Tests comparatifs pour détecter l'interféron alpha et l'interféron bêta-messager ribonucléic acid par hybridation in situ à l'aide de sondes radioactives et non radioactives
Christoph Helmer Antoni
Dr. méd. Études comparatives pour la détection de l'interféron et de l'interféron messenger -ribonucléic acide par hybridation in situ à l'aide de sondes radioactives et non radioactives né le 20.05.68 à Brême Examen de maturité le 02.06.87 à Brême Cours de médecine de la SS 1989 à SS 1996 Physique du 03.04.91 à l'Université Ruprecht-Karls Heidelberg Études cliniques à Heidelberg Examen de l'État de Heilbronn le 06.05.96 à l'Université Rupert-Karls Heidelberg Titre de doctorat: Centre allemand de recherche sur le cancer (DKFZ) Docteur: doctorat.
Utilisation d'un nucléotide marqué Digoxigenine (DIG).
L'objectif de ce travail était d'étudier la sensibilité et la résolution de différentes méthodes pour détecter les transcriptions de l'ARNm dans des préparations cytologiques à l'aide de l'ISH. Les recherches devraient être effectuées dans des cellules humaines d'origine différente, par exemple dans l'ARNm inductible mais à faible redondance des cytokines IFN-2 et IFN. Les cytokines comprennent des protéines ayant un effet transmetteur qui sont administrées constitutivement ou à un stimulant. Un sous-groupe de cytokines forme les interférones (NIF).
L'enquête a porté sur la comparaison de différentes méthodes de marquage.
En plus des sondes radioactivement marquées, il convient également d'élaborer des tests d'identification des acides nucléaires spécifiques.
La comparaison finale des résultats de l'ISH
En cas d'utilisation de sondes marquées radioactivement ou non-radioactivement, il convient de tenir compte de l'état de l'appareil.
les possibilités d'utilisation potentielles de procédés de détection non radioactifs dans le
Pour l'étude, des leucytes sanguins périphériques (PBL) de donneurs sains ont été sélectionnés, ainsi que deux cellules (cellules Namalva, cellules MG-63). L'induction de l'IFN a été effectuée avec le virus Sendai (SV), un inducteur de l'IFN connu.
Les cellules de PBL et de Namalva se sont séparées dans le milieu après infection avec SV. Une induction d'interféron maximale a été atteinte par une infection avec 640 unités d'hémagglutination (HAU) SV. Les tests de neutralisation avec des anticorps contre IFN et - ont montré que les proportions relatives des deux types d'IFN dans les cellules de PBL et de Namalva varient. Ainsi, les cellules de Namalva infectées par SV se sont séparées à 75% d'IFN et à 25% d'IFN, tandis que les mêmes proportions d'IFN et - ont été détectées chez PBL.
Densitometricement, il s'est avéré qu'il y avait un rapport entre IFN et IFN.
2 mRNS à IFN
MRNS situé à Namalva
Dans tous les types de cellules étudiés, après l'induction virale de l'IFN, un signal très hétérogène a été observé dans l'ISH, ce qui permet de conclure qu'il existe des expressions très différentes de l'IFN à l'échelle de la cellule.
Les cellules positives sont attribuées aux monocytes.
Le pourcentage de monocytes dans les images de sang différentielles du donneur était de 5,4% dans un
Les résultats de la comparaison statistique ont montré que les méthodes de marquage ont donné des résultats similaires pour la détection d'IFN-2 mRNS dans les PBL. En revanche, la marquage DIG a donné une fréquence plus élevée de cellules positives pour la détection d'IFN-mRNS. Dans le cas des cellules de Namalva, il y a eu une différence significative entre les méthodes. Les sondes radioactivement marquées ont donné des fréquences nettement plus élevées pour les deux espèces d'IFN-mRNS.
En résumé, on peut dire que les sondes marquées DIG ont obtenu des résultats comparables à ceux des sondes
Les sondes radioactives sont limitées par les pires sondes radioactives et les pires sondes radioactives sont limitées par les pires sondes radioactives et les pires sondes radioactives sont limitées par les pires sondes radioactives radioactives et les pires sondes radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactives radioactive
Elle résulte de la perception subjective de la force de la couleur des
Celles positives. Ainsi, avec des sondes marquées DIG, vous pouvez faire des déclarations qualitatives,
En revanche, les déclarations quantitatives ne sont que conditionnelles.
Les sondes d'une alternative plus rapide à l'exposition plus longue
Il s'agit d'une méthode plus compliquée utilisant des sondes radioactivement marquées.
Préparations de cellules adhésives (MG-63) Les sondes marquées DIG montrent de bons résultats:
En ce qui concerne l'hybridation in situ, en particulier dans le domaine du diagnostic de routine, P est un radioisotope très adapté à l'hybridation in situ en raison de son excellente résolution et de son faible signal d'arrière-plan; il offre donc d'excellentes conditions pour la recherche de base.