Introducción del diagnóstico genético molecular para el síndrome de X frágil.
Andreas Fritz
Dr. Med. Introducción del diagnóstico molecular genético para el síndrome de Fragile-X. Nacido el 23 de febrero de 1967 en la Universidad de Heidelberg Prueba de madurez el 11 de junio de 1986 en Backnang Curso de la Facultad de Medicina de la SS 1989 a WS 1996 Física el 3 de abril de 1991 en la Universidad de Heidelberg Estudio clínico en Heidelberg Práctico año en Durban, Sudáfrica (1. terciario) y ruptura (2. terciario) Exámenes estatales el 6 de noviembre de 1996 en la Universidad de Heidelberg Doctorado: Humanacología Doctorado: Prof. Dr. med. Dr. h.c. F. Vogel El síndrome de Fragile-X también se denomina marcadora X-S o síndrome de Martin-B. El síndrome de Martin-B es conocido como un síndrome de retrospectiva mental y, además, se presenta en pacientes con trastornos genéticos de 1:4000 a 1:6000 años de edad, más frecuentemente en pacientes con retrospectiva y retrospectiva mental, más frecuentemente en pacientes con retrospectiva y trastornos mentales de la edad preescolar.
En los estudios citogenéticos se encontró que, bajo ciertas condiciones culturales,
El cromosoma X en Xq27.3 tiene un punto frágil.
No se trata de una ruptura de cromosoma, sino de un punto en el que una alteración
La distribución de los nucleosomas altera la estructura de la cromatina y, por lo tanto, empeora
En las personas que no están afectadas por el FXS, existe un alelo normal (S) que incluye entre 6 y 51 repeticiones de CGG. Si hay entre 52 y 200 repeticiones de CGG, se habla de una premutación (S*) que es inestable a diferencia de la premutación normal (L) con 200 a más de 2.000 repeticiones de CGG.
Es probable que esta proteína tenga la función de unir el ARN y transportarlo desde el núcleo celular hasta los ribosomas. Es probable que esta falta de FMRP cause una alteración en la estructura de las sinapsis y dendrites de las células nerviosas en ciertas áreas del cerebro, lo que podría resultar en el retraso mental y las deficiencias neurológicas de los pacientes.
El diagnóstico clínico de esta enfermedad es extremadamente difícil de hacer, ya que los síntomas son inconstantes y muy variables. Esto es especialmente cierto para las mujeres y los niños, ya que los síntomas aquí son menos pronunciados y poco específicos.
En particular en las mujeres y en las premutaciones, los cromosomas X frágiles
En la actualidad, los resultados de las investigaciones no se han presentado, lo que ha dado lugar a conclusiones negativas erróneas.
El objetivo de este trabajo fue introducir en el Instituto de Genética Humana de la Universidad de Heidelberg un diagnóstico molecular genético sencillo, seguro y económico para el síndrome de Fragile X. Se ha desarrollado un protocolo de PCR que permite identificar a los pacientes masculinos no afectados por FXS. Esto también funciona en pacientes cuyos ambos alelos presentan un número suficientemente diferente de repeticiones de CGG.
A continuación, los productos de PCR se dividen electrophoreticamente, lo que puede ocurrir mediante
Se puede hacer un sello de agarro o un polyacrilamidgel. El ADN es teñido por etidiumbromida o por iones de plata. Después de fotografiar las geles, se puede determinar gráficamente la longitud de los fragmentos, lo que permite el diagnóstico.
Los demás casos se someten a un análisis de Southern Blot, que es más costoso y
El diagnóstico es más lento que el PCR, pero es indispensable para un diagnóstico seguro.
En el caso de los pacientes masculinos, la digestión individual del ADN genómico con
La restricción de la enzima Eco RI. En las mujeres se realiza una doble digestión.
Se utiliza la enzima Ecl XI, sensible a la metilación.
En la actualidad, el sistema de detección y detección de prémutantes es un sistema de detección y detección de prémutantes, especialmente para la identificación de prémutantes.
Si se determina la longitud de los fragmentos de la prémutación, se recomienda una digestión con el
Enzima de restricción Pst I. El ADN digerido es separado mediante ágarosis-gelectrophoresis,
Luego, los fragmentos de ADN se transforman en una membrana de nylon a través de una mancha del sur.
Una sonda de ADN radioactivamente marcada se hibrida con el fragmento de ADN en cuestión. La autoradiografía permite realizar el análisis de longitud del fragmento, de la cual se deriva el diagnóstico. En el caso de los hombres, se espera un fragmento de 5,2 kb tras la digestión de un alelo normal de Eco RI. En las mujeres, después de la digestión doble se encuentra una banda de 2,8 kb, que corresponde a la alelo en el cromosoma X activo, y una banda de 5,2 kb, que representa el alelo en el cromosoma X inactivo. Las mutaciones completas se detectan a partir de la expansión de al menos 600 bp.
Experimentos avanzados para la detección de mutaciones completas mediante PCR o en
El diagnóstico de FXS solo dirigido a través de la PCR encapsulada fue interrumpido debido a que:
En el caso de los pacientes con retraso mental, retraso en el desarrollo o displasia física, el análisis constitucional de los cromosomas no se aplica, sin embargo, a todos los pacientes con retraso mental, retraso en el desarrollo o displasia física para evitar que otros factores cromosómicos ignoren estos síntomas.
En el marco de este trabajo, se examinaron 152 pacientes en total, 99 de los cuales fueron probados citogenéticamente y molecularmente, y en total se pudieron detectar 14 mutaciones completas de FXS y una premutación.
En 96 pacientes, los resultados citogenéticos y moleculares
En un paciente, el análisis del blot del sur permitió una premutación de
Se ha demostrado que no se ha detectado en el ensayo citogenético y que se ha detectado en el resto de pacientes.
En dos casos, el diagnóstico definitivo sólo se pudo hacer mediante métodos genéticos moleculares.
La indicación de diagnóstico de FXS fue obviamente generosa por parte de los médicos que la remitieron. Un análisis detallado de las características clínicas de los pacientes reveló que en muchos casos los pacientes tenían síntomas que no serían muy típicos de FXS. Luego se elaboró una lista de verificación que, sin embargo, requiere un examen clínico exhaustivo antes de ser utilizado como instrumento de diagnóstico clínico de FXS.