Identificazione e caratterizzazione di GDNF e TGF-beta1 come componenti neurotropici di cellule cromaffine bovine secretori-organiche
Prisca-Maryla Henheik
Dr. sc. hum. Identificazione e caratterizzazione di GDNF e TGF-1 come componenti neurotropici delle cellule di memoria organiche bovine cromaffine nati il 17.08.1962 a Ebstorf Riproduzione di prova il 14.05.1981 a Dannenberg corso di studio presso la facoltà di chimica Diploma da WS 1981 a SS 1994 Diplomasso preliminare il 16.02.1989 presso l'Università di Göttingen Diplomasso il 06.05.1994 presso l'Università di Göttingen Promozione: Anatomia e Biologia Cellulare Dottorato: Prof.
L'isolamento delle proteine responsabili dell'attività neurotropea è stato
I metodi di depurazione di proteine chimiche sono stati tentati.
un assaggio altamente specifico dei neuroni ciliargangliani come controllo per un possibile arricchimento
In primo luogo, occorre separare il più possibile le neurotrofene.
attività neurotròfica di cromogranin
la componente principale del miscela di proteine
La produzione di granuli di cromaffina è stata effettuata con due metodi di separazione:
La concentrazione isolettrica preparatoria e la cromatografia di affinità all'eparina
La concentrazione isoelettrica ha caratterizzato le proteine di base che
L'incubazione con N-glicosidasi ha inoltre mostrato un spostamento dei pesi molecolari delle proteine in modo da poter concludere sulla presenza di glicoproteine. Tuttavia, nei successivi test di purificazione non è stata più possibile rilevare attività neurotropea. Nel corso del lavoro si è rilevato che due fattori sinergistici associati a noi avevano una neurotropea attività comune. I diversi metodi chimici proteici hanno quindi portato alla separazione dei componenti e alla perdita di attività neurotropea.
I fattori di crescita sintetizzati da due cellule cromaffine,
1 e GDNF,
L'immunoterapia e il successivo Western Blot hanno permesso di localizzare
Granuli di cromaffina e loro rilascio nel mezzo di coltura di cromaffina coltivata
Le cellule vengono mostrate secondo stimoli colinergici.
La prova che i fattori di crescita localizzati nei granuli cromatici, TGF-1 e GDNF, che erano le proteine ricercate per l'attività neurotrophica, erano responsabili, è risultata dalla neutralizzazione quasi completa dell'attività dei neuroni ciliari di GDNF e TGF-1 nei granuli cromatici, attraverso anticorpi specifici per questi fattori.
Come contraspetto, le proteine ricombinanti purificate sono state testate.
1 e GDNF
I ricercatori non avevano individualmente applicato alcun effetto di sopravvivenza ai neuroni delle ganglie ciliari.
la somministrazione combinata di entrambi i fattori ha prodotto un'attività simile a quella di CNTF. Questa sinergia tra TGF e GDNF è stata dimostrata in vitro non solo per la sopravvivenza dei neuroni ciliargangliani, ma anche per i neuroni spinalgangliani e anche per i neuroni simpatici della linea di confine della gallina.
Come meccanismo molecolare alla base della sinergia, l'influenza di
T.G.F.
l'ancorazione GPI dell'alpha-receptor (GFR)
L'Agenzia europea per la protezione dell'ambiente (GDNF) ha esaminato l'argomento.
L'applicazione del GFR sembra essere stata un'impostazione
In sintesi, si può dire che, nell'ambito di questa tesi, è stato possibile identificare le proteine responsabili dell'attività neurotròfica nel granulo cromaffino come i fattori di crescita TGF-1 e GDNF che agiscono in sinergia.