Sur la biologie cellulaire de la glutathione réductase: effet physiologique du carrier de NO et développement d'un système d'indicateur pour le métabolisme du redox cellulaire
Il s'agit de Michael Keese.
Dr. Médecin sur la biologie cellulaire de la réductase de glutathion: effet physiologique du NO-carrier et développement d'un système d'indicateur pour le redox métabolisme cellulaire Né le 19 décembre 1971 à Heidelberg Examen de maturité le 10 juillet 1991 à Nuremberg
Dans le cadre de l'expérience
Les modifications du cycle de redox du glutathion causées par le NO sont, par exemple,
Infections par des parasites intracellulaires d'importance pathophysiologique.
L'examen de ces changements pourrait permettre d'élaborer de nouvelles et plus
les mesures pharmacologiques d'influence par une modulation ciblée de l'organisme
A. S-nitrosoglutathione (GSNO) dans le métabolisme du glutathion À partir de l'inhibition de la réductase du glutathion par GSNO (Becker et al., 1995), l'effet du GSNO a été étudié sur deux autres enzymes du métabolisme du glutathion.
La transfertase de glutathion-S
- la classe devient concurrentielle avec les deux substrats de chlore.
inhibite le dinitrobenzol et le glutathion.
- Les valeurs de la CDNB et de la GSH sont de 168.
ou 180
Il s'agit d'une modification irréversible de la
Les effets réversibles du GSNO sur la glutathion peroxydase sont probablement insignifiants, mais difficiles à quantifier en raison des particularités du système d'assay. Par exemple, les complexes de fer dinitrosyldithiole (DNICs) et les enzymes du métabolisme du glutathion DNICs sont des substances réactives de NO constituant une part importante de l'EDRF.
La réduction du glutathion est déjà inhibée à très faibles concentrations de DNIC.
- Les valeurs sont pour le DNIC-GSH
à 1,5
, pour le DNIC-CYS
à 16 ans
- L' inhibiteur
Il s'agissait d'une part de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'une part, de l'économie de marché, d'autre part, de l'économie de marché et d'autre part de l'économie de marché.
l'activation de l'enzyme a été superposée.
La modification ne concerne probablement pas le flavin, puisque ApoGR, la proportion de protéines du GR, a également été modifiée après la sécrétion du FAD. La comparaison de la kinétique d'inactivation dans le type sauvage et un mutant GR sans les 15 premiers acides aminés N terminaux a suggéré que le Cys2 réactif est irrelevant pour l'inhibition observée. Cette conclusion est essentielle car Cys2 n'est pas cristallographiquement fiable.
Pour clarifier le mécanisme de l'hémorragie, l'enzyme modifiée a été cristallisée. L'analyse de l'inhibition aux rayons X réalisée par S. Savvides et P.A. Karplus à l'Université de Cornell a donné une carte de détection électronique à 1,7 Å de résolution que j'ai pu interpréter clairement: dans le GR modifié par DNIC-GSH, le Cys63 est oxydé en sulfate et le Cys58 est une molécule de glutathion dans la liaison au disulfide. La modification du Cys63 explique l'irréversibilité de l'inactivation de l'enzyme.
L'influence des DNICs externes sur les cellules GR intactes était modérée, où, même sous des conditions d'incubation dans les cellules CHO et les érythrocytes à des concentrations allant jusqu'à 100%, une diminution de l'activité n'a été observée que de 30%.
Les deux DNIC sont des inhibiteurs compétitifs de la glutathion-S-transférase avec
à faible K
- valeurs d'environ 20 nM. Une modification irréversible de l'enzyme a été
C. Prédictions structurelles sur la thiorédoxine réductase provenant de P. falciparum, une molécule cible potentielle des DNIC intracellulaires Basée sur la séquence d'acides aminés dérivés de la thiorédoxine réductase, une comparaison structurelle avec la GR a été réalisée par modélisation informatique.
Il a été démontré que 35% des acides aminés étaient identiques.
Mais il est moins dense et présente des différences significatives dans le système de liaison du substrat.
D. Glutathione reductase en tant que système quasi-psychologique d'indicateur de redox pour les cellules vivantes 1ère micro-injection des cristaux GR Pour cristalliser le GR à faible densité ionique, une méthode a été développée permettant d'obtenir avec une grande probabilité de grosses cristaux x-ray. Pour ces cristaux, les changements du spectre d'absorption GR dépendent d'une réduction de la pression de la couleur de la membrane environnante 1ère micro-injection des cristaux GR à faible densité ionique.
2° Les complexes immunitaires endogènes de GR avec des IgG micro-injectés
Les GR cytoplasmiques et nucléaires ont été
Je vous en prie.
- Les cellules et
Fibroblastes de Keppler
L'écoulement de la fluorescence immunologique a été démontré par microscopie.
si possible, le sérum anti(hGR) a été micro-injecté, la marquage de fluorescence a été effectuée
La présence intracytoplasmique et intranucléoplasmique de l'enzyme
Il est évident que les précipitations immunitaires, en tant que particules, sont clairement détectées par le système immunitaire.
Ce phénomène pourrait être aussi important que l'utilisation de
Les cristaux sont utilisés pour mesurer les redox potentiels intracellulaires parce que
Les résultats obtenus sur les particules GR-IgG dans les peroxysomes et les lysosomes n'ont pas été observés comme prévu. Les mesures sur les particules GR intracellulaires ne sont pas seulement intéressantes pour les questions pathophysiologiques telles que les effets des NO. Elles peuvent également servir de critère de qualité avant les transplantations d'organes, dont la réussite est probablement aussi importante qu'une concentration de pH ou d'ATP.