Reverse-dot-blot hybridization para la rápida identificación de las especies de micóbacterias

Katja Christine Benz

Dr. med. Reverse dot-blot hibridación para la rápida identificación de especies de micobáctérias Nacido el 13 de enero de 1970 en Stuttgart Prueba de madurez el 25 de mayo de 1989 en Ludwigsburg Curso de la Facultad de Medicina de la SS 1990 a WS 1997 Física en marzo de 1992 en la Universidad de Heidelberg Estudios clínicos en Heidelberg/Mannheim Curso práctico en el Hospital de Diakonissen en Mannheim Exámenes estatales el 4 de noviembre de 1997 en la Universidad de Heidelberg Doctorado en Cirugía Prof. Dr. med. Schmidt-Gayk El número de enfermedades y enfermedades causadas por la tuberculosis causada por la bacteria ycobacter uberosis (MOTT) ha aumentado en los últimos años.

Esta evolución está estrechamente relacionada con el aumento drástico de enfermedades como el SIDA o las enfermedades tumorales y las terapias que acompañan a un debilitamiento del sistema inmunitario. A diferencia de la micobacteria (M.) tuberculosis, los patógenos de la MOTT, a los que pertenecen todas las especies de micobacterias, excepto M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum y M.leprae, son ubicistas en el medio ambiente y representan posibles fuentes de infección por medio del agua, el polvo o los animales en todas partes.

El diagnóstico de la micobacteriosis es difícil. Los síntomas clínicos son:

El análisis de la tuberculosis como método de detección y los procedimientos serológicos muy comunes en otras infecciones han demostrado ser poco satisfactorios en las infecciones por MOTT. Para diagnosticar una micobacteria, se requiere la detección directa de la especie de micobacteria causante.

El método tradicional más común de detección de micóbacterias es el

Cultivación de cultivos de bacterias con la siguiente interpretación de las características morfológicas y

El crecimiento de la cultura requiere el desarrollo de las

Micobacterias de 3 a 6 semanas y las necesarias para su identificación

Las pruebas bioquímicas son complejas y a menudo reservadas a pocos laboratorios especializados.

La base de los métodos de diagnóstico convencionales son las características fenótipos comparativamente poco variables de los microorganismos, que pueden ser codificadas por muchas secuencias nucleóticas diferentes.

Por lo tanto, otro punto de partida son los métodos de diagnóstico genético molecular.

En el caso de las bacterias microbianas, el método de detección es el método de detección de las bacterias microbianas, que se utiliza para detectar las diferentes especies de micóbacterias.

Se seleccionan secuencias características, llamadas firmas de secuencia.

Las señales de secuencia se construyen en sondas de oligonucleotidos complementarias. Una molécula ideal como secuencia objetivo de estas sondas genéticas es el rRNS y el rDNS que las codifica. Se encuentra universal en todos los organismos, y además de las regiones conservadas también posee áreas altamente variables. Estas son ideales para la construcción de sondas genéticas específicas, mientras que las secciones conservadoras se utilizan como punto de unión de las compresoras de oligonucleotidos para la amplificación de secciones de ADN definidas in vitro con la ayuda de la PCR.

Una sección de rDNS óptima para la construcción de la sonda y la diferenciación de especies

es la inserción altamente variable del 23S rDNS en Helix 54 del dominio III, que es específica para bacterias grampositivas con alto contenido de G+C en su ADN. Esta inserción permite la diferenciación de un gran número de variedades de micóbacterias en un fragmento de ADN de sólo 100 pares de bases de longitud.

En este trabajo, se elaboró la estructura primaria hasta ahora desconocida de la inserción 23S rDNS de cinco troncos de micóbacterias y se corrigieron algunas secuencias ya conocidas. Para las especies de micóbacterias más aisladas o clínicamente relevantes, se construyó una alineación de secuencias en comparación con 29 especies diferentes de micóbacterias Oligo nucleotides sondas, de las cuales se desarrollaron ocho nuevos genes y se probaron la cruceactividad junto con ocho ya conocidas sondas de oligonucleotides.

De este modo, si se detectan varillas más resistentes al ácido en el cultivo líquido después de un reciente crecimiento del cultivo, la identificación de las especies de micobáctérias se puede realizar en un solo día, lo que supone un ahorro de tiempo de 2 a 6 semanas en comparación con los procedimientos tradicionales.