Sulla biologia cellulare della glutathione reductase: effetto fisiologico dei vettori di NO e sviluppo di un sistema di indicatori per il metabolismo cellulare di Rdox
Michael Keese
Dr. med. Biologia cellulare della glutathione riductase: effetto del carriere fisiologico di NO e sviluppo di un sistema di indicatore per il rdoxmetabolismo cellulare nato il 19 dicembre 1971 a Heidelberg esame di maturità il 10 luglio 1991 a Nürnberg corso di specializzazione in medicina da SS 1992 a SS 1998 fisica il 15 marzo 1994 presso l'Università di Heidelberg studio clinico a Heidelberg esami pratici a Cape Town, Murten e Heidelberg 12 novembre 1998 presso l'Università di Heidelberg
In vivo
Per esempio, le alterazioni del ciclo di redox del glutatione causate da NO
Infezioni da parassiti intracellulari di rilevanza patofisiologica.
L'esame di questi cambiamenti potrebbe permettere di realizzare nuove e più
farmacologici influenzanti attraverso una modulazione specifica dei
A. S. Nitrosoglutathione (GSNO) nel metabolismo del glutathione Basandosi sull'inibizione della glutathione reductase da parte di GSNO (Becker et al., 1995) è stato studiato l'effetto del GSNO su altri due enzimi del metabolismo del glutathione.
Glutathione-S-transferase
-La classe diventa competitiva nei confronti dei due sostanti di cloro.
inibisce il dinitrobenzolo e il glutatione.
-I valori per CDNB e GSH sono di 168
180, rispettivamente.
L'effetto di una modificazione irreversibile del
Gli effetti reversibili del GSNO sulla Glutathione Peroxidase sono probabilmente insignificanti, ma difficili da quantificare a causa delle particolarità del sistema di assaggio.
La riduzione del glutatione è inibita già a concentrazioni molto basse di DNIC.
- Valori per DNIC-GSH
a 1,5
, per DNIC-CYS
a 16 anni
- L' inibitazione .
In particolare, il tasso di conversione dei prezzi è stato molto elevato rispetto al tasso di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione di conversione dei prezzi di conversione di conversione dei prezzi di conversione dei prezzi di conversione di conversione dei prezzi di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione dei prezzi di conversione di conversione di conversione di conversione dei prezzi di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione dei prezzi di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione di conversione.
l'attivazione dell'enzima è stata sovrapposta.
La modifica non riguarda probabilmente la flavina, poiché ApoGR, la parte proteica del GR dopo la separazione del FAD, è stata modificata. Il confronto tra la cinetica di inattivazione nel tipo selvatico e in un mutante GR senza i primi 15 aminoacidi N-terminali ha suggerito che il Cys2 reattivo è irrilevante per l'inibizione osservata.
Per chiarire il meccanismo dell'emicrania, l'enzima modificata è stata cristallizzata. L'analisi di radiofrequenza condotta da S. Savvides e P.A. Karplus alla Cornell University ha rilevato una carta di densione elettronica a 1.7 Å di risoluzione che ho potuto interpretare chiaramente: nel GR modificato da DNIC-GSH, il Cys63 è ossidato in sulfatto e Cys58 porta in disulfido una molecola di glutatione. La modifica a Cys63 spiega l'irreversibilità dell'inaattivazione dell'enzima.
L'influenza delle DNIC esterne sulle cellule intatte GR è stata minore come previsto, con una riduzione dell'attività di solo il 30% nelle cellule CHO e eritrocitiche, anche a concentrazioni fino a 100. La crescita di P. falciparum non è stata influenzata dalle DNIC mediane.
Entrambe le DNIC sono inibitori competitivi della glutatione-S-transferase con
basso K
- Valori di circa 20 nM. Una modificazione irreversibile dell'enzima è stata
C. previsioni strutturali sulla tioredoxina reductase derivante da P. falciparum, una potenziale molecola di target di DNIC intracellulari Basata sulla sequenza di aminoacidi derivati della tioredoxina reductase, è stato effettuato un confronto strutturale con il GR mediante computer modellazione.
Il 35% degli aminoacidi è risultato essere identico.
Tuttavia, è meno denso e presenta notevoli differenze nel sistema di legame del substrato.
D. Glutathione reductase come sistema quasi fisiologico di indici di redox per le cellule viventi 1. Microiniezione di cristalli GR Per cristallizzare il GR a bassa densità di ionizzazione è stato sviluppato un metodo che consente di ottenere con elevata probabilità grandi cristalli röntgen-agibili. Per questi cristalli, i cambiamenti nello spettro di assorbimento GR dipendono da una riduzione della pressione del circolo circostante.
Complessi immunitari di GR endogeni con IgG micro-iniezionati
Le GR citoplasmatiche e nucleari sono state
HeLa
- le cellule e
Fibroblastiche di Keppler
La presenza di fluorescenze immunologiche è stata dimostrata microscopicamente.
se possibile, è stato micro-iniezionato il sermo anti(hGR), è stata effettuata la marcatura della fluorescenza
La presenza intracitoplasmica e intranucleoplasmica dell'enzima
In questo caso, le particelle immunitarie si manifestano chiaramente a causa della loro presenza.
L'effetto di questo effetto, come l'utilizzo di
I cristalli sono utilizzati per misurare i potenziali di redox intracellulare perché
La misurazione di particelle GR intracellulari non è di interesse solo per questioni fisiologiche, come ad esempio gli effetti dei vettori di NO, ma può servire anche come criterio di qualità prima dei trapianti di organi, per il cui successo un ambiente redoxmico delle cellule intatto è probabilmente importante quanto il pH o la concentrazione di ATP.