Diseño y caracterización de las primeras y sondas del gen 18A rRNA para el diagnóstico molecular de micosas

Christina Fauser

Dr. med. Diseño y caracterización de primas y sondas en el gen 18S rRNA-gen para el diagnóstico molecular de la micosa Nacido el 12 de noviembre de 1971 en Ulm, prueba de madurez el 11 de junio de 1991 Curso de la Facultad de Medicina de WS 1991 a SS 1998 Física el 30 de agosto de 1993 en la Universidad de Heidelberg, estudio clínico en Heidelberg

Para seleccionar selectivamente entre un gran número de agentes oportunistas el grupo muy desigual de agentes micóticos, se realizó una reacción en cadena de polimerasa con primarios específicos de hongos que son ampliamente activos. Cuatro pares de primarios más detallados en el trabajo resultaron adecuados, ya que 67 especies de hongos y 11 controles amplificaron en gran medida todos los hongos con relevancia médica, pero no se produjeron reacciones cruciales con ADN humano, bacteriano o parásito.

Para confirmar la infección por hongos y asignar a los hongos a uno de los principales grupos de hongos de levadura, moho, dermatófitos y dimórficos, los amplificados de PCR fueron hibridados con oligonucleótidos específicos de grupos de hongos. Los cuatro oligonucleótidos utilizados satisfacían los requisitos de sondas específicas de grupos, ya que cada uno de ellos hibridó con todos los representantes importantes de cada grupo de hongos, pero no con hongos de cada otro grupo de hongos.

La comparación de la sensibilidad de los métodos moleculares y convencionales a partir de una

Serie de dilución con

Cándida

- las células genitales mostraron que la prueba de

Cándida

- Las células

con PCR y microscopía de dos potencias decimales, la detección mediante prueba de antigenos

en tres décimas

La cultura se ha convertido en una forma de reflexión y de reflexión.

con el primer par más sensible fue el límite de detección.

Preparados y preparados

Cándida

-DNA en 250 por ejemplo. La detección de células fúngicas en material clínico

Se ha demostrado que la detección de células fúngicas en agua pura o sal de cocción es difícil: la amplificación PCR de ADN de cultivos de hongos reinos es posible sin tratamiento previo; sin embargo, en general, la proporción de células que explotan espontáneamente y liberan ADN es baja (< 1%) y no siempre es suficiente para la PCR en pocos hongos y en presencia de inhibidores.

Contenido de material clínico, buffer de enzimas y componentes celulares de la propia célula fúngica

Los inhibidores. En la separación de los inhibidores, el ADN se pierde, lo que representa una pérdida de aproximadamente 10 veces mayor que la pérdida de ADN.

Sensibilidad

pérdida frente a un inhibidor libre sin tratamiento

Cándida

- Suspensión

La formalización necesaria para la incorporación de cortes de tejido en parafina conduce a conexiones entre ADN y proteínas que producen un deterioro de la amplificación en la PCR posterior, que se vuelve cada vez más importante a medida que aumenta el producto de amplificación.

Para el diagnóstico de laboratorio, a pesar de una serie de ventajas de la PCR, la cultura y la microscopía siguen siendo los métodos de oro estándar. Los procedimientos inmunológicos y moleculares siguen siendo superiores a los diagnósticos de laboratorio convencionales en algunas áreas (por ejemplo, en el estudio de material fúngico muerto en bloques de parafina o de muestras de pacientes que contienen pocas células fúngicas vivas). Para la aplicación de métodos moleculares en el diagnóstico de rutina, en forma de kits fáciles de manejar, sin embargo, los hasta ahora muy complejos procedimientos de reparación de ADN e inhibidores de separación, que suelen ser inevitables en el procesamiento de material clínico para la PCR, deben simplificarse aún más.