Untersuchungen der molekularen genetischen Grundlagen der Rifam-Picin- und Isoniazid-Resistenz von afrikanischen Isolaten des M. tuberculosis-Komplexes
Kathrin Maria Gerda Schilke
Dr. med. Untersuchung der molekularen genetischen Grundlagen der Rifampicin- und Isoniazid-Resistenz von afrikanischen Isolaten des M. tuberculosis-Komplexes Geboren am 02.10.1968 in Göttingen Reifeprüfung am 11.06.1988 in Kiel Studiengang des Fachbereichs Medizin von WS 1989 bis SS 1995 Physik am 02.09.1991 an der Universität Heidelberg Klinische Studie an der Universität Heidelberg Praktischjahr in Heidelberg und Stockholm Staatsprüfungen am 31.10.1995 an der Universität Heidelberg Promotion: Kindermedizin Doktor: Prof. Dr. med. H. J. Bremer Thema der Arbeit sind die molekularen Grundlagen der Rifampicin- und Isoniazid-Resistenz (INH) von Mycobacteria in Ländern mit hohem Infektionsrisiko.
Die Rifampicin-Resistenz von Mycobacterien gilt als ein Marker für
Die molekulare Basis für diese Methoden ist
Resistenz beruht auf Mutationen in einem beschriebenen Abschnitt des
rpo
B Genen, die die
Die Mutationen verursachen, dass Rifampicin
Bei 94% der 103 Rifampicin-resistenten Stämme, darunter 79 multiresistenten Stämme aus Südafrika, wurden in der zentralen Sektion des rpo B-Gens missense Mutationen festgestellt. Neun Codons in der Sektion der Aminosäure 504 bis 533 wurden von Konsensationen betroffen. Bei einem Stamm traten 18 verschiedene Missense mutationen auf. Bei einem Stamm wurde eine stille Mutation festgestellt. Mutationen in Codon 504 lagen außerhalb der bisher bekannten Sektion des Gen, wobei die Mutationen von 10 Mutationen in Europa und 10 Mutationen in Nordamerika entsprachen den Ergebnissen der Beobachtungen, bei denen sich die Ergebnisse der Erforschung und der Beobachtung von Isolationsspezifikationen in den zwei häufigsten Sequenz- und Sequenz-Lokalen nicht verglichen.
Eine Voraussetzung für die Entwicklung einer molekularen genetischen Resistenzdiagnostik für
Es sollte die Vielfalt der Punktmutationen und die Erweiterung der
Zentrale Abschnitte des
rpo
B-Genen auf 90
Die Kommission hat die Kommission in ihrer Entschließung zur Änderung der Verordnung (EWG) Nr.
resistente Subpopulationen eines Isolates, die nach den Ergebnissen dieser Arbeit nicht selten sind,
Obwohl Isoniazid hochspezifisch gegen Mycobacterien wirkt, konnte der Wirkungsmechanismus bisher nur noch unvollständig geklärt werden. Das Katalase-Peroxidase-Gen (Kat G Gen) scheint eine wichtige Rolle bei der Entwicklung der Isoniazid-Resistenz bei Mycobacterien des M. tuberculosis-Komplexes zu spielen. Die Analyse des Kat G-Gens für 124 INH-resistente Isolate zeigte, dass Mutationen nicht zufällig im Gen verteilt, sondern in gut ausgewählten Positionen der konservierten Gensequenz vorkommen. Position 315 kann eine hohe Rolle bei der Entwicklung von schnelleren Screening-Methoden für die INH-Resistenz spielen, da in dieser Funktion in zwei Dritteln der Stämme des Cestaculosis-Komplexes in Zentralafrika und Südwesten Afrika relevante Mutationen gefunden wurden.
Ein wichtiges Ergebnis ist die Polymorphismus der Sequenz von Codon 463 unter INH-empfindlichen Isolaten von africanum. In dieser Position erscheint die geographische Herkunft der Isolate und nicht ihre INH-Resistenz als entscheidend für die Konformität des Codons. Daher sollte Codon 463 nicht für die INH-Resistenz-Diagnostik verwendet werden, aber es kann ein hilfreiches phylogenetisches Marker innerhalb von Stämmen des M. tuberculosis-Komplexes sein.
Durch die Kombination mit der Analyse der DNA-Fingerabdrücke für alle Stämme wurde
Es wurde die Klonalität von Isolaten mit gleichen Resistenzgen-Mutationen untersucht.
Südafrika erhielt mit der Mixed Linker-PCR-Methode 72 einzelne Bandmuster
27 Stämme teilten ihre Bandmuster jeweils mit einem oder
Es gab neun Clusters, die als Stämme mit 100 Stämmen definiert wurden.
Die Analyse des RPO B-Gens, des Kat G-Gens und phänotypischer Merkmale der Stämme, wie Resistenz gegen weitere Anti-Tuberkulose und epidemiologische Patientendaten, lieferte Hinweise auf Klonalität in vier der Stämme, die jeweils aus zwei Isolaten bestand.