Conception et caractérisation des primes et des sondes sur le gène 18A rRNA pour le diagnostic moléculaire des mycoses

Christina Fauser est décédée.

Dr. méd. conception et caractérisation des primes et des sondes sur le gène 18S rRNA pour le diagnostic moléculaire des mycoses né le 12 novembre 1971 à Ulm, test de maturité le 11 juin 1991 cours de la faculté de médecine du WS 1991 au SS 1998 Physique du 30 août 1993 à l'Université de Heidelberg, étude clinique à Heidelberg, année de pratique à Heidelberg/Houston, États-Unis

Le choix des oligonucléotides est sensible et spécifique. Pour délimiter sélectivement le groupe très différent des agents mycotiques parmi un grand nombre d'agents opportunistes, une réaction en chaîne polymérase a été effectuée avec des primes largement actives, spécifiques aux champignons.

Afin de confirmer l'infection fongique et d'assigner le champignon à l'un des principaux groupes de levure, de moisissure, de dermatophytes et de champignons dimorphes, les amplificateurs PCR ont été hybridés avec des oligonucléotides spécifiques aux groupes de champignons.

La comparaison de la sensibilité des procédés moléculaires et conventionnels à l'aide d'un

Série de dilution avec

L'épidémie de Candida

- Les cellules souches ont montré que la preuve de

L'épidémie de Candida

- Les cellules

à l'aide d'un PCR et d'une microscopie à deux décimales, la preuve par un test antigénique

à trois dixièmes

Il y a beaucoup plus de preuves que la preuve culturelle.

avec le premier couple le plus sensible, c'était la limite de détection.

préparés

L'épidémie de Candida

- ADN à 250 exemplaires: détection des cellules fongiques dans le matériel clinique

Il s'est avéré difficile de détecter des cellules fongiques dans de l'eau pure ou du sel de cuisson: l'amplification PCR de l'ADN provenant de cultures fongiques récoltées est possible sans traitement préalable, mais la proportion de cellules qui éclatent spontanément et libèrent de l'ADN est globalement faible (< 1%) et n'est pas toujours suffisante pour la PCR dans de rares champignons et en présence d'inhibiteurs.

contenant du matériel clinique, des tampons d'enzymes et des composants cellulaires de la cellule fongique elle-même

Les inhibiteurs. Lors de la sécrétion des inhibiteurs, l'ADN est perdu, ce qui représente environ 10 fois

Sensitivité

une perte par rapport à un inhibiteur non traité

L'épidémie de Candida

- La suspension

La formalisation nécessaire à l'implantation de tissus dans la paraffine conduit à des connexions entre l'ADN et les protéines qui entraînent une diminution de l'amplification lors de la PCR suivante, qui devient plus importante à mesure que le produit d'amplification est plus grand. Cependant, avec des paires de primaires dont l'amplificateur est inférieur à 200 paires de bases, l'étude a été menée avec succès à l'amplification de l'ADN à partir de myclélules de champignons fixées à la paraffine et incrustées dans la paraffine.

La culture et la microscopie demeurent les méthodes d'or pour le diagnostic de laboratoire, malgré un certain nombre d'avantages de la PCR. Les méthodes immunologiques et moléculaires biologiques sont supérieures aux méthodes de diagnostic de laboratoire conventionnelles dans certains domaines (par exemple, lorsqu'on étudie des matières mortes du champignon dans des blocs de paraffine ou des échantillons de patients contenant peu de cellules fongiques vivantes).