UNIVERSIDAD DE SEVILLA
Facul ad de Medicina
Depa amen o de Mic obiología
TESIS DOCTORAL
P e alencia de Esche ichia coli O25b:H4-ST131 p oduc o o no de
Be alac amasa de Espec o Ex endido (BLEE) en el á ea de Se illa.
T abajo ealizado pa a alcanza el g ado de Doc o po , la Licenciada en
Fa macia, Dña. Ma ía del Ma Bellido Ba que o.
Se illa, mayo de 2017

Ag adecimien os
Me gus a ía da le las g acias a odos y cada uno de los que han es ado a mi lado
du an e es e iempo. Quizás no pueda esc ibi el nomb e de odos los “con ibuyen es”, pe o
ellos saben quiénes son.
En p ime luga da le las g acias a mis dos di ec o es. Al D . Ál a o Pascual po
pe mi i me ealiza es e abajo bajo su u ela, po sus sabios consejos y habe me pe mi ido
compagina el desa ollo de es e p oyec o con mi o mación como Especialis a en
Mic obiología. A la D a. Lo ena López Ce e o po habe me ayudado y po habe con iado
en mí en es a úl ima e apa del p oyec o.
Al D . Ja ie Azna ag adece le habe sido mi u o del T abajo Fin de Más e y del
P oyec o de Tesis Doc o al.
También mos a mi ag adecimien o a odos los Facul a i os del Se icio de
Mic obiología del H. U. V. Maca ena: Anabel, Níni e, Enca na, Ma ina, Inma y Felipe.
G acias po habe dejado que in i ie a iempo de la especialidad en idas y enidas a” la
cá ed a”. G acias po ues as palab as de alien o, en especial al D . Muñoz. G acias,
En ique. G acias po odos us consejos y g acias po escucha me, aún a día de hoy.
G acias a los écnicos, en especial a Inma y Lola.
G acias a Candela y Pila po las isas que nos hemos echado y nos seguimos
echando.
Ag adece a odos mis compañe os de “la cá ed a” po compa i an os buenos
momen os y o os menos buenos; en de ini i a, g acias po compa i . G acias a So ía, José
Manuel, Isabel, Cá menes, Fe nando, Ra a y, en especial, a “los niños”. G acias, Alejand a,
E a, Fany, Pauli a, F an y sob e odo, a La a. G acias po odo lo que has hecho y po lo
que e es, g acias po las isas que nos hemos echado y po odo lo que me has aguan ado.
Deci os que sois g andes abajado es, pe o mejo es pe sonas.
G acias a mis compañe os de esidencia, en especial a mi “R2”, Meme, y a mi “R
chico”, Jesús. Con la especialidad se ganan muchas cosas y, una de los mejo es, los
amigos.
G acias a mis pad es, soy quien soy g acias a oso os. G acias po ues o apoyo
incondicional.
G acias a mi ma ido. Sin i, no lo hubie a conseguido. G acias po anima me a
con inua y po hace me el camino más ácil.
G acias a mi hija. Ella no lo sabe aún, pe o me ha dado mucha ue za pa a segui
adelan e.
G acias a mis amigas de oda la ida y a las más ecien es, pe o no menos
impo an es. G acias, Paula, Ma ía Rosa, Emma, Ma ía, Belén, Lucía y Ma ía.
6

7
1. In oducción
In oducción
9
1.1. Gene alidades de E. coli
En 1885, Theodo e on Esche ich aisló Bac e ium coli commune a pa i de
heces de neona os y niños sanos (1). Pe o has a el año 1954 no es denominada
Esche ichia coli, en hono a su descub ido (2).
Es a especie jun o con o as cinco pe enecen al géne o Esche ichia, el cual se
engloba den o de la amilia En e obac e iaceae. De odas las especies del géne o, E.
coli es la más impo an e pa a el se humano po o ma pa e de la mic obio a in es inal
de indi iduos sanos y o os mamí e os de sang e calien e, llegando a se la bac e ia
anae obia acul a i a más abundan e en el in es ino g ueso del se humano. Y po o o
lado, po ag upa cepas que pueden causa in ecciones in es inales y ex ain es inales,
an o en indi iduos sanos como inmunodep imidos (3). En e las in ecciones más
comunes p oducidas po E. coli se encuen an las in ecciones del ac o u ina io (80-
90%), seguidas de bac e iemias, meningi is y dia eas (4).
1.2. Pa ogenia
La pa ogenia de E. coli es a iable y, en unción de ella, se pueden dis ingui
es g upos p incipales: E. coli comensal, E. coli pa ógeno in es inal y E. coli pa ógeno
ex ain es inal.
1.2.1. E. coli comensal
Las cepas comensales de E. coli cons i uyen g an pa e de la mic obio a del
in es ino del se humano, mamí e os y a es. Son cepas pe ec amen e adap adas a la
coexis encia con su hospedado , el cual no desa olla sin oma ología, sal o en casos de
inmunodep esión.
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1.2.2. E. coli pa ógeno in es inal
Las cepas pa ógenas in es inales de E. coli a a ez se encuen an o mando
pa e de la lo a ecal de indi iduos sanos, sino que son pa ógenos obligados. En la
ac ualidad según la pa ogénesis y ca ac e ís icas epidemiológicas, se han de inido 6
pa o ipos de E. coli: E. coli en e o oxigénica (ETEC), E. coli en e oag ega i a (EAEC), E.
coli de adhe encia di usa (DAEC), E. coli en e ohemo ágica (EHEC), E. coli
en e oin asi a (EIEC), E. coli en e opa ógena (EPEC). Los es p ime os son causan es
de dia eas acuosas, mien as que los es úl imos p oducen dia eas sanguinolen as y/o
in asi as. Los mecanismos de acción son di e en es según el pa o ipo: p oducción de
oxinas (ETEC, EHEC, EAEC), ac o es de adhe encia (EHEC, EPEC, EAEC, DAEC) e
in asión del epi elio (EIEC).
1.2.3. E. coli Ex ain es inal (ExPEC)
Es as cepas son epidemiológica y ilogené icamen e dis in as de las comensales
e in es inales. Son capaces de causa in ecciones en los se es humanos y animales de
sang e calien e, no son capaces de causa una in ección en é ica, pe o sí de ins au a se
de o ma es able en el in es ino del hospedado y llega a coloniza el 20% de humanos
sanos (5). En el se humano es as cepas son la causa más impo an e de in ección del
ac o u ina io (UTI), en cuyo caso eciben el nomb e de cepas UPEC; seguida de
bac e iemias adqui idas en la comunidad y sepsis (cepas SEC). Po o a pa e,
cons i uyen una de las causas p incipales de meningi is en los ecién nacidos (cepas
NMEC) que, a menudo, acaban en mue e (6)(7). Pueden causa in ecciones
in aabdominales y neumonías nosocomiales y, ocasionalmen e, pa icipan en o as
in ecciones ex ain es inales, ales como la os eomieli is, celuli is e in ecciones de
he idas. En los animales es de especial ele ancia las ele adas pé didas económicas
que padece la indus ia a ícola debido a las cepas que causan in ecciones espi a o ias
y sepsis (8,9). Los animales de compañía como los pe os y ga os ambién su en
in ecciones po cepas ExPEC que pueden compa i genes de i ulencia con cepas
causan es de in ecciones en se es humanos (10,11).
1.2.3.1. Fac o es de i ulencia
Las cepas ExPEC es án implicadas en un amplio espec o de en e medades que
se pueden asocia con la p esencia de a ios ac o es de i ulencia, ales como di e sas
combinaciones de adhesinas, dis in os sis emas de adquisición de hie o, p oducción de
In oducción
11
oxinas y mecanismos de e asión del sis ema de de ensa del hospedado , en e o os.
Sin emba go, aunque no se puede es ablece una elación en e un ac o de i ulencia
ex ain es inal conc e o y una pa ología especí ica, a pa i del año 2000 su ge el
concep o de ExPEC, de iniéndose como al a aquellas cepas de E. coli con capacidad
i ulen a en un modelo animal o con de e minados ac o es de i ulencia que causan
in ecciones ex ain es inales y que son dis in os a los encon ados en las cepas
in es inales (12,13). Cabe menciona que en muchos es udios se engloba den o del
pa o ipo ExPEC a cualquie cepa de E. coli aislada de una in ección ex ain es inal, pe o
el c i e io pa a disc imina las cepas ExPEC de las no-ExPEC se basa en la p esencia
de dos de los siguien es ma cado es de i ulencia: papC o papAH, s a/ oc, a a/d a, iu A
y kpsM II (14).
Las cepas ExPEC poseen dis in os ipos de ac o es de i ulencia que
con ibuyen conjun amen e a po encia su pa ogenia, po lo que se conside a que su
i ulencia es un enómeno mul i ac o ial. A con inuación, se desc iben los siguien es
ac o es de i ulencia:
• Adhesinas
Es as p o eínas es án implicadas en la unión de la bac e ia a las células
epi eliales del ac o u ina io, ales como:
o Fimb ia común ipo 1 ( imH): p esen e en el genoma del 99% de los
aislados de E. coli (15) e implicada en la adhesión e in asión de las
células de la ejiga.
o Fimb ia ipo P (papG): p esen e en la mayo pa e de las cepas
causan es de pielone i is y u osepsis. Se enca ga de ija se a los
ecep o es y coloniza el epi elio (16).
o Fimb ia ipo S: asociada a cepas causan es de sep icemias y meningi is.
Muchas cepas exp esan an o la imb ia ipo S como ipo P
simul áneamen e (17).
o Adhesina a a/D : implicada en la e asión de la espues a humo al,
acili ando la in asión de las células epi eliales. Se ha asociado con
cepas causan es de in ecciones u ina ias y sep icemias (18).
En cuan o a la exp esión de las imb ias exis e una egulación; de modo que en
la p ime a ase de la in ección que iene luga en la ejiga se exp esan las de ipo 1,

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pe o en el iñón dejan de exp esa se y comienzan a hace lo las de ipo P y S. Es a
egulación je á quica pa ece se esencial pa a el pa ógeno, ya que se asegu a que sólo
las imb ias necesa ias implicadas en la adhe encia a un de e minado ejido se exp esan
en un momen o dado y, así, limi an su exposición al sis ema inmune y eluden la
espues a de los an icue pos (19).
• Toxinas
Ac úan des uyendo las células del hospedado , pa a así con inua
diseminándose po sus ejidos y adqui i nu ien es y o os ac o es necesa ios du an e
la in ección.
o α-hemolisina (Hly): p esen e en las cepas causan es de in ecciones
u ina ias y sepsis, en e o as. Con ibuye al suminis o de hie o a la
bac e ia (20).
o Sa (Sec e ed Au o anspo e Toxin): p esen e p incipalmen e en
cepas causan es de pielone i is. P o oca e ec os ci opá icos sob e
células del iñón y de la ejiga (21).
o CDT (Cy ole hal Dis ending Toxin): p esen a ac i idad ca alí ica. Se
conocen 5 a ian es, de las cuales la CDT-I, CDT-II y CDT-IV se han
iden i icado en cepas ExPEC (22).
o CNF (Cy o oxic Nec o izing Fac o ): se conocen 3 ipos, de los cuales
las cepas ExPEC causan es de in ección u ina ia y sepsis p oducen la
a iedad CNF1, jun o con Hly (23,24).
• Side ó o os
Los side ó o os son sis emas de cap ación del hie o que las bac e ias han
desa ollado pa a pode c ece y sob e i i , ya que al es a secues ado en
hemop o eínas o en p o eínas anspo ado as de hie o, puede llega a con e i se en
un ac o limi an e (25). Es os cap ado es de hie o se sin e izan en el ci oplasma,
pos e io men e son sec e ados, cap an el hie o g acias a la ele ada a inidad que ienen
po él, se in e nalizan y libe an el hie o en el ci oplasma (26).
• P o eínas in oluc adas en la esis encia al sue o y a la agoci osis
En e las p o eínas in oluc adas en la esis encia al sue o se encuen an las
lipop o eínas Iss (Inc eased Se um Su i al), que inc emen an la supe i encia al sue o
In oducción
13
y las T aT, las cuales aumen an la esis encia de la bac e ia a la acción del
complemen o, p oduciendo una disminución de la in e acción de la memb ana
bac e iana con el complemen o y, como consecuencia, educiendo la agoci osis (27).
También la cápsula juega un papel p o ec o con a la agoci osis y la ac i idad
bac e icida del sue o, p incipalmen e debido a an ígenos de los g upos II y III (28).
O o ac o de i ulencia que ayuda a la supe i encia de las bac e ias y a la
capacidad in asi a g acias a la o mación de biopelículas es el IbeA (In asion o B ain
Endo helium) (29).
La i ulencia de las cepas ExPEC ha es ado clásicamen e in e samen e
elacionada con la esis encia a an imic obianos, de modo que las cepas u opa ógenas
de E. coli esis en es a luo quinolonas (FQ) p esen an una disminución en la exp esión
de los ac o es de i ulencia en compa ación con las cepas sensibles, según han
cons a ado a ios es udios. Uno de ellos lo lle a on a cabo D ews y cols., quienes
es udia on la ecuencia de la be a(β)-hemólisis y de la exp esión de papEF (adhesina)
en una se ie de aislados canadienses de E. coli an o comuni a ios como nosocomiales
du an e los años 2003-2004. Ob u ie on que la β-hemólisis y la exp esión de papEF,
an o en comuni a ios como en nosocomiales, e an signi ica i amen e menos ecuen es
en e los aislados de E. coli esis en es a FQ que en e los sensibles (30). Po o o lado,
La igne y cols. es udia on en F ancia o os ac o es de i ulencia (papG allele II- a ian e
de la adhesina P, kpsMTK1- a ian e de kpsM y hlyA-hemolisina) en aislados de E. coli
p oceden es de mues as hospi ala ias, as lo que ob u ie on que los aislados de E. coli
sensibles a FQ es aban signi ica i amen e asociados con los ac o es de i ulencia en
compa ación con los aislados esis en es a FQ (31). En o a se ie eu opea de aislados
de E. coli, p oceden es de mues as hospi ala ias ecogidas du an e los años 1998-1999
y 2002, Johnson y cols. es udia on la p esencia de 35 ma cado es de i ulencia,
de ec ándose mayo núme o de es os en e los aislados sensibles a FQ que en e los
esis en es, siendo es adís icamen e signi ica i a la di e encia en 3 de ellos, yuA
(side ó o o), kpsMT II y ompT (p o easa de la memb ana ex e na (32).
1.3. Di e sidad gené ica
Como hemos comen ado an e io men e, den o de es a especie exis en
di e en es g upos, pe o ambién se pueden dis ingui dis in os linajes o subg upos. Pa a
ello se u ilizan las écnicas de ipado, en e las que se encuen an las an e io es a la e a
molecula y las pos e io es a la misma. De modo que an es de dispone de in o mación
14
a ni el molecula , el es udio de la di e sidad de E. coli se lle ó a cabo con cepas
di e enciadas median e se o ipado y pe iles me abólicos (MLEE).
1.3.1. Se o ipado
Pa a di e encia las cepas pa ógenas de las cepas comensales p esen es en la
lo a mic obiana no mal, Kau mann (33) desa olló un esquema de se o ipi icación que
ac ualmen e iene 174 an ígenos somá icos (O1 a O181), 53 lagela es (H1 a H56) y 72
capsula es (K1 a K103). El an ígeno “O” es el esponsable del se og upo; la
de e minación de los an ígenos somá ico y lagela (O:H) indica el se o ipo, el cual en
ocasiones se asocia con un cuad o clínico en pa icula . La se o ipi icación de E. coli
equie e de un g an núme o de an isue os y es una écnica muy cos osa, po lo que
muchos labo a o ios de u ina usan o os mé odos de ipado.
1.3.2. MLEE (Mul ilocus Enzyme Elec opho esis)
Es e mé odo analiza los pa ones de mo ilidad elec o o é ica de un g upo de
enzimas me abólicas (de 15 a 30). Al habe aislados que p esen an dis in a mo ilidad
enzimá ica, se conside a que ienen di e en es e siones de la misma enzima, lo que se
aduce en dis in os alelos codi ican es de esa enzima.
Con la inco po ación de las écnicas molecula es se an supe ando los
incon enien es an e io men e desc i os, además de consegui mayo ep oducibilidad y
pode de disc iminación (34). En e dichas écnicas se encuen an: pe il plasmídico,
análisis del ADN c omosómico median e enzimas de es icción (Res ic ion F agmen
Leng h Polymo phism “RFPL” y Pulse-Field Gel Elec opho esis “PFGE”), ibo ipado
(análisis de los genes de ADN que codi ican pa a ARN 16S y 23S), écnicas de PCR
(A bi a ily P imed Polyme ase Chain Reac ion, AP-PCR y Random-PCR) y
secuenciación del ADN (MLST) (6,35–38).
De odos ellos, cabe des aca el PFGE y el MLST po las en ajas comen adas a
con inuación.
1.3.3. PFGE (Pulsed-Field Gel Elec opho esis)
Es a écnica se basa en la diges ión del ADN c omosómico con una enzima de
es icción de baja ecuencia, y la pos e io sepa ación de los 10-30 agmen os de ADN
que se gene an median e elec o o esis en campo pulsado. Es al amen e ep oducible y
iene un ele ado pode de disc iminación (analiza g an pa e del ADN c omosómico),
po lo que es un mé odo de e e encia de ipado en es udios epidemiológicos locales en
In oducción
15
los que in e esa de ec a cepas implicadas en b o es. Pe o es a écnica ambién
p esen a cie as limi aciones, como: no pode in e cambia in o mación en e
labo a o ios po la necesidad de es anda ización, su ele ado cos e, labo iosidad y
iempo pa a ob ene y analiza esul ados.
1.3.4. MLST (Mul iLocus Sequence Typing)
La écnica de Mul iLocus Sequence Typing “MLST” es á basada en el MLEE y
de e mina la secuencia de nucleó idos de cie os genes al amen e conse ados
(housekeeping). La elación de los aislados median e MLST se basa en los
polimo ismos de los dichos genes; a cada secuencia gené ica se le asigna un núme o
de alelo, gene ándose pa a cada cepa un pe il alélico al que le co esponde un
secuencio ipo (ST) (39).
Exis en dos esquemas de MLST según los genes housekeeping seleccionados.
Uno de ellos es el esquema de Ach man (h p://mls .wa wick.ac.uk/mls /dbs/Ecoli), que
u iliza la secuencia de 7 genes housekeeping: adk (adenila o kinasa), umC ( uma a o
hid a asa), gy B (ADN gi asa), icd (isoci a o deshid ogenasa), mdh (mala o
deshid ogenasa), pu A (adenilsuccina o sin e asa), y ecA (mo i o de unión ATP/GTP).
El o o es el esquema de Pas eu
(h p://www.pas eu . / eche che/genopole/PF8/mls /EColi.h ml), el cual usa 8 genes
housekeeping: dinB (DNA polime asa), icdA (isoci a o deshid ogenasa), pabB (p-
aminobenzoa o sin asa), polB (polyme asa II [Pol II]), pu P (p olin pe measa), pA
(subunidad A ip ó ano sin asa), pB (subunidad B ip ó ano sin asa), y uidA (β-
glucu onidasa).
Es e mé odo no iene las des en ajas que p esen a el PFGE, ya que la
in o mación de las secuencias es compa able y ans e ible en e labo a o ios y es
al amen e ep oducible (40). Po el con a io, no iene el pode disc imina o io pa a
de ec a cambios gené icos en e cepas implicadas en b o es (34) y puede ocu i que
den o de un ST no exis a homogeneidad en cuan o a las p opiedades gené icas o
compo amien o pa o ípico y que, al ipa las, an o aislados pa ogénicos como
comensales o a i ulen os p esen en la misma combinación alélica.
Los obje i os de es as écnicas de geno ipado son dis ingui los aislados
pa ógenos de los inocuos y de e mina si son aislados que pe enecen al mismo clon o a
g upos clonales elacionados epidemiológicamen e. Es deci , si aunque p ocedan de
di e en es mues as, zonas geog á icas y quizás di e en es echas de aislamien o, ienen
las mismas ca ac e ís icas eno ípicas y geno ípicas, hace que la explicación más
22
Tabla 1. Clasi icación de los an ibió icos β-lac ámicos.
G upo
An ibió ico
Espec o de acción
Penicilinas
Bencilpenicilina
Penicilina G.
Espec o educido.
Fenoxialquilpenicilina
Penicilina V o enoxime ilpenicilina.
Espec o educido.
Isoxazolilpenicilinas
Oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina.
Ac i as en e a penicilinasas de S aphylococcus.
Aminopenicilinas
Ampicilina, amoxicilina,bacampicilina, pi ampicilina.
Ac i as en e a en e obac e ias.
Ca boxipenicilinas
Tica cilina, ca benicilina.
Ac i as en e a en e obac e ias y Pseudomonas.
Acilu eidopenicilina
Pipe acilina.
Ac i as en e a en e obac e ias y Pseudomonas.
Ce alospo inas
1ª gene ación
Ce alo ina, ce azolina, ce ad oxilo,
ce alexina, ce ad ina.
Ac i as en e a g amposi i os y algunas en e obac e ias.
2ª gene ación
Ce u oxima, ce amandol,
ce onicid, ce aclo .
Mayo ac i idad en e a g amnega i os que
g amposi i os.
Ce amicinas
Ce oxi ina, ce o e án, ce me azol.
Mayo esis encia a be alac amasas, incluidas las de
espec o ex endido.
3ª gene ación
Ce o axima, ce iaxona, ce azidima, ce podoxima,
ce ixima, ce ope azona.
Espec o ampliado en e a g amnega i os, incluido
Pseudomonas.
4ª gene ación
Ce epime, ce pi oma.
Amplio espec o: g an ac i idad en e a g amposi i os y
g amnega i os.
Ca bapenemas
Imipenem, e apenem, me openem, do ipenem.
Resis encia a be alac amasas, incluidas las de espec o
ex endido.
Monobac amas
Az eonam, ca umonam.
Resis encia a be alac amasas, especialmen e de
Pseudomonas.
Inhibido es de β-
lac amasas
Ácido cla ulánico, sulbac am, azobac am.
Asociados con be alac ámicos es au an su ac i idad.

In oducción
23
1.5.1.2. Quinolonas
Las quinolonas son an imic obianos bac e icidas cuya es uc u a química se basa en
el anillo 4-oxo-quinoleína. Ac úan inhibiendo a la ADN gi asa y a la opoisome asa IV, con
lo cual impiden la sín esis del ADN.
Sob e el anillo se han hecho múl iples modi icaciones pa a ob ene moléculas con
un mayo espec o de acción y mejo es ca ac e ís icas a macociné icas, siendo las más
no ables las adiciones de un á omo de lúo en la posición 6 y de un g upo pipe acínico o
me il-pipe acínico en la posición 7. Los compues os ob enidos se denomina on
luo oquinolonas, en e las que cabe des aca el cip o loxacino.
1.5.1.3. Aminoglicósidos
Es os an imic obianos son agen es bac e icidas cuya es uc u a química cons a de
un anillo aminocicli ol ( a ía según el an imic obiano) con dos o más azúca es. El
mecanismo de acción se basa en la inhibición de la sín esis de p o eínas. Se pueden
clasi ica en na u ales, den o de las cuales se encuen an la ob amicina, es ep omicina y
gen amicina, en e o os; y los semisin é icos, en e los que des aca la amikacina.
1.5.1.4. Co imoxazol
Es e an imic obiano esul a de la asociación de ime op im-sul ame oxazol, lo que
de e mina que se compo e como bac e icida. Ac úa bloqueando la sín esis del ácido ólico
en dos e apas, lo que supone una po enciación de la acción.
1.5.1.5. Fos omicina
Es e an imic obiano se ca ac e iza po la p esencia de un anillo epóxido y un g upo
os ó ico. Se compo a como un análogo del os oenolpi u a o, impidiendo la o mación del
N-ace il-mu ámico y, con ello, la sín esis de la pa ed bac e iana.
24
1.6. Resis encia a an imic obianos en E. coli
En los úl imos 15-20 años, el manejo e apeú ico de las in ecciones po E. coli se ha
is o di icul ado po el aumen o de los mecanismos de esis encia que p esen a el
mic oo ganismo. Conc e amen e, la esis encia a FQ y al ime op im-sul ame oxazol limi a
las opciones e apeú icas en los pacien es comuni a ios, mien as que la esis encia a las
ce alospo inas lo hace en el caso de los pacien es hospi ala ios.
Los aislados de E. coli pueden p esen a esis encia a un an imic obiano o a a ios,
lo cual conlle a ía a un es ado de mul i esis encia. Po o o lado, la esis encia puede se
na u al (in ínseca) o adqui ida. La esis encia na u al es p opia de cada amilia, especie o
g upo bac e iano y es a si uación no es a iable. La esis encia adqui ida sí es a iable y
puede o igina se po la adquisición de de e minan es de esis encia a a és de elemen os
mó iles, o po la apa ición de mu aciones.
A con inuación, se explican los di e en es mecanismos de esis encia de E. coli a los
p incipales g upos de an imic obianos: β-lac ámicos, aminoglucósidos y quinolonas.
1.6.1. Be alac ámicos
Exis en nume osos mecanismos po los que las bac e ias pueden desa olla
esis encia a los β-lac ámicos, en e los que se encuen an:
1. Aquellos que impiden que el β-lac ámico llegue a la diana, ales como
al e aciones en la pe meabilidad de la memb ana ex e na y bombas de
expulsión.
2. Aquellos en los que se modi ican las dianas. Los cambios a ni el de las PBPs
implican que los β-lac ámicos pie dan a inidad po ellas, con la consiguien e
disminución de su ac i idad. Aunque es e mecanismo a ec a undamen almen e
a g amposi i os.
3. Aquellos en los que exis e la inac i ación enzimá ica po p oducción de β-
lac amasas.
De odos es os mecanismos, el más impo an e, po su ecuencia y e icacia en
aislados de E. coli, es la p oducción de β-lac amasas.
In oducción
25
1.6.1.1. β-lac amasas
Las β-lac amasas pueden se c omosómicas o plasmídicas. En el p ime caso
pueden se an o cons i u i as como inducibles; si bien, las enzimas plasmídicas sólo son
cons i u i as, cuyo g ado de p oducción es á en elación con el núme o de copias del
plásmido (57,58). La esis encia que o iginan es in ínseca o adqui ida (mu ación) en el
caso de β-lac amasas c omosómicas, y adqui ida, si la β-lac amasa es plasmídica.
1.6.1.1.1. Mecanismos de acción
Las β-lac amasas son enzimas que hid olizan el anillo β-lac ámico an es de que el
an ibió ico llegue al pun o de unión con las PBP. Se unen a los β-lac ámicos median e un
enlace no co alen e, as lo cual iene luga una ace ilación en e el g upo és e del anillo β-
lac ámico y el g upo hid oxilo lib e del cen o ac i o de la enzima. Finalmen e, la enzima
que se encuen a ac i a es libe ada, y el an ibió ico inac i o (59).
1.6.1.1.2. Clasi icación
Las β-lac amasas se han clasi icado u ilizando di e en es c i e ios, aunque
p incipalmen e se han basado en su es uc u a molecula (clasi icación de Amble ) y en sus
ca ac e ís icas enzimá icas (clasi icación según Bush, Jacoby y Medei os) ( abla 2):
I. La clasi icación molecula de Amble (60) di ide a las β-lac amasas en cua o
clases (A, B, C y D), a endiendo a la es uc u a de la p o eína.
Las enzimas de los g upos A, C y D son se in-β-lac amasas, que con ienen
una se ina en su cen o ac i o. Las del g upo B son me alo-β-lac amasas,
enzimas que equie en pa a su acción la unión del Zn+2 a su cen o ac i o.
II. La clasi icación uncional p opues a po Bush, Jacoby y Medei os en 1995, y
ac ualizada en 2009 (61,62), es ablece di e en es g upos según su sus a o y
el pe il de inhibición po inhibido es de β-lac amasas:
26
El g upo 1 (clase C de Amble o de ipo AmpC) incluye enzimas que pueden
localiza se en el c omosoma o en plásmidos. Las c omosómicas (exp esión inducible)
hid olizan ce alospo inas de 1ª y 2ª gene ación (incluidas las ce amicinas) y no son
inhibidas po el ácido cla ulánico o azobac am, pe o si hay una hipe p oducción de dicha
enzima, el espec o hid olí ico aumen a y llegan a a ec a a las ce alospo inas de 3ª
gene ación; aunque en e a ce epime son mucho menos ac i as y ca ecen de ac i idad
en e a ca bapenemas. Es e pe il de ac i idad las hace indis inguibles de las AmpC
plasmídicas (exp esión cons i u i a), hecho que di icul a su seguimien o epidemiológico.
Se incluyen en es e g upo las β-lac amasas c omosómicas inducibles de E.
ae ogenes, C eundii, Se a ia spp., M. mo ganii, P. ae uginosa, y la c omosómica
cons i u i a de E. coli. También pe enecen a es e g upo AmpC plasmídicas desc i as en
K. pneumoniae, K. oxy oca, S. en e ica, E. coli, P. mi abilis, M. mo ganii y E. ae ogenes.
El g upo 2 (clases A y D de Amble ) se inhibe po el ácido cla ulánico y es á
compues o po 12 subg upos, de los cuales cabe des aca el 2b (incluye β-lac amasas de
amplio espec o) y el 2be (incluye las Be a-Lac amasas de Espec o Ex endido “BLEE”).
Las β-lac amasas de amplio espec o con ie en esis encia a penicilinas y ce alospo inas de
p ime a gene ación, y las BLEE a penicilinas, ce alospo inas de p ime a, segunda
gene ación (excep o ce amicinas), de e ce a y cua a (ce alospo inas de espec o
ex endido) y monobac ámicos. Ambos g upos de enzimas se inhiben po el ácido
cla ulánico/ azobac am.
In oducción
27
Bush-
Jacoby
(2009)
Bush-
Jacoby-
Medei os
(1995)
Clase
Molecula
(subclase)
Cen o
ac i o
Sus a o p e e encial
Inhibida po
Enzimas ep esen a i as
CLA/TAZ
EDTA
1
1
C
Se ina
Ce alospo inas
No
No
E. coli AmpC, P99,
ACT-1, CMY-2, FOX-1,
MIR-1
1e
NI
C
Se ina
Ce alospo inas
No
No
GC1, CMY-37
2a
2ª
A
Penicilinas
Sí
No
PC1
2b
2b
A
Penicilinas,
Ce alospo inas de 1ª
G.
Sí
No
TEM-1, TEM-2, SHV-1
2be
2be
A
Se ina
Ce alospo inas
Espec o Ex endido (3ª
y 4ª gene ación),
monobac ámicos
Sí
No
TEM-3, SHV-2, CTX-
M-15, PER-1, VEB-1
2b
2b
A
Se ina
Penicilinas
No
No
TEM-30, SHV-10
2be
NI
A
Se ina
Ce alospo inas
Espec o Ex endido (3ª
y 4ª gene ación),
monobac ámicos
No
No
TEM-50
2c
2c
A
Se ina
Ca benicilina
Sí
No
PSE-1, CARB-3
2ce
NI
A
Se ina
Ca benicilina,
ce epime
Sí
No
RTG-4
2d
NI
D
Se ina
Ca bapenemas
Va iable
No
OXA-23, OXA-48
2e
2e
A
Se ina
Ce alospo inas
Espec o Ex endido(3ª
y 4ª gene ación)
Sí
No
CepA
2
2
A
Se ina
Ca bapenemas
Va iable
No
KPC-2, IMI-1, SME-1
3a
3
B (B1)
Zinc
Ca bapenemas
No
Sí
IMP-1, VIM-1, Cc A,
IND-1
B (B3)
Zinc
L1, CAU-1, GOB-1,
FEZ-1
3b
3
B (B2)
Zinc
Ca bapenemas
No
Sí
CphA, S h-1
NI
4
Desconoc
ido
Se ina
Enzima c omosómica
de B. cepacia
Tabla 2. Clasi icación de las β-lac amasas según su g upo uncional (Bush, Jacoby y Medei os) y
clase molecula (Amble ). CLA: ácido cla ulánico; TAZ: azobac am. NI: No Incluido.

28
El g upo 3 (clase B de Amble ) incluye me alo-β-lac amasas. Es as enzimas se
inhiben po agen es quelan es como el EDTA, pe o no po el ácido cla ulánico o
azobac am.
El g upo 4, incluido en la clasi icación inicial, no apa ece en la ac ualización del año
2009. La mayo ía de enzimas de es e g upo no es án comple amen e ca ac e izadas y
pod ían se clasi icadas en los g upos an e io es.
Recien emen e, Giske y han p opues o una clasi icación pa a acili a el con ol
epidemiológico de las BLEE (Tabla 3), de modo que se es ablecen es g upos con
di e en es subclases cada uno, de acue do con sus ca ac e ís icas eno ípicas. El g upo
BLEEA ag upa a las β-lac amasas de clase 2be, donde se encuen an las BLEE más
p e alen es (TEM, SHV y CTX-M). El g upo BLEEM engloba a las AmpC plasmídicas y las
BLEE ipo OXA, en e o as. El g upo BLEECARBA es á compues o po ca bapenemasas
(63).
Be alac amasas con ac i idad hid olí ica en e a ce alospo inas de espec o ex endido y
ca bapenemas
BLEEA
BLEEM
BLEECARBA
Tipos de
be alac amasas
BLEEA Al a p e alencia
CTX-M, TEM, SHV,
VEB, PER
BLEEM-C (AmpC
plasmídicas)
CMY, FOX, MIR, MOX,
DHA,
LAT, BIL, ACT, ACC
BLEECARBA-A
KPC, GES-2, -4, -5, -6, -8,
NMC, SME, IMI-1, -2
BLEEA Baja p e alencia
GES-1,-3, -7, -9, SFO-1,
BES-1, BEL-1, TLA,
IBC, CMTa
BLEEM-D (OXA-BLEE)
G upo OXA-10
G upo OXA-13
G upo OXA-2
OXA-18, OXA-45
BLEECARBA-B (MBL)
IMP, VIM, SMP-1, GIM-1, SIM-
1, AIM-1
BLEECARBA-D (OXA-
ca bapenemasas)
G upo OXA-23, g upo OXA-
24, OXA-48b, G upo OXA-58
Ca ac e ís icas
Resis en es
ace alospo inas
de espec o ex endido.
Sine gia con ácido
cla ulánico.
Resis en es a
ce alospo inas de
espec o ex endido.
De ección
eno ípica(BLEEM-C)
y geno ípica (BLEEM-D)
Resis en es a ce alospo inas
de espec o ex endido y al
menos a una ca bapenema.
BLEECARBA de ec adas con
mé odos eno ípicos y/o
geno ípicos.
Tabla 3. Clasi icación de BLEE p opues a po Giske y (Adap ado de Giske y 2009).
a) Resis en e a ácido cla ulánico. b) Los aislados p oduc o es de OXA-48 pueden p esen a
sensibilidad in i o a las ce alospo inas.
In oducción
29
1.6.1.1.2.1. Be alac amasas de Espec o Ex endido (BLEE)
Las BLEE son enzimas que de i an de las β-lac amasas de amplio espec o que,
as su i mu aciones en el cen o ac i o (el cambio de uno o más aminoácidos implica la
ape u a del si io ac i o de la enzima y un mayo acoplamien o de la cadena la e al del β-
lac ámico), inc emen an su ac i idad, llegando a hid oliza no sólo penicilinas y
ce alospo inas de p ime a y segunda gene ación, sino ambién de e ce a y cua a (64).
Es as dos úl imas gene aciones de ce alospo inas se in oduje on en la p ác ica clínica en
los años 80 debido al inc emen o de mic oo ganismos p oduc o es de β-lac amasas, pe o
debido a que p esen aban meno ne o oxicidad que o os an imic obianos
(aminoglucósidos y polimixinas), hubo un uso excesi o y es o, según algunos au o es, hizo
que aumen a a la p e alencia de las BLEE (65). La mayo ía de es as enzimas son
p oducidas po bacilos g amnega i os, p incipalmen e E. coli y K. pneumoniae, aunque
ambién pueden iden i ica se en o as en e obac e ias y bacilos g amnega i os no
e men ado es.
Las BLEE incluyen enzimas de la clase A de Amble (g upo 2be de Bush) y enzimas
de la amilia OXA de la clase D (g upo 2de) (Tabla 2). El o igen de es as enzimas es
gene almen e plasmídico, aunque se han encon ado o mando pa e del c omosoma
bac e iano, como en el caso de CTX-M-9 y CTX-M-15 (66,67).
Desde que se desc ibie a la p ime a BLEE en 1983, el núme o de a ian es ha ido
aumen ando has a alcanza hoy día ap oximadamen e 200, lo cual demues a una ápida
e olución (68).
1.6.1.1.2.1.1. BLEE g upo TEM
Las BLEE del g upo TEM de i an de las β-lac amasas de amplio espec o, TEM-1 y
TEM-2, as modi icaciones en la secuencia de aminoácidos que, como se ha comen ado
an e io men e, conlle a cambios en la es abilidad de la enzima y en el pe il hid olí ico (69).
En 1987 se aisló la p ime a β-lac amasa con pa ón eno ípico de BLEE, TEM-3
(denominada o iginalmen e CTX-1 po su capacidad de hid oliza la ce o axima), la cual se
o iginó a pa i de TEM-2 as dos sus i uciones aminoacídicas (70). Aquellas sus i uciones
más des acables esponsables del eno ipo BLEE, con mayo capacidad de hid ólisis de
30
ce azidima que ce o axima, se p oducen en las posiciones 104 y 240 (glu ama o po lisina),
en la 164 (a ginina po se ina o his idina) y en la 238 (glicina po se ina).
Algunas enzimas como TEM-7 y TEM-12 no cumplen el pe il hid olí ico
igu osamen e, sino que las asas de hid ólisis pa a ce azidima son mucho más ele adas
en compa ación con TEM-1 y TEM-2 y, po an o, su CMI ambién aumen a. De ahí, que se
hayan conside ado BLEE y es én clasi icadas den o del g upo 2be (61).
Se han desc i o más de 180 a ian es de BLEE de la amilia TEM, en e las que se
incluyen las IRT (Inhibi o - Resis an TEM), es deci , enzimas de amplio espec o
esis en es a los inhibido es, pe o sensibles a ce alospo inas de 3ª gene ación, y las CMT
(Complex Mu an TEM), que combinan los pe iles de BLEE y de IRT. La mayo ía de las
enzimas de es e g upo son ce azidimasas y unas pocas son ce o aximasas. Son
p oducidas p incipalmen e po E. coli y K. pneumoniae, aunque ambién po E. ae ogenes,
M. mo ganii, P. mi abilis, e c.
1.6.1.1.2.1.2. BLEE g upo SHV
Las enzimas BLEE del g upo SHV de i an de la β-lac amasa de amplio espec o
SHV-1 (sul híd ico a iable), la cual ue iden i icada po p ime a ez en el c omosoma de K.
pneumoniae (71). También pueden de i a de la a ian e alélica SHV-1-2ª (SHV-11), as
sus i uciones en aminoácidos c í icos del cen o ac i o de la enzima que suponen una
ampliación del espec o.
En 1983 se de ec ó po p ime a ez una BLEE en un aislado de Klebsiella ozaenae
con mayo ac i idad hid olí ica en e a ce o axima que a ce azidima (72); la enzima,
denominada SHV-2, de i aba de SHV-1 as la mu ación Se 238Gly. O a sus i ución
impo an e es la que iene luga en el aminoácido 240, como ocu e con las enzimas SHV-5
y SHV-12, cuyo cambio Glu240Lys inc emen a la ac i idad hid olí ica en e a ce azidima y
az eonam.
Has a la echa exis en más de 130 a ian es de β-lac amasas SHV, la mayo ía de
espec o ex endido (www.lahey.o g/s udies) y con mayo capacidad de hid oliza la
ce azidima que la ce o axima. Aunque se han aislado p incipalmen e en especies de
Klebsiella, ambién se han desc i o en E. coli, C. di e sus y P. ae uginosa (73).
In oducción
31
1.6.1.1.2.1.3. BLEE g upo CTX-M
Todas las enzimas de es e g upo son BLEE y deben su nomb e a la p e e encia que
mues an pa a hid oliza ce o axima y ce iaxona en e a ce azidima.
En 1986 se desc ibió en Japón un aislado de E. coli esis en e a ce o axima en las
heces de un pe o de labo a o io y p oduc o a de β-lac amasa FEC-1 y de codi icación
plasmídica (74). En el año 1989 se aisló po p ime a ez una enzima simila a FEC-1 en un
aislado de E. coli p oceden e de un exudado ó ico de un ecién nacido y que ue
denominada CTX-M-1, po su ele ada ac i idad hid olí ica en e a la ce o axima y po
habe se aislado en Munich (75). Simul áneamen e en A gen ina se desc ibió la enzima
CTX-M-2 en cepas de Salmonella yphymu ium (75). En 1994 se de ec ó el p ime aislado
de E. coli p oduc o de CTX-M-9 en F ancia, en 1996 el p ime aislado p oduc o de CTX-M-
8 en B asil (76) y en 1999 el p ime aislado de CTX-M-15 en la India (77).
Las enzimas de es a amilia se clasi ican en 5 g upos (Tabla 4) en base a sus
iden idades aminoacídicas. Los miemb os de un mismo g upo compa en más del 94% de
dicha iden idad y menos del 90% aquellos que pe enecen a dis in os g upos (78).
Es as enzimas es án es echamen e elacionadas con las β-lac amasas
c omosómicas de dis in as especies del géne o Kluy e a, ya que exis e una al a homología
(>90%) en e los genes c omosómicos de Kluy e a y algunos genes blaCTX-M. De ahí, que
se piense que es os genes hayan sal ado del c omosoma pa a in eg a se en plásmidos y
disemina se y que, po an o, es as a ias especies de es e géne o sean el o igen de las
enzimas (78). El g upo CTX-M-1 de i a de β-lac amasas c omosómicas de K. asco ba a
(79) y el g upo 2 de K. c yocescens, mien as que 8 y 9 lo hacen de β-lac amasas
c omosómicas de Kluy e a geo giana (80). El o igen del g upo CTX-M-25 no se conoce con
p ecisión oda ía, pe o pudie a es a en o os miemb os del géne o Kluy e a (80,81).
38
di e en es á eas del mundo y, cada ez con más ecuencia, en e obac e ias esis en es a
β-lac ámicos y ambién a o os g upos de an ibió icos elacionadas con in ecciones
comuni a ias (125). Vamos a e a con inuación cómo e a la si uación an es del año 2000 y
cómo cambió a pa i de en onces.
1.7.1. Si uación has a el año 2000
Has a inales de los años 90 K. pneumoniae e a la p incipal en e obac e ia implicada
en la p oducción de es as enzimas, p incipalmen e de los g upos TEM y SHV (96). También
e a la más in oluc ada en b o es nosocomiales, sob e odo en unidades de cuidados
in ensi os (UCI) y Pedia ía. Dichos b o es se ca ac e izaban po es a p oducidos po
cepas clonalmen e elacionadas. El p ime b o e documen ado ue desc i o en F ancia en
1986 debido a que a ias cepas disemina on desde las Unidades de Cuidados In ensi os
has a o as salas hospi ala ias, llegando a in ec a al 15,7% de los pacien es (126). En es e
mismo país se p odujo du an e los años 1987-89 la diseminación clonal de K. pneumoniae
p oduc o de SHV-4 en 14 hospi ales anceses (127). O a en e obac e ia in oluc ada en
b o es nosocomiales e a E. ae ogenes, de la cual hay desc i o uno en el año 1993 debido a
una cepa p oduc o a de TEM-24. Llegó a a ec a a UCI, a o a sala del mismo hospi al y a
un ge iá ico localizado den o de la misma ciudad. Pe o ambién se de ec a on o as
en e obac e ias p oduc o as de TEM-24, lo cual pudo se debido a la diseminación
plasmídica de BLEE desde E. ae ogenes (128).
De o ma pa alela a lo que es aba ocu iendo en Eu opa, se desc ibie on a ios
b o es de en e obac e ias p oduc o as de di e en es ipos de BLEE en EEUU. Du an e los
años 1988-90 u o luga un b o e po K. pneumoniae y E. coli p oduc o es de TEM-26 en la
unidad de oncología pediá ica de un Hospi al de Cali o nia (129). También en Chicago se
p odujo un b o e du an e los años 1990-1992 debido a dos cepas p oduc o as de TEM-10;
una cepa de K. pneumoniae, la cual se expandió en el ámbi o hospi ala io, y o a cepa de
E. coli que lo hizo en esidencias (130).
A ni el nacional se desc ibió a inales de los años 80 la p ime a epidemia, la cual
u o luga en un hospi al de Mad id debido a a ias en e obac e ias p oduc o as de SHV-2,
de las cuales la más ecuen e ue K. pneumoniae (131). A pa i de en onces, se han
comunicado di e sos b o es hospi ala ios, de los cuales uno de los más impo an es
desc i o has a el momen o u o luga en e los años 1993-1995 en el Hospi al de Bell i ge.
Es e b o e se debió a la diseminación clonal de una cepa de K. pneumoniae p oduc o a de

In oducción
39
dos BLEE del g upo SHV y llegó a a ec a a 150 pacien es, de los cuales el 70% es aba
ing esado en UCI (132).
1.7.2. Si uación a pa i del año 2000
Pe o a inales de los 90 y p incipios del año 2000 se p odujo un cambio
epidemiológico muy signi ica i o. Eme gió E. coli como p incipal especie p oduc o a de
BLEE, llegando a supe a a K. pneumoniae, lo cual es aba elacionado con el inc emen o
de in ecciones comuni a ias po aislados de E. coli p oduc o es de BLEE del g upo CTX-M
(133). Es a si uación ambién la desc ibie on Pi ou y cols. al es udia de mane a
p ospec i a una se ie de aislados de E. coli p oduc o es de BLEE du an e 3 años y de ec a
que el 70% e an de o igen comuni a io y el 30% nosocomial. De odos los aislados, el 71%
e a p oduc o de CTX-M (134).
En España ambién se de ec ó es e cambio epidemiológico. En el año 2001 se
de ec a on los p ime os casos comuni a ios causados po E. coli p oduc o de CTX-M (135)
pe o después se p odujo una diseminación comuni a ia de cepas p oduc o as de BLEE en
odo el ámbi o nacional. Según los esul ados del p oyec o del GEIH-2000, el 50% de los
aislados de E. coli BLEE ue on comuni a ios y el 66% e an mues as de o igen u ina io. En
un abajo pos e io , se iden i ica on las BLEE del p oyec o an e io y encon a on que las
enzimas más p e alen es ue on CTX-M-9 (27,3%), SHV-12 (23,8%), CTX-M-14 (20,5%) y
TEM (19%), pe o ningún aislado ue p oduc o de CTX-M-15 (136). Seis años más a de, en
el es udio del GEIH-BLEE 2006, el po cen aje de casos comuni a ios aumen ó has a un
67,2% y las BLEE más p e alen es ue on CTX-M (72%), den o del cual CTX-M-14 e a
es eces más ecuen e que CTX-M-15; seguido de SHV (26,8%) con SHV-12 como
enzima p edominan e y, en úl imo luga , el g upo TEM (1,2%) (124).
La si uación en el á ea de Se illa e a simila a la ocu ida an o a ni el mundial como
nacional. En un es udio que se lle ó a cabo en los años 2001-2002 en un hospi al de la
ciudad, se con i mó que la mi ad de los casos de in ección po E. coli p oduc o de BLEE
a ec a a pacien es no hospi alizados (137). En cuan o al cambio epidemiológico de las
BLEE, se de ec ó du an e los años 1995-98 que los aislados de E. coli p oducían
p incipalmen e BLEE del g upo SHV, si bien a pa i de 1999 p oducían cualquie a de los 3
ipos. Con el anscu so de los años des aca el no able aumen o de aislados p oduc o es de
CTX-M (aunque ninguna CTX-M-15) a cos a de un descenso de SHV (108).
40
1.8. Dispe sión de los genes bla. Elemen os mó iles
Desde el pun o de is a molecula , la diseminación de las BLEE se ha p oducido po
un doble mecanismo: a a és de clones epidémicos, como se e á pos e io men e y, po
o o lado, a a és de elemen os gené icos mó iles, los cuales se han diseminado en e
dis in os clones de una especie e incluso en e dis in as especies bac e ianas. Es os
elemen os gené icos mó iles, ales como plásmidos, secuencias de inse ción (IS),
ansposones e in eg ones, pueden lle a además genes de esis encia a o os
an imic obianos como quinolonas, aminoglucósidos y sul amidas. Las es uc u as gené icas
que albe gan los genes bla pueden se muy complejas, con dis in os elemen os mó iles o
pa e de ellos in eg ados en o os (in eg ón den o de ansposón y odo ello den o de un
plásmido) y, además, pueden e oluciona con el iempo a consecuencia de nue os
p ocesos de mo ilización, inse ción, deleción, e c. De odos ellos, cabe des aca a los
plásmidos po su papel en la diseminación no clonal de los genes bla.
1.8.1. Plásmidos
Los plásmidos son moléculas de ADN ex ac omosómico ci cula o lineal y
au o eplicables, cuyo amaño a ía desde una a a ios cien os de kilobases. El núme o de
copias plasmídicas p esen es en una célula ambién es a iable, desde una copia has a
decenas. Con ienen an o genes esenciales pa a el inicio y con ol de la eplicación como
genes de esis encia an imic obiana y i ulencia (138).
La unidad gené ica in oluc ada en la eplicación se denomina eplicón, el cual
albe ga genes que codi ican las p o eínas implicadas en el inicio de eplicación ( ep), así
como o as p o eínas (inc y cop) y elemen os (ARN an isen ido) que lo con olan, y
secuencias especí icas de unión de las p o eínas que colabo an en el inicio de la
eplicación (139). Los plásmidos pueden se no conjuga i os o conjuga i os, den o de los
cuales se incluyen los plásmidos po ado es de los genes bla. Es e ipo de plásmidos
pe mi e la diseminación de es e mecanismo de esis encia no sólo en e dis in as cepas de
la misma especie sino ambién en e dis in as especies bac e ianas (140,141).
In oducción
41
1.8.1.1. Clasi icación de los plásmidos
La clasi icación de los plásmidos comienza a se impo an e a inal de los años 50,
as el descub imien o de los plásmidos R o de esis encia y el econocimien o de su
ex ensión.
Se conocen a ios sis emas de clasi icación, de los cuales el p ime o, desa ollado
en los años 60, a endía a las ca ac e ís icas elacionadas con la capacidad de ans e encia
po conjugación y a la capacidad de inhibi la ans e encia del plásmido F. Pe o la
exis encia de plásmidos inclasi icables según dichos c i e ios, dio luga a sis emas
pos e io es que clasi ican los plásmidos basándose en una p opiedad uni e sal a odos
ellos y de ca ác e es able: “la incompa ibilidad”. Median e es a se de inie on
“incompa ibles” aquellos plásmidos con el mismo con ol de eplicación o eplicones, y
“compa ibles” si e a di e en e.
En 1971, Hedges y Da a p opusie on un sis ema de clasi icación median e la
in oducción de un plásmido en una célula po ado a de o o plásmido cuyo g upo de
incompa ibilidad e a conocido (plásmido esiden e). Si en la célula hija no pe sis ía el
plásmido, ambos e an clasi icados en el mismo g upo de incompa ibilidad. En el caso de
que ambos coexis ie an, e an clasi icados en dis in os g upos de incompa ibilidad (142).
Pe o la incapacidad de cie os plásmidos pa a ans e i se, o el hecho de que alguno no
u ie a ma cado es seleccionables, ue on algunas de las complicaciones de es e sis ema.
Además, la exis encia de plásmidos mul i eplicón dio luga a la apa ición de g upos de
incompa ibilidad que ealmen e no exis ían. Ya que si al in oduci un plásmido con un
eplicón había coincidencia con alguno de los que con enía el mul i eplicón esiden e, no
e a eliminado.
Pa a e i a es os incon enien es, se desa olla on écnicas molecula es que pa ían
del mismo concep o. En 1988 Cou u ie desa olló un esquema de clasi icación basado en
el econocimien o de los di e en es eplicones median e hib idación po Sou he n blo (139).
U ilizó una colección de diecinue e sondas especí icas que con enían al menos uno de los
de e minan es de incompa ibilidad asociados a las unciones de eplicación o pa ición
(man enimien o). Dichas sondas de i aban de diecisie e g upos de incompa ibilidad: es de
ellas ( epFIA, epFIB, epFIC) p ocedían de es eplicones de plásmidos IncFI y las
dieciséis sondas es an es con enían los eplicones FIIA, com9, I1, B/O, k, HI2, L/M, N, P,
42
Q, U, W, X e Y. Debido a la al a de especi icidad po las eacciones c uzadas en e
eplicones al amen e elacionados Ca a oli y desa olla on en 2005 un sis ema, que es el
que se u iliza en la ac ualidad, basado en la ampli icación de los eplicones median e PCR
de los 18 p incipales g upos mayo i a ios de plásmidos en en e obac e ias (HI2, HI1, I1-Iγ,
X, L/M, N, FIA, FIB, FIC, W, Y, P, A/C, T, K, B/O, F y FIIAs (10). Cabe menciona que
ecien emen e se ha sepa ado el g upo de incompa ibilidad L/M, el cual ue e óneamen e
clasi icado según el mé odo an e io men e desc i o (143).
Los plásmidos IncF me ecen una especial mención ya que es án elacionados con
blaCTX-M-15 y E. coli, como e emos más adelan e. Es án asociados a ac o es de i ulencia y
de esis encia en en e obac e ias, lo que con ibuye al i ness de la bac e ia hospedado a
(144). También codi ican sis emas de adicción que con ibuyen a la p omoción del plásmido
y a la adap ación al hospedado (145). Además, es os plásmidos ienen la peculia idad de
posee una es uc u a mosaico y de pode ene más de un eplicón (es ado del
mul i eplicón), po lo que no odos los plásmidos ienen el mismo esquele o; hay pa es del
mismo que se han podido adqui i o pe de como consecuencia de la usión de los
eplicones. De ahí que, en 2010, Villa y cols. elabo a an un esquema pa a sub ipa los
basado en la ampli icación y secuenciación de las egiones implicadas en la egulación de
los eplicones. En el caso del eplicón FII es el gen copA y en el caso de FIA y FIB, epE y
epB, espec i amen e. Exis en di e en es alelos pa a cada una de las egiones: 31 (F1-
F30) pa a FII, 3 (A1-A3) pa a FIA y 20 (B1-B19 y B23) pa a FIB. Según el alelo de cada
eplicón, se puede iden i ica el plásmido siguiendo la ó mula FAB (FII:FIA:FIB) (146).
Respec o a la diseminación de las BLEE es des acable la asociación en e una
BLEE de e minada con plásmidos pe enecien es a un g upo conc e o de incompa ibilidad.
En Mad id se han desc i o aislados p oduc o es de CTX-M-9, cuyos genes bla se han
inculado p incipalmen e con plásmidos de amplio ango, IncHI2, aunque ambién a o os
de es echo ango, como los del g upo IncP1 (147)En el caso de los genes blaCTX-M-15
pa ecen es a ligados a plásmidos IncFII, como se ha desc i o en Canadá, F ancia y No e
de Á ica (148). Aunque ambién se ha elacionado con plásmidos IncFI (149) y con
mul i eplicones FIA-FIB, FIA-FIB-FII y FIB-FII (150). En el caso de SHV-12, se ha
encon ado en el á ea de Se illa que los genes bla es aban mayo i a iamen e ehiculizados
po plásmidos pe enecien es al g upo de incompa ibilidad IncI1 (151).
In oducción
43
1.9. Clon ST131. Descub imien o y ca ac e ís icas
gene ales.
Has a el año 2008 el aumen o en la diseminación de las BLEE había enido luga
po pa e de di e en es aislados de E. coli epidemiológicamen e no elacionados. En es e
con ex o epidemiológico, se desc ibe la eme gencia in e con inen al de un clon p oduc o de
CTX-M-15, denominado O25:H4-ST131. Es e hecho u o luga as comp oba que de 41
aislados p oceden es de ocho países pe enecien es a es con inen es, 36 se aisla on en 7
países de ellos y p esen aban ca ac e ís icas simila es en cuan o a g upo ilogené ico,
pulso ipo, esis encia an imic obiana y i ulencia. Aunque p esen aban pe iles de
es icción simila es, los aislados de es e g upo clonal se ag upa on en a ios clus e s
elacionados (152).
Es a p esencia de aislados clonales a ni el mundial ambién la desc iben en o o
abajo Coque y cols., quienes analiza on 43 aislados p oduc o es de CTX-M-15
p oceden es de 7 países (en e ellos España) y co espondien es al pe íodo 2000-2006.
También se incluye on 6 plásmidos po ado es de blaCTX-M-15 p oceden es de la India. Se
de ec a on cepas del g upo clonal ST131 en odos los países, encon ándose en la mayo ía
de las cepas (37 de 43) el gen blaCTX-M-15 ehiculizado po plásmidos del g upo de
incompa ibilidad IncFII. Además, la mayo ía de es os plásmidos po aban o os
de e minan es de esis encia como blaOXA-1, aac(6´)-Ib-c , y blaTEM-1. Al analiza los pe iles
de es icción plasmídica, se encon a on 3 plásmidos mayo i a ios, de los cuales uno
es aba p esen e únicamen e en los aislados de ST131 expandidos a ni el mundia (67).
1.9.1. Ca ac e ís icas del clon ST131
Como ya se ha comen ado en el abajo de Chanoine, los aislados de E. coli
pe enecien es al clon ST131, inicialmen e de ec ados, p esen aban las mismas
ca ac e ís icas. Todos enían la a ian e b de O25, pe enecían al se o ipo O25b:H4,
ilog upo B2 y secuencio ipo ST131. Además, compa ían la ca ac e ís ica de se
mul i esis en es an o a be alac ámicos po p oducción de BLEE (CTX-M-15), como a o os
an imic obianos; y de posee de e minados genes de i ulencia que los incluía como
ExPEC, en e los que des acan: iha y imH (codi ica ecep o adhesina-side ó o o y imb ia
ipo I, espec i amen e), sa (codi ica oxina), kpsM (codi ica p o eína implicada en sín esis
polisacá ido capsula ), yuA e iu A (codi ica side ó o os), usp (codi ica p o eína especí ica

44
u opa ogénica), aT (codi ica p o eína de esis encia al sue o), ompT (codi ica p o easa de
memb ana ex e na), y malX (codi ica ma cado de isla de pa ogenia) en un ele ado núme o
de cepas. En meno p opo ción se encon aban es genes: hlyF (codi ica hemolisina), iss
(codi ica p o eína pa a sob e i i en sue o) e i oN (codi ica side ó o o) (152,153).
Es de des aca que los genes implicados en la mul i esis encia es án ehiculizados
mayo i a iamen e en plásmidos IncF y que al con a io de lo que sucede con o as cepas
pa ógenas, en las que ya se comen ó an e io men e que había una elación in e sa en e
esis encia y i ulencia, los aislados de E. coli ST131 esis en es a quinolonas y a
ce alospo inas de espec o ex endido p esen an genes de i ulencia con más ecuencia
que la población sensible (152).
1.9.2. Tipado de ST131
A pesa de que es amos hablando de un clon, exis e cie a di e sidad de linajes o
subg upos den o de es e g upo de mic oo ganismos. Respec o al MLST, el ipo de
secuencia ST131 ue o iginalmen e iden i icado usando el esquema de Ach man
(h p://mls .wa wick.ac.uk/mls /dbs/Ecoli), el cual es u ilizado po muchos in es igado es
pa a iden i ica lo de mane a u ina ia. Según es e esquema, los aislados de E. coli ST131
p esen an secuencias uni o mes de los genes conse ados ( abla 5). También se puede
u iliza el esquema de Pas eu
(h p://www.pas eu . / eche che/genopole/PF8/mls /EColi.h ml) (Tabla 6), el cual iden i ica
di e en es ST a las ob enidas median e el esquema de Ach man. Además, se ha
encon ado mayo di e sidad den o del linaje de ST131 siguiendo el esquema ancés que
el de Ach man.
Tabla 5. Combinación alélica de ST131 según el esquema de Ach man
(h p://mls .wa wick.ac.uk/mls /dbs/Ecoli).
Gen
dinB
icdA
pabB
polB
pu B
pA
pB
uidA
Alelo
2
65
3
10
26
7
4
57
Tabla 6. Combinación alélica de ST131 según el esquema de Pas eu
(h p://www.pas eu . / eche che/genopole/PF8/mls /EColi.h ml).
Gen
adk
umC
gy B
icd
mdh
pu A
ecA
Alelo
53
40
47
13
36
28
29
In oducción
45
Respec o al ipado median e PFGE es de des aca que exis en di e en es linajes
den o del clon ST131, lo cual ponen de mani ies o Nicolas-Chanoine y cols. con la p ime a
desc ipción de es e clon, cuando de ec a on aislados con pulso ipos simila es en zonas
muy dis an es y pulso ipos muy di e gen es en á eas geog á icas elacionadas (152). Es a
dis inción ambién la desc iben Johnson y cols. al es udia una colección de aislados de E.
coli ST131 ecogidos du an e el pe íodo 1967-2009 y p oceden es de di e en es países. En
es a as a colección se iden i ica on linajes en odos los países, mien as que o os se
ci cunsc ibían a una de e minada zona (154).
1.9.3. Mé odo de sub ipado. Secuenciación de imH
En el caso de ST131, odos los aislados p esen an el gen imH, el cual codi ica la
imb ia ipo 1 que de e mina la unión de la manosa de la bac e ia con la célula diana (155).
Exis en dos esquemas de ipado: uno basado en el análisis de los 424 pa es de bases (pb)
de la secuencia de im (156) y o o en el de egión de ipado ( im-HTR) de 489 pb (157). En
base a la secuencia del gen imH se di e encian a ios subclones o linajes, 46 en el caso
del p ime esquema y 58 según el segundo. El esquema que ha enido mayo éxi o y al que
hacen e e encia en mul i ud de es udios es el de Weissman. Basándose en es e, Johnson
y analiza on la colección de e e encia de aislados ST131 (1967-2011) y ob u ie on 7
subclones con dis in os pe iles de esis encia a an ibió icos: H15, H22, H27, H30, H35,
H41, H94, siendo los más p e alen es imH30, imH22 y imH41. Du an e el p ime pe íodo
(1967-1999) encon a on aislados sensibles a FQ, en e los que p edominaban los
subclones H22 y H35. Los aislados esis en es a FQ se de ec a on en el pe íodo 2000-2005
y se asocia on casi exclusi amen e con el subclon H30 (70% de los aislados). La mayo ía
de los aislados del subclon H41 ue on sensibles a cip o loxacino y se aisla on en e los
años 2006-2011 (158).
1.9.4. Aislados de E. coli ST131 p oduc o es de CTX-M-15
La eme gencia y la p opagación a ni el mundial de CTX-M-15 ha cambiado la
epidemiología de E. coli p oduc o de BLEE y las enzimas p e alen es. Como hemos is o
an e io men e, la diseminación del clon ST131 p oduc o de CTX-M-15 es uni e sal,
aunque no es homogénea y llegan a obse a se g andes di e encias en e á eas y países.
Una de las egiones mejo es udiadas es No eamé ica, como se pone de mani ies o en los
siguien es es udios. En Canadá, según un es udio de bac e iemias po E. coli, du an e los
46
años 2000-2007, se p odujo un aumen o de los aislados que p oducían BLEE desde un
0,3% en el p ime año has a el 5% al inal del pe íodo. CTX-M-15 se de ec ó po p ime a
ez en el año 2002, pe o su ió un acusado aumen o a pa i del año 2005. Pa alelamen e a
es e inc emen o se p oducía un aumen o de los aislados de E. coli ST131, de modo que el
24% de los aislados que se de ec a on en el año 2005 ascendió has a un 57% en el año
2007 (159). Cuando se desc ibió es e clon en EE.UU., la ecuencia de aislamien o e a muy
baja, pe o ecien emen e se ha obse ado un inc emen o muy impo an e, has a el pun o de
que es e g upo ha sido desc i o como el p edominan e en algunas á eas. En Pensil ania el
81% de los aislados de E. coli p oduc o es de BLEE analizados en e 2007 y 2008 p oducía
BLEE del g upo CTX-M. Den o de es e g upo odos los aislados p oduc o es de CTX-M-15
(80%) pe enecían al clon ST131 (160).
De o ma simila a lo que es aba ocu iendo en los demás países, es e clon se
de ec ó como el esponsable pa cial del aumen o de aislados p oduc o es de CTX-M-15 en
el nues o. En un es udio en el que se de e minó la p e alencia y el ipo de BLEE p oducido
po los aislados de E. coli du an e los años 2006-2008, se ob u o un aumen o en la
p e alencia de E. coli BLEE del 3,8% en el año 2006 a un 7,4% en el 2008. Las enzimas
más ecuen emen e encon adas ue on: CTX-M-14 (57,1%), CTX-M-15 (21,9%), SHV-12
(9,5%) y CTX-M-32 (6,7%). Todos los aislados p oduc o es de CTX-M-15 se englobaban en
el clon ST131 (Blanco e al, 2009). En un es udio mul icén ico nacional ealizado en 2004
las enzimas p e alen es ue on CTX-M-14 (45,7%), CTX-M-9 (20,6%) y SHV-12 (21,7%). Al
igual que en el es udio del GEIH-BLEE-2000 de ca ac e ís icas simila es, no se de ec a on
aislados p oduc o es de CTX-M-15 (107,161).
Como ya comen amos an e io men e, los aislados de es e clon que se desc ibie on
po p ime a ez e an p oduc o es de CTX-M-15, lo cual se desc ibe en mul i ud de es udios.
Uno de ellos es un es udio mul icén ico ealizado en Canadá el cual analiza una se ie de
209 aislados de E. coli p oduc o es de BLEE y de ec a que el 46% ue on miemb os del
clon ST131, de los cuales el 91% e a p oduc o de CTX-M-15 (162). Po o a pa e,
Johnson y cols. encon a on la misma asa de aislados ST131 en e aislados p oduc o es
de BLEE p oceden es de 15 cen os es adounidenses du an e el pe íodo 2000-2009, si bien
la p e alencia de los que p oducían CTX-M-15 e a algo meno (70%) (163).
Según los p ime os es udios que se lle an a cabo en Eu opa, es e clon ambién
esul a se uno de los más p e alen es en la comunidad, aunque no p oducían CTX-M-15
con an a ecuencia como en Amé ica. Cagnacci y cols. con a on con que el 23% de los
In oducción
47
aislados de E. coli analizados du an e el 2003 al 2006, p oceden es de 32 cen os y 8
países, e an ST131. El 8,1% de los aislados de E. coli p oducía BLEE, siendo la más
común CTX-M-15 (164). En F ancia, en un es udio ealizado du an e el 2006, se analiza on
72 aislados p oduc o es de BLEE, muchos de los cuales exp esaban enzimas CTX-M; 40
(55,5%) aislados de E. coli e an p oduc o es de CTX-M-15, de los cuales 10 (25%)
co espondían al clon ST131 (165).
También cabe menciona que exis en zonas donde se han diseminado o as
enzimas del g upo CTX-M con mayo ecuencia que CTX-M-15. En el caso de Reino Unido
CTX-M-15 es la enzima p e alen e, aunque ambién se ha de ec ado CTX-M-3. Du an e los
años 2003-04 se analiza on median e PFGE 291 aislados de E. coli p oduc o es de BLEE
p oceden es de 42 cen os del Reino Unido, dis inguiéndose 5 clus e de inidos como cepas
A, B, C, D, E, los cuales englobaban desde 13 aislados (cepa B) has a 110 aislados (cepa
A) (166). Pos e io men e se es udia on los plásmidos de 3 aislados ep esen a i os de las
cepas A, B y C, encon ándose que los plásmidos de la cepas A y B ehiculizaban blaCTX-M-
15 y el de la cepa C blaCTX-M-3 (145).
Sin emba go, en o as zonas como Japón, es la menos ecuen e o no llega a
de ec a se. En un abajo donde se es udia on 142 aislados de E. coli p oduc o es de BLEE
p oceden es de 200 hospi ales du an e el pe íodo 2002-2003, se halló que el 22% de los
aislados pe enecía al clon ST131, de los cuales ninguno p oducía CTX-M-15. La enzima
más ecuen e ue CTX-M-14 (74%), seguida de CTX-M-35 (15%) y CTX-M-2 (11%) (167).
En o o es udio ealizado du an e el pe íodo 2001-2012 con 1079 aislados de E. coli
p oduc o es de BLEE p oceden es de 10 hospi ales se ob iene que el 43% co espondía a
ST131. De es os, casi la mi ad (49,6%) de los aislados p oducía CTX-M-27, un 33%
p oducía CTX-M-14 y un 17% CTX-M-15 (168).
Po o o lado, ambién hay que menciona que se han de ec ado aislados que no
p oducen BLEE, como queda cons ancia en un abajo canadiense y o o español, en los
que sólo el 6% y 7%, espec i amen e, de los aislados clonales p oducían BLEE (153,169).
Y ambién es de señala que ecien emen e se han desc i o a ios casos de aislados de
es e clon p oduc o es de ca bapenemasas elacionados an o con ing eso hospi ala io
como con la a ención comuni a ia. En EEUU se de ec ó un aislado de ST131 p oduc o de
NDM en una mues a de un pacien e con in ección u ina ia que había es ado ing esado con
an e io idad en un hospi al de la India (170) y en F ancia en una mues a de una pacien e
que había es ado i iendo en la India, pe o que nunca había sido hospi alizada

Hipó esis y obje i os
55
2.1. Jus i icación del es udio e hipó esis de abajo
Los cambios epidemiológicos p oducidos en la úl ima década espec o a E. coli ha
conducido a la apa ición de in ecciones de o igen comuni a io causadas po aislados de
mul i esis en e. Jun o a es os cambios iene luga la eme gencia de un clon de ec ado
simul áneamen e en di e en es zonas geog á icas del mundo, que se ca ac e iza po
pe enece al se og upo O25b, ilog upo B2, secuencio ipo ST131 y se esis en e a
be alac ámicos po p oducción de CTX-M-15 y a o os an imic obianos, en e los que
des aca el cip o loxacino. Es e clon p esen a o as ca ac e ís icas mic obiológicas
di e en es a los clones de E. coli mayo i a ios has a el momen o y un mecanismo de
diseminación que se desconoce.
Pa a pode diseña medidas e icaces de con ol de es a expansión es necesa io
conoce la p e alencia del clon que exis e en nues a á ea, así como pode iden i ica sus
ías de ansmisión.
Las hipó esis de es e es udio son las siguien es:
1. El clon O25b:H4-ST131 de E. coli es p e alen e en nues a á ea.
2. La p e alencia de E. coli ST131 no se debe a la adquisición de BLEE.
3. La adquisición de plásmidos con geens codi ican es de BLEE es especí ica
de un subg upo o linaje del clon.
4. La p e alencia del clon de E. coli ST131 en nues o medio se debe a la
in oducción muy ecien e de linajes de diseminación in e nacional.
5. Las masco as pueden juga un papel en la ansmisión a humanos.
6. El clon ST131 es á elacionado con la años ecien es.
56
2.2. Obje i os de es e es udio
El obje i o gene al de es e es udio se cen a en de e mina la p e alencia del clon
ST131 y es udia los posibles mecanismos implicados en su exi osa expansión. Pa a ello,
se lle a on a cabo las siguien es líneas de abajo:
1. Es udia de o ma p ospec i a la ecuencia de las in ecciones causadas po el
clon de E. coli O25b:H4-ST131 en nues a á ea sani a ia.
2. Compa a la dis ibución de los aislados de E. coli ST131 p oduc o es de BLEE y
no p oduc o es de BLEE en nues a á ea, así como los pe iles de esis encia.
3. Ca ac e iza los plásmidos de aislados de E. coli ST131 an o p oduc o es como
no p oduc o es de BLEE, en cuan o a g upo de incompa ibilidad, sub ipado de
plásmidos IncF, co-de e minan es de esis encia, ac o es de i ulencia y
sis emas de adicción.
4. De e mina la posible elación clonal en e aislados de o igen humano y animal
de compañía p oceden es de dos zonas geo g á icas, Lisboa y Se illa.
5. Conoce cuál e a la p e alencia de ST131 en años an e io es y de e mina cómo
ha e olucionado en nues a á ea sani a ia.
57
3. Ma e ial y mé odos
Ma e ial y mé odos
59
3.1. Ma e ial
3.1.1. Aislados clínicos y cepas bac e ianas
3.1.1.1. Aislados clínicos
3.1.1.1.1. Colección de p e alencia
Se ecogie on odos los aislados consecu i os de E. coli p oceden es de
mues as emi idas a los Hospi ales Uni e si a ios Vi gen del Rocío (HUVR) y Vi gen
Maca ena (HUVM) du an e el año 2010. Las mues as p ocedían de cen os de a ención
p ima ia, consul as de especialidades y de ambos cen os hospi ala ios, lo cual supone
la a ención de ap oximadamen e 1.000.000 de habi an es. Todos los aislados
ecupe ados de las mues as del HUVR se en ia on semanalmen e al HUVM pa a su
pos e io análisis.
Se echaza on aquellos aislados sucesi os p oceden es del mismo pacien e, si
el iempo anscu ido en e ellos e a in e io a dos semanas.
Se ca ego iza on como “comuni a ias” las mues as p oceden es de a ención
p ima ia, consul as de especialidades y las de pacien es con ing eso hospi ala io in e io
a 48h, y como “nosocomiales” las que p ocedían de pacien es ing esados du an e más
de 48h.
3.1.1.1.2. Colección his ó ica
Se incluye on en el es udio los aislados del mes de Ene o que habían sido
p e iamen e analizados du an e los años comp endidos en e 2002 y 2009, ambos

60
incluidos. Dichos aislados co esponden a 3 colecciones independien es pe enecien es
al HUVM:
Colección de Ene o
Los aislados de es a colección p oceden de mues as de cualquie o igen,
excep o hemocul i os. Se han incluido 206 aislados.
Colección Bac e iemias
Se han incluido en el es udio 91 aislados.
Colección BLEE
Los aislados p oduc o es de BLEE p oceden de cualquie ipo de mues a clínica,
sal o hemocul i os. Se han incluido 144 aislados.
3.1.1.1.3. Colección de Lisboa
Fue on obje o de es udio 59 aislados de Lisboa, los cuales ue on cedidos po la
D a. Pomba. Es os aislados p ocedían de dos o ígenes:
• Animal: 31 aislados p ocedían de animales (pe os y ga os) con ITU comuni a ia.
Las mues as se ecogie on en el Hospi al de Ve e ina ia de Lisboa en e los
años 2004 y 2009.
• Humano: 28 aislados p ocedían de mues as clínicas de pe sonas que se
ecibie on en el hospi al o en el labo a o io de diagnós ico comuni a io, los cuales
cub en un á ea de 365.000 habi an es. Las mues as se ecogie on du an e los
años 2005-2006.
3.1.1.2. Colección de e e encia de Johnson
La colección de e e encia cons a de 579 aislados de E. coli ST131 p oceden es
de EEUU (N=446), Canadá (N=53) y o os 11 países in e nacionales (N=80), ecogidos
du an e el pe íodo 1967-2009. Las uen es son de o igen humano, animales de
compañía, animales des inados a comida y agua, en e o as.
Ma e ial y mé odos
61
Los aislados p oceden de colecciones de in es igado es o de cen os de
e e encia seleccionados según eno ipo de esis encia, an ígeno somá ico, o igen
geog á ico y/o sínd ome clínico de in e és.
Los 579 aislados se co esponden con 170 pulso ipos, de los cuales 105 son
únicos y 65 múl iples, es deci , un pulso ipo co esponde a un aislado o a más de uno,
espec i amen e. Los pulso ipos múl iples suponen el 82% de los aislados, siendo la
mi ad de es a población ep esen ada po 12 pulso ipos con 6 o más aislados cada uno.
És os eciben el nomb e de pulso ipos de al a p e alencia, en e los cuales, los que
p esen an mayo núme o de aislados son el 968, con el 24% de la población, el 800 y el
812.
Cabe des aca que exis e una asociación en e los pulso ipos y el pa ón de
sensibilidad, siendo la p oducción de BLEE especí ica de los pulso ipos de al a
p e alencia, excep o el 968. En el caso de la esis encia a quinolonas, hay elación con
odos los pulso ipos múl iples. Respec o al año del aislamien o es impo an e menciona
que hay una dis ibución empo al, asociándose los pulso ipos de al a p e alencia con
aislados de años más ecien es.
El D . Johnson nos cedió 13 aislados de es a colección pa a ealiza el es udio
de la elación gené ica de los aislados.
3.1.1.3. Cepas con ol
Las ca ac e ís icas de las cepas bac e ianas más des acables u ilizadas en es e
abajo se desc iben a con inuación:
Esche ichia coli
• Cepa con ol en la de ección del se og upo O25b, alelo pabB3 y g upo
ilogené ico: E. coli 307. Cedida po la D a. Egea.
• Cepas con ol en la p oducción de BLEE:
E. coli p oduc o de BLEE del g upo CTX-M-1, cedida po la D a. Egea.
E. coli p oduc o de BLEE del g upo CTX-M-9, cedida po el D . He nández.
E. coli p oduc o de BLEE del g upo CTX-M-15, cedida po el D . He nández.
62
Salmonella
• Cepa con ol pa a la no malización de los pulso ipos, cedida po el D . Jo ge
Blanco del LREC (Lugo): S. b aende up H9812.
3.1.1.4. Cepa ecep o a en expe imen os de ans o mación
• E. coli DH10B (F-mc A Δ(m -hsdRMS-mc BC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 ecA1
endA1 a aΔ139(a a, leu)7697 galUgalKλ- psL (S R) nupG)
(G an ,1990.Gene ics).
3.1.2. Medios de cul i o
• Aga McConkey (McC, Oxoid): medio sólido u ilizado pa a selecciona los
aislados de E. coli.
• Aga McConkey con ce o axima (2 mg/l): medio sólido u ilizado pa a
selecciona los aislados de E. coli p oduc o es de BLEE.
• Aga Muelle -Hin on (MHA, Di co): medio sólido pa a el es udio de la
sensibilidad de los aislados de E. coli.
• Aga Muelle -Hin on con ampicilina (100 mg/l).
• Caldo Lu ia Be ani (Caldo LB, Di co): medio ico en nu ien es.
• Caldo de ip ona y soja (TSB, Di co) en iquecido con un 10% de glice ol
(Pan eac): medio líquido pa a la congelación de los mic oo ganismos.
• Medio SOC (Di co): medio sólido u ilizado en el p o ocolo de ans o mación.
Añadi 10ml de KCl 250 mM y en asa has a 1L. T as au ocla a y, una ez ío,
añadi 20 ml de glucosa 1M y 5 ml de MgCl2 2M.
3.1.3. An ibió icos
3.1.3.1. Suplemen os de medios de cul i o
• Ampicilina (AMP, Sigma-Ald ich).
• Ce o axima (CTX, Sigma-Ald ich).
Ma e ial y mé odos
63
• Ce azidima (CAZ, Sigma-Ald ich).
La p epa ación de los an imic obianos se ealizó siguiendo las no mas del CLSI.
Las soluciones se p epa a on a una concen ación de 4096 μg/ml y se conse a on a
-70ºC has a su u ilización. Los sol en es y diluyen es que se usa on en la p epa ación
se mues an en la siguien e abla:
An imic obiano
Sol en e
Diluyen e
Ampicilina
Tampón os a o, pH 8, 0.1M.
Tampón os a o, pH 6, 0.1M
Ce o axima
Agua
Agua
Ce azidima
Ca bona o sódico
Agua
Tabla 7. Sol en es y diluyen es usados pa a la p epa ación de los an imic obianos.
3.1.3.2. Discos pa a es udios de sensibilidad
Be alac ámicos
• Ampicilina (Amp, 25 μg, Oxoid).
• Amoxicilina/cla ulánico (AMC, 30 μg, Oxoid).
• Pipe acilina/ azobac am (PT, 36 μg, Oxoid).
• Ce u oxima (CFX, 30 μg, Oxoid).
• Ce o axima (CTX, 30 μg, Oxoid).
• Ce azidima (CAZ, 30 μg, Oxoid).
• Ce o axima/cla ulánico (CTX/CLA, 30/10 μg, Oxoid).
• Ce azidima/cla ulánico (CAZ/CLA, 30/10 μg, Oxoid).
Aminoglucósidos
• Gen amicina (GN, 10 μg, Oxoid)..
• Tob amicina (TOB, 10μg, Oxoid).
• Amikacina (AK, 30μg, Oxoid).
70
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
chuA-1
ATGATCATCGCGGCGTGCTG
281
(47)
chuA-2
AAACGCGCTCGCGCCTAAT
yjaA-1
TGTTCGCGATCTTGAAAGCAAACGT
216
yjaA-2
ACCTGTGACAAACCGCCCTCA
spE4.C2-1
GCGGGTGAGACAGAAACGCG
152
spE4.C2-2
TTGTCGTGAGTTGCGAACCCG
gadA-1
GATGAAATGGCGTTGGCGCAAG
373
gadA-2
GGCGGAAGTCCCAGACGATATCC
Tabla 11. Segundo se de cebado es u ilizados en el es udio de ilog upos (In i ogen).
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
CTX-M-1-F
ATGGCGACGGCAACCGTCA
875
(205)
CTX-M-1-R
CAAACCGTTGGTGACGATTTTA
CTX-M-9-F
GTGACAAAGAGAGTGCAACGG
856
(205)
CTX-M-9-R
ATGATTCTCGCCGCTGAAGCC
SHV-1-F
GGGTTATTCTTATTTGTC GC
930
(206)
SHV-2-R
TTAGCGTTGCCAGTGCTC
Tabla 12. Cebado es especí icos pa a cada g upo de BLEE (TIB Molbiol).
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
imH-F
CACTCAGGGAACCATTCAGGCA
975
(157)
imH-R
CTTATTGATAAACAAAAGTCAC
Tabla 13. Cebado es u ilizados pa a la ampli icación del gen imH (TIB Molbiol).

Ma e ial y mé odos
71
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
L/M FW
GGATGAAAACTATCAGCATCTGAAG
785
(10)
L/M RV
CTGCAGGGGCGATTCTTTAGG
N FW
GTCTAACGAGCTTACCGAAG
559
N RV
GTTTCAACTCTGCCAAGTTC
X FW
AACCTTAGAGGCTATTTAAGTTGCTGAT
376
X RV
TGAGAGTCAATTTTTTATCTCATGTTTTAGC
I1 FW
CGAAAGCCGGACGGCAGAA
139
I1 RV
TCGTCGTTCCGCCAAGTTCGT
HI1 FW
GGAGCGATGGATTACTTCAGTAC
471
HI1 RV
TGCCGTTTCACCTCGTGAGTA
HI2 FW
TTTCTCCTGAGTCACCTGTTAACAC
644
HI2 RV
GGTCACTACCGTTGTCATCCT
T FW
TTGGCCTGTTTGTGCCTAAACCAT
750
T RV
CGTTGATTACACTTAGCTTTGGAC
A/C FW
GAGAACCAAAGACAAAGACCTGGA
465
A/C RV
ACGACAAACCTGAATTGCCTCCTCCTT
B/O FW
GCGGTCCGGAAAGCCAGAAAAC
159
B/O RV
TCTGCGTTCCGCCAAGTTCGA
P FW
CTATGGCCCTGCAAACGCGCCAGAAA
534
P RV
CACGCGCCAGGGCGCAGCC
Y FW
AATTCAAACAACACTGTGCAGCCTG
765
Y RV
GCGAGAATGGACGATTACAAAACTTT
W FW
CCTAAGAACAACAAAGCCCCCG
242
W RV
GGTGCGCGGCATAGAACCGT
72
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
K FW
GCGGTCCGGAAAGCCAGAAAAC
160
K RV
TCTTTCACGAGCCCGCCAAA
F FW
TGATCGTTTAAGGAATTTTG
270
F RV
GAAGATCAGTCACACCATCC
Tabla 14. Cebado es u ilizados pa a la ca ac e ización del g upo de incompa ibilidad median e PCR-
Based Replicon Typing (PBRT) (TIB Molbiol).
Cebado es
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
FII FW
CTGATCGTTTAAGGAATTTT
258-262
(10)
FII RV
CACACCATCCTGCACTTA
FIA FW
CCATGCTGGTTCTAGAGAAGGTG
462
FIA RV
GTATATCCTTACTGGCTTCCGCAG
FIB FW
TCTGTTTATTCTTTTACTGTCCAC
683
FIB RV
CTCCCGTCGCTTCAGGGCATT
*FIBs FW
TGCTTTTATTCTTAAACTATCCAC
683
FIC FW
GTGAACTGGCAGATGAGGAAGG
262
FIC RV
TTCTCCTCGTCGCCAAACTAGAT
Tabla 15. Cebado es u ilizados pa a el sub ipado de plásmidos pe enecien es al g upo de
incompa ibilidad IncF. *Usado en pa eja con FIB RV (TIB Molbiol).
Ma e ial y mé odos
73
Cebado es
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
epI1 FW
CGAAAGCCGGACGGCAGAA
142
(206)
epI1 RV
TCGTCGTTCCGCCAAGTTCGT
a dA FW
ATGTCTGTTGTTGCACCTGC
501
a dA RV
TCACCGACGGAACACATGACC
bA FW
CGACAAATGCTTCCGGGGT
507
bA RW
TCTTACAATCGACAGCCTGT
sogS FW
TTCCGGGGCGTAGACAATACT
291
sogS RV
AACAGTGATATGCCGTCGC
pilL FW
CCATATGACCATCCAGTGCG
316
pilL RV
AACCACTATCTCGCCAGCAG
Tabla 16. Cebado es u ilizados pa a el sub ipado de plásmidos pe enecien es al g upo de
incompa ibilidad IncI1(TIB Molbiol).
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
Aac6´-Ib-c -F
ATGACTGAGCATGACCTT
528
(207)
Aac6´-Ib-c -R
GAAGGGTTAGGCATCACT
Aac3´-IIa-F
TGCCTCACTTAAAGCGATTG
500
(208)
Aac3´-IIa-R
CAAGCATCGGCATCTCATAC
TEM-F
ATGAGTATTCAACATTTCCG
867
(206)
TEM-R
CTGACAGTTACCAATGCTTA
OXA-F
CAGCAGCGCCAGTGCATC
694
(208)
OXA-R
TCCTGTAAGTGCGGACAC
Tabla 17. Cebado es u ilizados pa a la ampli icación de co-de e minan es de esis encia (TIB
Molbiol).
74
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
Iu A-F
GGCTGGACATCATGGGAACTGG
300
(50)
Iu A-R
CGTCGGGAACGGGTAGAATCG
HlyA-F
AACAAGGATAAGCACTGTTCTGGCT
1177
HlyA-R
ACAATATAAGCGGTCATTCCCGTCA
Iss-F
CAGCAACCCGAACCACTTGATG
323
(209)
Iss-R
TTCTGCCGCTCTGGCAATGCT
I on-F
AAGTCAAAGCAGGGGTTGCCCG
665
(210)
I on-R
GACGCCGACATTAAGACGCAG
Tabla 18. Cebado es u ilizados pa a la ampli icación de genes de i ulencia (TIB Molbiol).
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
PemK-up
AACGAGAATGGCTGGATGC
232
(211)
PemK-low
CCAACGACACCGCAAAGC
CcdA-up
AGGAAGGGATGGCTGAGGT
230
CcdB-low
GGTAAAGTTCACGGGAGAC
Pa D-up
ACGGACCAGCAGCACCAG
534
Pa E-low
AGCCCTTGAGCCTGTCGG
VagC-up
GGGACCTGGATTTTGATGG
210
VagD-low
GAGCAGATGTTGGTGTCG
Hok-up
AGATAGCCCCGTAGTAAGTT
203
Sok-low
GATTTTCGTGTCAGATAAGTG
PndC-up
TCAATCAACCAGGGCTCT
140
PndA-low
CCTCACCATCCAGACAAAA
Ma e ial y mé odos
75
Cebado
Secuencia (5´-3´)
Tm espe ado (pb)
Re e encia
S nB-up
ACTGATTGTAGCCTCTTCTTT
171
S nC-low
CACCACTGTATTTCCCCTGT
(211)
RelE-up
AAAAACCCGATGGCGACAG
370
RelE-low
TGATAGACCAGGCGAAAAC
Tabla 19. Cebado es u ilizados pa a la ampli icación de sis emas de adicción (TIB Molbiol).
3.1.7. Equipos
• Cabina desegu idad BIO-II-A (Tels a ).
• Cáma a de o os digi al Kodak DC290 (Eas man Kodak).
• Cube as de elec o o esis Sub-Cell GT (Bio-Rad).
• Equipo de elec o o esis en campo pulsan e CHEF- Mappe (Con ou -clamped
Homogeneus Elec ic Field) (Bio-Rad).
• Equipo de documen ación de imágenes Gel Doc XR (Bio-Rad).
• Fuen e de alimen ación modelo 1000-500 (Bio-Rad, He cules, Canadá).
• Ki de pu i icación de ADN (Qiagen).
• Mic ocen í uga Bio uge F esco (He aeus).
• Secuenciado ABI PRISM 377 (Applied Biosys ems).
• Te mociclado Gene Cycle (Bio-Rad).
• Sis ema semiau oma izado de iden i icación y an ibiog ama Wide ® (F ancisco So ia
Melguizo) y Mic oscan WalkAway® (Siemens).
• Hyb igene (Techne).
• UVC500 C osslinke (Hoe e Pha maciaBio ech).

76
• Mic o Pulse TM elec opo a o (Bio-Rad).
3.1.8. So wa e
• Bio-Rad Canada Quan i yOne® So wa e.
• Finge p in ing II SW so wa e (Bio ad).
• Sis ema de análisis digi ales Kodak 1D EDAS290 (Eas man Kodak).
• So wa e de análisis de secuencias:
- Ch omas (h p://www. echnelysium.com.au/ch omas.h ml).
- BLAST (h p://blas .ncbi.nlm.nih.go /Blas .cgi).
- T anseq (h p://www.ebi.ac.uk/Tools/emboss/ anseq/index.h ml).
- Clus alW2 (h p://www.ebi.ac.uk/Tools/clus alw2/index.h ml).
• SPSS so wa e ( e sion 17.0).
3.2. MÉTODOS
3.2.1. Aislamien o e iden i icación de aislados
Los aislados se ob u ie on as el p ocesamien o de las mues as según los
p o ocolos es ablecidos.
3.2.1.1. Colección p e alencia
La iden i icación de los aislados se ealizó median e paneles come ciales según las
condiciones del ab ican e. En el HUVM se lle ó a cabo con el sis ema come cial Wide ®
(F ancisco So ia Melguizo) y en el HUVR con el equipo de Mic oScan WalkAway®
(Siemens).
Ma e ial y mé odos
77
3.2.1.2. Colección his ó ica
La iden i icación de los aislados se hizo median e paneles come ciales Vi ek®
(Biomé ieux) en el pe íodo 2001-2004 y Wide ® (Fa ncisco So ia Melguizo) en el pe íodo
2005-2009.
3.2.2. De ección de ma cado es molecula es median e PCR
(Polyme ase Chain Reac ion)
Median e la écnica de la PCR se ob iene la ampli icación (ap oximadamen e 106
copias) de un agmen o de ADN. Pa a su pos e io es udio se isualiza on los p oduc os en
geles de aga osa y se secuencia on, si p ocedía.
En condiciones gene ales, la mezcla de los eac i os se hizo según se indica:
Reac i o
Volumen/ eacción
Cebado es
2,5 µl/cebado
MgCl2
2 µl
dNTPs
4 µl
Tampón Taq10X
5 µl
Taq polime asa (In i ogen®)
0,2 µl
H2O ul apu a g ado MilliQ es é il c.s.p.
48 µl
Tabla 20. Volúmenes y Concen ación inal de cada eac i o.
El olumen inal es de 48 µl, al cual se le adicionan 2 µl de la solución que con iene
el ADN. Es e puede ob ene se a pa i de pu i icaciones o de colonias escas c ecidas en
placa.
Las eacciones de PCR se lle a on a cabo en e mociclado esThe malcycle 2720
(AppliedBiosys ems), siguiendo el p og ama gene al que se mues a a con inuación:
78
Tempe a u a
P oceso
Tiempo
Nº ciclos
94 ºC
Desna u alización
5 min
1
95 ºC
Desna u alización
30 s
30
Según cebado es
Hib idación
30 s
72 ºC
Ex ensión
7 s
7 ºC
Ex ensión inal
5 min
1
Tabla 21. Condiciones gene ales de PCR.
3.2.3. De ección de ST131. Colección de p e alencia e his ó ica
Se han desc i o mé odos ápidos y especí icos pa a la de ección de E. coli ST131,
en e los que se incluyen la ep-PCR (212), el análisis SNP de mdh y gy B jun o con O25b
b (153) y la PCR del alelo 3 del gen pabB (35), siendo es a úl ima la que hemos elegido
en nues o es udio.
Pa a de ec a aislados pe enecien es al secuencio ipo ST131 noso os u ilizamos la
siguien e combinación:
3.2.3.1. De ección del se og upo O25b
Las cepas de E. coli se pueden clasi ica en base a los an ígenos “O” (an ígeno
somá ico), “K” (an ígeno capsula ) y “H” (an ígeno lagela ), lo cual da luga a los dis in os
se og upos y se o ipos.
La sín esis del an ígeno somá ico “O” es á egulada po un g upo de genes
denominado b, siendo la a iabilidad de su ex emo 5´ la que di e encia los dis in os
se og upos.
Tan o los aislados de la colección de p e alencia, los cuales se ecogían
semanalmen e, como los de la colección his ó ica, se some ie on a c ibado median e PCR
de O25b con cebado es especí icos pa a el an ígeno “O” a ian e b ( abla 8), según lo
desc i o po Cle mon (204).
Ma e ial y mé odos
79
3.2.3.2. De ección del alelo 3 del gen pabB
La de ección del alelo 3 del gen pabB, especí ico de los aislados del clon ST131, se
ealizó en odos aquellos aislados en los que de ec amos la a ian e b del se og upo O25.
Se lle ó a cabo median e PCR con los cebado es que se indican en la abla 9.
3.2.3.3. Análisis de ilog upo
El análisis de ilog upo se ealizó median e PCR con cebado es especí icos (Tabla
10) pa a los genes chuA, yjaA y el agmen o de ADN TspE4.C2. La in e p e ación de los
esul ados se lle ó a cabo según lo desc i o po B ange ( abla 22) (213); los aislados del
secuencio ipo ST131 pe enecen al ilog upo B2 subg upo B23, es deci , p esen an los 3
genes ma cado es. Debido a di e encias en e los esul ados del se og upo, ilog upo y
pe il gené ico de algunos aislados, se epi ió la PCR de ilog upo, comen ada
an e io men e en la in oducción, con o o se de cebado es (Tabla 11), en e los que se
incluyen los de un con ol in e no.
chuA
yjaA
TspE4.C2
Filog upo
-
-
-
A0
-
+
-
A1
+
+
-
B22
+
+
+
B23
+
-
-
D1
+
-
+
D2
Tabla 22. In e p e ación del ilog upo según B ange (B ange , EID 2005).
Los aislados con esul ado posi i o en la de ección de O25b, pabB3, chuA, yjaA y
TspE4.C2 se conside a on como pe enecien es al secuencio ipo ST131.
86
secuenciación, que o o ga un ST o secuencio ipo. Los esul ados se analiza on en la
página web: h p://pubmls .o g/plasmid/p ime s/incI1.sh ml.
3.2.9.3. Co-de e minan es de esis encia
Los genes gene almen e asociados a la egión Mul i-D ug-Resis an o MDR, la cual
ehiculiza blaCTX-M-15, son blaOXA-1, blaTEM-1, aac(6´)-Ib-c y aac(3)-II (148). Po lo que se
de e minó median e ampli icación po PCR con cebado es especí icos la p esencia de
es os de e minan es (Tabla 17).
3.2.9.4. Fac o es de i ulencia
La secuenciación comple a de uno de los plásmidos de un aislado de E. coli ST131
e eló la p esencia de los siguien es genes de i ulencia: iu A, hlyA, i on e iss (Zhong,
2012). De ahí que ue an los que quisimos de ec a en nues a selección de aislados. Pa a
ello, se ealizó una ampli icación po PCR con cebado es especí icos (Tabla 18).
3.2.9.5. Sis emas de adicción
Se han desc i o a ios sis emas de adicción en plásmidos que ehiculizan blaCTX-M-15 y
cuyo papel es con ibui a la diseminación del plásmido y a la adap ación al hospedado
(145,148). Se es udió median e PCR con cebado es especí icos ( abla 19) la p esencia de
los genes que codi ican los sis emas oxina/an i oxina: PemK-PemI “plasmid eme gency
main enance”, CcdA–CcdB “coupled cell di ision locus”, RelB–RelE “ elaxed con ol o
s able RNA syn hesis”, Pa D–Pa E “pa i oning sys em”, VagC–VagD “ i ulence-associa ed
p o ein”; y los que es án egulados po ARN an isen ido: Hok–Sok “hos -killing, PndA–PndC
(p omo ion o nucleic acid deg ada ion) y S nB–S nC “s able RNA”.
3.2.9.6. Res icción de ADN plasmídico
• Diges ión de plásmidos con EcoRI.
Se añadió a 10 μg de ADN ob enido median e el mé odo Takahashi 4 μl de EcoRI, 3 μl
de Bu e y 13 μl de agua. Se incubó du an e 1 h en un baño a 37ºC.

Ma e ial y mé odos
87
• Se co ió en un gel al 0,8% y se u ilizó como ma cado de peso molecula E. coli
50192.
3.2.10. Mé odos in o má icos
El análisis de los pulso ipos se lle ó a cabo con el Finge p in ing II SW so wa e
(Bio ad, He cules, CA, USA).
El sis ema de análisis digi ales Kodak 1D EDAS290 (Eas man Kodak) se u ilizó pa a
el es udio de las o og a ías de los geles.
Pa a el análisis compa a i o de secuencias se u iliza on los siguien es so wa es:
1. Ch omas (h p://www. echnelysium.com.au/ch omas.h ml)
2. BLAST (Al schul SF., Gish W. y cols., 1990)
(h p://blas .ncbi.nlm.nih.go /Blas .cgi)
3. T anseq (h p://www.ebi.ac.uk/Tools/emboss/ anseq/index.h ml)
3.2.11. Mé odos es adís icos
Los análisis es adís icos se ealiza on con el SPSS so wa e ( e sion 17.0; SPSS,
Chicago, Illinois, Uni ed S a es). La compa ación de p opo ciones de da os no apa eados
se ealiza on median e el es de la Chi cuad ado (o Fishe si p ocede), y las con inuas
median e el es de la U de Mann-Whi ney, según p ocedió.
88
89
4. Resul ados
Resul ados
91
4.1. Análisis de la p e alencia del clon ST131 en el á ea de
Se illa
Du an e el año 2010 se ecogie on 1.617 (38%) aislados de E. coli en el HUVM y
2.691 (62%) aislados p oceden es del HUVR, lo cual supone un o al de 4.308 aislados de
E. coli. En la igu a se puede obse a que de és os, 3.499 (81%) aislados p ocedían de
mues as de o igen comuni a io, 692 (16%) nosocomial, y de 117 (3%) se desconocía la
p ocedencia (Figu a 3).
Figu a 3. Rep esen ación del nº de aislados según el se icio pe iciona io.
La mayo ía de los aislados p ocedía de u ocul i os (88,9%), seguida de exudados
de he idas y abscesos (6%), hemocul i os (3,9%), mues as de o igen espi a o io (1%) y
de o a p ocedencia (0,2%), como se puede obse a en la siguien e igu a (Figu a 4).

92
Figu a 4. Dis ibución de las mues as.
Se ca ac e iza on 541 (12,5%) aislados como O25b/pabB3/B23, po lo que
podíamos deci que pe enecían al clon ST131. De es os, 38 (7%) e an aislados
p oduc o es de BLEE, mien as que 503 (93%) no lo e an. En la igu a 5 se puede obse a
que 436 (80,6%) aislados ST131 e an de o igen comuni a io, siendo 31 (7,1%) p oduc o es
de BLEE; 93 (17,2%) p ocedían del ambien e hospi ala io, de los cuales 6 (6,4%) p oducían
BLEE, y 12 (2,2%) enían o igen desconocido.
0
100
200
300
400
500
Comuni a io Nosocomial Desconocido
O igen
Nº de aislados
ST131
ST131 BLEE
Figu a 5. Dis ibución de aislados ST131 y ST131 p oduc o es de BLEE en unción del o igen.
Respec o al ipo de mues as, 468 (86,6%) e an de o igen u ina io, 32 (6%) p ocedían
de mues as de exudados de he idas y abscesos, 13 (2,4%) de hemocul i os, 13
(2,4%) de mues as espi a o ias y 14 (2,6%) de di e sas uen es. En la igu a 6
podemos e cómo quedan ep esen ados los aislados ST131 espec o a los no
Resul ados
93
ST131, según cada ipo de mues a. Podemos des aca que 467 (12,3%) u ocul i os
enían un aislamien o de E. coli ST131.
0
1000
2000
3000
4000
5000
Nº de aislados
U oc. EH y A. Hemoc Resp.
Tipo de mues a
ST131
No ST131
Figu a 6. Dis ibución de aislados ST131 y no ST131 según cada ipo de mues a.
U oc: U ocul i os; EH y A; Exudados de he idas y abscesos; Hemos: hemocul i os; Resp:
mues as espi a o ias.
De los 295 aislados de E. coli p oduc o es de BLEE, 38 (13%) e an ST131.
Respec o a la ilogenia de odos los aislados p oduc o es de BLEE, se puede e en
la igu a 7 que pe enecían p incipalmen e a los subg upos B23 (33,5%) y B1 (24,3%),
lo cual co espondía al 57,8% del o al. Los aislados de los ilog upos A1, D1, D2, A0 y
B22 suponían el 18,9%, 8,6%, 7,1%, 6,5% y 0,01%, espec i amen e. El 57,5% de los
aislados de E. coli p oduc o es de BLEE del ilog upo B23 e an ST131. Si se iene en
cuen a el análisis po g upos en luga de subg upos, el más ecuen e ue B2 (33,5%),
seguido de A (25,4%), B1 (24,3%) y D (15,7%).
94
0
5
10
15
20
25
30
35
40
Ao A1 B1 B22 B23 D1 D2
Filog upo
% de aislados
ST131
no ST131
Figu a 7. Dis ibución de ilog upos en aislados de E. coli p oduc o es de BLEE.
Al ealiza la ca ac e ización de 161 enzimas BLEE, se ob u ie on po cen ajes muy
simila es en e los g upo CTX-M-1 (38,5%), CTX-M-9 (31,7%) y SHV (29,8%). En la igu a 8
puede ap ecia se que las enzimas p edominan es ue on CTX-M-15 (31,1%), CTX-M-14
(27,3%) y SHV-12 (28,6%), espec i amen e, lo que suponía el 87%. No obs an e, ambién
se de ec a on en meno cuan ía o as enzimas, como puede obse a se en la abla 24. Un
o al de 35 aislados (92,1%) ST131 e an p oduc o es de CTX-M-15; dos aislados e an
p oduc o es de CTX-M-32 (5,3%) y uno (2,6%) de CTX-M-14.
Figu a 8. Dis ibución de los aislados en unción del ipo de BLEE.
Resul ados
95
Tipo de BLEE
Nº de aislados
%
G upo CTX-M-1
62
38,5
CTX-M-15
50
31,1
CTX-M-1
7
4,3
CTX-M-32
5
3,1
G upo CTX-M-9
51
31,7
CTX-M-14
44
27,3
CTX-M-9
5
3,1
CTX-M-27
2
1,2
G upo SHV
48
29,8
SHV-12
46
28,6
SHV-28
1
0,6
SHV-2
1
0,6
Tabla 24. F ecuencia de las los aislados p oduc o es de
BLEE po g upo.
En la igu a 9 se puede e la dis ibución de los ilog upos según cada g upo de
BLEE. En el caso del g upo CTX-M-1, se obse a que los aislados p oduc o es de CTX-M-
15 (50 aislados) pe enecen de o ma p edominan e al ilog upo B2, de los cuales el 70%
(35 aislados) e a ST131. Tan o en el g upo de CTX-M-9 como de SHV, las enzimas más
ecuen es son CTX-M-14 y SHV-12, espec i amen e. Aunque es as se encuen an en
odos los ilog upos, pe enecen p incipalmen e a los ilog upos A1 y B1. Todas las enzimas
pe enecien es al ilog upo B2, a su ez, es aban clasi icadas en el subg upo B23, excep o
una SHV-2 que pe enecía al subg upo B22.
102
4.1.3. Sub ipado ( imH)
Los aislados ue on seleccionados en e los 23 pulso ipos di e en es, conside ando
que, aquellos aislados con menos de 3 bandas de di e encia, pe enecían al mismo
pulso ipo. De los aislados ST131 se eligie on 8 aislados con pulso ipo único y 15 aislados
con pulso ipo múl iple. En el caso de los aislados ST131 p oduc o es de BLEE, los elegidos
ue on odos con pulso ipo múl iple y p oduc o es en su mayo ía (13/14) de CTX-M-15. El
aislado es an e e a p oduc o de CTX-M-32. En la abla 28 se de alla el núme o de
aislados que se eligie on po cada ipo de pulso ipo.
Pulso ipo
ST131 no BLEE (n=23)
ST131 BLEE (n=14)
Único
8
0
Múl iple 2-5 aislados
11
9
Múl iple >5 aislados
4
5
Tabla 28. Dis ibución de los aislados seleccionados ST131 no p oduc o es y
p oduc o es de BLEE según el pulso ipo.
T as ealiza el análisis de imH a los 37 aislados, ob u imos 7 alelos: imH30,
imH22, imH27, imH38, imH54, imH202 y imH298. En los aislados p oduc o es de BLEE
se iden i ica on 3 de ellos ( imH30, imH22, imH54), mien as que en los aislados ST131 no
p oduc o es de BLEE hubo mayo di e sidad alélica, al y como se puede e en la igu a
11. Los dos linajes más ecuen es an o en los aislados ST131 p oduc o es como no
p oduc o es de BLEE ue on H30 y H22. Se halla on di e encias signi ica i as al compa a
los linajes, de modo que H30 e a signi ica i amen e más ecuen e en e los aislados ST131
p oduc o es de BLEE que los no p oduc o es (85,8% s. 26,1%; p=0,0015); mien as que el
linaje H22 e a más ecuen e en e los aislados ST131 no p oduc o es de BLEE espec o a
los que sí p oducían BLEE, aunque la di e encia no ue signi ica i a (30,4% s. 7,1%;
p=0,20),

Resul ados
103
Figu a 11. Dis ibución de los alelos de imH en aislados ST131
no p oduc o es de BLEE y ST131 p oduc o es de BLEE.
En la abla 29 se puede obse a que odos los aislados de los linajes H38, H202,
H298 y la mayo ía (94,5%) de H30 e an esis en es a FQ. En los linajes H22, H27 y H54 el
50% de los aislados e a sensible y el o o 50% esis en e a FQ.
Alelo de imH
To al de aislados (%)
Resis en es a FQ
Sensibles a FQ
FimH30
17 (94,5)
1 (5,5)
FimH22
4 (50)
4 (50)
FimH27
2 (50)
2 (50)
FimH38
1 (100)
0
FimH54
1 (50)
1 (50)
Fim202
1 (100)
0
Fim298
1 (100)
0
Null
0
2 (100)
Tabla 29. Dis ibución de la esis encia a FQ según el alelo
de imH en odos los aislados de ST131.
104
En las igu as 12 y 13 quedan ep esen adas las dis ibuciones de la sensibilidad a
FQ de los aislados ST131 no p oduc o es de BLEE y de los aislados ST131 p oduc o es de
BLEE, espec i amen e. En el p ime caso, se obse a que odos los aislados de los linajes
H30, H38, H202 y H298 e an esis en es a FQ, si bien el 43%, 50% y 100% de los aislados
pe enecien es a los linajes de H22, H27 y H54, espec i amen e, e an sensibles. En el
caso de los aislados ST131 p oduc o es de BLEE, odos los aislados de los linajes H30 y
H54 e an esis en es a FQ y el único aislado del subclon imH22 e a sensible.
Figu a 12. Dis ibución de la sensibilidad a FQ de los aislados ST131
no p oduc o es de BLEE en unción de los linajes de imH.
Figu a 13. Dis ibución de la sensibilidad a FQ de los aislados
ST131 p oduc o es de BLEE en unción de los linajes de imH.
Resul ados
105
4.2. Animales de compañía
4.2.1. Es udio de la elación clonal de aislados po ugueses y
españoles
En la siguien e abla quedan ecogidos los pulso ipos según el núme o de aislados
po pulso ipo y el núme o de aislados que p esen a cada uno de ellos según su mues a de
o igen. Se pueden con abiliza 72 pulso ipos únicos, de los cuales 46 p ocedían de aislados
de pe sonas y 21 de animales. Po o o lado, hallamos 21 pulso ipos múl iples, de los
cuales 19 enían 2-5 aislados y 2 incluían más de 5. Excep o 5 aislados que e an de
animales, odos p ocedían de pe sonas.
Pulso ipo
Nº de pulso ipos
(N=93)
Nº de aislados
(N=146)
Pe sonas
(N=115)
Animales
(N=31)
Único
72
72
46
26
Múl iple 2-5 aislados
19
54
49
5
Múl iple con >5 aislados
2
20
20
0
Tabla 30. Dis ibución de los aislados según pulso ipo y mues a de o igen.
Como se puede e en la igu a 14, hubo más dispe sión de los pulso ipos de los
aislados p oceden es de masco as (el 84% de los pulso ipos de aislados de o igen animal
e an únicos), si bien en el caso de los pulso ipos de aislados de o igen humano se obse ó
mayo clonalidad (el 60% de los pulso ipos de aislados de o igen humano e an múl iples).
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Pulso ipos múl iples Pulso ipos únicos
% de aislados
Indi iduos
Masco as
Figu a 4. F ecuencia de aislados según el pulso ipo
y o igen de la mues a.
Es udiamos la elación gené ica de los aislados de ambas zonas jun o con 13 de la
colección de e e encia de Johnson. En la igu a 15 pueden dis ingui se 6 clus e s cuyos
106
pulso ipos ienen un índice de simili ud del 94%. Se obse a on las siguien es elaciones
en e los aislados:
• 3 clus e s incluían pulso ipos de aislados (5,5%) p oceden es de ambas zonas
geog á icas, odos de o igen humano, según indican la líneas ojas.
• 2 clus e s englobaban 8 pulso ipos de aislados de indi iduos y de e e encia:
dos aislados de España enían un pulso ipo que coincidía con el in e nacional
800 y o o aislado con el 903 (líneas mo adas); los pulso ipos de 3 aislados de
Po ugal y o o de España lo hacían con el pulso ipo 968 (línea azul).
• Sólo hubo un clus e con un pulso ipo de aislado de o igen humano y o o
animal (1,3%), ambos po ugueses. Es á señalado po la línea e de.
Figu a 15. Dendog ama ob enido median e PFGE con XbaI de aislados ST131 de mues as clínicas
de o igen humano y de masco as, p oceden es de España y Po ugal, y de aislados de la colección
de e e encia de Johnson
1774
1593
5825
1058
192
968
642
978
939
1302
800
2496
853
704
903
858
Nº de aislado
Puls.
e e encia
Po ugal
España
Indi iduo
Masco a
Resul ados
107
4.2.2. Sensibilidad a an imic obianos
4.2.2.1. Compa ación de aislados humanos po ugueses y españoles
con los aislados de animales de compañía.
Cuando se compa a on los pa ones de esis encia a los an imic obianos de los
aislados de indi iduos de ambas egiones con los de masco as ( igu a 16), se obse ó que
los aislados de indi iduos e an más esis en es de o ma muy signi ica i a (p<0,001) a
cip o loxacino, ob amicina y ime op im-sul ame oxazol que los de masco as; mien as que
en el caso del ácido nalidíxico ue on di e encias signi ica i as. También es de des aca que
la ecuencia de aislados ST131 p oduc o es de BLEE ue mayo en e los aislados de
pe sonas (n=57, 49%) que en e los de masco as (n=3, 10%; p <0,001).
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
AMC GEN TOB AMK NAL CPR TMX FOS
An imic obiano
% de aislados esis en es
Indi iduos
Masco as
Figu a 16. Dis ibución de aislados ST131 esis en es a los dis in os
an imic obianos en unción del o igen de la mues a. AMC: amoxicilina-
cla ulánico, PT: pipe acilina- azobac am; GEN: gen amicina; TOB: ob amicina;
AMK: amikacina; NA: ácido nalidíxico CIP: cip o loxacino; TMX: ime op im-
sul ame oxazol; FOS: os omicina. : An imic obianos pa a los que se halla on
di e encias muy signi ica i as. : An imic obianos pa a los que se halla on
di e encias signi ica i as.

108
4.2.2.2. Compa ación de aislados de indi iduos con los aislados de
animales de compañía, ambos po ugueses.
Al compa a los pe iles de esis encia de los aislados de indi iduos con los de
masco as pe enecien es a Lisboa ( igu a 17), se obse ó que los aislados de indi iduos
ue on más esis en es de o ma muy signi ica i a (p<0,001) a cip o loxacino, gen amicina,
ob amicina y ime op im-sul ame oxazol y de mane a signi ica i a a amoxicilina-
cla ulánico (p=0,002), ácido nalidíxico (p=0,009) y os omicina (p=0,006). También es de
des aca que la ecuencia de aislados de es e clon p oduc o es de BLEE e a mayo en
aislados de indi iduos (n=20, 71 %) que de masco as (n=3, 10%; p <0,001).
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
AMC GEN TOB AMK NAL CPR TMX FOS
An imic obiano
% de aislados esis en es
Indi iduos
Masco as
Figu a 17. Dis ibución de aislados ST131 esis en es a los dis in os
an imic obianos en unción del o igen de la mues a pe enecien es a una
misma egión. AMC: amoxicilina-cla ulánico, PT: pipe acilina- azobac am;
GEN: gen amicina; TOB: ob amicina; AMK: amikacina; NA: ácido nalidíxico
CIP: cip o loxacino; TMX: ime op im-sul ame oxazol; FOS: os omicina.
An imic obianos pa a los que se halla on di e encias muy signi ica i as. :
An imic obianos pa a los que se halla on di e encias signi ica i as.
Resul ados
109
4.2.2.3. Compa ación de aislados de indi iduos españoles y
po ugueses
Teniendo en cuen a los aislados de indi iduos an o de Se illa como de Lisboa, se
halla on di e encias muy signi ica i as pa a la gen amicina (p<0,001), ob amicina
(p<0,001), ime op im-sul ame oxazol (p<0,001) y os omicina (p<0,001), y signi ica i as
pa a el amoxicilina-cla ulánico (p=0,004), ob eniéndose mayo po cen aje de esis encia en
el caso de los aislados de pe sonas de Po ugal. También se de ec a on con más
ecuencia aislados p oduc o es de BLEE p oceden es de Lisboa (71%) espec o a los del
á ea de Se illa (42%) (p=0,009) ( igu a 18).
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
AMC GEN TOB AMK NAL CPR TMX FOS
An imic obiano
% de aislados esis en es
España
Po ugal
Figu a 18. Dis ibución de aislados ST131 esis en es de mues as de o igen
humano a los dis in os an imic obianos pe enecien es a dis in as egiones.
AMC: amoxicilina-cla ulánico, PT: pipe acilina- azobac am; GEN: gen amicina;
TOB: ob amicina; AMK: amikacina; NA: ácido nalidíxico CIP: cip o loxacino;
TMX: ime op im-sul ame oxazol; FOS: os omicina. : An imic obianos pa a
los que se halla on di e encias muy signi ica i as. : An imic obianos pa a los
que se halla on di e encias signi ica i as.
4.2.3. Ca ac e ización de plásmidos
En o al se ca ac e iza on los plásmidos de los 37 aislados seleccionados. Pa a la
ca ac e ización del los plásmidos de aislados ST131 p oduc o es de BLEE, se abajó con
110
ans o man es, los cuales se consiguie on en 13 de los 14 aislados. En el caso de los
aislados ST131 no p oduc o es de BLEE no se consiguie on ans o man es, po lo que la
ex acción plasmídica y los es udios consecu i os de ca ac e ización se hicie on
di ec amen e del aislado clínico. Se p ocedió de igual mane a con el aislado BLEE que no
se pudo ans o ma .
Como puede obse a se en la igu a 19, se halla on 23 aislados (62,2%) con un solo
plásmido, de los cuales 13 (56,5%) e an ST131 no p oduc o es de BLEE y 10 (43,5%)
ST131 p oduc o es de BLEE (CTX-M-15). En 13 (35,1%) de los aislados se de ec a on 2
plásmidos, siendo 9 (69,2%) aislados no p oduc o es de BLEE y 4 (30,8%) p oduc o es de
BLEE (3 CTX-M-15, 1 CTX-M-32). Hubo un aislado no p oduc o de BLEE (2,7%) en el que
se de ec a on 3 plásmidos.
0
5
10
15
20
25
1plásmido 2 plásmidos 3 plásmidos
Nº de aislados
ST131 BLEE
ST131no BLEE
Figu a 19. Dis ibución del núme o de plásmidos en cada aislado.
4.2.3.1. Tipado de plásmidos. G upos de incompa ibilidad y eplicones
En la abla 31 se obse a que odos los aislados ST131 p oduc o es de BLEE (14;
100%) y la mayo ía de los aislados no p oduc o es de BLEE (22; 96%) con enían al menos
un plásmido del g upo de incompa ibilidad IncF. El aislado es an e (4%) enía un plásmido
pe enecien e al g upo IncI. En odos los plásmidos se de ec a on más de un eplicón F,
siendo las combinaciones más ecuen es FII+FIA y FII+FIB con un 43,2% (n=16) cada uno.
Al analiza los esul ados en unción de la p oducción de BLEE, se ob u o que en los
aislados p oduc o es de BLEE los plásmidos p esen an con mucha más ecuencia los
eplicones FII+FIA que en los no p oduc o es de BLEE (78,5% s. 17,4%; p= 0,003). En
Resul ados
111
cambio, en los plásmidos de aislados no p oduc o es de BLEE la combinación FII+FIB ue
más ecuen e que en los p oduc o es de BLEE (60,8% s.14,3%; p = 0,01).
Nº de aislados (%)
G upo(s) Inc
ST131 no BLEE (n=23)(%)
ST131 BLEE (n=14) (%)
To al (%)
Replicon(es)
Inc F
FII+FIA
4
(17)
10
(71)
14
(38,8)
Inc F
FII+FIB
11
(48)
1
(7)
12
(33,3)
Inc F
FII+FIA+FIB
3
(13)
1
(7)
3
(8,3)
Inc F, IncY
FII+FIA+Y
0
1
(7)
1
(2,8)
Inc F, IncN
FII+FIB+N
0
1
(7)
1
(2,8)
Inc F, IncI1
FII+FIB+I1
2
(8)
0
2
(5,6)
Inc F, IncI1
FII+I1
1
(4)
0
1
(2,8)
Inc F, IncP, IncK
FII+FIB+P+K
1
(4)
0
1
(2,8)
Inc I1
I1
1
(4)
0
1
(2,8)
To al IncF
22
(96)
14
(100)
35
(97,2)
To al FII+FIA
4
(17,4)
11
(78,5)
16
(43,2)
To al FII+FIB
14
(60,8)
2
(14,3)
16
(43,2)
Tabla 31.Dis ibución de los g upos de incompa ibilidad plasmídica y eplicones de plásmidos de
aislados ST131 no p oduc o es de BLEE y ST131 p oduc o es de BLEE.
4.2.3.1.1. Sub ipado de plásmidos IncF. Esquema FAB.
En la igu a 20 se puede obse a que la ó mula FAB más ecuen e en los
plásmidos IncF de aislados ST131 p oduc o es de BLEE ue F2:A1:B- (57%), seguido de
F4:A1:B- (14,2%). En la misma p opo ción (7,1%) se encon a on F2:A-:B1; F11:A1:B-;
F29:A-:B1 y F31:A-:B1. Sin emba go, en los aislados ST131 no p oduc o es de BLEE se
de ec ó mayo a iabilidad en cuan o al sub ipado plasmídico: 23 aislados p esen a on 12
sub ipos de plásmido di e en es. De és os, los más ecuen es ue on F2:A-:B1 (17,4%) y
118
4.2.3.5. Relación gené ica
T as ealiza la diges ión con EcoRI de los plásmidos de 7 aislados ST131
p oduc o es de BLEE y 3 no p oduc o es, se ob u ie on los pe iles de es icción que
mues a la igu a 24. En el caso A se puede obse a que aquellos plásmidos con la
misma ó mula FAB (F2:A1:B-) y p oduc o es de CTX-M-15 p esen aban pe iles de
es icción muy simila es (80% de simili ud) o iguales (100%). El plásmido con una
a iación alélica del eplicón FII (F4 en ez de F2) mues a un pe il con un 72% de
simili ud espec o a los an e io es. Si además se p oducen cambios en la secuencia del
eplicón FIA, el po cen aje de simili ud disminuye aún más. En el caso B, los plásmidos de
3 aislados (dos no p oduc o es de BLEE y uno p oduc o de CTX-M-32) con la misma
ó mula FAB (F2:A-:B1) p esen an pe iles de es icción con menos del 50% de simili ud.
Figu a 24. Dendog ama ob enido median e PFGE conEcoRI de plásmidos de aislados ST131 no p oduc o es y
p oduc o es de BLEE ST131.

Resul ados
119
4.2.4. Colección his ó ica
4.2.4.1. P e alencia de ST131
4.2.4.1.1. P e alencia o al de ST131
De los 417 aislados co espondien es al pe íodo 2002-2009, 37 (8,8%) se
ca ac e iza on como O25b/pabB3/B23 (ST131).
4.2.4.1.2. P e alencia de ST131 según colección
En la igu a 25 se obse a la dis ibución de los aislados ST131 según la colección
de p ocedencia. Las colecciones de Ene o, Bac e iemia y BLEE con aban con 182, 91 y
144 aislados cada una, de los cuales 18 (9,9%), 7 (7,7%) y 12 (8,3%) pe enecían al clon
ST131, espec i amen e.
050 100 150 200
Ene o
Bac e iemia
BLEE
Colección
Nº de aislados
ST131
No ST131
Figu a 25. Dis ibución de los aislados ST131 según la colección de p ocedencia.
4.2.4.1.3. P e alencia de aislados ST131 según año de aislamien o
T as analiza la dis ibución empo al del o al de aislados (Figu a 26.A), se de ec ó
que los p ime os aislados ST131 da aban del año 2002, as el cual deja on de de ec a se
du an e un año. A pa i de 2004 encon amos aislados ST131 odos los años. En la igu a
29.B podemos obse a que el núme o de aislados ST131 iende a i aumen ando con el
120
anscu so de los años. Al inicio del es udio el núme o de aislados ST131 es de 2 (4%),
mien as que al inal del pe íodo de es udio, año 2009, llega on a con abiliza se 10 (14,5%)
aislados ST131.
Figu a 26.A) Dis ibución empo al del o al de aislados de E. coli. B) Dis ibución empo al de los
aislados ST131.
4.2.4.1.4. P e alencia de aislados ST131 según colección y año de
aislamien o
En la igu a 27 podemos obse a que aquella colección en la que se de ec a on po
p ime a ez aislados ST131 ue en la de Ene o, en el año 2002. En los años sucesi os
hubo aislamien os, excep o en el 2003. En la colección de Bac e iemias el p ime aislado
se iden i icó en 2004 y a pa i del año 2005 se de ec a on en los años al e nos. En la
colección BLEE el p ime año de aislamien o ue en 2006 y, a pa i de en onces, hubo
aislamien os odos los años.
A
B
Resul ados
121
Figu a 27. Dis ibución empo al de los aislados ST131 de las colecciones Ene o, Bac e iemias y
BLEE.
4.2.4.2. Filog upos
4.2.4.2.1. Dis ibución de ilog upos de odos los aislados ST131
Respec o a la dis ibución de los ilog upos de odos los aislados analizados,
obse amos en la igu a 28 que el g upo p edominan e ue B2 (38,8%), seguido de A
(28,6%), D (21,3%) y, en úl imo luga , B1 (10,4%).
4.2.4.2.2. Dis ibución de ilog upos según colección
Al ene en cuen a las colecciones de o ma independien e, se puede dis ingui en la
igu a 28 que el ilog upo p edominan e ue el B2 (53,8% y 42,9%) en el caso de las
colecciones Ene o y Bac e iemias, seguido de A (19,2% y 29,7%), D (17,6% y 20,9%) y B1
122
(8,8% y 3,3%), si bien en el caso de la colección BLEE el más ecuen e ue el A (40,3%),
seguido de D (25,7%), B1 (18,1%) y B2 (16%).
Figu a 28. Dis ibución de ilog upos: dis ibución global, colección Ene o, colección Bac e iemias y
colección BLEE.
4.2.4.2.3. Dis ibución de ilog upos según año de aislamien o
Como podemos e en la igu a 29 el ilog upo más ecuen e en odos los años ue
B2 (Media anual = 20%), excep uando 2002 y 2004, años en los que se de ec an con más
ecuencia aislados del ilog upo A (Media = 20%), seguido de B2 (Media = 13%). En los
años 2005, 2007-2009, el segundo g upo más p e alen e ue A (Media = 16,8%), si bien en
2003 y 2006 ue D (Media = 6,5%).
Resul ados
123
0%
20%
40%
60%
80%
100%
02 03 04 05 06 07 08 09
Año
% de aislados ST131
A
B1
D
B2
Figu a 29. Dis ibución empo al de ilog upos de odos los aislados
de E. coli.
4.2.4.2.4. Dis ibución de ilog upos según colección y año de aislamien o
Según la igu a 30 el ilog upo B2 a aumen ando de o ma g adual su p e alencia a
expensas del A. En la colección de Ene o el ilog upo B2 es el más ecuen e en casi odos
los años, no ándose un inc emen o g adual du an e los años 2004-2007. En las
colecciones de Bac e iemias y BLEE es e aumen o se p oduce desde el año 2004 has a
2008.

124
Figu a 30. Dis ibución empo al de los ilog upos de los aislados de la colección de Ene o (A),
colección Bac e iemias (B) y colección BLEE (C).
4.2.4.3. Sensibilidad a an imic obianos
4.2.4.3.1. Compa ación de odos los aislados ST131 y no ST131
Teniendo en cuen a el o al de aislados analizados du an e los 8 años de es udio,
podemos obse a en la igu a 31 que los aislados que pe enecían al clon ST131 ue on
más esis en es de mane a muy signi ica i a a ob amicina (29% s. 10%; p<0,001) y de
o ma signi ica i a a amikacina (12% s. 4%; p<0,05), ácido nalidíxico (78% s. 25%;
p<0,05) y cip o loxacino (61% s. 25%;p<0,05), que aquellos no ST131.
Resul ados
125
Figu a 31. Dis ibución de la sensibilidad en e a di e sos an ibió icos
de odos los aislados analizados du an e el pe íodo 2002-2009. GEN:
gen amicina; TOB: ob amicina; AMK: amikacina; NAL: ácido
nalidíxico CIP: cip o loxacino. : An imic obianos pa a los que se
halla on di e encias muy signi ica i as. : An imic obianos pa a los
que se halla on di e encias signi ica i as.
4.2.4.3.2. Compa ación de odos los aislados ST131 y no ST131 según año
de aislamien o
Los aislados ST131 de ec ados en los años 2006 ue on signi ica i amen e más
esis en es a ob amicina (60% s. 7%; p<0,05) y en el 2007 a cip o loxacino, (88% s.
42%; p <0,05), que los que no pe enecían al clon. Respec o a los o os años y demás
an ibió icos no hubo di e encias ( igu a 32).
A
B
126
Figu a 32. Dis ibución de odos los aislados ST131 esis en es a Gen amicina (A), Tob amicina (B),
Amikacina (C), Ácido nalidíxico (D) y Cip o loxacino (E) en unción del año de aislamien o.
: An imic obianos pa a los que se halla on di e encias signi ica i as.
4.2.4.3.3. Compa ación de los aislados ST131 y no ST131 según colección
y año de aislamien o
Aquellos aislados que pe enecían al clon ST131 de la colección de Ene o ue on
más esis en es a gen amicina y ob amicina du an e los años 2006 y 2008 que los
aislados no ST131 (50% s. 4%; p<0,05) ( igu a 33). No hubo di e encias en cuan o a la
amikacina. Du an e los años 2006, 2007 y 2008, los aislados ST131 ue on más esis en es
a ácido nalidíxico (75% s. 22%; 100% s. 18%; 67% s.19%; p<0,05) que los no ST131.
En el año 2007 los aislados ST131 ue on ambién más esis en es a cip o loxacino (100%
s. 5%; p<0,05), que los aislados no ST131.
C
D
E
Resul ados
127
En la colección de Bac e iemias ( igu a 34) no se de ec ó ningún aislado esis en e
a gen amicina ni di e encias en los pe iles de sensibilidad en e los aislados ST131 y no
ST131 du an e odo el pe íodo de es udio.
Los aislados de la colección BLEE pe enecien es al clon ST131 ue on más
esis en es a ob amicina (100% s. 13%; p<0,05) y amikacina (100% s. 6%; p<0,05)
du an e el año 2006 y a gen amicina (20% s. 4%; p<0,05) y ob amicina (40% s. 4%;
p<0,05) en el año 2009 ( igu a 35).
A
B
C
D
E

Discusión
135
En el es udio de p e alencia que hemos ealizado, obse amos po p ime a ez
que el clon ST131 e a un clon p e alen e en nues a á ea sani a ia en e odos los
aislados de E. coli, no sólo en e los mul i esis en es o esis en es a FQ. Los aislados de
es e clon ue on mayo i a iamen e de o igen comuni a io y elacionados p incipalmen e
con in ecciones del ac o u ina io. De odos los aislados ST131, sólo una mino ía e a
p oduc o de BLEE, p incipalmen e CTX-M-15, en p opo ción simila al es o de aislados
de E. coli. Respec o a la esis encia a an imic obianos, an o los aislados ST131
p oduc o es como no p oduc o es de BLEE, ue on más esis en es que los aislados que
no pe enecían al clon. En e odas las esis encias an imic obianas de ec adas des acó la
elación en e los aislados ST131 p oduc o es de BLEE y la esis encia a FQ.
Hemos encon ado cie a homogeneidad a ni el de pulso ipo, siendo un pequeño
núme o de pulso ipos múl iples los esponsables de la diseminación del clon. También
obse amos que, a pesa de habe encon ado coincidencia con pulso ipos
in e nacionales, la expansión del clon se debía p incipalmen e a pulso ipos locales.
Todos los aislados del clon p oduc o es de BLEE y la mayo ía de los no
p oduc o es con enían al menos un plásmido IncF. En el caso de aislados ST131
p oduc o es de BLEE la mayo ía de los plásmidos p esen aba los eplicones FII+FIA,
mien as que en los plásmidos de aislados no p oduc o es e a FII+FIB. Sin emba go,
encon amos más homogeneidad en cuan o al sub ipado plasmídico y pe iles de
es icción en e los aislados ST131 p oduc o es de BLEE que en e los no p oduc o es.
Los plásmidos de aislados ST131 p oduc o es de BLEE p esen aban con más
ecuencia o os de e minan es de esis encia, ales como aac(6´)-Ib-c y blaOXA-1, mien as
que en los no p oduc o es de BLEE ue on más p e alen es los ac o es de i ulencia. En
cuan o a los sis emas de adicción, la mayo ía de los plásmidos po ado es de genes bla
con la ó mula F2:A1:B- con enía la misma combinación de 5 sis emas de adicción (pemKI
, ccdAB, pa DE, agCD, hok-sok).
136
En nues a á ea la ansmisión humano-animal de compañía no in e iene en la
diseminación del clon, ya que excep o una pa eja de aislados, no encon amos
coincidencias en e los pulso ipos. Cabe des aca que los aislados de indi iduos ue on
más esis en es y p oducían BLEE con más ecuencia que los p oceden es de animales
de compañía.
La p e alencia del clon ST131 ob enida en el año 2010 ue del 12,5%, ci a simila
a dos es udios ealizados en años an e io es ( abla 36). Uno de ellos ue lle ado a cabo
po Blanco y cols. en el año 2009, quienes as es udia 500 aislados de E. coli
p oceden es de 5 hospi ales de España (en e ellos HUVM) ob u ie on una p e alencia
del clon ST131 del 12% (169). El o o es udio ealizado en Reino Unido analiza on 300
aislados de E. coli de o igen u ina io co espondien es a los años 2007 y 2009, de los
cuales el 12% pe enecían al clon ST131 (216). Sin emba go, en EEUU el clon esul ó se
más ecuen e, al y como desc iben los siguien es abajos. En uno de ellos, Johnson y
cols. analiza on una colección de 127 aislados de E. coli du an e el año 2007, llegando a
pe enece al clon ST131 el 16,6% de los aislados (217). En el segundo es udio
ame icano as analiza 299 mues as en el año 2011, ob u ie on que el clon ST131
con aba con el 27% de los aislados (218). Dicho inc emen o pod ía debe se a la inclusión
de odas las mues as an o de pacien es hospi alizados como comuni a ios o al iempo
anscu ido en e ambos es udios. En el es udio de Johnson se seleccionan los aislados
según sean p oduc o es de BLEE y/o esis en es a quinolonas, lo que pod ía jus i ica que
su p e alencia ue a supe io a la nues a. Sin emba go, no incluye on los aislados de
o igen comuni a io ni los u ocul i os, po lo que puede se que las di e encias geog á icas
sean la azón po la que las asas de aislados de E. coli ST131 de los es udios
ame icanos sean mayo es que la nues a.
Nues o es udio de p e alencia es el más ex enso has a día de hoy y en el que se
han incluido odos los aislados de E. coli p oceden es de cualquie ipo de mues a, sin
lle a a cabo ninguna selección po p oducción de BLEE o esis encia a FQ.
Discusión
137
País
Año de
es udio
C i e io de selección de
aislados
Nº de
aislados
% de E.
coli ST131
Re e encia
EEUU
2011
Ninguno. Se incluye on odos.
299
27
(218)
EEUU
2007
P oducción de BLEE y/o
esis encia a FQ. Pacien es
hospi alizados. Todas las
mues as, excep o u ocul i os.
127
16,6
(217)
España
2010
Ninguno. Se incluye on odos.
4.308
12,5
Es e es udio
Reino
Unido
2007 y
2009
Aislados de E. coli de
pacien es con ITU.
300
12,3
(216)
España
2009
Ninguno. Se incluye on odos.
500
12
(169)
Tabla 36. P e alencia de aislados de E. coli ST131 espec o al o al de aislados.
Respec o al o igen de las mues as, ob u imos que el 80,6% de los aislados de E.
coli ST131 e an de o igen comuni a io y el 17,2% de o igen nosocomial. Es os esul ados
son simila es a los del es udio de Blanco y cols., quienes encon a on que el 73% de los
aislados de E. coli ST131 e an comuni a ios y el 27% nosocomiales (169). Cabe
menciona que ha sido di ícil compa a nues os esul ados con o os es udios po la
di e encia en cuan o a la de inición de comuni a io y nosocomial. Gib eel y cols. de inie on
como aislados nosocomiales los que p ocedían de pacien es hospi ala ios, y los de o igen
comuni a io los de a ención p ima ia y medicina gene al, hallando un 48% y 52%,
espec i amen e (216). En el abajo de Bane jee y cols. los pacien es elacionados con
cuidados sani a ios se incluye on den o de los nosocomiales, de modo que ob u ie on
que el 34% de los aislados ST131 ue on comuni a ios y el 66% nosocomiales (218).
En cuan o al ipo de mues a, la mayo ía de los aislados de E. coli (86,6%) e a de
o igen u ina io. De és os, el 12,3% enía un aislamien o de E. coli ST131. Nues o
esul ado es in e io al ob enido a ni el eu opeo po Cagnacci, en el que el 23% de los
aislados de E. coli causan es de in ección del ac o u ina io e an ST131 (164). Es a
di e encia puede debe se a que en el es udio de Cagnacci se selecciona on aquellos
aislados de E. coli de o igen comuni a io y esis en es a cip o loxacino. De hecho, si
hubié amos seleccionado nues os aislados según los mismos c i e ios que en el es udio
mencionado, hab íamos ob enido un po cen aje simila al eu opeo (24% s. 23%).
Nues os da os e elan que la mayo ía de los aislados del clon ST131 no e an
p oduc o es de BLEE. Encon amos que la asa de los aislados ST131 p oduc o es de
138
BLEE (7%) ue in e io a la de o os es udios y simila a la de los aislados p oduc o es de
BLEE no pe enecien es al clon. Johnson y cols., as analiza una colección de 579
aislados de E. coli ST131, encon a on que el 47% e an p oduc o es de BLEE (154). En
o o es udio español halla on una asa de aislados ST131 p oduc o es de BLEE del 10%
(169). Po o a pa e, nues a asa de aislados de E. coli ST131 p oduc o es de BLEE ue
igual a la de los aislados p oduc o es de BLEE no pe enecien es al clon (7%), po lo que
el clon ST131 p oduc o de BLEE es el p e alen e en nues a á ea.
La p e alencia de ST131 en e odos los aislados de BLEE es a iable según la
zona geog á ica. En nues o es udio el clon ST131 suponía el 12,5% de los aislados
p oduc o es de BLEE, ci a muy in e io a la mayo ía ob enida en es udios a ni el mundial,
en los que el clon ST131 llega a supone desde el 20% has a el 81% de los aislados de E.
coli p oduc o es de BLEE, al y como se puede obse a en la abla 37. En España en un
es udio mul icén ico del GEIH-BLEE-2006 el clon ST131 ep esen aba el 19% de los
aislados de E. coli BLEE (219). Respec o al No e de Amé ica, en a ios es udios
canadienses ST131 supone desde un 31% has a un 46% (35,194,195), mien as que en
EEUU (Chicago) asciende has a un 53% (222). En la India, República de Á ica Cen al y
Reino Unido el clon ST131 albe ga desde la mi ad has a un 81% de los aislados de E. coli
BLEE (35,159,166,212). En Eu opa y Asia, según a ios es udios ealizados en Lugo,
F ancia, No uega, Taiwan, Camboya y Japón las asas se encuen an en o no al 20-30%
(35,165,167,194,223,192). Po o a pa e, cabe señala que ambién se han egis ado
asas in e io es a la nues a e incluso aislados ST31 no p oduc o es de BLEE en Filipinas,
Tailandia, F ancia y Mad id (35,193,224,225).
En odos los es udios, sal o en los de Blanco y el nues o, se seleccionan los
aislados en unción de la p oducción de BLEE. Es o pod ía se una de las azones po las
que la p e alencia en la mayo ía de los países la p e alencia es mayo que en el nues o.
O as explicaciones de es as di e encias pueden se la selección de aislados no solo
p oduc o es de BLEE, sino además de CTX-M, como en el caso de Reino Unido; el habe
isi ado una zona de al o iesgo de adquisición de una in ección po aislado p oduc o de
BLEE, como la India; selecciona las mues as solo de u ocul i os de la comunidad, como
Camboya y F ancia o bac e iemias, como en Canadá, Países Bajos y Taiwan. Y en lo que
espec a a las p e alencias de nues o país, puede se que la hallada en Lugo sea
supe io a la nues a po que g an pa e de los aislados p ocedían de esidencias, el cual
Discusión
139
puede se un ese o io del clon (194); la de Mad id puede que ue a in e io po habe se
ealizado el es udio 6 años an es que el nues o.
Zona
geog á ica
Año
O igen
Nº de E. coli
BLEE
% de
ST131
Re e encia
UK
04-07
Colección
labo a o io
103
81
(35)
UK
03-04
Mues a clínicas
287
65
(166,212)
India
In ecciones
asociadas a iajes
31
61
(221)
Chicago
08
Mues as clínicas
comuni a ias
30
53
(222)
Rep. Á ica
Cen al
04-06
Colección
labo a o io
10
50
(35)
Canadá
07
Mues a clínicas
209
46
(162)
Canadá
04-06
Colección
labo a o io
41
41
(35)
Países bajos
08-09
Bac e iemias
41
34
(194)
Calga y
00-07
Bac e iemias
67
31
(221)
Pi sbu gh
07-08
Mues a clínicas
70
30
(160)
Taiwan
05-10
Bac e iemias
122
29
(223)
Camboya
04-05
ITUs comuni a ias
30
27
(35)
Lugo
06-07
Mayo ía ITU
105
22
(194)
Lugo
07-08
Mayo ía ITU
249
22
(194)
F ancia
06
ITU comuni a ia
48
21
(194)
Mul inacional
04-06
Viaje os de e o no
84
19
(159)
Japón
02-03
Colección
labo a o io
142
19
(167)
Se illa
2010
Mues a clínicas
292
12,5
P esen e
es udio
Mad id
04
ITU
91
9
(224)
B asil
08-09
Mues a clínicas
25
8
(226)
Filipinas
07
Mues a clínicas
15
7
(225)
Tailandia
1999
Colección
labo a o io
5
0
(35)
F ancia
06
Volun a ios sanos
100
0
(193)
Tabla 37. Dis ibución geog á ica de aislados de E. coli ST131 p oduc o es de BLEE.
O igina iamen e, como ya hemos comen ado p e iamen e en o as secciones, los
aislados de ST131 se desc ibie on en e aislados de E. coli p oduc o es de CTX-M-15. De
odos los aislados de E. coli p oduc o es de CTX-M-15 p oceden es de 8 países y 3

140
con inen es, el 88% e an aislados del clon ST131 (152). En la abla 38 podemos obse a
los di e en es es udios en los que se de alla la dis ibución de los aislados ST131
p oduc o es de CTX-M-15. En nues o es udio, ob u imos una asa del 70%, simila a la
de un es udio belga e in e io a la de un es udio nacional mul icén ico, ambos del año
2006, en los que el 72% y el 86% de los aislados p oduc o es de CTX-M-15 e an ST131
(177,227). Po o a pa e, en o o es udio mul inacional el clon ST131 con aba con menos
de la mi ad de los aislados p oduc o es de CTX-M-15 (67), lo cual puede debe se a que
los aislados p ocedían sólo de mues as de pacien es hospi alizados, mien as que en los
o os es udios se incluye on an o los comuni a ios como los nosocomiales.
Zona geog á ica
Año
O igen
Nº E. coli
CTX-M-15
% ST131
Re e encia
Eu opa, Asia y
Canadá
NE
Mues as clínicas y
de labo a o io
41
88
(152)
España
06
Mues as clínicas
37
86
(227)
Se illa
10
Mues as clínicas
50
70
P esen e
es udio
Bélgica
06-07
Mues as clínicas
43
72
(177)
Eu opa, Canadá y
O ien e Medio
00-06
Colección labo a o io
43
42
(67)
Tabla 38. Dis ibución geog á ica de aislados de E. coli ST131 p oduc o es de CTX-M-
15. NE: no especi icado.
Del o al de nues os aislados ST131 p oduc o es de BLEE, la enzima más
ecuen e ue CTX-M-15 (92,1%). Únicamen e dos aislados (5,3%) p oducían CTX-M-32 y
uno (2,7%) CTX-M-14. Johnson encon ó con más ecuencia aislados de ST131
p oduc o es de BLEE (47%) en e los aislados de la colección de e e encia. Sin emba go,
e an menos los aislados que p oducían CTX-M-15 (69%) (154). Nues os esul ados son
simila es a los de Blanco y col, quienes halla on que el 96% de los aislados ST131
p oducía CTX-M-15 y el 4% CTX-M-14 (194), y a los de o os es udios de di e en es
o ígenes. Así, en Canadá du an e los años 2000-2010 el 80% de los aislados ST131
p oducía CTX-M-15 y el 17% CTX-M-14 (228). En F ancia y Po ugal la p e alencia de
CTX-M-15 en aislados ST131 se si uaba po encima del 90% (229–231). Mien as que en
el caso de Rumanía, la India y la República Cen al A icana e a del 100% (232–234).
Discusión
141
Una si uación di e en e ocu e en o as zonas donde CTX-M-14 se desc ibe con
más ecuencia e incluso llega a se la p edominan e en e aislados de ST131. De modo
que, en Aus alia y Nue a Zelanda, donde p edominan los aislados ST131 p oduc o es de
CTX-M-15 (60%), ambién son muy ecuen es los que p oducen CTX-M-14 (38%) y
algunas cop oducen ambas enzimas (235). En Japón, Camboya, Hong-Kong y en 11
p o incias de 7 egiones de China la enzima más p e alen e en e los aislados ST131 es
CTX-M-14, con ando con 47%, 61%, 73% y 67%, espec i amen e (168,236–238).
Si compa amos los esul ados de los es udios comen ados con an e io idad,
podemos dis ingui que en países de Occiden e (EE.UU., Canadá y Eu opa) se ha
expandido el clon ST131 p oduc o de CTX-M-15, mien as que en países de O ien e lo ha
hecho el clon p oduc o de o a BLEE di e en e a CTX-M-15. Es o puede suge i que el
clon se ha expandido y pos e io men e ha adqui ido los genes bla median e ans e encia
ho izon al (167) o bien que se ha p oducido la adquisición de los genes bla según la zona,
lo cual ha con ibuido a su diseminación.
En nues o es udio des aca la asociación, an o en p oduc o es como no
p oduc o es de BLEE, en e ST131 y la esis encia a amoxicilina-cla ulánico,
aminoglucósidos y cip o loxacino. Hay una di e encia en cuan o a la esis encia a
aminoglucósidos, según si p oducían o no de BLEE. En el caso de los aislados
p oduc o es de BLEE, los ST131 son más esis en es a amikacina y ob amicina que los
no ST131, mien as que en e los aislados no p oduc o es de BLEE hay mayo esis encia
a los es aminoglucósidos es ados. Nues os esul ados coinciden con los de un es udio
ancés (239) y o o canadiense (221) en cuan o a la esis encia de odos los aislados
ST131 a cip o loxacino ( abla 39). Sin emba go, al y como se puede obse a en la abla
40, hay di e encias con los aislados p oduc o es de BLEE, ya que en el caso de los
aislados ST131 anceses e an más esis en es a ime op im-sul ame oxazol y
pipe acilina- azobac am y los canadienses a gen amicina y pipe acilina- azobac am que
los no ST131.
La esis encia a AMC puede debe se a la adquisición de OXA-1 o IRT, al y como
desc iben O eo y cols. en un es udio mul icén ico en el que analizan una se ie de aislados
de E.coli esis en es a amoxicilina-cla ulánico, esul ando el clon ST131 el segundo clon
más ecuen e en e los aislados p oduc o es de OXA-1 y el más ecuen e en e los
p oduc o es de IRT (240). En nues a á ea se ha de ec ado du an e los años 2011 y 2012
un aumen o de aislados p oduc o es de OXA-1 ecogidos con sensibilidad disminuida a
142
amoxicilina-cla ulánico debido a la diseminación de los clones ST88 y ST131,
incluyéndose en es e úl imo an o aislados p oduc o es como no p oduc o es de BLEE
(241). Aunque ambién la esis encia a AMC ambién puede debe se a la adquisición de
TEM-1 o a la hipe p oducción de AmpC.
En lo que espec a a la esis encia de los aislados de Lisboa en compa ación con
los nues os, cabe menciona que los po ugueses e an más p oduc o es de BLEE y más
esis en es a amoxicilina-cla ulánico, gen amicina, ob amicina, ime op im-
sul ame oxazol y os omicina que los nues os.
Tabla 39. Sensibilidad de los aislados ST131 y no ST131 p oduc o es de BLEE.
Aislados p oduc o es de BLEE
Re e encia
P esen e es udio
B isse, JCM 2012
Pi ou , AAC 2009
% de esis encia
% de esis encia
% de esis encia
An imic obiano
No
ST131
ST131
p
No
ST131
ST131
p
No
ST131
ST131
p
Amoxicilina-
cla ulánico
28,6
82,4
<0,001
89
93
Pipe acilina-
azobac am
6,2
16,7
0,055
44
67
0,015
30
81
0,0002
Gen amicina
21,5
3,3
0,014
38
31
48
86
0,004
Tob amicina
19,9
80
<0,001
63
86
0,09
Amikacina
1,3
28
<0,001
15
34
0,01
A. nalidíxico
94,4
100
0,377
68
96
<0,001
Cip o loxacino
81,5
97,1
0,024
57
94
<0,001
85
100
0,004
T ime op im-
sul ame oxazol
49,4
64,7
0,094
77
43
<0,001
65
67
1
Fos omicina
3,3
3,3
1
0
0
Discusión
143
Aislados NO p oduc o es de BLEE
P esen e es udio
B isse, JCM 2012
% de esis encia
% de esis encia
An imic obiano
No ST131
ST131
p
No ST131
ST131
p
Amoxicilina-cla ulánico
18
27,6
<0,001
22
33
Pipe acilina- azobac am
4,9
5,5
0,643
10
10
Gen amicina
7,7
17
<0,001
4
20
0,03
Tob amicina
7,9
20,2
<0,001
Amikacina
0,1
1,2
<0,001
1
0
A. nalidíxico
40,9
76,1
<0,001
24
73
<0,001
Cip o loxacino
32,6
72,8
<0,001
13
67
<0,001
T ime op im-
sul ame oxazol
30,3
33,1
0,165
34
29
Fos omicina
1,1
1,1
0,996
1
14
Tabla 40. Sensibilidad de los aislados ST131 y no ST131 no p oduc o es de BLEE.
Además de la esis encia a las ce alospo inas de espec o ex endido po la
p oducción de BLEE, la esis encia a FQ es o o asgo común de los p ime os aislados
desc i os del clon ST131 (67,152). En nues o es udio encon amos una asociación en e
los aislados ST131 an o p oduc o es como no p oduc o es de BLEE con la esis encia a
FQ, ob eniendo que el 97,1% y 72,8% de los aislados, espec i amen e, ue on esis en es
a FQ.
Respec o al o al de aislados de E. coli p oduc o es de BLEE y esis en es a FQ,
noso os ob u imos que el 13,4% co espondía al clon ST131, lo cual es simila a lo que
sucede en China, según un abajo co espondien e a los años 1998-2000 (179). Sin
emba go, es muy in e io a lo hallado en o os es udios, en los que desde un 30% has a
un 60% de los aislados de E. coli BLEE y esis en es a FQ pe enecían al clon ST131.
Como podemos obse a en la abla 41, Ce que i encon ó en Roma en el año 2006 que
el 61% de los aislados de bac e iemias e in ecciones del ac o u ina io con E. coli
esis en es a FQ y BLEE e an ST131 (178). En o as zonas de Asia, Canadá y Aus alia,
la p e alencia de ST131 en e aislados BLEE y esis en es a FQ es aba en o no al 25%-
35% (179,221,242,243). Puede se que la asa an ele ada de Ce que i se deba a que la