U
NIVERZITA
K
ARLOVA
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
TEL
.
+420 377 593
280
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
FAX
+420 377 593
289
K
ARLOVARSKÁ
48
CHEMIE
@
LFP
.
CUNI
.
CZ
CZ
–
301
66
P
LZEŇ
WWW
.
LFP
.
CUNI
.
CZ
/
BIOCHEMIE
P o okol č. 19Bb01
PROTOKOL O ZKOUŠCE
Číslo p o okolu: 19Bb01
ADHEZE A PROLIFERACE
N
ÁZEV PROJEKTU
: „Tes o ání p oli e ace os eoblas ů na po chu i anu (SV100)“
Z
KUŠEBNÍ METODA
: „Adheze a p oli e ace os eoblas ů na po chu pe ného ma e iálu“
Z
KOUŠENÝ MATERIÁL
: Dodán zada a elem, zo ky popsané znaky A = V4 … oxidace při 40V
B = V4 … oxidace při 40V e m.
C = V6 … oxidace při 60V
D = V6 … oxidace při 60V e m.
E = Ti60… Timplan oxidace při 60V
F = Ti0 … Timplan lep ané kon ola
Č
ÍSLO ZAKÁZKY
: SV100/2018
Z
ADAVATEL
: TIMPLANT s. .o.
V
ÝSLEDEK ZKOUŠKY
: Mezi jedno li ými zo ky exis ují ozdíly i shody u edené p o okolu.
H
ODNOCENÍ VÝSLEDKŮ
: P o ádí se s o náním jedno li ých zo ků. In e p e ace ýsledků p o ádí zada a el.
Výsledky zkoušek se ýkají pouze předmě u zkoušky. Ten o p o okol o zkoušce nenah azuje sch álení
zd a o nického p os ředku. P o okol je možno ep oduko a jen jako celek.
P
OČET STRAN PROTOKOLU
: 4
Z
KOUŠKU PROVEDLI
: Mg . Jana Kolaja Dob á, Ph.D., Mg . Jana D ořáko á, Bc. Jan Ja ů ek
D
ATUM
: 16. 1. 2019 S
CHVÁLIL
: Ing. Václa Babuška, Ph.D.
U
NIVERZITA
K
ARLOVA
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
TEL
.
+420 377 593
280
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
FAX
+420 377 593
289
K
ARLOVARSKÁ
48
CHEMIE
@
LFP
.
CUNI
.
CZ
CZ
–
301
66
P
LZEŇ
WWW
.
LFP
.
CUNI
.
CZ
/
BIOCHEMIE
D
ATUM PŘIJETÍ VZORKŮ
: 10.10.2018
D
ATUM ZAHÁJENÍ ZKOUŠKY
: 3.12.2018
D
ATUM UKONČENÍ ZKOUŠKY
: 14.12.2018
P
OPIS VZORKŮ
: Vzo ky álco i é o p ůmě u 5,0 mm a ýšce 5,0 mm se zá i em na zadní s aně.
P
ODSTATA METODY
: S ano ení buněčné adheze a p oli e ace na zkoumaném zo ku při de ino aných
kul i ačních podmínkách pomocí CCK-8 es u.
Ten o kolo ime ický es je založen na schopnos i
ži ých buněk eduko a p os řednic ím elek ono ého mediá o u ysoce ozpus nou e azolo ou sůl
WST-8 [2-(2-me hoxy-4-ni o enyl)-3-(4-ni o enyl)-5-(2,4-disul o enyl)-2H- e azol sodný] na
o anžo ě zba ený o mazan ozpus ný kul i ačním médiu. Výsledné zaba ení se yhodnocuje
spek o o ome icky při lno é délce 450 nm. Naměřená abso bance je přímo úmě ná množs í ži ých
buněk.
1,2
B
UNĚČNÁ LINIE
: linie lidských os eoblas ů MG-63 (Sigma Ald ich)
P
OUŽITÉ MATERIÁLY A CHEMIKÁLIE
:
Dulbecco's Modi ied Eagle Medium - DMEM (Diagno um)
Penicillin/S ep omycin 100× (Biose a)
L-Glu amine 200 mM (Diagno um)
Fe al Bo ine Se um - FBS (Diagno um)
T ypsin EDTA 10× 0.5% / 0.2% in DPBS (Diagno um)
WST-8
[2-(2-me hoxy-4-ni o enyl)-3-(4-ni o enyl)-5-(2,4-disul o enyl)-2H- e azol sodný]
(Bio ool)
96- jamko é kul i ační des ičky (TPP)
P
OPIS METODY
: Na s e ilizo aný po ch zo ku je nanesena buněčná suspenze a zo ek s buňkami je
kul i o án inkubá o u při eplo ě 37°C a mos éře s 5% CO
2
. Po 2 hodinách je p o eden opa ný
oplach zo ku zajišťující další ůs pouze adhe o aných buněk. Adheze je s ano ena es em CCK-8 a
změřením abso bance. Hodno a abso bance odpo ídá ela i nímu poč u buněk na ma e iálu. Po 48
1
M. Ishiyama, Y. Miyazono, K. Sasamo o, Y. Ohku a and K. Ueno, Talan a, 1997, 44, 1299.
2
H. Tominaga, M. Ishiyama, F. Ohse o, K. Sasamo o, T. Hamamo o, K. Suzuki and M. Wa anabe, Anal. Commun.,1999, 36, 47.
U
NIVERZITA
K
ARLOVA
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
TEL
.
+420 377 593
280
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
FAX
+420 377 593
289
K
ARLOVARSKÁ
48
CHEMIE
@
LFP
.
CUNI
.
CZ
CZ
–
301
66
P
LZEŇ
WWW
.
LFP
.
CUNI
.
CZ
/
BIOCHEMIE
hodinách je p o eden d uhý CCK-8 es a změřena abso bance. Rozdíl mezi zjiš ěnými hodno ami
abso bance yjadřuje p oli e aci buněk.
N
EGATIVNÍ KONTROLA
: CCK-8 es p o edený p o kul i ační médium bez buněk.
P
OZITIVNÍ KONTROLA
: CCK-8 es p o edený p o nanášenou suspenzi buněk kul i o anou na běžné
polys y eno é kul i ační misce za s ejných podmínek jako na s udo aných zo cích.
Z
PRACOVÁNÍ VÝSLEDKŮ
: Výsledky jsou zp aco ány na základě po o nání poč u buněk na po chu
zkoušeného ma e iálu a na běžné polys y eno é kul i ační misce za s ejných podmínek kul i ace.
V
ÝSLEDKY ZKOUŠKY
:
S o nání adheze a p oli e ace linie lidských os eoblas ů MG-63 kul i o aných na
es o aných ma e iálech jako monobiologický es se zo ky pen apliká u. Výsledky jsou yjádřeny
jako a bi á ní jedno ky ycházející ze změřené abso bance. Chybo é úsečky g a u odpo ídají
smě oda né odchylce.
Tabulko ě
Číslo zo ku V4 V4 V6 V6 Ti60 Ti0 plas
Adheze [a b. j.] (p ůmě ) 0,1854 0,2054 0,2474 0,2298 0,3020 0,2312 0,2218
P oli e ace [a b. j.] (p ůmě ) 0,5600 0,6226 0,7376 0,7222 0,6426 0,6964 0,8410
Rozdíl [a b. j.] (p ůmě ) 0,3746 0,4172 0,4902 0,4924 0,3406 0,4652 0,6192
Adheze [a b. j.] (medián) 0,185 0,222 0,244 0,227 0,318 0,239 0,230
P oli e ace [a b. j.] (medián) 0,634 0,678 0,807 0,726 0,639 0,749 0,875
Rozdíl [a b. j.] (medián) 0,449 0,456 0,563 0,499 0,321 0,510 0,645
D snos Ra [µm] 0,142 0,144 0,158 0,151 0,343 0,362 ---
Smáči elnos [°] (p ůmě ) 60,5 72,2 91,0 94,4 101,3 94,3 ---
Smáči elnos [°] (median) 58,5 72,5 91,0 93,0 95,0 92,0 ---
U
NIVERZITA
K
ARLOVA
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
Ú
STAV
L
ÉKAŘSKÉ
C
HEMIE A
B
IOCHEMIE
TEL
.
+420 377 593
280
L
ÉKAŘSKÁ
F
AKULTA V
P
LZNI
FAX
+420 377 593
289
K
ARLOVARSKÁ
48
CHEMIE
@
LFP
.
CUNI
.
CZ
CZ
–
301
66
P
LZEŇ
WWW
.
LFP
.
CUNI
.
CZ
/
BIOCHEMIE
G a icky
K
ONEC PROTOKOLU
V4 V4 V6
V6 Ti60 Ti0
Buňky na i ano ém ma e iálu po 48 hodinách kul i ace. Ba eno k ys alo ou
iole í,
z ě šení 30x.
De
mons ační
o
og a ie
.
