Sobre la biología celular de la reductaza de glutatión: efecto fisiológico de los transportadores de NO y desarrollo de un sistema de indicadores para el metabolismo celular de Rdox
Michael Keese
Dr. med. Sobre la biología celular de la reductaza de glutatión: efecto de la NO-carriera fisiológica y desarrollo de un sistema indicador para el redox metabolismo celular Nacido el 19 de diciembre de 1971 en Heidelberg Prueba de madurez el 10 de julio de 1991 en Nuremberg Curso de medicina de SS 1992 a SS 1998 Física el 15 de marzo de 1994 en la Universidad de Heidelberg Curso clínico en Heidelberg Práctico año en la ciudad de Cape Town, Murten y Heidelberg exámenes estatales el 12 de noviembre de 1998 en la Universidad de Heidelberg Doctorado en bioquímica: doctorado padre: Prof. Dr. med. R. Heiner Schirmer Las enzimas del metabolismo de glutatión representan una parte importante de los mejores mecanismos antioxidantes.
En vivo
Los cambios en el ciclo de redox de glutatión por NO se producen, por ejemplo, en
Infecciones con parásitos intracelulares de importancia fisiopatológica.
La investigación de estos cambios podría dar lugar a nuevas y más suaves
Las medidas farmacológicas de influencia mediante la modulación específica de las propiedades corporales
A. S-nitrosoglutathione (GSNO) en el metabolismo del glutatión Basándose en la inhibición de la reductaza de glutatión por parte de GSNO (Becker et al., 1995), se estudió el efecto del GSNO en dos otras enzimas del metabolismo del glutatión.
La transmisión de glutatión S a la
-La clase se vuelve competitiva con los dos substratos de cloro.
Inhibe el dinitrobenzol y el glutatión.
-Los valores para CDNB y GSH son de 168.
y 180 respectivamente.
En la actualidad, el aumento de las emisiones de gases de efecto invernadero en la atmósfera y en la atmósfera de los gases de efecto invernadero en la atmósfera y en la atmósfera de los gases de efecto invernadero en la atmósfera y en la atmósfera de los gases de efecto invernadero en la atmósfera y en la atmósfera de los gases de efecto invernadero en la atmósfera y en la atmósfera de los gases de efecto invernadero en la atmósfera de efecto invernadero en la atmósfera y en la atmósfera de los gases de efecto invernadero en la atmósfera de efecto invernadero en la atmósfera de gases de efecto invernadero en la atmósfera de efecto invernadero es una alteración irreversible.
Las enzimas producidas por GSNO no tienen lugar. Esto también se aplica a la peroxidasa de glutatión. Los efectos reversibles de GSNO en la peroxidasa de glutatión son probablemente insignificantes, pero son difíciles de cuantificar debido a las particularidades del sistema de ensayo. Por ejemplo, los complejos de hierro dinitrosildietil (DNICs) y las enzimas del metabolismo de glutatión DNICs son sustancias reactivas de NO que representan una proporción significativa de la EDRF.
La reducción de glutatión se inhibe ya en concentraciones muy bajas de DNIC.
-Los valores son para DNIC-GSH
en el caso de 1.5.
, para DNIC-CYS
a los 16 años
La inhibición .
En la actualidad, el porcentaje de la población en el sector de la producción se ha convertido en un porcentaje competitivo, pero el porcentaje de la población en el sector de la producción se ha convertido en un porcentaje competitivo.
se ha superpuesto la activación de la enzima.
En la modificación de la enzima, el complejo CT entre Cys63 y la flavina ya no se puede construir. La modificación probablemente no afecta a la flavina, ya que ApoGR, la parte de la proteína de GR después de la separación de FAD, también se modificó. La comparación de la cinética de inactivación en el tipo salvaje y un mutante GR sin los primeros 15 aminoácidos N terminales sugirió que el Cys2 reactivo es irrelevante para la inhibición observada.
Para clarificar el mecanismo de hemo, se cristalizó la enzima modificada. El análisis de inhibición de rayos X realizado por S. Savvides y P.A. Karplus en la Universidad de Cornell dio una tarjeta de detección de electrones con una resolución de 1.7 Å, que pude interpretar claramente: en el GR modificado por DNIC-GSH, el Cys63 se oxida al sulfínato y Cys58 lleva a una molécula de glutatión en la unión disulfida. La modificación de Cys63 explica la irreversibilidad de la inactivación de la enzima.
La influencia de los DNICs externos en las células intactas de GR fue muy baja, con una reducción de actividad del 30% en las células CHO y eritrocitos, incluso bajo condiciones de incubación, a concentraciones de hasta 100. El crecimiento de P. falciparum no fue influenciado por los DNICs en el medio.
Ambos DNICs son inhibidores competitivos de la glutatión S-transferasa con
bajos K
-Values de alrededor de 20 nM. Una modificación irreversible de la enzima fue
C. Predicciones estructurales de la tioredoxina reductase de P. falciparum, una potencial molécula objetivo de DNICs intracellular basadas en la secuencia de aminoácidos derivados de la tioredoxina reductase, se ha realizado una comparación estructural con la GR mediante modelado informático.
El 35% de los aminoácidos resultaron ser idénticos.
Sin embargo, se trata de un material menos denso y que muestra diferencias significativas en el sistema de unión del substrato.
D. Glutathione reductase como un sistema de índice de reducción de oxidación casi fisiológica para las células vivas. 1a microinjección de cristales de GR Para cristalizar el GR a baja intensidad de iones, se ha desarrollado un método que permita obtener con gran probabilidad grandes cristales de capacidad de radiografía. En estos cristales, los cambios en el espectro de absorción del GR dependen de la reducción de la presión de la red circundante.
Complejos inmunológicos endógenos de GR con IgG microinjeccionados
Los GR citoplasmáticos y los GR nucleares se desarrollaron en
HeLa
- Celdas y
Fibroblastos de la fibra de Keppler
En la mayoría de los casos, la colocación de fluorescencia no es normal, ya que la colocación de fluorescencia no es normal.
Cuando fuera posible, se microinjectó el serum anti(hGR), se realizó el marcado de fluorescencia.
La presencia intracytoplasmática e intranucleoplasmática de la enzima
En el caso de las células inmunológicas, las células inmunológicas se muestran claramente como partículas de
Este efecto, así como el uso de
Los cristales se utilizan para medir los potenciales de redox intracellular porque
La medición de las partículas intracellularas de GR no solo es de interés para cuestiones fisiológicas como, por ejemplo, los efectos de los transportadores de NO, sino que también puede servir de criterio de calidad antes de los trasplantes de órganos, para el éxito de los cuales un entorno redox de las células intacto es probablemente tan importante como el pH o la concentración de ATP.