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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
ESPAÑA
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Núme o de publicación: 2 324 137
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Núme o de solici ud: 200703049
51
In . Cl.:
C07H 15/26 (2006.01)
C07H 5/10 (2006.01)
A61K 31/7056 (2006.01)
12
PATENTE DE INVENCIÓN CON EXAMEN PREVIO B2
22
Fecha de p esen ación: 14.11.2007
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Fecha de publicación de la solici ud: 30.07.2009
Fecha de la concesión: 25.01.2010
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Fecha de anuncio de la concesión: 12.02.2010
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Fecha de publicación del olle o de la pa en e:
12.02.2010
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Ti ula /es: Uni e sidad de Se illa
OTRI-Pabellón de B asil
Paseo de las Delicias, s/n
41013 Se illa, ES
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In en o /es: Mo eno Va gas, An onio José;
Molina Sanz, Lidia;
Ca mona Asenjo, Ana Te esa;
Lambele , Ma ine;
Spe ini, Oli e y
Robina Ramí ez, Inmaculada
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Agen e: No cons a
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Tí ulo: Tio ucósidos con eniendo p olinas hid oxiladas, sín esis y usos de los mismos.
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Resumen:
Tio ucósidos con eniendo p olinas hid oxiladas, sín esis y
usos de los mismos.
Compues o que comp ende un io ucósido con eniendo
p olinas hid oxiladas. La in ención ambién se e ie e al
mé odo de ob ención de dicho compues o y a su aplica-
ción en el a amien o de al e aciones o desó denes en los
que in e ienen selec inas, como, po ejemplo, p ocesos
in lama o ios, cánce , a i is, ombosis, de ma i is, in la-
maciones pulmona es o a ecciones ca díacas.
A iso: Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 40.2.8 LP.
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Ven a de ascículos: O icina Española de Pa en es y Ma cas. Pº de la Cas ellana, 75 – 28071 Mad id
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DESCRIPCIÓN
Tio ucósidos con eniendo p olinas hid oxiladas, sín esis y usos de los mismos.
La p esen e in ención se e ie e a un compues o de ó mula gene al (I), además de su p ocedimien o de ob ención
y su aplicación en el a amien o de al e aciones o desó denes en los que in e ienen selec inas, como, po ejemplo,
p ocesos in lama o ios, cánce , a i is, ombosis, de ma i is, in lamaciones pulmona es o a ecciones ca díacas.
Es ado de la écnica an e io
Las selec inas son glicop o eínas dependien es del ión Ca2+que se encuen an en las memb anas de las supe icies
celula es. Cons i uyen una amilia de es lec inas que inician la adhesión de los leucoci os a las plaque as o a las
células endo eliales. Una de sus ca ac e ís icas es que p esen an un dominio de lec ina-NH2 e minal, el cual in e iene
en el J econocimien o de ca bohid a os. Las es selec inas se denominan de acue do con el ipo de célula en la que
se iden i icó cada una o iginalmen e. Selec inas E iden i icada en células endo eliales; selec ina P, descubie a en
plaque as ac i adas; y selec ina L, econocida como ma cado de la supe icie celula en leucoci os. Cada una de las
selec inas in e iene como un ac o cla e en e apas elacionadas con la adhesión y el econocimien o celula .
En pa icula , se ha es udiado ampliamen e el papel de las selec inas como moléculas de adhesión celula en
p ocesos in lama o ios (Spe andio, M. FEBS J. 2006, ol. 273, pp. 4377-4389). Cuando ha habido una in asión po un
pa ógeno bac e iano o cuando se ha p oducido un daño isula , iene luga el eclu amien o de leucoci os y mig ación
hacia el si io dañado pe mi iéndoles e ec ua su acción inmunológica (Sp inge , T. A. Annu. Re . Physiol. 1995, ol.
57, pp. 827-872). Es e eclu amien o comienza con la cap u a y aslado de los leucoci os ci culan es hacia el endo elio
dañado y con inúa con el odamien o de los mismos sob e la supe icie endo elial de las plaque as lo que p ecede a la
adhesión. Es os p ocesos es án mediados po las selec inas exp esadas en las énulas del endo elio ac i ado, las cuales
se unen a de e minados ca bohid a os p esen es en la supe icie de los leucoci os, que ac úan como ligandos de las
selec inas. Si bien es a unión es ela i amen e baja, es su icien e pa a unciona como un eno biológico que desacele a
y acili a el odamien o de los leucoci os sob e la célula endo elial. La in e acción de selec inas con los ligandos
de ca bohid a os si uados en los leucoci os iene como misión p incipal acili a la unión enue de los leucoci os al
endo elio du an e los p ime os es adios de la in lamación u o os p ocesos elacionados. Es a in e acción adhe en e,
le e y ansi o ia pe mi e que las células ueden a lo la go de la pa ed ascula endo elial. Después de es a in e acción,
los leucoci os pueden sepa a se o almen e de las células endo eliales o uni se comple amen e median e la acción de
las in eg inas, aden ándose en el ejido (Khan, A. e al., I. Mic oci cula ion 2003, ol. 10, pp. 351-358). El odamien o
de los leucoci os es una e apa impo an e en el eclu amien o de los mismos ya que pe mi e ob ene un con ac o ín imo
en e los leucoci os y la supe icie del endo elio. Es e enómeno hace que se desencadenen las señales especí icas pa a
su in il ación en los ejidos pa a agoci a los o ganismos in aso es comba iendo la in ección (Panés e al., Inmmunol.
2003, ol. 22, pp. 203-214).
Sin emba go, el excesi o eclu amien o de leucoci os en luga de bene icia puede pe judica ya que conduce a
p ocesos in lama o ios que pueden o igina a ecciones c ónicas como a i is euma oide, in lamaciones in es inales o
pulmona es, daños ca díacos, de ma i is, e c. (Sa oh, T. e al., Eu . J. Immunol. 2002, ol. 32, pp.1274-1281).
Los ligandos de selec inas cons i uyen po an o un ac o de e minan e e impo an e en el eclu amien o e ec i-
o de leucoci os. Dichos ligandos son oligosacá idos pequeños sialilados y ucosilados como el sialil Lewis X (sLex)
(NeuAcα(2→3)Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAcβ1), el cual es un e asacá ido e minal de cie as glicop o eínas (Fo-
xall, C. e al.J. Cell Biol. 1992, ol. 117, pp. 895-902; Foxall, C. e al., J. Cell Biol. 1992, ol. 119, pp. 215-227; Va ki,
A., Cu . Opin. Cell Biol. 1992, ol. 257, pp. 257-266; Renkonen, R., Ad . Exp. Med. Biol. 1998, ol. 435, pp. 63-73).
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Los oligosacá idos que con engan el g upo SLex-R, inhiben la adhesión de los leucoci os a E- y P-selec inas
(Polley e al., P oc. Na l. Acad. Sci. USA 1991, ol. 88, pp. 6224-6228; Foxall, C. e al., J. Cell Biol. 1992, ol. 117,
pp. 895-902; Rosen, S. D, Annu Re Immunol. 2004, ol. 22, pp. 129-156). Las bases es uc u ales que con olan el
econocimien o de es os glicoconjugados po pa e de las selec inas han sido ampliamen e es udiadas (E ns , B. e al.
Angew. Chem. In . Ed. Engl. 1995, ol. 34, pp. 1841-1844; Velu aja, K. e al., J. Biomol. S uc . Dyn. 2005, ol. 23,
pp. 101-111; Beauha nois, M., E. Biochemis y 2005, ol. 44, pp. 9507-9519; Wong, C.-H. e al., J. Mol. S uc . 2002,
ol. 602(60), pp. 215-222; WO 0189531A1).
Es impo an e des aca que los ligandos que posean al a a inidad en e a selec inas no solamen e pueden llega a se
á macos e icaces en el a amien o de p ocesos in lama o ios sino ambién de o os p ocesos mediados po selec inas
como cánce (Alessand o, R. e al., In . J. Cance 2007, ol. 121, pp. 528-535), diabe es (Haubne , F. e al., Biochem.
Biophys. Res. Commun. 2007, ol. 360, pp. 560-565), obesidad (F anco, C. e al., J. Clin. Endoc inol. Me anol. 2007,
ol. 92, pp. 2644-2647), hipe ensión y a ecciones ca díacas (Va ughese, G. I. e al., J. In . Med. 2007, ol. 261, pp.
384-391) o ombosis (Ay, C. e al., Clin. Chem. 2007, ol. 53, pp. 1235-1243.
También se ha demos ado que el econocimien o en e L-selec inas y de e minados ca bohid a os desempeña un
papel ele an e en el p oceso de ges ación po que in e iene en el anidamien o del emb ión en el ú e o (P akobphol,
A. e al., De elopmen al Biol. 2006, ol. 298, pp. 107-117).
El p opio SLex como á maco p esen a los incon enien es de una baja a inidad hacia las selec inas, una sín esis
química o enzimá ica cos osa dado el al o núme o de eacciones so is icadas implicadas, y una baja biodisponibilidad
ya que dada su es uc u a oligosaca ídica es sensible a la hid ólisis ácida y enzimá ica (Bendas, G., Mini-Re . Med.
Chem. 2005, ol. 5, pp. 575-584; Kaila, N. e al., Med. Res. Re . 2002, ol. 22, pp. 566-601) De acue do con es o
y pa a soslaya los an e io es incon enien es se han diseñado mimé icos del SLex. La mayo ía de ellos implican
modi icaciones del p opio SLex en donde se ha sus i uido una, dos o es unidades de azúca po el a macó o o
adecuado. (Kunz, H. e al., Angew. Chem. In . Ed. 2007, ol. 46, pp. 2108-2111; Guindon, Y., J. Am. Chem. Soc. 2005,
ol. 127, pp. 554-558). También se han publicado ap oximaciones mul i alen es con algunos mimé icos (Thoma, G.
e al., Syn hesis 2005, pp. 1491-1495; Ali, M., No man, K. E. e al., Faseb J. 2004, ol. 18, pp. 152-154). Debido al
in e és de aplicabilidad de es os p oduc os, exis en pa en es elacionadas: US2006241022A1; US6111084A).
Con la idea de ob ene á macos de u ilidad clínica, se han p epa ado y es udiado es uc u almen e mimé icos del
SLex con enlaces es ables en e a la hid ólisis ácida y enzimá ica como son los enlaces C-C y C-S. Cabe des aca en e
ellos los C-glicósidos y C-disacá idos (Jiménez-Ba be o, J. e al., Eu . J. O g. Chem. 2007, pp. 645-654; Guindon,
Y. e al., J. Am. Chem. Soc. 2005, ol. 127, pp. 554-558). El empleo de S-glicósidos y io-disacá idos en es e ipo de
mimé icos es mucho más escaso y se limi a a pocos ejemplos (Wi czak, Z. e al., Mini Re . Med. Chem. 2003, ol. 3,
pp. 271-280; US5919769A)
Todos los compues os mencionados en los an e io es a ículos o pa en es con ienen una unción ácido ca boxílico
que mime iza la unidad de ácido ace ilneu amínico p esen e en el SLex na u al. (Su acción ha sido ecien emen e a-
ada en el a ículo de e isión: Tiz , A. e al., Chimia, 2007, ol. 61, pp. 194-197). La sus i ución del g upo ca boxila o
po o os g upos ca gados como sul a os, sul ona os, os ona os o os a os o igina moléculas con simila ac i idad
(B andley, B. K. e al., Glycobiology 1993, ol. 3, pp. 633-639; Ohmo o, H. e al., J. Med. Chem. 1996, ol. 39, pp.
1339-1343; W09831697A1; W09809976A1).
Todos es os modelos se acogen a un modelo inicial de in e acción ligando-selec inas en el que un g upo ca boxi-
la o ca gado nega i amen e del ligando o inhibido in e acciona con un g upo ca gado posi i amen e de la selec ina,
conc e amen e con el g upo guanidino del esiduo A g97 (ap oximación “a” en la siguien e igu a) (Wong C.-H. e
al., Chem. Re . 1998, ol. 98, pp. 833-862). Sin emba go, la esolución de la es uc u a de ayos X de un complejo E-
selec ina/SLex (Some s, W. S. Cell, 2000, ol. 103, pp. 467-479) jun o con cálculos mecánico-cuán icos (Pichie i, F.
Bioo g. Med. Chem., 2002, ol. 10, pp. 2751-2757), indican que la in e acción del g upo ca boxila o del ligando con
la selec ina es una in e acción po puen e de hid ógeno en e el g upo ca bonilo de la unción ácido ca boxílico del
SLex y los g upos NH de los esiduos A g97 y Ty 48 (ap oximación “b” en la siguien e igu a).
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Es o ab e las pue as hacia el diseño y p epa ación de nue os ligandos de selec inas no ca gados en los que la
unción ácido ca boxílico es á mime izada po o as unciones neu as como és e es o amidas.
Explicación de la in ención
La p esen e in ención se e ie e a la p epa ación y e aluación biológica de io ucósidos no ca gados que mues an
a inidad po E- y P-selec inas en un ango mM bajo de IC50. La p esencia de un á omo de S en el enlace glicosídico (S-
conjugados) es no edosa en es e ipo de compues os y su aplicabilidad, lo que le da una mayo es abilidad y solubilidad
en medios acuosos compa ados con sus análogos O-conjugados. El ca ác e neu o les con ie e la capacidad de inhibi
especí icamen e las in e acciones ligando-selec ina. P esen an ambién ac i idad an icánce en líneas celula es.
Los compues os de la p esen e in ención son glicósidos no ca gados que inco po an una unidad de ucosa, un
enlace ioglicosidico y aminoácidos no p o einogénicos en el aglicón. Dichos compues os se acogen a un nue o modelo
(A) que eúne los equisi os es uc u ales adecuados pa a p oduci una nue a gene ación de an agonis as de selec inas,
y que mejo a los modelos exis en es en el es ado de la écnica an e io , (Wong, C.-H. e al., Chem. Re . 1998, ol. 98,
pp. 833-862) en cuan o a su simplicidad, iabilidad sin é ica y meno cos e.
Algunos de los compues os ob enidos que de i an de dicho modelo p esen an a inidad po E y P selec inas y
ac i idad an i-cánce en líneas celula es, ac úan po an o como mimé icos del SLeX:
Donde: S, unión ioglicosídica; E, espaciado es simples; AAs-OH, p olinas polihid oxiladas; y Neu, g upo que
mime iza al ácido neu amínico p esen e en el SLeX.
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Median e el é mino “glicósido” se hace e e encia a ca bohid a os que lle an sus i uyen es en el ca bono anomé-
ico C-1, que iene ca ác e de ace al o hemiace al. El é mino “L- ucosa” se e ie e al monosacá ido CH3-(CHOH)4-
CHO que p esen a la siguien e es uc u a cíclica:
El é mino “ io” indica un á omo de azu e en el C-1. El é mino “aglicón” deno a el sus i uyen e que a unido a
dicho á omo de azu e.
El C-1 puede ene las con igu aciones SyR, que se exp esan ambién y espec i amen e como α(1) y β(2). Se
deno an ambién como epíme os po se isóme os que di ie en solamen e en la con igu ación de uno de sus ca bonos,
siendo con igu ación la disposición en el espacio de cada sus i uyen e del ca bono.
El é mino “no ca gado” se e ie e a que no exis e un g upo -COOH que en medio básico pueda o ma un ca bo-
xila o ca gado nega i amen e: -COO.
Po an o, un p ime aspec o de la p esen e in ención se e ie e a un compues o de ó mula gene al (I) o cualquie a
de sus sales:
donde:
X se selecciona del g upo que comp ende -OR4-NHR4, R4se selecciona del g upo que comp ende hid ógeno,
alquilo (C1-C6) o a ilo (C6-C12), p e e iblemen e R4es un alquilo C4, más p e e iblemen e n-bu ilo ó -bu ilo;
R11se selecciona del g upo que comp ende H ó -COCH3(Ac), p e e iblemen e R1es hid ógeno (H);
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R2se selecciona del g upo que comp ende H, -CH2OH ó -CH3(Me), p e e iblemen e R2es hid ógeno;
R3se selecciona del g upo que comp ende alquilo C1-C6o cicloalquilo (C3-C6), p e e iblemen e R3es un alquilo
no sus i uido, más p e e iblemen e R3es un alquilo C3, y aún más p e e iblemen e n-p opilo;
“a” es 1 ó 2, p e e iblemen e “a” es 1. Si a = 1 indica ía un g upo -OH unido al C-3’ ó al C-4’ del anillo, y si a = 2
indica ía dos g upo -OH unidos a C-3’ y C-4’;
“b” es 0 ó 1, p e e iblemen e “b” es O. Si b = 0 indica ía de i ados de p olinas, y si b = 1 indica ía de i ados de
homop olinas; e
Y se selecciona del g upo que comp ende H ó -COOR5, donde R5se selecciona del g upo que comp ende alquilo
(C1-C6) ó a ilo (C6-C12), p e e iblemen e Y es hid ógeno o R5es un alquilo (C1-C6), y más p e e iblemen e R5es un
me ilo.
En es os compues os de ó mula gene al (I) la con igu ación del ca bono del enlace ioglicosidico puede se SoR.
Una ealización p e e ida de la p esen e in ención, comp ende compues os sul óxidos ó sul onas ob enidos me-
dian e la oxidación del á omo de S de cualquie a de los compues os de ó mula gene al (I).
En la p esen e in ención el é mino “alquilo” se e ie e a cadenas ca bonadas ali á icas, lineales o ami icadas,
sus i uidas o no sus i uidas. Cuando se hace e e encia a un alquilo C1-C6se en iende que dicho g upo iene de 1 a 6
á omos de ca bono, po ejemplo, me ilo (Me), e ilo (E ), n-p opilo, i-p opilo, n-bu ilo (Bu), -bu ilo (Bu ), n-pen ilo,
e c.
Po “cicloalquilo” se e ie e en la p esen e in ención a cadenas ca bonadas ali á icas cíclicas. Cuando se hace
e e encia a un cicloalquilo C3-C6, se en iende que dicho g upo iene en e 3 y 6 á omos de ca bono, po ejemplo el
g upo ciclop opilo, ciclobu ilo, ciclopen ilo ó ciclohexilo.
Po “a ilo” se e ie e en la p esen e in ención a una cadena ca bocíclica a omá ica. Cuando se hace e e encia a un
g upo a ilo C6-C12 se en iende que dicho g upo iene de 6 a 12 á omos de ca bonos, po ejemplo enilo, na ilo.
La p esen e in ención además se e ie e a la p epa ación de glicósidos no ca gados que inco po an una unidad de
L- ucosa, un enlace ioglicosídico, y aminoácidos no p o einogénicos en el aglicón.
Así, un segundo aspec o de la p esen e in ención se e ie e a un mé odo de ob ención del compues o de ó mula
gene al (I) que comp ende los siguien es pasos:
a. acoplamien o de cualquie a de los siguien es compues os de ó mula gene al (III) ó (IV) (llamados io ucosil
de i ados) con el compues o de ó mula gene al (II) (de i ados hid oxi-p olínicos u homop olínicos):
R6es seleccionado del g upo que comp ende H, alquilo (C1-C4) ó a ilo (C6); P1es un g upo p o ec o ; y R1,
R2, a y b es án de inidos en la ei indicación 1.
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En es e paso (a) se ob iene el compues o de ó mula gene al (V):
b. acoplamien o de los compues os ob enidos en el paso (a) con de i ados mono-p o egidos de los ácidos
malónico, succínico o glu ámico. Es os de i ados son compues os de es uc u a gene al X-OC-R3-COOH
donde X es un g upo O-alquilo u O-a ilo, y R3es á de inido an e io men e, es deci , es un g upo -(CH2)n,
donde n = 1,2,3;
c. libe ación de los g upos p o ec o es del compues o ob enido en el paso (b) pa a la ob ención del compues o
de ó mula (I) (R1= COCH3; Y = H; y X = OH) o a amien o del compues o del paso (b) con una base
débil pa a la ob ención del compues o de ó mula (I) (X = -OR4; R1=H;eY=H).
En una ealización p e e ida del mé odo de la in ención, además comp ende el siguien e paso:
d. acoplamien o del compues o ob enido en (c) (compues os de es uc u a gene al (I) (R1= COCH3; Y = H; y
X = OH)) con aminas, que pueden se ali á icas o a omá icas, pa a ob ene compues os de ó mula gene al
(I) (X = -NR4).
El mé odo de ob ención de los compues os de ó mula gene al (IV), io ucosil aminoácidos, pod ía comp ende
los siguien es pasos:
a. eacción de L- ucosa pe ace ilada (CH3CH-(CHOCOCH3)3-O-CHOCOCH3) con HB en CH3COOH pa a
ob ene ace ob omo ucosa (CH3CH-(CHOCOCH3)3-O-CHB );
b. eacción del compues o ob enido en (a) con de i ados del aminoácido L-cis eína N- y O- p o egido (g upos
p o ec o es) y con una base, en condiciones de ca álisis de ans e encia de ase.
c. Eliminación de los g upos p o ec o es pa a da los compues os de ó mula gene al (IV).
El é mino “ io ucosil de i ados” o “S- ucosil de i ados” indica la exis encia de sus i uyen es unidos al á omo de S.
Es os sus i uyen es incluyen cadenas ca bonadas lineales o cíclicas o a omá icas e minadas en un g upo amino (NH2)
que se encuen a p o egido con un g upo p o ec o , indicando g upo p o ec o a los g upos que se puedan in oduci
en un g upo uncional (en es e caso NH2) y que se pueda qui a ácilmen e pa a ol e a gene a el mismo g upo
NH2. Es e g upo se á pun o de anclaje pa a la unión de cualquie cadena de aminoácidos, pep ídica o p o eínica. En
es e sen ido, los io ucosil de i ados que lo con ienen, son ma e ial de pa ida pa a la p oducción de glicoconjugados
sin é icos en donde el pép ido o la p o eína se unen al azúca po un á omo de azu e, es deci , neo- io-glicoconjugados.
Se en iende po de i ados hid oxi-p olínicos e hid oxihomop olínicos aquellos compues os que con ienen un anillo
sa u ado de 5 eslabones (pi olidina) con eniendo un á omo de ni ógeno, el cual lle a g upos COOH (p olinas)/
CH2OOOH(homop olinas), -OH, -CH3y -CH2OH como sus i uyen es.
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R2= H, -CH3, -CH2OH, a = 1 ó 2, b = 0 ó 1. Se en iende po D- y L-p olina los aminoácidos elacionados cuya
es uc u a se indican:
Los compues os de ó mula gene al (I) son capaces de inhibi la in e acción SLex/selec inas [SLex-BSA/E-selec-
ina; SLex-PSGL-1-gamma/P-selec ina], con a inidad en e a selec inas en el ango mM.
Es in e esan e señala que en los ensayos de inhibición ealizados el e asacá ido na u al SLex inhibe la in e acción
en e a E-selec inas en el ango mM siendo inac i o en e a las P-selec inas.
O o aspec o de la in ención, comp ende el uso del compues o de ó mula gene al (I) como p oduc os mimé icos
del e asacá ido na u al sialil Lewis X (SLex).
Pa icula men e, la in ención se e ie e a los mé odos de p oducción de ales compues os, dando buenos esul ados
de inhibición en e E- y P- selec inas y de ac i idad an i-cánce en líneas celula es.
Los compues os de la p esen e in ención que de i an de dicho modelo (A), son moléculas neu as, es ables en e
a la deg adación po p o easas po inco po a aminoácidos no p o einogénicos, es ables en e a la hid ólisis ácida o
enzimá ica po la p esencia de un enlace S-glicosídico, e sá iles po la posibilidad de oxidación del S a los co es-
pondien es sul óxidos y sul onas y más solubles en agua que los análogos oxigenados. Además, inco po an g upos
a omá icos lo que es a o able pa a su in e acción con p o eínas.
Los compues os no ca gados (X=OR) de la p esen e in ención mos a on una a inidad en e a E- y P-selec inas
análoga a los ca gados nega i amen e los cuales, en condiciones isiológicas, p o ienen de los compues os con (X
=OH). Los compues os aniónicos ienen la posibilidad de in e acciona con los es os ca iónicos de o as p o eínas,
mien as que los no ca gados p esen an mayo selec i idad en e a de e minadas p o eínas.
O o aspec o de la p esen e in ención, se e ie e al compues o de ó mula gene al (I) pa a su uso como medica-
men o.
Aún o o aspec o más de la p esen e in ención, se e ie e a un compues o de ó mula gene al (I) pa a su uso en
el a amien o de en e medades que cu sen con a inidad en e a a E- y P-selec inas. Es as en e medades pueden se
p ocesos in lama o ios, cánce , a i is, ombosis, de ma i is, in lamaciones pulmona es o a ecciones ca díacas.
Es deci , el compues o de ó mula gene al (I) se puede u iliza pa a la elabo ación de un medicamen o pa a el
a amien o de en e medades que cu sen con a inidad en e a E- y P-selec ina.
En una ealización p e e ida el compues o de la in ención, compues o de ó mula gene al (I), iene a inidad en e
a E- y P-selec inas en un ango de concen aciones mM y puede ac ua como agen e an icance ígeno en un ango de
concen ación µM.
Así, o o aspec o de la p esen e in ención se e ie e a una composición a macéu ica que comp ende cualquie
compues o de ó mula gene al (I) además de un ehículo a macéu icamen e acep able.
“Los ehículos acep ables a macéu icamen e” incluyen cualquie ehículo que po sí mismo no induzca la p oduc-
ción de an icue pos pe judiciales al indi iduo que ecibe la composición. Los ehículos adecuados son, ípicamen e,
g andes mac omoléculas len amen e me abolizadas ales como p o eínas, polisacá idos, ácidos polilác icos, ácidos po-
liglicólicos, aminoácidos políme os, copolíme os de aminoácidos, ag egados lípidos de ehalosa ( ales como go i as
de acei e o liposomas), y pa ículas de i us inac i os. Dichos ehículos son bien conocidos po los expe os en la éc-
nica. Adicionalmen e, pueden es a p esen es subs ancias auxilia es, ales como agen es humec an es o emulsi ican es,
subs ancias amponado as del pH, y simila es.
A lo la go de la desc ipción y las ei indicaciones la palab a “comp ende” y sus a ian es no p e enden exclui
o as ca ac e ís icas écnicas, adi i os, componen es o pasos. Pa a los expe os en la ma e ia, o os obje os, en ajas
y ca ac e ís icas de la in ención se desp ende án en pa e de la desc ipción y en pa e de la p ác ica de la in ención.
Los siguien es ejemplos se p opo cionan a modo de ilus ación, y no se p e ende que sean limi a i os de la p esen e
in ención.
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Ejemplos
A con inuación se ilus a á la in ención median e unos ensayos ealizados po los in en o es, que ponen de mani-
ies o los p ocedimien os de ob ención de los compues os de ó mula gene al (I) y su pos e io aplicabilidad.
Ejemplo 1
Sín esis de los in e medios de la eacción
1.- Sín esis de los de i ados pe ace ilados de 1-(αyβ)-L- io ucosa ((1) y (2))
Se pasó HCl(g) du an e 20 minu os a a és de un ma az que con enía 35 ml de ácido ioacé ico (AcSH) a 0ºC. A la
disolución sa u ada ob enida, se añadió L- ucosa (3 g, 18.2 mmoles), se agi ó a 0ºC du an e 10 min y pos e io men e
du an e 4 h a empe a u a ambien e. Al cabo de es e iempo, la mezcla se e apo ó a sequedad y el c udo esul an e se
ace iló (15 ml (CH3CO)2O/15 ml Pi idina (C6H5N: Py) y DMAP [4-dime ilaminopi idina, 4-(CH3)2C6H4N] en can i-
dades ca alí icas du an e una noche. La mezcla esul an e se e apo ó a sequedad, el c udo se diluyó con CH2Cl2(80
ml) y se la ó con HCl (1M, 40 ml), disolución acuosa sa u ada de NaHCO3(40 ml) y agua (40 ml). La ase o gánica
ob enida se secó sob e Na2SO4y se concen ó a sequedad. El c udo ob enido se pu i icó median e columna de c oma-
og a ía de gel de sílice (AcOE :E e de pe óleo, 1:4→41:2) ob eniéndose p ime o el α-1- io ucósido pe ace ilado (1)
(2.85 g, 45%) y luego su anóme o (2) (1.27 g, 20%) ambos como acei es ama illos. Una ez sepa ados los compues os
(1) y (2) se u iliza on independien emen e. (Esquema 1).
Las eacciones que se de allan en adelan e a pa i del compues o (1) son igualmen e aplicables al compues o (2).
2.- Sín esis de la ace ob omo ucosa (14)
Una disolución de 1,2,3,4- e a-O-ace il-L- ucopi anosa (13) (1 g, 3 mmoles) se disol ió en AcOH (4 mL), se
en ió a 0ºC y se adicionó HB /AcOH (3 mL) go a a go a. T as 1 h a empe a u a ambien e, la mezcla se diluyó con
CH2Cl2y se e ió sob e agua-hielo, ex ayendo la ase acuosa a ias eces con CH2Cl2. Las ases o gánicas eunidas
se seca on sob e Na2SO4, se il ó y se concen ó a sequedad, ob eniéndose el b omu o de 1,2,3,4- e a-O-ace il-α-L-
ucopi anosilo (14) (1 g, 84%) que se u ilizó di ec amen e en el siguien e paso de eacción. (Esquema 4).
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Esquema 2. Ejemplo de p epa ación de los compues os (4) y (5).
Esquema 3. Ejemplo de p epa ación de compues os (9), (10), (11) y (12). La sín esis de los compues os epíme os
en C-1 (β-análogos) de (9), (10), (11) y (12) se ealiza de mane a análoga pe o pa iendo del compues o (2).
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Esquema 4. Ejemplo de p epa ación del compues o de ó mula gene al (I) (donde Y = COOR) (18). El compues o
(15) iene la ó mula:
Ejemplo 3
Ensayos biológicos
A inidad en e a selec inas
Mé odo
SLex-BSA 2.3 µg/ml ó PSGL1/IgG quime a 5 µg/ml se incuba on en 96-celdillas a 4ºC, se la a on con PBS
0.1 %BSA 0.05%Tween-20 y en onces se inmo iliza on con PBS-BSA 2% du an e 2 h a 37ºC. Después del la ado,
las celdas se incuba on du an e 4 h a empe a u a ambien e con E-selec ina/µ(1 Ug/ml) ó P-selec ina/µ(5 µg/ml)
p ecomplejada con inmunoglobulina bio inilada de macho cab ío an i-humana IgM (0.5 µg/ml) y es ep a idina-HRPO
(0.6 µg/ml) en p esencia del compues o que se analizó. Después de epe idos la ados, la unión o anclaje a la selec ina
se e eló con hid oclo u o de o- enilendiamina (0.67 mg/ml, Sigma) en p esencia de 0.16‰ H2O2. La eacción se pa ó
con H2SO43M. OD se leyó a 490 nm.
Los alo es de IC50 se calcula on usando el p og ama P ism de G aphPad®.
Con es e p o ocolo el SLex na u al p esen a IC50 de 0.7 mM en e a E-selec inas, siendo inac i o en e a P-
selec inas.
Cánce
P o ocolo de los ensayos de ci o oxicidad
1.- Líneas celula es
Las líneas celula es humanas se ob u ie on de ATCC (Ame ican Type Cul u e Collec ion).
A-549, cánce de pulmón - ATCC # CCL-185
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HT-29, adenoca cinoma de colon - ATCC # HTB-38
MDA-MB 231, adenoca cinoma de mama- ATCC # HTB-26
2.- Cul i o celula
Todas las líneas celula es se man u ie on en DMEM (Dulbecco’s Modi ied Eagle’s Medium) en un medio de
cul i o suplemen ado con 10% FBS (se um de e o de buey), 2 mM L-glu amina y 100 Unidad/mL penicilina y
es ep omicina a 37ºC y 5% CO2. Los cul i os po iplicado se incuba on du an e 72 ho as en p esencia y en ausencia
de los compues os a analiza (a 10 concen aciones ípicamen e comp endidas en e 10 a 0.0026 µg/mL).
3.- Medidas de ci o oxicidad (SRB)
Siguiendo un mé odo desc i o p e iamen e (Skehan, P., e al., J. Na l. Cance Ins ., 1990, ol. 82, pp. 1107-1112),
se u ilizó un ensayo colo imé ico basado en el uso de sul o odamina B, el cual ue adap ado pa a medidas cuan i a i as
de c ecimien o celula y iabilidad.
GI50: Concen ación que o igina la inhibición del 50% de c ecimien o.
E aluación biológica
Los alo es de inhibición en e a E- y P-selec inas y en e al cánce en líneas celula es, de algunos de los de i ados
se mues an a con inuación:
TABLA 1
Valo es de IC50 (mM) medidos pa a la a inidad de los mimé icos de SLeX(10), (11) y (18) hacia E- y
P-Selec inas. Pa a las medidas se ha u ilizado el Tes ELISA
TABLA 2
Valo es de GI50 (µM) pa a la ac i idad an icánce del compues o (11β)
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REIVINDICACIONES
1. Compues o de ó mula gene al (I) o cualquie a de sus sales:
donde:
X se selecciona del g upo que comp ende -OR4-NHR4, donde R4se selecciona del g upo que comp ende hid óge-
no, alquilo (C1-C6) o a ilo (C6-C12),
R1se selecciona del g upo que comp ende H ó -COCH3(Ac);
R2se selecciona del g upo que comp ende H, -CH2OH ó -CH3;
R3se selecciona del g upo que comp ende alquilo (C1-C6) ó cicloalquilo (C3-C6);
“a” es 1 ó 2;
“b” es 0 ó 1; e
Y se selecciona del g upo que comp ende H o -COOR5, donde R5se selecciona del g upo que comp ende alquilo
(C1-C6) ó a ilo (C6-C12).
2. Compues o según la ei indicación 1, donde R1es hid ógeno.
3. Compues o según cualquie a de las ei indicaciones 1 ó 2, donde R4es hid ógeno ó alquilo (C4).
4. Compues o según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 3, donde R2es hid ógeno.
5. Compues o según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 4, donde a es 1.
6. Compues o según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 5, donde b es 0.
7. Compues o según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 6, donde R3es un alquilo (C3).
8. Compues o según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 7, donde Y es hid ógeno ó -COOCH3.
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9. Mé odo de ob ención del compues o de ó mula gene al (I) según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 8, que
comp ende:
a. acoplamien o de cualquie a de los siguien es compues os de ó mula gene al (III) ó (IV) con el compues o
de ó mula gene al (II):
R6es seleccionado del g upo que comp ende H, alquilo (C1-C4) ó a ilo (C6); P1es un g upo p o ec o ; y R1,
R2, a y b es án de inidos en la ei indicación 1.
b. acoplamien o de los compues os ob enidos en el paso (a) con de i ados mono-p o egidos de los ácidos
malónico, succínico o glu á ico;
c. libe ación de los g upos p o ec o es del compues o ob enido en el paso (b) o a amien o del compues o del
paso (b) con una base débil.
10. Mé odo según la ei indicación an e io , que además comp ende:
d. acoplamien o del compues o ob enido en (c) con aminas.
11. Compues o de ó mula gene al (I) según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 8, pa a su uso como medica-
men o.
12. Compues o de ó mula gene al (I) según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 8, pa a su uso en el a amien o
de en e medades que cu sen con a inidad en e a E- y P-selec inas.
13. Compues o según la ei indicación an e io donde las en e medades se seleccionan del g upo que comp ende
p ocesos in lama o ios, cánce , a i is, ombosis, de ma i is, in lamaciones pulmona es o a ecciones ca díacas.
14. Compues o según cualquie a de las ei indicaciones 11 a 13, como agen e an icance ígeno en un ango de
concen ación µM.
15. Uso del compues o de ó mula gene al (I) según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 8, pa a la elabo ación
de un medicamen o pa a el a amien o de en e medades que cu sen con a inidad en e a E- y P-selec inas.
16. Uso del compues o de ó mula gene al (I) según cualquie a de las ei indicaciones 1 a 8, como p oduc os
mimé icos del sialil Lewis X (SLeX).
17. Composición a macéu ica que comp ende cualquie compues o de ó mula gene al (I) según cualquie a de las
ei indicaciones 1 a 8, además de un ehículo a macéu icamen e acep able.
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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
ESPAÑA
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ES 2 324 137
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Nº de solici ud: 200703049
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Fecha de p esen ación de la solici ud: 14.11.2007
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Fecha de p io idad:
INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TÉCNICA
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In . Cl.: Ve hoja adicional
DOCUMENTOS RELEVANTES
Ca ego ía 56
Documen os ci ados Rei indicaciones
a ec adas
Ca ego ía de los documen os ci ados
X: de pa icula ele ancia
Y: de pa icula ele ancia combinado con o o/s de la
misma ca ego ía
A: e leja el es ado de la écnica
O: e e ido a di ulgación no esc i a
P: publicado en e la echa de p io idad y la de p esen ación
de la solici ud
E: documen o an e io , pe o publicado después de la echa
de p esen ación de la solici ud
El p esen e in o me ha sido ealizado

5pa a odas las ei indicaciones pa a las ei indicaciones nº:
Fecha de ealización del in o me Examinado Página
26.06.2009 P. Fe nández Fe nández 1/4
A US 5614615 A (WONG) 25.03.1997, ei indicaciones. 1-17
A US 6111084 A (WONG e al) 29.08.2000, ei indicaciones. 1-17
A WO 9629339 A1 (SANDOZ y THE SCRIPPS RESEARCH INSTITUTE) 1-17
26.09.1996, esumen; ei indicación 1.
A X ZHU e al, ORGANIC LETTERS 2004, ol. 6, no7, 1
páginas 1083-1085. "Syn hesis o no el S-Neoglycopep ides om
glycosyl hiome hyl de i a i es", esumen.

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA Nº de solici ud: 200703049
CLASIFICACIÓN DEL OBJETO DE LA SOLICITUD
In o me del Es ado de la Técnica (hoja adicional) Página 2/4
C07H 15/26 (2006.01)
C07H 5/10 (2006.01)
A61K 31/7056 (2006.01)
Documen ación mínima buscada (sis ema de clasi icación seguido de los símbolos de clasi icación)
C07H, A61K
Bases de da os elec ónicas consul adas du an e la búsqueda (nomb e de la base de da os y, si es posible, é minos de
búsqueda u ilizados)
INVENES, EPODOC,WPI,CAS,REGISTRY
OPINIÓN ESCRITA Nº de solici ud: 200703049
Fecha de Realización de la Opinión Esc i a: 26.06.2009
Decla ación
No edad (A . 6.1 LP 11/1986) Rei indicaciones 1-17 SÍ
Rei indicaciones NO
Ac i idad in en i a Rei indicaciones 1-17 SÍ
(A . 8.1 LP 11/1986) Rei indicaciones NO
Se conside a que la solici ud cumple con el equisi o de aplicación indus ial. Es e equisi o ue e aluado du an e la ase de
examen o mal y écnico de la solici ud (A ículo 31.2 Ley 11/1986).
Base de la Opinión:
La p esen e opinión se ha ealizado sob e la base de la solici ud de pa en e al y como ha sido publicada.
In o me sob e el Es ado de la Técnica (Opinión esc i a) Página 3/4
OPINIÓN ESCRITA Nº de solici ud: 200703049
1. Documen os conside ados:
A con inuación se elacionan los documen os pe enecien es al es ado de la écnica omados en conside ación pa a la eali-
zación de es a opinión.
In o me sob e el Es ado de la Técnica (Opinión esc i a) Página 4/4
Documen o Núme o Publicación o Iden i icación Fecha Publicación
D01 US 5614615 A 25.03.1997
D02 US 6111084 A 29.08.2000
2. Decla ación mo i ada según los a ículos 29.6 y 29.7 del Reglamen o de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de ma zo,
de pa en es sob e la no edad y la ac i idad in en i a; ci as y explicaciones en apoyo de es a decla ación
La solici ud se e ie e a los io ucósidos de ó mula gene al I ( ei indicación 1), al p ocedimien o de ob ención de dichos com-
pues os y a la composición a macéu ica que los comp ende.
Los documen os D1 y D2 di ulgan ucopép idos mimé icos de Sialil Lewis X, los compues os desc i os en la solici ud di ie en
o malmen e de los di ulgados en D1 y D2, po lo que se conside a que la in ención es nue a y iene ac i idad in en i a, de
acue do con los A . 6.1 y 8.1 de la Ley de Pa en es.