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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
ESPAÑA
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Núme o de publicación: 2 340 011
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Núme o de solici ud: 200803359
51
In . Cl.:
A61K 33/04 (2006.01)
A23K 1/18 (2006.01)
A23K 1/16 (2006.01)
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PATENTE DE INVENCIÓN B1
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Fecha de p esen ación: 26.11.2008
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Fecha de publicación de la solici ud: 27.05.2010
Fecha de la concesión: 01.03.2011
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Fecha de anuncio de la concesión: 11.03.2011
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Fecha de publicación del olle o de la pa en e:
11.03.2011
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Ti ula /es: Uni e sidad de Se illa
OTRI-Pabellón de B asil
Paseo de las Delicias, s/n
41013 Se illa, ES
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In en o /es: A encio Genes, Loyda Es he ;
Moyano Sal ago, Ma ía Rosa io;
Cameán Fe nández, Ana Ma ía;
P ie o O ega, Ana Isabel;
Pue o Rod íguez, Ma ía;
Mo eno Na a o, Isabel;
Blanco Rod íguez, Al onso;
Picha do Sánchez, Sil ia y
Jos Gallego, Ángeles Mencía
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Agen e: No cons a
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Tí ulo: Uso de Selenio pa a p o ege a los peces de la in oxicación po mic ocis inas.
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Resumen:
Uso de Selenio pa a p o ege a los peces de la in oxica-
ción po mic ocis inas.
En la p esen e in ención se e ie e al uso de una com-
posición que comp ende Selenio pa a el a amien o, p e-
ención y/o ecupe ación de e ec os óxicos en peces ex-
pues os a mic ocis inas (MCs). También se e ie e al uso
de la ci ada composición en la ecupe ación de las al e-
aciones his opa ológicas p oducidas en los ejidos de la
lis a que comp ende hígado, iñón, co azón, b anquias y/o
ac o gas oin es inal. Además, dicha composición se u i-
liza pa a la ab icación de un alimen o uncional, un com-
plemen o i amínico, o un complemen o nu icional.
A iso: Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 37.3.8 LP.
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Ven a de ascículos: O icina Española de Pa en es y Ma cas. Pº de la Cas ellana, 75 – 28071 Mad id
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DESCRIPCIÓN
Uso de Selenio pa a p o ege a los peces de la in oxicación po mic ocis inas.
En la p esen e in ención se e ie e al uso de una composición que comp ende Selenio pa a el a amien o, p e-
ención y/o ecupe ación de e ec os óxicos en peces expues os a mic ocis inas (MCs). También se e ie e al uso de
la ci ada composición en la ecupe ación de las al e aciones his opa ológicas p oducidas en los ejidos de la lis a que
comp ende hígado, iñón, co azón, b anquias y/o ac o gas oin es inal. Además, dicha composición se u iliza pa a la
ab icación de un alimen o uncional, un complemen o i amínico, o un complemen o nu icional.
Es ado de la écnica an e io
El Selenio es un mic onu ien e esencial pa a animales y humanos. En animales se han desc i o di e en es sín-
d omes (al e aciones del c ecimien o, degene ación muscula , ca diomiopa ía, degene ación hepá ica, e c.) mo i ados
po su de iciencia. En medicina e e ina ia exis e un amplio uso p o ilác ico y e apéu ico de la sal seleni o sódico, a
menudo en combinación con la i amina E, en e a di e sas en e medades elacionadas con las de iciencias de am-
bos nu ien es. Las dosis ecomendadas de seleni o sódico a ían en e 0,01-0,08 mg Se4+/Kg peso (0,25-1,5 mg/Kg
pienso) en las p epa aciones des inadas a piensos medicados pa a caballo, aca y o eja, así como en pollos y ce dos.
(EMEA/MRL249/97 inal, 1997). Seleni o y selenia o sódicos han sido ap obados como adi i os alimen a ios a una
concen ación máxima de 0,5 mg Se po Kg de pienso.
El mecanismo p incipal de acción de los e ec os isiológicos y a macológicos del Selenio se basa en su e ec o
an ioxidan e de las memb anas celula es en e a pe óxido de hid ógeno, lipope óxidos y a especies eac i as de oxí-
geno (ROS) en gene al. Los e ec os es án elacionados con la ac i idad enzimá ica de la enzima Glu a ión Pe oxidasa
(GPx), que con iene selenocis eina, en conc e o cua o subunidades y cada una de ellas con iene un á omo de Selenio
(Ba cioglu K e al. (2002) Cell Biochem Func 20:115-118). También es un componen e in eg al de o as p o eí-
nas uncionales, como po ejemplo e a-iodo i onina-5’-l-deiodinasa, que in e iene en el me abolismo de ho monas
i oideas y io edoxina educ asa, in oluc ada en la sín esis de ADN, de ensa en e es és oxida i o y epa ación
de p o eínas. Su acción p o ec o a an ioxidan e se ha desc i o en el documen o WO2006018294-A1, jun o con la
i amina E.
En peces se ha empleado el seleni o sódico como adi i o alimen a io en piensos, pa a mejo a la e iciencia de
piensos ege ales (JP61146155-A). El Selenio mejo a las de ensas an ioxidan es isiológicas en ucha a co i is (On-
co hynchus mykiss) (Mille LL e al. (2007) Aqua Toxicol 83:263-271). Asimismo el Selenio se ha u ilizado en
combinación con cob e pa a mejo a la espues a de los animales al es és oxida i o (Lin Yu-Hung y Shiau Shi-Yen
(2007) In e na ional Symposium on Fish Nu i ion and Feeding 267: 38-43).
Po o o lado, las MCs son oxinas p oducidas po cianobac e ias óxicas p esen es en aguas supe iciales, que pue-
den bioacumula se en pescados de consumo público a ni eles muy p óximos e incluso supe io es a la Inges a Dia ia
Tole able (IDT) p o isional es ablecida, a ec ando a la calidad y segu idad de es e ipo de alimen os y suponiendo un
iesgo po encial pa a el consumido . Las MCs han ocasionado episodios de mue e masi a en peces, siendo espon-
sables de la en e medad denominada “Ne Pen Li e Disease” (NPLD) en salmones p oceden es del A lán ico c iados
en cau i idad. En compa ación con los mamí e os, los peces son menos sensibles a los e ec os óxicos, lo que pod ía
pe mi i una mayo acumulación, exis iendo a iabilidad en unción de la especie y des acando su mayo dis ibución
pues a ec an no sólo al hígado sino ambién al iñón, co azón, b anquias, piel, médula y sang e, al e ando además
el compo amien o y el desa ollo. Las cianobac e ias cons i uyen pa e de la die a de di e sos cip inídos y cíclidos,
como es el caso de las especies de peces a las que se aplica es a in ención, p incipalmen e Tilapias (O ech omis,
sp.). La Tilapia (O eoch omis sp.) es uno de los pescados que más ápidamen e se ha in oducido en acuicul u a, po
la acilidad que p esen a su manejo, g an capacidad de adap ación a condiciones ad e sas y ácil ep oducción; sus
dis in as a iedades son il ado as y consumido as de cianobac e ias y en Eu opa se es á despe ando un g an in e és
po su cul i o.
Como mecanismo de acción óxica más acep ado, las MCs a ni el subcelula son inhibido es especí icos de las
os a asas de p o eínas ipo 1 (PP1) y 2A (PP2A), desencadenando un p oceso de apop osis y consecuen e daño celula .
Po o o lado, el es és oxida i o juega un papel muy signi ica i o en la pa ogenicidad de es as oxinas, de ec ándose
un aumen o en la p oducción de especies eac i as de oxígeno (ROS), así como cambios en la ac i idad de di e sas
enzimas an ioxidan es en oedo es y peces.
Ac ualmen e no exis e un a amien o an idó ico especí ico en casos de in oxicación po MCs p oceden es de
cianobac e ias. Va ios es udios han demos ado los e ec os p o ec o es de cie os an ioxidan es en e a su acción
óxica en oedo es, cuando se adminis an p e iamen e a la exposición de las oxinas, como es la suplemen ación con
la i amina E, la i amina C, licopenos, cie os poli enoles del é, la onoides o mela onina.
Has a la echa no se conoce ningún a amien o capaz de ecupe a a los peces in oxicados con MCs. Teniendo en
cuen a la ubicuidad de es as oxinas se hace necesa io ecupe a peces que p esen en al e aciones his opa ológicas con
di e en es ni eles de a ección que pueden impedi el ciclo de ida no mal de los peces a ec ados.
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Explicación de la in ención
La p esen e in ención se e ie e al uso de una composición que comp ende Selenio pa a el a amien o, p e ención
y/o ecupe ación de e ec os óxicos en peces expues os a MCs.
En ilapias (O eoch omis sp.) expues as a dosis únicas y epe idas de MCs se inducen es és oxida i o y al e acio-
nes pa ológicas. En conc e o, se han comp obado a iaciones dosis-dependien e en la ac i idad de di e sas enzimas
an ioxidan es, disminución de los ni eles de Glu a ión (GSH), aumen o de los ni eles de lipope oxidación (LPO) y de
oxidación de p o eínas, en di e en es ó ganos (hígado, iñón, b anquias, e c.), y múl iples al e aciones his opa ológicas
en ó ganos di e sos como hígado, iñón, b anquias o co azón.
El selenio adminis ado en la p esen e in ención se mues a e ec i o man eniendo el es ado de salud del pez,
p e iniendo daños causados po las oxinas y/o mejo ando los e ec os óxicos inducidos po MCs en di e sos ó ganos
de ilapias in oxicadas.
El uso de Selenio como adi i o alimen a io no solo mejo a los ni eles de GSH hepá icos, sino que po su p opia
ac i idad an ioxidan e es capaz de disminui la lipope oxidación (LPO) (hígado, iñón), aumen a el con enido p o eico
en hígado y ecupe a las lesiones his opa ológicas inducidas en múl iples ó ganos como hígado, iñón, co azón, ac o
gas oin es inal y/o b anquias.
En es e sen ido, un p ime aspec o de la p esen e in ención se e ie e al uso de una composición que comp ende
Selenio pa a la elabo ación de un medicamen o ú il en el a amien o, p e ención y/o ecupe ación de e ec os óxicos
en peces expues os a MC.
La composición de la p esen e in ención comp ende, al menos, Selenio y el medicamen o es á compues o, al
menos, po la composición an e io . De es a o ma, el Selenio, sus sales, de i ados a macéu icamen e acep ables o
sus p o á macos, se o mulan en una composición a macéu ica ap opiada, en la can idad e apéu icamen e e ec i a,
jun o con uno o más ehículos, adyu an es o excipien es a macéu icamen e acep ables. El medicamen o se emplea
pa a el a amien o de los e ec os óxicos en peces expues os a MC.
Po un “de i ado a macéu icamen e acep able” se en iende cualquie sal, a macéu icamen e acep able o cual-
quie o o compues o que después de su adminis ación, es capaz de p opo ciona (di ec a o indi ec amen e) Selenio.
P e e iblemen e la sal de Selenio es seleni o sódico (Na2SeO3.5H2O).
Un “ ehículo a macéu icamen e acep able” se e ie e a aquellas sus ancias, o combinación de sus ancias, conoci-
das en el sec o a macéu ico, u ilizadas en la elabo ación de o mas a macéu icas de adminis ación e incluye sólidos
o líquidos, disol en es, ensioac i os, e c.
El é mino “ a amien o” al como se en iende en la p esen e in ención supone comba i los e ec os óxicos pa a
es abiliza el es ado de oxicidad de los indi iduos. El medicamen o se emplea ambién pa a la p e ención de los
e ec os óxicos ocasionados a los peces expues os a MCs. El é mino “p e ención” al como se en iende en la p esen e
in ención consis e en e i a la apa ición de e ec os óxicos en peces expues os a MCs. En es e caso, p e iamen e a
la in oxicación po MCs, los peces es án p o egidos po un aumen o de las de ensas an ioxidan es p oducidos po la
acción del Selenio. El medicamen o ambién se emplea pa a la ecupe ación de los e ec os óxicos ocasionados en
peces expues os a MC.
El é mino “e ec os óxicos” al como se en iende en la p esen e in ención hace e e encia a la consecuencia
de i ada de la exposición del pez a la oxina MC, es deci , la apa ición de di e sos e ec os ad e sos como po ejemplo
un daño celula que ocasiona un daño en los ejidos biológicos lo que a su ez puede p o oca un cambio en las
unciones isiológicas y en el me abolismo celula .
Las MCs son oxinas de es uc u a hep apep ídica p oducidas an o po cianobac e ias ilamen osas (Anabaena,
Oscilla o ia,Nos oc,Hapalosiphon) como coloniales (Mic ocys is). Una ez que se ingie en, las MCs se anspo -
an has a el hígado donde la mayo ía quedan almacenadas y el es o pe manecen en la sang e y pueden con amina
o os ejidos. Las MCs se unen co alen emen e a os a asas de p o eínas bloqueando así nume osos p ocesos de con-
ol celula . La MC de la p esen e in ención se selecciona de la lis a que comp ende mic ocis ina LA, mic ocis ina
LR, mic ocis ina YR, mic ocis ina RR, mic ocis ina YM, mic ocis ina YA, mic ocis ina LY, mic ocis ina FR, mi-
c ocis ina Laba, mic ocis ina H yR, mic ocis ina AR, mic ocis ina M(O)R, mic ocis ina WR, 3-desme ilmic ocis ina
LR, 7-desme ilmic ocis ina LR, 3,7-didesme ilmic ocis ina LR, 3-desme ilmic ocis ina YR, 7-desme ilmic ocis ina
YR, 3-desme ilmic ocis ina RR, 7-desme ilmic ocis ina RR, 3,7-didesme ilmic ocis ina RR, 3-desme ilmic ocis ina
H yR, 7-desme ilmic ocis ina H yR, 3,7-didesme ilmic ocis ina H yR, 7-desme ilmic ocis ina HphR, (Mse 7)mic o-
cis ina LR, (Se 7)mic ocis ina LR, (Se 7)mic ocis ina RR, (Se 7)mic ocis ina H yR, (Se 7)3-desme hy mic ocis ina
XR, (DMAdda) mic ocis ina LR, (ADMAdda) mic ocis ina LR, (ADMAdda)3-desme ilmic ocis ina LR, (ADMAd-
da) mic ocis ina Lha , (ADMAdda,Mse 7) mic ocis ina LR, D-Glu(CH3O)es e mic ocis ina LR, D-Glu(CH3O)es e
3-desme ilmic ocis ina LR, D-Glu(C3H7O2)es e mic ocis ina LR o (D-Se 1, ADMAdda) mic ocis ina LR. La lis a
an e io no se limi a a las MCs mencionadas. P e e iblemen e la MC es mic ocis ina LR (MC-LR).
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Un segundo aspec o de la p esen e in ención es el uso de una composición que comp ende Selenio pa a la elabo-
ación de un medicamen o ú il en la ecupe ación de e ec os óxicos en peces expues os a MCs. El é mino “ ecupe a-
ción” hace e e encia a la desapa ición de los e ec os óxicos causados po la in oxicación con MCs. Es a ecupe ación
supone la e e sión o al de los daños causados en los ejidos del pez, ecupe ando de es a o ma las unciones no males
de los ó ganos a ec ados.
Una ealización aún más p e e ida de la p esen e in ención comp ende el uso de una composición que con iene
Selenio pa a la elabo ación de un medicamen o ú il en la ecupe ación de las al e aciones his opa ológicas p oducidas
en los ejidos de la lis a que comp ende hígado, iñón, co azón, b anquias y/o ac o gas oin es inal. Tal como se ha
mencionado an e io men e las MCs pueden acumula se en el ejido hepá ico y ambién pueden llega a o os ó ganos
u ilizando la sang e como medio de dispe sión, de es a o ma, las MCs pueden causa e ec os óxicos y/o al e aciones
his opa ológicas en los ci ados ó ganos. La ecupe ación de los ejidos a ec ados po las al e aciones his opa ológicas
es un aspec o des acable de la p esen e in ención ya que puede supone la cu ación de los peces cul i ados, peces
seleccionados po di e sas ca ac e ís icas pa a la c ía, peces de especies en pelig o de ex inción o cualquie o o ipo
de pez que p esen e al e aciones his opa ológicas en un g ado e e sible.
La ecupe ación que se p oduce en las al e aciones his opa ológicas en algunos ó ganos consis e en:
- Hígado: las MCs p oducen una deso ganización del pa énquima hepá ico, obse ándose hepa oci os con ci o-
plasmas muy cla os y el con o no celula a modo de célula en cebolla, y es uc u almen e se obse a que poseen
ci oplasma con escasos o ganoides y ci oplasma eple o de glucógeno g anula . Median e la adminis ación de Selenio
se consigue que los co dones hepá icos sean no males, hepa oci os con mo ología poliéd ica no mal, con o ganoides
ci oplasmá icos no males y ausencia de glucógeno g anula .
- Riñón: se ecupe a la glome ulopa ía y a o ia glome ula e iden es, p oducida po la in oxicación con MCs. Con
la adminis ación de selenio se obse an glomé ulos con los capila es enes ados apa en emen e no males.
- Co azón: Las MCs inducen mio ib olisis pa cial, edema y mic ohemo agias, que son supe ados po la dosis más
ele ada de selenio ( e más adelan e).
- In es ino: El a amien o con selenio ecupe a la pé dida, p ác icamen e o al, de mic o ellosidades p oducidas
po las MCs, apa eciendo los en e oci os apa en emen e no males y abundan es células calci o mes.
- B anquias: Las MCs inducen una hipe emia gene alizada, que es e e ida po Selenio.
En una ealización más p e e ida de la p esen e in ención, el Selenio se adminis a en una can idad dia ia de en e
1,5 y 6 µg de Selenio po g de die a (equi ale a una can idad dia ia de en e 5 y 20 µg de seleni o sódico po g de die a).
Es a adminis ación se lle a a cabo du an e al menos una semana. P e e iblemen e la can idad dia ia inco po ada a los
peces es de en e 3 y 6 µg de Selenio po g de die a. Tal como los in en o es han de e minado, la adminis ación de
can idades dia ias supe io es a 6 µg de Selenio po g de die a, pueden ocasiona al e aciones de los alo es basales
de cie os bioma cado es de es és oxida i o (Ca alasa en iñón y la elación GSH/GSSG en hígado) e induci LPO y
oxidación de p o eínas en peces no in oxicados.
Es a composición, se puede adminis a de dis in as o mas, en e ellas, pe o sin limi a se, in ape i onealmen e,
o almen e, bucalmen e, in amuscula men e o de o ma subcu ánea. Más p e e iblemen e se adminis a de o ma o al o
in ape i oneal. En o a ealización más p e e ida la composición se p esen a en una o ma adap ada a la adminis ación
o al o in ape i oneal.
Los peces in oxicados es án expues os a más de 60 µg de MC po pez y po día du an e 21 días (in oxicación
subc ónica). P e e iblemen e los peces es án expues os a más de 120 µg de MC po pez en exposición única.
O a ealización p e e ida de la in ención, comp ende el uso de la composición desc i a, que además incluye
excipien es a macológicamen e acep ables.
El é mino “excipien e” hace e e encia a una sus ancia que ayuda a la abso ción de la sus ancia ac i a (en la
p esen e in ención, Selenio), es abiliza dicha sus ancia ac i a o ayuda a la p epa ación del medicamen o en el sen ido
de da le consis encia o apo a sabo es que lo hagan más ag adable. Así pues, los excipien es pod ían ene la unción
de man ene los ing edien es unidos como po ejemplo almidones, azúca es o celulosas, unción de endulza , unción
de colo an e, unción de p o ección del medicamen o como po ejemplo pa a aisla lo del ai e y/o la humedad, unción
de elleno de una pas illa, cápsula o cualquie o a o ma de p esen ación como po ejemplo el os a o de calcio
dibásico, unción desin eg ado a pa a acili a la disolución de los componen es y su abso ción en el in es ino sin
exclui o o ipo de excipien es no mencionados en es e pá a o.
El é mino excipien e “ a macológicamen e acep able” hace e e encia a que el excipien e es é pe mi ido y e alua-
do de modo que no cause daño a los o ganismos a los que se adminis a.
En una ealización más p e e ida de la in ención, la composición comp ende además o a sus ancia ac i a.
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En cada caso la composición se adap a á al ipo de adminis ación u ilizada, po ello, la composición de la p e-
sen e in ención se puede p esen a bajo la o ma de soluciones o cualquie o a o ma de adminis ación clínicamen e
pe mi ida y en una can idad e apéu icamen e e icaz.
O as ealizaciones p e e idas son el uso pa a la ab icación de un alimen o uncional, el uso pa a la ab icación de
un complemen o i amínico y o a más es el uso pa a la ab icación de un complemen o nu icional.
El Selenio puede o ma pa e de un alimen o uncional, complemen o i amínico, complemen o nu icional o
cualquie a de sus combinaciones. Tal como se en iende en la p esen e in ención, un alimen o uncional cumple una
unción especí ica como puede se la de mejo a la salud de los peces. Pa a ello al alimen o uncional se le puede
ag ega un complemen o i amínico y/o complemen o nu icional. El alimen o uncional, los complemen os desc i os
o cualquie a de sus combinaciones pueden adminis a se jun o con un pienso, o ma pa e de la composición del
pienso o pueden adminis a se de o ma independien e.
En una ealización p e e ida, de la p esen e in ención, los peces son cul i ados.
En la p esen e in ención se en iende po “peces cul i ados” aquellos peces c iados en pisci ac o ías, cha cas o
cualquie con enedo de agua de cualquie amaño que pe mi a la c ía de peces y/o el engo de. Los peces cul i ados
pueden se , sin limi a , peces des inados a la alimen ación o a la c ía de peces o namen ales.
En o a ealización p e e ida, de la p esen e in ención, los peces pe enecen al géne o O eoch omis sp.
Los peces pe enecien es a es e géne o se conocen como Tilapias. Las Tilapias c ecen en aguas cálidas dulces o
saladas y ienen pocas exigencias espi a o ias, ápido c ecimien o y acilidad pa a la pues a. Los peces se seleccionan,
sin limi a , de la lis a que comp ende O. amphimelas,O. ande sonii,O. angolensis,O. au eus,O. chung u uensis,O.
esculen us,O. hun e i,O. ismailiaensis,O. jipe,O. ka omo,O. ka ongae,O. ko ogwe,O. lepidu us,O. leucos ic us,
O. lidole,O. mac ochi ,O. malaga asi,O. mo ime i,O. mossambicus,O. mwe uensis,O. nilo icus (Nile ilapia), O.
Pan ani,O. pangani gi igan,O. pangani pan ani,O. placidus,O. placidus placidus,O. placidus u umae,O. uk-
waensis,O. saka,O. salinicola,O. schwebischi,O. shi anus,O. shi anus chilwae,O. shi anus shi anus,O. spilu us,
O. spilu us nige ,O. spilu us pe ci ali,O. spilu us spilu us,O. squamipinnis,O. anganicae,O. upembae,O. u ole-
pis,O. u olepis ho no um,O. u olepis u olepis uO. a iabilis. Más p e e iblemen e los peces pe enecen a la especie
O. nilo icus (Nile ilapia).
A lo la go de la desc ipción y las ei indicaciones la palab a “comp ende” y sus a ian es no p e enden exclui
o as ca ac e ís icas écnicas, adi i os, componen es o pasos. Pa a los expe os en la ma e ia, o os obje os, en ajas
y ca ac e ís icas de la in ención se desp ende án en pa e de la desc ipción y en pa e de la p ác ica de la in ención.
Las siguien es igu as y ejemplos se p opo cionan a modo de ilus ación, y no se p e ende que sean limi a i os de la
p esen e in ención.
Desc ipción de las igu as
Fig 1. Mues a el e ec o p o ec o de di e en es dosis de Selenio (seleni o sódico) sob e las lesiones hepá icas
inducidas po MC en ilapias expues as a 120 µg MC/pez (dosis única).
(A, C, E, G) Tinción Hema oxilina-eosina. Ba as 100 µm. (B, D, F, H) Obse aciones ul aes uc u ales (mic os-
copía elec ónica). Ba as 10, 5, 10, 10 µm.
(A, B) Peces con ol; (C, D) ilapias expues as sólo a MCs (120 µgMC/pez). C: Pa énquima hepá ico deso ga-
nizado, hepa oci os con ci oplasmas muy cla os y el con o no celula a modo de célula en cebolla ( lecha). D: El
hepa oci o p esen a un núcleo denso no mal (N) odeado de un ci oplasma con escasos o ganoides y el es o del ci o-
plasma eple o de glucógeno g anula (cí culo); (E, F) Peces expues os a MC+Selenio dosis baja (1,5 µg Se/g die a).
E. Pa énquima con escasos hepa oci os con degene ación glucogénica sin mos a la mo ología de célula en cebo-
lla ( lecha). F. Hepa oci os con mayo desa ollo de los o ganoides ci oplasmá icos (cí culo). (G, H) Peces expues os
a MC+Selenio dosis media (3,0 µg Se/g die a). G. Co dones hepá icos no males y H. De alle de hepa oci o no mal
con o ganoides ci oplasmá icos, e ículos (R), mi ocond ias (es ella), lisosomas ( lecha) y ausencia de glucógeno
g anula .
Fig. 2. Mues a el e ec o p o ec o de di e en es dosis de Selenio (seleni o sódico) sob e las lesiones enales indu-
cidas po MCs en ilapias expues as a 120 µg MC/pez (dosis única).
(A, C, E, G) Tinción Hema oxilina-eosina. Ba as 100 µm. (B, D, F, H) Obse aciones ul aes uc u ales (mic o-
scopia elec ónica). Ba as 10, 10, 10, 5 µm.
(A, B) peces con ol; (C, D) ilapias expues as sólo a MCs (120 µgMC/pez.). C. Glome ulopa ía y a o ia glo-
me ula e iden e (cí culo), ep esen ado po una pé dida en el amaño, hialinizaciones in aglome ula es y pé dida
de capila es. D. Glomé ulos con eng osamien o y densi icaciones de las memb anas basales ( lechas) y colapsamien-
os de las luces de los capila es enes ados (cí culo). (E, F) Peces expues os a MC+Selenio dosis baja (1,5 µgSe/g
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die a). E. Glome ulopa ía con cie a deso ganización in e na ( ombo), aumen o de las células mesangiales (as e is-
co) y enue dila ación de la cápsula de Bowman ( lecha). F. Capila es enes ados con la pa ed del endo elio (1),
memb ana basal (2) y podoci os (3) p ác icamen e no mal y es os de endo elio ume ac o (cí culo). (G, H) Peces
expues os a MC+Selenio dosis media (3,0 µg Se/g die a). G. Glomé ulos p ác icamen e no males (cí culos), algu-
nos con cie a ume acción de los capila es enes ados ( lecha). H. cie o g ado de ume acción del endo elio capila
(cí culo).
Fig. 3. Mues a el e ec o p o ec o de di e en es dosis de Selenio (seleni o sódico) sob e las lesiones en co azón
inducidas po MCs en ilapias expues as a 120 µg MC/pez (dosis única).
(A, C, E, G) Tinción Hema oxilina-eosina. Ba as 100 µm. (B, D, F, H) Obse aciones ul aes uc u ales (mic o-
scopia elec ónica). Ba as 5, 10, 10, 10 µm.
(A, B) peces con ol; (C, D) ilapias expues as sólo a MCs (120 µg MC/pez). C. Mio ib olisis ( lecha). Edema
escaso (es ella) y mic ohemo agias (cí culo). D. Pé dida casi o al de las mio ib illas, es os de mio ib illas ( lecha)
y de mi ocond ias (es ella). Abundan e sa coplasma sin es uc u a (cí culo). (E, F) Peces expues os a MC+Selenio
dosis baja (1,5 µg Se/g die a). E. Mio ib olisis pa cial (cí culo), escaso edema (es ella) y mic ohemo agias ( lecha).
F. Recupe ación de mio ib illas con núcleo desplazado (N). (G, H) Peces expues os a MC+Selenio dosis media (3,0
µg Se/g die a). G. Tenue mio ib olisis ( lecha). Zonas poco edema osas y escasas mic ohemo agias. H. Abundan es
mio ib illas ( lecha) y abundan es mi ocond ias (cí culo).
Fig. 4. Mues a el e ec o p o ec o de di e en es dosis de Selenio (seleni o sódico) sob e las lesiones en ac o
gas oin es inal inducidas po MCs en ilapias expues as a 120 µg MC/pez (dosis única).
(A, C, E, G) Tinción Hema oxilina-eosina. Ba as 50, 50, 100, 100 µm. (B, D, F, H) Obse aciones ul aes uc u-
ales (mic oscopia elec ónica). Ba as 20, 10, 20, 20 µm.
(A, B) peces con ol; (C, D) ilapias expues as sólo a MCs (120 µg MC/pez). C. Aco amien o de las ellosidades
in es inales con nec osis en la zona apical (cí culo). D. De alle del epi elio in es inal con núcleos muy densos (N) y
pé dida p ác icamen e o al de las mic o ellosidades (cí culo). (E, F) Peces expues os a MC+Selenio dosis baja (1,5
µg Se/g die a). E. Vellosidades co as de escasos amaños, acuolizaciones ci oplasmá icas en en e oci os (cí culo). F.
De alle del epi elio con ecupe ación pa cial de las mic o ellosidades (cí culo). (G, H) Peces expues os a MC+Selenio
dosis media (3,0 µg Se/g die a). G. Vellosidades co as, células in es inales (en e oci os) con acuolización y células
calici o mes ( lecha). H. Recupe ación pa cial de las mic o ellosidades (cí culo).
Ejemplos
A con inuación se ilus a á la in ención median e unos ensayos ealizados po los in en o es que desc iben el uso
de Selenio (seleni o sódico) pa a a amien o, p e ención y/o ecupe ación de e ec os óxicos en peces expues os a
MCs.
Ejemplo 1
La in ención se lle ó a cabo empleando un o al de 64 peces macho de O ech omis nilo icus (Nile ilapia), de peso
medio 50±7 g, y longi ud de 12±2 cm, ob enidos en una pisci ac o ía, y ans e idos en acua ios (96 L) con sis ema
de il ación de agua y ai eación adecuados, y ciclos de 12/12 h luz/oscu idad. Los peces ue on alimen ados con
comida come cial (Dibaq, Sego ia, España), en una can idad de 0,3 g/día. Los peces se aclima a on du an e 15 días
an es del expe imen o. Se lle ó a cabo la ex acción de las MCs a pa i de un lio ilizado de células de cianobac e ias
p oceden es de una lo ación na u al que con enía 2885 µg/g de MC-LR, según el mé odo de Mo eno e al (2004, Biol
Res 37:405-417). Se u iliza on 8 g upos expe imen ales con 8 animales en cada uno. Cada g upo ue in oducido en
un acua io independien e:
Acua io 1: peces con ol, alimen ados sólo con pienso no mal du an e 7 días.
Acua io 2: peces alimen ados con pienso du an e 7 días, in oxicados con MCs en la die a (dosis única de 120
µg/pez).
Acua ios 3, 5 y 7: Peces alimen ados con pienso + Seleni o sódico (equi alen es a 1.5, 3.0 ó 6.0 µg Selenio/g die a,
espec i amen e) du an e 7 días.
Acua ios 4, 6 y 8: Peces con pienso + Se (1.5, 3.0 ó 6.0 µg Selenio/g die a, espec i amen e) du an e 7 días. Los
peces son in ec ados con una dosis única de 120 µg MC/pez.
Al inal del expe imen o los peces ue on sac i icados, anes esiándolos con hielo, se p ocedió a la ex acción de
los ó ganos, que se ija on en o mol amponado 10% 24 h a 4ºC, y p ocesados pa a su es udio al mic oscopio óp ico
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(e anol, xilol, pa a ina, y inción hema oxilina y eosina) y al mic oscopio elec ónico, de acue do con A encio e al
(2008, Toxicol Pa hol 36:449-458). Los esul ados más signi ica i os ue on los siguien es:
1) En la Fig 1 se obse a la degene ación glucogénica del hígado p oducida po las MCs, mos ando los hepa-
oci os un con o no de células en cebolla. La dosis más baja de Selenio (1,5 µg Selenio/g die a) no ecupe ó dicha
degene ación, aunque ue menos se e a, mien as que las dosis in e medias y ele adas ecupe an la a qui ec u a del
pa énquima hepá ico, con hepa oci os poliéd icos.
2) En la Fig 2 se obse an los cambios degene a i os inducidos po MCs en iñón: a o ia glome ula , glome ulo-
pa ía, eng osamien o de las memb anas basales y capila es enes ados colapsados. Una ecupe ación o al de dichas
lesiones se consigue con la suplemen ación de 6.0 µg Selenio/g die a.
3) Las lesiones ca diacas ca ac e izadas po una ma cada mio ib olisis, edema gene alizado y mic ohemo agias
ue on o almen e supe adas con la dosis de 6.0 µg Selenio/g die a.
4) En ac o gas oin es inal, el p oceso de en e i is nec ó ico p oducido po MCs ue ecupe ado, así como las
lesiones en b anquias.
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REIVINDICACIONES
1. Uso de una composición que comp ende Selenio pa a la elabo ación de un medicamen o ú il en el a amien o
y/o p e ención de e ec os óxicos en peces expues os a mic ocis inas.
2. Uso de una composición que comp ende Selenio pa a la elabo ación de un medicamen o ú il en la ecupe ación
de e ec os óxicos en peces expues os a mic ocis inas.
3. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 ó 2, donde los e ec os óxicos son al e aciones his opa ológicas.
4. Uso según la ei indicación 3, donde las al e aciones his opa ológicas son p oducidas en al menos uno de los
ejidos de la lis a que comp ende hígado, iñón, co azón, b anquias o ac o gas oin es inal.
5. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 4, donde el Selenio se adminis a en una can idad dia ia de
en e 1,5 y 6 µg de Selenio po g de die a.
6. Uso según la ei indicación 5, donde la composición se p esen a en una o ma adap ada a la adminis ación o al
o in ape i oneal.
7. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 6, donde la composición incluye excipien es a macológica-
men e acep ables.
8. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 7, donde la composición comp ende además o a sus ancia
ac i a.
9. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 8 pa a la ab icación de un alimen o uncional.
10. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 9 pa a la ab icación de un complemen o i amínico.
11. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 10 pa a la ab icación de un complemen o nu icional.
12. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 11, donde los peces son cul i ados.
13. Uso según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 12, donde los peces pe enecen al géne o O ech omis sp.
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Fecha de Realización de la Opinión Esc i a: 26.03.2010
Decla ación
No edad (A . 6.1 LP 11/1986) Rei indicaciones 3,4,7,8,10 SÍ
Rei indicaciones 1,2,5,6,9,11,12 y 13 NO
Ac i idad in en i a Rei indicaciones SÍ
(A . 8.1 LP 11/1986) Rei indicaciones 1-13 NO
Se conside a que la solici ud cumple con el equisi o de aplicación indus ial. Es e equisi o ue e aluado du an e la ase de
examen o mal y écnico de la solici ud (A ículo 31.2 Ley 11/1986).
Base de la Opinión:
La p esen e opinión se ha ealizado sob e la base de la solici ud de pa en e al y como ha sido publicada.
In o me sob e el Es ado de la Técnica (Opinión esc i a) Página 4/6

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1. Documen os conside ados:
A con inuación se elacionan los documen os pe enecien es al es ado de la écnica omados en conside ación pa a la eali-
zación de es a opinión.
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Documen o Núme o Publicación o Iden i icación Fecha Publicación
D01 CN 101438768 2009
D02 ATENCIO e al. 2008
D03 GEHRINGER e al. 2003
D04 AMARAL MONTEIRO e al. 2008
D05 ORUN e al. 2007
D06 LIN Y SHIAU 2007
2. Decla ación mo i ada según los a ículos 29.6 y 29.7 del Reglamen o de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de ma zo,
de pa en es sob e la no edad y la ac i idad in en i a; ci as y explicaciones en apoyo de es a decla ación
La solici ud de pa en e se e ie e al uso del selenio pa a la elabo ación de medicamen os ú iles pa a el a amien o, p e ención
y ecupe ación de e ec os óxicos que p oducen las mic ocis inas en los peces ( ei indicaciones independien es 1 y 2). En las
ei indicaciones dependien es se dan algunos de alles del uso del selenio en dichos medicamen os.
No edad y ac i idad in en i a (a . 6 y 8 de la ley de pa en es)
El esumen de la pa en e D1 di ulga el uso del selenio y el glu a ion como adi i os en la alimen ación pa a peces. Es e adi i o
mejo a la esis encia de los peces a los óxicos, en conc e o a las mic ocis inas, ya que p omue e la exp esión de los genes
elacionados con la de oxi icación. Es e documen o, que apo a la misma solución que la solici ud y ha sido p esen ado con
an e io idad a la solici ud, no se conside a es ado de la écnica po habe sido publicado con pos e io idad a la echa de
p esen ación de solici ud y, po ello, no a ec a a la no edad ni a la ac i idad in en i a de la misma (a ículos 6 y 7 de la LP) y
se ci a, únicamen e a í ulo in o ma i o.
El documen o D2 desc ibe el uso del selenio (de 5 a 20 mic og amos/g de pienso) pa a elabo a un alimen o pa a peces con
obje o de p o ege los de los e ec os óxicos que les p oducen las mic ocis inas, conc e amen e se menciona que el selenio
ac úa sob e la pe oxidación lipídica y las enzimas an ioxidan es. El documen o D2 a ec a, po an o, a la no edad de las
ei indicaciones 1, 2, 5, 6, 9, 11, 12 y 13 de la solici ud.
El es o de las ei indicaciones dependien es (3, 4, 7, 8 y 10) no apo an ninguna ca ac e ís ica écnica que, en combinación
con la ei indicación de la que dependen, le o o guen ac i idad in en i a, ya que se conside an me as cues iones p ác icas
ob ias pa a un expe o en la ma e ia.
En las ei indicaciones 3 y 4 se menciona el uso del selenio pa a p e eni , a a y ecupe a las al e aciones his opa ológicas
que p oduce la in oxicación con mic ocis inas. Teniendo en cuen a que el selenio o ma pa e de una las enzimas an ioxidan es
con que el o ganismo se de iende del es és oxida i o, la glu a ion pe oxidasa, es de espe a , que el a amien o con una
can idad e ec i a de selenio elimine o amo igüe cualquie e ec o o consecuencia que se de i e del es és oxida i o celula ,
incluidas las al e aciones his ológicas. De hecho, en el documen o D3, el uso de un suplemen o alimen icio de selenio demos ó
se ú il pa a p o ege a a ones en e a la oxicidad con mic ocis inas. Es e a amien o disminuyó la pe oxidación lipídica y las
al e aciones his opa ológicas p oducidas en el hígado de los a ones. Una ez demos ada la u ilidad del selenio en un g upo de
animales pa a a a una en e medad o p oblema, como es la in oxicación po mic ocis inas, el expe o en la ma e ia u iliza ía
es e mismo p oduc o en o os g upos de animales, po ejemplo en los peces, pa a a a el mismo p oblema con azonables
p obabilidades de éxi o. Po lo an o, se conside a que las ei indicaciones 1 a 13 ca ecen de ac i idad in en i a a la is a del
documen o D3.
OPINIÓN ESCRITA Nº de solici ud: 200803359
Hoja adicional
In o me sob e el Es ado de la Técnica (Opinión esc i a hoja adicional) Página 6/6
Po úl imo, el p oblema que a a de esol e la solici ud es encon a un p oduc o que elimine los e ec os óxicos de las
mic ocis inas p oducen en los peces. Muchos de los documen os del es ado de la écnica, incluida la p opia solici ud, ponen de
mani ies o que es os e ec os óxicos se basan en el es és oxida i o que es as oxinas p oducen en los peces. Así pues, pa a
un expe o en la ma e ia que busca a medicamen os pa a p e eni o a a la in oxicación con mic ocis inas, esul a ía ob io
p oba con aquellos á macos que han mos ado su u ilidad en peces an e un p oblema semejan e, es deci la in oxicación con
o os óxicos que p oduzcan ambién es és oxida i o. Dado que los documen os D4, D5 y D6, demues a la u ilidad del selenio
como p o ec o en e al es és oxida i o p oducido po p oduc os óxicos de di e sa índole (o gano os o ados, cadmio, c omo,
cob e), se conside a, que cada uno de es os documen os D4, D5 y D6 a ec a a la ac i idad in en i a de las ei indicaciones 1
a 13 de la solici ud.