Comparación de dos protocolos de PCR diferentes para la detección directa de Mycobacterium tuberculosis en el esputo y de dos tintes para la detección de ADN mediante gelatrophoresis

Marco Faas

Dr. med. dent. Nacido el 01.08.1968 en Pforzheim Prueba de madurez el 03.05.1988 en Pforzheim Curso de la Facultad de Odontología de la SS 1989 a la SS 1995 Física el 05.10.1992 en la Universidad de Ruprecht-Karls Heidelberg Estudios clínicos en Heidelberg Exámenes estatales el 02.08.1995 en la Universidad de Ruprecht-Karls Heidelberg Hans-Peter Hornig Dr. med. dent.

Nacido el 23 de mayo de 1967 en Heidelberg

Prueba de madurez del 3 de mayo de 1986 en Heidelberg

Curso de estudios en la Facultad de Odontología del WS 1989 al SS 1995

Física el 2 de octubre de 1992 en la Universidad Ruprecht-Karls Heidelberg

Estudios clínicos en Heidelberg

Exámenes estatales del 02 de agosto de 1995 en la Universidad Ruprecht-Karls Heidelberg

Título de doctorado: Patología

El padre del doctor: Prof. Dr. med. Dr. rer. nat. K. Kayser

Comparación de dos protocolos de PCR diferentes para la detección directa de

Mycobacterium tuberculosis en el esputo y dos tintes para la detección de ADN

por electrohoresis gélida

Se han probado dos protocolos diferentes para la reacción en cadena de polímera.

El primer grupo incluyó a 20 pacientes con tuberculosis segura; el segundo grupo incluyó a 20 pacientes en una cama no tuberculosa sin indicios de tuberculosis; el tercer grupo incluyó a 10 pacientes de los que no conocíamos ni un diagnóstico ni una conclusión cultural ni histológica al momento de la administración de la espuma.

Los siguientes resultados fueron obtenidos en los 50 pacientes examinados en el PCR estándar y

Los resultados obtenidos en el PCR de Nested: sensibilidad 92,9% (estándar) y 64,3% (nested), especificidad

80.5% (estándar) y 94.4% (nested). En la comparación de los dos colorantes de fluorescencia de ADN Ethydiumbromide y Sybr®GreenI para la gel electroforesis, usamos seglos de agarro de 2%. Los colorantes fueron evaluados en términos de sensibilidad, disminución de la intensidad luminosa bajo la influencia de los rayos UV y fluorescencia de fondo.

El análisis de los resultados mostró una sensibilidad de 10,5 por ciento más alta de Sybr®GreenI y una sensibilidad de 6 por ciento más alta de Sybr®GreenI después de 10 minutos de exposición a la luz UV frente a la etidiumbromida.

Por consiguiente, se concluye que:

la reacción en cadena de polímera tiene una alta sensibilidad y

El diagnóstico precoz de las infecciones microbianas es específico.

Sin embargo, la relativamente alta fiabilidad de los métodos de PCR no debería

Métodos de investigación como la detección histológica y la cultivación de patógenos culturales

El diagnóstico de los pacientes con PCR estándar no está claro.

Los resultados son facilitados por una investigación adicional con una PCR en el Nested.La comparación de los dos colorantes de ADN etidiumbromida y Sybr®GreenI muestra que el uso de Sybr®GreenI para su aplicación práctica en la electrohoresis rutinaria tiene ventajas en comparación con el colorante de ADN habitual etidiumbromida.Además de los costos más altos, éstos incluyen la mayor sensibilidad a la luz, la menor pérdida de fluorescencia (fading) y la casi ausencia de toxicidad.