Molekulare genetische Diagnose von Enzymdefekten von Steroid 21-Hydroxylase bei Patienten mit Adrenogenitalsyndrom
Gunter H. Scharer
Dr. Med. Molekulargenetische Diagnostik von Enzymdefekten der Steroid 21-Hydroxylase bei Patienten mit Adrenogenitalsyndrom geboren am 22.05.1963 in Niederbühl/Rastatt Reifeprüfung am 18.05.1982 in Rastatt Studiengang des Fachbereichs Medizin von SS 1989 bis SS 1996 Physik am 20.09.1991 an der Freien Universität Berlin Klinische Studie in Berlin und Heidelberg Praktischjahr in Bad-Mergentheim und New York, USA Staatsprüfung am 04.11.1996 an der Universität Heidelberg Promotion Fach: Pharmakologie Doktor: Prof. Dr. Med. Ulrich Schwabe drei Enzymdefekten der Steroid-21-Hydrox AG sind die häufigsten Ursache (>90 %) für Adrenalen AG (SGS AG).
Die 21-Hydroxylase wird durch das CYP21B-Gen auf Chromosom 6 kodiert. Das Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung eines molekularen genetischen Diagnose-Schemas zur Erkennung von CYP21B-Gene-Fehlern. Das Schema sollte die S-Creening einer großen Patientengruppe ermöglichen und für die pränatale und perinatelle Diagnose anwendbar sein. Nach spezifischer Verstärkung des CYP21B-Gens durch Polymerase-Kette-Reaktion (PCR) wurden die drei häufigsten Mutationen (Deletionen, Splice-Site-Mutation in Intron-2, Ile172Asn-Mutation in Inon-4) durch einzelne Extrasformationspolymorphismen (SSCPs) oder Heteroduplexen nachgewiesen.
Alle Ergebnisse der PCR-Deletierung oder der SSCP-Deletierung
Das Ergebnis konnte durch direkte DNA-Sequenzierung bestätigt werden.
6 Deletionen, 12 Intron-2-Mutationen und 7 Ile172Asn-Mutationen wurden nachgewiesen.
In einem Patienten wurde eine weitere seltene Mutation durch Sequenzanalyse herausgefunden.
Das angewandte Untersuchungskonzept hat eine hohe
Empfindlichkeit (> 90%) und Spezifität (100%) bei Mutationsnachweis im CYP21B-Gen
Das Diagnose-Schema ermöglicht bei geringer Aufwand die schnelle Erfassung (2-3 Tage) der drei häufigsten Mutationen, die zum Salzverlustsyndrom bei AGS führen, und ist damit auch für die perinatale Diagnose geeignet. Um die Empfindlichkeit zu erhöhen, können weitere Mutationen in das Diagnose-Schema einbezogen werden. Durch die relativ geringe Länge des CYP21B-Gens ist eine komplette DNA-Sequenzierung auch in kurzer Zeit möglich. Es sollte in jedem Fall durchgeführt werden, wenn bei einer gewünschten oder bestehenden Schwangerschaft und dem Vorhandensein von Krankheiten in der Familie ein Adrenogenitalsyndrom ausgeschlossen wird.
Die direkte DNA-Sequenzierung kann seltene oder unbekannte Mutationen auch im Bereich
Das Phänomen der bevorzugten -Amplifikation, das bei Sequenzpolymorphismus C an der Position der Splice-Site-Mutation in Intron-2 aufgetreten ist, kann zu einem Allelverlust in der primären PCR führen.