, las

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células del es oma ascula ambién pa icipan en la unción endoc ina del ejido
adiposo, libe ando al o en e sanguíneo pép idos como la omen ina, is a ina, el
ac o de nec osis umo al al a (TNF-α) o la in e leuquina-6 (IL-6) [73].
4.1.2 Adipoci o ma ón
El adipoci o ma ón, o célula mul ilocula , es el p incipal componen e del TAP y se
ca ac e iza po almacena lípidos en pequeñas go as a lo la go de su ci oplasma, en el
cual se encuen a una g an can idad de mi ocond ias, lo que con ie e a es a célula el
colo ma ón ca ac e ís ico. Es as mi ocond ias p esen an una maquina ia modi icada
que usa los ácidos g asos almacenados pa a la gene ación de calo median e la
ac i ación de la p o eína desacoplado a ipo 1 (UCP-1), exclusi a de es e ipo celula ;
es o pe mi e la e mogénesis mediada po el sis ema ne ioso simpá ico. Así, la
exp esión de es a p o eína es á ue emen e inducida po la exposición al ío [74]. Los
adipoci os ma ones han susci ado un g an in e és en los úl imos años, debido a
ecien es descub imien os sob e su posible papel en la egulación me abólica y su
unción endoc ina en adul os [75].
4.1.3 Adipoci o beis
Desde hace ya bas an es años se conoce la exis encia de cie as células, den o del
TAB, que exp esan al os ni eles de UCP-1 y que p esen an, de mane a simila a los
adipoci os ma ones, una mo ología mul ilocula con g an can idad de mi ocond ias
en su ci oplasma [76]. Hace poco se descub ió que es as células p o enían del mismo
p ecu so que los adipoci os blancos, que no exp esan my -5; po lo que el desa ollo
de es e ipo celula es a ía egulado de di e en e mane a que el de los adipoci os
ma ones. A es os adipoci os se les denominó adipoci os beis, y se conside a que
compa en uncionalidades me abólicas simila es a la de los adipoci os ma ones, sin
emba go, an o en su gené ica como en su o igen celula di ie en comple amen e [71].
Pa a explica el o igen de los adipoci os beis, el g upo de Spiegelman acuñó el
é mino b owning pa a e e i se a un enómeno de in e con e sión en el que los
adipoci os blancos del TAB, en p esencia de una se ie de ac o es como el pép ido
FNDC5/i isina, e ían ac i ada la maquina ia gené ica que pe mi i ía a es as células
lle a a cabo la e mogénesis y la adquisición de ca ac e ís icas simila es a las de los
adipoci os ma ones [77]. Es e g upo comp obó que la inducción de es e enómeno de
b owning pod ía se i de p o ección en e a la obesidad inducida po la die a y la
diabe es, e incluso sugi ie on que la mayo ía de depósi os de ejido adiposo pa do
encon ados en humanos adul os pod ían es a compues os po adipoci os beis [78].
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4.2 Tejido adiposo blanco
Además de sus unciones como aislan e é mico y sopo e es uc u al y mecánico, el
TAB se ha de inido adicionalmen e como el mayo almacén de ene gía del cue po.
Du an e pe iodos de inc emen o de la inges a o de poca demanda ene gé ica, la
ene gía sob an e es deposi ada en el TAB en o ma de iglicé idos, mediado po
enzimas lipogénicas cla es. Sin emba go, en el caso con a io, con escasez de
alimen os o de g andes necesidades ene gé icas, es e ejido es capaz de libe a
e icazmen e sus ese as lipídicas pa a inc emen a la disponibilidad ene gé ica en el
o ganismo, ya que los adipoci os ambién con ienen lipasas que ompen los
iglicé idos en glice ol y ácidos g asos que son anspo ados po el o en e
sanguíneo al hígado, músculo o TAP [79].
El TAB p esen a una impo an e unción endoc ina de egulación de la homeos asis
ene gé ica. Es e ejido se di ide en di e sos depósi os localizados en di e en es zonas
del o ganismo, p esen ando di e encias es uc u ales, de o ganización, amaño celula
y unción biológica en e los dis in os depósi os. La dis ibución del ejido adiposo
pa ece se un ac o cla e en el iesgo a desa olla en e medades elacionadas con la
obesidad, más impo an e incluso que el o al de ejido adiposo co po al de un
indi iduo [80].
4.2.1 Localización
El TAB es uno de los ipos isula es más abundan es del o ganismo, llegando a
supone más de la mi ad del peso co po al en si uaciones de obesidad [67]. Es e ejido
se encuen a localizado en di e en es egiones ana ómicas en mayo o meno
can idad, y según su localización ecibe dis in os nomb es: Los p incipales depósi os de
ejido adiposo son el isce al (TAV) y el subcu áneo (TAS). El TAV se encuen a
asociado al apa a o diges i o, y den o de es e se pueden dis ingui a ios sub ipos: el
omen al (TAVo), que se encuen a en con ac o con el es ómago; el mesen é ico
(TAVm), asociado al in es ino delgado y colon; y una se ie de depósi os pe i é icos
como son el e ope i oneal (TAV ), odeando a los iñones; y el gonadal (TAVg), unido
al ú e o y o a ios en muje es y al epidídimo y es ículos en homb es [80]. El TAS se
di ide en es depósi os p incipales que se denominan según su localización co po al:
abdominal (TASa), glu eal (TASg) y emo al (TAS ) ( igu a 11) [73].
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Figu a 11: Rep esen ación esquemá ica de los dis in os depósi os de ejido adiposo blanco humanos.
Modi icada de [73].
La dis ibución del TAB es á de e minada po el sexo, la edad y las di e encias
poblacionales. Los homb es suelen acumula mayo can idad de ejido adiposo en la
zona abdominal, an o TAV como TASa; mien as que en muje es la mayo
acumulación se suele da en la egión glu eo emo al (TASg y TAS ). Se c ee que es e
dimo ismo sexual iene de e minado po las ho monas sexuales es e oideas [81],
aunque los mecanismos que egulan la dis ibución del ejido adiposo son poco
conocidos. Con espec o a las di e encias poblacionales, los caucásicos p esen an un
meno índice de obesidad que el es o de poblaciones. En EUA los a oame icanos e
hispanos p esen an una meno can idad de TAV, mien as que las poblaciones de asia
del su p esen an una mayo adiposidad cen al con espec o a la caucásica.
A endiendo a la edad, en gene al, la adiposidad cen al (TAV y TASa) se inc emen a con
los años [73].
Me abólicamen e los dis in os depósi os de ejido adiposo se compo an de mane a
di e en e según su localización. Ac ualmen e se sabe que el inc emen o en el TAV es á
asociado a un aumen o en el iesgo de padece en e medades asociadas con la
obesidad y exis e una co elación di ec a en e los ni eles de adiposidad y los ni eles
de esis encia a la insulina. Po o o lado el TAS, en especial el TASg y TAS , p o ege
en e a los e ec os lipo óxicos del almacenamien o a co o y la go plazo de
iglicé idos. A ni el celula , los adipoci os del TAV son lipolí icamen e más ac i os y
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p esen an una mayo can idad de mi ocond ias que los adipoci os del TAS [80]. Con
espec o a las células del es oma ascula , se ha comp obado cómo, an o en su
composición como en su uncionalidad, es os depósi os di ie en eno memen e en e
ellos; y los p eadipoci os del TAS poseen una mayo capacidad de di e enciación que
los del TAV, lo que sugie e una mayo plas icidad de es e ipo isula conc e o [82].
Po o o lado, el TAVg se encuen a ue emen e egulado po las ho monas
sexuales y exis e una elación di ec a con la uncionalidad del apa a o ep oduc o [80,
83].
4.2.2 TAB como ó gano endoc ino
El TAB es un ó gano endoc ino complejo y al amen e ac i o que con iene la
maquina ia me abólica necesa ia pa a la comunicación con ó ganos dis an es, incluido
el SNC. Ac ualmen e se conocen una amplia a iedad de pép idos bioac i os
sec e ados po es e ejido, conocidos como adipoquinas, que ac úan an o a ni el local
( unción au oc ina/pa ac ina) como a ni el sis émico ( unción endoc ina) ( igu a 12).
Además el TAB exp esa nume osos ecep o es que le pe mi en esponde a las señales
a e en es p oceden es de los sis emas ho monales adicionales y del SNC [84].
Figu a 12: Di e sos e ec os de algunas de las adipoquinas conocidas. Modi icada de [85].
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Du an e las úl imas dos décadas, los a ances en las in es igaciones sob e obesidad
han dado luga al descub imien o de más de 600 adipoquinas. Es as p o eínas juegan
impo an es papeles en la egulación del ape i o y el con ol de la saciedad,
dis ibución del ejido adiposo, sensibilidad y sec eción de insulina, gas o ene gé ico,
in lamación, p esión a e ial, hemos asis y unciones endo eliales. De o ma au oc ina
y pa ac ina, las adipoquinas con ibuyen a la egulación de la adipogénesis, la
in il ación de células inmuni a ias en el ejido adiposo, el me abolismo de los
adipoci os y su unción. Pe o más impo an es son sus e ec os sis émicos sob e o os
ó ganos del cue po, como el ce eb o, hígado, músculo, sis ema ascula , co azón y
células β panc eá icas. Los pa ones de sec eción de las adipoquinas e lejan la unción
del ejido adiposo y suponen unos bioma cado es muy impo an es que de e minan el
iesgo de un indi iduo a padece en e medades me abólicas y/o ca dio ascula es
elacionadas con la obesidad [85].
4.2.2.1 Lep ina
El descub imien o de la lep ina en 1994 [66] y de su ecep o un año más a de [86],
supuso un pun o de in lexión en los es udios que has a en onces se habían enido
ealizando en la egulación de la inges a.
Es a p o eína es sin e izada y libe ada po los adipoci os blancos (y en meno
medida los ma ones), pe o aunque es ca ac e ís ica, no es exclusi a del ejido
adiposo; a ios ejidos como el muscula esquelé ico, placen a y es ómago la exp esan
y sec e an [46].
El e ec o me abólico de la lep ina es á ampliamen e documen ado, los ni eles
plasmá icos de es a p o eína aumen an en p opo ción a la can idad de ejido adiposo
co po al y puede se usado como bioma cado de adiposidad. La lep ina pene a la
ba e a hema oence álica y es econocida po los ecep o es exp esados en las
neu onas del hipo álamo, en especial las del núcleo a cua o. La ac i ación de es os
ecep o es induce una educción en la inges a y mejo a el gas o ene gé ico [38]. Si
bien los a amien os de casos de obesidad debida a de iciencia de es a p o eína
median e la adminis ación de lep ina han esul ado exi osos, en los casos comunes de
obesidad se ha is o como los ni eles ci culan es de lep ina se encuen an muy
ele ados, p oduciéndose un enómeno de esis encia a es a ho mona. Los mecanismos
que lle an a es a esis encia son aún poco conocidos, y algunos au o es sugie en que
pod ían es a elacionada con un allo en la señalización o en el paso de la lep ina a
a és de la ba e a hema oence álica [84]. O os e ec os endoc inos impo an es de la
lep ina incluyen la egulación de la unción inmune, hema opoyesis, angiogénesis y
os eogénesis.

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El ecep o de lep ina (LEPR) es miemb o de la amilia de ecep o es de ci oquina de
clase I con un único dominio ansmemb ana. Has a el momen o se han iden i icado
a ias iso o mas del mismo con a iaciones en la longi ud del dominio in acelula e
incluso se conoce la exis encia de una o ma sec e ada sin los dominios
ansmemb ana e in acelula [87]. La iso o ma que p esen a el dominio más la go es
conside ada la única o ma ac i a y se exp esa en el sis ema ne ioso cen al,
p e e en emen e en los cen os a e en es de la saciedad en el hipo álamo. LEPR
ambién se exp esa en ejidos pe i é icos como el ejido adiposo, muscula , células
be a panc eá icas e hígado; lo que indica la impo ancia de la lep ina como ho mona
an o endoc ina como au oc ina/pa ac ina en la egulación del me abolismo
ene gé ico [88].
4.2.2.2 Adiponec ina
La adiponec ina es una p o eína de 30 kDa descubie a en 1995 simul áneamen e
po a ios g upos. La adiponec ina se exp esa casi exclusi amen e en los adipoci os y
se sec e a al o en e sanguíneo, en donde ci cula en ele adas concen aciones (casi el
0.01% de las p o eínas plasmá icas o ales) [89].
La localización de los depósi os de ejido adiposo in luye de mane a di e encial a las
concen aciones de adiponec ina ci culan e. La sec eción de es a p o eína dec ece al
inc emen a se la adiposidad cen al, sin emba go, al os ni eles de adiposidad en el TAS
es án asociados a al as concen aciones de adiponec ina. Además se ha obse ado una
elación in e sa en e los ni eles de es a adipoquina y la p esencia de in ole ancia a
glucosa y diabe es ipo 2, incluso con la p opensión a desa olla es as en e medades
[90].
Desde el descub imien o de es a p o eína, se le han ido a ibuyendo cada ez más
unciones. La adiponec ina mejo a la sensibilidad pe i é ica a la insulina y posee una
acción an iin lama o ia y an iapop ó ica en di e en es ipos celula es. Es a p o eína
p omue e la uncionalidad y la supe i encia celula de las células be a del pánc eas,
enca gadas de sec e a insulina, y p esen a ambién una acción a ni el cen al,
es imulando el aumen o de gas o ene gé ico y la pé dida de peso [85].
4.2.2.3 O as adipoquinas
Las adipoquinas aspina (sec e ada po las células del es oma ascula ) y is a ina
(p oducida po los adipoci os) p esen an unciones de sensibilización a la insulina y
e ec os mimé icos a es a espec i amen e. Se ha comp obado que los ni eles de es as
dos p o eínas es aban ele ados en pacien es con diabe es ipo 2, an o en obesos
como en no obesos. Los ni eles ci culan es de aspina y is a ina se co elacionan con
los de IL-6 y la p esencia de es as 3 adipoquinas se asocia posi i amen e con el índice
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de masa co po al, el índice HOMA-IR (modelo homeos á ico de e aluación de la
esis encia a insulina), el po cen aje de la hemoglobina glucosilada HbA1c y los ni eles
de iglicé idos. Es os da os sugie en que es as p o eínas pueden juga un papel
impo an e en los enómenos de esis encia a la insulina y la diabe es ipo 2 [91].
La esis ina es una adipoquina descubie a en 2001 que se exp esa en los adipoci os
blancos de a ones y en los mac ó agos y monoci os del EV en humanos. Es a p o eína
compa e an sólo un 64% de homología en e ambas especies y no es á cla o que las
unciones que se le ha a ibuido a es a adipoquina en a ón sean equi alen es en
humanos. En los es udios ealizados en a ones, se io que es a p o eína se encon aba
ele ada an o en la obesidad inducida po la die a como en los modelos de obesidad
gené ica y diabe es (ob/ob y db/db espec i amen e). Al adminis a exógenamen e
esis ina se io que disminuía la sensibilidad a la insulina, mien as que las
concen aciones de coles e ol y iglicé idos se ie on inc emen adas. También se
comp obó que la exp esión de es a p o eína en el TAV es 15 eces mayo que en el
TAS [84]. Algunos au o es han conside ado a es a p o eína como un mediado de la
esis encia a la insulina y de las dis unciones me abólicas [92, 93], sin emba go o os
au o es no apoyan que es a adipoquina se enca gue de egula la acción de la insulina
[94, 95].
A pesa de la con o e sia gene ada sob e la acción de es a p o eína, ecien emen e
se ha asociado su p esencia en humanos con los ni eles de obesidad y esis encia a
insulina; así como en el desa ollo y p og esión de la a e ioscle osis y en e medades
ca dio ascula es [96].
4.3 Tejido adiposo pa do
Desde hace ya bas an es años se es ableció que el TAP es aba p esen e de mane a
ac i a en humanos ecién nacidos y que es e ejido se enca gaba del man enimien o
de la empe a u a co po al del neona o a a és de la gene ación de calo . Es e
p oceso de e mogénesis e a posible g acias al desacoplamien o de la cadena de
anspo e de elec ones de la memb ana de las mi ocond ias de los adipoci os
ma ones g acias a una se ie de p o eínas desacoplan es como la UCP-1 (conside ada
como un ma cado exclusi o de adipoci os ma ones). A es e enómeno se denominó
e mo egulación no i i an e y se conside ó como un mecanismo puen e has a
desa olla se comple amen e el sis ema de e mo egulación i i an e, con olado po
el SNC y ca ac e izado po gene a calo median e con acciones í micas del ejido
muscula . De es a o ma, a medida que el ecién nacido se iba desa ollando, los
depósi os de TAP a su ez disminuían, po lo que se suponía que en la e apa adul a
es e ejido o no es aba p esen e o que pod ía encon a se en can idades muy
pequeñas [72].
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Basándose en es e p incipio de unción puen e del TAP du an e el desa ollo y
debido a la inexis encia en esos momen os de écnicas sensibles que pe mi ie an
comp oba la exis encia de TAP ac i o en humanos adul os, du an e años el es udio de
es e ejido en humanos pasó ela i amen e inad e ido [97]. Sin emba go en la úl ima
década, los a ances en las écnicas de de ección y los ecien es descub imien os
indicando la p esencia de es e ejido ambién en adul os, supusie on un uelco en la
pe cepción gene al sob e es e ejido, do ándole de una g an impo ancia a ni el
endoc ino y de egulación de la homeos asis ene gé ica.
G acias a la omog a ía po emisión de posi ones - omog a ía compu e izada (PET-
CT) la isión del TAP ha dado un uelco. Es a ecnología, muy u ilizada en el
diagnós ico de umo es malignos se basa en el uso del análogo de la glucosa, la 18F-
luo odeoxiglucosa (FDG), que se inco po a a células con ele adas asas me abólicas
como las células umo ales. En es udios ecien es se encon a on asas de e ención de
FDG simé icas y ele adas en egiones en donde no se encon aba p esen e ningún
umo que se iden i ica on como ejido adiposo. Además se obse ó que dicha
e ención de FDG se inc emen aba a bajas empe a u as ambien ales, mien as que se
educía al ealiza un a amien o p e io con bloqueado es be a-ad ené gicos
implicados en la abso ción de glucosa en un mecanismo que depende di ec amen e de
la ac i ación de UCP-1. Con es as p uebas se llegó a la conclusión de que el ma caje
po FDG en el ejido adiposo en egiones especí icas es aba e lejando la ac i idad
me abólica del TAP. T as es os descub imien os han su gido nume osas cues iones
elacionadas con sus posibles unciones y su impo ancia isiológica. Va ios es udios
han elacionado es e ejido con la egulación del gas o ene gé ico co po al, es ando
implicado, al menos en pa e, an o en la e mogénesis inducida po calo como en la
inducida po la die a [98].
Es os descub imien os han e i alizado el in e és en el es udio de es e ejido con el
in de encon a mé odos más ú iles pa a comba i la obesidad. Así, se ha es imado
que la ac i ación de ap oximadamen e 50 g de TAP es su icien e pa a inc emen a
al ededo de un 20% el gas o ene gé ico dia io en una pe sona que consume unos
2500 kcal/día, equi alen e a los bene icios ob enidos po un indi iduo as habe se
some ido a die a o a eje cicio ísico pa a disminui su peso co po al [99].
4.3.1 Localización
En humanos adul os el TAP se localiza comúnmen e en la egión sup acla icula -
ce ical, en la egión en al del cuello y las egiones supe icial y la e al a los músculos
es e nocleidomas oideos. En indi iduos con al as asas de e ención de FDG, se
localizó ambién la p esencia de TAP en e los músculos pec o ales y subcapula es, la
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egión pos e io al plexo b aquial y en di e sas egiones a lo la go de la línea
pa aespinal ( igu a 13) [100].
Figu a 13: Localización del TAP en adul os y ecién nacidos según los da os apo ados pos mo em y
median e es udios PET/CT. (A) i oide/ aqueal, (B) medias inal, (C) pa ace ical/sup acla icula , (D)
pa a o acical, (E) sup a y pe i enal. Tomada de [101].
La p esencia de TAP en adul os es á elacionada di ec amen e con la edad, más del
50% de las pe sonas de en e 20-30 años p esen an TAP ac i o, pe o a medida que
aumen a la edad, es e po cen aje se a educiendo, de ec ándose es e ejido
únicamen e en un 10 % de los indi iduos analizados de 50-60 años. Se ha comp obado
que en muje es se encuen an mayo es can idades de TAP ac i o que en homb es en
angos que an en e 2 y 3 eces más can idad. También se ha encon ado una
elación in e sa en e el IMC y la p esencia de TAP ac i o, lo que e ue za la idea de
que es e ejido p esen a una impo an e unción me abólica en adul os [98, 100].
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músculo como pila cen al en el desa ollo e olu i o del me abolismo del es o de
ó ganos del cue po humano y a las mioquinas como ac o es impo an es o incluso
cla e en la egulación del me abolismo gene al. Es e pa adigma o ece ía las bases que
pod ían explica las múl iples consecuencias que conlle a lle a un es ilo de ida
seden a io ( igu a 15) [31].
Figu a 15: El ejido muscula esquelé ico libe a al o en e ci cula o io mioquinas con acción an o a
ni el cen al como pe i é ico. Modi icada de [31].
5.4.1 In e leuquina-6: la p ime a mioquina desc i a.
La IL-6 iene el hono de se la p ime a mioquina desc i a y la más es udiada. Fue
ca ac e izada como mioquina al descub i se que sus ni eles ci culan es se encon aban
inc emen ados has a más de 100 eces du an e el eje cicio. Es a p o eína ya e a
conocida desde hacía años como ci oquina p oceden e de di e en es células
inmuni a ias; sin emba go al demos a se que e a p oducida y sec e ada po el ejido
muscula esquelé ico du an e el eje cicio, se p odujo un eno ado in e és po su
es udio. La exis encia de es a mioquina suponía una pa adoja, ya que po un lado los
ni eles ci culan es de IL-6 se encon aban signi ica i amen e más ele ados en los
pe iodos inmedia amen e pos e io es al eje cicio, pe iodos en los que se obse a una
mayo sensibilidad a la insulina y cuando su acción es más e icaz. Sin emba go, po
o o lado la p esencia de es a p o eína había sido ambién asociada a la obesidad y a la
esis encia a insulina [111].

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Nume osos es udios han demos ado que la IL-6 se sec e a en espues a a
con acciones muscula es y eje ce una se ie de e ec os en a ios ó ganos pe i é icos,
que an desde el inc emen o de la abso ción de glucosa a la inducción de la oxidación
de ácidos g asos[112, 113]. También se ha demos ado que la IL-6 p oduce un
inc emen o en la p oducción de glucosa hepá ica du an e el eje cicio, así como
a o ece la lipólisis en el ejido adiposo [111].
Pe o la IL-6 no es la única mioquina descubie a, se han desc i o di e sas p o eínas
sec e adas po el ejido muscula esquelé ico con un posible e ec o endoc ino como la
IL-8, IL-15, el ac o de c ecimien o de ib oblas os 21 (FGF-21), la p o eína elacionada
con la olis a ina 1 o la mioquina de ecien e descub imien o mionec ina [114, 115].
5.4.2 El papel de la p o eína PGC-1α en la exp esión de los “genes del eje cicio”
El coac i ado -1α del ecep o ac i ado de p oli e ación de los pe oxisomas γ (PGC-
1α), que ue o igina iamen e iden i icado como un ac o que in e accionaba con la
p o eína PPAR-γ en ejido adiposo pa do, es un coac i ado de la ansc ipción que no
se une al ADN pe o que p esen a una ue e acción es imulado a de la exp esión de
de e minados genes al uni se a di e sos ac o es. PGC-1α induce la biogénesis
mi ocond ial y la exp esión de enzimas oxida i as en di e en es ipos celula es [32].
La p o eína PGC-1α se exp esa en el ejido muscula esquelé ico de una o ma
di e encial, siendo mayo es los ni eles obse ados en músculos len os que en los
ápidos. El eje cicio puede induci una ápida ac i ación de PGC-1α, que al ansloca se
al núcleo induce el inc emen o en la ansc ipción de enzimas mi ocond iales, acción
que se lle a a cabo an es incluso de obse a se un inc emen o en los ni eles de
exp esión del ARN mensaje o (ARNm) de PGC-1α [116]. El papel del eje cicio sob e
es a p o eína pa ece es a al menos en pa e mediado po el sis ema ne ioso
simpá ico y po la ac i ación de los ecep o es β2 ad ené gicos, ya que la
sob eexp esión de PGC-1α inducida po el eje cicio puede se e i ada median e el uso
de inhibido es especí icos pa a es e ecep o [117].
Los es udios ealizados en a ones ansgénicos que sob eexp esan PGC-1α
mos a on un aumen o en el con enido de mi ocond ias en las ib as muscula es
ápidas, así como un inc emen o de los ni eles de las enzimas oxida i as. Se obse ó
ambién que aumen aba la p opo ción de ib as ipo I y IIA haciendo a los músculos
más esis en es a la a iga [103]. Es udios ealizados en músculo esquelé ico de
indi iduos obesos demos a on que es os poseían una meno can idad de
mi ocond ias que en indi iduos no mopeso, dado que PGC-1α es un po en e induc o
de la biogénesis mi ocond ial, se descub ió que la ele ación de ácidos g asos lib es
plasmá icos educían la exp esión de PGC-1α en músculo, y que la educción en la
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exp esión de es a p o eína se asociaba a obesidad y diabe es ipo 2; es o se
elacionaba di ec amen e con las de iciencias de eje cicio ísico, ya que es os pacien es
no malmen e lle an una ida seden a ia [118].
En 2008 el g upo de Spiegelman p opuso la hipó esis de que la p o eína PGC-1α e a
el ac o cla e que elacionaba el eje cicio con los bene iciosos e ec os sis émicos que
p oduce sugi iéndose como el mayo esponsable de la p o ección en e a las
di e en es en e medades elacionadas con el seden a ismo. Es e g upo pos uló que la
educción en la exp esión de PGC-1α en músculo esquelé ico debida a es ilos de ida
seden a ios, pod ía es a causando una espues a p oin lama o ia c ónica que
a ec a ía nega i amen e a o os ejidos. Po an o, al elimina es e es ado de
in lamación c ónica median e la inducción de PGC-1α con el eje cicio, disminui ía la
ecuencia o la se e idad de las en e medades in lama o ias elacionadas, muchas de
ellas asociadas con la obesidad. La cascada de e ec os bene iciosos p oducidos po la
PGC-1α y que de i an en una sup esión de la in lamación c ónica, an desde induci
una mayo ascula ización del músculo, inc emen a su capacidad de de oxi icación de
las especies eac i as del oxígeno (ROS), mejo a las capacidades me abólicas de es e
ejido median e la biogénesis mi ocond ial y sob e odo la inducción de la exp esión de
oda una se ie de genes implicados en los e ec os bene iciosos del eje cicio (los cuales
denomina on “genes del eje cicio”), desde enzimas oxida i as a posibles ac o es
sec e ados po el músculo ( igu a 16) [32].
Figu a 16: E ec os de i ados de la acción de la PGC-1α. Modi icada de [32].
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5.4.3 La FNDC5/i isina como mioquina inducida po PGC-1α
La sospecha de que la p o eína PGC-1α pod ía es a implicada en la sec eción po
pa e del músculo de p o eínas con una unción endoc ina condujo al g upo de
Spiegelman a ealiza una se ie de es udios pa a in en a demos a es e hecho.
Es udia on a ones ansgénicos que sob eexp esaban PGC-1α en músculo,
obse ando que es os animales e an esis en es a la obesidad elacionada con la edad
y a diabe es, lo que suge ía que p esen aban algún ipo de al e ación del balance
ene gé ico sis émico [119]. Es e g upo se cen ó en el es udio de los genes enca gados
de ac i a el p og ama e mogénico y el desa ollo del ejido adiposo pa do,
descub iendo que en el TAS de es os a ones ansgénicos apa ecían una se ie de
adipoci os con ca ac e ís icas simila es a los adipoci os ma ones, con una g an
exp esión de ARNm de UCP-1, p opio del TAP. También obse a on una mayo
can idad de células mul ilocula es en es e ejido que p esen aban g andes
concen aciones de la p o eína UCP-1. Po el con a io, an o en el TAVg como en el
TAP no se obse aban di e encias. Es e modelo y sus e ec os (llamado enómeno de
b owning) ambién ue obse ado al some e a a ones de la cepa sal aje a dis in os
ipos de eje cicio du an e 3 semanas [77].
Pa a e alua si el enómeno de b owning e a p oducido e ec i amen e po un ac o
sec e ado p oceden e del músculo esquelé ico, el g upo de Spiegelman ealizó un
expe imen o en el que añadía a un cul i o p ima io de adipoci os del TAS medio de
cul i o lib e de sue o p oceden e de mioci os que exp esaban PGC-1α, obse ando en
es os adipoci os el inc emen o de ARNm de a ias p o eínas especí icas del TAP.
Median e el uso de chips de exp esión génica pudie on aisla una se ie de p o eínas
eguladas po la acción de la PGC-1α y con la capacidad en eo ía de se sec e adas po
el músculo esquelé ico (IL-15, FNDC5, VEGF-β, LRG1 y TIMP4). Se p obó la acción de
es as p o eínas sob e cul i os p ima ios de adipoci os de TAS, descub iendo que el
ac o implicado en el enómeno de b owning e a la FNDC5.
La ib onec ina ipo III con 5 dominios (FNDC5) se ca ac e izó como una p o eína de
memb ana ipo I de 20 kDa que p esen a pép ido señal y que su e una modi icación
p o eolí ica del ex emo N- e minal que o igina un pép ido de unos 12 kDa que se
sec e a ía a la ci culación siendo suscep ible de se modi icado po glucosilación y que
co esponde ía a la o ma ac i a de es a p o eína. A es e agmen o sec e ado se le
puso el nomb e de i isina en elación con la diosa I is de la mi ología g iega (la
mensaje a de los dioses en la Ilíada) y se conside ó como una mioquina capaz de inicia
la maquina ia e mogénica en el ejido adiposo blanco ( igu a 17). Sin emba go, los
da os apo ados median e écnicas de inmunode ección mos a on una se ie de
disc epancias con espec o al peso de la i isina y de su modi icación p o eolí ica,
pues o que los amaños de las bandas iden i icadas como pe enecien es a la i isina en
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ningún momen o ue on in e io es a 20 kDa, y u ilizando an icue pos especí icos en e
a la egión endógena de la FNDC5 se de ec a on g andes can idades de la p o eína
comple a en el medio de cul i o lib e de células [77]. Es os da os sugie en que la
p o eína FNDC5 puede se sec e ada ambién en su o ma comple a y que oda ía
hace al a más conocimien o sob e los mecanismos exac os median e los cuales es a
p o eína es sec e ada po pa e de las células muscula es.
Figu a 17: Di e en es modelos de e mogénesis mediada po adipoci os. (a) Te mogénesis clásica de los
adipoci os ma ones, (b) e mogénesis mediada po los adipoci os beis inducidos po la acción de la
i isina. Modi icado de [120].
Pa a ensaya los e ec os de es a p o eína in i o, el g upo de Spiegelman o zó la
sob eexp esión de la p o eína comple a FNDC5 en el hígado de a ones some idos a
una die a al a en g asa de la cepa C57BL/6, po se una cepa suscep ible a la obesidad
y la diabe es inducida po la die a. Con los da os apo ados con es e expe imen o, se
concluyó que el inc emen o de FNDC5 en la ci culación pod ía aumen a el gas o
ene gé ico, educi el peso co po al y mejo a la esis encia a insulina inducida po la
die a.
Como ase e ación inal, el g upo de Spiegelman des acó el u u o po encial de es a
p o eína pa a pode se usada en la clínica en si uaciones de obesidad o esis encia a
insulina median e la inyección di ec a del pép ido y así induci la e mogénesis en el
TAS humano y mejo a las condiciones me abólicas del indi iduo (Figu a 18).
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Desde la publicación de es e abajo, han su gido nume osos comen a ios en las
e is as cien í icas más ele an es, en las que se des aca es a in es igación, pe o
ambién se demanda un mayo conocimien o e in es igación u u a sob e la i isina, su
papel en el enómeno de b owning y sus e ec os isiológicos [121-124]. Po el
momen o hay pocos abajos o iginales sob e es a p o eína, y los exis en es no ayudan
a acla a el papel de la i isina con espec o a la egulación me abólica del o ganismo.
Incluso en aspec os an conc e os como los ni eles de i isina humana en obesidad
(ni eles que el g upo de Spiegelman no conside a on) se o ecen da os con a ios,
mien as unos g upos encuen an mayo es ni eles en pacien es obesos [125, 126],
o os au o es sugie en lo con a io [127].
Figu a 18: Dibujo esquemá ico del modelo p opues o pa a la acción de la i isina. Modi icada de [124].
6. Comunicación músculo-adiposo
Du an e los úl imos 20 años, el conocimien o sob e la comunicación endoc ina del
o ganismo ha dado un uelco comple o con la inclusión de dos nue os ó ganos den o
del complejo mapa endoc ino exis en e, es e hecho supone el es ablecimien o de un
nue o pa adigma en la egulación de la homeos asis ene gé ica al o o ga un eno me
p o agonismo a ejidos que an es se c eían ine es endoc inológicamen e hablando. El
p ime o de ellos en se econocido como al ue el ejido adiposo con la ca ac e ización
de la lep ina [66], es e hi o supuso la pue a de en ada al descub imien o de decenas

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(si no cien os) de adipoquinas implicadas en los g andes aspec os de la egulación
me abólica del o ganismo, desde el man enimien o del peso co po al has a el gas o y
el endimien o ene gé ico. Es e descub imien o ha de i ado en el en endimien o en
cie a medida del cómo y del po qué de muchas en e medades me abólicas,
incluyendo la obesidad y la diabe es ipo 2, y supond á en el u u o un ó gano cla e
pa a la nue a gene ación de es a egias e apéu icas pa a comba i las [128].
Años más a de, el mismo p oceso i ido po el ejido adiposo ha ocu ido de una
mane a simila con el ejido muscula esquelé ico. A pa i de 2004 se descub ió que
es e ejido e a capaz de p oduci y sec e a de mane a ac i a oda una se ie de
p o eínas (mioquinas) con e ec os sis émicos en di e en es ejidos, siendo la p ime a
ep esen an e de es e nue o g upo de ho monas la IL-6 [129]; es os hallazgos han
llamado la a ención de una buena pa e de la comunidad cien í ica poniendo de elie e
que el ejido muscula esquelé ico pod ía es a jugando un papel impo an e en la
comunicación en e los di e en es ejidos implicados en el me abolismo, pudiendo
es a implicado en muchas en e medades elacionadas con p ocesos de in lamación
sis émicos e incluso pos ula se como una u u a diana el a amien o de es as
en e medades [31].
A aíz de odo es e conocimien o gene ado en los úl imos años con espec o a es os
dos ejidos y su más que demos ada pa alela implicación en el desa ollo de di e sas
en e medades endoc inas, ha su gido la hipó esis de la exis encia de una
comunicación bidi eccional en e el ejido muscula y el ejido adiposo po medio de
las mioquinas y las adipoquinas espec i amen e pa a el con ol de di e sos p ocesos
me abólicos, en especial en el con ol de la lipólisis y en la modulación de la
sensibilidad a la insulina [130].
Las e idencias de es a comunicación quedan pa en es de o ma indi ec a al
obse a la elación exis en e en e la p ác ica de eje cicio ísico con la p e ención de
la esis encia a insulina en humanos. Pe o ambién exis en nume osos ejemplos
di ec os que sugie en es a in e elación. La mios a ina es una mioquina que egula
nega i amen e el c ecimien o muscula , los animales mu an es pa a el gen de es a
p o eína p esen an hipe o ia e hipe plasia del ejido muscula esquelé ico, pe o
además ambién se obse a una o al sup esión de la acumulación de g asa co po al lo
que sugie e una conexión muy impo an e en e ambos ejidos. De mane a simila , la
sob eexp esión en a ones del gen c-ski, que egula nega i amen e la exp esión del
ac o de c ecimien o ans o man e β (TGF-β) p oducido y sec e ado en g andes
can idades po el ejido adiposo en condiciones de obesidad, gene a un eno ipo de
hipe o ia muscula y una ma cada educción en la capacidad de almacenamien o de
ácidos g asos po pa e de los adipoci os [131]. O o ejemplo conc e o lo p o agoniza
la in e leukina-15 (IL-15), que es una mioquina con e ec os anabólicos en el ejido
muscula esquelé ico pe o que ambién pa ece juga un papel impo an e en el
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me abolismo lipídico. La IL-15 se sob eexp esa con el eje cicio ísico y se ha
encon ado una asociación nega i a en e los ni eles plasmá icos de es a p o eína y la
p esencia de TAV, pe o no de TAS en humanos. Con i mando es os da os, en a ones
mu an es con sob eexp esión de IL-15 y po an o ni eles ele ados de es a p o eína en
plasma, se obse ó una signi ica i a educción en el peso co po al y un inc emen o el
con enido mine al óseo, sin a ec a a la can idad o al de masa muscula co po al o a
los ni eles de o as ci oquinas conocidas; lo que sugie e que la p o eína IL-15 pod ía
es a implicada ambién en la egulación del TAV ( igu a 19) [111].
Figu a 19: Esquema de la hipo é ica comunicación c uzada en e el ejido muscula esquelé ico y el
ejido adiposo a a és de la IL-15 y las ho monas TNF-α y lep ina espec i amen e. Modi icado de [131].
Pe o el mayo ejemplo que e idencia la comunicación bidi eccional en e el
músculo y el ejido adiposo es la IL-6, p o eína que ac úa como una mioquina
sec e ada a la ci culación po el músculo con e ec os di ec os sob e el ejido adiposo,
pe o que ambién ac úa como una adipoquina sec e ada po el mismo ejido adiposo
a ec ando al músculo [132]. La IL-6 es la mioquina más es udiada y conocida, se sabe
que se sec e a a la ci culación en g andes can idades du an e el eje cicio y que la
es imulación a co o plazo de mioci os con es a p o eína mejo a la sensibilidad de los
mismos a la insulina; sin emba go el inc emen o c ónico de es a p o eína se elacionan
con la esis encia a la insulina en humanos. La IL-6 ambién se enca ga de ac i a la
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lipólisis en el ejido adiposo, y pa ece juga un papel muy impo an e en la
disponibilidad de ene gía du an e el eje cicio. Que es a p o eína pa ezca ene
unciones con adic o ias y que sus ni eles apa ezcan muy ele ados an o en eje cicio
como en obesidad sugie e que los e ec os de la IL-6 son dependien es del ejido que la
p oduce y de la condición me abólica en la que se encuen a el indi iduo. Es udios
ecien es de los e ec os agudos de la adminis ación de IL-6 en el ejido adiposo y
muscula de indi iduos sanos demos a on que mien as el ejido adiposo se man enía
inal e ado, en el músculo se ac i aba la u a de señalización de STAT3 (implicada en la
p oli e ación celula ) y se inc emen aba la lipólisis; lo que apoya la hipó esis de que la
mioquina IL-6 p esen a una g an impo ancia en el endimien o muscula du an e la
con acción aguda, mien as que la IL-6 como adipoquina, especialmen e cuando se
encuen a ele ada c ónicamen e, puede induci la esis encia a la insulina del músculo
[130].
Has a la echa se han ca ac e izado nume osas ho monas p oceden es del ejido
adiposo y muscula ( abla 6), y a medida que a ancen las in es igaciones con espec o
a la capacidad sec e o a de ambos ejidos y su papel en la señalización celula , la
elación en e ambos ejidos se i á acla ando aún más [131].
Tabla 6: Algunas de las p o eínas sec e adas que pod ían juga un papel muy impo an e en la
comunicación bidi eccional en e el ejido adiposo y el ejido muscula esquelé ico. Modi icada de [131].
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7. Sec eción p o eica
7.1 Tipos de Sec eción
Las p o eínas sec e adas son una clase impo an e de p o eínas cuya codi icación
supone ap oximadamen e el 10 % del genoma humano [133]. La mayo pa e son
p o eínas del sue o (po ejemplo albúmina, ans e ina o inmunoglobulinas),
p o eínas de la ma iz ex acelula (po ejemplo colágenos, p o eoglicanos,
ib onec ina o lamininas), enzimas diges i as (po ejemplo la ipsina), o p o eínas de la
leche. O as p o eínas, a pesa de encon a se en compa ación en muy bajas
concen aciones, son al amen e bioac i as, den o de es e g upo se inclui ían los
ac o es de c ecimien o, ci oquinas, ho monas o p o easas p ocesado as de la ma iz
ex acelula [134].
El é mino sec e oma engloba odas las p o eínas libe adas po una célula, ejido u
o ganismo al medio ex acelula , a a és de mecanismos de sec eción an o clásicos
como no clásicos. En el mecanismo clásico, una ez sin e izadas, las p o eínas se
anslocan al lumen del e ículo endoplasmá ico (RE), son anspo adas a a és del
apa a o de Golgi y libe adas po exoci osis [135]. Es as p o eínas se exp esan a pa i
de un ARNm que p esen a una secuencia señal que guía el paso del ibosoma a la
memb ana del RE e inicia el anspo e del pép ido hacia el lumen del RE. Es a
secuencia señal del RE, que no malmen e se encuen a en la egión amino- e minal del
pép ido, se compone de uno o más aminoácidos ca gados posi i amen e seguidos de
una cadena con inua de 6 a 12 esiduos hid o óbicos. Es a secuencia señal
no malmen e se co a en los ibosomas y no se encuen a en el pép ido inal ( igu a
20).
Po o o lado, en las ías no clásicas de sec eción, no se p oduce el paso de los
pép idos a a és del RE y el apa a o de Golgi, pe o has a el momen o el mecanismo
exac o po el que se egula es e p oceso oda ía es desconocido [136]. Se han desc i o
nume osas p o eínas que no se sec e an po la ía clásica, como cie os egulado es de
la espues a inmune. O os ejemplos son ac o es de c ecimien o, di e enciación o
angiogénesis que no p esen an pép ido señal, como po ejemplo el ac o de
c ecimien o básico de ib oblas os (bFGF), lec inas como la galec ina 1 y 3, y cie os
miemb os de la amilia de las in e leuquinas como la IL-1b. Se han desc i o al menos 5
u as de sec eción no clásica ( igu a 21):
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8.3 Es udios p o eómicos del sec e oma de ejido adiposo
8.3.1 Sec e oma del TA comple o
El TA es un ejido complejo y he e ogéneo compues o no sólo po adipoci os
madu os, sino que ambién es á compues o po p eadipoci os, pe ici os, células
endo eliales, mac ó agos y lin oci os T. Bajo es e con ex o, es azonable acep a que
los ac o es sec e ados po la acción del es oma ascula con ibuyen al sec e oma
del TA y modulan la sec eción de adipoquinas po pa e de los adipoci os. Po an o, la
ca ac e ización del sec e oma del TA, po encima de la ca ac e ización indi idual de las
células que componen es e ejido, pod ía apo a una isión más isiológica de la
unción sec e o a de es e ó gano. Po o o lado, el TA p esen a mayo es di icul ades
de manejo pa a es os es udios, ya que exis en mayo es posibilidades de la apa ición de
con aminaciones debidas a las p o eínas del sue o o a p o eínas in acelula es
p o enien es de la o u a o daño celula . Los con aminan es pueden a ec a
d ás icamen e al ango dinámico de las mues as y po an o a la iden i icación de
p o eínas sec e adas [149].
La p ime a ca ac e ización del sec e oma del TA humano comple o median e
écnicas de p o eómica ue publicado ecien emen e [150]. En es e es udio, la
ecolección del sec e oma del TAV ue es anda izado expe imen almen e al p oba
di e sas a iaciones del p o ocolo has a ob ene unas concen aciones y
composiciones p o eicas óp imas. El p o ocolo inal consis ió en la ealización de un
la ado de los explan es de TAV as 1 ho a de incubación, seguido de dos o es
la ados en un pe iodo máximo de 8 ho as, as los cuales se incubó la mues a oda la
noche. Finalmen e el TA se man u o en cul i o du an e 48-114 ho as has a ob ene la
mues a inal. Además, pa a a e igua si las p o eínas es aban siendo ealmen e
sec e adas, incuba on los explan es jun o a un medio ma cado con L-[13C6, 15N2]-Lys.
De las 259 p o eínas iden i icadas, 108 con enían pép ido señal, y 70 de ellas habían
inco po ado el ma caje, conside ándose como sec e adas po el TA. Es as p o eínas
ue on clasi icadas en cinco ca ego ías de acue do con la unción, la mayo ía e an
p o eínas que o maban pa e de la ma iz ex acelula (po ejemplo la pe lecan y la
e sican), seguidas po un segundo g upo de p o eínas elacionadas con la señalización
celula (po ejemplo la neu o ilina-1). Como e a de espe a , es e es udio ambién
mos ó como un conside able núme o de p o eínas e an libe adas no sólo po los
adipoci os, sino ambién pa icipaban en la sec eción o os ipos celula es como
mac ó agos y células endo eliales (po ejemplo endoplasmina, gelsolina, p o eína
disul u o isome asa, cal e iculina, ca epsina D y pe oxi edoxina 4).
Los cambios cuan i a i os en la sec eción p o eica del TAV ambién han sido
ecien emen e medidos median e el uso de la écnica de compa ación de a ios de
inco po ación de aminoácidos ma cados con isó opos es ables (CILAIR), una a ian e

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de la ecnología SILAC [149]. En es e es udio, los au o es de e mina on el e ec o de la
insulina en el sec e oma de explan es de TAV p oceden es de un pacien e median e la
compa ación de los a ios de inco po ación de L-[13C6]-Lys en p esencia y ausencia de
insulina. En es e expe imen o descub ie on que du an e el a amien o con insulina se
disminuía la sec eción de p o eínas elacionadas con la espues a al es és del RE y las
enca gadas de la emodelación de la ma iz ex acelula (ECM).
Po o o lado se ealiza on análisis compa a i os de los depósi os de TA epididimal
en e a as obesas y no mopeso, además de los e ec os del a amien o con
iazolidinediona (TZD); ma cando pa a ello los pép idos con 18O, y ealizando
c oma og a ía bidimensional acoplada a MS (2D-LC-MS/MS) [151]. Es e es udio mos ó
que el TA de animales obesos libe a más p o eínas in lama o ias y de ECM, además de
colágeno y p o easas. Además obse a on que el a amien o con TZD inhibía la
sec eción de es as p o eínas en el TA de animales obesos, ob eniendo un pe il simila
al de animales no mopeso.
8.3.2 Sec e oma de adipoci os madu os
El p ime es udio de la sec eción de adipoci os madu os ue ealizado después del
aislamien o de adipoci os p oceden es de TA epididimal, inguinal y omen al de a as
[152]. En es e caso ambién se siguió una es a egia basada en el ma caje p o eolí ico
con 18O y 2D-LC-MS/MS, pa a iden i ica y compa a los ni eles de p o eínas
sec e adas en el medio condicionado de las células en cul i o median e la p esencia o
ausencia de insulina ( igu a 23). De las 84 p o eínas iden i icadas como adipoquinas, 53
nunca habían sido ca alogadas como p oduc o de la sec eción del TA y de es as sólo 13
de ellas no apa ecie on en es udios p o eómicos pos e io es. Bajo la adminis ación
c ónica de insulina, se de ec ó la modulación de a ias p o eínas, po ejemplo se
inc emen a on los ni eles de adiponec ina, mien as que disminuye on los ni eles del
inhibido del ac i ado del plasminógeno-1 (PAI-1) y de la os eonec ina.
El es udio de la sec eción de adipoci os madu os humanos no se ealizó has a hace
apenas 2 años, y pa a ello se u iliza on las écnicas de 2-DE y MALDI-TOF. En es e
es udio, la ca ac e ización in i o del sec e oma de TAV humano e eló la sec eción
del ac o de i ado del pigmen o epi elial (PEDF) [153] y la iden i icación de la
dipep idil pep idasa 4 (DDP4) como una nue a adipoquina [154]. Es a ap oximación
p o eómica mos ó que PEDF es una de las p o eínas que más abundan emen e libe a
el adipoci o. La alidación po o as écnicas de los esul ados ob enidos median e 2-
DE y MS, demos a on que la sec eción de es a p o eína se encon aba egulada po la
insulina y la hipoxia. Además, as ealiza ensayos in i o, es e g upo concluyó que la
PEDF inducía la esis encia a insulina en los adipoci os y en las células muscula es
esquelé icas humanas; además ambién se le a ibuye on e ec os p oin lama o ios en
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células muscula es lisas humanas. Es os esul ados con i man las conclusiones de
abajos an e io es en los que se había suge ido que la PEDF pod ía ene un papel
impo an e en el desa ollo de diabe es y en e medades elacionadas con la obesidad.
Con espec o a la iden i icación de DDP4, los expe imen os ealizados lle a on a la
conclusión de que los adipoci os madu os sec e an más DDP4 que los p eadipoci os o
los mac ó agos, además el TAV de indi iduos obesos p esen a mayo es ni eles de es a
p o eína con espec o al TAS. Po o a pa e, al a a con DDP4 de cul i os de
adipoci os, células muscula es esquelé icas y lisas; se inhibía la u a de señalización de
la insulina. Además los ni eles obse ados en el TA se co elaciona on posi i amen e
con el iesgo a padece sínd ome me abólico.
Figu a 23: Diseño esquemá ico del expe imen o ealizado po Chen y col. pa a la iden i icación del
sec e oma de adipoci os madu os [152].
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8.3.3 Sec e oma de la acción EV
En el año 2007 se publicó un es udio en el que se ealizaba un análisis compa a i o
u ilizando las écnicas de 2-DE y MS/MS de la acción del es oma ascula del TAS de
muje es bajo condiciones no males o median e la inducción de la adipogénesis [155].
Es a in es igación pe mi ió la iden i icación de p o eínas sin pép ido señal clasi icadas
como ci oplasmá icas como ac ina o lac a o deshid ogenasa, y adipoquinas bien
ca ac e izadas como la adiponec ina y el PAI-1. En es e abajo ambién se
iden i ica on p o eínas como las se pinas, PEDF, el inhibido de la ombina placen a ia
y el inhibido de la p o easa C1.
En o o es udio se ealizó un análisis di e encial del sec e oma de la acción del EV
de TA epididimal p oceden e de a as Zucke obesas en e al sec e oma de adipoci os
madu os median e écnicas de 2D LC-MS/MS [151]. El esul ado ob enido mos ó que
el EV y los adipoci os p esen an di e en es pe iles de sec eción p o eica an o
cuan i a i a como cuali a i amen e. La mayo ía de las p o eínas iden i icadas en el
sec e oma de la acción del EV es aban elacionadas con la espues a inmune, ECM y
p o eólisis; sugi iendo una posible unción local de o ma au oc ina/pa ac ina sob e el
TA. Po el con a io, los adipoci os sec e an ac o es que pa icipan en la egulación de
ac i idades sis émicas.
Bajo el con ex o de la medicina egene a i a, se es udió ecien emen e el
sec e oma de células mad e mesenquimales de i adas de TA humano (hASC) median e
LC-MS/MS [156]. Se in es igó el papel de las hASC du an e p ocesos in lama o ios, po
lo que se analiza on es as células en p esencia de TNF-α. El sec e oma ob enido as el
a amien o p esen aba un inc emen o en a ios ipos de ci oquinas y quimiocinas
como la IL-6, IL-8, el ligando 6 de la quimiocina CXC y la p o eína quimioa ayen e de
monoci os-1 (MCP-1). La TNF-α ambién p odujo el inc emen o de los ni eles de a ias
p o easas como la ca epsina L, me alop o easas de la ma iz, e inhibido es de
p o easas; así como la inducción de la sec eción de la pen axina 3, implicada en la
inmunidad inna a.
8.3.4 Sec e oma du an e la di e enciación adipoci a ia
Hay ac ualmen e a ios ejemplos en la li e a u a en los cuales se analiza el
sec e oma du an e la di e enciación de células mad e adipoci a ias (o p eadipoci os)
con el obje i o p incipal de en ende el p oceso de adipogénesis. Apoyando odas
es as ap oximaciones in i o, exis e un es udio de p edicción de exp esión génica que
a ó de p edeci el posible sec e oma de p eadipoci os humanos al di e encia se. Es a
p edicción des acó una se ie de nue os genes candida os elacionados con
componen es de la coagulación sanguínea y del sis ema ib inolí ico; además de
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suge i a la p o eína gla de la ma iz (MGP) y a la inhibina be a B (INHBB) como nue as
adipoquinas [157].
Exis e un es udio en el que se ealizó una ca ac e ización del sec e oma de hASC a
di e en es e apas de la di e enciación adipoci a ia y os eobás ica median e 1-DE y
MS/MS [158], iden i icando un o al de 73 p o eínas en e los días 0 y 3 de
di e enciación. La clasi icación uncional de es as p o eínas indicó que la mayo ía de
ellas pe enecían a la ma iz ex acelula y a componen es del ci oesquele o, así como
a p o eínas de choque é mico. PAI-3 se de ec ó en los días 0 y 3 de la di e enciación
os eoblás ica, pe o en ningún momen o en la di e enciación adipoci a ia.
La écnica SILAC se aplicó en la ca ac e ización simul ánea del p o eoma y
sec e oma du an e la di e enciación de la línea celula 3T3-L1 ( igu a 24) [159],
iden i icándose p o eínas p esen es en abajos p e ios sob e di e enciación, como la
adiponec ina y la lipop o eína lipasa, además de nue as p o eínas como el complejo
THO 4 y el ac i ado p obable de la ansc ipción global 2 alpha (SNF2- α). El complejo
THO, elacionado con la ac i ación de la ansc ipción, se ha encon ado ele ado en
e apas in e medias de la adipogénesis; mien as que los ni eles de SNF2-α, una
p o eína emodelado a de la c oma ina, se encon aban disminuídos al inicio de la
adipogénesis, mien as que se man u ie on cons an es en el es o de e apas.
Una es a egia simila a la an e io ue la seguida po un g upo que ealizó la
ca ac e ización a dis in as e apas de la di e enciación, es a ez, de cul i os p ima ios
de p eadipoci os humanos, median e el uso de la écnica p o eómica de ma caje
isobá ico pa a la cuan i icación absolu a y ela i a (iTRAQ) [160]. El esul ado de es e
es udio e eló la p esencia an o de adipoquinas conocidas como la de o as p o eínas
que no se habían encon ado p e iamen e en o os es udios, como el glipicano 1, el
ac o de c ecimien o de i ado del hepa oma, la p o eína de unión modula al calcio 1
elacionada con SPARC o el ac o simila al ecep o de ci oquinas 1.
Finalmen e, hay que des aca la ap oximación cuan i a i a lib e de ma caje pa a el
es udio del sec e oma de la acción del es oma ascula du an e la adipogénesis
median e LC-MS/MS [161], obse ando que a ios componen es ex acelula es de las
ias de señalización de Wn y TGF-be a es aban al e ados du an e la adipogénesis.
In oducción
87
87
Figu a 24: Es a egia de 5-plex SILAC y inción de ojo oleoso de la di e enciación adipoci a ia.
Modi icado de [159].
8.3.5 Sec e omas de di e en es depósi os de ejido adiposo.
Exis en cada ez más e idencias que mues an nume osas di e encias an o
biológicas como gené icas en el TA dependiendo de su localización ana ómica [82, 162,
163]. Bajo es e con ex o, esul a ía in e esan e iden i ica las di e encias en e los
dis in os ipos de depósi os de TA; y en es e sen ido se han ealizado has a el
momen o unos cuan os es udios p o eómicos que se cen an en las di e encias en e
los p o eomas especí icos de los depósi os de TA [164, 165]. Sin emba go oda ía hay
muy pocas e idencias que mues en las di e encias en la sec eción p o eica de los
dis in os depósi os de TA.
El año pasado se publicó un es udio que indagaba en e las posibles di e encias que
se podían da en e las p o eínas sec e adas po el TAV en e al TAS, encon ando es
posibles p o eínas sec e adas que se encon a ían más ele adas en TAV, la g emlina 1
(GREM1), la pleio o ina (PTN) y el inhibido de la pep idasa sec e o a de los leucoci os
1 (SLPI) [166].

In oducción
88
88
Median e la u ilización de la écnica de c oma og a ía de a inidad en lec inas
inmo ilizadas, con el in de aisla las p o eínas que p esen an glucosilaciones
(modi icación p o eica p edominan e en las p o eínas sec e adas); el g upo de Hocking
y col. ealiza on un análisis cuan i a i o de los sec e omas de explan es de TAV en e a
TAS de a ón [167]. De mane a adicional, ambién compa a on el sec e oma de
p eadipoci os y de células endo eliales mic o ascula es (MVECS) de ambos depósi os
de TA. En es e es udio no se encon a on apenas di e encias en los sec e omas de los
explan es comple os de VAT y SAT, p eadipoci os o MVECS; sin emba go desc iben un
mayo ni el de sec eción de p o eínas po pa e de las mues as de TAV. Es e hecho es
pa icula men e ele an e, ya que el TAV cons i uye an solo una pequeña pa e de
odo el TA co po al (al ededo del 18%) compa ado con los depósi os de TAS
(ap oximadamen e un 82%). Po o a pa e, es e g upo concluye que casi el 50% del
sec e oma de los explan es de TA es á compues o po ac o es con una impo an e
implicación en la angiogénesis, sugi iendo que el TAV iene una mayo capacidad de
expansión que el TAS.
8.4 Es udios p o eómicos del sec e oma de ejido muscula
esquelé ico
8.4.1 Pano ama ac ual
El descub imien o de las capacidades del ejido muscula esquelé ico pa a unciona
como un ó gano endoc ino al igual que el TA es ela i amen e muy ecien e y po
an o apenas hay abajos en la bibliog a ía que abo den la a ea de ca ac e iza la
sec eción de es e ejido median e el uso de écnicas p o eómicas. En los úl imos años
han empezado a su gi es udios al espec o, pe o cen ados en el uso de cul i os de
líneas celula es de músculo esquelé ico [168-172] y mio ubos humanos [173, 174].
Has a el momen o no exis en abajos en la p o eómica clínica dedicados a la
ca ac e ización de la sec eción del ejido muscula esquelé ico median e es a egias de
explan es comple os de ejido, y menos aún que cen en su ca ac e ización en
di e encia el ejido muscula po su composición de ib as.
8.4.2 Sec e omas de líneas celula es condicionadas
Los p ime os abajos ealizados con el a án de iden i ica nue as mioquinas se
basa on en el uso de líneas celula es animales condicionadas pa a in en a induci la
sec eción p o eica y comp oba los e ec os de cie as señales en el pe il sec e o de
las células muscula es.
In oducción
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89
En un abajo publicado en el año 2008, se ealizó el es udio p o eómico de la línea
celula muscula de a a L6 GLUT4myc di e enciada, compa ando su sec eción en
p esencia o ausencia de insulina median e es a egias de c oma og a ía líquida de al a
esolución en ase e e sa (RP-HPLC) y MS/MS pa a la iden i icación de las p o eínas
sec e adas [168]. En es e abajo se iden i ica on un o al de 254 p o eínas, de las
cuales 153 se clasi ica on como sec e adas. 14 p o eínas se sec e a on en mayo es
ni eles du an e la es imulación con insulina, incluyendo algunas p o eínas elacionadas
con en e medades me abólicas, como la me alop o einasa 2 de ma iz (MMP-2) o la
PAI-1. Se encon a on ambién 19 p o eínas cuya sec eción disminuía en p esencia de
insulina, como la p o eína de unión a acil-CoA (ACBP) y la p o eína mo ogénica ósea 1
(BMP-1).
El mismo g upo años más a de, siguiendo una es a egia simila , ealizó una
ca ac e ización p o eómica de la misma línea celula de a a en p esencia o ausencia
de TNF-α pa a a a de a e igua si es a mioquina pod ía p esen a un e ec o de
esis encia a insulina [169]. Se encon a on 28 p o eínas cuya sec eción es aba
egulada po TNF-α, 10 de ellas con ni eles ele ados (po ejemplo la al a enolasa y la
p o eína de unión a os a idile anolamina 1) y 18 con sus ni eles disminuídos en
p esencia de TNF-α (po ejemplo la p o eína DJ-1, la pe oxi edoxina 4 y la disul u o
isome asa). Pa a comple a es e es udio ealiza on un análisis po mic ochips de la
exp esión gené ica en mues as muscula es ob enidas de a as Zucke .
8.4.3 Sec e omas du an e la di e enciación de mio ubos
Los es udios de la sec eción du an e la di e enciación adipoci a ia han apo ado un
alioso conocimien o sob e la egulación de es e p oceso y el descub imien o de
nue as adipoquinas que han ayudado a en ende aún más el uncionamien o del TA.
De es a o ma e a de espe a que una de las es a egias seguida po algunos de los
in es igado es in igados po el uncionamien o del ejido muscula como ó gano
endoc ino, ue a el es udio de la sec eción p o eica du an e el desa ollo y
di e enciación del ejido muscula esquelé ico.
El p ime abajo ealizado al espec o, se cen ó en el es udio de la sec eción
du an e la di e enciación de la línea celula mio ubula de a ón C2C12 median e
elec o o esis mono-dimensional y MALDI-TOF [170]. En es e es udio se iden i ica on
80 p o eínas, de las cuales 27 de ellas se clasi ica on como sec e adas, en e las que se
encon aba la MMP-2, cis a ina C y la p o eína ácida sec e ada ica en cis eína (SPARC);
ambas implicadas en la u a de señalización de TGF-β y en el p og ama de
di e enciación miogénica. O as p o eínas sec e adas que se iden i ica on es aban
elacionadas con la ECM, la p oli e ación celula , mig ación y señalización.
In oducción
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El mismo g upo comple ó su in es igación sob e la di e enciación de C2C12 con
o o abajo publicado en 2011 en el que u iliza on una es a egia basada en la
ecnología de ma caje SILAC y MS/MS ( igu a 25) [171]. Se iden i ica on 30 p o eínas
sec e adas de mane a di e encial du an e el desa ollo de los mio ubos, algunas de
ellas de nue o descub imien o y que pod ían ene una g an impo ancia biológica en
el man enimien o de la plu ipo encia y la di e enciación celula . Algunas de las
p o eínas iden i icadas ue on la p o eína elacionada con la olis a ina 1, os eoglicina,
espondina-2 y el inhibido de apop osis inducido po ci oquinas 1.
En un abajo simila de ca ac e ización de la sec eción de C2C12 po SILAC y
MS/MS ealizado un año an es [172], es e g upo llegó a iden i ica has a 635 p o eínas
sec e adas po es as células, conside ándose el es udio con el mayo núme o de
p o eínas sec e adas po el músculo iden i icadas has a el momen o. En e la ingen e
can idad de p o eínas sec e adas, des aca 3 iso o mas de la TGF-β, cuyos ni eles se
ie on aumen ados du an e la di e enciación, al igual que los ac o es de c ecimien o
simila es a insulina 1 y 2. O as p o eínas iden i icadas se ían la p o eína de unión a
ácidos g asos (FABP), SPARC, ib onec ina o de nue o la p o eína MMP-2.
Figu a 25: Es a egia de SILAC seguida po Chan y col. Pa a el es udio de la sec eción p o eica du an e la
di e enciación de mio ubos. Modi icado de [171].
In oducción
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8.4.4 Sec e omas de células muscula es humanas
Más allá de los es udios ealizados en líneas celula es p oceden es de animales,
exis en unos pocos es udios cen ados en la ca ac e ización de la sec eción en células
muscula es humanas.
En un abajo publicado en 2011, se u iliza on mioblas os p oceden es de biopsias
del músculo oblicuo in e no abdominal humano pa a se di e enciadas a mio ubos e
iden i ica en su sec e oma nue as p o eínas sec e adas con las que ealiza un es udio
pos e io de exp esión en espues a al es ue zo ísico. Pa a la iden i icación se usa on
écnicas p o eómicas de elec o o esis mono-dimensional y LC-MS/MS [173]. Se
iden i ica on 18 p o eínas sec e adas como la ib onec ina 1, gelsolina, p o eína
elacionada con olis a ina 1 y SPARC; de las cuales 15 p esen aban ni eles de
exp esión ele ados en mues as p oceden es de indi iduos some idos a un p og ama
de eje cicio as un análisis pos e io de su exp esión gené ica.
Con el obje i o de es udia los p ocesos de egene ación muscula , el g upo de Le
Bihan y col. se p opusie on es udia los mecanismos de comunicación in e celula
du an e es e p oceso median e la iden i icación de mioquinas en mioblas os
di e enciados ob enidos a pa i de células sa eli e humanas p oceden es de
nec opsias. Las p o eínas ue on iden i icadas median e 2-DE y LC-MS/MS [174]. Se
encon a on 253 p o eínas clasi icadas en an e io es abajos como sec e adas, de las
cuales 43 de ellas es aban implicadas en la miogénesis, mien as que o as se enca gan
de la egulación de o os ipos celula es, sugi iendo un papel impo an e de los
mioblas os en la emodelación muscula . También ca ac e iza on dos ipos de
mic o esículas de sec eción de i adas de la memb ana plasmá ica, que pueden ayuda
a en ende en pa e los complejos p ocesos de egulación de la sec eción po pa e del
ejido muscula esquelé ico.

Ma e iales y Mé odos
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1. Técnicas expe imen ales
1.1 Animales de expe imen ación
Los es udios ue on ealizados u ilizando a as macho Ra us no egicus de la cepa
Sp ague-Dawley p oceden es del Animala io Cen al de la Uni e sidad de San iago de
Compos ela ( igu a 26A). El modelo de a as Zucke diabé icas p ocede de una cepa
mu an e de Ra us no egicus ( a/ a) (Cha les Ri e labo a o ies, F ance) ( igu a 26B).
Los animales se man u ie on en el animala io del Depa amen o de Fisiología de la
Facul ad de Medicina (USC) a una empe a u a es able de 22 ± 2ºC y con ciclos de 12
ho as luz/oscu idad. Has a el inicio de los expe imen os los animales u ie on lib e
acceso a pienso come cial es ánda (SAFE-Panlab, España) y agua.
Todos los p o ocolos de manipulación y expe imen os lle ados a cabo han sido
ap obados p e iamen e po el Comi é É ico de Expe imen ación Animal de la
Uni e sidad de San iago de Compos ela.
Figu a 26: Las dos cepas de a as u ilizadas en es e abajo. Sp ague-Dawley (A); a a Zucke , cepa
mu an e de Ra us no egicus ( a/ a) (B).
1.1.2. Modelos animales
1.1.2.1 Eje cicio
Se u iliza on a as de 6 semanas de edad (ap oximadamen e 160 g) y se
man u ie on es abuladas en jaulas de ac i idad especiales con una ueda de 40
cen íme os de diáme o acoplada a un con ado de uel as (Ha a d Appa a us, MA,
EUA) ( igu a 27). Los animales es u ie on 5 días en pe iodo de aclima ación, as el cual
se comp obó su ac i idad en la ueda du an e las siguien es 8 ho as. Las a as cuyo
núme o de uel as ue meno o mayo que la media se desca a on.
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El eje cicio ue olun a io y du ó 6 días du an e los cuales los animales u ie on
lib e acceso a comida es ánda y agua. Se midió dia iamen e el núme o de uel as,
comida inge ida y peso co po al, así como la composición co po al a 0, 3 y 6 días
median e esonancia magné ica nuclea (Whole Body Composi ion Analyze ,
EchoMRI).
Como g upo con ol (Con ol Eje cicio) se u iliza on animales de las mismas
ca ac e ís icas y en las mismas condiciones. Se man u ie on du an e 6 días en jaulas
simila es sin ueda.
Adicionalmen e se ealizó un modelo de eje cicio simila pe o con una du ación de
3 semanas de acceso lib e a la ueda.
Figu a 27: Imagen de la jaula de ac i idad con el con ado de uel as conec ado.
1.1.2.2 Ano exia basada en la ac i idad.
La ano exia basada en la ac i idad (ABA) es un modelo es ablecido en a as hace 50
años [175] que combina la educción del apo e caló ico con la ac i idad ísica
olun a ia. Lo ca ac e ís ico de es e modelo es la ápida educción del peso co po al a
la ez que aumen a la ac i idad ísica dia ia de los animales. Así, se u iliza como
modelo de ano exia ne iosa humana sob e odo en es udios de compo amien o po
la simili ud de muchos de sus sín omas.
El diseño expe imen al ue equi alen e al modelo de eje cicio, pe o añadiendo una
es icción en el acceso a pienso y a la ueda. T as el pe iodo de aclima ación y
adap ación a la ueda, los animales se man u ie on du an e 6 días con lib e acceso a
agua y a la ueda de eje cicio sal o du an e el pe iodo de alimen ación, que du ó sólo
una ho a al día. Es e pe iodo de alimen ación ue ealizado odos los días a la misma
ho a.
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Po mo i os é icos, no se pe mi ió a los animales supe a una pé dida de peso
mayo del 20-30% de su peso co po al inicial. Los animales que alcanza on es a ci a
an es de los 6 días de expe imen o ue on desca ados [176].
Como g upo de con ol pa a ABA (Con ol ABA) se u iliza on animales de las mismas
ca ac e ís icas y en las mismas condiciones, pe o sin acceso a ueda.
1.1.2.3 Obesidad inducida po la die a.
El modelo de obesidad inducida po la die a (DIO) se u iliza pa a es udia los e ec os
de la obesidad p oducida al some e a los animales a una die a hipe caló ica al a en
g asas. La singula idad de es e modelo adica en que muchos de es os e ec os son
simila es a los egis ados en la obesidad humana, como son el aumen o en los ni eles
de lep ina, insulina y iglicé idos ci culan es o la disminución de la sensibilidad a
insulina.[177]
Se u iliza on a as de 8 semanas de edad (ap oximadamen e 250 g) que as una
semana de aclima ación se di idie on en dos g upos expe imen ales. El p ime g upo
ue alimen ado con una die a al a en g asa (High a die D12492; Resea ch Die s Inc.,
NJ, EUA) y el segundo g upo con una die a es ánda . La die a al a en g asa consis ía en
un 60% de g asa, 20% de p o eína y 20% de ca bohid a os; 5.24 Kcal/g. La die a
es ánda consis ía en un 5,5% de g asa, 23% de p o eína y 50% de ca bohid a os; 3.5
Kcal/g.
T as 10 semanas bajo es e ipo de die a las a as ue on sac i icadas. Du an e odo
el expe imen o se egis a on una ez po semana los alo es de inges a, peso y
composición co po al.
1.1.2.4 Modelo de a as Zucke diabé icas
El modelo de a as Zucke diabé icas (ZDF) es un modelo animal de diabe es ipo 2
bien ca ac e izado que po a una mu ación espon ánea en el ecep o de lep ina ( a)
[178], causando obesidad y esis encia a insulina. Las a as Zucke diabé icas de i an
del apa eamien o endogámico en e a as Zucke obesas, las cuales p esen an
obesidad y esis encia a insulina, ocasionando un eno ipo diabé ico a pa i de la 10
semana de edad [179].
Se u iliza on a as Zucke de 10 semanas de ida homocigo as (g upo expe imen al)
y he e ocigo as (g upo con ol) que en odo momen o u ie on lib e acceso a die a
es ánda y agua du an e 12 semanas ( igu a 26B).
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1.2 Líneas celula es
1.2.1 3T3-L1
Es una línea celula de i ada de la es ablecida en 1962 po Toda o y G een [180] y
ob enida a pa i de ejido emb iona io de a ones de la cepa Swiss. P esen a una
mo ología ipo ib oblas o y bajo condiciones ap opiadas las células pueden
di e encia se a adipoci os madu os.
Las células se man u ie on en placas de cul i o pe i de 100x20 mm (BD Bioscience,
NJ, EUA) en 8 ml de medio de cul i o DMEM (Lonza, Suiza) con 10% de sue o e al
bo ino (FBS), 100 U/ml de penicilina y 100 U/ml de es ep omicina. Pa a la
di e enciación [181] las células se incuba on has a llega a con luencia, pos e io men e
el medio de cul i o ue suplemen ado con 10 µg/ml de insulina, 0.5 mM de 3 isobu il-
1-me ilxan ina y 1 µM de dexame asona du an e 2 días. Du an e los siguien es 12 días,
el medio ue suplemen ado únicamen e con 10 µg/ml de insulina, cambiando el medio
cada 2 días.
1.2.2 L6E9
La línea celula L6E9 es un subclón de la línea celula neona al de a a L6 [182]
u ilizada en nume osos es udios elacionados con el músculo debido a su especial
acilidad pa a di e encia se a mio ubos [183].
Las células se incuba on en placas de cul i o pe i de 100x20 mm (BD Bioscience,
NJ, EUA) a baja densidad en el mismo medio de cul i o desc i o pa a 3T3-L1. Pa a
induci la di e enciación a mio ubos, las células se man u ie on has a llega a
con luencia, pos e io men e se incuba on du an e 8-10 días en 8 ml de medio de
cul i o DMEM con sólo un 2% de FBS.
1.2.3 Sec e omas de líneas celula es 3T3-L1 y L6E9
Se e i ó el medio de la placa de cul i o y se la a on las células a ias eces con
cuidado con el ampón HAM, in en ando elimina odo as o de FBS que se había
u ilizado pa a suplemen a el medio de cul i o. Inmedia amen e se incuba on las
células du an e 24 ho as (pa a la línea 3T3-L1) o 12 ho as (pa a la línea L6E9) en medio
DMEM sin FBS ni ojo enol (Lonza, Suiza) y suplemen ado con 100 U/ml de penicilina y
100 U/ml de es ep omicina.
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Al día siguien e se ecogió el medio de cul i o en il os de ul acen i ugación
(Amicon Ul a 3kDa cu o , Millipo e, Bille ica, EUA) y se concen ó has a un olumen
de en e 100-250 µl cen i ugando a 3500 pm a 4ºC.
1.3 Ex acción de ejido adiposo humano
Todas las mues as p oceden es de humanos ue on ob enidas de los pacien es as
habe i mado un consen imien o in o mado ap obado po el Comi é É ico de
In es igación Clínica de Galicia (CEIC de Galicia) de acue do con la Decla ación de
Helsinki.
El ejido adiposo se ex ajo de pacien es obesos (índice de masa co po al supe io a
35) some idos a una ope ación qui ú gica de gas ec omía po lapa oscopia g acias a la
colabo ación del Se icio de Ci ugía del Complexo Hospi ala io Uni e si a io de
San iago de Compos ela. El TAV ex aído se localiza en la egión hipogás ica
(al ededo de los ó ganos in e nos) y el TAS en la egión mesogás ica.
Los ejidos se anspo a on desde el qui ó ano al labo a o io en el ampón K ebs-
Ringe -Hepes (KRH) es é il suplemen ado con penicilina 100 U/ml y es ep omicina
100 µg/ml.
1.4 Ex acción de ejidos p oceden es de animales
Todos los ejidos de los animales ue on ex aídos cuidadosamen e en el qui ó ano
del animala io, minimizando odo lo posible las con aminaciones, en especial el pelo
de las a as. Se u ilizó ma e ial qui ú gico p e iamen e es e ilizado.
- Los ejidos des inados a expe imen os de sec eción se anspo a on al labo a o io en
el ampón KRH es é il con penicilina (100 U/ml) y es ep omicina (100 µg/ml) a
empe a u a ambien e. Pos e io men e se p ocesa on pa a elimina cualquie
con aminan e median e la ados sucesi os en KRH en condiciones es e iles (campana
de lujo lamina ).
- Los ejidos des inados a es udios de p o eína in acelula y mensaje o ue on
congelados en hielo seco en el mismo qui ó ano y almacenados pos e io men e a -
80ºC en el labo a o io.
- Los ejidos des inados a inmunohis oquímica se in oduje on en un ubo ipo Falcon
de 50 ml en uel os en una gasa qui ú gica empapada en sue o isiológico y se
aslada on inmedia amen e al labo a o io a empe a u a ambien e.
1.4.1 Localización de los ejidos ex aídos

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- El ejido adiposo blanco se seleccionó de es localizaciones dis in as:
 TAVo: Localizado en la ca idad pe i oneal, al ededo de las ísce as ( igu a 28A).
 TAVg: Tejido adiposo unido a los es ículos ( igu a 28B).
 TAS: Si uado bajo la piel de las ingles ( igu a 28C).
- El Tejido adiposo pa do se ex ajo de la egión subcu ánea del á ea sup acla icula
( igu a 28D).
- En el caso del ejido muscula esquelé ico, se selecciona on dos ipos múscula es
dis in os si uados en la pa a del animal:
 Sóleo: Ca ac e izado po posee mayo ía de ib as ipo I (oxida i as len as)
( igu a 28E).
 Gas ocnemio: Con mayo ía de ib as ipo II (glucolí icas ápidas) ( igu a 28F).
Figu a 28: Localización de los ejidos ex aídos en a a. TAVo (A); TAVg (B); TAS (C); TAP (D);
Gas ocnemio (E); Sóleo (F).
1.4.2 Cul i os de explan es
El p o ocolo de cul i o de explan es se basó en el desa ollado po Ál a ez-Llamas
en 2007 pa a el es udio del sec e oma del TAV humano [150].
Una ez ex aídos los ejidos (los cuales p esen a on pesos simila es según el ipo),
se ealizó una se ie de p eincubaciones con el in de acondiciona el ejido pa a el
expe imen o de sec eción y elimina en la medida de lo posible odos los
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con aminan es p esen es en el ejido, an o sang e como componen es in acelula es
p oceden es de la o u a celula . Inicialmen e los ejidos ue on incubados en placas
de cul i o de 6 pocillos (Iwaki, Tokio, Japón) con 5 ml de medio DMEM sin ojo enol ni
sue o y suplemen ado con una mezcla de penicilina (100 U/ml) y es ep omicina (100
µg/ml). El medio de cul i o se cambió cada 2 ho as dos eces y una más a las 16 ho as.
Finalmen e se añadie on 3 ml de medio esco a los ejidos y se incuba on du an e 24
ho as ( ejido adiposo) y 12 ho as ( ejido muscula esquelé ico) ( igu a 29). T as es e
iempo, se ecogió el medio de cul i o (sec e oma), se cen i ugó pa a elimina células
que se pudie an habe desp endido y se congeló a -80ºC has a su uso, o se p ocedió
di ec amen e a su p ocesado.
Figu a 29: Fo o del cul i o de di e en es explan es isula es. De izquie da a de echa y de a iba abajo:
TAS, TAVo, TAVg, TAP, gas ocnemio y sóleo.
1.5 Es ablecimien o de cul i os p ima ios en ejido adiposo blanco.
1.5.1 Dispe sión isula
T as la ex acción de ejido adiposo blanco, se la ó a ias eces en ampón os a o
salino (PBS) es é il pa a elimina los posibles es os de sang e, se coloca on
ap oximadamen e 5 g amos de ejido en una placa pe i con 10 ml de medio DMEM-
F12 (Lonza, Suiza) y con la ayuda de dos bis u íes se co ó el ejido en ozos de
ap oximadamen e 1 mg pa a pode se ecogidos u ilizando una pipe a pas eu
(dispe sión mecánica).
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Se ecogie on los ozos y el medio de la placa en un ubo ipo Falcon de 50 ml al
que se le añadió colagenasa ipo I 0.2% (Gibco, CA, EUA). El olumen inal se lle ó a 20
ml con medio DMEM-F12 y se incubó la mues a a 37 ºC en agi ación de 30 a 60
minu os (dispe sión enzimá ica).
1.5.2 Sepa ación de las acciones celula es
Una ez ealizada la dispe sión, se il ó el homogenado con un il o de 100 µm de
diáme o de po o (BD Biosciences, NJ, EUA), con ayuda de una pipe a pas eu se pasó a
un ubo nue o ipo Falcon de 50 ml y se lle ó a un olumen de 20 ml con medio
DMEM-F12 esco suplemen ado con un 5% de sue o e al bo ino. La mues a se
cen i ugó a 1800 pm du an e 10 minu os.
T as la cen i ugación se obse a on a ias ases bien di e enciadas ( igu a 30):
 Capa anspa en e/ama illa: G asa libe ada po las células o as.
 Fase blanca (inmedia amen e debajo): Adipoci os madu os in ac os.
 Fase acuosa: Medio de cul i o lib e de células.
 Pelle : F acción celula del es oma de ejido adiposo más las células que se han
o o y es os de ejido sin disg ega que han pasado po el il o.
Figu a 30: Rep esen ación de las dis in as capas esul an es de la diges ión enzimá ica.
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1.5.2.1 Ob ención de los adipoci os madu os
Se ecogió la ase blanca in e media as e i a con cuidado la ase ama illa y se
ans i ió a un ubo ipo alcon de 50 ml con 10 ml de medio DMEM-F12. Se cen i ugó
a 950 pm du an e 10 minu os y se ecogió nue amen e la ase blanca, la cual se
congeló di ec amen e a -80ºC o se p epa ó pa a los expe imen os de sec eción.
1.5.2.2 Ob ención de las células del es oma del ejido adiposo.
T as la sepa ación de las dis in as acciones celula es del ejido adiposo, se aisla on
las células del pelle con la ayuda de un il o de 40 µm de diáme o de po o (BD
Biosciences, NJ, EUA) y se pasa on a un ubo nue o ipo Falcon de 50 ml con 10 ml de
medio DMEM-F12. Las células se cen i uga on a 950 pm du an e 10 minu os y se
eliminó el sob enadan e po decan ación. Se ol ió a añadi 10 ml de medio DMEM-
F12 y se cen i ugó de nue o a 950 pm du an e 10 minu os.
T as elimina el sob enadan e, el pelle se esuspendió en 5 ml de medio DMEM-
F12 suplemen ado con un 10% de sue o e al bo ino y se semb a on
ap oximadamen e 1.000.000 de células en una paca pe i de 100x20 mm (BD
Bioscience, NJ, EUA); se deja on asen a en e 24-48 ho as as lo cual, según el
olumen inal de células asen adas obse ado con ayuda de un mic oscopio óp ico, se
le an a on y se epa ie on en a ias placas pe i.
Las células se man u ie on en cul i o 10 pases, has a el quin o pase
ap oximadamen e hubo mezcla de p eadipoci os, mac ó agos y o os ipos celula es
que componen el es oma; pe o a pa i del sex o pase, la mayo ía de las células
p esen es e an p eadipoci os ( igu a 31).
Figu a 31: Imagen de p eadipoci os aislados de TAB as el sex o pase omada con un mic oscopio óp ico
in e ido de campo cla o. A: TAS, B: TAVo.
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El p o ocolo seguido ue el especi icado en las ins ucciones del ki . La
cuan i icación se ealizó a 450 nm median e un lec o Ve saMax ELISA Mic opla e
Reade (Molecula De ices, CA, EUA)
2.1.6 Radioinmunoensayo (RIA)
Pa a la de e minación de insulina, lep ina y g elina se usó la écnica de
Radioinmunoensayo. Es e p ocedimien o se basa en la compe encia de unión a un
an icue po especí ico que se es ablece en e la ho mona a cuan i ica (lib e) y
can idades conocidas de la misma ma cada con un isó opo adiac i o. De es a o ma,
cuan a más ho mona lib e, meno se á la unión de la ma cada al an icue po y
ice e sa.
2.1.6.1 RIA Gh elina
Los ni eles ci culan es de gh elina se de e mina on en el plasma de las a as
median e la u ilización de un ki come cial de adioinmunoensayo (Linco esea ch Inc.,
MO, EUA). Los eac i os u ilizados ue on los siguien es:
 Ho mona ma cada: I125-Gh elina. 302 μCi/μg
 Cu a es ánda de 8 pun os: 10 pg/ml a 1000 pg/ml
 An icue po: An i-gh elina ob enido en cobaya
 Tampón de ensayo: Fos a o 0.01M, EDTA 0.01M, azida sódica 0.08%, y gela ina
pH 6.85
 IgG de sue o de cobaya ob enido en cab a
 Reac i o p ecipi an e: IgG de sue o de cobaya ob enido en cab a, polie ilenglicol
3% y T i on X-100 0.05% diluido en os osalino 0.05M, EDTA 0.025M y azida
sódica 0.08%.
P ime día: Se pipe ea on 300 µl de ampón de ensayo a los ubos NSB, 200 µl a los
TB y 100 µl al es o de los ubos del ensayo excep o a los TC. A con inuación se
añadie on 100 µl de los es ánda es, con oles de calidad y mues as a los ubos
co espondien es ( odos po duplicado). Seguidamen e se añadie on 100 µl de
an icue po a odos los ubos excep o los TC y NSB. La mezcla se agi ó y se dejó cubie a
du an e oda la noche a 4ºC ( abla 9).
Segundo día: Se añadie on 100 µl de ho mona ma cada a odos los ubos. Agi a la
mezcla, cub i e incuba oda la noche a 4ºC.

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Tabla 9: Dis ibución de los ubos del ensayo pa a la de ección de gh elina y eac i os añadidos a cada
uno.
Te ce día: Se añadie on 10 µl de IgG de sue o de cobaya a odos los ubos excep o
a los TC. Pos e io men e se añadie on 1.0 ml de eac i o de p ecipi ación ío (4ºC) a
odos los ubos excep o a los TC. Se agi ó la mezcla y se incubó du an e 20 minu os a
4ºC. Finalmen e odos los ubos excep o los TC se cen i uga on a 3000 g du an e 20
minu os. Se eliminó el sob enadan e po decan ación dejando el p ecipi ado seco.
La adiac i idad del p ecipi ado se midió median e un con ado γ (Wiza d 1470,
Wallac). Las concen aciones de gh elina se calcula on au omá icamen e u ilizando el
p og ama RIAcalc-LBK (Wallac)
2.1.6.2 RIA Insulina
Los ni eles ci culan es de insulina se de e mina on en el plasma de las a as
median e la u ilización de un ki come cial de adioinmunoensayo (Linco esea ch Inc.,
MO, EUA). Los eac i os u ilizados ue on los siguien es:
 Ho mona ma cada: I125-Insulina. 367 μCi/μg
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 Cu a es ánda de 7 pun os: 0.1 ng/ml a 10 ng/ml
 An icue po: An i-insulina ob enido en cobaya
 Tampón de ensayo: os osalino pH 7.4 0.05M, EDTA 0.025M, azida sódica 0.08%,
y BSA 1%.
 Reac i o p ecipi an e: IgG de sue o de cobaya ob enido en cab a, polie ilenglicol
3% y T i on X-100 0.05% diluido en os osalino 0.05M, EDTA 0.025M y azida
sódica 0.08%.
Tabla 10: Dis ibución de los ubos del ensayo pa a la de ección de insulina y eac i os añadidos a cada
uno.
P ime día: Se pipe ea on 200 µl de ampón de ensayo a los ubos NSB y 100 µl a los
TB. A con inuación se añadie on 100 µl de los es ánda es, con oles de calidad y
mues as a los ubos co espondien es ( odos po duplicado). Seguidamen e se
añadie on 100 µl de ho mona ma cada a odos los ubos, y 100 µl de an icue po
excep o los ubos TC y NSB. La mezcla se agi ó y se dejó cubie a du an e oda la noche
a 4ºC ( abla 10).
Segundo día: Se añadie on 0.1 ml de eac i o de p ecipi ación ío (4ºC) a odos los
ubos excep o a los TC. Se agi ó la mezcla y se incubó du an e 20 minu os a 4ºC.
Finalmen e odos los ubos excep o los TC se cen i uga on a 3000 g du an e 20
minu os. Se eliminó el sob enadan e po decan ación dejando el p ecipi ado seco.
Se midió la adiac i idad del p ecipi ado y se calcula on las concen aciones de
insulina del mismo modo que pa a el RIA de gh elina.
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2.1.6.3 RIA Lep ina
Los ni eles ci culan es de lep ina se de e mina on en el plasma de las a as
median e la u ilización de un ki come cial de adioinmunoensayo (Linco esea ch Inc.,
MO, EUA). Los eac i os u ilizados ue on los siguien es:
 Ho mona ma cada: I125-lep ina. 135 μCi/μg.
 Cu a es ánda de 7 pun os: 0.05 ng/ml a 10 ng/ml.
 An icue po: An i-lep ina ob enido en cobaya.
 Tampón de ensayo: os osalino pH 7.4 0.05M, EDTA 0.025M, azida sódica 0.08%,
y BSA 1% y i on-X 0.05%.
 Reac i o p ecipi an e: IgG de sue o de cobaya ob enido de cab a, polie ilenglicol
3% y T i on X-100 0.05% diluido en os osalino 0.05M, EDTA 0.025M y azida
sódica 0.08%.
Tabla 11: Dis ibución de los ubos del ensayo pa a la de ección de lep ina y eac i os añadidos a cada
uno.
P ime día: Se pipe ea on 300 µl de ampón de ensayo a los ubos NSB, 200 µl a los
TB y 100 µl al es o de los ubos del ensayo excep o a los TC. A con inuación se
añadie on 100 µl de los es ánda es, con oles de calidad y mues as a los ubos
co espondien es ( odos po duplicado). Seguidamen e se añadie on 100 µl de
ho mona ma cada a odos los ubos, y 100 µl de an icue po excep o los ubos TC y
NSB. La mezcla se agi ó y se dejó cubie a du an e oda la noche a 4ºC ( abla 11).
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Segundo día: El p o ocolo pa a es e día ue simila al seguido pa a el RIA de insulina.
Se midió la adiac i idad del p ecipi ado y se calcula on las concen aciones de
lep ina del mismo modo que pa a el RIA de gh elina.
2.1.7 Inmunohis oquímica
Se uso la écnica de inmunohis oquímica pa a de e mina la p esencia de ib as
ápidas (miosina ápida) o len as (miosina len a) en el ejido muscula esquelé ico.
Pa a ello, las mues as de ejido a es udio se en ia on a la Pla a o ma de
Inmunohis oquímica disponible en el Se icio de Ana omía Pa ológica-Dp o. Ciencias
Mo ológicas (CHUS). Allí las mues as se congela on en isopen ano, p e iamen e
en iado en ni ógeno líquido, y se co a on u ilizando un c ios a o. Se mon a on
secciones de 10 µm de ancho en po aobje os FLEX IHC (Dako, Glos up, Dinama ca)
pa a ealiza la inmunode ección de o ma au omá ica median e un Au os aine Link 48
(Dako).
El p o ocolo seguido ue el siguien e:
 5 min de bloqueo con EnVision FLEX pe oxidase-blocking eagen (Dako).
 30 min de incubación con el an icue po monoclonal de a ón pa a miosina len a
(No ocas a, Newcas le, UK) con una dilución 1/10, y el an icue po monoclonal
de a ón pa a miosina ápida (No ocas a) a una dilución 1/20 en un co e
con iguo.
 20 min de incubación con EnVision FLEX/HRP (políme o de dex ano conjugado
con pe oxidasa de ábano y an icue pos en e a a ón y conejo).
 10 min de e elado con e ahid oclo u o de 3,3'-diaminobenzidina (DAB) (Dako).
T as es e paso se iñe on los núcleos du an e 9 minu os con EnVision FLEX
hema oxilina (Dako).
Las p epa aciones ue on obse adas y o og a iadas u ilizando pa a ello un
mic oscopio óp ico de campo cla o.
2.2 Es udios de exp esión (ARNm): PCR cuan i a i a a iempo eal
(qRT-PCR)
Pa a la de e minación de la exp esión gené ica se u ilizó la qRT-PCR. La eacción en
cadena de la polime asa con ansc ip asa in e sa (RT-PCR, e e se ansc ip ion
polyme ase chain eac ion) es una a ian e de la PCR en la cual una heb a de ARN se
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e o ansc ibe a ADN complemen a io u ilizando la enzima ansc ip asa in e sa,
ampli icándose es e ADN median e una PCR en iempo eal.
La PCR en iempo eal pe mi e cuan i ica de mane a absolu a el p oduc o de la
eacción de PCR median e el uso de sondas Taqman (sondas especí icas ma cadas con
luo oc omos: donado y acep o ), cuyo sis ema de de ección se basa en la
ans e encia de ene gía luo escen e median e esonancia (FRET) en e las dos
moléculas.
2.2.1 Ex acción RNA-T izol
 0.1 g de ejido (adiposo o muscula ) almacenado a -80ºC se in odujo en un
eppendo con 800 µl de agen e T izol® (in i ogen, CA, EUA) y una o dos bolas
de me al pa a se homogenizado mecánicamen e median e un homogenizado
au omá ico “TissueLyse II” (Quiagen, Japón) a 30 Hz du an e 3 minu os.
 T as la homogenización, la mues a se cen i ugó a 12000 g du an e 10 minu os a
8 ºC y se ecogió el sob enadan e en un eppendo limpio.
 Se añadie on 160 µl de clo o o mo po cada 800 µl de T izol, se agi ó el
eppendo po in e sión y se incubó al ededo de 3 minu os has a e se bien
di e enciadas las dos capas.
 Pos e io men e se cen i ugó a 12000 g du an e 15 minu os a 4 ºC, se ecogió el
sob enadan e en o o eppendo nue o con cuidado de no oca la in e ase
blanquecina (p o eínas).
 Se añadie on 400 µl de isop opanol po cada 800 µl de T izol, se agi ó el
eppendo po in e sión y se incubó 10 minu os a empe a u a ambien e.
 A con inuación, se cen i uga on a 12000 g du an e 10 minu os a 4 ºC (a pa i de
es a cen i ugación la mues a debe pe manece siemp e en hielo). Se eliminó el
sob enadan e po decan ación con mucho cuidado de no a as a el pelle .
Pos e io men e se añadie on 800 µl de e anol al 75% diluido en H2O DEPC (H2O
bides ilada con die ilpi oca bona o al 0.1%) po cada 800 µl de T izol.
 Se cen i ugó a 7500 g du an e 5 minu os a 4 ºC, se eliminó el sob enadan e
decan ando el eppendo con cuidado de no a as a el pelle . Una ez seco, se
esuspendió el pelle en 25 µl de H2O DEPC.
 Finalmen e se cuan i icó en un NanoD op 2000c Spec opho ome e (The mo
Scien i ic, MA, EUA)

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2.2.2 T a amien o con DNasas
 Se siguió el p o ocolo del ki come cial Ambion® DNA- ee™ (Li e Technologies,
CA, EUA)
 Pa a el a amien o se calculó el olumen necesa io pa a e o ansc ibi 2 µg de
RNA en un olumen máximo de 12,5 µl de H2O DEPC.
 Se p epa ó una mezcla con 1.5 µl del ampón p opo cionado po el ki come cial
y 1 µl de DNasa I, y se añadió a la mues a. Se incubó el eppendo en el
e mociclado Illumina Eco Real Time PCR Sys em (Cul ek S.L.U., España) du an e
30 minu os a 37 ºC. T as la incubación se pasó di ec amen e el eppendo a
hielo.
 Se añadie on 2 µl del eac i o de inac i ación de la DNasa y se incubó 3 minu os
a empe a u a ambien e.
 T as es e iempo se cen i ugó la mues a a 1000 g du an e 1.5 minu os y se
pasa on 10 µl de sob enadan e a o o eppendo .
 Finalmen e se con inuó con la e o ansc ipción (la mues a puede se
congelada a -80 ºC en el caso de no usa se as el a amien o con DNasas)
2.2.3 Re o ansc ipción
Se u ilizó el ki come cial High Capaci y cDNA Re e se T ansc ip ion Ki (Applied
Biosys ems, CA, EUA).
Lo p ime o que se hizo ue p epa a una mezcla con eniendo 2 µl de ampón de
e o ansc ipción 10x, 0.8 µl de mezcla de dNTP al 20x (100 mM), 2 µl de cebado es
de e o ansc ipción alea o ios, 1 µl de Mul iSc ibe Re e se T ansc ip ase y 4.2 µl de
H2O DEPC.
Se pipe ea on 10 µl de la mezcla sob e los 10 µl de la mues a y se colocó en el
e mociclado con el p og ama:
10 minu os a 25 ºC / 120 minu os a 37 ºC / 5 minu os a 85 ºC / 4 ºC has a la
ecogida de la mues a.
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2.2.4 qRT-PCR
Se u ilizó el ki come cial TaqMan® Uni e sal PCR Mas e Mix, No AmpE ase® UNG
(Applied Biosys ems, CA, EUA).
Siemp e que se ealizó pa a un gen o un ejido po p ime a ez ue equisi o
necesa io hace una p ueba de las diluciones ap opiadas. Se p oba on las siguien es
diluciones:
Sin dilui (2 µl de cDNA + 7 µl de H2O DEPC) / 1:50 / 1:500 / 1:5000
Pa a da po buenas las diluciones debe ía habe 3 ciclos ap oximadamen e en e
una y o a; en es e es udio se escogió aquella dilución que caía en e los 20-30 CT
(cycle h eshold, ciclo umb al). Una ez escogida la dilución se p epa ó la mezcla po
gen usado en placas de 96 pocillos ( an o pa a el gen p oblema como pa a el gen
cons i u i o), en la que en cada pocillo i ían 1 µl de p ime y 10 µl de la Mas e Mix
p opo cionada po el ki . El gen cons i u i o usado ue HPRT y odas las mues as se
analiza on po duplicado (Tabla 12).
A la mezcla de cada pocillo se les añadie on 9 µl del ADN complemen a io
co espondien e ob enido as la e o ansc ipción. Se selló la placa con un adhesi o
óp ico y se cen i ugó a 3000 pm du an e 1 minu o. Finalmen e la placa se in odujo
en el equipo de PCR a iempo eal (S ep One Plus Real-Time PCR Sys em; Applied
Biosys ems, CA, EUA), u ilizando el p o ocolo es ánda de 2 ho as de du ación. Los
esul ados se analiza on u ilizando el so wa e p opo cionado po el apa a o.
Tabla 12: Lis a de cebado es u ilizados en es e abajo.
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2.3 Es udios de composición co po al: Imagen po esonancia
magné ica (IRM)
Pa a ealiza las medidas de la composición co po al se u ilizó un sis ema de imagen
po esonancia magné ica que p opo ciona medidas p ecisas de los pa áme os de
composición co po al: g asa co po al o al, masa de ejido mag o, luidos co po ales, y
agua co po al o al en a as y a ones de has a 700 g amos sin la necesidad de
anes esia o sedación. (Whole Body Composi ion Analyze , EchoMRI Echo Medical
Sys ems, TX, USA). Las mediciones se ealiza on en los animales a dis in os iempo
según modelo expe imen al, pe mi iendo conoce los alo es en g amos del o al de
ejido adiposo, así como de ejido mag o (masa muscula lib e de ejido adiposo)
co po al de las a as ( igu a 32).
Figu a 32: Imagen del apa a o de imagen po esonancia magné ica EchoMRI ( o o omada de
www.echom i.com).
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2.4 Es udios me abólicos
2.4.1 De e minación de glucosa en sang e
Se u ilizó un medido de glucosa Accu-CHEK senso (Roche, Suiza) pa a de e mina
los alo es de glucosa en sang e ob enida a a és de un ino co e ealizado con un
bis u í en la cola de las a as as 20 ho as en ayunas.
2.4.2 Modelo de e aluación de la homeos asis (índice HOMA)
Se u ilizó es e mé odo pa a cuan i ica la esis encia a insulina y el po cen aje
emanen e de células β (be a). Fue desc i o po p ime a ez po el D .Ma hews y
colabo ado es en el año 1985 [185]. Es e p ocedimien o es á basado en la elación que
exis e en e la concen ación de insulina en sue o y la concen ación de glucosa en
sang e según la siguien e ecuación:
Así, los alo es ele ados de índice HOMA indican baja esis encia a insulina y
ice e sa.
Los alo es de insulina se ob u ie on en sue o de a as median e la écnica de RIA,
mien as que los alo es de glucosa en sang e se ob u ie on g acias a un medido de
glucosa al y como se desc ibe en apa ados an e io es.
2.5 Análisis es adís ico
Sal o cuando se indica lo con a io (Ej. Análisis de imagen en es udios p o eómicos),
el análisis es adís ico se ealizó median e el so wa e G aphPad P ism 5 (G aphPad
So wa e Inc, CA, EUA). En conc e o los da os ue on analizados u ilizando el es no
pa amé ico Mann-Whi ney, conside ando una p<0.05 como signi ica i o y una p<0.01
como muy signi ica i o. Los esul ados se exp esa on como media±SEM.
3. Técnicas p o eómicas
Todas las écnicas que se desc iben a con inuación ue on hechas en la Unidad de
P o eómica del Hospi al Clínico Uni e si a io de San iago (Fundación Ramón
Domínguez/Ins i u o de In es igación Sani a ia de San iago). En conc e o los pasos
p e ios a la iden i icación po espec ome ía de masas se ealiza on en la sala blanca
de dicha unidad bajo p esión posi i a minimizando así la con aminación de las
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Figu a 38: Dibujo esquemá ico mos ando la dis ibución de las os o ilaciones y glucosilaciones de una
p o eína en un gel 2D.
3.3 Análisis de imagen di e encial
El análisis di e encial de geles 2-DE es una pode osa he amien a u ilizada pa a
iden i ica di e encias cuali a i as y cuan i a i as de una p o eína en e a ios g upos
expe imen ales dis in os. T as la inción de un gel de elec o o esis 2-DE se obse a un
pa ón de manchas más o menos complejo, en el cual en eo ía, cada mancha
co esponde ía a una p o eína de la mues a analizada.
Pa a el análisis de es e abajo se compa a on las imágenes de a ios g upos de 4
geles 2-DE cada uno (cada gel co espondien e a una mues a conc e a y cada mues a
co espondien e a un solo animal) ( igu a 39). Pa a lle a a cabo la compa ación, las
condiciones pa a la ob ención de las imágenes u ie on que se las mismas (geles, IEF y
elec o o esis ealizadas a la ez), in en ando ob ene pa ones de manchas lo más
homogéneos posibles den o de cada g upo expe imen al. La homogeneidad de los
mismos se obse ó median e la ealización de un análisis de los componen es
p incipales (PCA).
Según el es udio ealizado, se u iliza on dos ipos de análisis de imagen:
 El es udio del sec e oma de ejido adiposo se lle ó a cabo u ilizando el so wa e
de análisis de imagen Ludesi REDFIN BASIC (Ludesi, Suecia,
h p://www.ludesi.com). Es e análisis pe mi ió un con ol óp imo sob e las
po enciales a iaciones de i adas de la écnica. Pa a la de ección de las manchas,
segmen ación y colocalización en los geles se siguió un p o ocolo es ic o que

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asegu ó un al o ni el de exac i ud. Se midie on las in ensidades de cada una de
las manchas, no malizadas con la in ensidad de ondo de los geles. Es a
no malización pe mi e elimina di e encias sis emá icas en los geles como son
a iaciones de la in ensidad en la inción, iempo de escaneado y ca ga p o eica;
pe mi iendo una cuan i icación y compa ación adecuada de los di e en es geles.
Pa a las manchas que p esen aban un inc emen o de cambio >2 y una a ianza
p<0.05 ( es es adís ico ANOVA) se conside ó que p esen aban di e encias
signi ica i as, mien as que aquellas con una p<0.001 se conside a on muy
signi ica i as y ue on seleccionadas pa a su escisión e iden i icación.
 Pa a el es udio del sec e oma de ejido muscula esquelé ico, las imágenes se
en ia on al Cen o de Análisis de Ludesi (Lund, Suecia, h p://www.ludesi.com)
en donde se ealizó un análisis p o esional median e el so wa e Ludesi REDFIN
Solo. G acias a es e so wa e y al aseso amien o p o esional del equipo de
Ludesi, pe mi ió un con ol más in ensi o de las di e en es a iaciones en los
geles log ando un análisis obus o de las di e encias exis en es en e los geles.
Las manchas con un inc emen o de cambio >2 y una a ianza p<0.05 ( es
es adís ico ANOVA) del análisis di e encial de sóleo en e a gas ocnemio, y un
inc emen o de cambio >2 y una a ianza p<0.01 del análisis compa a i o bajo
condiciones ad libi um en e a eje cicio, ue on seleccionadas pa a su escisión e
iden i icación.
Figu a 39: Esquema del p oceso de análisis de imagen pa a el es udio compa a i o del sec e oma de los
es depósi os p incipales de TA en a a. A la de echa, dis ibución en el gel de las manchas que
p esen aban di e encias signi ica i as.
Ma e iales y Mé odos
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3.4 Diges ión p o eica en gel
Una ez inalizado el análisis di e encial, las manchas seleccionadas se co a on del
gel. Es o se hizo de o ma manual u ilizando la mi ad de una pun a de pipe a de 200 µl
pa a pode ob ene con mayo p ecisión la sección del gel en donde se encuen a la
mancha. En el caso de geles eñidos con azul de coomassie, las manchas se pudie on
co a a simple is a; sin emba go pa a los geles eñidos en Syp o Ruby, ue necesa ia
la u ilización de un ansiluminado Da k Reade DR46B T ansillumina o (Cla e
Chemical Resea ch, CO, EUA) en oscu idad ( igu a 40A). Los ozos de gel se pasa on a
ubos eppendo indi iduales con unos 10 µl de H2O ul apu a.
Figu a 40: P incipales equipos u ilizados pa a la escisión, diges ión e iden i icación de las manchas
seleccionadas en un gel 2-DE. Da k Reade DR46B T ansillumina o (A); Sa an SpeedVac Concen a o
(B); Op i-TOF MALDI pla e (C); 4800 MALDI-TOF/TOF Analyze (D).
Ma e iales y Mé odos
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An es de pode ealiza se la iden i icación median e el espec óme o de masas ue
necesa io hace una se ie de modi icaciones y ealiza una diges ión pep ídica de las
p o eínas den o del mismo gel. Dichas modi icaciones son la educción de puen es
disul u o y la alquilación de las cis eínas, de es a o ma las p o eínas quedan
desna u alizadas mos ando los si ios de co e pa a la diges ión enzimá ica y ambién
e i ando la o mación de díme os. El p o ocolo u ilizado ue el siguien e ( igu a 41):
 Se ealiza on 3 la ados de 30 minu os cada uno con 190 µl de una solución de
bica bona o amónico 50 mM (Sigma-Ald ich, MO, EUA) y me anol 50% de g ado
HPLC (Scha lau, España) (solución de la ado) si la inción ue ealizada con azul
de Coomassie. En el caso de las mues as eñidas con Syp o Ruby, cada uno de
los iempos de la ado ue on de 20 minu os. Pos e io men e se deja on 5
minu os en 50 µl de ace oni ilo 100% de g ado HPLC (Scha lau, España) pa a
deshid a a los geles y se seca on median e una cen í uga de e apo ación al
acío (Sa an SpeedVac Concen a o , The mo Scien i ic, MA, EUA) ( igu a 40B).
 Se eduje on los posibles puen es disul u o de la mues a median e una
incubación de 30 minu os a 56ºC con 50 µl de di io ei ol 10 mM (Sigma-Ald ich,
MO, EUA) en bica bona o amónico 50 mM. T as es o se ealiza on 2 la ados de
10 minu os cada uno con 190 µl de la solución de la ado, pa a luego ol e a
incuba la mues a 5 minu os con 50 µl de ace oni ilo 100% y se deshid a ó la
mues a.
 Una ez deshid a ada, la mues a se incubó 20 minu os en oscu idad con 40 µl
de yodoace amida 55 mM (Sigma-Ald ich, MO, EUA) en bica bona o amónico 50
mM pa a p oduci la alquilación de las cis eínas. Pos e io men e se epi ie on
los pasos de la ado y deshid a ación comen ados a iba.
 Se añadió ipsina po cina 20 ng/µl (P omega, WI, EUA) en bica bona o amónico
20 mM y se incubó a 37ºC du an e oda la noche.
 T as la diges ión, se ex aje on los pép idos esul an es con una solución de
ace oni ilo 60% y ácido ó mico 0.5% (Scha lau, España). Es e paso se ealizó 3
eces pa a ob ene la mayo can idad posible de pép idos (35-40-35 µl). En e
cada ex acción se incuba on las mues as 20 minu os con la solución.
 Finalmen e se unie on las es ex acciones pep ídicas, se concen a on al acío y
se gua da on a -20ºC has a su uso.
Ma e iales y Mé odos
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Figu a 41: P o ocolo esquemá ico de los pasos necesa ios pa a ealiza la diges ión enzimá ica de las
p o eínas den o de un gel de elec o o esis.
3.5 Espec ome ía de masas
Pa a la iden i icación po espec ome ía de masas, las mues as se esuspendie on
en ácido ó mico 0.5%, as es o se ca ga on 0.5 µl de mues a jun o con 0.5 µl de
ma iz de ácido α-ciano-4-hid oxicinámico (3 mg diluidos en 1 ml de ace oni ilo 50% y
ácido i luo oacé ico 0.1%) en un pla o de 384 espacios Op i-TOF MALDI pla e
(Applied Biosys ems, CA, EUA) ( igu a 40C), y se dejó seca la mezcla a empe a u a
ambien e.
Los da os de espec ome ía de masas ue on ob enidos au omá icamen e
u ilizando un 4800 MALDI-TOF/TOF Analyze (Applied Biosys ems, CA, EUA) con uen e
de ionización MALDI (deso ción/ionización láse asis ido po ma iz) ( igu a 40D). Los
espec os de masas (MS) se adqui ie on en modo e lec o posi i o con un láse
Nd:YAG (neodymium-doped y ium aluminium ga ne ) de 355 nm. La media de
dispa os del láse po mues a ue de 1000 y se u iliza on al menos es picos
esul an es de la au olisis de la ipsina como calib ación in e na. Todos los espec os
de agmen ación MS/MS ue on ealizados as selecciona los p ecu so es con una
esolución 300 FWHM (“Full Widh High a Hal Maximum”) y la sup esión de
me aes ables.
El análisis au omá ico de los da os ob enidos se ealizó median e el so wa e 4000
Se ies Explo e So wa e 3.5 (Applied Biosys ems, CA, EUA). Los da os de los espec os
de MS y MS/MS se combina on a a és del GPS Explo e So wa e 3.6 median e el
Ma e iales y Mé odos
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Masco So wa e 2.1 (Ma ix Science) pa a ealiza la búsqueda en una base de da os
no- edundan e (SwissP o elease 56.0), con una ole ancia de 30 ppm pa a la masa
del pép ido y 0.35 Da de ole ancia pa a los agmen os pep ídicos esul an es. Todos
los espec os y da os ob enidos ue on e isados manualmen e en de alle usando los
so wa es p e iamen e ci ados. Los alo es de de ección ob enidos po iden i icación
supe io es a 56 ue on acep ados como signi ica i os (p<0.05), conside ando posi i a
la iden i icación cuando el coe icien e de in e alo se encon aba po encima del 98%.
En el caso de los espec os MS/MS, el po cen aje de con ianza acep ado se dispuso po
encima del 95%.
3.6 P edicción de p o eínas sec e adas
Las p o eínas iden i icadas se analiza on a a és del se ido Sec e omeP 2.0
(Cen e o Biological Sequence Analysis: h p://www.cbs.d u.dk/se ices/Sec e omeP/),
un mé odo de p edicción basado en la secuencia capaz de iden i ica p o eínas
sec e adas de mamí e os an o pa a las u as clásicas como no clásicas de sec eción
[139, 186].
Po cada secuencia aminoacídica in oducida de la p o eína (en o ma o FASTA), el
se ido p edice la posibilidad de que la p o eína siga la u a de sec eción no clásica,
o o gando los alo es más al os (has a un máximo de 1.00) a las p o eínas que en an
den o de las u as de sec eción clásica (aquellas p o eínas con pép ido señal). Se
conside a ía que la p o eína sigue una u a de sec eción no clásica cuando los alo es
ob enidos supe en el lími e no mal de 0.50.
3.7 Análisis de la in e acción en e p o eínas
Se usó el Ingenui y Pa hways Analysis So wa e IPA 8.0 (Ingenui y Sys ems, CA, EUA)
pa a examina posibles in e acciones en e odas las p o eínas iden i icadas en los
dis in os sec e omas es udiados po p o eómica.
Las u as in e ac i as ue on gene adas pa a ep esen a las elaciones po enciales
an o di ec as como indi ec as en e las p o eínas sec e adas. Los alo es de
p obabilidad p opo cionados po el so wa e su gen a pa i de un alo p<0.05. Sólo
se escogie on las edes con al menos un 10% de pa icipación en e odas las p o eínas
iden i icadas.

IV. Resul ados
Resul ados
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1. Es ablecimien o y ca ac e ización de modelos
animales en di e en es si uaciones isiológicas y
pa ológicas.
1.1 Res icción caló ica, eje cicio y ano exia basada en la ac i idad
(ABA)
El apo e nu icional y la ac i idad ísica son los ac o es más ele an es en el
man enimien o de la homeos asis ene gé ica in e na. los ejidos implicados en es e
p oceso esponden ápidamen e a los es ímulos inducidos po es os ac o es, po lo
que consecuen emen e se p oduce una a iación en la señalización endoc ina que
puede se medida y ap o echada en in es igación pa a la iden i icación y/o la
ca ac e ización de nue as señales implicadas en es a egulación. El modelo de
ano exia basada en la ac i idad (ABA) [175] es un modelo animal p ome edo , poco
usado en es udios endoc inológicos, que combina la acción del eje cicio jun o con la
es icción caló ica, po lo que pod ía se muy ú il pa a es udios de señalización
endoc ina. Se ealizó una ca ac e ización de es e modelo pa a e alua su e icacia como
modelo endoc inológico y su uso en es udios pos e io es.
1.1.1 Pa áme os isiológicos
Como mues a la igu a 42, los g upos con alimen ación ad libi um y eje cicio
mos a on un aumen o p og esi o en su peso co po al, a lo la go de los 6 días de
du ación del expe imen o, sin habe di e encias signi ica i as en e ellos. Po el
con a io, el acceso limi ado a comida du an e una ho a al día sumado al lib e acceso a
la ueda de eje cicio p odujo en el g upo ABA una ma cada disminución del peso
co po al, que ue e iden e desde el día 1 al 6.
Se ijó el lími e de 6 días pa a el expe imen o de ABA po mo i os é icos, pues o que
a pa i del sex o día las a as alcanzaban pé didas de su masa co po al supe io es al
25-30 % y empezaban a apa ece sín omas de desnu ición se e a, como úlce as en el
es ómago y pé dida en el con ol de la empe a u a co po al. Debido a es as
condiciones ex emas, ambién a pa i del sex o día, se obse ó una signi ica i a
educción de su ac i idad ísica como se mues a en la igu a 42C.
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ABA, al compa a los con el g upo ad libi um ( igu a 46B). No obs an e, la banda
p edominan e de LEPR encon ada en los g upos de eje cicio y ABA pe enecían a la
o ma inac i a. Po el con a io, la exp esión o al de LEPR en sóleo disminuyó en
condiciones de eje cicio y es icción caló ica, incluyendo el g upo ABA, compa ados
con los animales del g upo ad libi um; es a disminución se encon ó muy ma cada en
el caso del g upo de eje cicio ( igu a 46B). Al con a io de lo que ocu ía en el músculo
gas ocnemio, la o ma p edominan e de LEPR en el sóleo del g upo ABA ue la ac i a.
El es udio del ecep o de lep ina en los di e en es depósi os de ejido adiposo
mos ó una ma cada a iación dependiendo de la localización ana ómica. El TAVo y el
TAVg de los g upos de eje cicio y es icción de comida, incluido el g upo ABA,
exp esa on exclusi amen e la o ma co a de LEPR, mien as que el TAS mos ó las dos
o mas, p oduciéndose una sob eexp esión de ambas en el g upo ABA, mien as que
su exp esión se eía disminuida en condiciones de eje cicio.
En gene al los ejidos sóleo, TAS y TAVo pa ecen los más sensibles a gh elina,
des acando su mayo pa icipación en la egulación me abólica del o ganismo en
compa ación de los ejidos gas ocnemio y TAVg. En el caso de la lep ina, al comp oba
la exp esión de la o ma ac i a de su ecep o , de en e odos los ejidos analizados,
los ejidos sóleo y TAS se de inie on como los más sensibles a es a ho mona y po
an o los que o ece ían una espues a más ápida a los cambios inducidos po la
lep ina.

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Figu a 46: Exp esión de los ecep o es de gh elina (GHS-R1a) y lep ina (LEPR) en ejidos pe i é icos. A.
Exp esión de GHS-R1a; B. Exp esión de LEPR. Las líneas celula es 3T3-L1 y L6E9 di e enciadas ue on
u ilizadas como con oles posi i os. La densi ome ía de las bandas se mues a como po cen aje en e a
los animales ad libi um. La exp esión de la o ma la ga y co a de LEPR se ep esen a en los his og amas
con los colo es neg o y blanco espec i amen e. Las di e encias signi ica i as se indican como *p<0.05
en e a ad libi um. El TAVg del g upo ABA ex aído ue insu icien e pa a la ealización del análisis po
inmunode ección.
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1.2 Obesidad inducida po la die a (DIO)
El modelo de obesidad inducida po la die a es uno de los modelos animales más
conocidos y mejo ca ac e izados pa a la ealización de es udios endoc inológicos, en
conc e o pa a los es udios de los e ec os de la obesidad y de la acumulación excesi a
de ejido adiposo. Debido a es e conocimien o, pa a el es ablecimien o de es e modelo
y su pos e io uso en subsiguien es es udios, se ealizó una ca ac e ización
equi alen e, aunque menos in ensi a, a la ealizada pa a los modelos de es icción
caló ica, eje cicio y ABA.
1.2.1 Pa áme os isiológicos
Du an e las 10 semanas que du ó el expe imen o, se ue moni o izando el
inc emen o de peso p oducido po la di e en e die a apo ada a los animales. Como se
mues a en la igu a 47A, ya desde la p ime a semana las a as del g upo DIO
p esen aban un peso signi ica i amen e mayo que el g upo con ol, di e encias que se
ue inc emen ando a medida que a anzaba el modelo. Resul a des acable comp oba
cómo al medi la inges a media de los animales, no se encon a on di e encias
signi ica i as a lo la go del expe imen o den o del mismo g upo, sin emba go al
compa a ambos g upos, se obse ó que el g upo DIO consumía una meno can idad
de alimen o, demos ando que la die a hipe caló ica p oduce una mayo sensación de
saciedad en los animales ( igu a 47B).
Los da os de composición co po al apo ados po la écnica de imagen po
esonancia magné ica, mos a on como se iban inc emen ando los po cen ajes an o
de masa g asa ( igu a 47C) como de masa lib e de g asa o masa mag a ( igu a 47D) con
di e encias signi ica i as en e g upos a pa i de la p ime a semana. El inc emen o
más no able se p odujo con espec o al po cen aje de masa g asa.
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Figu a 47: Va iación de pa áme os isiológicos du an e el desa ollo del expe imen o DIO. A. Va iación
de peso co po al (%); B. Inges a dia ia de comida (g/animal/día); C. Va iación de masa g asa (%); D.
Va iación de masa mag a (%). Las di e encias signi ica i as se indican como ***p<0.001 en e a CDIO.
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Se ealizó el es o al de in ole ancia a la glucosa la semana p e ia a inaliza el
expe imen o (semana 9). T as la adminis ación de glucosa o al exógena a los animales
se midie on los ni eles de glucosa en el iempo, obse ándose que los animales del
g upo con ol p esen aban una dis ibución no malizada; sin emba go en las a as con
die a hipe caló ica, los ni eles se man u ie on ele ados a los la go de la p ueba,
sugi iendo la exis encia de una in ole ancia a la glucosa o incluso esis encia a la
insulina ( igu a 48).
Figu a 48: Tes de ole ancia a la glucosa en el expe imen o DIO.
1.2.2 Pa áme os ho monales y me abólicos
Al igual que en los modelos desc i os an es, se u iliza on los alo es de las
ho monas lep ina y gh elina, as las 10 semanas de du ación del expe imen o, como
ma cado es del es ado nu icional.
Como e a de espe a , el g upo DIO p esen ó unos mayo es ni eles de lep ina
ci culan e, co elacionándose posi i amen e con la mayo can idad de ejido g aso
espec o al g upo con ol ( igu a 49A). Pa a in en a de e mina qué depósi o de ejido
adiposo pa icipaba más ac i amen e de la sec eción de lep ina, se midie on los
ni eles de lep ina p esen es en los sec e omas de explan es de TAS, TAVo y TAVg;
comp obando que el TAVo e a con di e encia el mayo esponsable en la sec eción de
lep ina ( igu a 49B), y el único que p esen aba di e encias en e los g upos siguiendo
una dis ibución simila a los ni eles obse ados en sue o. El apo e en ng/ml de
lep ina po pa e del TAS y TAVg an o en obesidad como su con ol ue simila al
Resul ados
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obse ado en el modelo ABA ca ac e izado p e iamen e, sin emba go en el TAVo de
los animales del modelo DIO se obse a on los alo es más ele ados.
Figu a 49: Ni eles de lep ina ci culan e y en sec e omas de ejido adiposo. A. Ni eles de lep ina en
sue o; B. Ni eles de sec eción de lep ina a pa i de los depósi os de TAS, TAVo y TAVg. Las di e encias
signi ica i as se indican como *p<0.05 en e a CDIO.
En el caso de la gh elina, de o ma so p enden e se comp obó que los ni eles en
DIO se encon aban signi ica i amen e más ele ados que en sus con oles ( igu a 50).
Figu a 50: Ni eles de gh elina ci culan es en el modelo DIO. Las di e encias signi ica i as se indican
como *p<0.05 en e a CDIO.

Resul ados
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2. Ca ac e ización del sec e oma del ejido adiposo
blanco en unción de su localización ana ómica.
A lo la go de la bibliog a ía se pueden encon a di e en es es udios p o eómicos
ealizados sob e la sec eción del ejido adiposo, sin emba go dichos es udios se
basa on mayo i a iamen e en desc ibi los pa ones de sec eción de la acción celula ;
muy pocos se han basado en la sec eción di ec a de explan es de ejido adiposo y
menos aún en cuan i ica las di e encias en e los dis in os depósi os exis en es. Bajo
es e con ex o se conside ó de g an impo ancia la ca ac e ización del pe il de
sec eción de los depósi os de ejido adiposo más ele an es en a a, Así mismo, se
p opuso ealiza un es udio di e encial en e es os depósi os median e écnicas
p o eómicas; odo ello en mues as bajo condiciones ad libi um.
2.1 Es ablecimien o y alidación de los sec e omas a pa i de
explan es
La écnica de explan es de ejido adiposo pa a la ob ención de su sec e oma es una
écnica que puede apo a una aliosa in o mación sob e las p o eínas que sec e a
es e ejido, sin emba go no es á exen o de complicaciones que pueden al e a el
esul ado inal apa eciendo alsos posi i os o la enmasca ación de p o eínas
po encialmen e in e esan es en a o de o as más conocidas y menos ele an es. Po
an o ue necesa io ealiza un p oceso de es anda ización y alidación de los
sec e omas an es de su uso en los di e en es es udios.
El p ime aspec o que se alo ó ue la elección de los di e en es depósi os de ejido
adiposo que se iban a u iliza pa a la ob ención de los sec e omas. Se seleccionó el
TAVo, si uado en e las ísce as, po se el ejido adiposo cuya acumulación causa la
mayo pa e de p oblemas de i ados de la obesidad y su posición y unciones se
asemejan en g an medida al TAVo humano. Como ep esen an e del TAS se op ó po el
si uado en la zona glú eo- emo al, depósi o pocas eces elacionado con las
complicaciones de la obesidad [67]. Po úl imo, se conside ó opo uno u iliza el
depósi o de ejido adiposo unido ísicamen e a los es ículos TAVg, elacionado
di ec amen e con la unción sexual [83] pe o que en mul i ud de es udios se ha
u ilizado indis in amen e como depósi o ep esen a i o del TAV po la acilidad de su
ex acción [77, 151].
Una ez seleccionados, los dis in os depósi os se ex aje on minimizando al máximo
an o las con aminaciones ex e nas como la o u a o daño celula . El p oceso de
ob ención de los sec e omas ue op imizado según se desc ibe en el apa ado de
ma e iales y mé odos, y se p ocedió a su alidación median e el es udio de la
sec eción de adipoquinas conocidas, seleccionando pa a ello la adiponec ina y la
lep ina ( igu a 51). Se comp obó que ambas p o eínas se encon aban p esen es en los
Resul ados
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153
es depósi os obse ándose di e encias signi ica i as en sus ni eles de sec eción al
compa a los en e sí.
Figu a 51: Imagen de la inmunode ección de lep ina y adiponec ina en los sec e omas de explan es de
TA usados en es e es udio.
2.2 Mapas 2-DE de e e encia de los sec e omas de ejido adiposo
isce al, subcu áneo y gonadal
Los sec e omas de los depósi os de ejido adiposo p oceden es de di e en es
localizaciones ana ómicas se ecogie on as 24 ho as de incubación in i o de los
explan es y ue on p ocesados pa a su análisis po 2-DE como se desc ibe en la sección
de ma e iales y mé odos.
Pa a la segunda dimensión, se hicie on geles del 10 y 15 % de
ac ilamida/bisac ilamida pa a sepa a las p o eínas de al o y bajo peso molecula
espec i amen e, co ando las manchas más ep esen a i as pa a con o ma los
mapas de sec eción (335 manchas en TAVo, 161 en TAS, y 113 en TAVg) ( igu as 52, 53
y 54).
El análisis de espec ome ía de masas de es as manchas, pe mi ie on la
iden i icación de 188, 85 y 91 p o eínas di e en es en TAVo, TAS y TAVg
espec i amen e (apéndice, ablas suplemen a ias 1, 2, 3).
Resul ados
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Figu a 52: Mapa 2-DE de sec eción del TAVo. Las manchas nume adas ue on seleccionadas pa a su
iden i icación po espec ome ía de masas. Imagen de a iba: gel de elec o o esis ealizado al 10% de
ac ilamida/bisac ilamida; imagen de abajo: gel ealizado al 15% de ac ilamida/bisac ilamida.
Resul ados
155
155
Figu a 53: Mapa 2-DE de sec eción del TAS. Las manchas nume adas ue on seleccionadas pa a su
iden i icación po espec ome ía de masas. Imagen de a iba: gel de elec o o esis ealizado al 10% de
ac ilamida/bisac ilamida; imagen de abajo: gel ealizado al 15% de ac ilamida/bisac ilamida.
Apéndice
258
258
Sec e oma de TAVo (2 de 4)
(Con inúa en la página siguien e)

Apéndice
259
259
Sec e oma de TAVo (3 de 4)
(Con inúa en la página siguien e)
Apéndice
260
260
Sec e oma de TAVo (4 de 4)
Tabla suplemen a ia 1: Sec e oma de TAVo. P o eínas o ales iden i icadas o denadas según el índice
o o gado po el so wa e Sec e omeP (Los núme os de mancha co esponden a la igu a 52). SignalP: la
p o eína con iene pép ido señal.
Apéndice
261
261
Sec e oma de TAS (1 de 2)
(Con inúa en la página siguien e)
Apéndice
262
262
Sec e oma de TAS (2 de 2)
Tabla suplemen a ia 2: Sec e oma de TAS. P o eínas o ales iden i icadas o denadas según el índice
o o gado po el so wa e Sec e omeP (Los núme os de mancha co esponden a la igu a 53). SignalP: la
p o eína con iene pép ido señal.
Apéndice
263
263
Sec e oma de TAVg (1 de 2)
(Con inúa en la página siguien e)

Apéndice
264
264
Sec e oma de TAVg (2 de 2)
Tabla suplemen a ia 3: Sec e oma de TAVg. P o eínas o ales iden i icadas o denadas según el índice
o o gado po el so wa e Sec e omeP (Los núme os de mancha co esponden a la igu a 54). SignalP: la
p o eína con iene pép ido señal.
Apéndice
265
265
Análisis di e encial TAVo s. TAS s. TAVg
Tabla suplemen a ia 4: Análisis di e encial TAVo s. TAS s. TAVg. P o eínas o ales iden i icadas
o denadas según el índice o o gado po el so wa e Sec e omeP (Los núme os de mancha co esponden
a la igu a 61). SignalP: la p o eína con iene pép ido señal.
Apéndice
266
266
Sec e oma gas ocnemio (1 de 2)
(Con inúa en la página siguien e)
Apéndice
267
267
Sec e oma gas ocnemio (2 de 2)
Tabla suplemen a ia 5: Sec e oma de gas ocnemio. P o eínas o ales iden i icadas o denadas según el
índice o o gado po el so wa e Sec e omeP (Los núme os de mancha co esponden a la igu a 71).
SignalP: la p o eína con iene pép ido señal.

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Como lamen ablemen e odo en la ida iene un inal, he llegado a la úl ima sección
de es a esis doc o al, a p io i la sección más sencilla de esc ibi y que más ganas enía
de comple a como apo eósico cie e de una e apa de mi ida, sin emba go me
encuen o en un callejón sin salida. De una mane a opues a al sínd ome de bloqueo
del esc i o , mi cabeza hie e con la can idad de nomb es que debe ían apa ece en
es a sección y con las miles de mane as que se me ocu en pa a pode plasma ,
mínimamen e, odo ese p o undo ag adecimien o que se me ecen odos ellos po
habe me ayudado de una mane a u o a a es a plan ado delan e de la pan alla del
o denado a pun o de da po concluida una de las mejo es expe iencias que hab é
i ido en oda mi ida. Es oy bloqueado, sin emba go es oy con encido que odos
es os sen imien os que ocupan mi cabeza lui án a medida que a ance es e ex o, y a
pesa de que muchos nomb es no pod án apa ece en es a sección, no signi ica á ni
mucho menos que me aya a ol ida nunca de ellos y de la ayuda que me han o ecido
du an e es os úl imos años.
Mi o aho a hacia a ás y me so p ende pensa que han pasado ya 6 años desde
aquel día que paseando po la acul ad de a macia po casualidad me encon é con la
o e a del g upo de Endoc inología pa a ealiza la esis doc o al. Han pasado 6 años ya
desde aquel momen o que en é po p ime a ez en aquel “ex año” y an iguo
labo a o io de la acul ad de Medicina, di igido po el p es igioso p o eso Felipe
Casanue a (al que nunca pod é ag adece lo su icien e el habe con iado en mí como
pa a o ece me la opo unidad de abaja en su equipo y ap ende de los mejo es).
Ahí me encon é po p ime a ez con algunas de las pe sonas que ma ca ían pa a
siemp e mi ida como es udian e p edoc o al. Han pasado 6 años, pe o yo aún
ecue do odo como si hubie a ocu ido aye …
Fue en ese es echo labo a o io en donde conocí a geniales in es igado es
p incipales que me ayuda ían muchísimo en el u u o (de las más inimaginables
mane as), desde la ayuda que me b indó Yola pa a ap oba un examen de RMN del
pos g ado de Bio ecnología (de no se po ella es a ía pe dido), pasando po esas u as
de señalización celula que “casi” consigo comp ende al comple o g acias a la eno me
expe iencia y conocimien o de Jesús (aunque sigo c eyendo que cuando engo una
u a dominada, mis e iosamen e es a se ami ica más y más). Muy impo an e sigue
siendo la ayuda o ecida po la magní ica expe a en isiología Sisi, sin la cual las a as
segui ían siendo pa a mí esos bichos con cola con los que man ene siemp e una
dis ancia p udencial. Ayuda complemen ada de mane a imp esionan e g acias a la
p esencia de Oma , el cual, siendo since o, apa e de isiología me lo enseñó odo en
cues ión de i i un doc o ado y p epa a me pa a da el sal o al pos doc; po lo que al
e lo aho a ab iéndose paso en la in es igación española as su es ancia pos doc o al
en EUA, gene a en mi una mezcla de aleg ía, admi ación y o gullo po habe
compa ido con él pa e de su e apa in es igado a.
No ol ida é nunca a muchas de las pe sonas que pasa on po ese “his ó ico”
labo a o io, como a Ca los y a Ma ía, los cuales eo desde la dis ancia haciéndose un
nomb e en el pano ama cien í ico in e nacional; o a Ma cos, el cual se emba có en el
pos doc o ado in e nacional al poco de llega , pe o al que más adelan e end ía la
opo unidad de conoce mejo . De la que gua da é un g an ecue do po supues o se á
de Uxía, odo un pe sonaje (en el buen sen ido de la palab a) que me acompaña desde
el p incipio de es a emp esa pa a comple a la esis doc o al, la pe sona con más
anécdo as de iaje que he conocido nunca, de hecho una de las ases más escuchadas
en el labo a o io es “Lo que no le pase a Uxía…”
P on o nos ocó hace las “male as cien í icas” pa a muda nos al Hospi al Clínico,
unas nue as ins alaciones en las que compa i íamos nues a expe iencia con g upos
de in es igación de lo más a iado, desde Ca diología a Oncología pasando po
Reuma ología, y en el que po so p esa me encon é odeado de an iguos compañe os
y amigos de la ca e a como B uno, Toño o Ma ía; haciendo si cabe más especial es a
e apa.
En es as nue as ins alaciones, que luego se in eg a ían den o del Ins i u o de
In es igaciones Sani a ias de San iago (“el IDIS” a pa i de en onces), conocí y oda ía
sigo conociendo a muchísimas pe sonas nue as de las cuales no se ía jus o des aca
unas sob e o as, pues conside o el IDIS un odo, un ecosis ema en el que odos han
apo ado su g ani o de a ena pa a que la expe iencia in es igado a y pe sonal i ida
allí se con ie a en una huella imbo able en mi memo ia du an e el es o de mis
pe ipecias i ales. Y no sólo el IDIS me ha apo ado es a huella, se icios del hospi al,
como el de Ci ugía Gene al y Diges i a lide ado po los doc o es Bal a y bahamonde o
el se icio de Ana omía Pa ológica lide ado po el doc o Ga cía-Caballe o, con su
impagable ayuda, me han enseñado como se puede es ablece una colabo ación
básica-clínica pe ec a.
Fue en es e hospi al en donde i c ece al labo a o io de Endoc inología con
muchísimas inco po aciones nue as y la c eación de nue os g upos henchidos de
ganas po c ea la mejo ciencia posible. In es igado es como Ana, doc o andos como
Begoña o Icía y los magní icos écnicos Ma ía y Ca los han hecho si cabe más comple o
y ag adable mi paso po es e g upo. Es en es os la es en donde hice mis p ime os
pini os como “p o eso ” que a a de consegui que los ecién llegados puedan ola
po sí mismos en el mundo de la pipe a y de la poya a, en especial con Lucía, que as
ayuda nos mu uamen e (ella a que me o mase como “p o eso ” y yo a que saca a
adelan e su p oyec o in de más e ), la eo aho a despegando pa a log a da o ma a
su p opia esis doc o al. Aho a mismo hay muchas ca as nue as, demasiadas como
pa a pone les nomb e a odas, sin signi ica eso que no o men pa e de es a a en u a
pe sonal; pe o si engo que des aca a una sob e las demás, es a se ía Cecilia, una
écnico de apoyo que más que apoyo me ha apo ado la mejo de las ayudas y la más
pe ec a de la compañía que alguien puede desea en un labo a o io, el inomio
o mado po Oma , Cecilia y yo mismo se á algo que di ícilmen e se pod á epe i en el
u u o, algo que a eso o en mi memo ia como uno de los mejo es pe iodos de es os
úl imos años.
Pe o no odo acon eció en San iago, du an e mi doc o ado u e la o una de
ecala en uno de los mejo es labo a o ios de España y sin duda en uno de los que
mejo me lo he pasado, an o p o esional como pe sonalmen e. Siendo since o, el
ambien e i ido en Có doba ue algo inmejo able, un luga en el que abundaba el
compañe ismo, el “buen ollismo” y las b omas; a la pa que la mejo ciencia y la mayo
exigencia como in es igado es. Allí he conocido a pe sonajes i epe ibles como la g an
p o eso a Malagón, que me acogió en su g upo como si ue a uno más y con la que
cada ez que con e saba, sin impo a el ema, yo sen ía que había ap endido una
cosa nue a. O Rocío, que a ando de pone a pun o la écnica de DIGE con ió en mí
ayuda a la ez que yo ap endía de su expe iencia. Me gus a ía des aca ambién a
Ma ina, que sin duda ue la pe sona que más me acili ó la es ancia en Có doba con su
apoyo y su iquísima comida. En ese labo a o io he conocido an a gen e buena que
me apena no pode dedica les un pá a o a cada uno de ellos, sin emba go es oy
con encido que la expe iencia co dobesa me segui á allá a donde aya en el u u o.
Delibe adamen e dejo pa a el inal a las dos pe sonas que más han con ibuido a
que es a esis se haya comple ado y que más han in luido en mi e apa p o esional. La
p ime a de ellas es Jana, la g an compañe a p o eómica de la que an o he ap endido
en elación con es a écnica (así como en o ganización). Una pe sona que me ha
enseñado desde a lle a la mayo pulc i ud y exac i ud posible en el abajo con
p o eínas pa a ob ene las iden i icaciones más exac as a incluso pode maneja y
en ende un espec óme o de masas y el complejo so wa e que le acompaña. Pe o
no sólo p o esionalmen e me ha ayudado, Jana ha sido siemp e un apoyo pe sonal en
es a e apa, e incluso aho a desde la lejana Escocia, sigue colabo ando conmigo pa a
da o ma a es a esis con sus consejos y co ecciones.
Sin duda, la úl ima y más impo an e de las pe sonas que me han ayudado en odos
es os años ha sido Ma ía Pa do, mi je a y di ec o a de esis, pe o ambién amiga y
compañe a de labo a o io. Una pe sona que du an e los p ime os años compa ió
poya a a mi lado pipe a en mano, pa a enseña me desde las écnicas más básicas a las
más complejas, a la ez que yo iba descub iendo la ciencia desde su pe spec i a
pe sonal llenándome la cabeza de ilusiones de u u o y de ganas po ahonda en la
in es igación con el in de log a los más asomb osos esul ados. Una pe sona que ue
capaz de gene a en mí el deseo de que e con e i me en el mejo in es igado que
uese capaz, sin impo a el es ue zo eque ido. Una pe sona que me pe mi ió
en ende odos los pasos po los que debe pasa un in es igado p incipal pa a
a ianza su ca e a y su ida, desde la ob ención de sus p ime os p oyec os de
in es igación al es ablecimien o de su p opio g upo eme gen e, pasando po emas
más pe sonales como la compaginación del abajo y la amilia; ap endiendo a cada
paso lo que me espe a en el u u o si quie o dedica mi ida a la ciencia y con la
ce eza de que odo obje i o es posible si uno iene la decisión i me de lle a lo a
cabo. Pod ía llena páginas y más páginas sob e lo que supone pa a mi habe enido
una di ec o a de esis como Ma ía Pa do y lo ag adecido que le es a é siemp e, pe o
c eo que la mejo o ma de pode ag adece odo lo que ha hecho po mí se á hace la
mejo ciencia posible en mis siguien es e apas, pues odo lo que log e a pa i de aho a
hab á sido g acias a su in luencia.
Has a aquí la pa e más “p o esional” de es e capí ulo, sin emba go una esis no se
gene a an sólo con las expe iencias y ayudas p o enien es de un labo a o io, exis en
mul i ud de pe sonas ajenas al mundo de la in es igación sin las cuales yo no pod ía
habe conseguido llega has a aquí. Desde las a en u as i idas jun o a los
“pi xelei os”, donde cada iaje a Pon e ed a se con ie e en una a en u a y cada ies a
de peñas en un “ eunión amilia ”; a los necesa ios momen os de desconexión que
supone ace ca se a mi amado Ribadeo, el único luga del mundo que siemp e
conside a é como mi único y e dade o hoga ; en donde an buenos amigos me
espe an siemp e pa a compa i Xi as, ines de año, noches in e minables o los “ oad
ips” a Lónga a.
Mi amilia ha sido siemp e mi g an apoyo i al a pa i del cual consegui odo lo
que me p oponía, sin su ayuda no sólo no me hab ía con e ido en in es igado , sino
que incluso no hab ía e minado la ca e a. Du an e mi ida he pasado po momen os
muy buenos, pe o ambién muy malos, y en odos ellos han es ado ahí apoyándome
absolu amen e en odo. Tan o a mis pad es, que an a paciencia y es ue zo han
demos ado conmigo, como a mi he mana, oda una a is a que incluso ha sacado
iempo pa a diseña la po ada de es a esis; no les oy a dedica es a esis, pues o que
es demasiado pequeña compa ada con odo lo que me han o ecido y me o ece án en
el u u o; lo mínimo que puedo hace pa a ag adece les odo lo que han hecho po mí
es dedicándoles oda mi ida, aún a sabiendas de que oda una ida oda ía no es
su icien e ag adecimien o po odo lo que signi ican pa a mí.
Si po algo se ha ca ac e izado es a e apa p edoc o al ha sido po la sucesión de
momen os buenos y malos, u o de las complicaciones inhe en es a un abajo de
in es igación y al es és de esc ibi una esis, malos momen os que me a ec a on
ambién anímicamen e a ni el pe sonal in luyendo en cie a medida en las pe sonas
que me odea on. En es a e apa u e la g andísima sue e de encon a me con
Mo ena, una pe sona capaz de ayuda me a a on a esos momen os, en especial
du an e los úl imos meses (du an e los que su í el llamado “es ado p e ésico”),
impidiendo que me dejase lle a po ellos; una pe sona que quie o muchísimo y
ag adezco p o undamen e que es é a mi lado independien emen e de odo lo que
pase, o eciéndome su ca iño y comp ensión en odo momen o.
A odos los que habéis o mado pa e de mi ida de una o ma o de o a en es os 6
úl imos años, independien emen e de que apa ezcáis aquí nomb ados o no:
Muchísimas g acias!