Comparaison de deux protocoles de PCR différents pour le dépistage direct de mycobacterium tuberculosis dans le sputum et de deux colorants pour le dépistage de l'ADN par gelélectrophore
Marc Faas
Dr. med. dent. né le 01.08.1968 à Pforzheim examen de maturité le 03.05.1988 à Pforzheim stage de la faculté de médecine dentaire de la SS 1989 à la SS 1995 physique le 05.10.1992 à l'Université Ruprecht-Karls Heidelberg études cliniques à Heidelberg Examen d'État le 02.08.1995 à l'Université Ruprecht-Karls Heidelberg Hans-Peter Hornig Dr. med. dent.
Né le 23 mai 1967 à Heidelberg
Épreuve de maturité du 3 mai 1986 à Heidelberg
Cours d'études de la faculté de médecine dentaire de WS 1989 à SS 1995
Physique du 02 octobre 1992 à l'Université Ruprecht-Karls de Heidelberg
Études cliniques à Heidelberg
Examens d'État du 02 août 1995 à l'Université Ruprecht-Karls Heidelberg
Titre de doctorat: pathologie
Le père du docteur: professeur Dr. med. Dr. rer. nat. K. Kayser
Comparaison de deux protocoles PCR différents pour la détection directe de
Mycobacterium tuberculosis dans le sputum ainsi que deux colorants pour le dépistage de l'ADN
par gélélectrophore
Deux protocoles de réaction en chaîne polymérase sont utilisés pour la démonstration
Le premier groupe comprenait 20 patients atteints de tuberculose sécurisée; le second groupe comprenait 20 patients hospitalisés non tuberculosiques sans aucun signe de tuberculose; le troisième groupe comprenait 10 patients dont nous n'avions aucun diagnostic ni aucun constat culturel ou histologique au moment de l'administration du sputum.
Les résultats suivants ont été obtenus chez tous les 50 patients examinés sur le PCR standard et
Résultats du PCR Nested: sensibilité de 92,9% (standard) et de 64,3% (Nested), spécificité
80,5% (standard) et 94,4% (nésté). Nous avons comparé les deux colorants de fluorescence ADN ethydiumbromide et Sybr®GreenI pour l'électrophorèse de gel à l'aide de sillons d'agaros de 2%. Les colorants ont été évalués en termes de sensibilité, de diminution de l'intensité lumineuse sous UV et de fluorescence de fond.
L'analyse des résultats a révélé une sensibilité de 10,5 degrés plus élevée de Sybr®GreenI et une sensibilité de 6 degrés plus élevée de Sybr®GreenI après 10 minutes d'exposition à la lumière UV face à l'ethydiumbromide.
Il s'ensuit que les
la réaction en chaîne polymérase ayant une sensibilité élevée et
Il existe des spécificités dans le domaine du diagnostic précoce d'infections mycobactériennes.
Cependant, une fiabilité relativement élevée des méthodes de PCR ne devrait pas être appliquée aux méthodes conventionnelles.
Méthodes d'enquête telles que la détection histologique et la culture des agents pathogènes
Le diagnostic chez les patients atteints d'un PCR standard qui n'est pas clair
Les résultats sont facilités par un examen supplémentaire avec un PCR Nested.La comparaison des deux colorants d'ADN ethydiumbromide et Sybr®GreenI montre que l'utilisation de Sybr®GreenI pour une application pratique dans l'électrophore routinière présente des avantages par rapport au colorant d'ADN traditionnel ethydiumbromide.Avec les coûts plus élevés, ceux-ci sont liés à la sensibilité à la lumière plus élevée, à la faible perte de fluorescence (fading) et à la quasi-absence de toxicité.