Competitiva trascrizione inversa - polimerasi - reazione a catena (RT - PCR) per l'esame dell'apo 3 - espressione genetica

Martin Rexin

Dr. med. Dr. rer. nat. Competitive Reverse Transcription - Polymerase - Chain Reaction (RT - PCR) per l'esame dell'apo - Gene Expression nato il 22.03.1959 a Mannheim test di maturità il 28.04.1978 a Ladenburg corso di studio della facoltà di medicina da SS 1993 a SS 1998 fisica il 30.03.1994 all'università di Heidelberg studio clinico a Heidelberg anno pratico a Pforzheim per l'esame statale il 13.05.1998 presso l'università di Heidelberg

Nell'ambito del mio lavoro ho quindi sviluppato un metodo altamente sensibile basato su una reazione a catena di polimerasi (PCR) per dimostrare qualitativamente e quantitativamente l'espressione di un gene (Apo) nei macrophagi, in cui l'RNA totale è stato inizialmente trasferito all'interno del DNA complementare (cDNA) tramite l'enzima reverse transcriptase (RT).

Il metodo sviluppato è stato utilizzato per

- mRNA - concentrazioni in macrophagi

I pazienti affetti da questo disturbo familiare del metabolismo dei grassi sono generalmente omosigoti per un apo-allele (2) che codifica un isoformato difettoso di legame dei recettori dell'apo E (E2). I dati indicano che questo allele funzionalmente difettoso è espresso quasi doppio quanto quello del tipo selvatico nei soggetti sani. Concludiamo che si tratti più probabilmente di un meccanismo fisiologico per compensare il prodotto genetico difettoso.

Inoltre, un paziente con HLP di tipo III clinicamente grave e una carenza familiare di Apo E in relazione all'apo gene espressione è stato studiato in questo paziente, in cui una delezione di 10 bp nel quarto esone del gene Apo conduce alla formazione di un precoce stop codone, con conseguente sintesi di frammenti Apo E abbreviati e apparentemente molto instabili. Poiché la sequenza di DNA amplificata con il metodo PCR sviluppato è localizzata in un'area che si trova molto più in direzione 5' (upstream) di questa delezione, ho potuto dimostrare che in questo paziente la molecola Apo mRNA è ancora elevata.