Alba Pescado Vázquez
Es udio de la p esencia de
Esche ichia coli p oduc o as de
BLEE en a es sil es es.
Facul ad de Ve e ina ia
G ado en Ve e ina ia
Año 2024
Modalidad del T abajo: Expe imen al
T abajo de
Fin de G ado
Licencia
Excep o donde se haga cons a explíci amen e, es a ob a pe enece a Alba Pescado Vázquez y
es á bajo una licencia de “C ea i e Commons Reconocimien o 4.0 In e nacional”.
1. RESUMEN/ RESUMO/ ABSTRACT
RESUMEN
La lucha con a las esis encias bac e ianas cons i uye uno de los g andes e os de la medicina
del siglo XXI. Esche ichia coli es una bac e ia implicada en múl iples en e medades que a ec an
an o al se humano como a los animales, y además, debido a su ubicuidad y al a plas icidad
gené ica, es una de las bac e ias en la que es más ecuen e la apa ición de cepas esis en es a
an ibió icos. En pa icula , la apa ición de cepas p oduc o as de be alac amasas de espec o
ex endido (BLEE) en E. coli es un iesgo eme gen e de pé dida de e icacia en el a amien o
e apéu ico de las in ecciones causadas po E. coli. La auna sil es e puede ac ua como
ese o io de es as cepas esis en es y puede pone en iesgo la salud animal y pública. En es e
es udio analizamos 102 a es sil es es ing esadas en dos Cen os de Recupe ación de Fauna de
dos zonas dis in as de España, de las que omamos mues as median e hisopos cloacales con el
obje i o de e alua la p esencia de E. coli, y en pa icula de cepas BLEE, en es as especies. Se
de ec ó la p esencia de E. coli en 75/102 de las mues as (73,5 %). En 7 de las 102 a es (6,9 %)
se de ec ó la p esencia de ocho cepas con eno ipo compa ible con BLEE median e siemb a en
medio TBX suplemen ado con an ibió ico. Es as ocho cepas ue on some idas a una PCR
mul iplex pa a iden i ica los genes de esis encia implicados en la p oducción de BLEE,
de ec ando la p esencia de blaCTX-M, blaSHV y blaTEM en 6 de las cepas (5,9 % del o al de
a es), siendo el gen más ecuen e blaCTX-M (5/6 cepas). La p esencia de a ios genes de
esis encia en la misma cepa ambién ue ecuen e (4/6 cepas). Nues os esul ados con i man
la ci culación de cepas esis en es a an ibió icos en a es sil es es. Se ían necesa ios es udios
pos e io es pa a pode de ini más de alladamen e el ol p eciso de cada especie. La p esencia
de es as cepas pod ía cons i ui un iesgo epidemiológico an o po los hábi os de cie as
especies (a es ca oñe as o habi uadas a i i en ambien e humanizados) que pueden a o ece
el con agio, como po sus mig aciones, pudiendo dispe sas dis in os ipos de esis encias du an e
sus iajes. La de ección de cepas esis en es en a es ca oñe as sugie e la posibilidad de
u iliza las como indicado as de con aminación ambien al.
Palab as cla e: E. coli, BLEE, a es sil es es, esis encias an ibió icas, be alac ámicos
1
RESUMO
A loi a con a a esis encia bac e iana cons i úe un dos g andes e os da medicina do século
XXI. Esche ichia coli é unha bac e ia implicada en múl iples en e midades que a ec an an o a
humanos como aos animais, e ademais, pola súa ubicuidade e al a plas icidade xené ica, é unha
das bac e ias nas que é máis ecuen e a apa ición de cepas esis en es aos an ibió icos. En
pa icula , a apa ición de cepas p odu o as de be alac amasas de espec o es endido (BLEE) en
E. coli é un isco eme xen e de pe da de e icacia no a amen o e apéu ico das in eccións
causadas po E. coli. A ida sal axe pode ac ua como ese o io pa a es as cepas esis en es e
pode poñe en isco a saúde animal e pública. Nes e es udo analizamos 102 a es sil es es
ing esadas en dous Cen os de Recupe ación de Fauna Sil es e en dúas zonas di e en es de
España, das que se oma on mos as median e hisopos cloacais co obxec i o de a alia a
p esenza de E. coli, e en pa icula cepas de BLEE, nes as especies. A p esenza de E. coli
de ec ouse en 75/102 das mos as (73,5 %). En 7 das 102 a es (6,9 %) de ec ouse a p esenza de
oi o cepas con eno ipo compa ible con BLEE median e a semen ei a en medio TBX
complemen ado con an ibió ico. Es as oi o cepas o on some idas a unha PCR múl iple pa a
iden i ica os xenes de esis encia implicados na p odución de BLEE, de ec ando a p esenza de
blaCTX-M, blaSHV e blaTEM en 6 das cepas (5,9% do o al de a es), sendo as máis ecuen es.
xene blaCTX-M (5/6 cepas). Tamén oi ecuen e a p esenza de a ios xenes de esis encia nunha
mesma cepa (4/6 cepas). Os nosos esul ados con i man a ci culación de cepas esis en es aos
an ibió icos en a es sil es es. Se ían necesa ios máis es udos pa a de ini con máis de alle o
papel p eciso de cada especie. A p esenza des as cepas pode ía cons i uí un isco
epidemiolóxico an o polos hábi os de de e minadas especies (a es ca oñe as ou a es a ei as a
i i en ambien es humanizados) que poden a o ece o con axio, como polas súas mig acións,
onde se poden dispe sa di e en es ipos de esis encias du an e as súas iaxes. A de ección de
cepas esis en es en a es ca oñe as suxi e a posibilidade de u ilizalas como indicado es de
con aminación ambien al.
Palab as cha e: E. coli, BLEE, a es sil es es, esis encias an ibió icas, be alac ámicos
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ABSTRACT
The igh agains bac e ial esis ance cons i u es one o he g ea challenges o 21s cen u y
medicine. Esche ichia coli is a bac e ia in ol ed in mul iple diseases ha a ec bo h humans
and animals, and in addi ion, due o i s ubiqui y and high gene ic plas ici y, i is one o he
bac e ia in which he appea ance o s ains esis an o an ibio ics is mos common. In pa icula ,
he eme gence o ex ended-spec um be a-lac amase (ESBL)-p oducing s ains in E. coli is an
eme ging isk o loss o e icacy in he he apeu ic ea men o in ec ions caused by E. coli.
Wildli e can ac as a ese oi o hese esis an s ains and can pu animal and public heal h a
isk. In his s udy we analyzed 102 wild bi ds admi ed o wo Wildli e Reco e y Cen e s in wo
di e en a eas o Spain, om which we ook samples using cloacal swabs wi h he aim o
e alua ing he p esence o E. coli, and in pa icula ESBL s ains, in hese species. The p esence
o E. coli was de ec ed in 75/102 o he samples (73.5 %). In 7 o he 102 bi ds (6.9 %), he
p esence o eigh s ains wi h ESBL-compa ible pheno ype was de ec ed by sowing in TBX
medium supplemen ed wi h an ibio ic. These eigh s ains we e subjec ed o a mul iplex PCR o
iden i y he esis ance genes in ol ed in he p oduc ion o ESBL, de ec ing he p esence o
blaCTX-M, blaSHV and blaTEM in 6 o he s ains (5.9% o he o al bi ds), being he mos
equen gene blaCTX-M (5/6 s ains). The p esence o se e al esis ance genes in he same s ain
was also equen (4/6 s ains). Ou esul s con i m he ci cula ion o an ibio ic- esis an s ains
in wild bi ds. Fu he s udies would be necessa y o de ine in mo e de ail he p ecise ole o
each species. The p esence o hese s ains could cons i u e an epidemiological isk bo h due o
he habi s o ce ain species (sca enging bi ds o bi ds accus omed o li ing in humanized
en i onmen s) ha can a o con agion, and due o hei mig a ions, whe e di e en ypes o
esis ance may be dispe sed du ing hei a els. The de ec ion o esis an s ains in sca enging
bi ds sugges s he possibili y o using hem as indica o s o en i onmen al con amina ion.
Key wo ds: E. coli, ESBL, wild bi ds, an ibio ic esis ance, be a-lac ams
3
2. ÍNDICE
1. RESUMEN/RESUMO/ABSTRACT 1
2. ÍNDICE 4
3. ABREVIATURAS 5
4. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS 6
4.1 Ca ac e ís icas gene ales de las in ecciones po Esche ichia coli 6
4.1.1 E iología 6
4.1.2 Impo ancia clínica de las in ecciones po E. coli 7
4.1.2.1 Impo ancia clínica de las in ecciones po E. coli en humanos 8
4.1.2.2 Impo ancia clínica de las in ecciones po E. coli en animales 9
4.2 Esche ichia coli y las esis encias bac e ianas a an ibió icos 10
4.2.1 An ibió icos y esis encias bac e ianas 10
4.2.2 Tipos y mecanismo de esis encias bac e ianas 11
4.2.3 An ibió icos be a-lac ámicos 12
4.2.3.1 De inición, mecanismo de acción y ipos de be alac ámicos. 12
4.2.3.2 Mecanismos de esis encias en e a be alac ámicos 13
4.2.3.3 Be alac amas de espec o ex endido (BLEE) 13
4.3 A es sil es es y BLEE 14
4.3.1 El papel de las a es sil es es en la ansmisión de pa ógenos. 14
4.3.2 Ca ac e ís icas de las poblaciones de a es sil es es en España 15
4.3.3 P e alencia de Esche ichia coli en a es sil es es 17
4.4 Obje i os 18
5. MATERIAL Y MÉTODOS 19
5.1 O igen de las mues as y ca ac e ís icas de las zonas de mues eo 19
5.2 Toma de mues as y ecogida de in o mación epidemiológica 20
5.3 Análisis de labo a o io 23
5.3.1. Cul i o mic obiológico 23
5.3.2 Análisis molecula de genes de esis encia 24
5.3.2.1 Ex acción de ADN 24
5.3.2.2 Ampli icación con PCR mul iplex 24
5.3.2.3 Comp obación de la ampli icación en gel de aga osa y lec u a 25
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 26
6.1 Mues as ob enida e in o mación epidemiológica 26
6.2 P esencia de E. coli en las a es mues eadas 29
6.3 P esencia de BLEE en las a es mues eadas 32
7. CONCLUSIONES 38
8. BIBLIOGRAFÍA 39
4
3. ABREVIATURAS
ADN: Ácido desoxi ibonucleico
AIEC:E. coli adhe en e in asi a
AMUS: Acción po el Mundo Sal aje
APEC:E. coli pa ogénica a ia
ATP: Adenosín T i os a o
BLEE: Be alac amasa de espec o
ex endido
CRAS: Cen o de Recupe ación de
Animales Sil es es
CRF: Cen os de Recupe ación de
Fauna
CTX: Ce o axima
CTX-M:Ce o aximase om Munich
DAEC:E. coli adhe en e di usa
dNTPs: Desoxi ibonucleó idos
i os a o
EAEC:E. coli en e oag ega i a
EHEC:E. coli en e ohemo ágica
EPEC:E. coli en e opa ógena
ETEC:E. coli en e o oxigénica
ExPEC:Ex ain es inal pa hogenic E. coli
IBA: Á eas Impo an es pa a la
Conse ación de las A es y la
Biodi e sidad en España
IPEC:In es inal pa hogenic E. coli
MAPAMA: Minis e io de Ag icul u a,
Pesca, Alimen ación y Medio Ambien e
MITECO: Minis e io pa a la T ansición
Ecológica y el Re o Demog á ico
NMEC:E. coli asociada a meningi is
neona al
OXA: Oxacilinasa
PBPs:Penicillin-binding p o eins
PCR: Reacción en cadena de la
polime asa
pm: Re oluciones po minu o
SEO: Sociedad Española de O ni ología
SEPEC:E. coli asociada a sep icemia
SHV:Sul hyd yl a ian
TAE: T is-Ace a o-EDTA
TBX: T ip ona-Bilis-X-glucu ónido
UPEC:E. coli u opa ogénica
VNO: Vi us del Nilo Occiden al
ZEPA: Zonas de Especial Conse ación
pa a las A es
5
4. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
4.1 Ca ac e ís icas gene ales de las in ecciones po Esche ichia coli
4.1.1 E iología
Esche ichia coli es una bac e ia G am nega i a, anae obia acul a i a, con o ma de bacilo que
o ma pa e de la amilia En e obac e iaceae. Es a bac e ia se encuen a en mul i ud de especies
animales donde o ma pa e de la mic obio a del in es ino de la mayo pa e de los e eb ados
de sang e calien e (Riley, 2020). Aunque la elación en e E. coli y su hospedado
adicionalmen e se había de inido como comensalismo, hoy en día se plan ea conside a la de
mu ualismo (Ma inson & Walk, 2020), ya que an o el hospedado como la bac e ia esul an
bene iciados en la elación: la bac e ia ob iene el alimen o y el e ugio que necesi a pe o, a
cambio, pa icipa en la sín esis de las i aminas K (Su a na e al., 1998) y B12; consume el
oxígeno que en a en el in es ino, c eando así un ambien e más a o able pa a el es o de
bac e ias anae obias es ic as que componen la mic obio a; y además, con su p esencia excluye
la posible colonización de o as bac e ias pa ógenas del in es ino (Bloun , 2015), si bien es
cie o que ambién exis en cepas pa ógenas de la p opia bac e ia. Po su g an ubicuidad, la
acilidad pa a abaja con ella, y la apidez con la que c ece en di e en es medios, E. coli es una
de las bac e ias con las que más se ha abajado en los labo a o ios de mic obiología en el siglo
XX (Bloun , 2015), y, po an o, una de las especies más conocidas y mejo ca ac e izadas.
El genoma de E. coli se ca ac e iza po p esen a una al a a iabilidad, de o ma que algunas
cepas pueden llega a compa i solo el 20 % de los genes (Riley, 2020). Po an o, E. coli es un
ejemplo de especie con pangenoma abie o, es deci , el núme o de genes o ales de la especie no
es á ijado y puede aumen a a medida que se descub en nue as cepas o indi iduos. De es a
o ma, podemos encon a nos es ipos de genes: po un lado, una pa e del genoma que se
denomina cen al o “co e”, el conjun o de genes que apa ecen en la o alidad de las cepas de E.
coli secuenciadas; o os genes que, solamen e se encuen an en una cepa, y que se denominan
como genoma único; y po úl imo, es án los genes compa idos en e a ias cepas pe o que no
se encuen an en odas, y que con o man el genoma p escindible. Es o o o ga una al a
plas icidad gené ica a la bac e ia y g an capacidad pa a adqui i nue os genes de su en o no,
dando como esul ado múl iples eno ipos con los que puede adap a se a di e en es condiciones
ambien ales (Leimbach e al., 2013).
Como esul ado amos a encon a una g an a iabilidad den o de la especie. A ni el molecula
podemos dis ingui ocho g upos ilogené icos: A, B1, B2, C, D, E, F, G, y cinco clados de
Esche ichia (I a V). Los ilog upos se di e encian en las ca ac e ís icas eno ípicas y
geno ípicas, así como en los nichos ecológicos que ocupan, la pa ogenicidad o la p obabilidad
6
de que acumulen genes de esis encia a an ibió icos. Den o del ilog upo B1 hay cepas que se
encuen an en el ambien e y que es án adap adas a i i en el suelo, el agua o las plan as
(Lage s om & Hadly, 2023). Asimismo, algunas cepas pueden sob e i i y c ece en el medio
sin necesidad de un hospedado (Jang e al., 2017).
El se o ipo de las cepas se puede de e mina a pa i de los an ígenos somá icos (O), capsula es
(K) y lagela es (H). Tan o las cepas pa ógenas como las inocuas suelen p esen a di e sidad de
se o ipos, si bien algunos son más ecuen es. Po ejemplo, E. coli O157H7, causan e de muchos
b o es po in oxicaciones alimen a ias en muchos países (Jang e al., 2017).
4.1.2 Impo ancia clínica de las in ecciones po E. coli
Esche ichia coli puede causa en e medad en una g an a iedad de especies. Las cepas
comensales pueden esul a pa ógenas en caso de inmunodep esión del hospedado o si
a a iesan algunas ba e as na u ales (Bloun , 2015). Sin emba go, exis en o as cepas que
ienen ca ac e ís icas especí icas de i ulencia y pa ogenicidad que les pe mi e causa de o ma
p ima ia di e en es ipos de en e medades en los se es humanos y en los animales. Es as cepas
se incluyen den o de pa o ipos en unción de los ac o es de i ulencia que p esen en, del
cuad o clínico que p oduzcan y de su ilogené ica.
P incipalmen e se di e encia en e pa o ipos in es inales (IPEC) y ex ain es inales (ExPEC),
con g an a iedad de cuad os clínicos (Tabla 1). Los in es inales es án ep esen ados en los
ilog upos A, B1 y C (Lage s om & Hadly, 2023), y causan cuad os dia eicos. Los más
impo an es son: E. coli en e opa ógena (EPEC), E. coli en e ohemo ágica (EHEC), E. coli
en e o oxigénica (ETEC), E. coli en e oag ega i a (EAEC), E. coli adhe en e in asi a (AIEC)
yE. coli adhe en e di usa (DAEC) (Denamu e al., 2020). Las cepas que con o man los
pa o ipos ex ain es inales o man pa e de la mic obio a in es inal, es án ep esen adas en los
ilog upos B2, D y F (Lage s om & Hadly, 2023), y se ca ac e izan po ene cie os ac o es de
i ulencia que las con ie en en pa ógenas cuando se encuen an en o as pa es del o ganismo.
Las más habi uales son E. coli u opa ogénica (UPEC), el pa ógeno más comúnmen e asociado a
las in ecciones del ac o u ina io no complicadas (Lü hje & B aune , 2014), E. coli pa ogénica
a ia (APEC), esponsable de la colibacilosis a ia , causa de g andes pé didas económicas a
ni el indus ial po aumen a la mo alidad debido a la apa ición de múl iples cuad os como
sep icemia, pe ica di is o in ecciones espi a o ias (Rocha e al., 2021), E. coli asociada a
meningi is neona al (NMEC), que llega a ene un 10 % de mo alidad y has a un 30 % de
mo bilidad (Sa owska e al., 2019), y E. coli asociada a sep icemia (SEPEC), con una
mo alidad es imada del 30 % (Bi an & Ron, 2018).
7
Las BLEE se pueden di idi en a ias amilias. Las p ime as en desc ibi se ue on las TEM, a
p incipios de la década de 1960, denominadas así po que se aisla on po p ime a ez de un
cul i o sanguíneo de una pacien e g iega llamada Temonei a (Cas anhei a e al., 2021). Las
oxacilinasas (OXA) be alac amasas ambién ue on de las p ime as enzimas con es as
ca ac e ís icas en desc ibi se, con un sus a o mucho más he e ogéneo que las ya desc i as TEM
pe o con mucha más ac i idad con a la oxacilina y la me icilina (E ans & Amyes, 2014). Más
a de, en 1985, se aisla on las BLEE del g upo SHV (sul hyd yl a ian ). Es a a ian e, jun o
con las TEM, ue on las más comúnmen e encon adas has a la década de los 2000, cuando
empezó a c ece la p e alencia de las CTX-M (ce o aximase om Munich), una a iedad
desc i a po p ime a ez en Alemania a inales de los 80, y que desde en onces se ha con e ido
en la amilia de BLEE más encon ada en odo el mundo (Cas anhei a e al., 2021).
Una de las ca ac e ís icas bioquímicas más impo an es de las BLEE se e ie e a su
suscep ibilidad en e a los inhibido es de las be alac amasas como el ácido cla ulánico, el
sulbac am o el azobac am. Es o se ha ap o echado en la clínica dia ia en la lucha con a es e
ipo de esis encias al combina un an ibió ico be a-lac ámico con un inhibido de las
be alac amasas, ampliando así el espec o de acción conseguido. En cambio, las OXA no
cumplen con es a ca ac e ís ica, po lo que su inclusión en el g upo de las BLEE ha sido
discu ida (Cas anhei a e al., 2021).
4.3 A es sil es es y BLEE
4.3.1 El papel de las a es sil es es en la ansmisión de pa ógenos.
Las a es sil es es son sumamen e ele an es desde el pun o de is a de la Salud Pública.
In e ienen di ec amen e en el ciclo epidemiológico de en e medades zoonósicas impo an es
como el Vi us del Nilo Occiden al (VNO); son po ado as asin omá icas de p ác icamen e odas
las combinaciones an igénicas del i us de la in luenza a ia , con el consiguien e iesgo de que
ocu a eo ganización gené ica con cepas humanas que aumen e la i ulencia de es e i us en
nues a especie; y, además, ambién pueden con amina se con en e opa ógenos como E. coli al
alimen a se en aguas esiduales y p opaga es os pa ógenos a los se es humanos y/o animales de
p oducción o ice e sa, pueden in ec a se en las g anjas y ex ende los pa ógenos a a és de
sus u as mig a o ias (Viso, 2017).
La dis in a biología y ecología de las di e en es especies de a es a a in luencia en la mane a
en que pueden a ec a a la ansmisión de pa ógenos a los se es humanos u o as especies
domés icas. En el caso de las a es mig a o ias, sus amplios desplazamien os les pe mi en
dispe sa pa ógenos y ec o es a ópodos, lo que puede ocasiona la apa ición de nue os ocos
endémicos de en e medad a la gas dis ancias (Viso, 2017). La mig ación de las a es pe mi e el
14
mayo ap o echamien o posible de los ecu sos du an e odo el año. Es un compo amien o que
muchas a es p esen an, se es ima que la mi ad de las 9.000 especies del mundo (Telle ía, 2004),
y en su anscu so pueden eco e has a 80.000 km anuales, como es el caso del cha án á ico
(S e na pa adisaea) que en su mig ación iaja desde un polo a o o (Ege ang e al., 2010).
Las especies ligadas al mundo u al y al ganado, como las galli o mes sil es es, palomas,
có idos o es o ninos, ienen especial ele ancia desde el pun o de is a de la biosegu idad
ganade a (MAPAMA, 2024), ya que pueden ansmi i pa ógenos a las especies domés icas, sin
emba go ambién pueden adqui i los y p opaga los al es o de la comunidad sil es e (Kuiken &
C omie, 2022). Las apaces po su pa e, debido a su die a, basada en la dep edación de o as
especies animales, pueden ac ua como bioacumulado es de pa ógenos al alimen a se de
indi iduos po ado es o in ec ados, incluso algunas en e medades como el VNO pueden
ansmi i se de es a mane a (Vidaña e al., 2020). Al igual que pasa con el es o de ca ní o os,
su si uación en lo al o de la cadena ó ica las con ie en en buenas indicado as del es a us
sani a io del ecosis ema al que pe enecen (MAPAMA, 2024). En pa icula , las a es ca oñe as,
como los bui es, se conside an un buen indicado de con aminación con an ibió icos del medio
y de ansmisión de uen es an opogénicas de esis encias debido a que muchas eces se
alimen an de cadá e es de ganade ía ex ensi a que es a ada con an ibió icos (Sua ez‐Pé ez e
al., 2021).
4.3.2 Ca ac e ís icas de las poblaciones de a es sil es es en España
España es un país de g an impo ancia o ni ológica con más de 600 especies de a es di e en es
de un o al de ce ca de 10.000 especies di e en es en odo el mundo según la Sociedad Española
de O ni ología (SEO)/Bi dLi e, (2022). Algunas de las cuales son exclusi as de la península
ibé ica. Además, cons i uye un encla e muy impo an e den o del Paleá ico Occiden al pa a la
a i auna mig a o ia eu opea po su si uación me idional y su g an ex ensión con g an di e sidad
de ambien es. Po o a pa e, debido a su si uación, si e de puen e en e el con inen e eu opeo y
el a icano po lo que es una impo an e zona de paso mig a o io.
La es uc u a de las poblaciones de a es sil es es es compleja y di e sa dada la amplia
a iedad de ac o es que la modulan y de especies con di e en es es a egias biológicas, así
como a es esiden es o mig a o ias con dis in os pa ones empo ales. De es e modo, España
ecibe a es mig a o ias en in ie no (in e nan es) y en p ima e a y e ano (es i ales o
ep oduc o as). En é minos gene ales, se conside a que el 63 % de las especies son
ep oduc o as y au óc onas, el 15 % son a es mig an es, el 14 % ep esen an a especies exó icas
y, además, exis e un 8 % de especies que se conside an a as y que no se ep oduci ían o lo
ha ían de o ma ocasional (SEO/Bi dLi e, 2022).
15
La dis ibución de odas es as especies a ia es es he e ogénea a a és de la geog a ía española.
Las condiciones climá icas p opias de cada zona, así como las ca ac e ís icas geog á icas, la
disponibilidad an o de hábi a s adecuados como de alimen o y el impac o de las ac i idades
humanas an a condiciona el ipo de a es que encon amos. En la Figu a 1 podemos e
dis in as zonas con dis in o núme o de especies ep oduc o as, las á eas con mayo núme o
pa ecen concen a se a lo la go de las cuencas de íos impo an es como el Eb o, el Tajo o el
Guadalqui i , mien as que en o as zonas, como las islas, disminuyen las especies que se
ep oducen allí.
Figu a 1: Mapa de biodi e sidad de a es ep oduc o as en la península ibé ica.
Tomado de Eu opean Bi d Census Council (EBCC), (2022).
Pa a p o ege y asegu a a la go plazo las especies y los dis in os ipos de hábi a de Eu opa
su ge en 1992 la Red Na u a 2000, como una ed ecológica eu opea de á eas de conse ación de
di e sidad. En es e ma co, se c ean las Zonas de Especial Conse ación pa a las A es (ZEPA).
Es as son acciones del e i o io necesa ias pa a p ese a , man ene o es ablece una
di e sidad y una supe icie su icien e de hábi a pa a odas las especies de a es incluidas en el
Anexo I de la Di ec i a 2009/147/CE del pa lamen o eu opeo y del consejo ela i a a la
conse ación de las a es sil es es (MAPAMA, 2021). La o ganización SEO/Bi dLi e de ine las
Á eas Impo an es pa a la Conse ación de las A es y la Biodi e sidad en España (IBA) como
aquellas zonas en las que se encuen an p esen es egula men e una pa e signi ica i a de la
población de una o a ias especies de a es conside adas p io i a ias. En España se han
iden i icado 469 IBA (SEO/Bi dLi e, 2011) y el Minis e io pa a la T ansición Ecológica y el
Re o Demog á ico (MITECO) iden i ica 662 ZEPA (MITECO, s. .) (Figu a 2). Muchas de ellas
coinciden con zonas de al a biodi e sidad de a es ep oduc o as (Figu a 1), como es el caso de
la comunidad au ónoma de Ex emadu a.
16
Figu a 2: Mapa ep esen a i o de zonas ZEPA e IBA en España.
Elabo ación p opia a pa i de: SEO/Bi dli e, 2011; MAPAMA, 2021.
4.3.3 P e alencia de Esche ichia coli en a es sil es es
Esche ichia coli puede encon a se ácilmen e en mues as cloacales en a es sil es es al o ma
pa e de la mic obio a no mal de es os animales, aunque las p e alencias en e especies pueden
di e i : en Canadá Pa ke e al. (2016) desc ibie on una p e alencia o al de 68 % que a iaba
desde 44,8 % pa a zo zal pechi ojo (Tu dus mig a o ius) has a un 92 % pa a el cue o
ame icano (Co us b achy hynchos); en Eu opa ambién se han desc i o es as di e encias en e
especies, Guen he e al. (2012) en un es udio en ocado en las a es apaces ob u ie on desde un
69,2 % de p e alencia en los milanos neg os (Mil us mig ans) mues eados, has a un 22 % en
los busa dos a one os (Bu eo bu eo), con una p e alencia o al encon ada de 38 %. También
apa ecen di e encias en las p e alencias de E. coli ob enidas en unción del o igen de las
mues as, Ga giulo e al. (2018) encon a on una baja p e alencia en mues as de mucosa
in es inal de cadá e es de a es apaces (6,8 %) en e a 54,5 % en hisopos cloacales de a es
i as (Giacopello e al., 2016)
Po o a pa e, la p ime a ci a de esis encias bac e ianas a an ibió icos en auna sal aje se
egis ó con cepas de E. coli en palomas en 1975 (Sa o e al., 1978), y desde la p ime a
desc ipción de E.coli p oduc o a de BLEE en animales de ida sal aje, en 2006 en a es de un
cen o de ecupe ación de auna en Po ugal (Cos a e al., 2006), se han encon ado esis encias
de ipo BLEE en a es sal ajes en odos los con inen es excep o en la An á ida (Bonnedahl &
Jä hul , 2014; Nešpo o á e al., 2020). Incluso han apa ecido en zonas emo as con poca
17
in luencia del se humano p e alencias compa ables a aquellas encon adas en zonas más
humanizadas (10,8 % de las a es mues eadas en una zona emo a de Mongolia en e a 13,8 %
en zona humanizada de Alemania) (Guen he e al., 2012).
Las cepas de E. coli p oduc o as de BLEE que a ec an a a es sil es es pueden se las mismas
que a ec an a los se es humanos. Po ejemplo, en F ancia se encon a on en ga io as
pa iama illas (La us michahellis) las mismas cepas bac e ianas p oduc o as de la BLEE
CTX-M-1 que es la más p esen e en la clínica humana en el país (Bonnedahl e al., 2009).
Teniendo es o en cuen a adquie e especial ele ancia el papel de las mig aciones de las a es, ya
que cepas esis en es pueden disemina se a zonas más aisladas donde no pa ece habe in luencia
del se humano, o a o as zonas humanizadas y ansmi iendo así nue as cepas pa a los
habi an es de luga es lejanos. Es o se io e lejado en un es udio en Chile (He nández e al.,
2013); en él se obse ó que los se es humanos y las ga io as de F anklin (Leucophaeus
pipixcan) compa en la misma secuencia de los genes que codi ican pa a la p oducción de
BLEE en E. coli, con una p e alencia de más del doble en las ga io as. Además, es a secuencia
e a la misma que apa ecía en humanos en la zona de Canadá donde las mismas ga io as anidan
as mig a , lo que sugie e, apa e de una ansmisión in e especie, una dispe sión del mismo
mecanismo de esis encia a a és de la mig ación de las ga io as.
En España, las BLEE más ex endidas en la clínica de humanos son las CTX-M-1 (Pé ez e al.,
2019) y la SHV-12 (Díaz e al., 2010), ambién son las más encon adas en a es sil es es
(Alcalá e al., 2015; O eo e al., 2018). Al se España un país con una g an di e sidad de a es
sil es es que acoge a un g an núme o de especies mig ado as, es especialmen e impo an e
hace una igilancia de la p esencia de genes codi ican es de BLEE en las a es, an o pa a
p e eni que lleguen nue as cepas que puedan supone un iesgo de salud pública, como pa a
con ola el ni el de dispe sión de esis encia a es os an ibió icos en el medio ambien e.
4.4 Obje i os
Debido a la ya mencionada impo ancia de las esis encias a an ibió icos, en especial de las
BLEE en E. coli po las azones ya expues as, y al impo an e papel que desempeñan las a es
sil es es; en es e es udio hemos de inido los siguien es obje i os:
1. E alua la p esencia de E. coli en dis in as especies de a es sil es es.
2. E alua la p esencia de E. coli p oduc o as de BLEE en dis in as especies de a es
sil es es.
3. Es udia qué genes implicados en la p oducción de BLEE es án p esen es en las cepas de E.
coli de ec adas en a es sil es es.
18
5. MATERIAL Y MÉTODOS
5.1 O igen de las mues as y ca ac e ís icas de las zonas de mues eo
Las mues as de a es analizadas en es e es udio se oma on de a es emi idas a dos cen os de
ecupe ación de auna sil es e. Es os cen os a ienden y ehabili an a ejempla es he idos,
en e mos o debili ados de la auna sil es e, con el in de que puedan se de uel os en las
mejo es condiciones a su hábi a na u al. Las a es son encon adas po pa icula es o
di ec amen e po los agen es medioambien ales de cada comunidad au ónoma que son los
enca gados de ecoge las y aslada las. La casi o alidad de las causas de ing esos son
p o ocadas di ec a o indi ec amen e po el se humano, siendo las más ecuen es
elec ocuciones, dispa os, a opellos o in oxicaciones (Molina, 2013; SEO/Bi dLi e, 2023).
Debido a la amplia a iabilidad de especies y si uaciones epidemiológicas, se selecciona on dos
zonas de mues eo dis in as que aba can el á ea de abajo de dos cen os de ecupe ación de
auna sil es e: Acción po el Mundo Sal aje (AMUS, Villa anca de los Ba os, Badajoz), que
ecibe oda la auna sil es e ecogida en la p o incia de Badajoz, con una ex ensión de 21.766
km² (Zona 1); y el Cen o de Recupe ación de Animales Sil es es (C.R.A.S) de Bu gos
(Albillos, Bu gos), que ecoge ejempla es p oceden es de las p o incias de Bu gos, Palencia y
So ia, cub iendo una ex ensión de 32.650 km² (Zona 2).
Las zonas de mues eo p esen an di e encias climá icas y geog á icas que in luyen en la
densidad, dis ibución y ipo de especies que p edominan en cada una de ellas.
La Zona 1 p esen a un clima medi e áneo en el que los e anos son calu osos con una
empe a u a media de 26ºC y los in ie nos sua es con una media de 6ºC, con p ecipi aciones
mode adas concen adas sob e odo en o oño y p ima e a (Fe nández e al., 2011). Se encuen a
en la comunidad au ónoma de Ex emadu a que p esen a una g an di e sidad de paisajes y una
g an iqueza de a i auna, como demues a que sea la comunidad au ónoma de España con más
Zonas de Especial P o ección pa a las A es (ZEPA) (71). De es as, 33 se encuen an en Badajoz,
ocupando unas 596.264 Ha (da os de la Jun a de Ex emadu a). Muchas de ellas incluyen zonas
húmedas, debido a la g an can idad de embalses y pan anos de la p o incia, donde es ácil
encon a aná idas, ga zas, limícolas, espá ulas, ga io as, co mo anes y o as muchas especies
a ia es.También son impo an es los campos de cul i o de ce eal y las zonas de dehesa donde
podemos encon a a es ípicas de zonas abie as como la a u a da eu oasiá ica (O is a da), el
sisón común (Te ax e ax), alca a án común (Bu hinus oedicnemus), el aguilucho cenizo
(Ci cus pyga gus) o el ce nícalo p imilla (Falco naumanni), pe o ambién o as de zonas
a bus i as y o es ales como el abila go ibé ico (Cyanopica cooki), el abeja uco eu opeo
19
(Me ops apias e ), la ca aca eu opea (Co acias ga ulus), el cuco común (Cuculus cano us), el
mochuelo eu opeo (A henea noc ua), la abubilla común (Upupa epops) o la cigüeña blanca
(Ciconia ciconia) y neg a (Ciconia nig a). En oda la p o incia son abundan es las a es apaces
de las que apa ecen g an a iedad como el águila eal ibé ica (Aquila ch ysae os), el águila
impe ial (Aquila adalbe i), el alimoche común (Neoph on pe cnop e us), el bui e leonado
(Gyps ul us) o el bui e neg o (Aegypius monachus), el águila pe dice a (Aquila ascia a), el
ce nícalo ulga (Falco innunculus), el búho eal (Bubo bubo), el águila calzada (Hie aae us
penna us), la culeb e a eu opea (Ci cae us gallicus), el milano neg o (Mil us mig ans), el
milano eal (Mil us mil us) o el busa do a one o (Bu eo bu eo). Ex emadu a es, además, la
comunidad au ónoma donde in e na el g ueso de la población de g ulla común (G us g us)
eu opea.
En cambio, la Zona 2 p esen a un clima oceánico-con inen al, en el que los in ie nos son la gos
y pueden alcanza se has a 12 ºC bajo ce o, y los e anos son co os y calu osos. Aba ca es
p o incias, Bu gos, Palencia y So ia, con una densidad de población de 24,91; 19,76; y 8,6
hab/km² espec i amen e, y en las que encon amos un o al de 23 zonas ZEPA. Los paisajes
que encon amos an desde la al a mon aña has a las llanu as ce ealis as de la mese a, po lo que
podemos encon a an o a es asociadas a medios ag ícolas como esc ibanos, go iones,
alond as, pe diz oja (Alec o is u a), ce nícalo ulga (F. innunculus), o mochuelo eu opeo (A.
noc ua), a medios o es ales como pico picapinos (Dend ocopos majo ), a endajo eu oasiá ico
(Ga ulus glanda ius), o opéndola eu opea (O iolus o iolus), abila go ibé ico (C. cooki) o cuco
común (Cuculus cano us), como adap ados a i i en e iscos mon añosos como el águila eal
ibé ica (A. ch ysae os), el bui e leonado (G. ul us), la cho a piquigualda (Py hoco ax
g aculus) o el oque o ojo (Mon icola saxa ilis).
5.2 Toma de mues as y ecogida de in o mación epidemiológica
La ecogida de mues as se ealizó a p incipios de 2023 y se di idió en dos ases. En la p ime a
ase se ecogie on mues as de la Zona 1 du an e cinco semanas desde eb e o a ma zo de 2023,
y la segunda se lle ó a cabo pos e io men e en la Zona 2 du an e cua o semanas del mes de
ab il de 2023. En o al se mues ea on 102 a es: 71 de la Zona 1 y 31 de la Zona 2. Las en adas
de a es en los cen os de ecupe ación pueden se an o de animales i os como de cadá e es
pa a se p ac icada la nec opsia. Al llega al cen o a cada animal se le asigna un núme o de
en ada y es e aluado po los e e ina ios enca gados.
Se oma on mues as de las a es que ing esa on en el cen o du an e el pe íodo de ecogida de
mues as ( i as o mue as), así como de a es que ya es aban p esen es en el cen o al inicio del
es udio. En el p ime caso, se ecogie on las mues as a la ecepción de cada a e, du an e el
20
econocimien o e e ina io, y en el segundo, en momen os en los que necesi a on se manejadas
po el pe sonal del cen o, con el obje i o de e i a es és innecesa io, como po ejemplo
du an e la ealización de cu as, mues eos u ina ios de in luenza a ia , aslados a o os cen os,
o en libe aciones.
La oma de mues as se ealizó median e hisopo cloacal de animales i os, o bien du an e las
nec opsias ealizadas du an e el pe íodo de ecogida de mues as. Los hisopos se gua da on en
medio Amies (Del alab, Ba celona, España) y se man u ie on en e ige ación has a su en ío al
labo a o io. Con el obje i o de educi la can idad de en íos, las mues as se emi ie on al
labo a o io semanalmen e, odos los lunes, en iando a la ez odas las mues as ecolec adas
du an e la semana. Las mues as se anspo a on en ne e as equipadas con acumulado es de
ío. Una ez en el labo a o io se p ocesa on en menos de 48 ho as.
Con cada mues a se egis ó el cen o; el núme o de his o ia asignado; la echa de ing eso del
animal y de ecogida de la mues a; el municipio donde el a e ue ecogida; la especie; el sexo;
la edad; la causa del ing eso; si se a aba de un animal i o o de un cadá e ; si había ecibido
algún a amien o an ibió ico en el mes an e io a la ecogida de la mues a; y si p esen aba
signos de en e medad.
Pa a de e mina el sexo se a endió a ca ac e ís icas ex e nas elacionadas po ejemplo con el
amaño co po al o el diseño del plumaje (Ollé & T abalon, 2019; Blasco-Zume a & Heinz,
2023). Sin emba go, en algunos ejempla es i os no ue posible de e mina el sexo de es a
o ma ya que cie as especies de a es (como el bui e leonado o la cigüeña blanca), no p esen an
dimo ismo sexual apa en e, y se egis ó como “inde e minado”. No obs an e, en algunos
ejempla es de las especies sin dimo ismo sexual se pudo egis a el sexo ya que ue on
some idos a análisis gené ico pa a de e mina el sexo po in e és del cen o.
En cuan o a la edad, se usa on mé odos de da ación basados en las mudas del plumaje y las
ca ac e ís icas de cada especie pa a de e mina el año calenda io en el que se encon aban las
a es (Ollé & T abalon, 2019; Blasco-Zume a & Heinz, 2023). Cuando se habla de "año
calenda io" en la medición de la edad de las a es sil es es, se e ie e al con eo de años
comple os según el calenda io humano con encional, es deci , se conside a que el p ime año de
ida de un a e comienza desde su nacimien o y con inúa has a el inal del p ime año calenda io
comple o. Es e en oque de medición de la edad se u iliza comúnmen e en es udios cien í icos y
obse aciones de a es, ya que acili a la compa ación y el seguimien o de las edades de las a es
en di e en es momen os y luga es. En consecuencia, los indi iduos se clasi ica on en “0-1
años”: pollos nacidos esa misma p ima e a o pa a las a es en su segundo año calenda io, “1-2
años”: a es en su e ce año calenda io, y “2 años o más” pa a el es o, ya que en muchas
especies a pa i del e ce año calenda io se alcanza el plumaje de adul o, lo que di icul a la
21
da ación exac a de la edad. Pa a las a es en las que no ue posible es ablece una edad se ano ó
como “inde e minado”.
Sin emba go, es impo an e ene en cuen a que la madu ez del animal puede a ia según su
ciclo de ida y desa ollo de la especie, po ello ambién se clasi icó en e “pollos”, “ju eniles”,
y “adul os”, eniendo en cuen a que di e en es especies alcanzan la madu ez y el plumaje de
adul o en di e en es momen os (Tabla 4).
Tabla 4: Año calenda io en el que cada especie mues eada p esen a el plumaje y las ca ac e ís icas
ísicas del adul o.
FAMILIA
ESPECIE
EDAD ADULTA
Accipi idae
Ga ilán común (Accipi e nisus),
Aguilucho pálido (Ci cus cyaneus),
Aguilucho lagune o (Ci cus
ae uginosus)
3º año calenda io
Milano eal (Mil us mil us),
Milano neg o (Mil us mig ans),
Busa do a one o (Bu eo bu eo),
Aguilucho cenizo (Ci cus pyga gus)
4º año calenda io
Bui e leonado (Gyps ul us),
Bui e neg o (Aegypius monachusi),
Alimoche común (Neoph on
pe cnop e us)
5º año calenda io
Águila eal (Aquila ch ysae os), Águila
impe ial ibé ica (Aquila adalbe i)
6º año calenda io
Falconidae
Ce nícalo ulga (Falco innunculus),
Ce nícalo p imilla (Falco naumanni),
Esme ejón (Falco columba ius)
3º año calenda io
S igidae
Búho chico (Asio o us)
3º año calenda io
Búho eal (Bubo bubo),
Cá abo común (S ix aluco)
5º año calenda io
A deidae
Ga za eal (A dea cine ea),
Ga cilla bueye a (Bubulcus ibis)
3º año calenda io
G uidae
G ulla común (G us g us)
3º año calenda io
Ciconiidae
Cigüeña blanca (Ciconia ciconia)
3º año calenda io
La idae
Ga io a somb ía (La us uscus)
4º año calenda io
Cuculidae
C íalo eu opeo (Clama o glanda ius)
3º año calenda io
F ingillidae
Jilgue o eu opeo (Ca duelis ca duelis)
3º año calenda io
Elabo ación p opia a pa i de Ollé & T abalon, (2019); Blasco-Zume a & Heinz, (2023).
22
5.3 Análisis de labo a o io
5.3.1. Cul i o mic obiológico
Pa a iden i ica la p esencia de E. coli e iden i ica las mues as po ado as de cepas p oduc o as
de BLEE cada hisopo se semb ó en dos placas con medio de cul i o
T ip ona-Bilis-X-glucu ónido (TBX) (Labbox, Ba celona). En una de las placas el medio se
suplemen ó con ce o axima diluida a una concen ación de 2 mg/ml (TBX/CTX).
El TBX es un medio en iquecido que con iene ex ac o de soja, ip icasa y o os nu ien es que
a o ecen el c ecimien o bac e iano. Es un medio selec i o, ya que pe mi e el c ecimien o de
en e obac e ias e inhibe el c ecimien o de bac e ias G am posi i as, y di e encial pa a E. coli ya
que con iene un compues o c omogénico (5-b omo-4-clo o-3-indolol-β-D-glucu ónico) que
eacciona con la enzima 𝛃-D glucu onidasa que p oduce E. coli haciendo que las colonias de
es a bac e ia puedan se di e encias po su colo azul- e doso, mien as que o as coli o mes no
p esen an colo (Figu a 3).
Po o o lado, la adición de ce o axima, an ibió ico de la amilia de los be alac ámicos
(ce alospo ina de e ce a gene ación), solo pe mi e el c ecimien o de las colonias de E. coli
esis en es a es e ipo de an ibió icos y se u iliza como sc eening ma cado de la p esencia de
esis encias ipo BLEE (Wo ld Heal h O ganiza ion, 2021).
De es a mane a, el medio TBX nos pe mi e hace un sc eening isual de la p esencia de E. coli
en las mues as, y el medio TBX/CTX nos pe mi e iden i ica si los E. coli p esen es en la
mues a son esis en es a CTX. Una ez inoculadas, las placas se incuba on du an e 24 h a 37 ºC
y se leye on y se egis a on los c ecimien os.
Figu a 3: Cul i o de mues as en TBX/CTX con c ecimien o de E. coli esis en es
a ce o axima (azules) y o as colonias (blancas). Fo og a ías p opias.
23
Figu a 7: F ecuencia de aislamien o de E. coli po especie.
De es a mane a, las especies con una ep esen ación de 10 o más indi iduos: bui e leonado,
cigüeña blanca y busa do a one o; mues an p e alencias muy al as (70 % - 86,4 %) (Figu a 8).
En el caso de los bui es leonados, la p e alencia hallada en nues o es udio es de 83,3 %, en
línea con lo desc i o po Se illa e al. (2020) en España pa a la misma especie (86,5 %). En
cambio, en F ancia se han desc i o p e alencias meno es de un 51 % (Haenni e al., 2023), es as
di e encias pueden debe se an o a la a iación geog á ica, como a dis in os ipos de die a, ya
que el es udio de F ancia se cen aba únicamen e en bui es que se alimen aban de cadá e es
p oduc o de la ganade ía ex ensi a. También hay que ene en cuen a que g an pa e de los
bui es mues eados en la Zona 1 con i ían en las mismas ins alaciones po lo que es lógico que
se ansmi ie an la bac e ia en e ellos. De o ma simila , espec o a las cigüeñas blancas,
nues os esul ados (86,4 %) ambién concue dan con lo an e io men e desc i o en España
(Ma ín-Maldonado e al. (2022) 95 %), así como los ob enidos en busa dos a one os (70 %)
con lo hallado po Radhouani e al. (2012) (85,7 %).
30
Se ía in e esan e pa a es udios u u os que se incluye an más núme o de mues as po especie a
in de ca ac e iza más co ec amen e la p e alencia de E. coli en o as especies di e en es.
Figu a 8: P e alencia de E. coli en las especies más ep esen adas.
Las di e encias en la p e alencia de E. coli en cuan o al sexo, los g upos de edad y la
p ocedencia de las mues as se pueden consul a en la Tabla 7. Encon amos una p e alencia
gene al mayo en hemb as que en machos, que ambién se cumple pa a la mayo ía de las
especies indi iduales en los que enemos mues eados e iden i icados indi iduos de ambos
sexos (bui es leonados, busa dos a one os y milanos eales). En el es o la p e alencia es á
igualada en e sexos, aunque es cie o que el bajo núme o de indi iduos mues eados po
especie puede se una limi ación a la ho a de in e p e a es os esul ados. Es a es una a iable
que no hemos encon ado analizada en o os es udios, po lo que pod ía se la p ime a ez que
se desc ibie a. Dada la mayo endencia a po a E. coli is a en hemb as se ía in e esan e
ealiza o os es udios que p o undizasen en los mo i os de dicha dispa idad, que pod ían se
desde cues iones gené icas a di e encias en las in e acciones sociales y de compo amien o.
En cuan o a la edad, no se obse ó una endencia cla a, pe o esul ó pa ecida y ela i amen e
al a en odos los casos (Tabla 7). O os es udios pa ecen indica que los ejempla es más jó enes
ienen p e alencias meno es, como es el caso del ealizado po Guen he e al. (2012) que
mues ea on pollos aún en el nido y encon a on un 38 % y 40,7 % en dos á eas dis in as.
También Zu luh e al. (2019) desc iben p e alencias meno es (53,7 %) en un es udio en el que
el 83,4 % de las a es mues eadas e an pollos/ju eniles. Es o se puede explica po la mayo
p obabilidad de adqui i la bac e ia con un mayo iempo de ida. En nues o es udio sólo se
incluyó un pollo, el es o de la ca ego ía de las a es más jó enes (“0 a 1 año”) co esponden con
a es de segundo año calenda io; además, la g an mayo ía de los posi i os de es a ca ego ía
31
(20/30) co esponden a bui es leonados que compa ían las ins alaciones, lo que ha podido
in lui en ele a es a p e alencia.
Po úl imo, con as a con o os es udios nues o g an núme o de aislamien os de colonias de E.
coli p oceden es de mues as ecogidas en cadá e es; Yapicie e al. (2022) encon a on una
p e alencia de 62,2 % en mues as de heces y de mucosa in es inal de cadá e es y Ga giulo e
al. (2018) únicamen e un 6,8 % en mues as de mucosa in es inal ambién en a es mue as. Los
p ocesos de descomposición pod ían modi ica el ambien e in es inal a o eciendo la
p oli e ación de la bac e ia y, po an o, su p obabilidad de de ección.
Tabla 7: F ecuencia y p e alencia de E. coli en unción de “Sexo”, “Edad” y “P ocedencia”
Va iable
Sexo
Edad
P ocedencia
Ca ego ía
Macho
Hemb a
0 a 1 años
1 a 2 años
2 años o
más
Vi os
Cadá e es
Posi i os/N
24/36
31/35
30/37
8/9
34/50
51/75
24/27
Po cen aje
66,7 %
88,6 %
81,1 %
88,9 %
68 %
68 %
88,9 %
Dado que las a es ue on ecogidas en cen os de ecupe ación, los animales podían habe sido
some idos a a amien os an ibió icos y es o pod ía al e a la capacidad de de ección de E. coli.
No obs an e, solamen e es a es habían ecibido a amien o an ibió ico en el mes p e io a la
ecogida de las mues as. En odas ellas se adminis ó amoxicilina, en un caso combinada con
ob amicina, lo que no impidió que en las es mues as hubiese c ecimien o de E. coli en medio
TBX. Po lo que podemos conclui que la adminis ación de an ibió icos no in luyó de mane a
nega i a a la ho a de la ecogida de las mues as.
6.3 P esencia de BLEE en las a es mues eadas
En cuan o a la p esencia de cepas de E. coli p oduc o as de BLEE, se aisla on ocho colonias
compa ibles con c ecimien o en medio TBX/CTX de sie e a es di e en es, ya que en un a e se
aisla on dos colonias que mo ológicamen e e an dis in as ( ex u a, amaño, e c.), siendo ambas
compa ibles con E. coli. En seis de esas colonias, p oceden es de seis a es di e en es, se
de ec a on genes codi ican es de esis encias ipo BLEE, lo que supone un 5,9 % del o al de las
102 a es y un 8 % de las a es po ado as de E. coli (6/75). Las ci as a ni el global en a es
sal ajes a ían desde an solo un 1,7 % de p e alencia en pollos en Suiza (Zu luh e al., 2019),
o 3,3 % en G ecia (A hanasakopoulou e al., 2022), has a un 13,2 % en I alia (P andi e al.,
2023), 13 % en B asil (De Jesus e al., 2019) o 26,9 % encon ada en Po ugal en a es apaces
(Pin o e al., 2010). En España, la p e alencia encon ada en o os es udios es supe io a la
32
nues a. Alcalá e al. (2015) encon a on una p e alencia del 14 % y O eo e al. (2018) del 8,7
%, los dos en la comunidad au ónoma de Mad id. Ambos ecogie on sus mues as en cen os de
ecupe ación de auna al igual que noso os y, como en nues o es udio, no selecciona on
ninguna especie o amilia de a es en conc e o.
Las a es en las cuales encon amos las cepas p oduc o as de BLEE ue on una cigüeña blanca,
una ga io a somb ía, un búho eal, dos bui es neg os y un bui e leonado (Figu a 9). Des aca
que en odos los casos se a a de a es con hábi os ue emen e ligados a en o nos humanizados,
que llegan incluso a alimen a se de o ma egula en e ede os, o bien de a es apaces. Los
hábi os de las p ime as pod ían habe acili ado la ansmisión de es as cepas esis en es desde
los humanos a las a es. Si bien es cie o que en nues o es udio, a pesa de que las cigüeñas
blancas ( amilia Ciconiidae) ue on una de las especies con mayo núme o de mues as, la
p e alencia de BLEE ue muy baja (Tabla 8) en compa ación con o os esul ados que han
llegado a desc ibi un 44,4 % de p e alencia en es a especie (Alcalá e al., 2015), lo que pone de
mani ies o la g an di e encia que se puede encon a en e dis in as zonas geog á icas.
También po es as azones la amilia de las ga io as (La idae) ha sido suge ida como posible
cen inela pa a e alua la con aminación del medio con cepas de E. coli esis en es a an ibió icos
(S ed e al., 2014), y en España un 63,2 % de las E. coli aisladas en ga io as p oceden es del
cen o de España p esen aban algún eno ipo esis en e (Ma ín-Maldonado e al., 2022).
Nues o es udio solo incluye una ga io a, pe o que la única mues eada sea po ado a de una
cepa p oduc o a de BLEE puede conco da con ele adas p e alencias en es a especie en nues o
país. Es o es compa ible con los esul ados ob enidos po Ve ga a e al., (2017) en Ba celona
donde desc ibie on una p e alencia de BLEE en ga io as de 54,5 %, muy po encima de lo
encon ado en o os pun os de Eu opa: 19 % (Veldman e al., 2013); 9,4 % (Bonnedahl e al.,
2009). Ya se había desc i o un g adien e c ecien e de no e a su de Eu opa en la ecuencia de
apa ición de cepas esis en es en ga io as, así como pasa en se es humanos y animales de
p oducción (S ed e al., 2014), quizás debido a un mayo uso de los an ibió icos (Ca s e al.,
2001).
Las a es apaces son o o g upo de a es que ambién se han suge ido como posibles especies
indicado as de con aminación del medio con cepas esis en es a an ibió icos debido a su
posición en lo al o de la cadena ó ica. No obs an e, en nues o es udio, si analizamos
únicamen e las apaces mues eadas ( amilias Accipi idae,S igidae yFalconidae),
encon amos que solamen e en 4/74 a es se de ec ó la p esencia de cepas BLEE (5,4 %); una
ci a muy in e io al 26,4 % encon ada en Po ugal po Pin o e al. (2010). En o os es udios
ambién se indica on la p esencia de p e alencias bajas, aunque lige amen e supe io es: 13,8 %
33
en Alemania y 10,8 % en Mongolia desc i os po Guen he e al. (2012). En nues o país, Alcalá
e al. (2015) encon a on un 10,8 % de BLEE en 74 apaces mues eadas en la comunidad
au ónoma de Mad id. La mayo p e alencia obse ada po es os au o es puede debe se a una
densidad de población muy supe io a nues as zonas de es udio, que a o ezcan una mayo
ecuencia de con ac o con a es sil es es y la con aminación de las a es con cepas esis en es.
Es as densidades pueden se más bajas en á eas con ganade ías más ex ensi as, lo que puede
a o ece p e alencias meno es de cepas esis en es. Es o es ele an e ya que los cadá e es
p o enien es de la ganade ía son una uen e impo an e de alimen o pa a apaces ca oñe as
como los bui es, que no solo ap o echan los cadá e es de la ganade ía ex ensi a sino que
muchas eces son alimen ados en pun os de alimen ación suplemen a ios conocidos como
mulada es con cadá e es p o enien es de la ganade ía in ensi a.
Hay que des aca que odas las colonias aisladas en medio TBX/CTX, es deci , con eno ipo
esis en e a ce o axima, de la Zona 2 co esponden con bui es neg os y leonados que ing esa on
a la ez debido a una sospecha de in oxicación, así que pod ían se indi iduos que se mo iesen
no malmen e jun os en busca de alimen o y que se alimen a an de las mismas ca casas, lo que
lle a ía a una posible misma uen e de con aminación, o a una ansmisión en e los indi iduos.
Figu a 9: F ecuencia encon ada de BLEE po especie.
34
Tabla 8: P e alencias de E. coli y BLEE po amilias de a es
Familia
n
P e alencia E. coli
P e alencia BLEE
Accipi idae
63
71,4 %
4,8 %
A deidae
2
50 %
-
Ciconiidae
22
86,4 %
4,5 %
Cuculidae
1
0 %
-
Falconidae
4
50%
-
F ingillidae
1
0 %
-
G uidae
1
100 %
-
La idae
1
100 %
100 %
S igidae
7
85,7 %
14,3 %
Las ocho cepas en las que se de ec a on eno ipos compa ibles con la p esencia de BLEE ue on
analizadas median e PCR pa a iden i ica los genes esponsables de la esis encia. La PCR puso
de mani ies o la p esencia de es genes di e en es en el conjun o de las mues as analizadas:
blaSHV (1), blaCTX-M (5) y blaTEM (4) (Tabla 9).
Nues os esul ados indican una mayo p e alencia de CTX-M en a es sil es es, en
conco dancia con la mayo ía de es udios a ni el mundial, en los que las CTX-M son ambién las
más encon adas en a es sil es es (Pin o e al., 2010; Veldman e al., 2013; O eo e al., 2018;
De Jesus e al., 2019; A hanasakopoulou e al., 2022), pe o ambién en humanos (Ka anika e
al., 2016). En España, las CTX-M en humanos ambién son las BLEE p edominan es (Pé ez e
al., 2019), pe o la p e alencia de la amilia SHV aumen a con espec o a o os países. En
conc e o el gen blaSHV-12 es el más encon ado den o de es a amilia (Díaz e al., 2010). En
nues o es udio no hemos secuenciado las colonias esis en es encon adas, así que no podemos
a i ma que sea es e el gen que se encuen a ci culando, pe o su p esencia se á ele an e ya que
se ha desc i o como causa impo an e de in ecciones ex a-hospi ala ias en la comunidad (Díaz
e al., 2010). Una mayo ecuencia de apa ición de es a amilia de BLEE en el ámbi o de la
medicina humana en nues o país puede se la causa de que en algunos es udios con a es
sil es es es e gen haya sido el más ecuen e (Alcalá e al., 2015; Ve ga a e al., 2017).
35
No obs an e, la p esen ación combinada de a ios genes ue la si uación más ecuen e. La
asociación desc i a en e blaTEM con blaSHV o blaCTX-M ya ha sido desc i a en o os es udios,
apa eciendo de es a mane a más ecuen emen e que en soli a io (Alcalá e al., 2015; Ve ga a e
al., 2017), de la misma mane a que ocu e en es e es udio.
Tabla 9: Da os epidemiológicos asociados a las colonias de E. coli aisladas en medio TBX/CTX y
esul ado de PCR mul iplex pa a genes codi ican es de BLEE
Zona
Mues a
Especie
Genes
implicados
Sexo
Edad
O igen
1
8
Cigüeña
blanca
blaSHV y
blaTEM
Inde e minado
2o+
(Adul o)
A e i a
9
Búho eal
blaCTX-M
Inde e minado
1 a 2
(Ju enil)
A e i a
55
Ga io a
somb ía
blaCTX-M y
blaTEM
Macho
2o+
(Adul o)
A e i a
2
100
Bui e
leonado
blaCTX-M
Hemb a
2o+
(Adul o)
Cadá e
101A
Bui e neg o
nega i o
Inde e minado
1 a 2
(Ju enil)
A e i a
101B
blaCTX-M y
blaTEM
102
Bui e neg o
nega i o
Macho
1 a 2
(Ju enil)
Cadá e
103
Bui e neg o
blaCTX-M y
blaTEM
Hemb a
1 a 2
(Ju enil)
Cadá e
En dos de las ocho colonias compa ibles ob enidas no ue posible iden i ica ninguno de los
genes analizados en la PCR. Es o puede se debido a la exis encia de o os ipos de
be alac amasas como son las AmpC pa a las cuáles la PCR u ilizada no iene capacidad de
disc iminación.
Los esul ados de nues o es udio con ibuyen a mejo a el conocimien o epidemiológico p e io
de la p esencia de cepas de E. coli BLEE en las a es sil es es. La a iedad geog á ica en el
mues eo y de especies analizadas nos p opo ciona una imagen p elimina gene al de la
si uación de es e p oblema en las a es sil es es. Una de las p incipales limi aciones, ípica de
36
es e ipo de es udios, es el bajo núme o de mues as pa a cie as especies de a es sil es es
debido a las di icul ades pa a la ecolección de los ejempla es. Nues os esul ados pueden
ayuda a la ho a de iden i ica aquellas especies con mayo es p e alencias pa a ealiza
ca ac e izaciones pos e io es a mayo escala. Aunque las p e alencias han sido gene almen e
bajas, nues os esul ados ponen en e idencia la ci culación de es as cepas y la exis encia de
di e en es genes de esis encia p esen es en las a es sil es es. Las especies con p esencia de
cepas esis en es iden i icadas en es e es udio (cigüeña blanca, ga io a somb ía, búho eal,
bui e leonado y bui e neg o) ue on especies cuyas ca ac e ís icas ó icas pueden a o ece el
con ac o con es as cepas, y es á en consonancia con su posible ol como ese o ios o
indicado as de p esencia ambien al de cepas mul i esis en es (S ed e al., 2014; Viso, 2017;
Sua ez‐Pé ez e al., 2021). Asimismo, las a es ambién pueden juga un papel como
diseminado as geog á icas de E. coli mul i esis en es, de o ma simila a como ocu e con o as
en e medades, aunque se ían necesa ios más es udios pa a ca ac e iza epidemiológicamen e
es e hecho con más de alle. El análisis molecula de las cepas BLEE de ec adas con i mó la
p esencia de a ios genes de esis encia, ambién encon ados en o os es udios en a es
sil es e. No obs an e, a pesa de habe u ilizado un diseño de PCR ípico pa a es e ipo de
es udios, algunas cepas no pudie on ca ac e iza se co ec amen e, lo que sugie e la exis encia de
o os genes esponsables de esis encias ci culan es y unas elaciones epidemiológicas más
complejas. Son necesa ios más es udios que pe mi an ca ac e iza en más de alle la di e sidad
molecula de los elemen os de esis encia de los E. coli ci culan es en a es sil es es.
37
7. CONCLUSIONES
1. Nues os esul ados con i man una al a p e alencia de E. coli en los hisopos cloacales de a es
sil es es.
2. En las zonas analizadas se de ec ancepas de E. coli p oduc o as de BLEE en di e en es a es
sil es es.
3. Las a es apaces, en especial las ca oñe as, o las a es ligadas a en o nos humanizados
p esen an cepas de E. coli p oduc o as de BLEE con mayo ecuencia. Es o añade más
e idencia a su posible papel como indicado as de con aminación ambien al y agen es de
p opagación de cepas esis en es, que debe ían se e aluados en u u os es udios.
4. Se encon ó una al a di e sidad de genes implicados en esis encias de ipo BLEE. La amilia
de BLEE CTX-M es la más ecuen emen e encon ada, al igual que ocu e en medicina
humana o en animales domés icos, lo que sugie e que las a es sil es es pueden ac ua como
ese o io de las mismas cepas que nos a ec an a noso os.
38
8. BIBLIOGRAFÍA
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