Diagnosi genetico molecolare di difetti enzimatici dello steroide 21-idroxylase in pazienti con sindrome adrenogenitale
G. H. Scharer
Dott. medico Genetica Molecolare diagnosi di difetti di enzima dello steroide 21-idroxylase in pazienti con sindrome adrenogenale nati il 22.05.1963 a Niederbühl/Rastatt Test di maturità il 18.05.1982 a Rastatt corso di studio presso la facoltà di medicina SS 1989-1996 fisica il 20.09.1991 presso la Freie Universität Berlin Cliniche Studie in Berlin e Heidelberg anno pratico a Bad-Mergentheim e New York, Stati Uniti Esami statali il 04.11.1996 presso l'Università di Heidelberg corso di laurea: farmacologia
La 21-idroxylase è codificata dal gene CYP21B sul cromosoma 6. L'obiettivo di questo lavoro è stato quello di sviluppare un schema genetico molecolare per identificare i difetti del gene CYP21B. Il schema dovrebbe consentire l' S creening di un grande gruppo di pazienti e essere applicabile nella diagnosi prenatale e perinatale. Dopo la specifica amplificazione del gene CYP21B mediante polymerase chain reaction (PCR), le tre mutazioni più frequenti (delezioni, mutazione splice-site in Intron-2, mutazione Ile172Asn in Ileon-4) sono state rivelate attraverso polimorfismi di esposizione singolare (SSCP) o heteroduplex.
Tutti i risultati ottenuti dalla prova di rimozione mediante PCR o SSCP
I risultati sono stati confermati da una sequenza diretta del DNA.
6 delezioni, 12 mutazioni di introne 2 e 7 mutazioni di Ile172Asn sono state rilevate.
In un paziente, l'analisi di sequenza ha rilevato un'altra mutazione rara.
Il concetto di studio applicato ha permesso di ottenere un elevato livello di
Sensibilità (> 90%) e specificità (100%) per la prova di mutazione nel gene CYP21B
Per aumentare la sensibilità, ulteriori mutazioni possono essere incluse nel schema di diagnosi. A causa della relativamente bassa lunghezza del gene CYP21B, una sequenziatura completa del DNA è anche possibile in breve tempo. Deve essere eseguita in ogni caso se si esclude una sindrome adrenogenale in una gravidanza desiderata o esistente e in presenza di malattie in famiglia.
La sequenza diretta del DNA può causare mutazioni rare o sconosciute anche nel
Il fenomeno dell'amplificazione preferita, che si verifica in caso di polimorfismo di sequenza C alla posizione della mutazione del sito di splice in Intron-2, può portare alla perdita di un allele nel PCR primario.