Transcripción reversa competitiva - Polymerase - Reacción en cadena (RT - PCR) para el estudio del Apo 3 - Expresión genética
Martín Rexin
Dr. med. Dr. rer. nat. Competitive Reverse Transcription - Polymerase - Chain Reaction (RT - PCR) para el estudio de la Apo - Gene Expression Nacido el 22 de marzo de 1959 en Mannheim Prueba de madurez el 28 de abril de 1978 en Ladenburg Curso de la Facultad de Medicina de la SS 1993 a la SS 1998 Física el 30 de marzo de 1994 en la Universidad de Heidelberg Estudio clínico en Heidelberg Práctico año en Pforzheim El año de examen estatal el 13 de mayo de 1998 en la Universidad de Heidelberg Doctorado en medicina interna: Dr. Priv.-Doz.
En el marco de este trabajo, desarrollé un método altamente sensible basado en una reacción en cadena de polimerasa (PCR) para demostrar la expresión de un gen (Apo) en macrophages, tanto cualitativamente como cuantitativamente, en el que el RNA total fue transferido inicialmente a través de la enzima reverse transcriptase (RT) al ADN complementario (cDNA).
El método desarrollado ha permitido a los apo
- mRNA - Concentraciones en macrófagos
Los pacientes con este trastorno familiar de metabolismo de las grasas son generalmente homogéneos a un apo-allele (II) que codifica un isoforme defectuoso de la unión a los receptores de Apo E (E2). Los datos indican que este allele funcionalmente defectuoso se expresa casi dos veces más fuerte que el de la especie silvestre en los sujetos sanos.
Además, se examinó a un paciente con HLP de tipo III clínicamente grave y con una deficiencia familiar de Apo E en relación con la expresión de los apo genes. En este paciente, una deleción de 10 bp en el cuarto exón del apo gene conduce a la formación de un códono de parada precoz, lo que resulta en la síntesis de fragmentos de Apo E reducidos y aparentemente muy inestables. Dado que la secuencia de ADN amplificada por el método de PCR desarrollado aquí está localizada en un área que se encuentra significativamente más en la dirección 5′ (upstream) de esta deleción, he podido demostrar que en este paciente todavía hay una alta síntesis de Apo mRNA.