Infectómica y Vacunómica aplicada al estudio del Rotavirus

TESIS DE DOCTORADO
INFECTÓMICA Y
VACUNÓMICA APLICADA AL
ESTUDIO DEL ROTAVIRUS
José Gómez Rial
ESCUELA DE DOCTORADO INTERNACIONAL USC (EDIUS)
PROGRAMA DE DOCTORADO EN AVANCES E NOVAS ESTRATEXIAS EN CIENCIAS
FORENSES
SANTIAGO DE COMPOSTELA
2020
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2!
DECLARACIÓN
DEL AUTOR DE LA TESIS
In ec ómica y Vacunómica aplicada al es udio del
Ro a i us
D.
JOSE GOMEZ RIAL
P esen o(mi( esis,(siguiendo(el(p ocedimien o(adecuado(al(Reglamen o,(y(decla o(que:(
1) La( esis(aba ca(los( esul ados(de(la(elabo ación(de(mi( abajo.(
2) En(su(caso,(en(la( esis(se(hace( e e encia(a(las(colabo aciones(que( u o(es e(
abajo.(
3) (La( esis(es(la( e sión(de ini i a(p esen ada(pa a(su(de ensa(y(coincide(con(la(
e sión(en iada(en( o ma o(elec ónico.(
4) Con i mo(que(la( esis(no(incu e(en(ningún( ipo(de(plagio(de(o os(au o es(ni(
de( abajos(p esen ados(po (mí(pa a(la(ob ención(de(o os( í ulos.(
!
En San iago de Compos ela 12 de Mayo de 2020
Fdo.
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3!
AUTORIZACIÓN
DEL
DIRECTOR
/
TUTOR DE
LA TESIS
In ec ómica y Vacunómica aplicada al es udio del
Ro a i us
P o . D . D. ANTONIO SALAS ELLACURIAGA
P o . D . D. FEDERICO MARTINÓN TORRES
INFORMA/N:
Que la p esen e esis, co esponde con el abajo ealizado po D. JOSE GÓMEZ RIAL, bajo mi
di ección, y a
u o izo
su
p esen ación
, conside ando
que eúne l os
equisi os
exigidos en
el R
eglamen o
de Es udios de
Doc o ado de la USC,
y
que
como di ec o de és a
no
incu e en las causas de
abs ención es ablecidas
en Ley 40/2015.
En San iago de Compos ela 12 de Mayo de 2020
Fdo.
...........
P o . D . An onio Salas
Fdo.
...........
P o . D . Fede ico Ma inón-To es
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4!
A la memo ia de mis pad es
A mi muje Ca olina y mis hijos Manuel y Me ce
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5!
Ag adecimien os
Ha sido un la go camino has a llega a la consecución de es e obje i o. Son
muchas las pe sonas a las que le debo mi más since o ag adecimien o y sin las
cuales es a emp esa no hubiese podido llega a su in.
En p ime luga , mi más p o undo ag adecimien o a mis di ec o es de Tesis, los
p o eso es Fede ico Ma inón To es y An onio Salas Ellacu iaga, Fede y Toño,
mis maes os, mis amigos, mis men o es. Sin ellos hab ía dejado ya hace mucho
iempo es e mundo de la in es igación. Solo su cons an e mo i ación y
en usiasmo dia io me ha pe mi ido llega al inal del camino. Nunca en la ida he
conocido a pe sonas an b illan es y a la ez an gene osas. G andes maes os
en lo p o esional y en la ida, a los que no me cansa é nunca de ag adece que
me hayan inco po ado a su mundo de es e modo. G acias po compa i an o
conmigo.
A odas las pe sonas que o man y han o mado el g upo de in es igación en
acunas, in ecciones y pedia ía (GENVIP) Todos y cada uno de ellos han dejado
una imp on a en es e abajo de algún u o o modo. Una g an amilia dispues a a
colabo a en cualquie abajo que se le solici ase, sin pedi nada a cambio. Han
sido y se án mis compañe os de iaje en es e ing a o, pe o a la ez ascinan e
mundo de la ciencia y la in es igación. En especial debo ag adece a mi
compañe a Ma ía José Cu ás Tuala, oda su labo y apoyo p es ado pa a la
ealización de g an pa e del abajo expe imen al de es a esis.

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6!
A mis compañe os del Se icio de Inmunología del Hospi al Clínico de San iago,
mi luga de abajo, po habe me aguan ado odo es e iempo y habe me
apoyado has a el inal en la consecución de es e abajo.
A mis pad es, Pepe y Me che, donde quie a que es én, pe sonas humildes y
abajado as que enuncia on a an o pa a que sus hijos pudiesen consegui los
éxi os pe sonales y p o esionales ac uales. Lle a é siemp e conmigo una losa al
no pode habe conseguido es e pequeño log o an es que el cap ichoso des ino
me los a eba ase de o ma an p ema u a. Aquí la ienes papá, la esis.
A mis hijos Manuel y Me ce, el u u o es ues o, ap o echad lo que os dejo y
ap ended de mis e o es. Papá ha e minado la esis, al in.
A mi muje Ca olina, el sen ido de mi ida, la azón de mi día a día, mi más
p o unda mo i ación, mi más e oz c í ica y a la ez mi más e ien e admi ado a.
Ella ha su ido más que nadie, odas las ho as que le he obado pa a dedica a
la consecución de es e abajo. Mi compañe a de iaje, pa icipe de mis éxi os y
mis acasos, siemp e a mi lado. G acias Ca o.
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7!
Decla ación de con lic os de in e és
Decla o no ene ningún con lic o de in e és en elación con la esis doc o al.
La p esen e esis no ha gene ado ninguna pa en e.
Es e abajo ha sido inanciado ín eg amen e po el p oyec o de in es igación
en salud PI13/02382 inanciado po el Ins i u o de Salud Ca los III al P o D
Fede ico Ma inón To es en e los años 2014-2016
Du an e el anscu so de la esis he ecibido pagos de la emp esa Me ck Sha p
& Dohme, GlaxoSmi hkline y P ize en concep o de aseso ías cien í icas, no
elacionadas con el con enido de la esis.
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8!
1 Tabla de con enido
1!INTRODUCCIÓN+.......................................................................................................................................+11!
1.1!ROTAVIRUS:!CARACTERÍSTICAS!Y!DESCRIPCIÓN4..................................................................................411!
1.2!CARACTERIZACIÓN!DE!LA!ENFERMEDAD!POR!ROTAVIRUS4.............................................................413!
1.2.1!Fisiopa ogenia....................................................................................................................................................13!
1.2.2!Anclaje.del. o a i us.a.la.memb ana.celula :.suscep ibilidad.gené ica.a.la.in ección......17!
1.3!EPIDEMIOLOGÍA!Y!CARGA!DE!LA!ENFERMEDAD4....................................................................................419!
1.3.1!Ca ga.de.la.en e medad.po .Ro a i us.en.Eu opa.y.en.España...................................................21!
1.4!VACUNAS!FRENTE!AL!ROTAVIRUS4................................................................................................................424!
1.4.1!P ime as.es a egias.......................................................................................................................................24!
1.4.2!Vacunas.ac uales. en e.a.Ro a i us........................................................................................................25!
1.4.3!Nue os.candida os. acunales......................................................................................................................27!
1.5!LA!RESPUESTA!INMUNE!FRENTE!AL!ROTAVIRUS4..................................................................................429!
1.5.1!Respues a.inmune.inna a.en.humanos. as.la.in ección.po . o a i us.....................................29!
1.5.2!Papel.de.las.ci ocinas.en.la.de ensa. en e.al. o a i us...................................................................31!
1.5.3!Acción.de.las.células.inmunes.inna as.en.la.in ección......................................................................32!
1.5.4!Respues a.inmune.humo al. as.la.in ección.po . o a i us...........................................................34!
1.5.5!Respues a.inmune.celula .............................................................................................................................35!
1.5.6!Respues a.inmune. as.la. acunación.....................................................................................................36!
1.6!CORRELATOS!DE!PROTECCIÓN!PARA!LAS!VACUNAS!FRENTE!A!ROTAVIRUS4...........................438!
1.6.1!RV-sIgA.como.co ela o.de.p o ección....................................................................................................39!
1.6.2!Nue os.co ela os.de.p o ección.al e na i os......................................................................................42!
1.6.3!An icue pos.sec e o es. en e.a. o a i us.(RV-SIg)...........................................................................42!
1.6.4!Células.B.memo ia.y.células.plasmá icas.especí icas.de. o a i us.............................................43!
1.6.5!Células.T.especí icas. en e.a. o a i us...................................................................................................43!
1.7!ORGANIZACIÓN!DE!LA!RESPUESTA!INMUNE!EN!LA!MUCOSA!INTESTINAL4...............................445!
1.7.1!El.sis ema.inmune.de.la.mucosa.(MALT)...............................................................................................46!
1.7.2!Los.di e en es.sis emas.MALT.y.la.comunicación.en e.ellos........................................................47!
1.8!ROTAVIRUS!COMO!ENFERMEDAD!SISTÉMICA:!“ROTAVOLUTION”4.................................................451!
2!JUSTIFICACIÓN+DE+LA+TESIS+................................................................................................................+54!
3!OBJETIVOS+.................................................................................................................................................+56!
4!MATERIAL+Y+MÉTODOS+.........................................................................................................................+57!
4.1!SUJETOS!DEL!ESTUDIO4................................................................................................................................................457!
4.1.1!C i e ios.de.inclusión.y.exclusión.en.el.es udio....................................................................................57!
4.2!MUESTRAS!RECOGIDAS!PARA!EL!ESTUDIO4...............................................................................................................459!
4.3!VACUNA!EMPLEADA!DURANTE!EL!ESTUDIO4............................................................................................................460!
4.4!ANTÍGENOS!DE!ROTAVIRUS!EMPLEADOS!ENSAYO!ESTIMULACIÓN!IN!VITRO4......................................................460!
4.5!PROCEDIMIENTOS!REALIZADOS!DURANTE!EL!ESTUDIO4.........................................................................................461!
4.5.1!Ex acción.de.ARN.y.p epa ación.de.la.mues a................................................................................61!
4.5.2!Análisis. ansc ip ómico.median e.ARN-Seq........................................................................................61!
4.5.3!De e minación.de.RV-IgA.en.mues as.de.sue o.y.sali a.median e.ELISA.di ec o..............65!
4.5.4!De e minación.po .mul iplexado.de.ci ocinas.en.sue o.y.sali a.median e.xMAP-
Luminex
â
...............................................................................................................................................................................66!
4.5.5!E aluación.de.la. espues a.inmune.celula .median e.ensayo.de.es imulación.en.sang e.
comple a.(WBS,.whole.blood.s imula ion.assay)..................................................................................................68!
4.5.6!C iop ese ación.de.sang e.comple a.....................................................................................................69!
4.5.7!Análisis.de.exp esión.de.ma cado es.de.ac i ación.en.supe icie.celula .median e.
ci ome ía.de. lujo..............................................................................................................................................................69!
4.5.8!Inmunoblo ing.sob e.elec o o esis.bidimensional.de.p o eínas.de. o a i us....................70!
4.6!ANÁLISIS!ESTADÍSTICO4...............................................................................................................................................474!
5!RESULTADOS+............................................................................................................................................+75!
5.1!ESTUDIO!DE!LA!RESPUESTA!HUMORAL!EN!LA!MUCOSA!ORAL!EN!RESPUESTA!A!LA!INFECCIÓN!NATURAL!Y!EN!
LA!VACUNACIÓN:!COMPARACIÓN!CON!LA!RESPUESTA!SISTÉMICA4....................................................................................475!
5.1.1!Análisis.de.RV-IgA.en.mues as.de.sue o/sali a.en.la.coho e.de.pacien es.in ec ados....75!
!
!
9!
5.1.2!Análisis.de.RV-IgA.en.mues as.de.sue o/sali a.en.la.coho e.de.pacien es. acunados...77!
5.1.3!Análisis.de.la.in luencia.de.la.lac ancia.sob e.la.inmunogenicidad.de.la. acunación.y.el.
GMFR.83!
5.1.4!Compa ación.en e.las.coho es.de.indi iduos. acunados.e.in ec ados...................................85!
5.1.5!Co elación.en e.las.mues as.de.sali a.y.sue o.en.ambas.coho es........................................87!
5.2!ESTUDIO!DE!LA!RESPUESTA!DE!CITOCINAS!EN!MUCOSA!ORAL!ENTRE!EL!PACIENTE!VACUNADO!E!INFECTADO:!
COMPARACIÓN!CON!LA!RESPUESTA!SISTÉMICA4...................................................................................................................489!
5.2.1!Pe il+de+ci ocinas+en+sue o+y+sali a+en+la+coho e+de+pacien es+in ec ados................89!
5.2.2!Pe il.de.ci ocinas.en.sue o.y.sali a.en.la.coho e.de.pacien es. acunados............................92!
5.2.3!Análisis.compa a i o.en e.el.pe il.de.ci ocinas.de.la.coho e.de.pacien es.in ec ados.y.
acunados...............................................................................................................................................................................95!
5.2.4!Co elación.en e.los. alo es.de.ci ocinas.ob enidos.y.el.cu so.clínico.de.los.pacien es.
in ec ados...............................................................................................................................................................................98!
5.3!ANÁLISIS!DE!LA!RESPUESTA!INMUNE!CELULAR!A!DIFERENTES!ANTÍGENOS!DE!ROTAVIRUS!EN!AMBAS!
COHORTES4.............................................................................................................................................................................4104!
5.3.1!Respues a.inmune.celula .a.an ígenos.de. o a i us.en.la.coho e.de.pacien es.in ec ados
.104!
5.3.2!Respues a.inmune.celula .a.an ígenos.de. o a i us.en.la.coho e.de.pacien es.
acunados............................................................................................................................................................................106!
5.3.3!Compa ación.de.la. espues a.inmune.celula .ob enida.en e.la.coho e.de.pacien es.
in ec ados.y. acunados..................................................................................................................................................112!
5.3.4!Co elación.de.la. espues a.inmune.celula .con.el.cu so.clínico.en.la.coho e.de.
pacien es.in ec ados........................................................................................................................................................114!
5.3.5!Co elación.en e.la.inmunidad.celula .y.la.inmunidad.humo al.en.la.coho e.de.
pacien es. acunados.......................................................................................................................................................116!
5.4!ESTUDIO!COMPARATIVO!DE!LOS!PERFILES!MOLECULARES!DE!INMUNIZACIÓN!HUMORAL!EN!EL!SUERO!TRAS!
LA!INFECCIÓN!NATURAL!Y!TRAS!LA!VACUNACIÓN4...........................................................................................................4118!
5.5!ANÁLISIS!DEL!TRANSCRIPTOMA!EN!EL!PACIENTE!INFECTADO!Y!VACUNADO4...................................................4121!
5.5.1!Análisis.del. ansc ip oma.en.el.pacien e.in ec ado. s.g upo.con ol...................................121!
5.5.2!Análisis.del. ansc ip oma.en.el.pacien e. acunado. s.g upo.con ol...................................135!
5.6!CARACTERIZACIÓN!DE!LA!RESPUESTA!INMUNE!CELULAR!TRAS!LA!INFECCIÓN!Y!TRAS!LA!VACUNACIÓN!DE!
ROTAVIRUS4............................................................................................................................................................................4136!
5.6.1!Ca ac e ización.de.la. espues a.celula .du an e.la. ase.aguda.de.la.in ección.po .
o a i us...............................................................................................................................................................................136!
5.6.2!Ca ac e ización.de.la. espues a.celula . as.la. acunación. en e.al. o a i us................138!
6!DISCUSIÓN+..............................................................................................................................................+140!
6.1!ESTUDIO!DE!LA!RESPUESTA!HUMORAL!EN!LA!MUCOSA!ORAL!EN!RESPUESTA!A!LA!INFECCIÓN!NATURAL!Y!A!LA!
VACUNACIÓN4.........................................................................................................................................................................4140!
6.1.1!Ro a i us-IgA.sali a .como.co ela o.de.p o ección.al e na i o.............................................141!
6.1.2!In e e encia.de.la.lac ancia.ma e na.en.el.cálculo.de.la.con e sión....................................142!
6.1.3!Di e encias.en.los.ni eles.de.an icue pos.alcanzados.median e.la.in ección.na u al.y.la.
acunación..........................................................................................................................................................................144!
6.1.4!Co elación.en e.los.compa imen os.sé ico.y.mucosa.o al.....................................................145!
6.2!RESPUESTA!DE!CITOCINAS!EN!SUERO!Y!EN!MUCOSA!ORAL!TRAS!LA!INFECCIÓN!NATURAL!DE!ROTAVIRUS!Y!
TRAS!LA!VACUNACIÓN4.........................................................................................................................................................4146!
6.2.1!Respues a+inmune+mediada+po +ci ocinas+en+ espues a+a+la+in ección+po +
o a i us+en+mucosa+o al.........................................................................................................................................146!
6.2.2!Respues a.inmune.mediada.po .ci ocinas.en. espues a.a.la. acunación.............................153!
6.2.3!Compa ación.en e.la. espues a.de.ci ocinas.en.la.in ección.na u al.y. as.la. acunación
.154!
6.2.4!Compa ación.en e.la. espues a.de.ci ocinas.en.sue o.y.sali a................................................155!
6.3!ANÁLISIS!DE!LA!RESPUESTA!INMUNE!CELULAR!A!DIFERENTES!ANTÍGENOS!DE!ROTAVIRUS!EN!AMBAS!
COHORTES4.............................................................................................................................................................................4156!
6.3.1!Respues a.inmune.celula .en.el.pacien e.in ec ado........................................................................156!
6.3.2!Respues a.inmune.celula .en.el.pacien e. acunado.......................................................................157!
6.3.3!Cambios.en.el.pe il.de.ci ocinas. as.la. acunación......................................................................158!
6.3.4!Compa ación.de.la. espues a.en e.ambas.coho es.....................................................................159!
In oducción
!
16!
Figu a 2: Modelo de dia ea inducida po o a i us (De Robe
F. Raming J Vi ol, 2004 Vol 78 Nº 19)
A.
La célula epi elial es in ec ada po el i us p esen e en
el lumen in es inal, se p oduce la decapsidación i al y la
o mación del i oplasma (Vi) y la libe ación del i us y las
p o eínas i ales. La en e o oxina NSP4 ( iángulo ojo) pod ía
se libe ada a a és de una ía sec e o a no habi ual. La
libe ación de NSP4 en el in e io de la célula p oduce libe ación
del Ca++ desde sus compa imen os in e nos, p incipalmen e el
e ículo endoplasmá ico, aumen ando la concen ación de
Ca++ in acelula . También la en e o oxina NSP4 libe ada
du an e la in ección in e acciona con las uniones es echas
in e celula es, pe mi iendo la salida de agua y elec oli os
en e las células ( lecha e de) NSP4 se une a su ecep o
especí ico en la célula y ac i a una cascada de señalización a
a és de la PLC e IP3 que esul a en la libe ación de Ca++ y
aumen o de su concen ación in acelula . Es e inc emen o
p oduce la deso ganización del ci oesquele o de las
mic o ellosidades y inalmen e sec eción de iones como el Cl-
hacia el ex e io .
B.
Se mues a la a qui ec u a no mal del in es ino delgado
con el sis ema ne ioso en é ico y el sis ema gangliona en los
di e en es ni eles de la submucosa.
C.
Se mues a el a co e lejo en el que el sis ema ne ioso
en é ico (SNE) puede ecibi señales del epi elio de las
mic o ellosidades y ac i a el epi elio de las células de la c ip a.
La imagen 1 mues a las ellosidades eñidas pa a una p o eína
del sis ema ne ioso en é ico que e ela la g an ine ación
p esen e ( inción ama illa) La imagen 2 mues a que los
en e oci os de las ellosidades in ec ados pueden es imula el
SNE a a és de la libe ación basola e al de NSP4.

In oducción
!
17!
1.2.2 Anclaje del o a i us a la memb ana celula : suscep ibilidad gené ica a la
in ección
!
El o a i us p e e en emen e in ec a los en e oci os illosos e minalmen e
di e enciados de la pa e supe io del in es ino delgado (20). El p ime paso en
el p oceso de in ección es la diges ión de la pa ícula i al mediada po p o easas
simila es a ipsina localizadas en el lumen in es inal del huésped (21, 22).
Du an e es e paso de ac i ación se p oduce la up u a de la p o eína de cápside
i al VP4 en dos agmen os p incipales, VP8* po el ex emo N- e minal y VP5*
en el lado C- e minal (23, 24). Es e p ocesamien o p o eolí ico es esencial pa a
la in ec i idad del i us y pe mi e un anclaje es able al epi elio de la mucosa
in es inal (25).
Es udios ecien es han iden i icado el ligando sob e la mucosa in es inal
econocido po es a molécula VP8* del o a i us; se a a de oligosacá idos
pe enecien es a los an ígenos de g upo sanguíneo isula (HBGA, his o-blood
g oup an igens) (26-28). Es os ca bohid a os HBGA simila es a los an ígenos
Lewis y ABO se encuen an gené icamen e de e minados y es án p esen es en
las células epi eliales in es inales, en las sec eciones mucosas y en la supe icie
de los hema íes. Son, además, ac o de anclaje pa a o os pa ógenos
gas oin es inales como son Helicobac e pilo y ó No o i us (29)
Es os HBGA compa en un esiduo común de a-1,2-Fucosa unido, añadido po
el enzima a-1,2- ucosil ans e asa. Es e enzima es codi icado po el gen FUT2 y
de e mina un eno ipo “sec e o ” pa a es os an ígenos HBGA. Los indi iduos
In oducción
!
18!
mu an es pa a FUT2 son conside ados “no-sec e o es” po ca ece de es a
ac i idad enzimá ica y po an o ausen es de an ígenos a-1,2- ucosilados en los
ejidos de la mucosa. Es os indi iduos mues an una esis encia na u al a la
in ección sin omá ica po o a i us, demos ando se un de e minan e de
suscep ibilidad impo an e al o a i us (30).
Sin emba go, la en ada del o a i us en la célula es un p oceso complejo que
implican a ios pasos de anclaje a di e en es ecep o es. La p o eína i al VP8*
media la in e acción especí ica con glicanos celula es, pe o se equie en o os
ecep o es (componen es endosomales, in eg inas, p o eínas de choque
é mico) pa a que el p oceso de in ección se comple e con éxi o (31-33).
In oducción
!
19!
1.3 EPIDEMIOLOGÍA Y CARGA DE LA ENFERMEDAD
La in ección po o a i us es la causa de en e el 40-50% de las dia eas g a es
agudas en niños en odo el mundo (34, 35). A la edad de 5 años, el 95% de los
niños hab án con aído la en e medad y se mues an especialmen e ulne ables
los niños de en e 6 meses y dos años, aunque la in ección po o a i us puede
a ec a a cualquie edad del indi iduo (36, 37).
Los o a i us son al amen e con agiosos en e los niños. Es ecuen e encon a
casos de in ecciones epe idas con di e en es cepas i ales, y muchos niños
su en a ios episodios de in ección po o a i us en el p ime año de ida. La
p ime a in ección iende a se la más se e a y con las sucesi as in ecciones el
indi iduo adquie e inmunidad en e al i us (38).
Se epo an anualmen e 114 millones de casos de in ección po o a i us en
niños meno es de 5 años en el mundo, de los cuales 24 millones de casos
equie en isi a al cen o de salud y 2,3 millones de casos equie en de
hospi alización (35). En el año 2013, la in ección po o a i us se asoció con
ap oximadamen e 200.000 mue es en niños meno es de 5 años en odo el
mundo (39). Aunque la p e alencia de la in ección po o a i us es mundialmen e
simila (30-50%), >90% de la mo alidad se asocia a países en ías de desa ollo,
debido undamen almen e al limi ado acceso a los se icios básicos de salud,
al a de las e apias de hid a ación necesa ias y una mayo p e alencia de o as
condiciones como la desnu ición (40).
In oducción
!
20!
La in ección po o a i us se p oduce a edades más emp anas en los países en
ías de desa ollo que en los países desa ollados, con asas de hospi alización
a los 8 meses de ida del 43% en Á ica y 27% en Eu opa (40).
Además, la es acionalidad se co elaciona con el ni el de ida de los países, con
mayo nume o de en e medad es acional en países desa ollados que en países
en ías de desa ollo (41).
Figu a 3: Mo alidad asociada a Ro a i us en niños meno es de 5 años en el año 2013
La OMS es ima que du an e el año 2013, 215.000 niños meno es de 5 años allecie on a causa de una in ección po o a i us.
Imagen ob enida de:
h p://www.who.in /immuniza ion/moni o ing_su eillance/bu den/es ima es/ o a i us/ o a i us_dea hs_map_b.jpg?ua=1
In oducción
!
21!
1.3.1 Ca ga de la en e medad po Ro a i us en Eu opa y en España
Las mue es po dia ea asociada a o a i us ocu en con menos ecuencia en
las egiones indus ializadas como Eu opa. A pesa del bajo núme o de mue es
anuales, la ca ga de la en e medad po o a i us es conside able, con más de
87.000 hospi alizaciones y casi 700.000 consul as en cen os de salud en niños
meno es de 5 años en los países indus ializados. En los países eu opeos la
in ección po o a i us ambién p oduce mue es, con 231 niños anualmen e (42).
Los o a i us son la causa única más común de gas oen e i is en niños meno es
de 5 años de edad en Eu opa, donde es es eces más p obable la
hospi alización que en gas oen e i is po o os causas (43)
En Eu opa, las in ecciones nosocomiales adqui idas po o a i us a ec an
ap oximadamen e al mismo núme o de niños que las in ecciones adqui idas en
comunidad (44), alcanzando la ci a de has a el 40% de las dia eas
nosocomiales adqui idas en Polonia, Aus ia y F ancia (42, 45, 46). Es udios
desa ollados en F ancia e I alia demues an que más del 15% de los niños
mues an sin oma ología de la en e medad as el al a hospi ala ia (47, 48). Los
cos es asociados a la in ección nosocomial son conside ables y o man pa e de
los p incipales cos es hospi ala ios asociados a la en e medad po o a i us en
la egión eu opea (45).
En España, la ca ga de la en e medad se conside a ele ada en elación con el
es o de los países eu opeos (Tabla 1) con has a 7 mue os al año, más de 7000
hospi alizaciones y más de 60.000 isi as a los cen os de salud (42). Se es ima

In oducción
!
22!
que el 31,6% de las admisiones hospi ala ias po gas oen e i is son debidas al
o a i us con una asa de hospi alización de 480 casos po cada 100.000 niños
meno de 5 años y un cos e hospi ala io medio anual de 123.262 eu os (49).
In oducción
!
23!
Tabla 1: Incidencia anual de la en e medad po o a i us en niños meno es de 5 años en Eu opa
Figu a 4: Ca ga de la en e medad po o a i us en Eu opa y el Mundo
La pi ámide mues a el iesgo de su i la en e medad po o a i us de un niño an es de alcanza los 5 añosen la
Unión Eu opea y su compa ación con el es o del mundo (Da os ob enidos de Pa asha UD e al Eme g In ec Dis
2003 9(5)
In oducción
!
24!
1.4 VACUNAS FRENTE AL ROTAVIRUS
Desde el p incipio, el obje i o de la acunación en e al o a i us ha sido eplica
el g ado de p o ección en e a la en e medad que sigue a la in ección na u al.
Po an o, los p og amas de acunación se cen aban en p e eni la en e medad
g a e y/o mode ada pe o no necesa iamen e la en e medad le e asociada con
o a i us.
1.4.1 P ime as es a egias
!
Las p ime as in es igaciones pa a desa olla una acuna en e a o a i us
segu a y e icaz comenzó du an e los años 70 cuando se demos ó que
in ecciones p e ias con cepas de o a i us animales gene aban p o ección en e
a in ecciones expe imen ales con o a i us humanos (50). De es e modo, se
desa olla on es acunas en e a o a i us no humanas, dos de ellas con cepas
de o a i us bo inas RIT4237 con una cepa G6P6 (51) y WC3 con G6P7 (52), y
una cepa de o a i us de simio Rhesus RRV con G3P3 (53). Todas es as
acunas demos a on una e icacia a iable du an e los ensayos clínicos, pe o
ob u ie on esul ados pa icula men e decepcionan es en los países en ías de
desa ollo (54, 55). En el año 2001, China in odujo una acuna en e a o a i us
pa a inmunización de niños basada en una cepa a enuada de co de o G10P12
desa ollada y p oducida po el Ins i u o Lanzhou, aunque la e icacia y los
esul ados del ensayo clínico no son conocidos.
A la is a de los malos esul ados ob enidos a pa i de acunas mono alen es
basadas en cepas animales a enuadas, los es ue zos se cen a on en desa olla
cepas humanas a enuadas o cepas de o a i us easo an es animales-
In oducción
!
25!
humanas. La p ime a acuna o al mul i alen e easo an e desa ollada ue
Ro aShield™ (RRV-TV), una acuna e a alen e que con enía una mezcla de
cua o cepas i ales G1 a G4 con genes easo an es humanos- hesus (56).
RRV-TV demos ó al a e icacia en e a las o mas g a es-mode adas de la
en e medad (80-100%) en los ensayos clínicos desa ollados en EEUU,
Finlandia y Venezuela (57-59), y ue licenciada en agos o de 1998 pa a su uso
u ina io en EEUU (60).
Sin emba go, as la inclusión de es a acuna en el calenda io de inmunización
se epo a on a ios casos de in aginación in es inal asociada a la acuna (61)
con mayo iesgo a los 3-10 días de la p ime a de las es dosis (62). El iesgo
de es e e ec o ad e so de la acuna se es imó en 1/10.000 niños acunados (63)
y hecho po el cual Ro ashield™ ue e i ado del me cado ame icano 14 meses
as su in oducción y se de u ie on odos los ensayos que se es aban ealizando
en los demás países.
1.4.2 Vacunas ac uales en e a Ro a i us
!
!
Ac ualmen e exis en cua o acunas en e a o a i us licenciadas po la OMS:
Ro a ix™ (GlaxoSmi hKline, 2009), Ro aTeq™ (Me ck & Co, 2008) Ro a ac™
(Bha a Bio ech, 2018) y ROTASIIL™ (Se um Ins i u e o India, 2018). Sin
emba go, las dos ul imas en licencia se Ro a ac™ y Ro asiil™ ac ualmen e solo
se usan en India (ambas acunas) y Pales ina (Ro a ac™). Adicionalmen e,
exis en o as dos acunas disponibles en el me cado p i ado nacional de
In oducción
!
32!
ac i ación a a és de la p o eína i al NSP1 (103). En es e sen ido, la cepa de
o a i us humana Wa es muy e icien e bloqueando la anslocación nuclea del
NFKB (95) y limi ando de es e modo la inducción de a ios ipos de IFN (91).
1.5.3 Acción de las células inmunes inna as en la in ección
!
Las células dend í icas han demos ado su impo ancia pa a esol e la
in ección po o a i us y la p o ección en e a la e-in ección en modelos mu inos
(104, 105). T as la ac i ación y madu ación de las células dend í icas, és as
mig an a las placas de Peye in es inales y mues as signos de ac i ación e
inducción de ci ocinas (106). La ac i ación de las células dend í icas se ealiza
as de ección del ARN i al po el ecep o endosomal TLR7 que induce la
exp esión de IFN-a/b (107) Sin emba go aun no se ha de e minado que sub ipo
de células dend í icas son impo an es en con ola la eplicación del o a i us
du an e la in ección in i o.
Además de es as células dend í icas, o as células agocí icas, los mac ó agos
juegan un papel impo an e en el acla amien o de la in ección, aunque su papel
exac o no ha sido aún escla ecido (108).

In oducción
!
33!
Figu a 5: De ección de la in ección po o a i us e inducción de la espues a inmune inna a en las células epi eliales
in es inales. T as la en ada del RV en la célula, los senso es MDA5 y RIG-I de ec an ARN i al y a a és de p o eínas
mi ocond iales de señalización an i i al (MAVS) inducen la ac i ación de los ac o es de espues a a IFN (IRF3/7) y la exp esión
de IFN-a/b. La in ección po o a i us ambién ac i a el ac o de ansc ipción NFKB. Todos es os ac o es de ansc ipción se
asladan al núcleo donde induce la exp esión de IFN y o as ci ocinas como IL-8. Se ha desc i o ambién una ía al e na i a de
de ección del o a i us a a és de TLR3 y su adap ado TRIF que conduce a la ac i ación de IRF3/7 e inducción de IFN. Los e ec os
p o ec o es del IFN es án mediados po ac i ación de la ía STAT1/2 y ac i ación de los genes es imulados po IFN (ISG) e
inhibición de la eplicación del o a i us a a és de un mecanismo desconocido. La libe ación de ci ocinas p oduce el
eclu amien o de o as células inmuni a ias al luga de la in ección. La p o eína de o a i us NSP1 puede in e e i con la
espues a del IFN, deg adando los ac o es IRF3/7. También algunos o a i us inhiben la ac i ación del ac o NFKB a a és de la
deg adación mediada po NSP1 de ac o es asociados a NFKB La in ección po o a i us p e iene la acumulación nuclea de las
moléculas ac i adas STAT1/2 a a és de un componen e i al no iden i icado.
In oducción
!
34!
1.5.4 Respues a inmune humo al as la in ección po o a i us
!
En uno de los abajos más impo an es ealizados has a la echa, Velázquez
(37) en un seguimien o ealizado du an e 2 años a 200 niños sanos, es udió la
espues a inmune asociada a la in ección po o a i us. Según es e abajo, la
p ime a in ección po o a i us ípicamen e esul aba en una GEA, sin emba go,
la p o ección desa ollada en e a in ecciones pos e io es de o a i us, el iesgo
de desa olla en e medad descendía p og esi amen e, de o ma que as dos
in ecciones no se obse aba en e medad mode ada o g a e.
La in ecciones sin omá icas o asin omá icas con e ían g ados simila es de
p o ección (37, 109), esal ando la impo ancia de la in ección asin omá ica po
o a i us en la p o ección en e al o a i us (110). La inmunidad as in ección
neona al no con e ía p o ección pe o en algunos casos e i aba el desa ollo de
en e medad g a e (111).
La p ime a e idencia de que la p o ección en e al o a i us e a especí ica de
se o ipo y se elacionaba con los ni eles de an icue pos neu alizan es
homo ípicos del i us p o inie on de los es udios de Chiba e al (112). O os
es udios pos e io es sugi ie on que la inmunidad humo al en e al o a i us se
co elacionaba con p o ección (113, 114). T as la p ime a in ección po o a i us
en niños se encon aban espues as de an icue pos neu alizan es homo ípicas
y he e o ípicas, lo que suge ía la p esencia de epí opos neu alizan es
c oss eac i os (78, 115). Aquellos niños con espues as he e o ípicas endían a
se de mayo edad y enían an icue pos en e a o a i us p e-exis en es (112).
In oducción
!
35!
Pos e io men e se in es igó en mues as de heces la p esencia de an icue pos
IgA especí icos en e a o a i us y se demos ó que a ni eles al os
co elacionaba muy bien con p o ección (116, 117). Los an icue pos IgA sé icos
especí icos en e a o a i us ambién mos aban ac i idad neu alizan e y
eaccionaban con epí opos que inducían p o ección he e o ípica (118).
Los an icue pos ma e nos adqui idos ansplacen a iamen e podían con e i
cie o ni el de p o ección en e al o a i us en los p ime os meses de ida (119)
La lac ancia ma e na p opo ciona p o ección pasi a a a és de mecanismos
más allá de los an icue pos (120, 121).
Sin emba go, a pesa de la impo ancia de las espues a inmunes especi icas
en e a o a i us, la p o ección as la in ección na u al no necesa iamen e se
co elaciona con la p esencia de an icue pos neu alizan es se o ipo-especí icos
(122) Las p o eínas de o a i us VP2 y VP6 aunque no gene an an icue pos
neu alizan es po an epí opos inmunodominan es y se han encon ado
an icue pos di igidos en e a es os an ígenos en mues as de sue os de
indi iduos con alecien es (123), así como an icue pos en e a NSP2 y NSP4
(124-126) El signi icado clínico de es os an icue pos especí icos no-
neu alizan es es desconocido.
1.5.5 Respues a inmune celula
!
La in ección na u al po o a i us no es g an induc o a de la sec eción de
ci ocinas ni de células CD8+ especí icas en e al i us (127) aunque es as
células pueden de ec a se en ci culación in la mayo ía de los adul os (128) Del
In oducción
!
36!
mismo modo se de ec an células CD4+ especí icas en e a o a i us ci culan es
en mues as de sang e de niños en la ase de con alecencia (129) Las células
dend í icas han demos ado ene capacidad de sec e a ci ocinas Th1 as la
in ección po o a i us (106) aunque son menos e icien es en la p esen ación de
an ígenos en indi iduos jó enes que en adul os (127). El papel de las espues as
inmunes mediadas po células en la p o ección en e a la in ección po o a i us
en humanos es á aun po cla i ica (78).
1.5.6 Respues a inmune as la acunación
!
La inmunidad he e óloga desa ollada en e ne os as la acunación con cepas
de o a i us bo inas en e a cepas humanas cons i uyó la base pa a el uso de
cepas bo inas como los p ime os candida os acunales humanos en e a
o a i us (130, 131) Aunque es a cepa de i us bo ina no compa ía epí opos
neu alizan es con las cepas humanas conocidas, inducía una po en e espues a
p o ec o a he e o ípica (132) Pos e io men e se demos ó que no solo los ni eles
de an icue pos neu alizan es en e a o a i us ep esen aban el co ela o de
p o ección y se desa olla on o os concep os di e en es de acunación
basándose en acunas easo an es mul i alen es que con enían moléculas de
VP4 y VP7 ep esen a i as de las cepas humanas ci culan es (base pa a las
acunas Ro aShield™ y Ro aTeq™) (65, 131). En con as e, la acuna
mono alen e de se o ipo G1P8 único (Ro a ix™) se desa olló en base a la
gene ación de la espues a inmune he e o ípica p oducida en el cu so de
sucesi as in ecciones na u ales (37).
In oducción
!
37!
Ambas es a egias de acunas en e a o a i us han demos ado excelen es
asas de p o ección, pa icula men e en e a en e medad g a e que equie e
hospi alización (69, 133) y han demos ado desa olla inmunidad homo ípica y
he e o ípica (78) La p o ección que gene an ambas acunas co elaciona la
mayo ía de las eces pe o no siemp e con los ni eles de an icue pos IgG o IgA
especí icos en e a o a i us, pe o no así con los ni eles de an icue pos
neu alizan es especí icos (134) Así, los an icue pos neu alizan es especí icos
pa a la p o eína VP7 (se o ipo G) gene ados po la acuna pen a alen e
Ro aTeq™ son demasiado bajos pa a el ele ado ni el de p o ección que
gene an. Además, indi iduos con de iciencia selec i a IgA se encuen an
p o egidos de la en e medad g a e a a és de una espues a compensa o ia IgG
especi ica que es mayo que la que se gene a en indi iduos IgA compe en es.
En el sue o de indi iduos acunados se encuen an an icue pos IgA
neu alizan es especí icos de o a i us que econocen epí opos especí icos de
VP4 y VP7 y que han demos ado p oduci una amplia inmunidad he e o ipica
(118) Del mismo modo, se ha p opues o como posible co ela o de p o ección de
la acunación ni eles de células plasmá icas o células B especi icas en e a
o a i us que po an ecep o es de mig ación in es inales (135).
Con elación a la inmunidad celula p opo cionada po las acunas de o a i us
hay muy poca in o mación disponible. Se conoce que los indi iduos acunados
mues an células dend í icas ci culan es capaces de es imula células T
especí icas en e a o a i us y p oduci ci ocinas Th1 (9) Asimismo, niños

In oducción
!
38!
a ec ados con inmunode iciencia se e a combinada pueden desa olla GEA as
la acunación con o a i us (136)
1.6 CORRELATOS DE PROTECCIÓN PARA LAS VACUNAS FRENTE A ROTAVIRUS
Aunque las acunas ac uales en e a o a i us han demos ado se al amen e
e ec i as en la p e ención de la en e medad g a e po di e en es ipos de
o a i us, el mecanismo de p o ección gene ado no es á del odo cla o (79) T as
la acunación se ha obse ado en odo el mundo la gene ación de inmunidad
homo ípica y he e o ípica, pe o el ni el has a el que es a p o ección he e o ípica
puede alcanza comienza aun a se explo ado, especialmen e en los países en
ías de desa ollo (78) La igilancia epidemiológica que se lle a a cabo en los
países con p og amas de acunación e ela án el g ado en que es a p o ección
he e o ípica a ec a a la di e sidad de las cepas de o a i us y si las a iaciones
en es a di e sidad es a ibuible a la luc uación na u al o ep esen an especies
nue as de o a i us que consiguen escapa a la p esión de los p og amas de
acunación (137)
Hay una necesidad u gen e en de e mina los mecanismos y co ela os de
p o ección de las espues as inmunes especi icas en e al o a i us en humanos
que puedan se adqui idas a a és de la in ección na u al o as la acunación.
Sob e odo, po que se ha demos ado que la e ec i idad de las acunas
depende, al menos en pa e del es a us socioeconómico de los países (138-140)
In oducción
!
39!
1.6.1 RV-sIgA como co ela o de p o ección
Has a la echa se han p opues o a ios mecanismos de p o ección gene ados
as la acunación que se esumen en la Figu a 6. En la g an mayo ía de los
ensayos clínicos ealizados has a la echa se ha empleado la inducción de IgA
sé icas especí icas de o a i us (RV-sIgA) como ma cado de espues a acunal
(141-144) y a mayo es se han epo ado los í ulos de an icue pos neu alizan es
se o ipo-especí icos en algunos ensayos clínicos ( e isado en (81) De es e
modo, la espues a a la acuna se exp esa en asas de se ocon e sión o como
el po cen aje de niños con aumen o de í ulo de an icue pos en al menos es
eces sus ni eles basales.
La e isión sis emá ica del alo de los an icue pos RV-sIgA como co ela o de
e icacia de la acuna demos ó que an o el ni el de p o ección como el
man enimien o de es a as la acunación e a meno en aquellos indi iduos con
meno asa de se ocon e sión y que las asas de mo alidad in an il en <5 años
mos aba una co elación in e sa con los í ulos de IgA (138) En un es udio
ecien e se ha demos ado la co elación en e el ni el de an icue pos unidos al
agmen o sec e o ( an o IgA como IgM) y el ni el de p o ección en e a la
en e medad, mos ando así una ínculo en e inmunidad mucosa y en e medad
(145)
In oducción
!
40!
Sin emba go, la medición de los í ulos de RV-sIgA no p opo ciona ninguna
in o mación ace ca de las p o eínas de o a i us diana de la p o ección
he e o ípica. Se han suge ido epí opos c oss eac i os de VP4 y VP7 no
neu alizan es o an ígenos incluidos en la p o eína VP6 como posibles
candida os (79) An icue pos especí icos en e a VP6 se han demos ado a al os
ni eles as la in ección na u al y la acunación (146, 147) Es á cla o que
an icue pos en e a VP6 son los an icue pos más comunes p oducidos po las
Figu a 6: Mecanismos p opues os de inmunidad mediada po an icue pos en e al o a i us. (1) Células plasmá icas p esen es
en la mucosa in es inal incluyen poblaciones (2) sec e o as de IgA e IgG monomé ica que pueden se de ec adas en ci culación
en g an p opo ción (3) sec e o as de IgA dimé icas (unidas po la cadena J) que de igual modo pueden se de ec adas en sang e.
(4) IgA dimé ica (y ambién IgM pen amé ica) in e ac úan con el ecep o de poli-inmunoglobulina (pIgR) en la supe icie
basola e al del en e oci o y po ansci osis a la supe icie apical (5) La IgA dimé ica es libe ada al lumen in es inal po p o eólisis
unida al componen e sec e o . Su unción en el lumen in es inal es uni se al o a i us y p oduci la exclusión de la mucosa
in es inal y p e eni la in ección. (6) Cop o-IgA puede se de ec ada en las heces y se co elaciona ocn los ni eles en el duodeno
p opo cionando un ma cado de inmunidad en el luga de la in ección (7) IgA sec e o a ambién puede se de ec ada en sue o a
a és de un mecanismo de e o- ansci osis a a és de la mucosa in es inal y puede ep esen a un e lejo de la inmunidad
in es inal (8) Du an e la ansci osis, an icue pos en e a VP6 ambién pueden uni se al o a i us una ez la p o eína VP6 es
expues a du an e la eplicación i al, lo que esul a en expulsión i al (9) An icue pos en e a VP6 ambién inhiben la
ansc ipción i al
In oducción
!
41!
células B especi icas en e a o a i us, dada la g an inmunogenicidad de es a
p o eína (104, 148) Es os an icue pos han demos ado en modelos animales
capacidad de ac ua in acelula men e, bloqueando el paso del i us a a és de
la mucosa y expulsando al i us de la mucosa in es inal (149) Además ambién
han demos ado capacidad pa a inhibi la ansc ipción i al lo que explica ía
ambién su e ec o an i i al (150-152) Sin emba go es os an icue pos han
demos ado no se p o ec o es en ce dos a pesa de se p oducidos localmen e
en la mucosa in es inal. Po an o, es á pendien e de de e mina en humanos su
papel uncional en la inmunidad he e o ípica (153) De igual modo, an icue pos
en e a la en e o oxina i al NSP4 han mos ado con e i p o ección en modelos
mu inos pe o no así en ce dos (154) Finalmen e, an icue pos que bloquean la
in e acción en e el i us y su ecep o en la mucosa in es inal (HBGA, his o-
blood g oup an igens) e i ando el anclaje inicial han demos ado con e i
p o ección en e a la in ección po no o i us y po an o debe ía se explo ado
su papel como co ela o de p o ección en e a la in ección po o a i us (155)
In oducción
!
48!
De odos ellos los sis emas más complejos y mejo o ganizados son los es
p ime os BALT, GALT y NALT que ac úan a su ez de p incipales si ios
induc o es (172-174) Des aca el sis ema de la mucosa asociado al sis ema
gas oin es inal (GALT) po su o ganización y complejidad y po cons a de ejido
lin oide o ganizado simila a un ganglio lin á ico y denominado Placas de Peye ,
Figu a 7: Esquema de uncionamien o de la espues a inmune en el sis ema inmune mucoso con los si ios induc o es y
e ec o es. Los an ígenos adminis ados a a és de los si ios induc o es (Mucosa in es inal, Tejido Lin oide B onquial y Tejido
Lin oide Nasal) ac i an las células inmuni a ias en los ganglios lin á icos egionales (p. ej. Placas de Peye en mucosa in es inal)
donde se gene an células inmunes e ec o as que iajan a a és de la sang e pe i é ica y la ed lin á ica gangliona hacia el es o
de las mucosas del o ganismo, que ac úan como si ios e ec o es, p opo cionando la de ensa global en e al an ígeno.
GALT: Gu -associa ed lymphoid issue; BALT: B onchial-associa ed lymphoid issue; NALT: Nasal-associa ed lymphoid issue

In oducción
!
49!
que ac úan como si ios induc o es p incipales (172) Desde es os si ios induc o es
donde se inicia la espues a inmuni a ia se anspo a an las células e ec o as
(células B-IgA, células T CD4+) hacia los si ios e ec o es del es o de los ejidos
mucosos. Podemos habla po an o de un sis ema pe ec amen e o ganizado de
á ico celula en e los luga es donde se inicia la espues a inmune (si ios
induc o es) hacia los luga es donde se p oduce la espues a e ec o a (si ios
e ec o es) (174) (Figu a 8)
In oducción
!
50!
Figu a 8: Diag ama esquemá ico del uncionamien o del sis ema inmune de la mucosa o ganizado en si ios induc o es y e ec o es. Se
mues a el á ico celula a pa i de los si ios de induc o es p incipales GALT, NALT y BALT hacia los si ios e ec o es que comp enden
los demás sis emas de la mucosa. Adap ado a pa i de O czyk C & C ipps AW Human Vaccines 2010 6(12)
In oducción
!
51!
1.8 ROTAVIRUS COMO ENFERMEDAD SISTÉMICA: “ROTAVOLUTION”
Du an e muchos años la pa ología del o a i us se conside aba una en e medad
limi ada solo al ac o gas oin es inal y ca en e de in e és pa a la g an mayo ía
de la comunidad cien í ica. Sin emba go, e idencias ecien es sob e las
implicaciones sis émicas de la in ección po o a i us han hecho econside a el
in e és po es a pa ología (175).
Ac ualmen e es á cla o que o a i us a más allá de una simple in ección
gas oin es inal. El é mino clásico de gas oen e i is aguda (GEA) po o a i us
es á siendo eemplazado po el den “en e medad po o a i us” lo que e leja las
implicaciones sis émicas de la in ección (176). Es amos, po an o, an es una
au én ica e olución (“ o a olu ion”) de la pe cepción clínica adicional de la
in ección po o a i us, ayudado po el ecien emen e demos ado impac o de las
acunas más allá de la pa ología gas oin es inal (177) y el hecho de que la
dia ea no es necesa ia pa a el diagnos ico de la in ección po o a i us dado que
un impo an e po cen aje de pacien es con o a i emia no p esen an clínica
in es inal (178).
El espec o clínico de la in ección po o a i us es ac ualizado cada año, con una
c ecien e e idencia que apun a hacia una conexión en e la in ección po
o a i us y el desa ollo de cie as en e medades au oinmuni a ias en indi iduos
gené icamen e p edispues os (177) Es a ecopilación de mani es aciones ex a
in es inales nos lle a a p opone un modelo “icebe g” pa a la en e medad po
o a i us, donde la pa e isible se ían las mani es aciones clínicas ípicamen e
In oducción
!
52!
asociadas con la pa ología in es inal ( ómi os, dia ea y deshid a ación) mien as
que la pa e ocul a comp ende ía odas las mani es aciones ex a in es inales
elacionadas como las con ulsiones o el desa ollo de en e medades
au oinmuni a ias, pasando po la in ección asin omá ica sin p esencia de dia ea
(177) (Figu a 9)
Figu a 9: Modelo de icebe g pa a la in ección po o a i us. Dia ea, ómi os y deshid a ación son solo la pa e más isible y econocible
de la en e medad po o a i us, pe o en la g an mayo ía de las eces se p oduce una diseminación i al que puede desencadena en
una se ie de mani es aciones ex a in es inales ocul as como son las con ulsiones o el desa ollo de pa ología au oinmuni a ia en
indi iduos gené icamen e suscep ibles. Imagen ob enida de Gómez-Rial J e al In ec and D ug Resis 2019
In oducción
!
53!
La implemen ación de las acunas en e a o a i us du an e la ul ima década ha
p oducido además de un descenso signi ica i o de la pa ología in es inal
mode ada o g a e (179), ambién ha impac ado sob e las mani es aciones ex a
in es inales asociadas a o a i us en una o ma que es amos empezando aún a
comp ende . T as el abajo inicial de Payne demos ando una educción de las
hospi alizaciones po con ulsiones as la inco po ación de la acunación en e
al o a i us en USA (180) con inua on o os g upos mos ando esul ados en la
misma línea (181-186).
No solo se ha demos ado impac o de las acunas sob e el desa ollo de
con ulsiones; en los úl imos años di e sos es udios han encon ado un e ec o
p o ec o de la acuna en el desa ollo de pa ología au oinmuni a ia como la
en e medad celíaca (187, 188) y diabe es melli us ipo 1 (189, 190) demos ando
unos e ec os bien he e ólogos o bien di ec os has a aho a desconocidos y que
da án mucho que habla du an e los p óximos años.

Jus i icación
!
54!
2 JUSTIFICACIÓN DE LA TESIS
Ac ualmen e, los mecanismos de p o ección en e al o a i us bien sean de
o ma na u al o a a és de la acunación, son solo pa cialmen e conocidos y no
se encuen an cla amen e de inidos. Sabemos que la exposición epe ida al
i us, ya sea de o ma na u al o a a és de dosis sucesi as de acuna, gene a
p o ección. Sin emba go, los mecanismos implicados son p ác icamen e
desconocidos, o ex apolados de o as pa ologías, y no se dispone de
bioma cado es especí icos con as ados, ni de p o ección clínica, ni de
inmunidad na u al o inducida po acunación, que sean ep oducibles y ú iles.
No exis e ac ualmen e una co elación en e el ni el de p o ección y los í ulos
de an icue pos neu alizan es se o ipo-especí icos gene ados as la acunación.
La asa de se ocon e sión, sob e odo en países en ías de desa ollo, no se
co esponde con el ni el de p o ección, po lo que es necesa io la búsqueda de
co ela os de p o ección al e na i os a los ac uales. En es a búsqueda se debe ía
conside a el compa imen o de la mucosa y el componen e celula de la
espues a inmuni a ia, pob emen e es udiado en la p o ección en e al i us.
Po o o lado, hoy sabemos que nues a espues a inmune es el esul ado de la
ac i ación coo dinada de cien os-miles de genes que pueden se de ec ados con
g an p ecisión y de modo indi e en e en el genoma median e pe iles de
exp esión de ARN mensaje o median e análisis ansc ip ómicos. Se econoce
Jus i icación
!
55!
que los genes que es án egulados de o ma di e encial en es as espues as
especi icas uncionan den o de edes al amen e ep oducibles que pueden se
de ec adas den o de un conjun o de da os de exp esión median e el uso de
algo i mos ap opiados. Median e es a es a egia se pe mi e en ende mejo la
in e acción en e los an ígenos, an o na u ales como acunales, y nues o
sis ema inmuni a io, y pe mi e iden i ica nue os bioma cado es di e enciales de
espues a inmune o p o ección clínica que pe mi an guia el desa ollo de nue as
acunas en e a o a i us.
El econocimien o de los mecanismos de acción conc e os del sis ema
inmuni a io en e a la in ección y la acunación nos pe mi i á aumen a la
capacidad de hace mejo es acionales en el espec o de acunas ac uales y
u u as, no solo en ases p eclínicas y clínicas, sino du an e su implemen ación
poblacional, pe mi iendo incluso plan ea se la acunación indi idualizada en
unción de los ma cado es de p o ección na u al o acunal iden i icados, con los
consiguien es aho os an o en el p oceso de desa ollo acunal como en su
aplicación poblacional a g an escala.
Po ello, la inalidad del p esen e abajo de esis es p o undiza desde una
pe spec i a “-ómica” en el es udio de la in ección na u al y la acunación
po o a i us. Pa a ello hemos ealiza emos un abo daje ans e sal de
e aluación de la espues a inmune desencadenada median e la in ección na u al
o median e la acunación en e al o a i us, basado en la inmunogenómica y
la acunómica.
Obje i os
!
56!
3 OBJETIVOS
El p esen e abajo de esis pe sigue los siguien es obje i os:
1. Ca ac e iza la espues a inmune na u al y a i icial en e al o a i us
2. Búsqueda de co ela os de p o ección en las acunas en e a
o a i us
3. Ca ac e ización de la huella ansc ip ómica de la en e medad
na u al y de la acunación en e a o a i us
4. Iden i icación de bioma cado es p edic i os de g a edad en la
in ección po o a i us
Ma e ial y Mé odos
!
57!
4 MATERIAL Y MÉTODOS
En el desa ollo del p esen e abajo de in es igación se han empleado los
siguien es ma e iales y mé odos:
4.1 Suje os del es udio
Pa a la ealización de es e abajo de in es igación se eclu a on un o al de 148
suje os de los cuales 27 pe enecían a la coho e de pacien e in ec ado y 121
pe enecían a la coho e de pacien e acunado. Los di e en es expe imen os se
han ealizado sob e el o al o subg upos de pacien es pe enecien es a ambas
coho es. Dependiendo del expe imen o lle ado a cabo, se u iliza on dis in as
mues as biológicas de los pacien es y en iempos de mues eo di e en es ( e
de alles en el siguien e apa ado). El eclu amien o u o luga du an e el pe íodo
2013-2015.
4.1.1 C i e ios de inclusión y exclusión en el es udio
!
Se aplica on di e en es c i e ios de inclusión/exclusión en unción de la coho e:
a) Suje os coho e acunados
Los suje os de es a coho e ue on eclu ados en la unidad de ensayos
clínicos del Se icio de Pedia ía del Hospi al Clínico Uni e si a io de
San iago de Compos ela. Se conside ó elegible pa a el p esen e es udio
cualquie niño sano que acudía pa a ecibi la acuna pen a alen e del
o a i us siguiendo las indicaciones de la icha écnica de la acuna. Du an e
el pe íodo de du ación del es udio solo la acuna pen a alen e en e a
o a i us (Ro a eqâ) es aba au o izada po las au o idades sani a ias.
Ma e ial y Mé odos
!
64!
de la longi ud del gen) y po millón de lec u as (dependien e del
amaño de la lib e ía).
La in o mación de los genes ep esen ada po los pe iles
ansc ip ómicos ob enidos en el p esen e es udio ha sido ob enido
empelando Gene On ology (GO) (196, 197). El análisis de
en iquecimien o ue lle ado a cabo empleando la Enciclopedia Kyo o
de genes y genomas (KEGG) (198). Los pa ones de exp esión ue on
codi icados empleado un mé odo de clasi icación de genes basado en
dis ibución hipe geomé ica (199)
4.5.2.4 Análisis de componen es p incipales
!
Se hizo un análisis de componen es p incipales (PCA) s pa a mejo a
la isualización de los pa ones de ansc ip oma global de los da os
de ARN-seq en casos y con oles. El PCA pe mi e la inspección de
pa ones di e enciales de exp esión en e mues as e iden i icación de
posibles ou lie s, así como acili a las decisiones con elación al
análisis basado en clus e s de mues as. El PCA se ealizó empleando
la lib e ía adegene (200) del so wa e es adís ico R (h p://www. -
p ojec .o g)
4.5.2.5 In e encia de edes
!
La in e encia de edes egulado as empleándose hizo empleando el
so wa e GeneMANIA ( 3.2.1; h p://www.genemania.o g) Es e
so wa e usa un g an conjun o de da os uncionales de in e acciones

Ma e ial y Mé odos
!
65!
pa a encon a genes que es án elacionados con un conjun o de
genes de en ada (201)
4.5.3 De e minación de RV-IgA en mues as de sue o y sali a median e ELISA di ec o
El mé odo pa a de e minación de an icue pos an i-IgA especí icos en e
a o a i us empleado se adap ó del p e iamen e desc i o po F iedman
(202). El an ígeno sal aje de o a i us (106 PFU) se cap u ó en placas de
polies i eno a inidad in e media G eine Bio-one Mic olone (Fishe
Scien i ic) incubando oda la noche a 4ºC en ampón de cap u a NaHCO3
pH 9,5. T as la ado de exceso de an ígeno de o a i us con ampón de
la ado os a o salino-albumina sé ica bo ina (PBS-BSA) 1% se bloquean
los pocillos con PBS-BSA 5% du an e 2 ho as a empe a u a ambien e.
Las mues as de sue o y sali a se incuban en los pocillos a una dilución
1:25 y 1:10 espec i amen e en PBS-Tween20 0.1%-BSA 1% du an e 24
ho as a 4ºC. T as los la ados, se incuban los pocillos du an e 1 ho a con
an icue po monoclonal especí icos en e a IgA Goa An i-Human IgA-
HRP (abcam ab97215, Camb idge, UK) diluido 1/100 en PBS-Tween20
0.1%-BSA 1% seguido de e elado con solución 3,3',5,5'-
Te ame hylbenzidine (TMB) (Sigma-Ald ich CL07) y de eniendo la
eacción a los 30 minu os con solución S op (Sigma-Ald ich S5814) La
lec u a en el espec o o óme o se ealizó a una longi ud de onda de
450nm
Ma e ial y Mé odos
!
66!
4.5.4 De e minación po mul iplexado de ci ocinas en sue o y sali a median e xMAP-
Luminexâ
El ensayo pa a de ección de ci ocinas se ealizó median e el ki Human
Map Miliplex HCYTOMAG-60K (Me ck Millipo e, Bille ica, MA). El panel
de ci ocinas es aba cons i uido po In e e on-alpha2 (IFN-a2),
in e leucina-8 (IL-8), in e leucina-1be a (IL-1b), in e leucina-10 (IL-10),
in e leucina-15 (IL-15), in e leucina-12 subunidad p70 (IL-12p70), ac o de
nec osis umo al-alpha (TNF-a), in e e ón-gamma (IFN-g) e in e leucina-
6 (IL-6) Los ensayos se lle a on a cabo en la pla a o ma Luminexâ 200.
T as econs i ui las mic oes e as siguiendo las indicaciones del ki se
p epa a el coc el de mic oes e as, así como los es ánda y con oles
co espondien es. Se incuban 25 µl de sue o o sali a (ne os, sin dilui )
jun o con 25 µl de solución ampón y 25 µl del coc el de mic oes e as. Se
incuba du an e oda la noche a 4ºC y as los consiguien es la ados se
añaden 25 µl de An icue po de de ección incluido en el ki y se incuba
du an e 1 ho a a empe a u a ambien e. Pos e io men e se añaden 25 µl
de solución de Ficoe i ina-Es ep a idina y se incuba du an e 30 minu os
a empe a u a ambien e. T as el la ado inal se añaden 150 µl de líquido
de sis ema Labscan y se ealiza la lec u a en el equipo Luminexâ200.
Pa a el análisis de los da os ob enidos se emplea el so wa e de análisis
xPONENTâ del equipo que ans o ma los alo es de in ensidad media
de luo escencia (MFI) en unidades de concen ación empleando el
Ma e ial y Mé odos
!
67!
análisis de eg esión logís ica de 5 pa áme os que ecomienda el
ab ican e. Finalmen e se aplica el ac o de dilución empleado pa a el
cálculo del alo inal.
Pa a la de ección del in e e ón-lambda (IFN-l) y la in e leucina-22 (IL-22)
se empleó un ki ELISA Duose (R&D Sys ems, Minneapolis, MN)
consis en e en an icue pos de cap u a y de ección especí icos, así como
las p o eínas es ánda ecombinan es co espondien es. En p ime luga ,
se ans ie en 100 µl del co espondien e an icue po de cap u a a una
placa de ELISA G eine Bio-one Mic olone (Fishe Scien i ic) de a inidad
in e media. Se incuba oda la noche a empe a u a ambien e y al día
siguien e se aspi an los pocillos y se la a es eces con el ampón de
la ado que incluye el ki . T as es e p oceso, se bloquea la placa con 300
µl de ampón de bloqueo incluido en el ki du an e 1 ho a a empe a u a
ambien e. A con inuación, las placas ya es án lis as pa a se incubadas
con las mues as de sue o y sali a (ne os, sin dilui ) y los co espondien es
es ánda du an e 2 ho as a empe a u a ambien e. Las mues as se
incuban con 100 µl del an icue po bio inilado de de ección du an e 2 ho as
a empe a u a ambien e. Finalmen e, se añaden 100 µl de S epa a idina-
Pe oxidasa du an e 30 minu os a empe a u a ambien e e i ando la luz
di ec a sob e la placa. T as el iempo de incubación se la a la placa y se
añaden 100 µl de la solución sus a o incluida en el ki du an e 30 minu os
a empe a u a ambien e. La eacción se de iene añadiendo 50 µl de
solución S op a cada pocillo y se agi a la placa pa a una co ec a
homogenización de la solución. La lec u a de la abso bancia se ealiza en
Ma e ial y Mé odos
!
68!
un espec o o óme o a 450 nm, con co ección a 540 nm pa a elimina
in e e encias. Los alo es de densidad óp ica (DO) ob enidos son
ex apolados median e análisis logís ico de 4 pa áme os a pa i de la
cu a de concen ación es ánda ealizada pa a ob ene , as aplica el
ac o de co ección empleado, el alo inal de concen ación de cada
mues a.
4.5.5 E aluación de la espues a inmune celula median e ensayo de es imulación en
sang e comple a (WBS, whole blood s imula ion assay)
El mé odo empleado es adap ado del p o ocolo desc i o po Thu m &
Halsey (203) desc i o a con inuación: 1 ml de sang e comple a
hepa inizada se diluyó 1:5 en RPMI1640 (Gibco, G and Island, NY) y se
dis ibuyó en cua o ubos polip opileno de 15 ml (Fishe Scien i ic, G and
Island, NY) y ue on es imulados du an e 24 ho as (a 37ºC en a mos e a
5% CO2) con 10µg/ml de Fi ohemaglu inina (PHA, a pa i de Phaseolus
ulga is, Sigma-Ald ich, S Louis, MO), 5µl solución o a i us sal aje
(10x106 PFU/ml de cepa Wa-1 cul i ada en células MA104) y 5µl solución
o a i us acunal (Ro aTeqâ, con eniendo easo an es de o a i us
humano-bo inos p oducidos en células Ve o, ~10x106 PFU) y 5µl RPMI
como con ol de es imulación basal. La sang e ue es imulada siemp e
den o de las 4 ho as as la ex acción. T as el pe íodo de incubación las
mues as ue on cen i ugadas a 2000g du an e 10 minu os y los
sob enadan es almacenados a -80ºC. La acción celula es an e se
Ma e ial y Mé odos
!
69!
some ió a c iop ese ación pa a pos e io es es udios de ci ome ía de
lujo.
Pos e io men e, los sob enadan es ue on analizados pa a de e minación
múl iple de ci ocinas median e p ocedimien o desc i o en el pun o 5.4 con
el ki Human Map Miliplex HCYTOMAG-60K (Me ck Millipo e, Bille ica,
MA) a una dilución de la mues a 1:10 en pla a o ma Luminexâ200.
4.5.6 C iop ese ación de sang e comple a
!
La acción celula esul an e as los ensayos de es imulación en sang e
comple a se some ió a c iop ese ación pa a pos e io es es udios de
ci ome ía de lujo median e mé odo desc i o po Pa edes e al (204) La
acción celula (500 µl) se ans ie e len amen e a c io iales de 1,8 ml
con eniendo 500µl de medio de congelación (90% Sue o Te ne a Fe al +
10% DMSO (Sigma-Ald ich, S Louis, MO) en ío. La solución esul an e
se mezcla median e in e sión y se colocan en ecipien e Co ning de
congelación CoolCell (Fishe Scien i ic, G and Island, NY) a -80ºC
P e io a los es udios de ci ome ía de lujo, los c io iales se án
descongelados po inme sión en baño ma ía a 37ºC has a su comple a
descongelación.
4.5.7 Análisis de exp esión de ma cado es de ac i ación en supe icie celula
median e ci ome ía de lujo

Ma e ial y Mé odos
!
70!
La sang e comple a descongelada se epa e (100µl) en ubos de
polies i eno 12x75mm y se incuba con los siguien es An icue pos
Monoclonales de Bec on Dickinson (Be gen, JE): CD45 Pe CP-Cy5.5
(clon 2D1), CD69 FITC (clon L78), CD3 APC (clon SK7), CD4 PE (clon
SK3), CD8 PE (clon SK1), CD16 PE (clon B73.1), CD56 APC (clon
NCAM16) empleando las siguien es combinaciones: CD69-FITC+CD4-
PE+CD3-APC+CD45-Pe CP (células T CD4+); CD69-FITC+CD8-
PE+CD3-APC+CD45-Pe CP (células T CD8+); CD69-FITC+CD16-
PE+CD56-APC+CD45-Pe CP (células Na u al Kille ). Se incuba du an e
20 minu os a empe a u a ambien e en oscu idad. T as la incubación se
añaden 2 ml de Solución de Lisis 1x (Bec on Dickinson, Be gen JE) y se
incuban a empe a u a ambien e du an e 10 minu os. Al inaliza el pe iodo
de incubación se cen i ugan los ubos a 350g du an e 5 minu os y se
desca a el sob enadan e. Se ealiza un la ado con 3 ml de PBS, y se
uel e a cen i uga a 350g du an e 5 minu os. T as el la ado se
esuspende el pelle celula en 500 µl de PBS y se analiza on en ci óme o
de lujo BD FACSCalibu empleando el p og ama CellQues pa a
adquisición y análisis de luo escencia. Se analizó sob e la población de
células que exp esaban el ma cado CD45, la p opo ción de células T-
CD4+, células T-CD8+ y células Na u al Kille CD16+CD56+ que
exp esaban el ma cado de ac i ación CD69.
4.5.8 Inmunoblo ing sob e elec o o esis bidimensional de p o eínas de o a i us
!
4.5.8.1 P epa ación del ex ac o p o eico de o a i us
!
Ma e ial y Mé odos
!
71!
Se cen i ugó 1 ml de suspensión de o a i us sal aje (10x106 PFU/ml)
a 5000 g du an e 5 minu os y esuspende el pelle en mismo olumen
de ampón de la ado 2-D (Bio-Rad, Múnich GE) calen ado a 37ºC. Se
epi ió es e p oceso es eces pa a elimina p o easas ex acelula es.
Pos e io men e se añadie on 150 µl de ampón de solubilización SDS
a 95ºC al pelle y se some ió a un o ex. T as la homogenización se
ealizó sonicación de la mues a 10 eces du an e 1 segundo a 60W y
20kHz y se incubó la solución a 95ºC du an e 5 minu os. Al inaliza el
pe iodo de incubación se en ió la mues a a 20ºC y se diluyó con 500
µl de ampón de mues a 2-D (Bio-Rad, Múnich GE) Se incubó a
empe a u a ambien e du an e 20 minu os as lo cual se cen i ugó la
mues a a 14000g du an e 30 minu os a 20ºC y se ecogió el
sob enadan e p o eico. Se ajus ó la concen ación de p o eínas i ales
a ap oximadamen e 5 µg/µl
4.5.8.2 Pu i icación de la mues a
!
Se empeló el ki ReadyP epâ2-D Cleanup Ki de BioRad pa a elimina
posibles con aminan es en la mues a. Se ans i ie on 100 µl de la
solución p o eica en un ubo mic ocen í uga 1,5 ml y se añadie on 300
µl del agen e p ecipi an e 1. T as la homogenización de la solución, se
incubó en hielo du an e 15 minu os. Pos e io men e se añadie on 300
µl del agen e p ecipi an e 2 a la mezcla y se homogenizó
igo osamen e. Se cen i ugó el ubo a 12000g du an e 5 minu os y se
desca ó el sob enadan e usando una pipe a. Se añadie on 40 µl de
eac i o de la ado 1 al pelle y se cen i ugó el ubo a 12000g du an e
Ma e ial y Mé odos
!
72!
5 minu os. Se desca ó el sob enadan e y se añadie on 25 µl de agua
ul apu a ReadyP ep (BioRad Múnich GE) al pelle p o eico. Se
añadie on 1 ml de eac i o de la ado 2 en iado a -20ºC y 5 µl de
adi i o de la ado. El ubo se some ió a un o ex du an e 1 minu o pa a
homogeniza la solución y pos e io men e se incubó a -20ºC du an e
30 minu os. T as el pe iodo de incubación se cen i ugó el ubo a
12000g du an e 5 minu os y se desca ó el sob enadan e. Se dejó
seca el pelle p o eico al ai e du an e 5 minu os, as lo cual se
esuspendió el pelle en ampón de ehid a ación 2-D
4.5.8.3 Isoelec oen oque (IEF)
!
Se empleó el sis ema PROTEAN i12â de BioRad pa a ealización de
la p ime a sepa ación p o eica median e isoelec oen oque (IEF)
siguiendo las ins ucciones del p o eedo .
Se in odujo un olumen equi alen e a 100 µg de p o eínas de
o a i us esuspendidos en ampón de ehid a ación 2-D en el
g adien e de pH inmo ilizado (IPG ReadyS ips, 7 cm, pH 3-10,
BioRad) en el sis ema de IEF. Du an e la ehid a ación ac i a a 50 V,
20ºC du an e 16 ho as, la co ien e se limi ó a 70 µA. Se ajus ó el
p o ocolo de g adien e de IEF según ins ucciones del p o eedo (1:
man ene a 150V du an e 1 ho a; 2: man ene a 300V du an e 1 ho a;
3: subida a 1000 V en 1 ho a; 4: subi a 3000 V en 2 ho as; 5: man ene
a 3000 V du an e 2 ho as) a una empe a u a de 20ºC
Ma e ial y Mé odos
!
73!
4.5.8.4 Elec o o esis en gel
!
T as el IEF, las p o eínas se eduje on di ec amen e en ampón de
mues a, con eniendo 50mM DTT. Pa a la sepa ación de las p o eínas
en la segunda dimensión, las i as de IPG se coloca on en la pa e
supe io del gel de poliac ilamida (4%-12%, 1.0 mm) empleando 4 µl
de Es ánda de P o eínas (Dual Colo P o ein S anda d III, Se a)
como ma cado de peso molecula . La elec o o esis se desa olló en
ampón XT-MES (BioRad, Múnich GE) a 180V.
4.5.8.5 Inmunoblo ing
!
El gel esul an e se equilib ó en ampón XT-MES du an e 10 minu os,
as lo cual las p o eínas ue on ans e idas a una memb ana de PVDF
(Millipo e, Da ms ad , GE) en ampón de ans e encia en un sis ema
XCell II Blo (The mo Fishe Scien i ic) a 30V du an e 15 minu os. T as
la ans e encia, la memb ana de PVDF se bloqueó du an e 30 minu os
en ampón de bloqueo E e yBlo (BioRad, Múnich GE) as lo cual se
incubó du an e 24 ho as con pool de sue o pacien es diluido 1:500 en
ampón de bloqueo. T as el pe iodo de incubación, la memb ana de
PVDF ue la ada cinco eces du an e 5 minu os en PBS-Tween20
0,1%. El an icue po secunda io usado ue el IRDye 800 CW Goa an i-
human IgA (LI-COR)
La memb ana ue digi alizada empleando un escáne Odyssey de
in a ojo ce cano (LI-COR) a 800 nm longi ud de onda.
Resul ados
!
80!
El po cen aje de indi iduos que mos a on se ocon e sión con GMFR ³ 1 pa a
mues a de sali a ue 77,58% (45/58) pa a el g upo de Fó mula, 61,53% (24/39)
pa a el g upo de Ma e na y 50,00% (12/24) pa a el g upo de Ma e na/Fó mula.
En las mues as de sue o el po cen aje de indi iduos que mos a on
se ocon e sión con GMFR ³ 3 ue 89,65% (52/58) pa a el g upo de Fó mula,
87,17% (34/39) pa a el g upo de Ma e na y 91,66% (22/24) pa a el g upo de
Ma e na/Fó mula. Da os ep esen ados en el siguien e g á ico:
Es os da os mues an que la lac ancia ma e na no a ec a a la asa de
se ocon e sión medida en el sue o, pe o si a ec a a la asa de se ocon e sión
medida en sali a, debido a la p opia in e e encia de los Ac an i RV-IgA p esen es
en la leche ma e na y que son de ec ados en la mues a de sali a del niño. Es a
in e e encia se p esen a en odas las mues as de sali a ob enidas du an e la
lac ancia ma e na (P e-dosis1/Pos -Dosis 3 en el g upo Ma e na y P e-Dosis 1
G á ica 3: Rep esen ación de las di e encias en los alo es de se ocon e sión en sali a (GMFR
³
1) y sue o (GMFR
³
3)
según el ipo de lac ancia
GMFR: Geome ic Mean Fold Rise
Fo mula Ma e na Ma e na/Fo mula
0
20
40
60
80
100
% Se ocon e sión GMFR ≥ 1
Se ocon e sión (sali a) según lac ancia
Fo mula Ma e na Ma e na/Fo mula
0
20
40
60
80
100
% Se ocon e sión GMFR ≥ 3
Se ocon e sión (sue o) según lac ancia
77,58%
(45/58)
61,53%
(24/39) 50,00%
(12/24)
89,65%
(52/58)
87,17%
(34/39)
91,66%
(22/24)

Resul ados
!
81!
en el g upo Ma e na/Fó mula) no pe mi iendo ealiza un cálculo co ec o de la
asa de se ocon e sión en es os g upos.
En cuan o a los alo es de GMT ob enidos en los di e en es g upos de lac ancia,
se ep esen an en la siguien e G á ica 4:
p e-dosis1 pos -dosis3 p e-dosis1 pos -dosis3
0
100
200
300
GMT RV-IgA
Vacunados (Fo mula)
Sali a Sue o
GMFR.=.1,65 GMFR.=.8,00
p e-dosis1 pos -dosis3 p e-dosis1 pos -dosis3
0
100
200
300
GMT RV-IgA
Vacunados (Ma e na)
Sali a Sue o
GMFR.=.1,27 GMFR.=.10,51
p e-dosis1 pos -dosis3 p e-dosis1 pos -dosis3
0
100
200
300
GMT RV-IgA
Vacunados (Ma e na/Fo mula)
Sali a Sue o
GMFR.=.0,88 GMFR.=.8,79
G á ica 4: Rep esen ación de los alo es de GMT (IC 95%)
pa a RV-IgA ob enidos en mues a de sali a y sue o en la
coho e de pacien es acunados según el ipo de lac ancia,
an es de la p ime a dosis (p e-dosis 1) y 40 días as la
oma de la 3ª dosis (pos -dosis 3), jun o con los alo es de
GMFR pa a cada mues a
GMT: Geome ic Mean Ti e ; IC: In e alo de con ianza;
GMFR: Geome ic Mean Fold Rise
Resul ados
!
82!
De igual modo que an es, aquellos alo es de GMT ob enidos en las mues as
P e-Dosis 1/Pos -Dosis 3 del g upo Ma e na y P e-Dosis 1 en el g upo
Ma e na/Fó mula, mues an in e e encia po p esencia de Ac an i RV-IgA
p oceden e de la leche ma e na, lo que no pe mi e en es os g upos hace una
es imación eal de los alo es GMT ob enidos a a és de la acunación.
Resul ados
!
83!
Fo mula Ma e na Ma e na/Fo mula
0
100
200
300
GMT RV-IgA
Pos -Dosis3 (Sali a)
Sali a
Fo mula Ma e na Ma e na/Fo mula
0
100
200
300
GMT RV-IgA
Pos -Dosis3 (Sue o)
Sue o
G á ica 5: Análisis compa a i o de los alo es de GMT (IC 95%) pa a RV-IgA ob enidos en mues a de sali a y sue o en e
los di e en es g upos de lac ancia: Fó mula, Ma e na y Ma e na/Fó mula
GMT: Geome ic Mean Ti e ; IC: In e alo de con ianza
5.1.3 Análisis de la in luencia de la lac ancia sob e la inmunogenicidad de la
acunación y el GMFR
Pa a es udia si el ipo de lac ancia iene algún e ec o signi ica i o sob e la
inmunogenicidad de la acuna, ealizamos un análisis compa a i o en e los
GMT pa a RV-IgA alcanzados as 40 días de oma de la úl ima dosis de acuna
(Pos -Dosis 3) (G á ica 5)
La p ueba es adís ica empleada (K uskal-Wallis) no mues a di e encias
signi ica i as en los alo es de GMT RV-IgA alcanzados en los di e en es g upos
de lac ancia y en ambas mues as.
K uskal-Wallis P alo 0.6320
K uskal-Wallis P alo 0.3241
Resul ados
!
84!
Asimismo, ambién ealizamos un análisis compa a i o del GMFR en las
mues as de sali a y sue o en e los di e en es g upos de lac ancia (G á ica 6)
El análisis es adís ico median e la p ueba de K uskal-Wallis no mos ó
di e encias signi ica i as en los alo es de GMFR en e los di e en es g upos de
lac ancia en ambas mues as.
Fo mula Ma e na Ma e na/Fo mula
0
10
20
30
40
GMFR
GMFR (Sali a)
Fo mula Ma e na Ma e na/Fo mula
0
10
20
30
40
GMFR
GMFR (Sue o)
G á ica 6: Análisis compa a i o de los alo es de GMFR ob enidos en mues a de sali a y sue o en e los di e en es g upos
de lac ancia: Fó mula, Ma e na y Ma e na/Fó mula
GMFR: Geome ic Mean Fold Rise
K uskal-Wallis P alo 0.0633
K uskal-Wallis P alo 0.2372
Resul ados
!
85!
5.1.4 Compa ación en e las coho es de indi iduos acunados e in ec ados
En el siguien e g á ico se ep esen an los alo es de GMT y GMFR pa a los Ac
en e a RV-IgA ob enidos a a és de la in ección na u al y a a és de la
acunación:
p e-dosis1 pos -dosis3 p e-dosis1 pos -dosis3
0
100
200
300
GMT RV-IgA
Coho e Vacunados
Sali a Sue o
GMFR.=.1,34 GMFR.=..8,15
Fase Aguda Con alecencia Fase Aguda Con alecencia
0
100
200
300
GMT RV-IgA
Coho e In ec ados
Sali a Sue o
GMFR.=.1,76
GMFR.=.4,02
G á ica 7: Análisis compa a i o en e los alo es de GMT (IC 95%) y GMFR pa a Ac an i RV-IgA ob enido en la coho e de
in ección na u al y en la coho e de acunación
GMT: Geome ic Mean Ti e ; IC: In e alo de con ianza; GMFR: Geome ic Mean Fold Rise

Resul ados
!
86!
Se ealizó la p ueba es adís ica de Mann-Whi ney en e los alo es
co espondien es pa a cada g upo pa a conoce si exis en di e encias
signi ica i as en e ambas coho es:
Los esul ados no mues an di e encias signi ica i as en e los alo es GMT
iniciales y inales en mues as de sali a en e ambas coho es.
Po el con a io, si se obse an di e encias es adís icamen e signi ica i as en los
alo es sé icos de GMT iniciales (P e-Dosis 1 y Fase Aguda) (P=0.0064) y po
ex ensión de los alo es de GMFR (P=0.0332), en e ambas coho es Muy
p obablemen e es a di e encia se deba a la di e encia de edad en e ambos
g upos ( e Tabla 4). Sin emba go, no se obse an di e encias en el alo de
GMT inal en el sue o (Pos -Dosis 3 y Con alecencia) alcanzado po ambas
coho es.
Pa áme o
Sali a
Sue o
Vacunados
(n=121)
In ec ados
(n=10)
Mann-
Whi ney
Vacunados
(n=121)
In ec ados
(n=10)
Mann-
Whi ney
GMT P e-1/F-Aguda
GMT Pos -3/Con al
GMFR
23,25 (20,33–26,60)
31,28 (27,19–35,99)
1,34 (1,14–1,58)
33,46(12,63 – 88,62)
58,90(21,19 – 163,8)
1,76(0,73 – 4,21)
ns
ns
ns
12,71(11,24 – 14,38)
103,7(89,53 – 120,2)
8,15(6,97 – 9,54)
27,05(14,07 – 52,04)
109,0(61,83 – 192,3)
4,02(2,16 – 7,48)
0.0064
ns
0.0332
N = nume o de suje os de la coho e
GMT = Geome ic Mean Ti e
GMFR = Geome ic Mean Fold Rise
ns = di e encias no signi ica i as
Tabla 4: Análisis de las di e encias de inmunogenicidad en sue o y sali a en e la coho e de indi iduos acunados e
in ec ados
Resul ados
!
87!
Hay que ene en cuen a en el análisis de los esul ados la limi ación que supone
el bajo núme o de pacien es eclu ados en la coho e in ec ados.
5.1.5 Co elación en e las mues as de sali a y sue o en ambas coho es
Se ealizó una co elación de Spea man en e los alo es GMT RV-IgA ob enidos
en e ambas mues as de sue o/sali a pa a cada coho e. Se ep esen an en la
siguien e abla los alo es p de co elación ob enidos pa a cada pa eja de
mues as:
COHORTE
VACUNADOS
Sali a
P e-Dosis 1
Sali a
Pos -Dosis 3
Sue o
P e-Dosis 1
Sue o
Pos -Dosis 3
Sali a
P e-Dosis 1
0.003
0.837
0.619
Sali a
Pos -Dosis 3
0.003
0.135
0.191
Sue o
P e-Dosis 1
0.837
0.135
0.002
Sue o
Pos -Dosis 3
0.619
0.191
0.002
COHORTE
INFECTADOS
Sali a
F- Aguda
Sali a
Con al
Sue o
F-Aguda
Sue o
Con al
Sali a
F-Aguda
0.088
0.912
0.810
Sali a
Con al
0.0088
0.313
0.843
Sue o
F-Aguda
0.912
0.313
0.097
Sue o
Con al
0.810
0.843
0.097
Tabla 5: Co elación de Spea man en e mues as de sue o/sali a en ambas coho es
050 100 150 200 250
0
100
200
300
400
500
Pos -Dosis 3 RV-IgA (Sali a)
Pos -Dosis 3 RV-IgA (Sue o)
no signi ica i o
0200 400 600
0
100
200
300
Con al RV-IgA (Sali a)
Con al RV-IgA (Sue o)
no signi ica i o
G á ico 8: Asociación median e co elación de Spea man en e los alo es de GMT RV-IgA en Sue o y Sali a en la coho e
de pacien es acunados (Pos -Dosis 3) y en la coho e de pacien es in ec ados (Con alecencia)
Coho e Vacunados
Coho e In ec ados
Resul ados
!
88!
Como se puede obse a en ambas ablas y en el g á ico de asociación, no se
obse a co elación signi ica i a alguna en e las mues as de sue o y sali a en
ambas coho es, lo que indica compa imen os di e en es.
Resul ados
!
89!
5.2 Es udio de la espues a de ci ocinas en mucosa o al en e el pacien e
acunado e in ec ado: compa ación con la espues a sis émica
5.2.1 Pe il de ci ocinas en sue o y sali a en la coho e de pacien es in ec ados
Median e análisis mul ipa amé ico se analizó el pe il de 12 ci ocinas en sue o y
sali a del pacien e eclu ado en ase aguda y as su ecupe ación en la
con alecencia.
En la abla siguien e se p esen an los da os de concen ación (pg/ml) de ci ocinas
ob enidos:
Pa áme o
Sali a
(N = 27)
Sue o
(N = 20)
Fase Aguda
(n=27)
Con alecencia
(n=23)
Wilcoxon es
Fase Aguda
(n=20)
Con alecencia
(n=12)
Wilcoxon es
EGF
843,8 (317,8-1346)
338,4 (191,1-532)
0.0214
9,17 (5,87-32,32)
1,27 (0,06-5,33)
0.0078
IFN α2
30,09 (11,93-69,59)
71,80 (18,46-221,5)
0.0192
6,21 (1,23-14,46)
0,0 (0,0-9,67)
ns
IL-8
387 (165,9-1510)
249,6 (121,7-418,4)
0.0319
19,34 (10,85-35,32)
8,49 (3,66-14,80)
0.0391
IL-1β
3,97 (1,94-19,82)
3,02 (1,78-4,59)
0.0319
5,79 (3,18-17,06)
0,01 (0,0-0,35)
0.0156
IL-15
2,68 (1,27-5,53)
2,27 (0,99-3,72)
ns
2,37 (1,31-5,31)
0,95 (0,72-2,04)
ns
IL-10
3,80 (0,61-15,15)
10,70 (3,30-15,40)
ns
70,0 (22,40-204,7)
14,62 (12,02-60,86)
0.0156
IL12
7,82 (3,01-17,76)
7,55 (2,85-20,66)
ns
1,15 (0,31-5,21)
0,53 (0,17-5,94)
0.0469
IL 6
1,98 (1,10-3,84)
1,12 (0,55-2,49)
0.0351
2,32 (1,41-4,49)
0,94 (0,25-3,85)
ns
TNF-α
2,61 (1,17-9,14)
2,89 (0,89-4,19)
ns
14,89 (7,95-20,37)
13,87 (11,57-27,78)
0.0313
IFN-γ
4,43 (1,88-7,24)
4,38 (2,69-8,03)
ns
5,78 (3,18-17,06)
1,27 (0,06-5,33)
0.007
IL-22
51,71 (4,53-186,6)
12,36 (2,71-17,53)
0.0161
119,8 (55,66-197,8)
31,90 (18,29-84,26)
ns
IFN-
l
n.d.
n.d.
-
n.d.
n.d.
-
N = nume o de suje os de la coho e
n = nume o de suje os con mues a analizada
n.d.= no de ec able
EGF=Epide mal G ow h Fac o ; IL=In e leucina; IFN=In e e on; TNF=Tumo Nec osis Fac o
Tabla 6: Concen ación de ci ocinas en sali a y sue o en la coho e de pacien es in ec ados (Fase Aguda y Con alecencia). Los da os
ep esen an la Mediana de las concen aciones (pg/ml) y el ango in e cua il 25%-75% El ni el de signi icancia calculado según el es
de Wilcoxon (signi ica i o < 0.005)
Resul ados
!
96!
En el G á ico 13 se ep esen an compa a i amen e los alo es de ci ocinas
ob enidos en la mues a de sue o en ambas coho es es udiadas:
G á ico 13: Análisis compa a i o de ni eles de ci ocinas en mues a de SUERO en e la coho e In ec ados s Vacunado. Los da os
ep esen an la Mediana de las concen aciones (pg/ml) y el ango in e cua il 25%-75% (+ = Media)
SUERO
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
100
200
300
pg/ml
In ec ados+(Fase+Aguda)
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
100
200
300
pg/ml
In ec ados+(Con alecencia)
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
100
200
300
pg/ml
Vacunados)(P e-Dosis)1)
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
100
200
300
pg/ml
Vacunados)(Pos -Dosis)3)

Resul ados
!
97!
En el G á ico 14 se ep esen an compa a i amen e los alo es de ci ocinas
ob enidos en la mues a de sali a en ambas coho es es udiadas:
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
500
1000
1500
2000
pg/ml
In ec ados+(Fase+Aguda)
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
500
1000
1500
2000
pg/ml
In ec ados+(Con alecencia)
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
500
1000
1500
2000
pg/ml
Vacunados)(P e-Dosis)1)
EGF
IFN-alpha
IFN-gamma
IL-1be a
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-alpha
IL-22
0
500
1000
1500
2000
pg/ml
Vacunados)(Pos -Dosis)3)
SALIVA
G á ico 14: Análisis compa a i o de ni eles de ci ocinas en mues a de SALIVA en e la coho e In ec ados s Vacunado. Los da os
ep esen an la Mediana de las concen aciones (pg/ml) y el ango in e cua il 25%-75% (+ = Media)
Resul ados
!
98!
5.2.4 Co elación en e los alo es de ci ocinas ob enidos y el cu so clínico de los
pacien es in ec ados
!
Con el obje o de busca algún bioma cado en sue o y/o sali a asociado al cu so
clínico de la en e medad, se analizó la co elación en e los di e en es alo es de
ci ocinas ob enidos y di e en es pa áme os clínicos ecogidos en la coho e
in ec ados (n=27) en ase aguda de la en e medad (Tabla 9)
5.2.4.1 Co elación con los alo es ob enidos en mues a de sali a
En la Tabla 10 siguien e se ep esen an los alo es p ob enidos median e el es
de Spea man pa a cada asociación de ci ocinas en SALIVA con los pa áme os
clínicos ob enidos en ase aguda de la en e medad:
SALIVA
EGF
IFN-⍺
IFN-𝜸
IL-1β
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-⍺
IL-22
Edad (Meses)
0,184
0,962
0,207
0,329
0,814
0,533
0,242
0,932
0,397
0,555
0,966
Es ancia hospi ala ia (días)
0,022
0,437
0,830
0,109
0,582
0,633
0,690
0,658
0,867
0,205
0,193
Du ación Dia ea (días)
0,891
0,226
0,031
0,718
0,206
0,553
0,249
0,711
0,034
0,928
0,870
Nº deposiciones/día
0,273
0,199
0,783
0,149
0,690
0,605
0,585
0,472
0,511
0,644
0,513
Du ación ómi os
0,634
0,220
0,128
0,614
0,225
0,859
0,114
0,559
0,343
0,618
0,224
Nº máx. omi os/día
0,790
0,155
0,313
0,856
0,319
0,473
0,454
0,759
0,192
0,507
0,938
Tempe a u a
0,503
0,773
0,066
0,513
0,993
0,172
0,099
0,946
0,314
0,058
0,238
Ni el de Deshid a ación
0,216
0,762
0,003
0,712
0,023
0,949
0,010
0,039
0,014
0,594
0,225
Sco e Vesika i
0,642
0,655
0,039
0,670
0,026
0,665
0,031
0,121
0,031
0,374
0,655
Pa áme os Clínicos
Fase Aguda
Sco e Vesika i
11,07 (3,485)
Días de Es ancia Hospi ala ia
5,750 (3,026)
Tempe a u a (ºC)
38,70 (0,622)
Núme o de episodios de ómi os/día
3,179 (4,738)
Du ación de los ómi os (días)
2,037 (1,931)
Núme o de deposiciones/día
4,929 (5,018)
Du ación de la dia ea (días)
4,571 (2,168)
Ni el de deshid a ación
1,607 (1,100)
Tabla 9: Ca ac e ís icas clínicas de los pacien es en Fase aguda exp esados como Media (SD)
Tabla 10: Ni eles de signi icación según el es de Spea man pa a la asociación de los ni eles de ci ocinas ob enidos en ase aguda en
SALIVA con los pa áme os clínicos de los pacien es in ec ados. Se mues a en neg i a aquellos alo es p signi ica i os (P<0.005)
Resul ados
!
99!
Encon amos alo es de ci ocinas en sali a con asociaciones signi ica i as con
pa áme os clínicos: EGF con Es ancia Hospi ala ia ( 2=-0.63), IFN-g, IL-6, IL-10
e IL-12 con el Sco e de G a edad de Vesika i ( 2=-0.39, 2=-0.42, 2=-0.41 y 2=-
0.41 espec i amen e)
En el G á ico 15 se mues an aquellos alo es que mues an una asociación
clínica signi ica i a (P<0.05) median e es de Spea man:
G á ico 15: Asociación en e los alo es de EGF, IFN-
g
, IL-6, IL-12 e IL-10 en SALIVA (Fase Aguda) con los pa áme os clínicos de Es ancia
Hospi ala ia (días) y Sco e de g a edad de Vesika i.
0 5 10 15
0
200
400
600
800
1000
1200
Es ancia hospi ala ia (nº días)
EGF$sali a$pg/ml
2
= - 0.63
p = 0.022
0 5 10 15 20
0
10
20
30
Sco e Vesika i
IFN-γ%%sali a%pg/ml
2
= - 0.398
p = 0.039
0 5 10 15 20
0
50
100
150
Sco e Vesika i
IL-6%sali a%pg/ml
2
= - 0.427
p = 0.026
0 5 10 15 20
0
10
20
30
Sco e Vesika i
IL-10&sali a&pg/ml
2
= - 0.415
p = 0.031
0 5 10 15 20
0
10
20
30
40
50
Sco e Vesika i
IL-12&sali a&pg/ml
2 = - 0.416
p = 0.031
Resul ados
!
100!
5.2.4.2 Co elación con los alo es ob enidos en mues a de sue o
En la Tabla 11 siguien e se ep esen an los alo es p ob enidos median e la
p ueba de Spea man pa a cada asociación de ci ocinas en sue o con los
pa áme os clínicos ob enidos en ase aguda de la en e medad:
SUERO
EGF
IFN-⍺
IFN-𝜸
IL-1β
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-⍺
IL-22
Edad
0,747
0,071
0,235
0,052
0,479
0,571
0,784
0,543
0,493
0,245
0,023
Es ancia hospi ala ia (días)
0,133
0,380
0,042
0,299
0,181
0,091
0,059
0,178
0,445
0,707
0,656
Du ación Dia ea (días)
0,938
0,716
0,405
0,867
0,025
0,756
0,064
0,816
0,758
0,969
0,226
Nº deposiciones/día
0,525
0,000
0,007
0,009
0,492
0,424
0,313
0,054
0,023
0,992
0,557
Du ación ómi os
0,818
0,791
0,947
0,189
0,194
0,529
0,889
0,953
0,677
0,382
0,027
Nº máx. omi os/día
0,280
0,038
0,026
0,039
0,895
0,100
0,517
0,084
0,017
0,302
0,285
Tempe a u a
0,612
0,880
0,823
0,832
0,533
0,989
0,342
0,530
0,610
0,875
0,272
Ni el de Deshid a ación
0,875
0,382
0,494
0,768
0,194
0,984
0,635
0,973
0,850
0,375
0,189
Sco e Vesika i
0,270
0,005
0,007
0,009
0,827
0,294
0,389
0,109
0,005
0,577
0,090
Encon amos alo es de ci ocinas en sue o con asociaciones signi ica i as con
pa áme os clínicos, des acando po su al o alo de signi icancia: IFN-a, IFN-g,
IL-1b e IL-12 y su asociación con el Sco e de g a edad de Vesika i ( 2=0.606,
2=0.582, 2=0.571 y 2=0.598 espec i amen e)
Tabla 11: Ni eles de signi icación según el es de Spea man pa a la asociación de los ni eles de ci ocinas ob enidos en ase aguda en
SUERO con los pa áme os clínicos de los pacien es in ec ados. Se mues a en neg i a aquellos alo es p signi ica i os (P<0.005)
Resul ados
!
101!
En el G á ico 16 se des acan es os alo es que mues an una asociación clínica
signi ica i a (P<0.05) median e la p ueba de Spea man:
5.2.4.3 Co elación de los alo es de ci ocinas con la edad de los pacien es
Pa a desca a que las asociaciones encon adas no sean debido a la edad del
pacien e, se analizó median e la p ueba de Spea man si exis ía alguna
asociación en e los alo es de ci ocinas y la edad del pacien e. En las ablas
an e io es se analizó la asociación en e la edad en meses de los pacien es y lo
alo es de ci ocinas encon ados an o en sue o y sali a.
Como se puede obse a po los alo es de signi icación calculados, an solo la
IL-22 en sue o mues a una asociación con la edad de los pacien es ( 2=+0.519
G á ico 16: Asociación en e los alo es de IFN-a, IFN-
g
, IL-1
b
e IL-12 en SUERO
(Fase Aguda) con el Sco e de g a edad de Vesika i.
0 5 10 15 20
0
10
20
Sco e Vesika i
IFN-α&&sue o&pg/ml
2
= + 0.606
p = 0.005
0 5 10 15 20
0
10
20
30
40
Sco e Vesika i
IFN-γ%%sue o%pg/ml
2
= + 0.582
p = 0.007
0 5 10 15 20
0
5
10
Sco e Vesika i
IL-1β%%sue o%pg/ml
2 = + 0.571
p = 0.009
0 5 10 15 20
0
5
10
15
20
Sco e Vesika i
IL-12&sue o&pg/ml
2
= + 0.598
p = 0.005

Resul ados
!
102!
P=0.023) Con es a ci ocina no se encon ó ninguna asociación clínica
signi ica i a.
En el G á ico 17 se mues a la asociación de las ci ocinas EGF (sali a), IFN-a,
IFN-g, IL-1b e IL-12 (sue o) con la edad de los pacien es:
0500 1000
0
10
20
30
40
EGF sali a pg/ml
Edad (meses)
ns
0 5 10 15 20
0
10
20
30
40
IFN-α%sue o%pg/ml
Edad (meses)
ns
010 20 30 40
0
10
20
30
40
IFN-γ%sue o%pg/ml
Edad (meses)
ns
012345
0
10
20
30
40
IL-1β sue o pg/ml
Edad (meses)
ns
0 5 10
0
10
20
30
40
IL-12 sue o pg/ml
Edad (meses)
ns
G á ico 17: Asociación en e los alo es de ci ocinas EGF (sali a), IFN-
a
, IFN-
g
, IL-1
b
e IL-12 (sue o) con la edad de los pacien es de la
coho e in ec ados
Resul ados
!
103!
5.2.4.4 Co elación en e la espues a mediada po ci ocinas en sue o y sali a
Se analizó (Tablas 12 y 13) si exis ía alguna co elación en e los alo es de
ci ocinas ob enidos en sue o y sali a pa a cada una de las coho es median e el
calculo del coe icien e de co elación de Spea man. No se encon ó ninguna
asociación signi ica i a.
SALIVA/SUERO
EGF
IFN-⍺
IFN-𝜸
IL-1β
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-⍺
IL-22
EGF
0.906
0.476
0,718
0,909
0,814
0,442
0,322
0,151
0,228
0,473
0,616
IFN-⍺
0,291
0,635
0,801
0,855
0,711
0,868
0,404
0,757
0,807
0,829
0,034
IFN-𝜸
0,745
0,264
0,523
0,596
0,267
0,333
0,482
0,974
0,878
0,075
0,284
IL-1β
0,436
0,376
0,936
0,676
0,670
0,361
0,681
0,168
0,533
0,391
0,587
IL-6
0,828
0,056
0,797
0,742
0,923
0,673
0,986
0,127
0,167
0,844
0,425
IL-8
0,676
0,360
0,530
0,491
0,468
0,204
0,668
0,057
0,110
0,190
0,887
IL-10
0,683
0,344
0,380
0,729
0,963
0,428
0,342
0,843
0,658
0,454
0,909
IL-15
0,596
0,109
0,751
0,797
0,571
0,424
0,509
0,549
0,858
0,094
0,478
IL-12
0,713
0,081
0,819
0,898
0,634
0,655
0,418
0,490
0,586
0,132
0,521
TNF-⍺
0,472
0,386
0,586
0,983
0,909
0,909
0,753
0,151
0,580
0,960
0,604
IL-22
0,523
0,571
0,901
0,951
0,857
0,549
0,220
0,392
0,057
0,078
0,182
SALIVA/SUERO
EGF
IFN-⍺
IFN-𝜸
IL-1β
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-⍺
IL-22
EGF
0,304
0,779
0,271
0,779
0,364
0,383
0,105
0,294
0,779
0,271
0,019
IFN-⍺
0,185
0,219
0,346
0,219
0,142
0,964
0,929
0,224
0,219
0,346
0,543
IFN-𝜸
0,565
0,287
0,045
0,287
0,951
0,059
0,119
0,064
0,287
0,045
0,143
IL-1β
0,394
0,442
0,836
0,442
0,971
0,262
0,346
0,880
0,442
0,836
0,227
IL-6
0,128
0,086
0,586
0,086
0,709
0,217
0,041
0,361
0,086
0,586
0,258
IL-8
0,905
0,415
0,719
0,415
0,242
0,763
0,243
0,685
0,415
0,719
0,158
IL-10
0,234
0,589
0,113
0,589
0,806
0,353
0,864
0,116
0,589
0,113
0,538
IL-15
0,128
0,443
0,276
0,567
0,876
0,123
0,345
0,234
0,098
0,258
0,178
IL-12
0,627
0,376
0,552
0,376
0,878
0,845
0,131
0,755
0,376
0,552
0,212
TNF-⍺
0,941
0,064
0,133
0,056
0,886
0,057
0,131
0,064
0,133
0,123
0,451
IL-22
0,128
0,086
0,089
0,341
0,132
0,051
0,361
0,579
0,258
0,125
0,098
Tabla 12: Ni eles de signi icación según el es de Spea man pa a la asociación en e los alo es de ci ocinas en sue o y sali a en la
coho e de pacien es INFECTADOS.
Tabla 13: Ni eles de signi icación según el es de Spea man pa a la asociación en e los alo es de ci ocinas en sue o y sali a en la
coho e de pacien es VACUNADOS.
Resul ados
!
104!
5.3 Análisis de la espues a inmune celula a di e en es an ígenos de o a i us
en ambas coho es
Empleamos el mé odo de es imulación en sang e comple a (WBS, whole blood
s imula ion assay) pa a e alua la espues a inmune celula di e encialmen e en
la coho e de pacien es acunados e in ec ados. La espues a celula ue
e aluada en espues a a dos an ígenos de o a i us: cepa de o a i us humano
sal aje (Wa-1) y cepa de o a i us acunal (cepa RIX4414, ob enida a pa i de
acuna mono alen e)
5.3.1 Respues a inmune celula a an ígenos de o a i us en la coho e de pacien es
in ec ados
La espues a inmune celula medida a a és del pe il de ci ocinas libe ados ue
e aluada en la coho e de pacien es in ec ados, du an e la Fase Aguda de la
in ección, al no habe conseguido mues a de sang e en el pe íodo de
con alecencia. Los alo es ob enidos as la es imulación se esumen en la
Tabla 14:
Pa áme o
Fase Aguda
(n=16)
Basal
wildRV
acRV
PHA
IFN-
a
2,98 (1,65 – 6,82)
11,40 (7,32-38,76)
16,03 (7,29-37,07)
44,74 (31,04-62,57)
IFN-
g
1,67 (0,88-3,11)
1,80 (1,04-8,62)
3,14 (1,19-85,44)
144,9 (129-239,7)
IL-1
b
8,05 (1,86-13,67)
8,81 (1,91-36.13)
77,91 (9,00-1139)
948 (139-1575)
IL-6
18,05 (11,59-65,39)
137,8 (14,03-982,7)
1480 (149,9-2456)
1803 (549-3465)
IL-8
167 (124-317,3)
2021 (487,2-2720)
2779 (1562-2978)
4545 (2617-7458)
IL-10
2,98 (1,65-6,82)
23,82 (4,21-64,83)
36,52 (6,01-582,4)
92,50 (36,25-341,3)
IL-15
0,82 (0,33-1,22)
1,16 (0,0-2,33)
0,35 (0,0-1,21)
12,87 (11,00-23,00)
IL-12
0,0 (0,0-0,68)
0,0 (0,0-0,1)
0,70 (0,0-3,35)
135 (58,0-317,3)
TNF-
a
2,98 (1,65-6,82)
26,30 (4,48-145,9)
50,63 (9,54-289,0)
167,5 (136,0-348)
wildRV = cepa o a i us humana sal aje (Wa-1)
acRV = cepa o a i us acuna RIX4414
PHA = con ol posi i o (Fi ohemaglu inina)
Basal = con ol nega i o (Medio de cul i o)
Tabla 14: Valo es (pg/ml) de ci ocinas ob enidos as la es imulación de sang e comple a ob enida en Fase Aguda de pacien es de la
coho e in ec ados. Se ep esen an los da os como Mediana (Rango in e cua ílico)
Resul ados
!
105!
El G á ico 18 mues a la ep esen ación de los alo es donde se obse a una
po en e espues a inmune celula du an e la ase aguda de la in ección, con
p oducción de IFN-a, IFN-g, IL-1b, IL-6, IL-8, IL-10 IL-15 y TNF-a en espues a a
an ígenos del o a i us. En la ep esen ación g á ica de los alo es se obse an,
además, las di e encias en e los dos an ígenos de o a i us empleados. Como
G á ico 18: P oducción de ci ocinas (pg/ml) e aluadas median e análisis mul iplex en espues a a an ígeno sal aje de o a i us (RVwild)
y an ígeno acunal o a i us (RV ac) en sang e comple a de pacien e in ec ado en Fase Aguda. Se ep esen a el con ol nega i o pa a
de e mina los ni eles basales y el con ol posi i o con PHA. Se ep esen a la mediana de los alo es y el ango in e cua ílico. El es
de Wilcoxon ealizado mues a las di e encias en e los dos an ígenos de o a i us empleados.
ns = no signi ica i o PHA = Fi ohemaglu inina
Basal RVwild RV ac PHA
0
20
40
60
80
100
IFN-α&&pg/ml
ns
Basal RVwild RV ac PHA
0
100
200
300
400
IFN-γ%%pg/ml
ns
Basal RVwild RV ac PHA
0
500
1000
1500
2000
2500
IL-1β pg/ml
ns
Basal RVwild RV ac PHA
0
2000
4000
6000
IL-6 pg/ml
p=0.0067
Basal RVwild RV ac PHA
0
2000
4000
6000
8000
10000
IL-8 pg/ml
p=0.0067
Basal RVwild RV ac PHA
0
500
1000
IL-10 pg/ml
ns
Basal RVwild RV ac PHA
0
10
20
30
IL-15 pg/ml
ns
Basal RVwild RV ac PHA
0
200
400
600
IL-12 pg/ml
p=0.0293
Basal RVwild RV ac PHA
0
100
200
300
400
500
TNF-α pg/ml
ns
Resul ados
!
112!
En el caso de la coho e de pacien es acunados, se obse an di e encias
mínimamen e signi ica i as en la p oducción de ci ocinas en espues a a los dos
an ígenos de o a i us al ni el de IFN-a e IL-1b, pe o an solo en la mues a
ob enida as la acunación (Pos -Dosis 3) En es e caso, a di e encia de la
coho e de pacien es in ec ados, se ob ienen alo es lige amen e supe io es de
ci ocinas en la es imulación con el an ígeno sal aje de o a i us.
5.3.3 Compa ación de la espues a inmune celula ob enida en e la coho e de
pacien es in ec ados y acunados
En el G á ico 24 se mues a el es udio compa a i o en la espues a de ci ocinas
en e ambas coho es, compa ando los alo es de ci ocinas ob enidos en Fase
Aguda (Coho e In ec ados) y omando la mues a P e-Dosis 1 (Coho e
Vacunados) como mues a con ol.

Resul ados
!
113!
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
100
200
300
400
500
IFN-α&&pg/ml
wildRV acRV
p=0.0021 p=0.0010
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
50
100
IFN-γ%%pg/ml
wildRV acRV
ns ns
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
500
1000
1500
IL-1β pg/ml
wildRV acRV
p=0.0003 ns
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
1000
2000
3000
IL-6 pg/ml
wildRV acRV
p=0.0323 ns
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
1000
2000
3000
4000
IL-8 pg/ml
wildRV acRV
p=0.0025 ns
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
200
400
600
IL-10 pg/ml
wildRV acRV
ns ns
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
1
2
3
4
IL-15 pg/ml
wildRV acRV
ns ns
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
2
4
6
8
10
IL-12 pg/ml
wildRV acRV
ns ns
Fase Aguda P e-Dosis 1 Fase Aguda P e-Dosis 1
0
200
400
600
TNF-α%%%pg/ml
wildRV acRV
p=0.0420 ns
G á ico 24: Compa ación en los alo es de ci ocinas (pg/ml) ob enidos en e la coho e de pacien es in ec ados (Fase Aguda) y la mues a
P e-Dosis 1 (Vacunados) omada como mues a con ol, en espues a a an ígeno de o a i us sal aje (wildRV) y acunal ( acRV) Se ep esen a
la mediana de los alo es y el ango in e cua ílico. El es de Wilcoxon ealizado mues a las di e encias en la espues a en e ambas coho es.
Resul ados
!
114!
Como se puede obse a en la imagen, a ias ci ocinas p esen an di e encias en
su p oducción en e ambas mues as: IFN-a (con ambos an ígenos de o a i us),
IL-1b, IL-6, IL-8 y TNF-a (solo en espues a al an ígeno sal aje de o a i us) En
odos los casos, el ni el de es as ci ocinas es in e io en la mues a omada en
ase aguda de la in ección con espec o a la mues a con ol.
5.3.4 Co elación de la espues a inmune celula con el cu so clínico en la coho e de
pacien es in ec ados
Se es udió la co elación exis en e en e la espues a inmune celula du an e la
ase aguda de la in ección y el cu so clínico de los pacien es in ec ados median e
el análisis de Pea son.
En la Tabla 16 siguien e se p esen an los alo es de signi icancia del alo de
cada ci ocina con la es ancia hospi ala ia y el Sco e de G a edad de Vesika i:
Co elación Pea son
alo es p
IFN-
a
IFN-
g
IL-1
b
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-
a
Es ancia Hospi ala ia
0.874
0.848
0.050
0.102
0.340
0.028
0.562
0.435
0.119
Sco e Vesika i
0.156
0.417
0.002
0.019
0.013
0.227
0.934
0.116
0.207
Edad
0,116
0,745
0,123
0,223
0,113
0,353
0,823
0,441
0,652
Co elación Pea son
alo coe icien e
IFN-
a
IFN-
g
IL-1
b
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-
a
Es ancia Hospi ala ia
-0.043
+0.052
+0.497
+0.424
+0.255
+0.549
+0.172
+0.210
+0.481
Sco e Vesika i
-0.372
+0.218
-0.704
-0.578
-0.606
-0.320
-0.008
+0.592
-0.333
Edad
-0.422
-0.158
-0.540
-0.283
-0.425
-0.548
-0.063
+0.461
-0.126
Tabla 16: Asociaciones median e co elación de Pea son en e los alo es de ci ocinas y el Sco e de G a edad de Vesika i. Se ep esen a
el alo p ob enido (pa e supe io ) y el alo del coe icien e (pa e in e io )
Resul ados
!
115!
Encon amos po lo an o una asociación posi i a de los alo es de IL-10 con la
Es ancia Hospi ala ia (P=0.028, 2=+0.549) lo que indica que, a mayo
p oducción de es a ci ocina en espues a al o a i us, mayo se á el iempo de
ecupe ación y de es ancia hospi ala ia.
Po o o lado, hay a ias ci ocinas que se asocian con el Sco e de g a edad de
Vesika i: IL-1
b
(P=0.002, 2=-0.704), IL-6 (P=0.019, 2=-0.578) e IL-8 (P=0.013,
2=-0.606) mues an una asociación nega i a con el alo del sco e de g a edad.
Es o indica que a mayo capacidad de p oducción de las ci ocinas IL-1b, IL-6 e
IL-8 po pa e del pacien e in ec ado en espues a al o a i us, meno pun uación
alcanza en la escala de g a edad.
Pa a desca a que es as asociaciones no es u iesen elacionadas con la edad
del pacien e se co elaciona on los alo es de ci ocinas con la edad, no
ob eniéndose en ningún caso asociación signi ica i a alguna en e la edad del
pacien e y la capacidad de p oducción de ci ocinas en espues a a los an ígenos
de o a i us.
Resul ados
!
116!
5.3.5 Co elación en e la inmunidad celula y la inmunidad humo al en la coho e de
pacien es acunados
Pa a analiza si exis ía alguna asociación en e el í ulo de IgA especí icos en e
a o a i us y la espues a inmune celula del pacien e, seleccionamos aquellos
pacien es de la coho e acunados de los que u iésemos da os de inmunidad
humo al e inmunidad celula .
En un subg upo de 26 pacien es acunados es ablecimos una co elación en e
los alo es de ci ocinas p oducidos en espues a al an ígeno sal aje de o a i us
as la acunación (Pos -Dosis 3) y el í ulo de an icue pos IgA en e a o a i us
en sue o alcanzado as la acunación.
En la Tabla 17 se mues an los alo es de signi icación pa a las di e en es
asociaciones en e los ni eles de ci ocinas y el í ulo de an icue pos:
Como se puede obse a , encon amos una asociación posi i a en e la
p oducción de IL-15 y TNF-
a
con los alo es alcanzados de an icue pos IgA en
sue o en e a o a i us, en la coho e de pacien es acunados, da os
ep esen ados en el G á ico 25. En la coho e in ec ados no se pudo ealiza el
Co elación Pea son
alo es p
IFN-
a
IFN-
g
IL-1
b
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-
a
RV-IgA pos -dosis 3
(Sue o)
0,2165
0,3932
0,2450
0,2943
0,3892
0,3921
0,0310
0,2850
0,0023
Co elación Pea son
alo coe icien e
IFN-
a
IFN-
g
IL-1
b
IL-6
IL-8
IL-10
IL-15
IL-12
TNF-
a
RV-IgA pos -dosis 3
(Sue o)
0,2458
0,1712
0,2364
0,2095
-0,1762
0,1752
0,4237
0,2178
0,5713
Tabla 17: Asociaciones median e co elación de Pea son en e los alo es de ci ocinas y el í ulo de An icue pos RV-IgA en suse o
ob enidos en Pos -Dosis 3. Se ep esen a el alo p ob enido (pa e supe io ) y el alo del coe icien e (pa e in e io )
Resul ados
!
117!
es udio de asociación al no habe podido comple a da os de un mínimo
azonable de pacien es.
012345
0
1
2
3
4
IL-15
RV-IgA GMT (sue o)
p=0.031
2=+0.423
0100 200 300
0
1
2
3
4
TNF-α (pg/ml)
RV-IgA GMT (sue o)
p=0.002
2
=+0.571
G á ico 25: Asociación en e los ni eles de IL-15 y TNF-
a
p oducidos as la acunación y el í ulo de An icue pos en e a o a i us
alcanzado as la acunación en la coho e de pacien es acunados, median e el análisis de co elación de Pea son.

Resul ados
!
118!
5.4 Es udio compa a i o de los pe iles molecula es de inmunización humo al
en el sue o as la in ección na u al y as la acunación
Se ealizó el es udio compa a i o de los pe iles molecula es de inmunización
humo al gene ados as la in ección na u al y as la acunación, con el obje i o
de analiza di e encias.
Pa a ello se ealizó un pool ep esen a i o de mues as de sue o de cada coho e
(in ec ados s acunados) y se en en ó a un lisado de p o eínas de o a i us
(cepa Wa-1) sepa adas median e elec o o esis bidimensional y ans e idas a
una memb ana de PVDF (Inmunoblo ing)
En el G á ico 26 se mues an los di e en es pe iles de inmunización ob enidos:
Resul ados
!
119!
VP1
125kDa, pI:8.1
NSP1
(58kDa, pI:8.64)
VP6
(44kDa,pI:5.82) NSP2
(36kDa, pI:9.07)
NSP3
(34kDa, pI:5.19)
VP7
(37kDa, pI:4.43)
NSP5
(21kDa,pI:6.37)
15
25
35
55
70
100
130
WM
Sue os pacien es in ec ados con Ro a i us
pH 10 -------------------------------------------------------------------------- 3
VP8/VP5
(86kDa, pI: 5.1)
Peso Molecula (kDa)
70
55
35
25
15
100
130
10
WM
VP1
125kDa, pI:8.1
VP7
(37kDa, pI:4)
NSP3
(34kDa, pI:5.19)
NSP5
(21 kDa, pI: 6.37)
NSP1
(58kDa, pI:8.64)
VP6
(44kDa, pI:5.82)
VP3
(98kDa, pI:8.3)
VP2
(24.8 kDa, pI: 6.9)
VP8/VP5
(86kDa, pI: 5.1)
Sue os de pacien es acunados Ro aTeq™
pH 10 ------------------------------------------------------------------------------ 3
Peso Molecula (kDa)
G á ico 26: Pe iles molecula es de inmunización en sue o ob enidos en pool de mues as de A) pacien es in ec ados en ase de
con alecencia y B) pacien es acunados as la oma de la e ce a dosis (Pos -Dosis 3)
A
B
Resul ados
!
120!
En la Tabla 18 se elacionan las p o eínas i ales econocidas en ambas
coho es de pacien es:
P o eínas Ro a i us
Pool In ec ados
Pool Vacunados
Función/Localización
VP1
+
+
ARN polime asa / Co e
VP2
-
+
Unión a ARN / Co e
VP3
-
+
ARN T ans e asa / Co e
VP4 (VP5+VP8)
+
+
Anclaje / Supe icie
VP6
+
+
Es uc u al / Cápside in e na
VP7
+
+
Anclaje / Supe icie
NSP1
+
+
Unión a ARN / No es uc u al
NSP2
+
-
Unión a ARN / No es uc u al
NSP3
+
+
Unión a ARN / No es uc u al
NSP4
-
-
En e o oxina / No es uc u al
NSP5
+
+
Unión a ARN / No es uc u al
Tabla 18: Reconocimien o di e encial de los An icue pos IgA an i-RV en pool de pacien es de la coho e in ec ados
y acunados.
Resul ados
!
121!
5.5 Análisis del ansc ip oma en el pacien e in ec ado y acunado
Median e secuenciación de ARN (ARN-seq) se p ocedió a cuan i ica la
exp esión di ec a de odos los genes p esen es en la sang e de los pacien es
in ec ados y acunados.
5.5.1 Análisis del ansc ip oma en el pacien e in ec ado s g upo con ol
5.5.1.1 Ca ac e ís icas clínicas de pacien es in ec ados y g upo con ol
Todos los niños eclu ados pa a es e sub-es udio ( ango de edad 1,9-14,4
meses, a io masculino/ emenino = 8,3) enían el calenda io de inmunización de
u ina al día y ninguno había ecibido la acuna de o a i us o había su ido
in ecciones de o a i us p e ias en el momen o de la oma de mues as. Los
pacien es empleados pa a g upo con ol pe enecían a la coho e de pacien e
acunados en el momen o p e io a la acunación (P e-dosis 1). En el g upo de
pacien es in ec ados, el iempo medio en e el ing eso hospi ala io y la oma de
mues as ue de es días. Todos los pacien es in ec ados mos a on una
ecupe ación comple a después de una es ancia media hospi ala ia de 4 días
(des iación es ánda = 2,3 días)
Resul ados
!
128!
Los da os analizados indican una cla a ac i ación de los ac o es de
ansc ipción E2F en las mues as de pacien es in ec ados: E2F1 (D=2,2), E2F2
(D=2,3) y E2F8 (D=5). Usando di e en es uen es biológicas y me odología de
edes se iden i icó que es os ac o es de ansc ipción egulan a ios aspec os
del ciclo celula a a és de la modulación de la exp esión de di e en es
complejos de econocimien o de o igen (ORCs) y con olando el ciclo mi ó ico,
como se puede obse a en el G á ico 31:
G á ico 31: Análisis de edes de los ac o es de ansc ipción E2F indicando el complejo escena io de in e acciones elacionadas
con el ciclo celula . El colo ojo indica la si uación de genes ac i ados.

Resul ados
!
129!
Po o o lado, los da os indican que dos ca ego ías de genes elacionados con
espues a inmune como son los genes de espues a a Mala ia y las
in e acciones Ci ocina-Recep o de Ci ocina, se encuen an cla amen e
inhibida en los pacien es con espec o al g upo con ol.
De los genes de ambas ca ego ías, elacionados con espues a inmune, des aca
el gen pa a la p o eína 27 inducible po IFN-
a
(IFI27) que mues a el alo de
inc emen o mayo de odos los genes di e encialmen e exp esados en el g upo
de pacien es con espec o al g upo con ol (D=23,8, alo P=0.0014). O o gen
con ac i ación mode ada en el g upo de pacien es ue el gen pa a in e leucina-
12 (IL-12) (D=3,5, alo P=0.013).
En e los genes con mayo inhibición encon ados en nues os da os des acan el
gen pa a la hemoglobina
g
1 (HBG1) (D= -77, alo P=0.0016), el gen pa a la
p o eína de unión a Selenio 1 (SELENBP1) (D= -41, alo P=0.001) y el gen
pa a el g upo sanguíneo Diego (SLC4A1) (D= -27, alo P=0.001).
De en e la se ie de genes encon ados con inhibición en su exp esión, des acan
además es de los cua o genes pa a glico o ina de ec ados median e
secuenciación del ARN: los genes pa a las glico o inas A (GYPA) (D= -7,5,
alo P=0.0037), glico o ina B (GYPB) (D= -20, alo P=0.0025) y glico o ina
C (GYPC) (D= -2,3, alo P=0.0014)
Resul ados
!
130!
El análisis de las edes de in e acción de los di e en es genes pa a la glico o ina
(G á ico 32) mues a elación con o os genes elacionados con el me abolismo
del hema íe como son: p o eína es abilizado a hemoglobina-a (AHSP),
anhid asa ca bónica 1 (CA1), anhid asa ca bónica 4 (CA4), p o eína
anspo ado a aniónica Banda-3 (SLC4A1) y el enzima mi ocond ial del a
aminole ulina o sin asa 2 (ALAS2), odos ellos con exp esión inhibida du an e la
in ección po o a i us.
G á ico 32: Análisis de edes de los genes pa a la glico o ina GYPA/B/C y sus in e acciones con o os genes elacionados con el
hema íe. El colo ojo y e de indica espec i amen e la si uación de genes ac i ados e inhibidos.
Resul ados
!
131!
La exp esión de los genes en el g upo de pacien es in ec ados mos aba además
una al a co elación (Pea son = 0.8) como se mues a en el G á ico 33, lo que
es compa ible con una egulación di ec a de es os genes sob e el ciclo celula .
G á ico 33: Mapa de calo que mues a los pa ones de co elación en e genes di e encialmen e exp esados en los pacien es
in ec ados. La unción de densidad (línea e de) en la leyenda de la imagen (a iba izquie da) indicaba la can idad de genes que
mues a el co espondien e alo de co elación.
Resul ados
!
132!
5.5.1.4 Análisis ansc ip ómico de los genes de espues a inmuni a ia en e al
o a i us
!
Cen ando el análisis ansc ip ómico en los genes elacionados di ec amen e
con la espues a inmuni a ia, ob enemos un o al de 75 genes di e encialmen e
inhibidos/ac i ados que nos dan una idea de como es la espues a inmune
gene ada du an e la in ección po o a i us. En la Tabla 20 se elacionan los
genes que se encuen an di e encialmen e inhibidos y ac i ados, así como su
unción conocida.
Resul ados
!
133!
Ensembl_ID
Nomb e Gen
C omosoma
D
P- alo ajus ado
Función del Gen
ENSG00000123838
C4BPA
ch 1
-11.428
0.00585665
Inhibe la acción del complemen o
ENSG00000162722
TRIM58
ch 1
-9.562
0.00142852
Regulación nega i a exp esión TLR2
ENSG00000169245
CXCL10
ch 4
-5.704
0.01307760
Quimioa ayen e células T, NK, dend í icas
ENSG00000091181
IL5RA
ch 3
-3.930
0.00142852
Recep o pa a IL-5
ENSG00000090920
FCGBP
ch 19
-3.331
0.00142852
P o eína de unión a Fc IgG
ENSG00000105366
SIGLEC8
ch 19
-3.252
0.00142852
Recep o inhibido memb ana eosinó ilos
ENSG00000158488
CD1E
ch 1
-2.763
0.01055640
P esen ación de an ígenos lipídicos a células T
ENSG00000179639
FCER1A
ch 1
-2.624
0.00142852
Recep o al a a inidad Fc IgE
ENSG00000163735
CXCL5
ch 4
-2.619
0.00689309
Quimio axis y ac i ación de neu ó ilos
ENSG00000232629
HLA-DQB2
ch 6
-2.465
0.03197730
P esen ación an igénica
ENSG00000237541
HLA-DQA2
ch 6
-2.089
0.00142852
P esen ación an igénica
ENSG00000196083
IL1RAP
ch 3
-2.022
0.00142852
P o eína acceso ia del ecep o IL-1
ENSG00000172183
ISG20
ch 15
2.034
0.00142852
Ac i idad an i i al en e a i us ARN
ENSG00000137441
FGFBP2
ch 4
2.044
0.00142852
P o eína con ac i idad ci o óxica
ENSG00000176083
ZNF683
ch 1
2.045
0.00689309
Di e enciación células NK
ENSG00000163464
CXCR1
ch 2
2.058
0.00142852
Recep o pa a IL-8, ac i ación neu ó ilos
ENSG00000198933
TBKBP1
ch 17
2.060
0.01554680
Supe i encia células NK
ENSG00000008516
MMP25
ch 16
2.089
0.00142852
Me alop o einasa sec e ada po células NK
ENSG00000137265
IRF4
ch 6
2.164
0.00142852
Fac o egulado del in e e on
ENSG00000196549
MME
ch 3
2.170
0.00142852
CD10, enzima me alop o einasa
ENSG00000004468
CD38
ch 4
2.173
0.00142852
Ma cado de ac i ación celula en lin oci os
ENSG00000119632
IFI27L2
ch 14
2.196
0.00142852
Ac i idad p o-apop ó ica
ENSG00000105374
NKG7
ch 19
2.205
0.00142852
Enzima p o eolí ica libe ada po células NK
ENSG00000181036
FCRL6
ch 1
2.251
0.00373316
Ma cado di e enciación lin oci os ci o oxicos
ENSG00000077984
CST7
ch 20
2.329
0.00142852
Regulación células NK y células T
ENSG00000115523
GNLY
ch 2
2.339
0.00142852
Enzima ci o óxica de células NK y CD8
ENSG00000160791
CCR5
ch 3
2.340
0.00142852
Recep o quimiocinas células T
ENSG00000137757
CASP5
ch 11
2.348
0.03572250
Caspasa con ac i idad in lama o ia
ENSG00000124256
ZBP1
ch 20
2.371
0.00263678
Senso de ARN i al de inmunidad inna a
ENSG00000105501
SIGLEC5
ch 19
2.459
0.00263678
Molécula adhesión células agocí icas
ENSG00000057657
PRDM1
ch 6
2.469
0.00142852
Rep eso IFN-b, p oli e ación cel plasmá icas
ENSG00000142089
IFITM3
ch 11
2.487
0.03388020
E ec o an i i al sis ema inmune inna o
ENSG00000100453
GZMB
ch 14
2.513
0.00142852
G anzima B exp esado po células ci o óxicas
ENSG00000026751
SLAMF7
ch 1
2.517
0.00142852
Regulación células NK, ma cado cel plasma
ENSG00000161570
CCL5
ch 17
2.533
0.00142852
RANTES, quimio axis leucoci os
ENSG00000205020
CCL4L1
ch 17
2.662
0.03637160
Ci ocina in lama o ia
ENSG00000111537
IFNG
ch 12
2.754
0.02401320
In e e on-g, ac i ación agoci osis
ENSG00000183508
FAM46C
ch 1
2.797
0.00142852
P o eína de espues a a IFN-I
ENSG00000160932
LY6E
ch 8
2.971
0.00142852
P o eína an i i al
ENSG00000163568
AIM2
ch 1
2.995
0.00263678
P o eína del in lamasoma
ENSG00000100290
BIK
ch 22
3.272
0.00142852
P o eína an i i al
ENSG00000112299
VNN1
ch 6
3.293
0.00142852
Enzima pan e einasa sec e ada po células NK
ENSG00000188389
PDCD1
ch 2
3.319
0.00142852
P o eína de mue e celula
ENSG00000100450
GZMH
ch 14
3.401
0.00142852
G anzima H sec e ada po células ci o óxicas
ENSG00000173585
CCR9
ch 3
3.410
0.00142852
Recep o quimiocina lin oci os
ENSG00000168811
IL12A
ch 3
3.479
0.01307760
Subunidad a IL-12
ENSG00000173372
C1QA
ch 1
3.499
0.00142852
Subunidad A componen e c1q
ENSG00000165948
IFI27L1
ch 14
3.674
0.00142852
Respues a a in e e ón, p o-apop ó ica
ENSG00000137965
IFI44
ch 1
4.140
0.00142852
P o eína de espues a a in e e ón
ENSG00000123095
BHLHE41
ch 12
4.249
0.00142852
Desa ollo de células B-1ª
ENSG00000137959
IFI44L
ch 1
4.278
0.01467030
Respues a a in e e ón, an i i al
ENSG00000123689
G0S2
ch 1
4.417
0.00142852
Ac i ación y di e enciación células T CD8+
ENSG00000173369
C1QB
ch 1
4.532
0.00142852
Subunidad B componen e c1q
Tabla 20: Exp esión di e encial de genes elacionados con espues a inmuni a ia en pacien es s con ol
mos ando la unción de los genes

Resul ados
!
134!
ENSG00000134285
FKBP11
ch 12
4.821
0.01382790
Di e enciación células plasmá icas
ENSG00000182985
CADM1
ch 11
5.439
0.00142852
Adhesión celula que media ci o oxicidad NK
ENSG00000240505
TNFRSF13B
ch 17
5.476
0.00142852
TACI, ac i ación células B
ENSG00000117650
NEK2
ch 1
5.595
0.00142852
Di e enciación células B
ENSG00000105974
CAV1
ch 7
5.673
0.00142852
Ca eolinas, inmunidad inna a
ENSG00000100985
MMP9
ch 20
5.712
0.00142852
Me alop o einasa sec e ada po células NK
ENSG00000109956
B3GAT1
ch 11
5.742
0.00142852
CD57, ma cado células NK
ENSG00000089685
BIRC5
ch 17
6.181
0.00142852
Desa ollo y ac i ación células NK
ENSG00000165409
TSHR
ch 14
6.695
0.03088750
Recep o TSH, ac i ación células inmunes
ENSG00000189233
NUGGC
ch 8
6.812
0.00142852
Fo mación cen o ge minal células B
ENSG00000089692
LAG3
ch 12
7.067
0.00142852
Ac i ación células T, B y NK
ENSG00000254709
IGLL5
ch 22
7.269
0.00142852
Cadena lige a lambda inmunoglobulinas
ENSG00000048462
TNFRSF17
ch 16
7.364
0.00142852
Ac i ación células B
ENSG00000011590
ZBTB32
ch 19
7.390
0.00142852
P oli e ación células NK
ENSG00000125726
CD70
ch 19
7.468
0.00373316
Ma cado ac i ación células T
ENSG00000170476
MZB1
ch 5
9.009
0.00142852
Chape ona sín esis inmunoglobulinas
ENSG00000145850
TIMD4
ch 5
9.230
0.00142852
Desa ollo espues as Th2
ENSG00000204936
CD177
ch 19
9.922
0.00142852
Ac i ación y p oli e ación neu ó ilos
ENSG00000115884
SDC1
ch 2
10.731
0.00142852
Sindecano, p oli e ación de células inmunes
ENSG00000132465
IGJ
ch 4
11.324
0.00142852
Cadena J, unión inmunoglobulinas
ENSG00000165949
IFI27
ch 14
23.755
0.00142852
Respues a a in e e ón, p o-apop ó ica
Resul ados
!
135!
5.5.2 Análisis del ansc ip oma en el pacien e acunado s g upo con ol
En el análisis del ansc ip oma ealizado sob e las mues as ob enidas as
la pau a comple a de acunación comp ado con el g upo con ol p e io a la
acunación no ob u imos ninguna exp esión di e encial signi ica i a, lo cual e a
de espe a pues se co esponde con momen os de eposo inmunológico con lo
cual la huella de exp esión génica no di ie e de la del g upo con ol.
Resul ados
!
136!
5.6 Ca ac e ización de la espues a inmune celula as la in ección y as la
acunación de o a i us
T as el ensayo de WBS se analiza on las células o ales esul an es as la
es imulación con el an ígeno de o a i us sal aje (RVwild) median e ci ome ía de
lujo pa a el es udio del ma cado de ac i ación CD69 en di e en es
subpoblaciones celula es: T-CD4+, T-CD8+ y célula Na u al Kille (NK)
CD16+CD56+
5.6.1 Ca ac e ización de la espues a celula du an e la ase aguda de la in ección po
o a i us
Se es udia on los cambios en las poblaciones lin oci a ias y el análisis de la
exp esión del ma cado de ac i ación lin oci a ia CD69+ as el ensayo de
es imulación con an ígeno sal aje de o a i us median e WBS en los 16
pacien es eclu ados du an e la ase aguda de la in ección po o a i us. Los
da os ob enidos se ep esen an en la Tabla 21 y el G á ico 34:
FASE
AGUDA
n=16
Células T-CD4
Células T-CD8
Células NK
%CD4+
%CD4+CD69+
%CD8+
%CD8+CD69+
%CD16+CD56+
%CD16+CD56+
CD69+
Basal
42,1 (37,9-46,4)
14,8 (13,8-17.0)
19,9 (18,7-23,2)
5,2 (2,6-6,6)
6,9 (4,8-10,3)
0,6 (0,3-1,1)
RVwild
42,0 (39,4-46,8)
17,7 (15,6-19,3)
20,4 (19,5-26,6)
11,3 (8,1-13,1)
8,0 (5,6-10,2)
1,3 (0,9-1,7)
PHA
48,8 (47,5-51,3)
21,8 (20,4-25,3)
25,6 (23,4-27,0)
10,4 (9,3-11,3)
8,3 (6,7-10,1)
1,2 (1,0-1,5)
Tabla 21: Valo es ela i os de las di e en es poblaciones lin oci a ias y la exp esión de ma cado de ac i ación CD69 en pacien es
in ec ados en ase aguda. Valo es exp esados en po cen ajes de lin oci os o ales: mediana ( ango in e cua ílico)
Resul ados
!
137!
Basal RVwild PHA
0
20
40
60
%CD4+
ns
Basal RVwild PHA
0
10
20
30
%CD4+CD69+
p = 0.002
Basal RVwild PHA
0
10
20
30
40
%CD8+
p = 0.013
Basal RVwild PHA
0
5
10
15
20
%CD8+CD69+
p < 0.0001
Basal RVwild PHA
0
5
10
15
%CD16+CD56+
ns
Basal RVwild PHA
0
1
2
3
4
%CD16+CD56+CD69+
p < 0.0001
G á ico 34: Dis ibución de las di e en es poblaciones lin oci a ias (células T-CD4+, células T-CD8+ y células NK CD16+CD56+) y
exp esión del ma cado de ac i ación CD69 as el ensayo WBS de es imulación con an ígeno sal aje de o a i us (RVwild) en
pacien es in ec ados en ase aguda. Se mues an las compa aciones ealizadas median e es de Wilcoxon (ns: no signi ica i o)
PHA: Fi ohemaglu inina (con ol posi i o)
Discusión
!
144!
6.1.3 Di e encias en los ni eles de an icue pos alcanzados median e la in ección
na u al y la acunación
Los esul ados del es udio no mues an di e encias signi ica i as en los
alo es de GMT en sue o y sali a inales alcanzados as la in ección na u al
y as la acunación (Tabla 4) Si bien los alo es de se ocon e sión mues an
di e encias signi ica i as, es as son debidas a las di e encias en los alo es
basales de an icue pos en e ambas coho es. La azón de es as di e encias
adica ía en las di e en es edades en e ambas coho es y/o en la posibilidad
de in ecciones subclínicas p e ias en la coho e in ec ados.
Si bien el análisis de es os esul ados p esen a como limi ación el bajo
nume o de pacien es analizados en la coho e in ec ados, podemos conclui
que an o a ni el de mucosa o al como a ni el sis émico no se ap ecian
di e encias signi ica i as en la espues a de an icue pos RV-IgA en e ambas
coho es.
Recien emen e, un abajo publicado en Finlandia concluía que la espues a
de An icue pos en e a la p o eína de cápside de o a i us VP6 e a simila
as la in ección na u al y as la acunación con Ro aTeqâ (220) Es e
hallazgo es á en línea con nues os esul ados basados en an icue pos IgA
o ales en e a o a i us, en sue o y sali a.

Discusión
!
145!
6.1.4 Co elación en e los compa imen os sé ico y mucosa o al
Los es udios de asociación ealizados en e los alo es ob enidos de RV-IgA
en ambos compa imen os (sis émico y sali a) indican que no exis e
co elación alguna en e las espues as humo ales en sue o y sali a (G á ico
8) Es a íamos hablando, po an o, de espues as independien es y no
elacionadas, gene adas a pa i del mismo es ímulo. Si bien, es udios
p e ios indicaban una asociación en e los alo es de IgA in es inal y los
alo es sé icos (208, 221), nues os esul ados mues an que esa asociación
no es ex apolable a la mucosa o al.
Sin emba go, en el caso de acunas sis émicas si se ha demos ado una
co elación posi i a en e los alo es ob enidos en sue o y en sali a, como es
el caso de la acuna polisacá ida conjugada en e a meningococo (222)
Pa ece, po an o, que la ía de adminis ación condiciona la asociación en e
las espues as de ambos compa imen os.
Ya se discu ió p e iamen e la con eniencia del uso del RV-IgA sali a como
co ela o de p o ección al e na i o al sé ico. El hecho de que no haya
co elación en e ambos compa imen os apoya el uso de la sali a como un
posible co ela o al e na i o, si bien los bajos alo es de con e sión
encon ados y las limi aciones e in e e encias p esen es en sali a, lo
desaconsejan desde nues o pun o de is a.
Discusión
!
146!
6.2 Respues a de ci ocinas en sue o y en mucosa o al as la in ección na u al
de o a i us y as la acunación
El pa ón de ci ocinas libe ado du an e la espues a inmuni a ia o
pe sis en e as la in ección nos mues a una isión impo an e del p oceso
inmune que se ha desa ollado (223) Es a espues a se p oduce
no malmen e a las pocas ho as de la in ección o del con ac o con el
pa ógeno y la pe sis encia en el iempo depende á del iempo de
esolución del p oceso y de la in ensidad de la eacción (224) Po lo an o,
según las mues as omadas en nues o es udio debemos in e p e a es
momen os bien di e enciados: basal (p e io al con ac o con el pa ógeno)
que co esponde ía a la mues a P e-Dosis 1 de la coho e acunados;
ase aguda ( ase aguda de la in ección) y ecupe ación as la
in ección/ acunación, que co esponde ía a las mues as de
con alecencia (coho e in ec ados) y Pos -Dosis 3 (coho e acunados).
6.2.1 Respues a inmune mediada po ci ocinas en espues a a la in ección po
o a i us en mucosa o al
6.2.1.1 Respues a p oin lama o ia del epi elio mucosa o al
Los da os ob enidos mues an po p ime a ez en la li e a u a, que la
in ección na u al po o a i us p oduce en ase aguda una espues a
mediada po ci ocinas en la mucosa o al. Las células del epi elio o al
econocen la in asión del pa ógeno a a és de sus ecep o es inna os
especí icos y son es imuladas a p oduci ci ocinas. Es a espues a de
Discusión
!
147!
ci ocinas po pa e de células de epi elio o al se había demos ado
p e iamen e du an e in ecciones o in lamaciones locales (225), pe o es la
p ime a ez que se demues a du an e una in ección in es inal como el
o a i us, pa a la cual no hay e idencia de que in ec e la ca idad bucal.
Se obse an di e encias signi ica i as en los ni eles de a ias ci ocinas en
los pacien es du an e la ase aguda de la in ección (Tabla 6), lo que
sugie e una espues a sis émica a la in ección po o a i us, que incluye
la mucosa o al. Los da os mues an ambién que se a a de una espues a
coo dinada asociada a un inc emen o de ci ocinas p oin lama o ias, lo que
indica una ans e encia de la espues a in lama o ia que se p oduce a
ni el in es inal hacia la sali a en una o ma pe ec amen e o ques ada.
Los pacien es en ase aguda de la in ección mues an ni eles
inc emen ados de a ias ci ocinas asociadas a espues a inmune inna a,
pa icula men e IL-22 pe o ambién IL-6, IL-8 e IL-1b (G á ico 9) Todas
ellas son ci ocinas p oin lama o ias que ac úan a ayendo di e sas células
inmuni a ias como polimo onuclea es hacia el luga de la in ección. La
mayo ía de es as ci ocinas son p oducidas po el epi elio en espues a a
la en ada del pa ógeno (226, 227) Po an o, aunque no hay e idencia
has a la echa de en ada de pa ículas de o a i us en el in e io de la
mucosa o al, nues os da os sugie en que la mucosa o al p oduce una
espues a inmune a a és de la libe ación de mediado es p o-
in lama o ios, p esumiblemen e a a és de la comunicación inmuni a ia
en e la mucosa in es inal y la mucosa o al, mos ando una espues a
Discusión
!
148!
inmune global en oda la mucosa del huésped en espues a a la in ección
po o a i us.
O as ci ocinas de o igen adap a i o como el IFN-g, p oducida
p incipalmen e po los lin oci os T, no se ha encon ado di e encialmen e
exp esado en los pacien es, lo que indica ía que el sis ema inmune
adap a i o no pa icipa ía al menos en la espues a inmune en la mucosa
o al. El IFN-l, elacionada con la de ensa epi elial en e a pa ógenos
i ales ampoco no ue de ec ada en nues o es udio.
6.2.1.2 Pa icipación de la IL-22 en la espues a inmune en la mucosa o al
La ci ocina que más no ablemen e se mos ó inc emen ada con espec o
a sus alo es basales ue la IL-22, ci ocina no asociada a sín esis epi elial.
Es a ci ocina es p incipalmen e sin e izada po células lin oides inna as
ipo 3 (ILC-3), células dend í icas y células NK (228) No hay e idencia de
sín esis de IL-22 po las células epi eliales, po an o su p esencia en la
mucosa o al es á asociada a una espues a inmune de células lin oides
inna as, sugi iendo la p esencia de células lin oides ac i adas en la
mucosa o al en espues a a la in ección in es inal. La diana p incipal pa a
es a ci ocina son las células epi eliales donde ac úa como po en e
mediado del p oceso in lama o io en e a los pa ógenos in aso es (229)
En modelos expe imen ales de a ón, la adminis ación de IL-22 en células
epi eliales in es inales p odujo la eliminación de la in ección po o a i us
ac uando como agen e an i i al de amplio espec o (230) También se ha
Discusión
!
149!
elacionada con unciones p o ec o as en el epi elio a a és de su acción
egene ado a en el epi elio dañado as la in ección (229, 231, 232)
Po an o, nues os esul ados mues an que no solo se p oduce una
espues a po pa e de las células epi eliales en espues a a la in ección
in es inal po o a i us, sino que ambién se de ec a implicación de las
células lin oides inna as en es a espues a.
6.2.1.3 Al e ación en la p oducción del IFN-
a
2 en la mucosa
Un da o bas an e signi ica i o encon ado en nues o es udio de ci ocinas
en sali a de pacien es in ec ados es que los alo es de IFN-a2 se
encon a on signi ica i amen e descendidos du an e la ase aguda de la
in ección en compa ación con la ase de con alencencia y con los alo es
basales de es a ci ocina. Va ios es udios indican que la exp esión
cons i u i a de in e e ón ipo I en las supe icies mucosas juega un
impo an e papel en el con ol de la p oli e ación y unción del epi elio,
egulando la eno ación epi elial (233-235) Los o a i us han desa ollado
una amplia a iedad de mecanismos di igidos a e adi la espues a
an i i al del in e e ón ipo I del huésped con el obje i o de alcanza un
ni el de eplicación op imo en el epi elio del huésped (236) po ejemplo
e i ando la de ección de componen es i ales o inhibiendo la unción de
los ac o es de ansc ipción que inician la espues a del in e e ón (237)
Sin emba go, es poco p obable que los alo es descendidos de IFN-a2
obse ados en la mucosa o al en ase aguda de la in ección po o a i us
sean debidos a una inhibición especí ica p omo ida po el o a i us, dado

Discusión
!
150!
que no hay e idencia de en ada del o a i us en el epi elio o al. Pa ece
mas p obable que el daño p oducido en la mucosa in es inal conlle e una
in e e encia en la homeos asis no mal de p oducción del in e e ón a lo
la go de odo el sis ema de mucosas.
6.2.1.4 Asociación de los alo es de EGF con es ancia hospi ala ia
O o pa áme o encon ado ele ado en las mues as de sali a ecogidas
en ase aguda en los pacien es in ec ados es el ac o de c ecimien o
epidé mico (EGF) (G á ico 9) Es a p o eína, es á inculada a la
egene ación del epi elio as una lesión mucosa, es imulando la
cica ización de he idas y la epa ación del ejido (238) Es udios p e ios
en modelos animales de ce dos neona ales in ec ados con o a i us
apun an hacia un papel bene icioso con a con ni eles isiológicos al os
de EGF en es imula la ecupe ación del epi elio in es inal as la in ección
(239) Po o o lado, la aplicación de EGF en la mucosa puede p omo e
la p oli e ación in es inal y mejo a la ecupe ación as una lesión
in es inal, y pod ía se un a amien o e ec i o en el sínd ome de isquemia-
epe usión en modelos animales (240) O os au o es, basándose en
es udios animales, p oponían la hipó esis de suplemen ación con EGF
as una lesión in es inal como po encial a amien o que mejo aba el
p onós ico de los pacien es (241) lo que ab ía la pue a a un no edoso
posible a amien o de ecupe ación as la in ección po o a i us.
Según nues os esul ados, los alo es de EGF se encuen an
aumen ados du an e la in ección na u al con o a i us. Es a
Discusión
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151!
sob eexp esión de los alo es de EGF en los pacien es in ec ados pod ía
suge i una espues a de ecupe ación po pa e del huésped al daño
inducido en la mucosa in es inal po la in ección del o a i us. La pe dida
de la homeos asis no mal de la mucosa induci ía la sín esis de EGF a lo
la go de oda la mucosa con el obje i o de ecupe a la in eg idad de es a
as la in ección.
Además, nues os esul ados mues an una asociación de los alo es de
EGF con la du ación de la es ancia hospi ala ia (G á ico 15) Cuan o mayo
e an los ni eles de EGF en las mues as de ase aguda de pacien es
in ec ados, más co a e a la es ancia hospi ala ia. Se pod ía a gumen a
que mayo es ni eles de EGF e leja ían una espues a más pode osa de
ecupe ación de la homeos asis en la mucosa, acili ando la ecupe ación
y esul ando en una meno es ancia hospi ala ia. Es a asociación, de
con i ma se p ospec i amen e, pe mi i ía ealiza p edicciones sob e
es ancia hospi ala ia y ecupe ación de la in eg idad de la mucosa a a és
de un bioma cado no-in asi o como es la sali a. Sin emba go, debemos
señala como una limi ación impo an e de nues o es udio el limi ado
nume o de indi iduos analizados.
6.2.1.5 Asociación en e o as ci ocinas encon adas en sali a y g a edad de la
en e medad
Además del EGF, o as ci ocinas encon adas en sali a du an e la ase
aguda de la en e medad mos aban asociación con pa áme os clínicos
de g a edad de e minados po el sco e clínico de g a edad de Vesika i
Discusión
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152!
(Tabla 10) Las ci ocinas que mos aban asociación signi ica i a ue on
IFN-g, IL-6, IL-10 e IL-12. Sin emba go, de odas ellas solamen e la IL-6
mos ó di e encias lige amen e signi ica i as en e los alo es en ase
aguda y los alo es de con alecencia, po ello la in e p e ación de es a
asociación clínica debe se hecha con p ecaución.
6.2.1.6 Pe il de ci ocinas en sue o de pacien es in ec ados se asocia con g a edad de
la en e medad
Los alo es de ci ocinas ob enidos en el sue o de los pacien es in ec ados
y as el pe iodo de con alecencia mues an a ias ci ocinas con alo es
signi ica i amen e al e ados du an e la ase aguda de la in ección (Tabla
6) Así, nos encon amos ele aciones signi ica i as en EGF, IL-8, IL-1b, IL-
10, IL-12, TNF-a e IFN-g Los cambios más signi ica i os se p oducen en
EGF y en IFN-g. El aumen o sé ico de la molécula de EGF end ía a
con i ma lo mismo que obse amos en sali a y es a ía en línea con la
misma a gumen ación que el aumen o en la mucosa, es o es, in en o de
ecupe ación de la mucosa dañada as la in ección. Po o o lado, IFN-g
es una ci ocina libe ada po una g an a iedad de células inmuni a ias
en e las que des acan la célula T CD4+ y la célula NK, y cons i uye un
po en e ac i ado de la espues a inmune inna a en e a i us a a és de
la ac i ación de los mac ó agos y sus capacidades agocí icas (242) O as
ci ocinas signi ica i amen e ele adas co esponden a un pe il p o-
in lama o io, como son IL-8, IL-1b y TNF-a, p oducidas po múl iples
es i pes celula es y que ac i an el es ado de in lamación sis émica en el
Discusión
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153!
huésped. Es os esul ados ienen a con i ma el ca ác e sis émico de la
in ección po o a i us, no limi ándose la in lamación al compa imen o
in es inal sino que se aduce en la ele ación de ma cado es in lama o ios
sis émicos especí icos, como o os au o es habían desc i o an e io men e
(243)
Sin emba go, nues os esul ados mues an po p ime a ez en la
li e a u a una asociación en e los alo es sé icos de algunas ci ocinas y
a ios pa áme os clínicos de g a edad ecogidos en el sco e de Vesika i
(Tabla 11) que no mues an dependencia con la edad del pacien e. De
es e modo, podemos es ablece un pe il de ci ocinas sé icas (IFN-a, IFN-
g, IL-1b e IL-12) que mues an una asociación posi i a con el sco e de
g a edad de Vesika i (G á ico 16) Has a la echa, la es a i icación de
g a edad en la in ección po o a i us se ealiza en base a escalas
exclusi amen e clínicas que no inco po an ningún pa áme o de
labo a o io (244) Se ía in e esan e e alua de acue do a es os esul ados
si la inco po ación de es e pe il de ci ocinas sé icas a las ac uales escalas
de clasi icación de la g a edad pod ían apo a algo.
6.2.2 Respues a inmune mediada po ci ocinas en espues a a la acunación
El análisis de ci ocinas as la acunación en e a o a i us mues a como
no se p oducen cambios signi ica i os en sus alo es en sue o y sali a
(Tabla 7) Es os esul ados indican que la acunación no p oduci ía
in lamación sis émica, al menos que pe du e un mes después de la ul ima
dosis de acuna.