MIKROBIOLOGIA ETA OSASUNA UNIBERTSITATE MASTERRA /
MASTER UNIVERSITARIO EN MICROBIOLOGÍA Y SALUD
Mas e Amaie ako Lana / T abajo Fin de Mas e
Egilea/Au o /a:
Lucía Valle Suá ez
Zuzenda ia/Di ec o /a:
Mi en Basa as Iba zabal
Mikel U u ikoe xea Gu ié ez
Da a/Fecha
Sep iemb e 2024
Ca ac e ización de Neisse ia
gono hoeae median e esquema
NG-MAST y FTIR
ABREVIATURAS
ECDC
Eu opean Cen e o Disease P e en ion and Con ol
FTIR
Espec ome ía in a oja median e ans o mada de Fou ie
HSH
Homb es que ienen sexo con homb es
ITS
In ección de ansmisión sexual
IGD
In ección gonocócica diseminada
MLST
Mul ilocus Sequence Typing
NG-MAST
Neisse ia gono hoeae Mul i-An igen Sequence Typing
OMS
O ganización Mundial de la Salud
PCR
Reacción en cadena de la polime asa
ST
Secuencio ipo
VIH
Vi us de la inmunode iciencia humana
ÍNDICE DE CONTENIDOS
ANEXO 1 .................................................................................................................................. i
ABREVIATURAS .........................................................................................................................
ÍNDICE DE FIGURAS Y TABLAS.................................................................................................. ii
RESUMEN .............................................................................................................................. iii
1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1
2. OBJETIVOS ........................................................................................................................ 5
2.1. OBJETIVOS PRINCIPALES ........................................................................................... 5
2.2. OBJETIVOS SECUNDARIOS ........................................................................................ 5
3. MATERIAL Y MÉTODOS ...................................................................................................... 6
3.1. DISEÑO DEL ESTUDIO ............................................................................................... 6
3.1.1. Población a es udio .......................................................................................... 6
3.1.2. C i e ios de inclusión........................................................................................ 7
3.1.3. C i e ios de exclusión ....................................................................................... 7
3.2. SELECCIÓN DE LAS CEPAS ......................................................................................... 7
3.3. CARACTERIZACIÓN DE LOS AISLAMIENTOS MEDIANTE NG-MAST ............................. 7
3.4. ANÁLISIS BIOINFORMÁTICO ................................................................................... 10
3.5. CARACTERIZACIÓN MEDIANTE FTIR ........................................................................ 10
4. RESULTADOS ................................................................................................................... 11
4.1. RESULTADOS EPIDEMIOLÓGICOS............................................................................ 11
4.2. CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LOS AISLADOS................................................. 13
4.3. COMPARATIVA FTIR Y NG-MAST ............................................................................. 17
5. DISCUSIÓN ...................................................................................................................... 21
5.1. SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA DE LA INFECCIÓN POR N. gono hoeae..................... 21
5.2. CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS DE LOS PACIENTES CON INFECCIÓN GONOCÓCICA...... 22
5.3. CARACTERIZACIÓN DE LOS AISLADOS DE N. gono hoeae ....................................... 23
5.4. FTIR COMO MÉTODO DE TIPIFICACIÓN PARA N. gono hoeae ................................ 25
6. CONCLUSIONES ............................................................................................................... 27
7. BIBLIOGRAFÍA.................................................................................................................. 28
ÍNDICE DE FIGURAS
Figu a 1
Incidencia de in ección gonocócica en España en el año 2022
1
Figu a 2
Esquema ep esen a i o de la secuenciación Sange
4
Figu a 3
Pe il é mico de la eacción en cadena de la polime asa u ilizada
8
Figu a 4
Esquema del p oceso de ca ac e ización de los aislados de N.
gono hoeae
9
Figu a 5
Tasas de incidencia de in ección gonocócica po g upos de edad y sexo
11
Figu a 6
Se icio de p ocedencia de los pacien es analizados en el abajo
12
Figu a 7
Dend og ama de los espec os de los 5 aislados analizados en el p ime
un con su co espondien e ST
18
Figu a 8
Dend og ama de los espec os de los 5 aislados analizados en el segundo
un con su co espondien e ST
18
Figu a 9
Dend og ama de los espec os de los 18 aislados analizados en el e ce
un con su co espondien e ST
19
Figu a 10
Dend og ama de los espec os de los 9 aislados analizados en el cua o
un con su co espondien e ST
20
Figu a 11
Ma iz de dis ancias en la que se ep esen a los secuencio ipos y los
g upos gene ados po la espec oscopía FTIR
21
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1
Clasi icación de los diagnós icos de in ección gonocócica en unción de la
localización de la mues a y el sexo
12
Tabla 2
Secuencio ipos más ecuen es de N. gono hoeae du an e el año 2023
13
Tabla 3
Secuencio ipos que no han sido p e iamen e desc i os de N.
gono hoeae
14
Tabla 4
Secuencio ipos que no han sido p e iamen e desc i os, jun o con sus ST
más p óximos
15
Tabla 5
Sensibilidad an imic obiana a cip o loxacino y a penicilina de los 10 ST
más ecuen es
16
Tabla 6
Genog upos de N. gono hoeae ob enidos en unción de la semejanza de
los alelos po B y bpB
17
RESUMEN
Las in ecciones de ansmisión sexual (ITS) ep esen an un g a e p oblema de salud
pública eme gen e que a ec an a la salud sexual y ep oduc i a en odo el mundo. La
in ección gonocócica, causada po Neisse ia gono hoeae, es la segunda ITS bac e iana
más común as Chlamydia achoma is. En los úl imos años, su incidencia ha
aumen ado signi ica i amen e en nues o país, siendo el País Vasco la segunda
comunidad au ónoma más a ec ada po de ás de Ca aluña. Ac ualmen e, la in ección
gonocócica se a a con an imic obianos, sin emba go, la apa ición de cepas esis en es
a es os es cada ez más común. Po es e mo i o, es undamen al ealiza una igilancia
epidemiológica molecula que nos p opo cione in o mación ace ca de los clones que
ci culan en nues o medio. Uno de los mé odos de ipi icación que se emplean con
ecuencia es el esquema NG-MAST, debido a su pode disc imina o io y su al o g ado
de ep oducibilidad y capacidad pa a elaciona cepas. A pesa de sus en ajas, se es án
in oduciendo nue as écnicas con el obje i o de agiliza es e p oceso. Recien emen e,
se ha comenzado a u iliza la espec ome ía in a oja median e ans o mada de
Fou ie (FTIR) como ecnología al e na i a de ipado. Es e mé odo ha esul ado exi oso
en di e en es especies bac e ianas; sin emba go, son escasos los es udios ealizados con
N. gono hoeae.
Nues o abajo u o como obje i o ca ac e iza las cepas aisladas de N. gono hoeae
del año 2023 median e el esquema NG-MAST y comp oba si la espec oscopía FTIR es
iable con es a bac e ia. Los esul ados ob enidos mues an que el FTIR aún no es ú il
como mé odo de ipi icación pa a el gonococo, ya que no obse amos ninguna
co elación con el esquema NG-MAST. En is a de que N. gono hoeae p esen a
pleomo ismo, es necesa io segui in es igando es a p ome edo a ecnología e inclui
di e en es en oques analí icos en un u u o.
ABSTRACT
Sexually ansmi ed in ec ions (STIs) ep esen a se ious eme ging public heal h
p oblem a ec ing sexual and ep oduc i e heal h wo ldwide. Gonococcal in ec ion,
caused by Neisse ia gono hoeae, is he second mos common bac e ial STI a e
Chlamydia achoma is. In ecen yea s, i s incidence has inc eased signi ican ly in ou
coun y, wi h he Basque Coun y being he second mos a ec ed au onomous
communi y a e Ca alonia. Cu en ly, gonococcal in ec ion is ea ed wi h
an imic obials, howe e , he appea ance o s ains esis an o hese is inc easingly
common. Fo his eason, i is essen ial o ca y ou molecula epidemiological
su eillance o p o ide us wi h in o ma ion abou he clones ci cula ing in ou
en i onmen . One o he yping me hods equen ly used is he NG-MAST scheme, due
o i s disc imina o y powe and i s high deg ee o ep oducibili y and abili y o ela e
s ains. Despi e i s ad an ages, new echniques a e being in oduced wi h he aim o
speeding up his p ocess. Recen ly, Fou ie ans o m in a ed spec oscopy (FTIR) has
begun o be used as an al e na i e yping echnology. This me hod has been success ul
in di e en bac e ial species; howe e , ew s udies ha e been ca ied ou wi h N.
gono hoeae.
Ou wo k aimed o cha ac e ize N. gono hoeae isola es om he yea 2023 using he
NG-MAST scheme and o es whe he FTIR spec oscopy is easible wi h his bac e ium.
The esul s ob ained show ha FTIR is no ye use ul as a yping me hod o gonococcus,
as we did no obse e any co ela ion wi h he NG-MAST scheme. Because N.
gono hoeae shows pleomo phism, i is necessa y o u he in es iga e his p omising
echnology and o include di e en analy ical app oaches in he u u e.
1
1. INTRODUCCIÓN
Neisse ia gono hoeae es una bac e ia g amnega i a conocida po se el agen e
e iológico de la gono ea, una in ección de ansmisión sexual (ITS) que puede p oduci
g a es complicaciones (Quillin y Sei e , 2018). Las consecuencias ísicas, psicológicas y
sociales de las ITS, empeo an no ablemen e la calidad de ida de los pacien es a ec ados,
p o ocando complicaciones ales como in e ilidad, di icul ades en el emba azo, así
como impo an es asas de mo bilidad y mo alidad (Raccagni e al., 2023).
La in ección gonocócica es la segunda ITS bac e iana más común en el mundo as
Chlamydia achoma is (Lin e al., 2021) y según la O ganización Mundial de la Salud
(OMS) se es ima que en 2020 se p oduje on 82.400.000 casos de la en e medad en odo
el mundo (Miyna czyk-Bonikowska e al., 2022). El úl imo in o me anual del Cen o
Eu opeo pa a la P e ención y Con ol de En e medades (ECDC) e eló un o al de 70.881
casos no i icados de gono ea en 28 países de la Unión Eu opea/Espacio Económico
Eu opeo (UE/EEE) en el año 2022. Es a asa de no i icación de in ección gonocócica es la
más al a egis ada desde que comenzó la igilancia eu opea de ITS en 2009 (ECDC,
2024).
A endiendo a los úl imos da os egis ados en España (Figu a 1) en el año 2022 se
no i ica on un o al de 23.333 casos de gono ea, siendo Ca aluña, País Vasco, Mad id y
Balea es las p incipales comunidades au ónomas a ec adas (ISCIII, 2024).
Figu a 1: Incidencia de in ección gonocócica en España en el año 2022 po Comunidades Au ónomas.
Tomado de (ISCIII, 2024).
2
Po ello, el con ol y la p e ención de las ITS, y en pa icula de N. gono hoeae se
conside an una p io idad en la ac ualidad pa a la salud pública a ni el global (Raccagni
e al., 2023).
La gono ea a ec a a las localizaciones geni ales, ec ales y a íngeas an o de homb es
como de muje es, y la in ección puede cu sa con o sin sín omas. En muje es,
ap oximadamen e el 80-90 % de los casos anscu en de mane a asin omá ica, mien as
que en homb es se p esen an sín omas en el 45 % de los casos. La disu ia y las
sec eciones pu ulen as son las p incipales mani es aciones de la in ección en ambos
sexos, y en caso de no se a ada puede da luga a se e as complicaciones en e las
que des acan la epididimi is, la salpingi is y la en e medad pél ica in lama o ia, que a su
ez se asocian con mayo p obabilidad de emba azo ec ópico e in e ilidad. De o ma
menos ecuen e, N. gono hoeae puede llega a disemina se po odo el o ganismo y
p oduci una in ección gonocócica diseminada (IGD) que p o oca a i is gonocócica,
os eomieli is, endoca di is y meningi is en e o as (Lin e al., 2021; Raccagni e al.,
2023).
A pesa de que el p incipal mecanismo de ansmisión es po con ac o di ec o ía sexual,
es e pa ógeno ambién se puede ansmi i de la mad e al hijo du an e el emba azo,
causando en el e o in ecciones ocula es que pueden p oduci cegue a si no son a adas
adecuadamen e. Asimismo, N. gono hoeae aumen a el iesgo de ansmisión y
adquisición del i us de la inmunode iciencia humana (VIH) al igual que o as ITS (Lin
e al., 2021).
Con elación al a amien o, las indicaciones e apéu icas pa a hace en e a es e
pa ógeno han ido e olucionando a lo la go de los años. En 2016, la OMS ecomendaba
la e apia dual como égimen de a amien o p ima io, basada en la combinación de
ce iaxona gene almen e inyec able jun o con azi omicina, o ce ixima po ía o al en
combinación con azi omicina. Sin emba go, en el año 2020 los Cen os pa a el Con ol
y P e ención de En e medades ac ualiza on sus di ec ices ace ca de las ITS debido al
aumen o de cepas esis en es a azi omicina y a los nume osos acasos e apéu icos.
Conc e amen e, sup imie on la azi omicina del a amien o empí ico y duplica on la
dosis de ce iaxona de 250 a 500 mg, la cual se emplea ac ualmen e (Raccagni e al.,
2023).
3
En los úl imos años, ambién se ha e aluado la e icacia de los ca bapenemes como
posible a amien o en e a la in ección gonocócica. Sin emba go, su aplicación ha sido
desca ada an o de la p ác ica clínica habi ual como opción de a amien o de p ime a
línea. El p incipal mo i o se debe a la necesidad de p ese a y ese a es os
an imic obianos pa a hace en e a o o ipo de in ecciones y e i a así la apa ición de
más cepas esis en es (Raccagni e al., 2023).
Al igual que muchos o os mic oo ganismos pa ógenos, N. gono hoeae ha log ado
desa olla mecanismos de esis encia a odas las clases de an imic obianos disponibles,
y en los úl imos años se han iden i icado cepas ci culan es esis en es an o a ce iaxona
como a azi omicina (Lin e al., 2021). En is a de es a c í ica si uación, es e pa ógeno
ue incluido en el año 2017 en la lis a desa ollada po la OMS de los doce agen es
pa ógenos p io i a ios que necesi an u gen emen e el desa ollo de nue os
an imic obianos debido a la amenaza que supone pa a la salud pública a ni el mundial
(Miyna czyk-Bonikowska e al., 2022). Po odo ello, se ha p oducido un impo an e
p og eso en los p og amas de igilancia epidemiológica an o a ni el egional, nacional
e incluso in e nacional con el obje i o de as ea esos pa ones de esis encia y llega a
conoce con p ecisión los clones ci culan es en nues o medio. Los esquemas de
ipi icación molecula son las p incipales he amien as pa a es ablece co elaciones
en e cepas, de e mina su modo de p opagación y sus mecanismos de esis encia
(Iba goyen e al., 2020).
En el caso de N. gono hoeae, los esquemas de ipi icación molecula que se emplean
con mayo ecuencia son Mul ilocus Sequence Typing (MLST) y N. gono hoeae Mul i-
An igen Sequence Typing (NG-MAST) debido a su al o g ado de esolución,
ep oducibilidad y capacidad pa a cuan i ica elaciones en e cepas (Golpa ian e al.,
2021).
El esquema NG-MAST pe mi e ca ac e iza las cepas a endiendo a cambios en las
secuencias del gen po B que codi ica pa a la p o eína po ina Po B, y del gen bpB, que
codi ica pa a la subunidad B de la p o eína de unión a la ans e ina. Tan o la Po B como
la TpbB son p o eínas de memb ana ex e na hipe a iables, y po ello el esquema NG-
MAST iene un pode disc imina o io signi ica i amen e mayo que el MLST,
10
3.4. ANÁLISIS BIOINFORMÁTICO
Una ez ob enidas las secuencias de cada cepa se u ilizó el so wa e Ch omasP o 2 pa a
ealiza el análisis y la edición de las secuencias azadas en ambas di ecciones o wa d
y e e se. La secuencia consenso de cada cepa se in odujo en la web de PubMLST pa a
ob ene los alelos po B y bpB y inalmen e el co espondien e secuencio ipo (ST). Pa a
los alelos con una homología ≥ 99 % con un alelo desc i o se calculó el alelo más p óximo.
Finalmen e, los alelos de los diez ST más ecuen es se ag upa on en genog upos. De
acue do con la de inición p e iamen e desc i a po (Chisholm e al,. 2013), los aislados
que compa en un alelo idén ico y cuyo o o alelo mues a una semejanza del ≥ 99 % (≤5
pa es de bases de di e encia pa a po B y ≤4 pa es de bases pa a bpB) se ag upan en un
genog upo, el cual ecibe el nomb e del ST p edominan e den o de cada g upo.
3.5. CARACTERIZACIÓN MEDIANTE FTIR
Pa a lle a a cabo la espec oscopía FTIR, los aislamien os de Neisse ia gono hoeae del
cepa io se semb a on po ago amien o en Aga Chocola e. Se incuba on du an e 24
ho as en una es u a a 37 °C y a mós e a de un 70 % de humedad, suplemen ados con 5
% de CO2. T as el pe iodo de incubación, se ealizó una esiemb a y se incuba on
nue amen e en la es u a du an e 48 ho as.
Se ealizó una suspensión con un inóculo de bac e ias en iales diluidas en 50 µl de
e anol 70 %. Es os iales con enían a illas me álicas pa a acili a la homogeneización
(B uke Dal onics GmbH, Ge many). T as 5 minu os de agi ación en ó ex, se añadió 50
µl de agua des ilada.
Se pipe ea on 15 µl de la solución esul an e en una placa de silicona (B uke Dal onics
GmbH, Ge many) y se dejó seca a 37 °C du an e 10 minu os. Se ealiza on es éplicas
écnicas de cada uno de los aislados en a ias ejecuciones independien es en días
di e en es en el sis ema IR Bio ype ®, en una en ana de adquisición espec al de 1300
a 800 cm-1, siguiendo las ecomendaciones del ab ican e.
Adicionalmen e ambién se explo a on o as en anas de adquisición, an o
p econ igu adas po el ab ican e, así como o as desa olladas especí icamen e pa a el
abajo.
11
4. RESULTADOS
4.1. RESULTADOS EPIDEMIOLÓGICOS
En el es udio únicamen e se ha incluido un aislamien o po pacien e y po episodio,
siendo el o al 365 aislados. Sin emba go, 5 de esos aislados no c ecie on en el medio de
cul i o, po lo que ue on desca ados pa a el abajo. Po lo an o, el análisis de los
esul ados se lle ó a cabo únicamen e con las 360 mues as con c ecimien o posi i o.
Respec o al sexo, el 78,1 % (281) de las mues as es udiadas co espondían a homb es y
el 21,9 % (79) a muje es.
La edad media de los pacien es ue de 30 años an o en homb es como muje es (DE=
9,89) (mediana 28 y ango de 14-74 años).
Las asas más ele adas de in ección gonocócica se p oduje on en el g upo de 25 a 34
años (40 %), seguidas del g upo de 20 a 24 años (25,6 %), 35 a 44 años (17,2 %), 15 a 19
años (7,8 %), 45 a 54 años (5,8 %), 55 años o más (2,8 %) y meno es de 15 años (0,8 %)
(Figu a 5). Las asas de in ección en homb es ue on supe io es a las de las muje es en
los g upos de 20 a 24 años, 25 a 34 años, 35 a 44 años y 45 a 54 años.
Figu a 5: Tasas de incidencia de in ección gonocócica po g upos de edad y sexo.
12
Con elación a la localización, el 66,4 % de las mues as analizadas ue on ob enidas de
localización geni al, seguido de un 26,7 % de localización ec al, 5,5 % a íngea y 1,4 %
con o a p ocedencia dis in a (Tabla 1).
En lo e e en e al se icio de p ocedencia de los pacien es, la mayo pa e de los
diagnós icos ue on ealizados en la consul a de ITS (68,1 %), seguido de aquellos
ealizados en a ención ambula o ia (18,3 %), en el Se icio de U gencias (10,8 %) y en
o os se icios del Hospi al Uni e si a io Basu o (2,8 %) (Figu a 6).
Tabla 1: Clasi icación de los diagnós icos de in ección gonocócica en unción de la localización de la mues a
y el sexo.
Figu a 6: Se icio de p ocedencia de los pacien es analizados en el abajo.
13
4.2. CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LOS AISLADOS
La ca ac e ización molecula median e esquema NG-MAST se ealizó a 360 aislamien os
pe enecien es al año 2023. Se ob u ie on los ST de 318 pacien es median e el uso de la
base de da os online PubMLST, e elando un o al de 76 ST di e en es. Del o al, 38 ST
se mani es a on en un único aislado, y o os 38 ST se mani es a on en dos o más aislados.
Los 10 ST más ecuen es ue on el ST19838 (48 aislados, 13,3 %), ST20881 (29 aislados,
8,1 %), ST19792 (20 aislados, 5,6 %), ST19636 (19 aislados, 5,3 %), ST19762 (18 aislados,
5,0 %), ST3935 (14 aislados, 3,9 %), ST338 (10 aislados, 2,8 %), ST17972, ST20737 y
ST21386 (8 aislados, 2,2 %) (Tabla 2). Los STs ST20881, ST3935 y ST21386 únicamen e
a ec a on a homb es.
Los secuencio ipos más ecuen es se dis ibuye on de mane a homogénea a lo la go del
pe íodo de es udio. Sin emba go, algunos ST p edomina on en épocas conc e as del año
2023, como el ST19636 (7 aislados en ene o), ST19792 (6 aislados en sep iemb e) o el
ST21386 (4 aislados en ab il).
Tabla 2: Secuencio ipos más ecuen es de N. gono hoeae du an e el año 2023.
14
Po o o lado, a un o al de 40 pacien es no se les pudo de e mina su ST debido a
di e en es azones. En 23 de ellos, la base de da os online PubMLST no mos ó
coincidencias al in oduci la combinación de alelos de ambos genes (Tabla 3), po lo que
pod ían p esen a nue os ST que aún no han sido desc i os.
En 13 pacien es, no se pudo de e mina su ST exac o ya que p esen aban mu aciones en
el gen po B (12 pacien es) y en el gen bpB (1 pacien e). Sin emba go, al a a se de un
bajo núme o de mu aciones, se pudie on ob ene sus ST más ce canos. Es os
secuencio ipos son: ST19968, ST21783, ST20379, ST4186, ST20591, ST9702, ST22089,
ST22693 y ST22896.
Los 4 pacien es es an es p esen aban más de cua o mu aciones en el alelo po B, po
lo que no ue posible de e mina su ST exac o o ce cano. A es os alelos se les asignó una
nomencla u a di e en e: nPo 001, nPo 002 y nPo 003 (Tabla 4).
Tabla 3: Secuencio ipos que no han sido p e iamen e desc i os de N. gono hoeae.
15
Al o al de 32 ST no desc i os p e iamen e se les es ableció la nomencla u a HUB
(Hospi al Uni e si a io Basu o) seguido de un núme o y o denados c onológicamen e
como se obse a en las Tablas 3 y 4.
Las secuencias de ambos genes no desc i as p e iamen e se en ia on a la base de da os
PubMLST pa a que se les asigne un nue o núme o alélico.
Finalmen e, no ue posible la secuenciación del agmen o del gen bpB en 2 pacien es
que compa ían el mismo alelo del gen po B (alelo 30). En es e caso, se ealizó
secuenciación masi a po nanopo os, y en ambos casos se con i mó la ausencia de
ampli icación en la PCR in silico median e el uso de los cebado es del esquema NG-MAST
pa a bpB po una deleción en el gen.
Los da os p e iamen e ob enidos ace ca de la sensibilidad an imic obiana nos indica on
que la mayo ía de los ST más ecuen es p esen aban esis encia al cip o loxacino (Tabla
5). Sin emba go, odos los aislados de los STs ST19636, ST3935 y ST21386 p esen a on
sensibilidad en e a es e an imic obiano. Respec o a la penicilina, la mayo ía de los STs
Tabla 4: Secuencio ipos que no han sido p e iamen e desc i os, jun o con sus STs más p óximos.
16
mos a on sensibilidad in e media, excep uando 8 aislados pe enecien es al ST338, y 1
aislado con secuencio ipo ST17972.
Con elación a la e aciclina, la mi ad de los aislados (24) del ST19838 p esen a on
esis encia. Respec o al o al de mues as del es udio, 163 aislados e an esis en es a
es e an imic obiano (45,2 %).
R: esis en e, I: in e medio, S: sensible.
Asimismo, odos los aislamien os pe enecien es a los ST ST22718, ST13892, ST8435,
ST9208 y HUB08 ambién mos a on sensibilidad a cip o loxacino. Respec o a la ce ixima
y ce iaxona, las 360 cepas del es udio e an sensibles a ambas.
Con espec o a los genog upos, se designa on un o al de 9 genog upos que incluían a
189 aislados (52,5 %). El G19838 ue el genog upo con mayo núme o de aislados. Los
genog upos G19838, G19792, G19762 y G3935 ambién engloba on ST di e en es (Tabla
6).
Tabla 5: Sensibilidad an imic obiana a cip o loxacino y a penicilina de los 10 STs más ecuen es.
17
4.3. COMPARATIVA FTIR Y NG-MAST
Se ealiza on 4 análisis independien es pa a comp oba si la espec oscopía FTIR en el
sis ema IR Biosys em ag upaba los aislados de la misma mane a que el NG-MAST. En
odos los análisis se consiguió con ola el uido y que odas las éplicas u ie an
su icien e abso bancia pa a supe a el con ol de calidad. Los esul ados se
ep esen a on en o ma de dend og ama de espec os de los aislados y el pun o de co e
se ijó según las ins ucciones del ab ican e. El dend og ama se ob u o en base a
cálculos ma emá icos según los alo es de simili ud espec al en e los aislados, y
pe mi e ob ene una isión gene al en o ma de á bol. El colo e de mues a que las
éplicas écnicas que pe enecen al mismo aislado se han ag upado sa is ac o iamen e.
Po el con a io, el colo ama illo indica que las éplicas écnicas del mismo aislado no
consiguie on ag upa se (Co win e al., 2023). El colo na anja indica que éplicas écnicas
de di e en es secuencio ipos han ag upado den o del mismo clus e .
Tabla 6: Genog upos de N. gono hoeae ob enidos en unción de la semejanza de los alelos po B y
bpB.
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En los dos p ime os uns ealizados, se in es iga on 5 aislados con 3 éplicas écnicas
(NG-003, NG-008, NG-009, NG-013, NG-017) pe enecien es a los secuencio ipos
ST21359, ST5624, ST21645, ST19792 y ST17972, espec i amen e (Figu as 7 y 8).
Figu a 7: Dend og ama de los espec os de los 5 aislados analizados en el p ime un con su co espondien e
ST.
Figu a 8: Dend og ama de los espec os de los 5 aislados analizados en el segundo un con su
co espondien e ST.
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En el e ce un, se analiza on 18 aislados con 3 éplicas écnicas (NG-012, NG-025, NG-
026, NG-027, NG-033, NG-035, NG-066, NG-077, NG-079, NG-097, NG-116, NG-123, NG-
157, NG-179, NG-202, NG-207, NG-289 y NG-352) odos ellos con secuencio ipo ST19636
(Figu a 9).
Figu a 9: Dend og ama de los espec os de los 18 aislados analizados en el e ce un con su
co espondien e ST.
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En nues o es udio, ampoco se obse ó conco dancia con los esul ados ob enidos po
el esquema NG-MAST. La espec oscopía FTIR ue capaz de ag upa las éplicas écnicas
de cie os aislados, pe o su co elación con el esquema NG-MAST ue escasa.
Se plan ean di e en es hipó esis ace ca de po qué no se ha log ado es ablece una
co elación en e la espec oscopía FTIR y el NG-MAST. Uno de los mo i os se c ee que
es debido a la a iación an igénica y de ase de las es uc u as supe iciales de los
ca bohid a os de la pa ed celula del gonococo. Es a ecnología analiza y p oduce
espec os de polisacá idos p esen es en la pa ed celula de las bac e ias, a di e encia de
o os mé odos de ipi icación. Las moléculas de la supe icie de la pa ed celula del
gonococo suelen se an igénicamen e a iables y los epí opos se modi ican po a iación
an igénica o de ase. La pa ed celula de N. gono hoeae es á compues a po di e sos
ac o es de i ulencia, pep idoglicano y glicop o eínas. En e los ac o es de i ulencia,
des acan los lipooligosacá idos (LOS), ya que cons i uyen el 75 % de la memb ana
ex e na. Cuando N. gono hoeae c ece en cul i o, la a iación de ase de los
lipooligosacá idos c ea una supe icie bac e ia en cons an e cambio, lo que di icul a su
uso como ma cado de ipi icación con es a ecnología. Además, N. gono hoeae ca ece
de cápsula, y es o ambién pueden con ibui a que no sea posible su ipado po es e
mé odo (Co win e al., 2023).
Asimismo, o o p oblema que plan ea es a écnica es la ele ada sensibilidad que posee,
an o a los medios de cul i o, como a la empe a u a o al iempo de inoculación, lo que
puede conduci a esul ados e óneos (Finlayson e al., 2019).
En nues o es udio, se analiza on además el ango espec al 1700-1600 cm-1 ( egión de
humedad), 3000-2800 cm-1, 1500-1400 cm-1 (lípidos), 1800-1900 cm-1 (p o eínas y
ca bohid a os) y aquellos diseñados especí icamen e pa a el p oyec o, 995-975 cm-1,
1035-1025 cm-1, 1385-1370 cm-1. Sin emba go, con ningún ango se log ó ipi ica
co ec amen e N. gono hoeae.
En is a de la si uación ac ual de in ección gonocócica, es undamen al con inua
ealizando igilancia epidemiológica que nos pe mi a desa olla nue os en oques en el
a amien o de es a en e medad. La ca ac e ización molecula ya sea po mé odos
con encionales o po nue as ecnologías, es imp escindible pa a conoce con exac i ud
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las cepas esis en es que ci culan en nues o medio, pudiendo así an icipa nos a
p opo ciona un diagnós ico y un a amien o más e ec i o. En es e es e es udio se ha
comp obado cómo la ca ac e ización median e el esquema NG-MAST aún sigue siendo
la mejo opción pa a ipi ica el gonococo. Sin emba go, la espec oscopía FTIR ha
demos ado se una al e na i a en muchas especies bac e ianas, debido a su bajo cos e,
acilidad y su iempo educido de análisis. Po odo ello, c eemos necesa io con inua
in es igando es a ecnología añadiendo di e en es en oques analí icos que pe mi an
ipi ica con éxi o N. gono hoeae en un u u o.
6. CONCLUSIONES
Se exponen a con inuación las conclusiones ob enidas as la ealización de es e es udio:
1. La in ección gonocócica en nues o es udio a ec a mayo i a iamen e a homb es,
siendo el g upo de edad de 25 a 34 años el que p esen a mayo p e alencia.
2. La ca ac e ización molecula de los 360 aislados e eló un o al de 76 ST
di e en es en el á ea sani a ia de Bilbao du an e el año 2023. Los 10 ST más
ecuen es ue on ST19838, ST20881, ST19792, ST19636, ST19762, ST3935,
ST338, ST17972, ST20737 y ST21386. Excep uando el ST338 y el ST3935, el es o
no han sido desc i os en o os es udios p e ios, po lo que podemos
encon a nos an e cepas que es án ci culando p incipalmen e en nues a á ea.
3. Todos los aislados con ST19636, ST3935 y ST21386 p esen a on sensibilidad
en e al cip o loxacino.
4. La ca ac e ización molecula median e el esquema NG-MAST posee un al o
g ado de esolución, ep oducibilidad y una g an capacidad pa a elaciona
cepas. Po ello, es a écnica con inúa siendo la mejo opción de ipi icación pa a
N. gono hoeae.
5. De acue do con los esul ados ob enidos, no se obse ó co elación en e el
esquema NG-MAST y el FTIR. La p incipal hipó esis de es e esul ado se debe al
pleomo ismo que p esen a el gonococo. Po ello, es necesa io con inua
in es igando es e mé odo y abo da lo desde di e en es pe spec i as que
pe mi an la ca ac e ización de es a bac e ia con éxi o en un u u o.
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