L'hybridation à point inverse permettant d'identifier rapidement les espèces de mycobactéries

Katja Christine Benz

Dr. med. Reverse dot-blot hybridation pour l'identification rapide d'espèces de mycobactéries né le 13 janvier 1970 à Stuttgart Examen de maturité le 25 mai 1989 à Ludwigsburg

Cette évolution est étroitement liée à la forte augmentation des maladies telles que le sida ou les maladies tumorales et des thérapies accompagnées d'un affaiblissement du système immunitaire. Contrairement à la mycobacterium (M.) tuberculosis, les agents MOTT, qui représentent partout des sources d'infection potentielles de toutes les espèces de mycobacteries, à l'exception de M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum et M.leprae, sont omniprésents dans l'environnement et représentent des sources d'infection via l'eau, la poussière ou les animaux.

Le diagnostic de la mycobacteriose est difficile. Les symptômes cliniques sont

Le test de teneur en tuberculose utilisé comme méthode de dépistage de la tuberculose et les méthodes serologiques largement utilisées dans d'autres infections se sont révélées peu satisfaisantes dans le cas des infections par MOTT. Pour diagnostiquer une mycobacteriose, il est nécessaire de détecter directement l'espèce de mycobacteries à l'origine.

La méthode traditionnelle la plus courante d'indication des mycobactéries est

La culture de bactéries avec une interprétation ultérieure des morphologies et

La croissance culturelle est nécessaire dans les pays où la croissance est lente.

les mycobactéries de 3 à 6 semaines et les mycobactéries nécessaires à l'identification

Les tests biochimiques sont coûteux et souvent réservés à quelques laboratoires spécialisés.

Les méthodes de diagnostic conventionnelles sont basées sur des caractéristiques phénotypiques relativement peu variables chez les microorganismes, qui peuvent être codées par de nombreuses séquences de nucléotides différentes.

Une autre approche est donc celle des méthodes de diagnostic génétique moléculaire.

Ces méthodes sont utilisées par des spécialistes spécialisés dans le traitement des différentes espèces de mycobactéries.

Les séquences caractéristiques, appelées signatures de séquence, sont sélectionnées.

Les signatures de séquence sont conçues par des sondes d'oligonucléotides complémentaires. Une molécule idéale comme séquence cible de ces sondes est le rRNS et le rDNS qu'ils codent. Elle est universelle dans tous les organismes et possède, en plus des régions conservées, des zones très variables. Ces zones sont idéales pour la construction de sondes de gène spécifiques, tandis que les sections conservatrices sont utilisées comme point de liaison des compresseurs d'oligonucléotides pour l'amplification des sections d'ADN définies in vitro à l'aide de la PCR.

Une section rDNS optimalement adaptée à la construction du sonde et à la différenciation des espèces

est l'insertion très variable du 23S rDNS dans l'hélix 54 du domaine III, spécifique aux bactéries gram-positives présentant une teneur élevée en G+C dans leur ADN. Cette insertion permet de différencier un grand nombre de souches de mycobactéries sur un fragment d'ADN de seulement 100 paires de bases de longueur.

Ce travail a permis d'établir la structure primaire inconnue de l'insertion 23S rDNS de cinq souches de mycobactéries et de corriger certaines séquences déjà connues. Pour les espèces de mycobactéries les plus isolées ou cliniquement pertinentes, une alignement de séquence a été conçu par rapport à 29 différentes espèces de mycobactéries Oligo-nucleotides probes.

De cette façon, en détectant des tiges plus acides dans la culture liquide après une croissance récente, l'identification des espèces de mycobactéries peut être effectuée en une seule journée, ce qui permet de gagner 2 à 6 semaines de temps par rapport aux méthodes traditionnelles.