Vergleich zweier verschiedener PCR-Protokolle zur direkten Erkennung von Mycobacterium tuberculosis in Sputum und zweier Farbstoffe zur DNA-Erkennung durch Gelelektrophorese
Markus Faas
Dr. med. dent. Geboren am 01.08.1968 in Pforzheim Reifeprüfung am 03.05.1988 in Pforzheim Studiengang der Fachschule für Zahnmedizin von SS 1989 bis SS 1995 Physik am 05.10.1992 an der Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Klinische Studien in Heidelberg Staatsprüfungen am 02.08.1995 an der Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Hans-Peter Hornig Dr. med. dent.
Geboren am 23.05.1967 in Heidelberg
Reifeprüfung am 3. Mai 1986 in Heidelberg
Studiengang der Fachrichtung Zahnmedizin von WS 1989 bis SS 1995
Physik am 02.10.1992 an der Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg
Klinische Studien in Heidelberg
Staatsprüfungen am 02.08.1995 an der Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg
Promotionsfach: Pathologie
Doktor Vater: Prof. Dr. med. Dr. rer. nat. K. Kayser
Vergleich zweier verschiedener PCR-Protokolle zur direkten Nachweis von
Mycobacterium tuberculosis in Sputum und zwei Farbstoffe zur DNA-Erkennung
durch Gelelektrophorese
Es werden zwei verschiedene Protokolle für die Polymerase-Kette-Reaktion nachgewiesen.
Die Sputumproben der 50 untersuchten Patienten wurden in drei Gruppen aufgeteilt. Die erste Gruppe umfasste 20 Patienten mit gesicherter Tuberkulose. Die zweite Gruppe stellte 20 Patienten in eine nicht-tuberkulose Bettenstation ohne Hinweise auf Tuberkulose ein. Die dritte Patientengruppe umfasste 10 Patienten, von denen wir zum Zeitpunkt der Sputumvergabe weder eine Diagnose noch kulturelle oder histologische Erkenntnisse wussten.
Die folgenden Ergebnisse wurden unter allen 50 untersuchten Patienten auf der Standard-PCR und
bei Nested PCR erzielt: Sensitivität 92,9% (Standard) und 64,3% (Nested), Spezifität
80.5% (Standard) und 94.4% (Nested). Im Vergleich zu den beiden DNA-Fluoreszenzfarben Ethydiumbromid und Sybr®GreenI für die Gelelektrophorese verwendeten wir 2%-Agarosegel.
Die Analyse der Ergebnisse ergab eine 10,5-fache höhere Sensitivität von Sybr®GreenI und eine 6-fache höhere Sensitivität von Sybr®GreenI nach 10-minütiger UV-Light-Exposition gegenüber Ethydiumbromid.
Es ist zu schließen, daß
die Polymerase-Kette-Reaktion mit hoher Sensibilität und
Es gibt Spezifikationen im Bereich der frühen Diagnose von Mycobacterial-Infektionen.
Die relativ hohe Zuverlässigkeit der PCR-Methoden sollte jedoch nicht auf die konventionellen
Untersuchungsmethoden wie histologischer Nachweis und Kulturpflanzung
Die Diagnose bei Patienten mit nicht eindeutigen standardisierten PCR-
Die Ergebnisse werden durch eine zusätzliche Untersuchung mit einem Nested-PCR erleichtert.Der Vergleich der beiden DNA-Falben Ethydiumbromid und Sybr®GreenI zeigt, dass die Verwendung von Sybr®GreenI für die praktische Anwendung in der Routineelektrophorese Vorteile im Vergleich zu dem üblichen DNA-Falben Ethydiumbromid hat.Außer den höheren Kosten liegen die höheren Lichtempfindlichkeiten, der geringen Fluoreszenzverlust (Fading) und der nahezu fehlenden Toxizität.