L'introduction du diagnostic génétique moléculaire du syndrome de X fragile.
Il s'agit d'Andrés Fritz.
Dr. Med. Introduction du diagnostic génétique moléculaire pour le syndrome de Fragile-X. Né le 23.02.1967 à l'Université de Heidelberg Examen de maturité le 11.06.1986 à l'Université de Backnang Cours de médecine de SS 1989 à WS 1996 Physique du 03.04.1991 à l'Université de Heidelberg Études cliniques à Heidelberg Examen d'état moléculaire pour le syndrome de Fragile-X.
Dans les études cytogénétiques, il a été constaté que, dans certaines conditions de culture, des
Le chromosome X est fragile à Xq27.3.
Ce n'est pas une rupture chromosomique, mais un point où un changement de chromosome entraîne une rupture chromosomique.
L'ordre des nucléosomes modifie la structure de la chromatine et, par conséquent, le degré de détérioration
Une élargissement de la séquence de trinucléotides (CGG) dans le premier exon du gène FMR-1 a été découvert à l'aide de méthodes génétiques moléculaires. Chez les personnes non affectées par le FXS, il y a une élargissement normal (S) comprenant 6 à 51 répétitions CGG. S'il y a 52 à 200 répétitions CGG, on parle d'une prémutation (S*) qui, contrairement à la prémutation normale, est instable et qui peut provoquer une élargissement complet (L) de 200 à plus de 2000 répétitions CGG.
Il est probable que cette protéine ait pour fonction de lier l'ARN et de le transporter du noyau cellulaire vers les ribosomes. Il est probable que ce manque de FMRP entraîne une perturbation de la structure des synapses et des dendrites des cellules nerveuses dans certaines régions du cerveau, ce qui pourrait entraîner le retard mental et les déficits neurologiques des patients.
Le diagnostic clinique de cette maladie est extrêmement difficile à mettre en place, car les symptômes sont incohérents et très variables. Cela est particulièrement vrai pour les femmes et les enfants, car les symptômes ici sont moins prononcés et plus non spécifiques.
En particulier chez les femmes et les prémutations, les chromosomes X fragiles ont souvent été
En effet, les résultats de l'enquête ont été négatifs, ce qui a conduit à de fausses conclusions négatives.
L'objectif de ce travail était d'introduire à l'Institut de génétique humaine de l'Université de Heidelberg un diagnostic moléculaire simple, sûr et peu coûteux du syndrome de la fragile X. Un protocole PCR a été développé pour identifier les patients masculins non affectés par le FXS. Cela fonctionne également chez les patients dont les deux allèles présentent un nombre suffisamment différent de répétitions de CGG.
Ensuite, les produits PCR sont séparés par électrophore, ce qui peut être fait par
L'ADN est coloré par de l'éthidium bromide ou par des ions d'argent. Une fois les gels photographiés, la longueur des fragments peut être déterminée graphiquement, ce qui permet de déduire le diagnostic. Cette méthode permet de diagnostiquer une grande partie des patients.
Les autres cas font l'objet d'une analyse Southern Blot qui, bien que plus coûteuse et
Il est plus long que la PCR, mais indispensable pour un diagnostic sûr.
Il suffit d'une digestion individuelle de l'ADN génomique avec
L'enzyme restreignante Eco RI.
l'enzyme Ecl XI, qui est sensible à la méthylation, est utilisée.
Il s'agit notamment d'identifier les prémutations.
La détermination de la longueur des fragments de la prémutation est effectuée.
L'enzyme de restriction Pst I. L'ADN digéré est séparé par l'agarouse gélélectrophoreuse,
Ensuite, les fragments d'ADN sont transformés en une membrane de nylon à l'aide d'une tache sudine.
Une sonde d'ADN radioactivement marquée est hybridée à l'élément d'ADN concerné. L'auto-radiographie permet d'effectuer l'analyse de la longueur de l'élément, ce qui détermine le diagnostic. Pour les hommes, la dégénérescence de l'éco-RI est attendue après une dégénérescence normale de 5,2 kb. Pour les femmes, une bande de 2,8 kb correspondant à l'élément sur le chromosome X actif, ainsi qu'une bande de 5,2 kb représentant l'élément sur le chromosome X inactif. Les mutations complètes sont détectées à l'expansion d'au moins 600 bp.
Des expériences avancées permettant de détecter des mutations complètes par PCR ou par
Le diagnostic FXS exclusif à l'aide d'un PCR nœud a été abandonné car
Les résultats de l'analyse constitutionnelle des chromosomes de chaque patient présentant un retard mental, un retard de développement ou une dysplasie physique ne devraient pas être négligés pour éviter d'autres causes chromosomiques de ces symptômes.
Dans le cadre de ce travail, un total de 152 patients ont été examinés, dont 99 ont été testés à la fois cytogénétiquement et moléculairement.
Dans 96 patients, les résultats cytogénétiques et moléculaires
Dans un patient, l'analyse du blot du sud a révélé une prémutation
Il a été démontré qu'il n'a pas été détecté par le test cytogénétique et que le reste de l'animal a été infecté par le virus.
Dans deux cas, le diagnostic unique n'a été possible qu'avec des méthodes génétiques moléculaires.
L'indication du diagnostic de FXS a été manifestement généreuse par les médecins transférants. Une analyse minutieuse des caractéristiques cliniques des patients a révélé que, dans de nombreux cas, des symptômes totalement inhabituels à un FXS étaient présents. Une liste de contrôle a ensuite été élaborée, qui nécessite cependant un examen clinique approfondi avant d'être utilisé comme instrument de diagnostic clinique de FXS. Cette liste de contrôle pourrait permettre de déterminer un score X fragile permettant d'estimer la probabilité de l'existence d'un FXS.