Trasduzione del segnale tra reticolo endoplasmatico e nucleo: effetto di Brefeldin A sulla regolazione della trascrizione della subunità gonadotropina a umana

Mathias Gante

Dr.sc.hum. trasduzione del segnale tra reticolo endoplasmatico e nucleo: influenza di Brefeldin A sulla regolazione della trascrizione della subunità gonadotropina dell'uomo nato il 27.3.1967 a Berlino esame di maturità il 5.6.1986 a Darmstadt corso di studio in biologia dalla WS 88/89 alla SS 94 laurea del 25.6.1991 presso l'Università Tecnica di Darmstadt laurea il 21.4.1994 presso l'Università Tecnica di Darmstadt laurea di ricerca: Biochimica: Prof. Dr.phil. nat. Wolfgang Ekke Merz

La sequenza promotrice del gene -hCG è stata isolata da una banca genomica di DNA pagene con una sequenza a fianco 5′. La sequenza è stata clonata insieme all'area iniziale del primo esone di -hCG in un vettore di luciferasi-reportergen (pGL -1102/+50).

Questo vettore del reportergen è stato trasferito nelle cellule carcinogeniche JAR-chorion e

Le cellule hanno misurato l'attività della luciferasi. Le cellule sono state trattate con 8 bromo-cAMP,

L'attività promotrice di

-l'hCG è aumentato di 3,5 volte dopo 12 ore,

L'induzione fino a questo massimo è costantemente aumentata e si è mantenuta a questo livello fino a circa 48 ore. Se le cellule sono state trattate con BFA, è stato possibile osservare un effetto biphasico. Ai punti di misura dopo 10 minuti e 30 minuti è stata osservata una riduzione dell'attività promotrice con un'induzione di 0,5 o 0,9 rispettivamente, mentre dopo 60 minuti e 120 minuti con un'induzione di 1,9 o 1,4 rispettivamente, è stato osservato un aumento dell'attività promotrice.

Se le cellule sono state inizialmente applicate 8-bromo-cAMP per 12 ore e poi 1 ora di BFA è stata conferita, si è potuto ottenere un'induzione di 5,4 che corrispondeva alla somma degli singoli valori precedentemente misurati. Il luogo di attuazione dell'effetto BFA dopo 1 ora (faccia di induzione 1.9) è stato ridotto da sperimentazioni di trasfezione con costrutti di reportergen con progressivamente piccole inserzioni del promotore -hCG all'intervallo tra -938 bp e -1102 bp. Un frammento di DNA che si estende in questa zona è stato utilizzato per gli esperimenti di banda di DNA.

L'obiettivo di una purificazione, ossia la caratterizzazione e la sequenza di questa proteina, deve essere realizzato su larga scala e utilizzando diversi pilastri.

In questo caso,

BFA-responsive DNA-binding protein

(15 kDa) è probabile che si tratti di:

L'effetto osservato è BFA-responsivo, ma non si può dire se è specifico di BFA. La confrontazione con il lavoro di altri gruppi di lavoro suggerisce che si tratta di una reazione all'accumulo di proteine nell'ER come generato da BFA. Probabilmente qui sono descritti i componenti di una via di trasduzione del segnale che producono una comunicazione tra via segretoriale e nucleo.