Regeneración pulpar: revisión sistemática

REGENERACIÓN PULPAR: REVISIÓN SISTEMÁTICA TRABAJO FIN DE MASTER EN CIENCIAS ODONTOLÓGICAS María del Carmen Jiménez Sánchez Curso 2013-14 UNIVERSIDAD DE SEVILLA FACULTAD DE ODONTOLOGÍA Departamento de Estomatología 2 JUAN JOSÉ SEGURA EGEA, Catedrático de Patología y Terapéutica Dental del Departamento de Estomatología de la Universidad de Sevilla, HACE CONSTAR que: Dª María del Carmen Jiménez Sánchez, Licenciada en Odontología por la Universidad de Sevilla, ha realizado bajo su tutela y dirección el Trabajo titulado “REGENERACIÓN PULPAR: REVISIÓN SISTEMÁTICA”, como trabajo Final del Máster en Ciencias Odontológicas. Sevilla, 20 de mayo de 2014 3 AGRADECIMIENTOS En primer lugar, comienzo por dar mi agradecimiento a mi director, el Dr. Juan José Segura Egea, Director del Máster de Endodoncia de la Universidad de Sevilla, por permitirme trabajar con él, por su total disponibilidad siempre que lo he necesitado, su continuo apoyo y su infinita confianza depositada en mí, por su tiempo y dedicación. Muchas gracias por todo, ha sido un verdadero placer trabajar con usted. A mi madre y mi hermana mayor, por todo el apoyo y por estar a mi lado de manera incondicional, siempre creyendo en mí pase lo que pase. Gracias por ser mi ejemplo a seguir. A mi amiga, colega, mi confidente… a una parte de mí como lo es María Murillo con la que me embarqué en esta locura, por todo su apoyo, su cariño, por estar siempre a mi lado, en definitiva, por entenderme mejor que nadie. A Jénifer Martín y Lizett Castellanos por todos sus consejos y su continua disponibilidad para ayudarnos en todo aquello que ha podido. A Jaime por considerarme siempre la mejor, por animarme como nadie más lo puede conseguir, simplemente por ser como es, por ello que sea el hombre de mi vida. En definitiva, a todo aquel que me haya ayudado en este comienzo. 4 ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN 1.1.- COMPLEJO DENTINO-PULPAR……………………………………….. 9 1.1.1.- ODONTOGÉNESIS…………………………………………………….. 9 1.1.2.- HISTOLOGÍA………………………………………………………….11 1.1.2.1.- Céluas…………………………………………………………..12 1.1.2.2.- Sustancia fundamental de la pulpa dental …………………18 1.1.2.3.- Fibras de la pulpa dental……………………………………..19 1.1.2.4.- Vascularización de la pulpa dental…………………………..20 1.1.2.5.- Irrigación linfática de la pulpa dental………………………...21 1.1.2.6.- Inervación de la pulpa dental…………………………………21 1.1.3.- FUNCIONES DE LA PULPA DENTAL……………………………..23 1.1.4.- MODIFICACIONES DE LA PULPA DENTAL……………………..24 1.2.- PATOLOGÍA PULPO-PERIAPICAL……………………………………...24 1.2.1.- ETIOPATOGENIA…………………………………………………….24 1.2.2.- PULPITIS………………………………………………………………27 1.2.3.- NECROSIS……………………………………………………………35 1.2.4.- PERIODONTITIS PERIAPICAL……………………………………..37 1.2.5.- TRATAMIENTOS DE LAS PATOLOGÍA DENTARIAS…………..39 5 2.-ENDODONCIA REGENERATIVA 2.1.- INTRODUCCIÓN…………………………………………………………...50 2.2.- CONCEPTO DE REGENERACIÓN……………………………………....52 2.3.- BASES BIOLÓGICAS DE LA REGENERACIÓN PULPAR…………....53 2.4.- INDICACIONES…………………………………………………………….58 2.5.- TRIADA DE LA INGENIERÍA DE TEJIDOS……………………………..59 2.5.1.- Células Madre…………………………………………………………59 2.5.2.- Factores de crecimiento o moléculas señalizadoras………………70 2.5.3.- Andamiaje (scaffolds)…………………………………………………77 2.6.- TÉCNICA DE REGENERACIÓN………………………………………....82 2.7.- RESULTADOS HISTOLÓGICOS DE LA TÉCNICA……………………92 3.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA………………………………………93 4.- OBJETIVOS…………………………………………………………………….96 5.- MATERIAL Y MÉTODOS……………………………………………………..99 6.- RESULTADOS………………………………………………………………...102 Células madre pulpares Factores de crecimiento Scaffolds Desinfección intracanal Materiales dentales Marcadores de superficie celular 7.- CONCLUSIONES…………………………………………………………….126 8.- BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………128 6 1.- INTRODUCCIÓN 7 1.-INTRODUCCIÓN El término de endodoncia fue definido por Canalda como la parte de la odontología que estudia la morfología, estructura, fisiología y patología de la pulpa dental y de los tejidos perirradicular 1 . La endodoncia estudia las enfermedades del órgano dentino-pulpar así como la consecuente afección de los tejidos periodontales circundantes. Siendo la misma uno de los tratamientos más requeridos en clínica, ésta consiste en la remoción del tejido pulpar infectado y/o necrótico mediante el desbridamiento mecánico y desinfección química del sistema de conductos, y posterior obturación y sellado del espacio pulpar con un material similar al caucho artificial, conocido como gutapercha, siendo así su principal objetivo el de prevenir y curar la periodontitis apical. A pesar de su demostrado éxito clínico, los dientes tratados con endodoncia se convierten en dientes desvitalizados, frágiles y susceptibles a la fractura postoperatoria debido a la pérdida de la humedad y presión intersticial proporcionada por la pulpa. Otras complicaciones pueden ser, las reinfecciones debidas a filtración coronal o microfiltración, donde la presencia de una pulpa vital proporcionaría una defensa biológica al mantenerse así la presión intersticial disuadiendo, por lo tanto, estas invasiones. Además, la pérdida de la vitalidad de la pulpa en un diente permanente joven hace que finalice la formación de la dentina y la subsiguiente inmaduración del ápice dental 2 . 8 Por lo tanto, las investigaciones actuales en endodoncia deben ampliar su enfoque para la realización y el establecimiento de métodos más eficaces, fiables y seguros que las terapias actuales 3 . Con los recientes avances en la tecnología de la ingeniería de tejidos se ha creado un creciente interés en el desarrollo de procedimientos de endodoncia regenerativas. La regeneración del complejo dentino-pulpar podría permitir la sustitución natural de las estructuras dentales dañadas o faltantes 4 , mediante la extracción de tejidos de la pulpa enferma / necrótico y reemplazo por tejido pulpar regenerado para revitalizar así los dientes. El objetivo final de la terapia pulpar regenerativa es reconstituir la normal continuidad del tejido en la frontera de pulpa -dentina mediante la regulación de los procesos específicos de dentinogénesis terciaria3. Por lo tanto, la regeneración de tejidos afectados de forma irreversible avanza hacia convertirse en una realidad, mejorando así la comprensión de la cicatrización de heridas junto con los últimos avances en biomateriales en la ciencia y biología de células madre, las cuales ayudan a restaurar la capacidad de regeneración de nuestros pacientes3. Debido al volumen prolífico de la literatura científica en este campo, el mismo es esencial para llegar a una reflexión crítica y resumen de todo lo que se ha escrito hasta la fecha, con el fin de entender la base de los avances actuales y las consiguientes líneas futuras de la terapia. En este trabajo, se va a intentar proporcionar una cobertura científica de los más recientes avances moleculares descritos en el campo de la regeneración por medio de la terapia de células madre 5 . 9 Antes de adentrarnos en el desarrollo sobre las últimas investigaciones en las técnicas regenerativas, se procederá a realizar un breve repaso de la histología y fisiología pulpar, ya que es esencial llevar a cabo a priori un análisis para poder comprender así el desarrollo de las diferentes estructuras dentales 6 . 1.1.- COMPLEJO DENTINO-PULPAR 1.1.1.- ODONTOGÉNESIS La odontogénesis comienza en torno a la quinta semana de desarrollo intrauterino continuándose hasta el término de la sustitución de todos los dientes deciduos por sus análogos definitivos6. Las principales estructuras dentales derivan del ectomesénquima constituido por las células de la cresta neural 7 .Las células de la cresta neural migran desde el pliegue neural hasta encontrar la membrana bucofaríngea, la cual ha desarrollado una prolongación de células ectodermales que están en cercanía con el neuroectodermo y constituyen el ectodermo del estomodeo o cavidad oral primitiva. Las células mesenquimales inducidas siguen migrando hacia los arcos faríngeos, donde junto con las células del mesodermo paraxial, forman los tejidos conectivos 8 . Este ectomesénquima particularmente localizado dentro de los arcos faríngeos y debajo del ectodermo oral, sufre procesos de inducción epitelio/mesenquimal que inicia la formación de los dientes. El desarrollo dental comienza cuando el epitelio oral hace que el ectomesénquima derivado de las 16 Son células presentadoras de antígenos y presentan complejos de MHC de clase II en su superficie celular. Desempeñan una función central en la inducción de la inmunidad dependiente de las células T9. V) Linfocitos Se ha demostrado que en la pulpa sana solamente posee linfocitos de tipo T (T8 supresores), encontrándose los linfocitos B normalmente ausentes. Los linfocitos T participan en la respuesta inmunológica inicial. Estas células se activan mediante mecanismos inmunológicos ante la presencia de antígenos, los cuales liberan linfoquinas que provocan vasodilatación pulpar. La interacción entre ambos tipos de linfocitos facilitaría la diferenciación de linfocitos B en células plasmáticas, las cuales son la que elaboran anticuerpos específicos contra los antígenos que han propiciado la respuesta inflamatoria 15 . VI) Células mesenquimáticas indiferenciadas (Células madre) Son células a partir de las cuales se diferencian otras células conjuntivas de la pulpa. Dependiendo de la estimulación pueden originar odontoblastos, fibroblastos o incluso, osteoblastos o cementoblastos, por lo que constituyen una población residente de células pluripotentes capaces de diferenciarse en una variedad de células según se requiera para el mantenimiento y reparación del tejido. Las células progenitoras son críticas, por tanto, son un objetivo fundamental al considerar el diseño de materiales bioactivos destinados a estimular la regeneración de la pulpa dental11. Se sitúan en el área celular y central de la pulpa y están en relación con los vasos sanguíneos (pericitos). Son células poliédricas grandes con un 17 núcleo grande y central, con abundante citoplasma y prolongaciones citoplasmáticas. Al aumentar la edad pulpar, su número disminuye llevando a una reducción del potencial regenerativo de la pulpa10. VII) Mastocitos Derivan de los polinucleares basófilos sanguíneos. Son células que poseen en su citoplasma gránulos con histamina y heparina, un anticoagulante. Al estar cerca del músculo liso vascular, la histamina hace que se provoque una vasodilatación, aumentando la permeabilidad del vaso y permitiendo el escape de líquido y leucocitos. Se encuentran ampliamente distribuidos por los tejidos conectivos. Se suelen localizar en tejidos con inflamación crónica, aunque también se describen en pulpas normales1. Farnoush A (1984) señala que existen muchas controversias sobre la presencia de mastocitos en pulpas dentales. El autor realizó un estudio donde fueron observadas las pulpas dentales de dientes permanentes libres de caries y dientes primarios con caries, los resultados indicaron que los mastocitos están presentes en pulpas tanto inflamadas como no inflamadas. Los mastocitos provenientes de pulpas inflamadas mostraron signos de desgranulación con gránulos por fuera de la membrana celular. Como se ha descrito se trata de un entorno complejo y dinámico que se conserva en un delicado equilibrio, con los odontoblastos manteniendo los tejidos mineralizados y los demás tipos celulares posicionados de manera efectiva para apoyar la actividad de los mismos11. 18 1.1.2.2.- Sustancia Fundamental de la Pulpa Dental El compartimento extracelular de la pulpa o matriz está compuesto por fibras colágenas y sustancia fundamental. La sustancia fundamental o matriz extracelular amorfa es la materia que se encuentra entre las células y las fibras del tejido conjuntivo y está constituida, principalmente, por proteoglicanos o glucosaminoglucanos, producidos y secretados por los fibroblastos. Los GAG más significativos presentes en la pulpa son condroitin 4 y 6 sulfato (60%), dermatán sulfato (34%), heparán sulfato (2%) y ácido hialurónico (2%). Estas moléculas sirven de soporte para las células, proporcionan turgencia a los tejidos y median una variedad de interacciones celulares9. La fibronectina es una glucoproteína de superficie que junto al colágeno forma una red fibrilar integrada con influencia sobre la adhesión, movilidad, crecimiento y diferenciación de las células. En la sustancia fundamental del tejido pulpar en dientes recién erupcionados, el GAG predominante es el dermatán sulfato, en cambio, en la pulpas maduras predomina el ácido hialurónico y, en menor proporción, se encuentran el dermatan sulfato y el condroitín sulfato. El contenido de proteoglucanos disminuye aproximadamente un 50% con la erupción del diente9. Es de consistencia similar a un gel y constituye la mayor parte del órgano pulpar. Su función es soportar los componentes celulares y actuar como medio de transporte de nutrientes desde los vasos a las células, y de metabolitos en sentido inverso10. Debido a su contenido en polisacáridos polianiónicos, la 19 sustancia fundamental es la causante de las propiedades que le permiten la retención de agua9. La degradación de la sustancia fundamental puede producirse en ciertas lesiones inflamatorias, caracterizadas por una concentración elevada de enzimas lisosómicas. Las vías de la inflamación y la infección están fuertemente influidas por el estado de polimerización de los componentes de la sustancia fundamental9. 1.1.2.3.- Fibras de la Pulpa Dental La pulpa contiene 3 tipos de fibras: colágenas, elásticas y de reticulina. Todas ellas son sintetizadas por los fibroblastos y, aunque existen importantes diferencias en su composición química, todas contienen una proteína peculiar: el colágeno. Las fibras que encontramos en la pulpa son de colágeno tipo I (60%) y III (40%). Este conjunto de fibras aumenta con la edad, organizándose en haces fibrosos. La mayor concentración de colágeno se observa en la zona más apical, observándose también haces de fibras colágenas formando una vaina alrededor de los nervios de la pulpa. Otras fibras presentes en la pulpa dental son las fibras reticulares, siendo las mismas más frecuentes en la pulpa de dientes jóvenes. Están formadas por delgadas fibrillas de colágeno tipo III asociadas a fibronectina. Las fibras reticulares son fibras muy finas que se distribuyen de forma abundante en el tejido mesenquimático de la papila dental. Estas fibras se disponen al azar en el tejido pulpar, excepto a nivel de la región odontoblástica donde se insinúan 20 entre las células y constituyen el plexo de Von Korff. Además puede aumentar el diámetro con la edad, pero en menor proporción que las colágenas. Por último, las fibras elásticas son muy escasas en el tejido pulpar y se encuentran localizadas exclusivamente en las delgadas paredes de los vasos sanguíneos y su principal componente es la elastina15. La pulpa dental también contiene fibronectina. Ésta se distribuye por la pulpa con un patrón reticular (con mayor densidad en las paredes vasculares) y a veces se encuentra formando pequeños filamentos no estriados entre las fibras de colágeno de mayor tamaño10. 1.1.2.4.- Vascularización de la Pulpa Dental Los vasos sanguíneos penetran en la pulpa por los forámenes apicales principales y accesorios. Las arteriolas de unas 150 μ de diámetro entran en el diente junto a los haces nerviosos simpáticos y sensitivos. Estas arteriolas forman en el centro de la pulpa un amplio plexo del que salen vasos de menor calibre hacia la periferia, formando el plexo capilar subdentinoblástico. Algunos capilares pueden extenderse entre los odontoblastos y llegar a la predentina. En la periferia de los capilares se sitúan en intervalos irregulares las células de Rouget o “pericitos” formando una vaina alrededor del endotelio de los vasos cuya función se cree contráctil influyendo en el tamaño de la luz vascular. 21 El sistema eferente está formado por un sistema de vénulas con un diámetro similar a las arteriolas pero con paredes más delgadas y con menos capa muscular. Se observan anastomosis arteriovenosas, siendo estos puntos de contacto entre la sangre arterial y venosa que sirven para desviar sangre de la circulación capilar1 y 10. 1.1.2.5.- Irrigación Linfática de la Pulpa Dental Los vasos linfáticos de la pulpa se originan en la región coronaria y son vasos pequeños de paredes delgadas con zonas abiertas en sus paredes que son aperturas entre sus células endoteliales y comunican la luz del vaso con el tejido conjuntivo vecino. Los vasos linfáticos pequeños se reúnen en uno o dos vasos más grandes que abandonan la pulpa por el foramen apical principal. Todo este sistema circulatorio es el responsable de la presión tisular del compartimento extracelular de la pulpa. El fluido tisular pulpar se extiende dentro de la dentina ocupando los túbulos dentinarios10. 1.1.2.6.- Inervación de la Pulpa Dental Como se ha mencionado, los nervios entran en compañía de los vasos arteriales por el foramen apical principal o por los conductos accesorios. Siguen un trayecto similar y van emitiendo ramas nerviosas según ascienden hacia la zona central de la pulpa formando un plexo nervioso extenso en la zona 22 acelular debajo de los odontoblastos en la porción coronaria del diente. Este plexo nervioso se llama plexo subodontoblástico o plexo de Raschkow. Los plexos son haces de axones mielínicos y amielínicos rodeados por una vaina de tejido conjuntivo. Los axones que entran en la pulpa son aferentes sensoriales del trigémino (son fibras A-delta, que pierden la capa de mielina y constituyen el plexo subdentinoblástico de Raschkow, el plexo dentinoblástico y las ramificaciones en el interior de los túbulos dentinarios, que son las que perciben los movimientos de los fluidos en la dentina) y ramas simpáticas del ganglio cervical superior (son fibras tipo C, simpáticas, responsables del control del flujo vascular). Estas últimas tienen axones amielínicos en estrecha relación con los vasos sanguíneos. Los nervios sensoriales son mielínicos y amielínicos, aumentando el número de axones amielínicos en las zonas más coronales del diente. En el centro de la pulpa se han descrito, entre otras, fibras mielínicas Adelta responsables del bloqueo de la transmisión del dolor en determiandas circunstancias1 y 10. Estas redes de fibras nerviosas proporcionan enervación al tejido, su conexión con el sistema nervioso central, además de proporcionar una salida sensorial11. 23 1.1.3.- FUNCIONES DE LA PULPA DENTAL I) Formativa Esta función no solo se ha de contemplar durante el desarrollo embrionario, sino durante toda la vida con la formación de dentina secundaria fisiológica o en situaciones patológicas de dentina secundaria reparativa o terciaria. II) Nutritiva Corre a cargo de los vasos sanguíneos existentes en la pulpa y que penetran, fundamentalmente, por el foramen apical. Los nutrientes pasan desde los capilares pulpares hacia el líquido intersticial que penetra en los túbulos dentinarios con presión positiva convirtiéndose en el fluido dentinario que llena los túbulos y aporta los nutrientes a la dentina. III) Sensitiva Corresponde a los 3 posibles mecanismos de sensibilidad dentinaria que estimulan las fibras A-delta y a la estimulación de las fibras C de la pulpa. IV) Protección La pulpa realiza la protección mediante la formación de dentina secundaria reparativa o por las células propias del tejido conectivo que responden ante un proceso, infeccioso o no1. 24 1.1.4.- MODIFICACIONES DE LA PULPA DENTAL El tejido pulpar comienza a modificarse desde el mismo momento en que se empieza a formar. Los cambios que se producen son más frecuentes con el paso de los años y, por lo tanto, están íntimamente ligados a los cambios de edad del individuo, ya que la formación continua de dentina secundaria fisiológica y circunstancialmente, de dentina secundaria reparativa o terciaria, condiciona progresivamente la disminución del volumen de la cámara pulpar. Al disminuir el volumen del tejido pulpar, disminuye la irrigación e inervación, lo que facilita la aparición de cuadros de degeneración pulpar o pulposis, la disminución de las células existentes en el tejido conectivo, y condiciona una menor o nula respuesta ante los agentes irritantes10. 1.2.- PATOLOGÍA PULPO-PERIAPICAL 1.2.1.- ETIOPATOGENIA En la etiopatogenia de la inflamación pulpar y periapical intervienen una serie compleja de factores y elementos que interaccionan entre sí. Los estímulos capaces de producir la inflamación y necrosis de la pulpa, así como sus complicaciones periapicales, son múltiples, puediéndose clasificar como sigue1: 25 I) Bacterias Las bacterias son la principal causa de inflamación pulpar y periapical, pudiendo llegar a pulpa por varias vías: - Caries: es lo más habitual. No es preciso que exista comunicación directa, pueden alcanzar la pulpa desplazándose a través de los túbulos dentinarios. - Periodonto: las bacterias pueden proceder de una bolsa periodontal, bien a través de los conductos laterales o desplazándose por los túbulos dentinarios cuando existe reabsorción de cemento. - Traumatismo: cuando la pulpa queda expuesta o a través de los túbulos dentinarios. - Filtración marginal en las restauraciones. - Anomalías de desarrollo: defectos acaecidos durante el desarrollo del diente que pueden dejar grietas. - Circulación sanguínea: mediante anacoresis, las bacterias pueden colonizar la pulpa cuando la misma se halla lesionada por un traumatismo o por degeneraciones hísticas. La relación de las bacterias con la inflamación pulpar es evidente desde el clásico estudio de Kakehashi y cols 16 . Cuando las bacterias desarrollan una inflamación en pulpa, y no se realiza un tratamiento precoz, la inflamación se extiende en un tiempo variable dando lugar a la necrosis pulpar. Si las bacterias y sus componentes alcanzan el espacio periodontal a través del foramen apical o conductos secundarios, se 32 Este tipo de pulpitis se asocia con ninguna o muy poca sintomatología, siendo los mismos siempre provocados por algún estímulo (nunca espontáneo), de muy escasa duración y cede al suprimir el estímulo. Su diagnóstico se fundamenta en las pruebas de vitalidad pulpa 24 . La pulpitis irreversible es la inflamación de la pulpa sin capacidad de recuperación, a pesar de que cesen los estímulos externos que la han provocado. Esta inflamación crónica, aparece de forma precoz ya que junto a los mediadores de la destrucción de tejidos se liberan mediadores que estimulan la reparación1. En la inflamación crónica son muy importantes las células mononucleares: linfocitos, células plasmáticas y macrófagos. En la periferia de la zona inflamada se inicia la proliferación de los fibroblastos, los cuales liberan numerosos mediadores. En la zona de la pulpa donde llegan los componentes bacterianos se forma un microabsceso, instaurándose a su alrededor la inflamación crónica 25 . Cuando la enfermedad progresa, son los fibroblastos, células endoteliales, y células inmunes los que se van a ver involucrados 26 . Ya en el estado crónico de la enfermedad, la población de células de PMNs cambia a linfocitos y macrófagos. Después de 3 -5 días, se producen clones de linfocitos y el tejido se infiltra por células inmunocompetentes, en especial los linfocitos T: células T CD8 +, que pueden diferenciarse en células T citotóxicos y las células T CD4 +. También se incluyen diferentes subconjuntos de células T helper (Th) caracterizadas por las diferentes citocinas que producen, principalmente, Th1 y 33 Th2. Principalmente a través de interferón gamma (IFN - C), las células Th1 activan los macrófagos (sistema inmune adaptativo), que luego pueden producir diversos mediadores inflamatorios como la interleuquina - 1 (IL - 1), factor activador de plaquetas, prostaglandinas, leucotrienos. Las células Th2 activan las células B a través de diferentes citoquinas (principalmente IL - 4 , IL - 5 ) y las células B, se diferencian en cualquiera de las células B de memoria o células plasmáticas productoras de anticuerpos (sistema inmune adaptativo humoral). Como resultado de la enfermedad, linfocitos T y B, células plasmáticas, neutrófilos y macrófagos se incrementaron de manera significativa en todos los niveles en el sitio de la lesión. La migración de las células inmunes a través del tejido pulpar y su actividad antimicrobiana pueden causar significativos daños en los tejidos de acogida. Cabe destacar que, durante el proceso de la quimiotaxis de células inmunológicas, proteasas, tales como las metaloproteinasas, son liberadas para combatir las bacterias, además las células inmunes liberan especies reactivas del oxígeno (ROS) y otras enzimas potentes, que pueden causar daños colaterales de células y tejidos. Las señales de los daños producidos en las células del huésped pueden conducir a una mayor exacerbación de la respuesta proinflamatoria26. La existencia de una vía de escape para los exudados pueden retrasar estos fenómenos, pero ésta si no es tratada evolucionará, extendiéndose hacia pulpitis irreversible1. Existen dos formas de pulpitis irreversibles, en función de la presencia o ausencia de síntomas24: pulpitis irreversible asintomática o sintomática. 34 La mayoría de las pulpitis irreversibles se desarrollan de forma asintomática, mediante la propagación de la inflamación crónica a toda la pulpa para terminar así en la necrosis pulpar. La ausencia de los síntomas es posible que se deba a la liberación, por las fibras nerviosas, de neuromoduladores 27 . En la pulpitis irreversible asintomática, como su nombre indica hay ausencia de sintomatología aguda debido a la existencia de una vía de drenaje espontánea del exudado seroso, que normalmente es la caries. El diente no responde a la prueba de frío y tienen una respuesta mediocre a la percusión o palpación. Las imágenes radiográficas no suelen ser significativas28. Clínica e histológicamente, se pueden diferenciar dos formas de pulpitis agudas asintomáticas: hiperplásica y ulcerada. La forma hiperplásica se da en pacientes jóvenes que presentan amplias cavidades pulpares. Se forma una masa granulomatosa rojiza exofítica de consistencia fibrosa e indolora (pólipo pulpar)1. En la forma ulcerada se observa un tejido necrosado en el fondo de la cavidad y tejido de granulación subyacente. Los dientes afectados por estas formas de pulpitis presentan una respuesta disminuida a los estímulos términos. En contraste con la pulpitis irreversible asintomática, la pulpitis sintomática se caracteriza por dolor espontáneo, persistente, pudiendo los síntomas ser duplicados cuando el paciente se somete a la prueba de frío. Se puede desarrollar sensibilidad a la percusión en un estado más avanzado si el proceso inflamatorio ha progresado hacia los tejidos periapicales, lo cual se 35 observa mediante una radiográfica que revela un engrosamiento del ligamento periodontal24 y 28 . Dentro de la pulpitis irreversible sintomática, existen dos formas clínicas: de predominio seroso o purulento. La clínica de la forma de predominio seroso se caracteriza por un dolor intenso, espontáneo, continuo e irradiado. Se incrementa el dolor en decúbito y con el esfuerzo. La estimulación térmica incrementa el dolor, el cual se mantiene durante un tiempo tras la retirada del estímulo. Si ya están afectados los tejidos periapicales, habrá dolor a la percusión y ensanchamiento del ligamento periodontal visible en la radiografía. La pulpitis irreversible sintomática en su forma purulenta se diferencia de la anterior en que el dolor es pulsátil y se calma con la aplicación de frío1. 1.2.3.- NECROSIS PULPAR La necrosis pulpar es "la descomposición séptica o no, del tejido conjuntivo pulpar que cursa con la destrucción del sistema microvascular y linfático, de las células y, en última instancia, de las fibras nerviosas”1. Consiste en el cese de los procesos metabólicos de la pulpa. La necrosis pulpar se produce a partir de una pulpitis irreversible progresiva, la cual se instaurará más lentamente cuanto mejor sea el drenaje espontáneo del exudado inflamatorio, menor sea la virulencia de los microorganismos y la capacidad defensiva del huésped sea efectiva, representada ésta por la 36 resistencia orgánica del paciente y llevada a cabo por mediadores específicos y no específicos de la inflamación. La necrosis pulpar suele comenzar en las regiones más periféricas, subdentinarias, y avanzar en sentido centrípeto hacia el centro de la pulpa. Igualmente, la necrosis suele afectar primero a la pulpa cameral y luego extenderse hacia la pulpa radicular y apical. La necrosis pulpar, desde el punto de vista histopatológico, puede clasificarse en dos tipos: coagulativa y licuefactiva. La necrosis pulpar por coagulación se produce cuando la isquemia tisular genera una coagulación de las proteínas intracelulares. Se caracteriza por la transformación del contenido soluble del tejido pulpar en una sustancia sólida, por lo que también recibe el nombre de caseificación. La necrosis por licuefacción se produce cuando las enzimas proteolíticas convierten el tejido pulpar en una masa blanda o líquida. La salida de pus a través de la cavidad de acceso endodóncico indica la presencia de una necrosis por licuefacción. A la necrosis pulpar le sigue la putrefacción. Los productos finales de la descomposición pulpar son los mismos que generan la descomposición de las proteínas en cualquier otra parte del cuerpo 29 . 37 1.2.4.- PERIODONTITIS PERIAPICAL La relación entre la patología pulpar y la periapical es muy estrecha, ya que a través de los forámenes apicales y conductos laterales, el tejido conjuntivo de la pulpa se comunica con el ligamento periodontal. Esta comunicación permite la propagación de patologías en uno u otro sentido, dado que pulpa y periodonto tienen además de una interconexión anatómica directa, un origen embriológico común. Por tanto, la periodontitis apical es la respuesta defensiva del organismo a la inflamación, necrosis y destrucción de la pulpa dental. Pero la región periapical, a pesar de estar directamente relacionada con la pulpa y poder sufrir las consecuencias de las alteraciones de la misma, también puede sufrir alteraciones propias. Conviene destacar que también pueden producirse en la región periapical de los dientes otras alteraciones patológicas periapicales de naturaleza hiperplásica, metabólica, neoplásica, etc..., que no tienen relaciones patogénicas directas con la pulpa 30 . Ante cualquier agente patógeno, cuyos estímulos superen el límite de tolerancia de la pulpa, se producirá en esta una respuesta inflamatoria y/o degenerativa, que conllevarán un aumento del volumen pulpar y por tanto, una compresión de sus elementos estructurales, lo que determinará la aparición de alteraciones pulpares. Por ello, dependiendo de la gravedad de la irritación, de la duración de la misma y de la respuesta del huésped, la enfermedad periapical variará desde una simple inflamación ligera, hasta lesiones de mayor tamaño, en las que se 38 produce una destrucción extensa de tejido, afectándose incluso el hueso alveolar y apareciendo, por consiguiente, signos radiográficos del daño. Inicialmente, la inflamación periapical aguda es predominantemente serosa y, si no se instaura el tratamiento, se hace purulenta, formándose el llamado absceso apical agudo que puede evolucionar a absceso subperióstico, absceso submucoso y terminar produciendo una celulitis cérvico-facial, cuadro muy grave que antes de la era antibiótica ocasionaba en muchos casos la muerte del paciente afectado. El dolor agudo a nivel del diente afectado, con percusión positiva, junto con el ensanchamiento del espacio periodontal evidente en la radiografía periodontal, son las claves para el diagnóstico de la periodontitis apical aguda. En ocasiones, la inflamación periapical no tratada evoluciona de forma crónica y asintomática, originando bien la formación de tejido de granulación (granuloma apical, periodontitis crónica granulomatosa) o bien desarrollando una inflamación crónica supurativa (absceso apical crónico, periodontitis apical crónica supurativa) con drenaje de la secreción purulenta a través de una fístula. En ambos casos la radiografía periapical del diente afectado muestra una imagen radiolúcida periapical, indicativa de la gran osteolisis provocada por la inflamación. Entre las posibles evoluciones de la inflamación crónica periapical se incluyen también la formación de quistes apicales, la osteoclerosis u osteítis condensante y la anquilosis alveolo-dentaria1. 39 1.2.5.-TRATAMIENTOS DE LAS PATOLOGÍAS DENTARIAS Recubrimiento pulpar indirecto El recubrimiento pulpar indirecto es un procedimiento en el que un material se coloca sobre una capa delgada de dentina cariada remanente que, si se retira, podría exponer a la pulpa en dientes permanentes inmaduros. Una vez la dentina está dañada por caries o traumatismo, la integridad del complejo dentina - pulpar se ve comprometida porque la dentina dañada no puede ser regenerada por los odontoblastos primarios. El recubrimiento pulpar indirecto es uno de los temas más controvertidos en la terapia pulpar vital. Una crítica opinión tradicional de tratamiento de lesiones de caries profundas por la excavación completa o eliminación parcial, indica que la eliminación de todo el vestigio de la dentina infectada de las lesiones cariosas que se acercan a la pulpa no se requiere para que el tratamiento de la caries sea exitoso. Sin embargo, las revisiones sistemáticas de la caries y tratamiento pulpar indican una falta de ensayos clínicos aleatorios para apoyar la eliminación incompleta de la caries aún es inexistente. El recubrimiento pulpar indirecto tiene por objeto proteger los odontoblastos primarios y la pulpa de una lesión mayor. El hidróxido de calcio y el cemento de ionómero de vidriose han utilizado con éxito como agentes del recubrimiento pulpar indirecto, pudiendo causar la liberación de factores de crecimiento de la matriz de dentina. 40 En sentido estricto, la formación de dentina reactiva siguiente al recubrimiento pulpar indirecto no es ni un proceso regenerativo ni de reparación 31 . Recubrimiento pulpar directo El recubrimiento pulpar directo consiste en colocar un material dental directamente sobre una exposición mecánica o traumática de pulpa vital. El tratamiento de una pulpa vital expuesta se lleva a cabo sellando la herida de la pulpa con un material tal como hidróxido de calcio o minerales trióxido agregado (MTA) para facilitar la formación de dentina reparativa y el mantenimiento de una pulpa vital. Hay suficientes ensayos clínicos controlados de alta calidad aleatorizados para evaluar el resultado de la utilización de hidróxido de calcio o MTA como agentes de recubrimiento pulpar directo, aunque en los últimos estudios observacionales aseguran una mayor tasa de éxito utilizando MTA. En el sitio de exposición de la pulpa, los odontoblastos primarios junto con otras células pulpares se destruyen y se inicia la inflamación. Si la infección / inflamación en la pulpa coronal está bajo control, las células residentes van a generar nuevos odontoblastos. La dentinogénesis reparadora requiere el reclutamiento y la diferenciación de células progenitoras / madre en las células de odontoblastos similares, que producen dentina reparadora o la dentina como tejido cicatrizal o la osteodentina como tejido mineralizado. Las células madre postnatales han demostrado ser capaces de diferenciarse en células de odontoblastos mediante la recepción de señales inductivas apropiadas. Los factores de crecimiento, tales como TGF - 1, TGF - 3, BMP - 2 y el IGF - 1, y 41 moléculas bioactivas liberadas de la matriz de dentina y matriz extracelular pueden ser señales inductoras de dicha diferenciación. Es posible que los mismos factores de crecimiento y moléculas bioactivas también estimulen a los nuevos odontoblastos a producir dentina reparadora. Los materiales para llevar a cabo el recubrimiento pulpar, tales como el hidróxido de calcio y el MTA inducen la formación de dentina reparativa muy probablemente a través de un mecanismo indirecto por la liberación de factores de crecimiento de la matriz de dentina. Sin embargo, poco se sabe de la regulación de genes y la activación de factores de transcripción que están implicados en el reclutamiento y la diferenciación de los odontoblastos en la pulpa para producir la matriz de dentina. La dentina reparativa no está formada por odontoblastos primarios sino por los nuevos odontoblastos diferenciados a partir de las células madre pulpares, por lo que dicha dentina no es igual que la dentina primaria constituida en la odontogénesis, por lo tanto, la dentina reparadora es unproceso de reparación y no de regeneración del complejo dentina – pulpa, como su propio nombre indica31. Pulpotomía La pulpotomía es la extirpación quirúrgica de la porción coronal de una pulpa vital como medio de preservar la vitalidad de la porción radicular restante. La pulpa vital radicular infectada restante es generalmente sellada con hidróxido de calcio para fomentar la formación de puentes de dentina. Histológicamente, la naturaleza de un puente de dentina es similar a la dentina reparadora. Se forma el puente de dentina a través del tejido radicular pulpar 48 para que se active un proceso similar al de un coágulo de sangre activando los procesos de cicatrización en la herida quirúrgica. Por lo tanto, los procedimientos de regeneración dental se presentan como un cambio en evolución con un gran futuro en la odontología9. El enfoque del tratamiento de la regeneración de la pulpa dental tiene el potencial para restaurar la vitalidad del diente. En dientes inmaduros, este puede permitir el continuo desarrollo fisiológico normal. La pulpa tiene la capacidad de promover la formación de dentina, lo que aumentaría el grosor de las raíces y la longitud para evitar la fractura y permitiendo también el desarrollo de la dentina coronal. La pulpa vital mantiene la respuesta inmune que le permite resistir la irritación bacteriana futura debida a caries o microfiltración de las restauraciones. Por último, un normal desarrollado radicular en cuanto a la morfología es más apropiado para una terapia endodóntica convencional si el tratamiento futuro así lo requiriese 33 . Otros beneficios de la pulpa incluye la capacidad de reparar los defectos debido a caries y fracturas a través de la dentina terciaria, para proporcionar el riego vascular normal y respuestas sensoriales, y para promover la función normal. Por lo tanto, la regeneración de la pulpa es un resultado del tratamiento ideal para dientes inmaduros con o sin infección preoperatoria35. 49 2.- ENDODONCIA REGENERATIVA 50 2.-ENDODONCIA REGENERATIVA 2.1.- INTRODUCCIÓN Desde una perspectiva biológica, el objetivo de la endodoncia es prevenir o tratar la periodontitis apical, siendo una de las mejores formas de alcanzar dicho objetivo el mantener una pulpa sana en los casos de inflamación pulpar o bien, regenerar el tejido en los casos de necrosis de la pulpa. Es por ello, que se esté manifestando un interés cada vez mayor en la investigación por la regeneración de un complejo pulpo-dentinario sano y funcional9. El reconocimiento de que las partes del cuerpo pueden regenerarse fue por primera vez realizado en el año 330 aC por Aristóteles, cuando el mismo observó que en un lagarto podía crecer de nuevo la punta perdida de su cola. Desde entonces, el estudio de la regeneración ha recorrido un largo camino para encontrar así sus aplicaciones en la medicina regenerativa y la odontología 34 . Los trabajos pioneros que apoyaron el concepto de regeneración de los tejidos dentales se publicaron hace más de 50 años, cuando el Dr. B. W. Hermann describió la aplicación del hidróxido de calcio para el tratamiento de la pulpa dental vital y el profesor Nygaard-ᴓstby evaluó un método de revascularización para restablecer el complejo pulpo-dentinario en un diente permanente con necrosis de la pulpa. La odontología tradicional ha llegado a una fase en la que las tasas de éxito en condiciones óptimas para algunos procedimientos superan el 90% después de 10 años. El desarrollo de nuevos materiales con propiedades 51 mejoradas, una cuidadosa atención a los factores que influyen en la sensibilidad de la técnica de algunos procedimientos, y en general mayor conciencia de los problemas de salud oral entre la población han ayudado a contribuir a estas mejoras en los resultados del tratamiento. No obstante, hay que reconocer que los enfoques más tradicionales simplemente buscan restaurar la integridad estructural, la función y la estética de los dientes no promoviendo los mismos aún la vitalidad biológica de los tejidos (concepto de restauración). Como consecuencia, un diente restaurado puede ser no vital y por lo tanto tener mayor riesgo de daño debido a la ausencia de mecanismos de defensa fisiológica, además de ser incapaz de continuar el desarrollo de la raíz, si todavía es inmaduro. La medicina regenerativa está mostrando un tremendo potencial para la mejora de los resultados de los tratamientos en muchas áreas. Por supuesto, la odontología ha sido pionera de la medicina regenerativa con el uso de agentes, tales como hidróxido de calcio, para promover la curación de heridas en los procedimientos de recubrimiento pulpar, aunque estos enfoques han sido algo empírico debido a una falta de comprensión mecanicista de la acción de estos agentes. Sin embargo, los recientes avances significativos en la biología pulpar están ayudando a abordar la regeneración de tejido vital, y esto ofrece gran margen para la endodoncia 35 . 52 2.2.- CONCEPTO DE REGENERACIÓN Los procedimientos de regeneración pueden ser definidos como procedimientos biológicamente diseñados para remplazar estructuras dañadas, incluyendo dentina y estructuras radiculares, así como las células del complejo dentino-pulpar34. La ingeniería tisular es una ciencia multidisciplinar que tiene como objetivo el desarrollo de las estrategias clínicamente relevantes para la regeneración de un tejido u órgano. Se trata de la identificación de células progenitoras capaces de regenerar los tejidos cuando se siembran en andamios biodegradables y son expuestos a las señales morfogenéticas. La aplicación de los principios de ingeniería de tejidos al desarrollo de los procedimientos de endodoncia regenerativa requiere investigar el correcto ensamblaje espacial de diferentes células madre, factores de crecimiento y armazones para formar un complejo pulpo-dentinario funcional. Una buena comprensión de los eventos biológicos asociados con el desarrollo fisiológico de los dientes es necesaria para apoyar la selección de andamios, células, y moléculas de señalización que imiten a los que participan en el desarrollo del mismo. Si estudiamos el desarrollo del diente, esto nos puede servir de “guía” para entender cómo las células desarrollan la especificidad para formar los tejidos dentales y los exquisitos mecanismos de control, que regulan estos procesos, de tal manera que podamos así reproducirlos. 53 2.3.- BASES BIOLÓGICAS DE LA REGENERACIÓN PULPAR El daño irreversible en los dientes permanentes inmaduros como resultado de la infección nociva o trauma local antes del cierre fisiológico de la estructura apical representa un verdadero desafío clínico. El desarrollo del conducto radicular completo y cierre apical de los dientes permanentes tiene lugar unos 3-3,5 años después de la erupción completa de los dientes. Cuando se produce un trauma o infección, el desarrollo del canal de la raíz se interrumpe y el cierre apical natural no puede tener lugar, lo que plantea más dificultades para realizar procedimientos de endodoncia convencional con éxito. El objetivo final de la curación de la herida producida por la infección o el trauma es restaurar la arquitectura original y la función biológica del tejido lesionado. Aunque los seres humanos están equipados con potentes mecanismos de defensa inmunológica innata y adaptativa, muchos factores intrínsecos y extrínsecos pueden afectar a la cicatrización de heridas. La regeneración completa después de una lesión en los seres humanos puede ocurrir sólo en el feto prenatal dentro de las 24 semanas de gestación. Heridas postnatales, incluyendo pulpitis irreversible o periodontitis apical siempre sanan por reparación o por una combinación de la reparación y regeneración. Reparar es el reemplazo del tejido dañado por tejido diferente, tales como la fibrosis o cicatrización, y por lo general provoca la pérdida de la función biológica del tejido dañado. En contraste, la regeneración es la sustitución del tejido dañado por las mismas células con la restauración de la función biológica 54 de los tejidos heridos. Por lo tanto, la curación de heridas no implica necesariamente la regeneración de tejidos31. Las células somáticas, tales como fibroblastos, macrófagos, cementoblastos y osteoblastos, en la pulpa y tejido periapical tienen un potencial limitado para la regeneración después de la lesión. La cicatrización de heridas requiere el reclutamiento y la diferenciación de las células progenitoras / madre en células somáticas presentes en el tejido. La diferenciación de células madre está regulada por factores intrínsecos y extrínsecos microambientales claves. La infección induce una respuesta inmuno - inflamatoria y la destrucción del tejido, lo que dificulta el potencial de regeneración. Por lo tanto, la prevención, la detección temprana y el tratamiento de la inflamación / infección pulpar y periapical puede mejorarla regeneración y minimizar la reparación de la pulpa y tejidos periapicales después del tratamiento endodóntico. Cualquier tipo de lesiones, incluyendo trauma que induce una reacción inflamatoria se acompaña siempre de al menos alguna formación de tejido cicatrizal en heridas post –natal. Cuando los odontoblastos primarios son destruidos por la caries, traumatismo, insulto mecánico o citotoxicidad, las células madre/ progenitoras en la pulpa dental son capaces de diferenciarse en células de odontoblastos gracias a la estimulación apropiada por moléculas de señalización inductivas, sin embargo, las señales que controlan las células progenitoras / madre a partir de la proliferación y diferenciación durante la curación de heridas no está claro. 55 Las células madre normalmente permanecen en un constante estado de reposo hasta que son estimuladas por las señales desencadenadas por el tejido dañado o de remodelación. La interacción entre las células madre y su nicho es fundamental para el mantenimiento de las propiedades de las células madre, que incluyen la capacidad de auto-renovación y la capacidad de diferenciación en múltiples linajes celulares. Las células se colocan en un nicho perivascular y están listas para viajar a través de la circulación hasta el sitio diana de la lesión del tejido. Una vez que las células madre salen de su nicho hacia su destino, que sería el tejido dañado, las células son dirigidas por factores solubles liberados por el tejido dañado y celular , tales como stromalcell -factor derivado - 1 - CXCR4 y de crecimiento de hepatocitos factoriales -c -met. Las células madre del tejido residente claramente juegan un importante papel en la regeneración de tejidos. Sin embargo, su relativa baja frecuencia y potencial de regeneración limitado en un tejido dado puede no ser suficiente para la regeneración masiva de una lesión tisular severa como puede ser una gran lesión inflamatoria periapical31. Además de la necesidad de diferenciación guiada de células madre en odontoblastos, también hay una necesidad importante de su diferenciación en células de apoyo (por ejemplo, células endoteliales vasculares y células neuronales). El tejido nervioso es fundamental para la regulación funcional de las células implicadas en la regeneración de pulpa. Además la rápida inducción de una respuesta proangiogénico es crucial no sólo como un medio para proporcionar la afluencia necesaria de oxígeno y nutrientes requeridos por las altas demandas metabólicas de las células que participan en la regeneración 56 de tejidos, sino también para permitir las respuestas inmunológicas necesarias para proteger el emergente tejido de la contaminación bacteriana típicamente asociados con el manejo de dientes necróticos. Las células inmunes como los macrófagos que infiltran el tejido requieren la presencia de una red vascular funcional para acceder al tejido regenerado y protegerlo contra las bacterias que posiblemente podrían seguir viables después del tratamiento de dientes necróticos. De hecho, es curioso que el acceso de las células inmunes a la pulpa juegue un mayor papel en el éxito de los dientes tratados con endodoncia necróticas – regenerativos. Además, es a través de los vasos sanguíneos que los sustratos necesarios para la mineralización de la dentina (por ejemplo, el calcio y el fosfato) se ponen a disposición del odontoblastos, lo que quizás explica la frecuente presencia de vasos sanguíneos en las proximidades de la capa de odontoblastos, en particular en la pulpa de participar activamente en los procesos regenerativos. Además, la vascularización es un determinante clave de la heterogeneidad de células mesenquimales en ingeniería de los tejidos dentales, presumiblemente al permitir la contratación de células circulantes para el diente en desarrollo. Por lo tanto, con todos estos datos se demuestra claramente que la pulpa dental tiene la capacidad teórica para regenerar los tejidos mineralizados y funcionales del complejo dentino-pulpar. La capacidad de la pulpa para sintetizar tejido mineralizado reparativo en respuesta a la destrucción de la matriz de dentina es de crítica importancia clínicamente. Se requiere esta matriz para la formación de un puente de dentina entre las restauraciones dentales y dentina que rodea, evitando la continua microfiltración, la 57 reinfección, y el fracaso final de la restauración. En cuanto a la regeneración de tejidos blandos, la diversidad de tipos de células que pueden surgir de las células progenitoras mesenquimales pulpares representa una oportunidad para reparar y restaurar la pulpa dental funcional, incluso en casos en los que cantidades significativas de tejido necrótico han sido extirpadas. En términos clínicos, si hay alguna posibilidad de regenerar los tejidos pulpares, está claro que la lesión debe ser limpiada de cualquier presencia microbiana y la pulpitis debe ser atenuada de manera eficiente, facilitando de este modo el reclutamiento y la diferenciación de las células progenitoras mesenquimales en fenotipos de reparación. La primera batalla es claramente en contra de la presencia de microbios en una lesión de caries. Sin embargo, hay una segunda lucha, igualmente crítica en contra del medio ambiente proinflamatorio en la pulpa creado por estos microbios, que no sólo puede dañar el tejido, sino que también puede interferir en su capacidad de auto – reparación, al disminuir la diferenciación de las células progenitoras mesenquimales11. Para finalizar este apartado, se van a indicar varias áreas que suponen importantes desafíos antes de que la traducción clínica de dicho proceso se pueda realizar, como son: 1.- Identificación de la fuente de células ideales. 2.- Los méritos relativos de las células basados en la regeneración frente a las células libres. 64 FIGURA 1: Marcadores de superficie38. Se han descrito al menos 5 tipos de células madre mesenquimatosas postnatales que dan lugar a células similares a los odontoblastos. Estas células son las siguientes: - Células madre de la pulpa dental (DPSC) - Células madre de los dientes deciduos humanos exfoliados (SHED) - Células madre de la papila apical (SCAP) - Células progenitoras de los folículos dentales (DFPC) - Células madre del ligamento periodontal (PDLSCs) Células madre de la pulpa dental (DPSC) En la pulpa dental de los dientes adultos, existe una población de células por clonación con un alto poder proliferativo. Las células madre de la pulpa dental son células multipotentes que pueden proliferar extensamente, pueden 65 ser de forma segura criopreservadas, poseen propiedades inmunosupresoras y marcadores tales como CD13, CD29, CD44, CD59, CD73, CD90, CD105, CD146 y STRO - 1, pero no expresan CD14, CD24, CD34, CD45, CD19 y HLA –DR. Las DPSCs tienen la capacidad de diferenciarse en células de odontoblastos, osteoblastos, adipocitos, células neuronales, cardiomiocitos, miocitos y condrocitos in vitro38. DPSCs se cree que contribuyen a la formación de dentina reparadora, y parece que se pueden corresponder a poblaciones heterogéneas de células precursoras o representar etapas de diferenciación distintas a lo largo del linaje de odontoblastos. Las células madre de pulpa están implicadas en la reparación pulpar. Sin embargo, la demostración formal de que las células madre pulpares residentes son en realidad las células de formación de dentina reparadora reclutadas en respuesta a la lesión es todavía insuficiente. La hipótesis de que un subconjunto de células madre llevado por la vascularización repone la pulpa después de una lesión no se puede excluir totalmente. Células madre de los dientes deciduos humanos exfoliados (SHED) Como las DPSCs, estas células multipotentes derivan de la pulpa dental y tienen propiedades inmunosupresoras. La morfología de las vertientes, también denominado inmadura, es similar a la de DPSCs, SCAPs y DFPSCs. Tienen mayor índice de proliferación que las células madre mesenquimales de la médula ósea (BMMSCs) y DPSCs y expresan Oct4, CD13, CD29, CD44, CD73, CD90, CD105, CD146 y CD166, pero no expresan CD14, CD34, o 66 CD4538. Las células madre aisladas de tejido de la pulpa de dientes exfoliados son capaces de diferenciarse en una variedad de células, tales como células neuronales, osteoblastos, condrocitos, adipocitos y miocitos. Células madre de la papila apical (SCAP) Estudios recientes han confirmado que las células SCAP expresan marcadores de células madre mesenquimales, incluyendo STRO - 1,CD13, CD29, CD44, CD73,CD106, CD146, CD34, CD105, CD24, CD90, y marcadores de células madre embrionarias, como Nanog y Oct3 / 4, y no expresan CD18, CD34, CD45 y CD150. Las células son negativas para los marcadores de células madre hematopoyéticas, tales como CD45 y CD117 (ckit). Además, en comparación con DPSCs derivados de los mismos dientes en el mismo donante, células SCAP presentan tasas de proliferación mucho más altas y más rápidas, el potencial de mineralización, tienen más STRO - 1 células positivas, un mayor nivel de duplicación de la población y una mayor capacidad en la regeneración dental in vivo; esto puede ser muy significativo para utilizarlas en ingeniería de tejido dental de hueso. Las SCAP son candidatas potenciales como una fuente primaria de odontoblastos en el desarrollo de la raíz del diente, en contraste con DPSCs, cuyo papel parece ser más restringido a su participación en la formación de dentina reparativa 41 . Por lo tanto, un nuevo tipo de células madre se ha descubierto en la papila apical de los dientes inmaduros permanentes de seres humanos. La distinción entre la pulpa dental y la papila apical es quela papila apical 67 representa un tejido precursor para la pulpa radicular. A pesar de estos hallazgos, el miogénico y potencial de diferenciación condrogénica de scaps no se ha determinado38. Células progenitoras de los folículos dentales (DFPC) El folículo dental es un tejido mesenquimatoso que rodea el germen del diente en desarrollo. Las células progenitoras del folículo dental (DFPCs) expresan CD10, CD13, CD29, CD44, CD53, CD59, CD73, CD90 y CD105, y no expresan CD34, CD45, o HLA -DR. Las DFPCs tienen la capacidad de diferenciarse en osteoblastos / cementoblastos, condrocitos y adipocitos. En los hallazgos in vitro sugieren que DPSCs tienen mayor potencial de formación de tejido duro que DFPCs, lo cual podría explicarse por la etapa de desarrollo de gérmenes del diente de los que derivan de estas células. Las células del folículo dental inmortalizadas son capaces de volver a crear un nuevo ligamento periodontal (PDL) después de la implantación in vivo; sin embargo, los tejidos duros, tales como la dentina, el cemento o el hueso no se han identificado después del trasplante de estas células en ratones inmunocomprometidos33. Células madre del ligamento periodontal (PDLSCs) El PDL humano contiene una población de células madre multipotentes postnatales que pueden aislarse. PDLSCs expresan MSC marcadores como CD10, CD13, CD29, CD44, CD59, CD73, CD90 y CD105, y no expresan 68 CD14, CD34, CD45, HLA –DR. Las células madre ligamento periodontal tienen la capacidad de diferenciarse en células similares a cementoblastos y células de formación de colágeno. La formación de nódulos calcificados es menos prominente que la observada con DPSCs y cobertizos. Además, PDLSCs tienen la capacidad de diferenciarse in vitro en adipogénica, osteogénica y células condrogénicas38. El comportamiento de células madre está regulado por un microambiente local, al cual se hace referencia como a ''el nicho de células madre'' que se caracteriza por 3 propiedades esenciales: 1. Un nicho proporciona un espacio anatómico donde el número de células madre es regulado. 2. Es el lugar en el que una célula madre se encarga de controlar el mantenimiento, quiescencia, auto-renovación y reclutamiento hacia la diferenciación, la determinación del destino y la capacidad de regeneración a largo plazo. 3. El nicho influirá en la motilidad celular. En las señas de identidad de un nicho se incluyen la propia célula madre, las células que interactúan directamente con las células madre a través de factores secretados y las moléculas de la superficie celular. El ECM proporciona un apoyo estructural al nicho y permite la difusión de señales químicas y mecánicas. En los dientes, la ubicación y los elementos del presunto nicho que proporciona el entorno fisiológico para las células madre es 69 desconocido. Se ha asumido que existen múltiples nichos en los dientes, pero los marcadores específicos que permiten la identificación precisa de las células madre dentro de la pulpa son desconocidos. Muchos autores plantearon la hipótesis de un origen perivascular de células madre. MSC están asociados con nichos perivasculares y coexpresan muchos marcadores en común con los pericitos. Algunos pericitos se diferencian en células especializadas del mesénquima. Algunos datos sugieren que los pericitos podrían diferenciarse en osteoblastos y las células madre odontogénicos pueden residir en un nicho perivascular. En este contexto, es interesante mencionar que muchas células madre hematopoyéticas y células madre neuronales se localizan cerca la red vascular. Por lo tanto, parece que la distribución de las células madre de tejido no es aleatoria, y dentro de la pulpa dental, hay potencialmente varios nichos distintos de las células madre / progenitoras. Esto implica que las señales deben garantizar susupervivencia y prevenir su diferenciación y manteniendo como respuesta después del daño pulpar. Lo que es desconocido es si es necesario una piscina endógena de células madre asociadas con las células del estroma de apoyo que se moviliza en el sitio de la lesión y / o si la atracción de la migración de células madre es necesario para repoblar un nicho y expandir las células precursoras en la sitio adecuado para la reparación de la dentina. Resumiendo las conclusiones de algunos informes, parece obvio que algunas poblaciones secundarias de la pulpa dental están implicadas en la estimulación de la angiogénesis, la neurogénesis y la regeneración pulpar12. El microambiente también controla el destino de las células progenitoras in vivo. Los datos de este estudio muestran claramente que las células 70 progenitoras de pulpa se diferencian en células odontoblásticos cuando se trasplantan en la pulpa y en otros tipos de células in vitro o cuando se trasplantan en otros sitios en vivo. Esto nos indica que las señales de regeneración que afectan a la diferenciación de células progenitoras están originadas por el medio ambiente local43. También en este estudio obtienen datos que indican claramente que la modificación de las condiciones de cultivo y el entorno local afectan el potencial de destino de las células y la diferenciación. 2.5.2.- Factores de crecimiento/morfogenéticos o moléculas señalizadoras Tras haber llegado a la conclusión después de todo lo anterior descrito de que la dentina tiene una alta capacidad regenerativa, dicha capacidad parece ser debida a la presencia de células progenitoras y señales inductoras de la regeneración de diferentes orígenes. Los factores de crecimiento son un amplio grupo de proteínas que pueden inducir la proliferación y diferenciación, así como la migración celular mediante la unión a receptores en la superficie celular 42 . El simple cambio de la composición de los factores de crecimiento altera por completo la diferenciación de las células, de modo que la misma población puede expresar marcadores de odontoblastos, condrocitos o adipositos, dependiendo de su exposición a distintas combinaciones de factores de crecimiento. Estos resultados resaltan la importancia de los factores de crecimiento para dirigir la diferenciación de estas células. 71 Esto es de vital importancia en los casos de regeneración de dentina - pulpa, que se producen en virtud de lesiones cariosas o traumáticas. Estos eventos conducen a una reacción inflamatoria, que se cree que es el paso inicial de la regeneración de tejidos. Dentro del diente, la regeneración de dentina - pulpa puede tomar varias formas dependiendo del agente causal y la gravedad de la alteración del tejido, variando desde una simple regulación de la actividad sintética de odontoblastos subyacentes, lo que conduce a la regeneración de una capa protectora de dentina reaccionaria, hasta procesos relacionados con lesiones más graves de la dentina - pulpa. Estos últimos, por lo general implican la completa regeneración de dentinapulpa incluyendo no sólo la síntesis de dentina reparativa, sino también la angiogénesis y la inervación. Esta regeneración, parece ser que no sólo depende de la interacción de la dentina con la pulpa, sino también de la interacción entre diferentes células en la pulpa y entre las células progenitoras y otros componentes de la respuesta inmune/ inflamatoria tales como el fragmento de complemento C5a biológicamente activo. Por lo tanto, la regeneración de dentina - pulpa en caso de lesión pulpar requiere la activación y proliferación de células progenitoras, así como su migración y la diferenciación en el sitio de la lesión. Todos estos procesos son orquestados por las moléculas de señalización43. Estas señales pueden ser liberadas después de la disolución ácida de la dentina cariada, así como a partir de fibroblastos de la pulpa y de las células endoteliales en los casos de lesión traumática. Por lo tanto, las lesiones cariosas y traumáticas y las células de la pulpa proporcionan los mediadores necesarios para la regeneración completa del complejo dentino-pulpar 72 incluyendo la secreción de dentina reparativa, la angiogénesis y la inervación. Además, todos los daños a la pulpa dentinaria incluyendo la infección cariosa, las lesiones traumáticas, la aplicación de los materiales de restauración en la pulpa dentinaria y la subsiguiente apoptosis son activadores del conocido sistema del complemento. Esta activación conduce a la producción de varios fragmentos biológicamente activos responsables de las modificaciones vasculares y la atracción de células inmunológicas al sitio de inflamación / lesión. Entre éstos,C5a está involucrado en el reclutamiento de células progenitoras de pulpa, que expresan el receptor de C5a. Por lo tanto, además de la dentina, la pulpa, las células y el plasma deben ser considerados como una fuente adicional de señales de regeneración 43 . La observación de que la dentina es un depósito de señales morfogénicas bioactivas que pueden ser reclutadas según la demanda, representa un verdadero cambio de paradigma porque eleva la dentina a la condición de una fuente morfogenética que permite y orienta los procesos de regeneración y reparación de los tejidos, en lugar de ser simplemente un tejido inerte. Varias líneas de investigación han demostrado que las proteínas derivadas de la dentina son suficientes para la diferenciación odontoblástica. En particular, la degradación intencional de las proteínas de la dentina con hipoclorito de sodio elimina su potencial inductivo. Este hallazgo planteó la posibilidad de que el hipoclorito de sodio podría no ser la solución ideal para la irrigación del conducto radicular en endodoncia regenerativa36 y 46. 73 Proteínas Símbolo Papel potencial en dentinogénesis Papel potencial en ingeniería y regeneración de tejidos de la pulpa dental Proteína moforgenética ósea 2,4,7 BMP-2,-4,-7 BMP-7 media las interacciones epiteliomesenquimal durante la fase de iniciación de odontogénesis y la morfogénesis;experimentos que utilizan BMP-7, BMP-2, y BMP-4 dan lugar dentina inducida y la regeneración in vivo BMP-2 induce la diferenciación de VERTIENTE en las células de la pulpa dental y formación de tejido mineralizado utilizando CEDIP in vivo; BMP-7 induce la regulación de la mineralización dental de células madre de la pulpa in vitro. Sialoproteína ósea BSP BSP estimula la diferenciaciónde las células de la pulpa dental en odontoblastos e induce dentina regenerativa in vivo Incierta Factode unión al núcleo subunidad alfa 1 (factor de transcripción) Cbfa1 Regula interacciones epitelial-mesenquimal durante la morfogénesis e histodiferenciación del órgano epitelial del esmalte, pero desempeña un papel en una etapa específica de la determinación del linaje y terminales de diferenciación de los odontoblastos. Incierta Proteína de la matriz de dentina 1 DMP-1 DMP-1 se expresa en Odontoblastos maduros, juega un importante papel en la mineralización de la dentina, y parece tener una función reguladora en el núcleo. Además, activa lasíntesis de IL-6 e IL-8 a partir de fibroblastos de la pulpa. Induce la formación de matriz organizada similar a la del tejido pulpar, que podría dar lugar a la formación de tejido duro in vivo. Sialofosfoproteínas de la dentina: sialoproteína y fosfoproteína de la dentina. DSPP:DSP Y DPP DSPP es expresada por odontoblastos y se escinde en 2 polipéptidos más pequeños con características fisicoquímicas únicas (DSP y DPP); DSPP es “downregulated” por la escasez de DMP-1 durante la dentinogénesis; DSP está involucrado en interacciones epiteliomesenquimal que son Incierta 80 de liberación lenta para factor de crecimiento transformante beta 1, factor de crecimiento básico de fibroblastos 2 y factor de crecimiento endotelial vascular. Sin embargo, la adición de factores de crecimiento recombinantes en andamios para aplicaciones clínicas es crítica. Por lo tanto, otras opciones deben ser exploradas y podrían estar disponibles en el mismo entorno que deseamos entregar el biomaterial a la dentina del conducto radicular46. En términos generales, los andamios se pueden dividir en: - Fundido: son bastante rígidos y hechos a medida para fines específicos. - Inyectable: geles de baja viscosidad que pueden ser moldeados en el sitio que requiere la regeneración de tejidos44. Ambos tipos de andamios se pueden funcionalizar con señales morfogenéticas. Por lo tanto, el desarrollo de una estrategia para la liberación controlada de estas proteínas es crítico para maximizar sus efectos en períodos de tiempo predeterminados. Al mezclar las proteínas morfogenéticas con andamios inyectable scomo el colágeno o la Puramatrix hidrogel automontaje, es muy difícil de reducir la velocidad de la tasa de degradación de las proteínas. Para solucionar este problema, se han sugerido los polímeros naturales derivados de las algas pardas (por ejemplo, alginatos),que son biocompatibles y presentan una baja inmunogenicidad, los cuales se pueden utilizar en combinación con los andamios inyectables y servir como un '' dispositivo de liberación lenta '' para señales morfogenéticas. El trabajo de muchos investigadores en todo el mundo consiste en identificadar señales morfogenéticas que desempeñan papeles importantes durante el desarrollo de los dientes y que potencialmente pueden ser utilizados 81 terapéuticamente en la regeneración. Tal hallazgo sugiere candidatos de señales morfogenéticas que pueden ser ya sea reclutados en el medio ambiente circundante o entregados localmente con el uso del andamio para dirigir el destino de células madre y optimizar la regeneración guiada del tejido. Los armazones se clasifican en naturales o sintéticos: - Naturales: - Colágeno - Glusosaminoglucanos - Matriz de dentina desmineralizada o nativa - Fibrina - Sintéticos: - Ácido poliláctico (PLA) - Ácido poliglucólico (PGA) - Ácido poliláctico-coglucólico (PLGA) - Poliépsilon caprolactona - Hidroxiapatita/fosfato tricálcico - Biocerámicas - Titanio - Alginato - Variantes del polirtilenglicol (PEG) El plasma rico en plaquetas (PRP) cumple también varios de los criterios para actuar como armazón ya que es un material autólogo, fácil de preparar en el entorno dental, rico en factores de crecimiento, se degrada con el tiempo y forma una matriz de fibrina tridimensional9. 82 2.6.- TÉCNICA DE REGENERACIÓN En la actualidad, la endodoncia clínica utiliza diversos procedimientos que se basan en la capacidad de las células madre para lograr la reparación, por ejemplo, recubrimiento pulpar directo, apicogénesis, apicoformación e incluso la regeneración pulpar. Sin embargo, sistemáticamente, estos procedimientos pueden ser divididos en dos estrategias principales de investigación que impliquen células para la reparación y / o regeneración del tejido dañado. En primer lugar, la vía acelular consiste en la estimulación in situ de células madre y la modulación de su actividad, y como segundo enfoque, la vía celular que consiste en el cultivo de células ex vivo y el uso de las mismas en la ingeniería de tejidos45. El enfoque de la regeneración de células madre de pulpa por el trasplante está afectado por varios problemas, entre ellos la escasez de fuentes de células madre, la cosecha de células y expansión, costos excesivos y trabas regulatorias para su aprobación y la traducción clínica. Además, se ha considerado una tarea difícil de diseñar ya que regenerar toda la pulpa y su producto, la dentina, es muy complicado debido a las siguientes situaciones: 1) Localización anatómica única del tejido de la pulpa encajonado dentro de la dentina que tiene principalmente un orificio apical para permitir la angiogénesis. 2) Diferentes tipos de células (por ejemplo, odontoblastos) en diferentes capas o zonas de inervación; 83 3) La ubicación específica de la dentina que sólo se encuentra periféricamente en el tejido pulpar y la estructura de la dentina altamente organizada con túbulos dentinarios 45 . Tal modalidad de tratamiento no parece ser factible para una enfermedad como la pulpitis, que no es peligrosa para la vida. Por lo tanto, podría ser interesante explorar opciones alternativas al trasplante de células madre 46 . En la búsqueda de opciones alternativas, deben ser considerados enfoques que incluyan en vez del trasplante de células, la participación libre de células de tejido de la pulpa dental. Esta regeneración sin trasplante de células madre es posible en pacientes jóvenes con dientes inmaduros y formación de raíces incompleta. En casos de graves pulpitis o necrosis pulpar con lesiones periapicales, los elementos consistentes del tratamiento regenerativo incluyen lo siguiente: 1. Desinfección del conducto radicular a través de la irrigación. 2. Aplicación de un apósito intracanal, generalmente con pasta triantibiótico. 3. Provocación de sangrado en el conducto radicular por irritación mecánica de la pulpa restante o los tejidos periapicales. 4. Colocación de mineral trióxido agregado en la coagulación de la sangre. La curación y formación completa de la raíz se observa en periodos de 12-24 meses. ¿Cómo se puede explicar la regeneración en estos casos? En el caso de un paciente joven con formación radicular incompleta, la presencia de un nicho de células madre que residen en la papila apical puede ser la respuesta. 84 Durante el desarrollo de la raíz, las células madre que residen en este nicho son responsables de la formación de la dentina de la raíz y de la pulpa y son guiados e instruidos por la vaina radicular epitelial de Hertwig. Con la afluencia de la sangre, las células madre de la papila apical y otras posibles células madre derivadas de la región apical entran en el canal de la raíz, lo que lleva a un enriquecimiento de las células madre 47 . Por lo tanto, el protocolo clínico de regeneración como un enfoque libre de células sin trasplante de las mismas permite contar con la ventaja de las células residentes en los tejidos circundantes46. Los métodos para la regeneración de tejidos in situ dependen de las células endógenas, la estimulación funcional y respuestas tisulares locales. Pero la estimulación in situ de células madre dentales para la reparación /fines regenerativos enfrenta varios problemas. Uno de estos es la presencia de inflamación en los tejidos (tejidos de la pulpa y periapicales), que pueden impedir el potencial de regeneración de las células madre. Los infiltrados inflamatorios formados como reacción a las bacterias se componen de diferentes células inmunes (neutrófilos, linfocitos B y T, macrófagos, etc) y un cóctel de diversos mediadores de la regulación de su acción. Considerando que la inflamación puede ser potencialmente desfavorable en estos casos, los pasos iniciales de la inflamación sí que juegan una parte necesaria en la curación de heridas, incluyendo el reclutamiento de células progenitoras. También se ha demostrado que las MSC están presentes en tejidos inflamados 48 , ya sea en la pulpa o en tejidos periapicales de dientes necróticos infectados. Estas células retienen una cierta capacidad de diferenciación. Por lo tanto, es importante entender cómo las células inmunes y mediadores pueden 85 afectar la función de células madre. Por el contrario, las células madre tienen en sí la capacidad de modular las respuestas inmune e inflamatoria40. Irrigación En las técnicas de regeneración, de forma similar al tratamiento endodóntico convencional, el control microbiano es crucial. Los canales de los dientes inmaduros presentan paredes dentinarias frágiles lo que supone una contraindicación para la instrumentación mecánica; por lo tanto, el desbridamiento químico sigue siendo la principal forma de desinfección. Sin embargo, es importante tener en cuenta que sin la fuerza de fricción aplicada a la pared dentinaria, las biopelículas bacterianas permanecen intactas y son mucho más resistentes a los agentes antimicrobianos que si las mismas son interrumpidas por la acción mecánica. Por lo tanto, una pequeña cantidad de fricción debe ser llevada a cabo con las limas, con la intención no de dar forma a la raíz como en los dientes maduros, sino más bien de crear incursiones a través del biofilm para permitir la máxima permeabilidad de los antimicrobianos. El hipoclorito de sodio (NaOCl) es el agente más utilizado para el desbridamiento químico en procedimientos de endodoncia. Presenta varias características deseables incluyendo excelente eficacia bactericida, la capacidad de disolución del tejido y la lubricación efectiva de los instrumentos de endodoncia. Las dos primeras propiedades beneficiosas son cruciales para la desinfección de los dientes inmaduros, las cuales suelen implicar una mínima o ninguna preparación mecánica. Un estudio evaluó la supervivencia de las células madre de la papila apical (Scaps) cultivadas en un modelo de canal de raíz con diversas 86 combinaciones de agentes químicos comúnmente utilizados. Se encontró que la dentina acondicionada con 17 % de EDTA promovió mayor supervivencia de SCAP, mientras que el uso de 6 % NaOCl tuvo un profundo efecto perjudicial sobre la supervivencia SCAP. Es importante destacar que, el uso de EDTA después de6 % de NaOCl atenúa sus efectos no deseados32. Por lo tanto, la dentina acondicionada con NaOCl en su máxima concentración utilizada en clínica conduce a disminuir en gran medida la supervivencia de células madre y pérdida de la diferenciación celular en odontoblastos. Se realizó un estudio reciente para evaluar si otras concentraciones clínicas utilizadas de NaOCl (6 %, 3 %, y 1,5 %) eran propicias para la supervivencia y diferenciación de células madre (SCAP). Aproximadamente la mitad de las muestras recibieron una segunda irrigación con EDTA al 17%. Se encontró que la dentina acondicionada con NaOCl disminuye la supervivencia y diferenciación de las SCAP de manera dependiente a la concentración. Sin embargo, se encontró que la concentración de 1,5 % de NaOCl tenía efectos mínimos sobre la supervivencia y la diferenciación. Por lo tanto, el NaOCl tiene un profundo efecto en la dentina, disminuyendo la supervivencia de células madre y la diferenciación. Estos efectos pueden ser minimizados mediante el uso de 1,5 % de NaOCl seguido por 17 % de EDTA. Además, también se ha comprobado que el hipoclorito puede afectar al destino de las células madre mediante la alteración química de la composición de la dentina, incluyendo la desnaturalización de factores de crecimiento y moléculas de fijación 49 . 87 Medicación Intracanal Aproximadamente en la mitad de los casos de endodoncia regenerativas publicados han utilizado algún medicamento intracanal. El uso de formulaciones de antibiótico como medicamentos de endodoncia se ha documentado muchas décadas antes del primer informe de revascularización. Una mezcla de antibióticos compuesta por ciprofloxacino, metronidazol y minociclina, ha sido el más ampliamente utilizado. Tras varios estudios se dedujo que la concentración de 100 mg/ml de cada fármaco era suficiente para erradicar por completo las bacterias cultivables de los canales infectados de la raíz in vitro y en muestras clínicas. Sobre la base de esta investigación previa, TAP se utilizó en un procedimiento endodóntico regenerativo por primera vez en 2004. Se convirtió rápidamente en el medicamento intracanal más comúnmente utilizado. El medicamento la podíamos obtener en solución acuosa, solución salina o glicol de propileno, hasta una mezcla espesa y cremosa se formó. Sin embargo, es importante apreciar que cualquier agente farmacológico tiene una ventana terapéutica que varía de una concentración mínima que es ineficaz, desprovista de eficacia terapéutica, a concentraciones excesivas que conducen a efectos no deseado y / o toxicidades secundarias. Este concepto es potencialmente relevante para los REP, porque niveles seguros circulantes terapéuticos de estos antibióticos en los seres humanos son a concentraciones de aproximadamente 0.001-0.01mg/mL, mientras que las formulaciones anteriores son a niveles de aproximadamente 1,000 mg/ml, una diferencia en concentración de hasta un millón de veces. Comentar que el Ca (OH)2 por otra 88 parte utilizado a cualquier concentración no mostró ningún daño sobre las células 50 . Para abordar esta cuestión, un estudio reciente evaluó los efectos concentración dependientes de diferentes combinaciones de antibióticos intracanal (incluyendo a TAP) sobre la supervivencia de scaps in vitro 51 . Es importante destacar que este estudio encontró que la toxicidad de la pasta de antibiótico se disminuye en gran medida cuando estos fármacos se usan en concentraciones de 0,1 mg/ml o 0,01 mg / ml; siendo ambas eficaces contra las bacterias endodóntica. Estos medicamentos se aplican típicamente a toda la longitud de los conductos radiculares por períodos que varían de la semana al mes. Por lo tanto, se ponen en contacto las células madre de la papila apical con el antibiótico durante un periodo prologando, posiblemente conduciendo a la toxicidad, y disminuyendo el número de células madre mesenquimales (MSCs) viables. Además, también se realizó un estudio de seguimiento para evaluar si las técnicas de riego eran adecuadas para eliminar los restos de TAP totalmente. A pesar de utilizar las diferentes técnicas con abundante irrigación, < 20 % deTAP podría ser eliminado, por lo que el 80% restante queda fuertemente unido a la dentina a profundidades > 350 mm. A la inversa, > 85 % del Ca(OH)2 se pudo retirar únicamente con riego, y los residuos de Ca(OH)2 se encontraron en profundidades de la dentina < 350 mm. Dado que es conocido que las bacterias penetran y colonizan los túbulos dentinarios a profundidades > 350 mm, la alta penetración de TAP puede ser la base de sus deseables efectos antibacterianos. Sin embargo, esta propiedad también incrementa la probabilidad de que las MSC en el sistema de conductos radiculares durante 89 REP entren en contacto directo con el medicamento residual. Por lo tanto, el hidróxido de calcio podría ser considerado la primera línea de la medicación intracanal en REP. Alternativamente, las pastas de antibióticos como TAP se pueden utilizar como medicamentos primarios o después de hidróxido de calcio si el tratamiento dicta desinfección más agresiva siempre a concentración (0,01-0,1 mg/ml) 52 . Además del efecto directo de estos medicamentos, pueden tener un efecto indirecto mediante la alteración de las propiedades de la dentina y la consiguiente alteración del destino de las células madre. Algunos de los cambios observados son probablemente el resultado de la bajada de pH de estas combinaciones de fármacos, dando como resultado la desmineralización de la dentina. Es importante destacar que el tratamiento prolongado con Ca(OH)2, también altera la composición de la dentina, que resulta en aumento de la susceptibilidad a las fracturas. Estos hallazgos sugieren que al igual que los irrigantes, los medicamentos intracanal tienen el potencial de alterar el sustrato (dentina) donde idealmente las células madre deben proliferar y diferenciarse52. El siguiente protocolo refleja las recomendaciones actuales para los procedimientos regenerativos y se basa en el mejor nivel de evidencia disponible de estudios para la traslación clínica o preclínica. Estas recomendaciones se basan en parte en el doble requisito de seleccionar irrigantes y medicamentos a concentraciones que se sabe que son eficaces contra los microorganismos, mientras que son menos tóxicos para las células madre. Es importante reconocer que estas recomendaciones son propensas a cambiar a medida que el campo de la regeneración endodoncica evolucione. 96 4.- OBJETIVOS 97 4.- OBJETIVOS El objetivo del presente trabajo es revisar el estado del conocimiento científico respecto a las posibilidades de aplicación de las células madre en la regeneración del tejido pulpar dañado, analizando la bibliografía existente en cuanto a algunos aspectos principales: 1.- Tipos de células madre utilizadas en las técnicas de regeneración pulpar. 2.- Factores de crecimiento implicados en la regeneración pulpar. 3.- Matrices y andamiajes utilizados en las técnicas de regeneración pulpar. 4Sistemas de desinfección y medicaciones intraconducto utiizados en las técnicas de regeneración pulpar, así como materiales usados en procedimientos clínicos. 5Las moléculas de señalización de DPSCs implicadas en la regeneración pulpar. 98 5.- MATERIAL Y MÉTODO 99 5.- MATERIAL Y MÉTODO Se realizó una búsqueda exhaustiva en la base de datos Medline-Pubmed para identificar los artículos relacionados con la regeneración con células madre en endodoncia. Se utilizó la base de datos MesH de Pubmed para la determinación de las palabras clave: regeneración, pulpa dental, célula madre. Las estrategias de búsqueda fueron las siguientes: endodontic stem cells; dental pulp stem cells endodontic; stem cells damage pulp; dental pulp stem cells endodontic odontoblast. Como criterios de exclusión de artículos se consideraron los siguientes: - Idioma: fueron excluidos los artículos en idiomas diferentes al español o inglés. - Fecha de publicación: excluidos los artículos publicados antes de 2000. - Casos clínicos. - No relacionados con el tema de interés. - Duplicados. Las revisiones y los no experimentales han sido obtenidos los textos completos y no se han incluido sus datos en las tablas. Como criterios de inclusión, se tienen en cuenta aquellos artículos que cumplan los criterios anteriormente descritos y que estén relacionados con el tema a tratar, permitiendo así dar respuesta a las preguntas planteadas durante el trabajo. En una primera búsqueda realizada a fecha de 23 de Noviembre de 2013, tras la introducción de las estrategias de búsqueda, los resultados 100 obtenidos fueron 138 artículos, de los cuales, tras aplicar los distintos criterios de exclusión permanecen 75. Posteriormente se procedió a la lectura de resúmenes, descartando aquellos no relacionados con el tema de estudio, quedando un total de 34 artículos. A fecha de 1 de Febrero de 2014 se realiza una nueva búsqueda introduciendo las mismas estrategias de búsqueda y aplicando los mismos criterios de exclusión, resultando 5 artículos nuevos, de los cuales se consideraron de interés, cuatro de los mismos. La última búsqueda se realiza el día 10 de Abril de 2014 y en ella se encuentran 27 artículos nuevos, siendo de interés y por lo tanto seleccionados, 23 de ellos. Por lo tanto, para la realización del presente trabajo se han utilizado 61 artículos, además de dos libros de texto. También se ha consultado trabajos fin de máster y tesis doctorales de compañeros de años anteriores (Tabla 1). 101 Tabla 1. Diagrama de búsqueda Resultados obtenidos en PUBMED 170 Endodontics stem cells: 79 Stem cells damage pulp: 35 Dental pulp stem cells endodontic: 43 Dental pulp stem cells endodontic odontoblast: 13 *En estos resultados se han tenido en cuenta las tres búsquedas realizadas en las tres fechas diferentes. Artículos obtenidos después de lectura de títulos y resúmenes 71 Endodontics stem cells: 51 Stem cells damage pulp: 4 Dental pulp stem cells endodontic: 16 Dental pulp stem cells endodontic odontoblast: 0 *En estos resultados se han tenido en cuenta las tres búsquedas realizadas en las tres fechas diferentes. Artículos usados en la revisión 61 Se añaden 2 libros de texto, un trabajo fin de máster y una tesis doctoral. 102 6.- RESULTADOS 103 6.- RESULTADOS Para evaluar con precisión los distintos aspectos necesarios para una adecuada comprensión del proceso de regeneración pulpar, se han analizado por separado algunos de los aspectos planteados en los objetivos: 1) Tipos de células madre, 2) Factores de crecimiento, 3) Matrices (Scaffolds) o andamiajes, 4) Medicación intraconducto y 5) Moléculas de señalización. De los 61 artículos totales que cumplían los criterios de inclusión se han seleccionado 18 (artículos experimentales) para así poder sintetizar los resultados de los mismos. Tabla 1.-Estudios realizados con células madre pulpares. AUTOR AÑO TIPO CÉLULA MADRE TIPO DE ESTUDIO Yu V &cols. 54 2009 DPSCs In vivo Arthur A &cols.55 2009 DPSCs In vivo e in vitro Wang Y & cols. 56 2013 DPSCs e iDPSCs In vitro e in vivo Zhang J &cols 57 2013 SCAPs In vitro Yu V&cols en 2009 anunciaron que la morfología y diferenciación funcional de las células del tejido conectivo pueden ser controladas por mecanismos de estimulación, pero los efectos de las fuerzas incontroladas en la homeostasis intrapulpar y habilidad de las células pulpares para soportar fuerzas externas no estaba clara, por lo que estudiaron el efecto de la presión hidrostática dinámica en la supervivencia y diferenciación odontogénica. 104 Las DPSCs de cuatro adolescentes son sometidas a presión hidrostática dinámica y se sigue la evolución de las células en cuanto a su adhesión, su supervivencia y capacidad de recuperación basadas en la diferenciación odontogénica, mineralización y la capacidad de respuesta a la proteína morfogenética ósea-2. Al someter a las células a la presión hidrostática dinámica disminuye la adhesión de las DPSCs y supervivencia, pero promueve la diferenciación mediante el incremento de la mineralización en vivo en la regeneración de los tejidos duros y sensibilidad a BMP-2 a pesar de la reducción del número de células. En las DPSCs tratadas con la presión hidrostática dinámica se ha visto mejorada la diferenciación odontogénica, una indicación de la favorable recuperación del estrés celular. El potencial de DPSCs para promover la mineralización y formación de tejido duro en respuesta a HSP apoya la formación de calcificación pulpar heterotópica en respuesta a las fuerzas masticatorias parafuncionales . Arthur A&cols en 2009 estudian los mecanismos que influyen en la proliferación y movilización de las células progenitoras dentales tras un daño en la matriz dentinaria. Observan que los receptores EphB y sus ligandos pueden estar implicados. El propósito del estudio es elevar los niveles de ephrin-B1 tras un daño para comprobar si previene la migración de las DPSCs, mientras que en la interacción de receptor y ligando se facilita la diferenciación odontoblástica. 105 La migración, proliferación y diferenciación de las DPSCs en respuesta a Eph/ephrinB se evalúa en un modelo con una lesión establecida in vivo y mediante ensayos in vitro se evalúa la formación de colonias y diferenciación. Tras los análisis se demuestran que EphB envían señales promoviendo la proliferación de DPSC, mientras que inhiben la migración. Los niveles de mRNA de los genes asociados con la formación de dentina se encuentran significativamente más elevados en los cultivos tratados con EphB2 - Fc en condiciones de mineralización en comparación con los cultivos tratados con humano - Fc o ephrin -B1 - Fc. Las observaciones surgieren que las moléculas EphB/ephrin-B son importantes en la migración de las DPSCs perivascular hacia la superficie de la dentina y en la diferenciación funcional de los odontoblastos, tras el daño a la matriz dentinaria. En 2013 Wang & cols. evalúan el efecto de la exposición pulpar (durante 48h) por traumatismo en la capacidad osteo/odontogénica de las DPSCs. La capacidad proliferativa y osteogénica así como las características odontogénicas de DPSCs lesionadas (iDPSCs) se investigaron tanto in vitro como in vivo. Se aíslaron las DPSCs lesionadas y se observó su capacidad osteo/odontogénica junto con la participación de NF-kB. Los resultados obtenidos fueron que las iDPSCs presentan menor capacidad proliferativa que las nDPSCs, ALP presenta un mayor nivel (P<0,01) en iDPSCs, iDPSCs tienen mayor capacidad de depósitos de Ca, iDPSCs expresan más marcadores osteogénicos (Runx2/RUNK2 y ocn/OCN) y menos genes/proteínas 112 de la estructura de colágeno. Ninguna nueva matriz apareció, ni tampoco parece que hubiera cualquier infiltrado celular. Por lo tanto, tras este estudio se puede deducir que esta triada puede inducir la formación de una matriz organizada similar a la del tejido pulpar. El-Backly RM & cols en 2008 estudian la hipótesis de la utilización de andamios de 50/50poli (glicólico-láctico) (PLG) con diferente porosidades y co - cultivarlos con células madre de la pulpa dental de conejo (RDPScs) y trasplantarlos subcutáneo para así evaluar el potencial de esta construcción de células madre / andamio para regenerar el tejido de la dentina / pulpa. También exploran la naturaleza de los tejidos regenerados para potenciar el uso de esta terapia de endodoncia regenerativa. Las células madres de la pulpa dental son aisladas de dientes de conejos y sembradas en estructuras preparadas para 50/50 (ácido glicólico-láctico) usando dos partículas de porogen de diferente tamaño. Estas construcciones son transplantadas subcutáneamente a los conejos. Se visualiza una gran variedad de diámetros de poros llenos por el mercurio para cada grupo. Las células transplantadas muestran una alta proliferación y capacidad clonogénica, además de la habilidad de producir tejido mineralizado in vitro en cultivos de 12 días. La evaluación histológica revela la formación de estructuras de osteodentina además de capas de túbulos paralelos parecidos a los túbulos dentinarios. 113 Usando estas técnicas se obtienen tejidos similares a la dentina y la pulpa que podrían ser usados en la regeneración o como productores operativos. Syed-Picard F.N, &cols, en 2014 hacen un estudio en el que se investiga el uso de scaffolds 3D como mecanismo similar a los tejidos dentales para llevar a cabo así la regeneración de los tejidos pulpares de los conductos radiculares en los dientes humanos. Los tejidos tridimensionales diseñados a partir de las células de la pulpa dental (DPSCs) se colocaron en el conducto de segmentos de raíces de dientes humanos que fueron cerrados en un extremo con cemento de fosfato de calcio, y todo este sistema se implantó por vía subcutánea en ratones. Se observa una pequeña cantidad de infiltración de tejido del huésped cerca del extremo abierto de la raíz y también se exhibe tejido adiposo a los 3 y 5 meses, sin embargo, la mayor parte del espacio del canal permanece vacío en el grupo control. La tapa de cemento de fosfato de calcio apoyó la infiltración de las células huésped. A los 3 meses, los espacios entre las partículas de cemento aparecen repletos de células, y después de 5 meses, el tejido del huésped infiltrado aún permanece en la región de cemento, pero se observa menos cemento, debido a la reabsorción del mismo. A diferencia de las muestras de control vacías, la tinción con H&E muestra que los espacios del canal de la raíz que contienen scaffoldls 3D presentan poblaciones de DPSCs, llenándose todo con tejido conectivo vascular después de tres y cinco meses de las implantaciones. Los scaffolds contienen un tejido adiposo que es similar al tejido que se encuentra cerca de la región abierta de las raíces utilizadas, y por lo tanto es probable que sea tejido de ratón anfitrión. El espacio intracanal está lleno de un tejido conectivo vascular que está 114 adherido a la dentina, y células adicionales también se pueden ver que recubren la pared de dentina, similar a odontoblastos naturales. A los 3 meses, se observa en la interfase del cemento y el scaffoldls formación de tejido dentinario, lo que indica que los DPSCs mantienen el potencial de generación de tejido duro. La inmunotinción sialoproteína dentina (DSP), indica la diferenciación de odontoblastos en la superficie de la dentina de los conductos radiculares que contienen scaffoldls, no estando presente en la muestra de control vacío. Además, la inmunotinción contra CD31, un marcador de la superficie celular endotelial, verifica la presencia de tejido vascular en los canales de la raíz que contienen el scaffoldls. Por lo tanto, los tejidos de ingeniería -DPC facilitaron la formación de una pasta similar al tejido después de ser colocado en una raíz del diente, demostrándose así la viabilidad de la implantación de un scaffoldls para regenerar el complejo dentina - pulpar. Tabla 4.-Estudios que hacen referencia a la desinfección del canal AUTOR AÑO IRRIGANTE/MEDICAMENTO INTRACANAL TIPO DE ESTUDIO Galler KM &cols.46 2011 NaOCl y EDTA In vivo Lovalace TW&cols.47 2011 NaOCl y pasta triantibiótica In vivo Trevino EG &cols. 32 2011 NaOCL, CLX, EDTA In vitro Ahangari Z &cols. 60 2012 Propolis, Ca(OH)2 In vivo Ruparel NB &cols. 61 2012 TAP, DAP, Ca(OH)2 In vitro Martin D &cols. 62 2014 NaOCl In vitro 115 Galler KM&cols en 2011investiga como influye el acondicionamiento de la dentina en el destino de la célula encargada de la regeneración. Las células madre son cultivadas con factores de crecimiento en péptido hidrogel y transferidas a los canales de dentina y por vía subcutánea a ratones inmunodeprimidos Para los grupos de control de los cilindros de dentina solo con hidrogel, la migración de células en el cilindro no tiene lugar. Para ambos grupos de cilindros de dentina cargados con células, los análisis histológicos muestran un tejido conectivo blando vascularizado, parecido a la pulpa dental. Las células tienen una morfología similar a fibroblastos y son incrustadas en una matriz extracelular colagenosa, que ha sustituido el portador sintético. La formación de tejido y la distribución de los microvasos se puede observar a lo largo de la longitud de los cilindros. Sin embargo, claras diferencias pueden ser vistas por los 2 grupos sobre el comportamiento celular y la morfología en la interfase célula - dentina. Para el grupo A (pretratamiento de dentina con NaOCl solamente), el límite de la dentina parece robusto, y las células multinucleadas estaban presentes creando lagunas de reabsorción. La tinción con TRAP muestra células positivas en la interface célula - dentina para el grupo A, lo que confirma su fenotipo como odontoclastos. En los cilindros de dentina grupo B (acondicionamiento adicional con EDTA), una asociación íntima de células con la matriz de dentina es aparente. Las células en contacto con la dentina parecen plana, y los procesos celulares se extienden hasta los túbulos. La inmunohistoquímica con el anticuerpo Dsp revela que las células adyacentes a la superficie de la dentina se han diferenciado en un fenotipo de odontoblastos. La tinción específica no se observó en las muestras tratadas con NaOCl. 116 Por lo tanto, las condiciones de la dentina tienen influencias considerables en el destino de la célula cuando son cultivadas en estrecha proximidad con la dentina. La descalcificación de la superficie de la dentina, la eliminación del frotis, la exposición de los túbulos dentinarios y fibrillas de colágeno, y la liberación de factores de crecimiento de la matriz de dentina podría ser parámetros favorables para la diferenciación celular en la interfase dentina. Las modificaciones en el protocolo, tales como una etapa final o de riego con EDTA, podría optimizar las condiciones para la diferenciación celular, la formación tisular y la regeneración. Lovalace TW&cols, en el año 2011evalúan si los productos de regeneración endodóntica son capaces de ofrecer células madres en el canal de dientes inmaduros en pacientes jóvenes y la identificación del posible tejido de origen de estas células. Lo primero que realiza el autor es la irrigación del canal con NaOCl y la introducción en el mismo de la pasta triantibiótica. Después de un mes se irriga con suero salino y se toman muestras con punta de papel. Mediante RT-PCR e inmunohistoquímica se comparan los genes transcriptasas y proteínas encontradas en el canal con los niveles encontrados en el sistema circulatorio. Los análisis moleculares de la sangre del canal indican gran acumulación de transcriptasas para los marcadores CD73 y CD105 comparados con el sistema circulatorio. Por lo tanto, la manipulación de los tejidos periapicales y paso de la hemorragia tiene una importante afluencia de células que contienen mRNA transcripciones de codificación de genes de marcadores de células 117 madre mesenquimales en el sistema de conductos radiculares. No había cambios en la expresión de los marcadores ALK-P, DSPP, ZBTB16 y CD14, mostrando los análisis histológicos la exposición de CD105 y STRO-1, marcadores de células madres. Por lo tanto, el paso de evacuación de sangrado hace que se acumulen células madres en el canal después del tratamiento con la pasta triantibiótica en dientes inmaduros con necrosis pulpar. Trevino EG&cols en ese mismo año investiga la influencia de los diferentes protocolos de irrigación de los canales radiculares en la edad de supervivencia de las células madres apicales (SCAPS). Las SCAP son aisladas de los 3os molares inmaduros y una subpoblación de células positivas para STRO-1 fueron seleccionadas y expandidas in vitro. Las raíces son irrigadas según 4 protocolos de irrigación distintos (1: 17% EDTA, 2: 6% NaOCl/17% EDTA/6% NaOCl, 3: 17% EDTA/2% CHX o 4: 6% NaOCl/17% EDTA/6% NaOCl/isopropyl alcohol/2% CHX y las células con STRO-1 son mezcladas con un plasma rico en plaquetas, que se implantan en las raíces y se cultivan durante 21 días. La separación inmunomagnética produjo una población de STRO – 1 purificada de SCAP que conserva su fenotipo después de cada paso. En general, las células identificadas en el sistema de conductos radiculares después 3 semanas de crecimiento se localizaron adyacentes a las paredes de la dentina. Para el efecto de soluciones de irrigantes en la supervivencia de SCAP, el EDTA mostró 579 células positivo para vimentina (consideran estas 118 células como viables) y 653 células positivas para TOPRO3, el grupo NaOCl / EDTA mostró 203 células positivas para vimentina y 273 células con A -PRO3 tinción, mientras que el EDTA / CHX y NaOCl / EDTA / NaOCl /grupos alcohol isopropílico (IPA) / CHX no mostraron células con vimentina o TO - PRO - 3 tinción ( 0 % de viabilidad ). Además, no se observaron células viables en las superficies de dentina de segmentos de raíz incubadas con sólo las células en ausencia de PRP (negativo control), mientras que SCAP cultivadas en cubreobjetos demostrado la supervivencia y la proliferación de llegar a 100 % de confluencia en el período de 3 semanas (control positivo). La irrigación con un 17% de EDTA supuso la mayor supervivencia de células. Los protocolos que incluían un 2% de CHX carecían de células viables. Se puede concluir que los irrigantes afectan en gran medida a las SCAP enriquecidas con STRO-1 en el ambiente de la raíz y la inclusión de EDTA podría ser beneficioso en la regeneración. Un año más tarde, Ahangari Z &cols realizaron un estudio en el que el objetivo principal fue evaluar el efecto del própolis en la regeneración de dentina y el papel potencial de DPSCs 48 maxilares y mandíbulas de cerdos guinea fueron divididos de forma aleatoria usando en unos sujetos própolis y en otros Ca(OH)2. La congestión vascular fue evidente en los dos casos experimentales en diferentes periodos de tiempo. A lo largo del período experimental todos los casos tratados con propóleo, presentaron pulpas vitales sin ningún signo de necrosis, en contraste con los controles en los que el 75% tenían pulpa vital 119 durante el mismo período. La inflamación crónica era detectable en ambos grupos a un nivel por debajo del 10%. En todos los casos, las células de odontoblastos estuvieron presentes en cada intervalo y no hubo diferencia significativa entre los dos grupos. No se formó un verdadero puente dentinario durante el experimento. El día 30, todos los casos (100 %) tratados con propóleos tenían dentina tubular mientras que sólo el 86 % del grupo de control tenía dentina tubular. El día 30 el 17 % del grupo experimental todavía tenía restos de propóleos, mientras que no había restos de hidróxido de calcio en el grupo control. Se detectó que las células madre en el hidróxido de calcio con el tiempo disminuían para los CD146 y CD29, no encontrando ningún patrón específico en la detección de células madre en el grupo de propóleos en el tiempo. Por lo tanto, el Propolis tiene ventajas sobre el Ca(OH)2 e induce una mejor calidad en la producción de la dentina. Ruparel NB &cols también en 2012 estudiaron los posibles efectos tóxicos de la TAP, DAP e hidróxido de Ca (medicamentos intracanal comúnmente usados) sobre las SCAPs in vitro. Las SCAPs son sometidas a varias concentraciones de TAP, DAP, TAP modificado, augmentine o Ca (OH)2. Las células viables se detectan mediante colorante azul trypan a los 3 días. Los cuatro antibióticos reducían la supervivencia de estas células con el aumento de las concentraciones, a la inversa del Ca(OH)2 que promovía su supervivencia en todas las concentraciones, aumentando significativamente la proliferación / supervivencia de SCAPs en la concentración de 1 mg/ml 120 Este estudio demostró que los medicamentos en concentraciones utilizados actualmente en procedimientos de endodoncia regenerativas con la excepción de Ca(OH)2 , tienen un efecto perjudicial en la supervivencia de SCAPs. Por lo tanto, estos hallazgos sugieren que los medicamentos utilizados en procedimientos regenerativos necesitan ser cuidadosamente seleccionados y utilizados en concentraciones adecuadas para tener eficacia antibacteriana y no evocar toxicidad. Martin D &cols en 2014 evalúan el efecto de diferentes concentraciones de NaOCl sobre la supervivencia y la diferenciación de las SCAPs en un modelo de canal de raíz, donde los conductos estandarizados fueron creados en los dientes humanos extraídos e irrigados con NaOCl (0,5%, 1,5%, 3%, o 6%) seguidos por 17% de EDTA o solución salina estéril. Las SCAPs en un andamio a base de ácido hialurónico se sembraron en los canales y se cultivaron durante 7 días. En la dentina acondicionada con 17% de EDTA se observó un aumento del 35% de SCAPs, siendo este el grupo control. Sin embargo, la dentina acondicionada con NaOCl evoca una disminución dependiente de la concentración en la viabilidad SCAP. Las concentraciones de 0,5 %, 1,5 % y 3 % provocaban una reducción similar de aproximadamente 37 % en la supervivencia de SCAPs, mientras que el tratamiento con 6% de NaOCl dió como resultado una supervivencia de SCAP muy disminuida. La adición de una irrigación final con 17 % de EDTA invierte los efectos negativos de NaOCl en la supervivencia SCAP. Es importante destacar que la neutralización de NaOCl (6 %) con tiosulfato de sodio (5 %) no revirtió los efectos perjudiciales sobre la supervivencia SCAP (datos no mostrados). 121 La dentina acondicionada con 17 % de EDTA promovió la expresión de células similares a odontoblastos (expresión DSPP marcador). Por otro lado, el NaOCl a la concentración de 1,5 % no tuvo efectos en la expresión génica de DSPP en comparación con el grupo de control, mientras que la concentración de 3 % redujo la expresión de genes DSPP en aproximadamente un 50%. Es importante destacar que en la dentina acondicionada con 6 % de NaOCl fue completamente abolida la expresión de DSPP. Además, la adición de una irrigación final con el 17 % de EDTA aumentó la expresión DSPP después de 1,5 % en comparación de NaOCl con el control. Una irrigación final con EDTA al 17% invirtió los efectos producidos en la irrigación con 3 % y el 6 % NaOCl. Los resultados sugieren que la dentina acondicionada con 1.5% NaOCl promueve una mayor supervivencia y diferenciación de scaps que la irrigación con 3% NaOCl cuando es seguida por 17% de EDTA. Estos resultados ponen de relieve que irrigantes utilizados en endodoncia en clínica tienen un profundo efecto sobre la supervivencia de células madre y su capacidad de diferenciación. Así, además de una desinfección adecuada, es fundamental para crear un microambiente en los conductos radiculares que promuevan la supervivencia / proliferación y la diferenciación de células madre. 128 8.- REFERENCIAS 129 8.- REFERENCIAS 1 Canalda Shali C, Brau Aguadé E. Endodoncia. Técnicas clínicas y bases científicas. 2006. 2ª Ed. Masson. 2 Syed-Picard F.N, Ray H.L, Kumta P.N and Sfeir C. Scaffoldless Tissueengineered Dental Pulp Cell Constructs for Endodontic Therapy. J Dent Res. 2014;93;250-5. 3 Hai-Hua S, Tao J, Qing Y.Biological approaches toward dental pulp regeneration by tissue engineering. J Tissue Eng Regen Med. 2011; 5: e1–e16. 4 Prescott R, Fayad M, Johnson B. In-vivo Generation of Dental Pulp-Like Tissue Using Human Pulpal Stem Cells, a Collagen Scaffold and Dentin Matrix Protein 1Following Subcutaneous Transplantation in Mice.J Endod. 2008; 34; 421–6. 5 Iglesias-Linares A, Yáñez-Vico RM. Stem cells in current pediatric dentistry practice. 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