II Wo kshop “Es udio, ap o echamien o y ges ión del agua en e enos e islas olcánicas”
Las Palmas de G an Cana ia, 2015
417
RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS EN BACTERIAS AISLADAS DE MUESTRAS DE
AGUA EN GRAN CANARIA Y SU RELACIÓN CON LA PRESENCIA DE
CONTAMINANTES EMERGENTES
Ma ía Te esa TEJEDOR-JUNCO1, Ma ga i a GONZÁLEZ MARTÍN1, Pablo
LUPIOLA GÓMEZ1, Esme alda ESTÉVEZ2, Ma ía del Ca men CABRERA2 y
Sa ah MONTESDEOCA ESPONDA3
1Depa amen o de Ciencias Clínicas (Mic obiología). Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia.
Apa ado de Co eos 550, 35080 Las Palmas de G an Cana ia, España.
ma ia e esa. ejedo @ulpgc.es ; ma ga i a osa.gonzale[email p o ec ed] ; [email protected]
2 Depa amen o de Física. Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia, 35017 Las Palmas de G an
Cana ia, España, mca men.cab e [email protected]; ees e e[email p o ec ed]
3Depa amen o de Química. Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia, 35017 Las Palmas de G an
Cana ia, España. smon esdeoca@beca ios.ulpgc.es
RESUMEN
Hemos analizado la posible elación en e la p esencia de con aminan es eme gen es en
agua egene ada pa a iego, agua del lixi iado dell suelo y agua sub e ánea y la esis encia
a an ibió icos de las bac e ias aisladas. Se oma on mues as de agua (gale ía, solución de
suelo, pozo y iego). Cada mues a se di idió en dos pa es. Una se cen i ugó y se
esemb ó en di e en es medios. Cincuen a milili os de la segunda pa e se añadie on a
Caldo B ain Hea . En la siemb a di ec a de agua de iego y solución del suelo se de ec a on
nume osas colonias. El c ecimien o en la siemb a di ec a de agua de gale ía ue escaso, y
no hubo c ecimien o cuando se semb ó agua de pozo. Median e en iquecimien o en Caldo
BHI y esiemb a pos e io , se ob u ie on nume osas colonias en odos los medios y
mues as. Encon amos dos géne os de G am posi i os (En e ococcus y S aphylococcus).
La mayo ía de las cepas p esen aba una sensibilidad al a a an ibió icos. En agua de iego se
aisló una cepa de En e ococcus esis en e a odas las quinolonas ensayadas. En e los
bacilos G am nega i os, encon amos di e sos géne os de En e obac e ias y o os géne os
(Vib io y Pseudomonas). Apa ece un ele ado po cen aje de cepas esis en es a la
combinación Amoxicilina + Ácido Cla ulánico. No pa ece habe co elación con la p esencia
de o os con aminan es eme gen es, aunque se ía necesa io analiza un mayo núme o de
mues as.
Palab as cla e: An ibió icos, Resis encia, Con aminan es eme gen es.
ABSTRACT
We ha e analyzed he possible ela ionship be ween he p esence o eme ging
con aminan s in eclaimed i iga ion wa e , soil wa e and g oundwa e and an ibio ic
esis ance o he isola ed bac e ia. Wa e samples we e aken. Each sample was di ided
ISBN: 978-84-938046-4-0
M.T. Tejedo Junco e al. – Resis encia a an ibió icos en bac e ias aisladas de mues as de agua en G an Cana ia …
418
in o wo pa s. One was cen i uged and cul u ed in di e en media. Fi y millili e s o he
second pa was added o B ain Hea B o h. In di ec cul u e o i iga ion wa e and soil
solu ion, nume ous colonies we e de ec ed. When galle y wa e was di ec ly cul u ed, g ow h
was sca ce, and no g ow h was obse ed when well wa e was di ec ly cul u ed. By BHI
b o h en ichmen and subsequen pla ing, nume ous colonies we e ob ained in all media and
samples. We ound wo kinds o G am posi i e (S aphylococcus and En e ococcus). Mos o
he s ains ha e a high sensi i i y o an ibio ics. In i iga ion wa e , an En e ococcus s ain
esis an o all quinolones es ed was isola ed. Among he G am nega i e bacilli, we ound
di e en gene a belonging o En e obac e iaceae and o he gene a (Vib io and
Pseudomonas). A high pe cen age o s ains we e esis an o Amoxicillin + Cla ulanic acid
combina ion. I seems ha he e is no co ela ion among esis ance and he p esence o
eme ging con aminan s, al hough i would be necessa y o analyze a la ge numbe o
samples.
Key wo ds: An ibio ics, Resis ance, Eme ging con aminan s.
INTRODUCCIÓN
Los compues os eme gen es son con aminan es que aún no es án con emplados po la
legislación y cuyos e ec os ad e sos no se conocen con exac i ud (Pe o ic e al., 2004). El
consumo de dis in os compues os conside ados eme gen es, como po ejemplo á macos y
p oduc os de cuidado pe sonal, se si úa en miles de oneladas cada año, inco po ándose a
las aguas medioambien ales po di e sas ías, en e las que des acan las aguas esiduales
que no son adecuadamen e a adas en las es aciones depu ado as (Mon esdeoca-Esponda
e al., 2014a).
En G an Cana ia, la eu ilización de aguas depu adas pa a iego es una p ác ica habi ual
desde hace más de ein a años, dada la escasez de ecu sos híd icos que exis e en la isla
(Ma e o y Palacios, 1996). El p og ama CONSOLIDER-TRAGUA, desa ollado en e 2009 y
2013, ha enido como obje i o en G an Cana ia la e aluación de la a ección al acuí e o de la
eu ilización de aguas egene adas. Los abajos del p og ama incluye on la de e minación
de con aminan es eme gen es en mues as ambien ales de agua de di e sos o ígenes,
cuyos esul ados son obje o de o a comunicación en es e mismo Wo kshop (Mon esdeoca-
Esponda e al, 2014b).
La elación en e di e sos con aminan es eme gen es y la esis encia bac e iana a
an ibió icos ha sido desc i a po di e sos au o es. Pumbwe e al. (2007) demos a on la
elación en e la p esencia de compues os con anillo benceno (como el ibup o eno) y la
apa ición de cepas de Bac e oides mul i esis en es. Po ello, a pa i de los esul ados de
eme gen es ob enidos en la zona de es udio, se plan eó la necesidad de con as a sus
ni eles con la exis encia de bac e ias esis en es a di e sos an imic obianos. Las
de e minaciones ealizadas en es e sen ido son obje o de la p esen e comunicación.
MATERIALES Y MÉTODOS
Ca ac e ización de la zona de mues eo
Como zona de mues eo se seleccionó el acuí e o subyacen e al Campo de Gol de
Bandama, si uado en la Cuenca de Las Go e as, en e los 400 y los 500 m de al u a al NE
de G an Cana ia. El iego del campo de gol se ha ealizado con agua depu ada de la
E.D.A.R. de la ciudad de Las Palmas de G an Cana ia desde 1976 (Figu a 1).
II Wo kshop “Es udio, ap o echamien o y ges ión del agua en e enos e islas olcánicas”
Las Palmas de G an Cana ia, 2015
419
El lujo sub e áneo en la zona de es udio iene luga de cumb e a cos a, siguiendo el
esquema gene al pa a la isla. La piezome ía pe mi e iden i ica la exis encia de un camino
p e e encial po el Ba anco de Las Go e as y de una línea de lujo en e el campo de gol y
dicho ba anco. El ni el piezomé ico se si úa a unos 250 m po debajo del campo de gol y a
unos 100 m del ondo de la Calde a (Es é ez e al., 2012) (Figu a 1).
Figu a 1. Localización del á ea de es udio. Se indican los pun os de mues eo pe enecien es a la ed
de con ol imes al pa a la de e minación de con aminan es eme gen es y la piezome ía de la
Cuenca de Las Go e as.
En la zona se ins aló una ed de con ol que se mues eó imes almen e du an e 2009
pa a la de e minación de con aminan es eme gen es seleccionados (Mon esdeoca-Esponda
e al., 2014b).
La si uación de los pun os de agua sub e ánea pe enecien es a la ed de con ol se
ecoge en la Figu a 1. Se a a de pozos adicionales cana ios, con diáme os en e 2,5 y 3
m, p o undidades en e 15 y 300 m y caudales medios dia ios in e io es a 1 Ls-1. Se ha
mues eado ambién una gale ía de agua de unos 40 m de p o undidad si uada en la pa ed
de la Calde a de Bandama, a unos 60 m po debajo del campo de gol . La gale ía d ena un
acuí e o colgado, con un caudal cons an e de unos 0,05 Ls-1 e in eg a el agua de los
e o nos de iego del campo de gol de Bandama.
M.T. Tejedo Junco e al. – Resis encia a an ibió icos en bac e ias aisladas de mues as de agua en G an Cana ia …
420
Análisis Mic obiológicos
Se oma on cua o mues as de agua: agua de iego, lixi iado del suelo, gale ía de agua y
pozo. El agua de iego se omó di ec amen e en una oma del campo de gol , el lixi iado del
suelo se omó en un lisíme o ins alado en el mismo campo de gol , el agua de la gale ía se
omó de un es anque en que se almacena el agua y el agua de pozo se mues eó después
de un bombeo su icien emen e p olongado pa a e i a el es ancamien o. Las mues as se
conse a on en ne e a y se aslada on al labo a o io an es de cua o ho as. Cada mues a
se di idió en dos pa es. La p ime a se cen i ugó pa a sedimen a los posibles
mic oo ganismos y el sedimen o se semb ó en di e en es medios (Aga B ain-Hea ; Aga
Cled, Aga McConkey, Aga Salmonella-Shigella, Aga con Sal y Mani ol y Aga Ve de
B illan e). Cincuen a milili os de la segunda pa e se añadie on a 50 mL de Caldo B ain-
Hea y se esemb a on pos e io men e en los medios desc i os. Todos los medios se
incuba on a 37ºC du an e 24 ho as.
Se lle ó a cabo la inción de G am. Los cocos G am posi i os se iden i ica on median e
p esencia /ausencia de ca alasa y, si p ocede, de coagulasa. En el caso de los Bacilos G am
nega i os, se lle ó a cabo la p ueba de la oxidasa y se iden i ica on median e los sis emas
API 20E y 20NE (BioMe ieux, F ancia).
El es udio de la sensibilidad a an ibió icos se lle ó a cabo median e an ibiog ama en
medio de Müelle -Hin on. Los an ibió icos u ilizados pa a G am posi i as ue on:
Cip o loxacina (CIP), En o loxacina (ENRO), Le o loxacina (LEVO), No loxacina (NOR),
Penicilina (P), Ampicilina (AM), Vancomicina (VAN) y Teicoplanina (TE). Pa a los Bacilos
G am nega i os, los an ibió icos ensayados ue on: Cip o loxacina, En o loxacina,
Le o loxacina, No loxacina, Ce azidima (CAZ), Ce o axima (CTX), Ce u oxima (CXM) y
Amoxicilina + Ácido Cla ulánico (AMOX/CLAV).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los esul ados de los es udios de iden i icación y sensibilidad a an ibió icos se mues an
en las Tablas 1 y 2.
En la siemb a di ec a se de ec a on nume osas colonias en los di e sos medios pa a el
agua de iego y solución de agua del suelo ( omado en el lisíme o). El c ecimien o en la
siemb a di ec a de agua de gale ía ue escaso, y no hubo c ecimien o en ninguno de los
medios cuando se semb ó agua de pozo. Al ealiza un en iquecimien o en Caldo BHI
du an e 24 ho as, y lle a a cabo una esiemb a pos e io , se obse a on nume osas
colonias en odos los medios y en odas las mues as.
Se aisla on dos géne os de G am posi i os (En e ococcus y S aphylococcus) (Tabla 1).
En gene al p esen an una sensibilidad al a a an ibió icos. Den o de las bac e ias G am
posi i as de in e és clínico aisladas, las cepas R1 y G1 pe enecen al géne o En e ococcus y
las cepas G7, G8 y G9 pe enecen al géne o S aphylococcus. Des aca la p esencia en agua
de iego de una cepa de En e ococcus esis en e a odas las quinolonas ensayadas. Las
es an es cepas bac e ianas no se incluyen inicialmen e en los géne os aislados en
mues as clínicas.
Los bacilos G am nega i os (Tabla 2) se iden i ica on median e los sis emas API 20E y
20NE (BioMe ieux, F ancia). Encon amos di e sos géne os de En e obac e ias (Klebsiella,
En e obac e , E. coli, Ci obac e , P o eus y Se a ia) así como bac e ias pe enecien es a
o as Familias (Vib io y Pseudomonas).
II Wo kshop “Es udio, ap o echamien o y ges ión del agua en e enos e islas olcánicas”
Las Palmas de G an Cana ia, 2015
421
Tabla 1. Es udio de sensibilidad de los bacilos G am posi i os aislados.
Cepa
Géne o
CIP
ENRO
LEVO
NOR
P
AM
VAN
TE
G1
En e ococcus
R
R
S
I
S
S
S
S
G2
NI
S
S
S
I
R
R
S
S
G7
S aphylococcus
S
S
S
S
S
S
S
S
G8
S aphylococcus
S
S
S
S
S
S
S
S
G9
S aphylococcus
S
S
S
S
R
R
S
S
P1
NI
S
S
S
S
R
R
S
S
P2
NI
S
S
S
S
R
R
S
S
R1
En e ococcus
R
R
R
R
S
S
S
S
G = Agua de Gale ía.
L = Agua de Lisíme o.
P = Agua de Pozo.
R = Agua de Riego
S= sensible
R= esis en e
I= in e medio
NI: iden i icación insu icien e con las écnicas empleadas
En cuan o a la sensibilidad a an ibió icos, apa ece un ele ado po cen aje de cepas
esis en es a la combinación Amoxicilina + Ácido Cla ulánico (12 de 18 incluyendo las de
sensibilidad in e media, 66,6%), lo que puede debe se a su uso ecuen e en la población.
Los esul ados de los mues eos de con aminan es eme gen es e ela on la p esencia de
odos los anali os seleccionados en concen aciones en e 15 y 150 ng·L-1, a excepción de la
pe me ina. Los compues os más ecuen emen e encon ados ue on nico ina y ca eína, con
concen aciones de has a 150 ng·L-1 y de mane a cons an e du an e odo el año. A enolol y
pa axan ina ambién ue on de ec ados en odos los mues eos pe o en meno es
concen aciones. Me amizol y luoxe ina sólo se de ec a on de mane a pun ual
(Mon esdeoca-Esponda e al., 2014b)
O os es udios ealizados en aguas sub e áneas han demos ado la p esencia de
concen aciones ele an es de con aminan es eme gen es en mues as ambien ales de
agua: en e 10 y 100 ng·L-1 (sul onamidas, ime op im, luo oquinolonas, e aciclinas,
mac ólidos y ca eína) (Ba y Aga, 2005), 54 ng·L-1 (quinolonas y penicilinas) (Pozo e al.,
2006) y en e 46 y 215 ng·L-1 (sul onamidas) (Ba e al., 2006). Es é ez e al., 2012
p ocedie on en es a misma zona de es udio a la de e minación de 183 compues os en agua
de iego egene ada y agua sub e ánea de la zona, de los que se de ec a on un 43%: 42
p oduc os a macéu icos, 20 pes icidas, 12 hid oca bu os polia omá icos, 2 olá iles
o gánicos y 2 e a dan es de llama. Los compues os más ecuen es ue on ca eína,
nico ina, clo pi i os e il, luo eno, enan eno y pi eno.

M.T. Tejedo Junco e al. – Resis encia a an ibió icos en bac e ias aisladas de mues as de agua en G an Cana ia …
422
Tabla 2. Es udio de sensibilidad de los bacilos G am nega i os aislados.
Cepa
Especie
CIP
ENRO
LEVO
NOR
CAZ
CTX
CXM
AMOX/
CLAV
G3
Pseudomonas
(Fla ibac e ium)
o yzihabi ans
S
S
S
S
S
S
R
S
G4
Esche ichia coli
S
S
S
S
S
S
S
S
G5
Klebsiella pneumoniae
subsp. pneumoniae
S
S
S
S
S
S
S
S
G6
En e obac e sakazakii
S
S
S
S
S
S
S
R
L1
Pseudomonas
ae uginosa
S
R
S
S
S
I
R
R
L2
P o eus mi abilis
S
R
S
S
S
I
R
R
L3
Ci obac e eundii
S
S
S
S
S
S
S
R
L4
Se a ia ma cescens
S
S
S
S
S
S
R
R
L5
Pseudomonas
ae uginosa
S
R
S
S
S
I
R
R
L6
Ci obac e eundii
S
S
S
S
S
S
S
R
P3
Vib io me schniko ii
S
R
S
I
S
S
S
R
P4
Esche ichia coli
S
R
S
I
S
S
S
R
P5
Vib io me schniko ii
I
R
S
I
S
S
S
R
R2
Pseudomonas
ae uginosa
S
R
S
S
S
I
R
I
R3
Klebsiella oxy oca
I
I
S
S
S
I
I
I
R4
Klebsiella o ni hinoly ica
S
S
S
S
S
I
S
S
R5
En e obac e sakazakii
S
S
S
S
S
S
S
S
R6
BNF
S
S
S
S
S
S
S
S
G = Agua de Gale ía.
L = Agua de Lisíme o.
P = Agua de Pozo.
R = Agua de Riego
S= sensible
R= esis en e
I= in e medio
BNF: bacilo no e men ado , iden i icación insu icien e con las écnicas empleadas
En los es udios ealizados en la zona (Es é ez e al., 2012; Mon esdeoca-Esponda e al.,
2014b), se indica que no es posible es ablece un o igen uní oco de los con aminan es
eme gen es en el acuí e o a pa i de la eu ilización de aguas egene adas, oda ez que las
aguas sub e áneas in eg an aguas p oceden es de a ios o ígenes, como las osas sép icas
si uadas a lo la go del ba anco, las o u as en la ed de saneamien o y los e o nos de iego
con aguas egene adas en pequeñas explo aciones ag ícolas de la zona. No se ha
obse ado co elación en e la p esencia de con aminan es eme gen es y esis encia a
an ibió icos. Sin emba go, conside amos des acable la p esencia de En e ococcus
II Wo kshop “Es udio, ap o echamien o y ges ión del agua en e enos e islas olcánicas”
Las Palmas de G an Cana ia, 2015
423
esis en es a quinolonas en mues as ambien ales de agua así como el ele ado núme o (12
de 18) de Bacilos G am nega i os esis en es a Amoxicilina + ácido Cla ulánico.
AGRADECIMIENTOS
Es e abajo se enma ca en el P og ama CONSOLIDER-TRAGUA (CSD2006-00044) y ha
sido inanciado en pa e po las Redes de Excelencia de la ULPGC a a és de la Acción
Incipien e “P esencia de con aminan es eme gen es en aguas egene adas y sub e áneas
de la isla de g an cana ia y su elación con la esis encia bac e iana. Taxonomia/clasi icación
de aguas usando edes neu onales a i iciales”. Se ag adece su apoyo al Real Club de Gol
de Las Palmas y a los p opie a ios de los pozos y la gale ía.
REFERENCIAS
Ba , A.L. y Aga, D.S. (2005). Simul aneous analysis o mul iple classes o an ibio ics by ion ap
LC/MS/MS o assessing su ace wa e and g oundwa e con amina ion. Analy ical Chemis y 77:
2940-2947.
Ba , A.L.; Snow, D.D. y Aga, D.S. (2006). Occu ence o sul onamide an imic obials in p i a e wa e
wells in Washing on Coun y, Idaho, USA. Chemosphe e, 64: 1963-1971.
Es é ez, E.; Cab e a, M.C.; Molina-Díaz, A.; Robles-Molina, J. y Palacios-Díaz, M.P. (2012).
Sc eening o eme ging con aminan s and p io i y subs ances (2008/105/EC) in eclaimed wa e o
i iga ion and g oundwa e in a olcanic aqui e (G an Cana ia, Cana y Islands, Spain). Science o
he To al en i onmen , 433, 538-546.
Ma e o, A. y Palacios, M.P. (1996).Depu ación y eu ilización de aguas en G an Cana ia. Ed.
Conso cio Insula de Ap o echamien o de Aguas Depu adas de G an Cana ia, Las Palmas de
G an Cana ia, 55 pp.
Mon esdeoca-Esponda, S.; Mahugo-San ana, C.; Sosa-Fe e a, Z. y San ana-Rod íguez, J.J. (2014).
A dispe si e liquid–liquid micella mic oex ac ion o he de e mina ion o pha maceu ical
compounds in was ewa e s using ul a-high-pe o mace liquid ch oma og aphy wi h DAD de ec ion.
Biomedical Ch oma og aphy, (wileyonlinelib a y.com) DOI 10.1002/bmc.3282.
Mon esdeoca-Esponda, S.; Es é ez, E.; Cab e a, M.C.; Sosa-Fe e a, Z. y San ana-Rod íguez, J.J.
(2014). De e minación de con aminan es eme gen es en aguas sub e áneas del No es e de G an
Cana ia.II Wo kshop "Es udio, ap o echamien o y ges ión del agua en e enos e islas olcánicas"
(en p ensa)
Pe o ic l a a ope de lda y a cel Endoc ine dis up ing compounds
and o he eme ging con aminan s in he en i onmen : A su ey on new moni o ing s a egies and
occu ence da a. Analy ical and Bioanaly ical Chemis y 378: 549-562.
Pozo, O.J.; Gue e o, C.; Sancho, J.V.; Ibáñez, M.; Pi a ch, E.; Hogendoo n, E. y He nández, F.
(2006). E icien app oach o he eliable quan i ica ion and con i ma ion o an ibio ics in wa e
using on-line solid-phase ex ac ion liquid ch oma og aphy/ andem mass spec ome y. Jou nal o
Ch oma og aphy A 1103: 83-93.
Pumbwe L., Skilbeck C.A. y Wexle H.M. (2007). Induc ion o mul iple an ibio ic esis ance in
Bac e oides agilis by benzene and benzene-de i ed ac i e compounds o commonly used
analgesics, an isep ics and cleaning agen s. Jou nal o An imic obial Chemo he apy 60, 1288–
1297.