Studi comparativi per la determinazione di interferon alfa e interferon beta-messaggero ribonucleico acido mediante ibridazione in situ con sonde radioattive e non radioattive
Christoph Helmer Antoni
Dott. medico Studi comparativi per la rilevazione di acido interferonico e interferonico messenger -ribonucleico mediante ibridazione in situ con sonde radioattive e non radioattive nato il 20.05.68 a Bremen test di maturità il 02.06.87 a Bremen corso di studio della facoltà di medicina da SS 1989 a SS 1996 fisica al 03.04.91 presso la Ruprecht-Karlsuniversità di Heidelberg studio clinico a Heidelberg pratica anno a Heilbronn esami statali il 06.05.96 presso la Rupert-Karlsuniversità di Heidelberg
L'uso di nucleotidi contrassegnati a digoxigenina (DIG).
L'obiettivo di questo lavoro era quello di elaborare la sensibilità e la capacità di risoluzione di diversi metodi per la rilevazione delle trascrizioni di mRNA in preparati citologici con l'aiuto di ISH. Gli studi dovevano essere condotti, ad esempio, su mRNA inducibili ma a bassa riduzione delle citochine IFN-2 e IFN- nelle cellule umane di diverse origini.
L'inchiesta si è concentrata sul confronto tra diverse procedure di marcatura.
In aggiunta alle sonde con marcatura radioattiva, occorre
Il confronto finale dei risultati dell'ISH
In caso di utilizzo di sonde radioattive o non radioattive, occorre tenere conto delle
le potenziali applicazioni di sistemi di rilevamento non radioattivo in
Per l'indagine sono stati selezionati le leucotide sanguigne periferiche (PBL) di donatori sani, nonché due cellule (cellule Namalva, cellule MG-63). L'induzione di IFN è stata effettuata con il virus Sendai (SV), un noto induttore di IFN.
Dopo l'infezione con SV, le cellule di PBL e di Namalva hanno separato grandi quantità di interferone nel medium. L'infezione con 640 unità di emagglutinazione (HAU) SV ha ottenuto una massima induzione dell'interferone. Nel test di neutralizzazione con anticorpi contro IFN e - si è rivelato che le proporzioni relative di entrambi i tipi di IFN nelle cellule di PBL e di Namalva hanno variato. Così, le cellule di Namalva infette da SV separate sono state rivelate al 75% di IFN e al 25% di IFN, mentre nelle cellule di PBL sono state rivelate le stesse proporzioni di IFN e -.
Densitometricamente, si è rilevato un rapporto di IFN
2 mRNS per IFN
MRNS a Namalva
In tutti i tipi di cellule studiati, dopo l'induzione virale di IFN, è stato osservato un segnale molto eterogeneo nell'ISH, che consente di concludere che le espressioni di IFN mRNA sono molto diverse a livello singolo. Le analisi di frequenza per l'IFN- 2 mRNA hanno rilevato una percentuale di cellule positive in PBL di 5,9%; per l'IFN mRNA, i valori erano pari al 7,1% per i campioni DIG e al 6,4% per i campioni P-marcati.
Le cellule positive sono assegnate ai monociti.
La percentuale di monociti nel sangue differenziale del donatore è stata del 5,4%, in un
Il comparto statistico dei risultati ha evidenziato che i metodi di marcatura forniscono risultati simili nel rilevamento di IFN-2 mRNA in PBL, mentre il DIG fornisce una maggiore frequenza di cellule positive nel rilevamento di IFN-mRNA.
In sintesi, si può dire che le sonde DIG hanno ottenuto risultati analoghi a quelli di
La produzione di sonde radioattive è limitata dalle peggiori condizioni di produzione di radioattive.
Il risultato è la percezione soggettiva dell'intensità della colorazione.
In questo modo, con le sonde DIG, si possono ottenere dichiarazioni qualitative,
Infatti, le dichiarazioni quantitative, invece, sono condizionate a soddisfare le loro esigenze.
Sonde un'alternativa più veloce a quelli a causa del tempo di esposizione più lungo
I sistemi di ricerca e di ricerca sono stati sviluppati in modo più complesso con sonde con marcatura radioattiva.
Preparazioni di cellule adherenti (MG-63) i sensori DIG mostrano buoni risultati:
L'applicazione di P può produrre ottimi risultati in intersezioni di tessuto, offrendo nuove prospettive per una più ampia applicazione dell'ibridazione in situ, in particolare nella diagnosi di routine.