Transduction du signal entre le réticulum endoplasmatique et le noyau: l'influence de la bréfeldine A sur la régulation de la transcription de la sous-unit gonadotrophine chez l'homme

Mathias Gante

Dr.sc.hum. Transduction du signal entre le réticulum endoplasmatique et le noyau: Influence de la bréfeldine A sur la régulation de la transcription de l'unité gonadotrophine de l'homme né le 27.3.1967 à Berlin Examen de maturation le 5.6.1986 à Darmstadt

La séquence promotrice du gène -hCG a été isolée à partir d'une banque génomique de l'ADN de phage avec une séquence flanquante de 5′. La séquence a été clonée avec la zone initiale du premier exon de -hCG dans un vecteur de rapporteurs de luciférase (pGL -1102/+50).

Ce vecteur de réporteur génique a été transféré dans des cellules cancéreuses de la chorione JAR

Les cellules ont mesuré l'activité de la luciférase.

L'activité promotrice de

- hCG est augmenté de 3,5 fois après 12 h,

L'induction jusqu'à cette valeur maximale a augmenté constamment et s'est maintenue à ce niveau jusqu'à environ 48 h. Lorsqu'on a traité les cellules avec BFA, un effet biphasique a été observé.

Si les cellules ont d'abord été appliquées 8 bromo-cAMP pendant 12 h, puis 1 h BFA ont été admises, une induction de 5,4 a été obtenue, ce qui correspond à la somme des indices précédemment mesurés. Le lieu d'action de l'effet BFA après 1 h (induction de 1,9 cas) a été limité par des essais de transfection avec des constructions de rapporteurs avec des insertions progressivement plus petites du promoteur -hCG dans la gamme comprise entre -938 bp et -1102 bp. Un fragment d'ADN couvrant cette gamme a été utilisé pour des expériences de bande d'expériences nucléaires. Les protéines extraites de protéines BFA non traitées par les cellules BFA ont généré une protéine d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience d'expérience de BFA.

Il n'était plus possible d'effectuer d'autres purifications à l'aide d'une colonne d'affinité, mais pour atteindre l'objectif d'une purification, c'est-à-dire la caractérisation et la séquentiation de cette protéine, elles devaient être effectuées à plus grande échelle et à l'aide de plusieurs colonnes.

Par celui-ci,

Proteine de liaison à l'ADN responsable du BFA

Il s'agit vraisemblablement de

L'effet observé est BFA-réactif mais on ne peut pas dire s'il est spécifique à BFA. La comparaison avec les travaux d'autres groupes de travail suggère qu'il s'agit d'une réaction à l'accumulation de protéines dans l'ER, telle qu'elle est produite par BFA.