Receptores de angiotensina en neuroinflamación e inflamación periférica. Implicaciones en la degeneración dopaminérgica

ESCUELA DE DOCTORADO
INTERNACIONAL DE LA USC
Ma ía A
Ped osa Sánchez
Tesis doc o al
Recep o es de angio ensina en
neu oin lamación e in lamación
pe i é ica. Implicaciones en la
degene ación dopaminé gica.
San iago de Compos ela, 2022
P og ama de doc o ado en Neu ociencia y Psicología Clínica
TESIS DE DOCTORADO
RECEPTORES DE ANGIOTENSINA EN
NEUROINFLAMACIÓN E INFLAMACIÓN
PERIFÉRICA. IMPLICACIONES EN LA
DEGENERACIÓN DOPAMINÉRGICA.
Ma ía A Ped osa Sánchez
ESCUELA DE DOCTORADO INTERNACIONAL DE LA UNIVERSIDAD
DE SANTIAGO DE COMPOSTELA
PROGRAMA DE DOCTORADO EN NEUROCIENCIA Y PSICOLOGÍA CLÍNICA
SANTIAGO DE COMPOSTELA
2022
D./Dña.
Ma ía Ángeles Ped osa Sánchez
Tí ulo de la
esis:
Recep o es de angio ensina en neu oin lamación e
in lamación pe i é ica. Implicaciones en la
degene ación dopaminé gica.
P esen o mi esis, siguiendo el p ocedimien o adecuado al Reglamen o y
decla o que:
1) La esis aba ca los esul ados de la elabo ación de mi abajo.
2) De se el caso, en la esis se hace e e encia a las colabo aciones que
u o es e abajo.
3) Con i mo que la esis no incu e en ningún ipo de plagio de o os
au o es ni de abajos p esen ados po mí pa a la ob ención de o os
í ulos.
4) La esis es la e sión de ini i a p esen ada pa a su de ensa y coincide
la e sión imp esa con la p esen ada en o ma o elec ónico.
Y me comp ome o a p esen a el Comp omiso Documen al de Supe isión en
el caso que el o iginal no es é deposi ado en la Escuela.
En San iago de Compos ela , 15 de no iemb e de 2022.
Fi ma elec ónica

AUTORIZACIÓN DEL DIRECTOR / TUTOR DE
LA TESIS
RECEPTORES DE ANGIOTENSINA EN
NEUROINFLAMACIÓN E INFLAMACIÓN
PERIFÉRICA. IMPLICACIONES EN LA
DEGENERACIÓN DOPAMINÉRGICA
D./Dª. José Luis Labandei a Ga cía
INFORMA/N:
Que la p esen e esis, se co esponde con el abajo ealizado po D/Dª.
Ma ía Ángeles Ped osa Sánchez, bajo mi di ección/ u o ización, y au o izo
su p esen ación, conside ando que eúne los equisi os exigidos en el
Reglamen o de Es udios de Doc o ado de la USC, y que como di ec o de
es a no incu e en las causas de abs ención es ablecidas en la Ley 40/2015.
De acue do con lo indicado en el Reglamen o de Es udios de Doc o ado,
decla a ambién que la p esen e esis doc o al es idónea pa a se de endida
en base a la modalidad de Monog á ica con ep oducción de publicaciones,
en los que la pa icipación del doc o ando/a ue decisi a pa a su elabo ación
y las publicaciones se ajus an al Plan de In es igación.
En San iago de Compos ela., 15 de No iemb e de 2022
Fi ma elec ónica: José Luis Labandei a Ga cía
AUTORIZACIÓN DEL DIRECTOR DE LA TESIS
RECEPTORES DE ANGIOTENSINA EN NEUROINFLAMACIÓN E
INFLAMACIÓN PERIFÉRICA. IMPLICACIONES EN LA
DEGENERACIÓN DOPAMINÉRGICA
D./Dª. Ana Isabel Rod íguez Pé ez
INFORMA/N:
Que la p esen e esis, se co esponde con el abajo ealizado po D/Dª. Ma ía
Ángeles Ped osa Sánchez, bajo mi di ección, y au o izo su p esen ación,
conside ando que eúne l os equisi os exigidos en el Reglamen o de Es udios
de Doc o ado de la USC, y que como di ec o de es a no incu e en las causas
de abs ención es ablecidas en la Ley 40/2015.
De acue do con lo indicado en el Reglamen o de Es udios de Doc o ado,
decla a ambién que la p esen e esis doc o al es idónea pa a se de endida en
base a la modalidad de Monog á ica con ep oducción de publicaciones, en
los que la pa icipación del doc o ando/a ue decisi a pa a su elabo ación y
las publicaciones se ajus an al Plan de In es igación.
En San iago de Compos ela., 15 de No iemb e de 2022
Fi ma elec ónica: Ana Isabel Rod íguez Pé ez
I
AGRADECIMIENTOS
Quisie a ag adece a odas las pe sonas que han colabo ado
eno memen e a la elabo ación de es a esis doc o al, especialmen e:
Al P o eso José Luis Labandei a Ga cía, po su eno me dedicación,
es ue zo y pasión que o ece cada día a la in es igación. G acias po
habe me pe mi ido o ma pa e de es e g an g upo, po enseña me y
po inicia me en el mundo de la in es igación.
A la p o eso a Ma ía José Gue a Seijas, po odo su abajo y po su
amabilidad y gene osidad que nos ansmi e siemp e.
A Ana Isabel, g acias po u lucha incansable, po u inmensa
dedicación, po lo mucho que me has enseñado, po apoya me, po
escucha me, po guia me y po inspi a me. Pa a mí ha sido una
g andísima sue e habe abajado jun as en es a esis.
A Pablo Ga ido, con quien he podido abaja mano a mano, g acias
po u inmensa amabilidad, capacidad de enseñanza, paciencia y buen
humo .
A Ri a, con la que he a on ado innume ables e os, con igo he
ap endido cosas aliosísimas y lo que signi ica un abajo con calidad
cien í ica.
Al p o eso Juan Suá ez Quin anilla, con quien he enido el place de
abaja y compa i an as con e saciones in e esan es, ú iles y
di e idas. Siemp e me has ayudado, g acias.
A Janne e Rod íguez, g acias po habe me enseñado y ayudado en
las p ác icas y se i me de ejemplo pa a la docencia y la in es igación.
A Ana Muñoz, g acias po ansmi i paz y anquilidad, po se buena
p o eso a y po u igu osidad en el abajo.
A Juan Pa ga, g acias po us innume ables ges iones, po u eno me
paciencia, po u anquilidad y buen es a .

II
A C is, cuyo ánimo, ene gía, buen humo , pasión y en ega nos ayudan
a odos cada día. G acias po es a siemp e ahí, po u sabidu ía y apoyo
pe sonal.
A Pili, g acias po se como e es, luchado a, ce cana, con ca ác e
explosi o, con ene gía y con empeño.
A I ia, g acias po se p o esional, igu osa y o ganizada. Además, us
suge encias me han animado a hace escapadas y conoce muchos
incones de Galicia.
A Ca men Díaz, g acias po se an a en a, po cues ioná elo odo y
apo a un pun o de is a di e en e.
A Begoña Villa , g acias po la ue za que siemp e ansmi es, po us
consejos y po u buen humo .
A An onio Domínguez, g acias po aba ca y enseña nos an ísimos
conocimien os, siemp e es un place habla con igo.
A Alicia, g acias po u buen humo an con agioso y po u
compañe ismo.
A And ea, u inmensa bondad y u g an capacidad de abajo e hacen
una pe sona única y admi able. G acias po ayuda me en odo y po
es a siemp e ahí.
A Ma ía Ga cía g acias po u igu osidad en el abajo, po se una
a en a y buena compañe a.
A Aloia, me ha gus ado mucho en en a me con igo a nue os e os,
ag adezco u ayuda, u compañía y u buen humo .
A Lucía, muchas g acias po el apoyo que me has dado siemp e a mí y
po la aleg ía que ansmi es.
A Ca men Labandei a, g acias po odo u abajo, que nos ha
pe mi ido emba ca nos en desa íos ex ao dina ios.
A Ana Muñoz Manchado, g acias po esa inol idable y p o echosa
es ancia, po ab i me las pue as de Ka olinska, po habe sido an
ce cana y a en a, y po se un g an ejemplo a segui .
III
A Fe nando, una pe sona con un co azón que no le cabe en el pecho,
un amigo con el que pode con a siemp e. Me has apoyado en odos
los malos momen os y hemos celeb ado odo los buenos. Simplemen e,
g acias.
A mi g an amigo Ismael, me aleg o mucho de habe compa ido
con igo es a in ensa a en u a gallega. Has sido un g andísimo apoyo.
E es una excelen e pe sona y e me eces lo mejo .
A Albica, qué e oy a deci a i. G acias inmensas po odo, po u
posi i ismo ex emo, po us consejos, po u empa ía, po odas las
a en u as que hemos i ido, po hace me an eliz, po se ú, única.
A Ma i, la pe sona esponsable de se quien soy. Con la que he c ecido,
con la que he ap endido, con la que he iajado. G acias po compa i
conmigo las ca cajadas, los miedos y los iun os.
A mi Ti a Ma i, mi segunda mad e. Me has enseñado impo an es
lecciones de ida. G acias po odo el ca iño, po cuida me y po
apoya me siemp e. G acias po la adición “sábados de a oz”, que nos
pe mi en euni nos como amilia. G acias a odos po ues a aleg ía,
consejos y ca iño.
A mi he mana Pina. Me has apoyado y has con iado en mí siemp e.
G acias po cuida me, po se he mana y amiga, po odo lo que he
ap endido de i y po odo lo que segui é ap endiendo. A mi pad e
An onio, g acias po odo lo que me has enseñado, po ayuda me, po
inspi a me, po pe mi i me cumpli mis sueños y po hace me eí . A
mi mad e Pina, luchado a, aleg e, buena, en egada a los demás. No
dejes de se quien po que odos e necesi amos. G acias po con ia en
mí y apoya me en cada paso. Todo lo que he conseguido ha sido g acias
a i, e quie o.
Y, po supues o, a An onio. Tú has apos ado y luchado po es a esis
an o como yo. G acias po se mi apoyo incondicional, po u ca iño,
po u con ianza y po u buen co azón. Con igo cada día es una aleg ía
y una a en u a. G acias po hace me eliz y po eco e el mundo
conmigo.
IV
RESUMEN
La des egulación en la exp esión de ecep o es de angio ensina puede
media p ocesos de neu oin lamación, p omo iendo así,
neu odegene ación dopaminé gica. Es a des egulación puede e se
a ec ada po e en os pa ológicos de in lamación pe i é ica c ónica
(como el en ejecimien o o sínd ome me abólico) y aguda (como la
in ección po SARS-CoV-2). El uso de a amien os modulado es de
los componen es y ecep o es del Sis ema Renina-Angio ensina (SRA)
pueden media , po an o, mecanismos neu op o ec o es y an i-
in lama o ios.
El obje i o p incipal de la p esen e esis doc o al se cen a en el es udio
de los ecep o es de angio ensina en la neu oin lamación e in lamación
pe i é ica, así como su implicación en la neu odegene ación
dopaminé gica. Los esul ados ob enidos mues an la implicación del
ecep o AT1 ce eb al en la neu oin lamación y mue e neu onal
dopaminé gica en un modelo animal de en e medad de Pa kinson (EP)
inducido po la sob eexp esión de la p o eína α-sinucleína. Además, se
obse ó un e ec o neu op o ec o de los an agonis as del ecep o AT1
median e la inhibición de la espues a in lama o ia mic oglial en el
modelo animal de EP. Las espues as in lama o ias de las células
mic ogliales es án mediadas po la exp esión de ecep o es de
angio ensina. En condiciones basales, los ecep o es AT2 egulan a la
baja la exp esión de los ecep o es del eje p o-in lama o io del SRA
( ecep o es AT1) en células mic ogliales. Sin emba go, en condiciones
de in lamación pe i é ica c ónica (en ejecimien o) y aguda (LPS), se
educe la exp esión de ecep o es AT2, lo que conduce a un inc emen o
en la exp esión de los ecep o es AT1, p omo iendo así enómenos de
neu oin lamación, que pueden se e e idos median e el empleo de
an agonis as del ecep o AT1. Además, la mic oglía de a ones hemb a
p esen a mayo exp esión del ecep o AT2 que la mic oglía de machos,
independien emen e de las ho monas emeninas ci culan es.
La in lamación pe i é ica c ónica con la que cu sa el sínd ome
me abólico, o la adminis ación c ónica de au oan icue pos agonis as
del ecep o AT1 (AT1-AA), p o ocan un aumen o en la exp esión de

V
los ecep o es del eje p o-in lama o io del SRA ce eb al y una
disminución en los ecep o es del eje an i-in lama o io, así como un
inc emen o de la mue e neu onal dopaminé gica y de la espues a
in lama o ia mic oglial en modelos animales de EP, que son e e idos
po el a amien o con el an agonis a del ecep o AT1, candesa án.
Finalmen e, en la in lamación pe i é ica aguda desencadenada po
COVID-19, ambién es á implicado el SRA. El enzima ECA2 se
iden i icó como el ecep o uncional de en ada pa a el i us SARS-
CoV-2. Dada la impo ancia del SRA en la in lamación pe i é ica, se
gene ó en onces un deba e sob e el uso, pe judicial o bene icioso, de
a amien os que modulan el SRA y sus ecep o es, sob e odo en
pacien es de mayo ulne abilidad a la g a edad po COVID-19
(en ejecimien o y sínd ome me abólico). Nues os esul ados sugie en
que el a amien o con bloquean es del ecep o AT1 (candesa án), con
inhibido es del enzima ECA (cap op il) o con modulado es indi ec os
de los ecep o es del SRA (ibup o eno) aumen a la exp esión de los
ecep o es del eje an i-in lama o io del SRA (AT2 y Mas) y del enzima
ECA2 a ni el pulmona , e ec o pa icula men e p onunciado en los
modelos que cu san con in lamación pe i é ica c ónica (en ejecimien o
y sínd ome me abólico). Es e inc emen o en la exp esión de ECA2 se
con i mó a ni el celula en cul i os de neumoci os humanos de ipo II.
Se comp obó, además, que la posible egulación posi i a de la en ada
i al a a és del aumen o de exp esión de ECA2 ansmemb ana
inducido po a amien os modulado es del SRA es con a es ada po
mecanismos adicionales de los a amien os mencionados,
pa icula men e po la inhibición de la ac i idad de p o easas
implicadas en la en ada celula de SARS-CoV-2 (ADAM17 y
TMPRSS2).
VI
ABSTRACT
Dys egula ion o angio ensin ecep o exp ession can media e
neu oin lamma ion p ocesses, hus p omo ing dopamine gic
neu odegene a ion. This dys egula ion can be a ec ed by pa hological
e en s such as ch onic pe iphe al in lamma ion (aging o Me abolic
Synd ome) and acu e in lamma ion (SARS-CoV-2 in ec ion).
The e o e, he use o modula ing ea men s o he Renin-Angio ensin
Sys em (RAS) ecep o s can media e neu op o ec i e and an i-
in lamma o y mechanisms.
The ole o angio ensin ecep o s in neu oin lamma ion and pe iphe al
in lamma ion, as well as hei in ol emen in dopamine gic
neu odegene a ion, has been s udied in his doc o al hesis. The esul s
ob ained demons a e he ole o b ain AT1 ecep o in
neu oin lamma ion and dopamine gic neu onal dea h in an animal
model o Pa kinson's disease (PD) induced by o e exp ession o α-
synuclein p o ein. In addi ion, neu op o ec i e e ec o AT1 ecep o
an agonis s by inhibi ion o mic oglial in lamma o y esponse was
obse ed in PD animal model. In lamma o y esponses o mic oglial
cells a e media ed by angio ensin ecep o exp ession. In basal
condi ions, AT2 ecep o s down egula e he exp ession o RAS p o-
in lamma o y ecep o s in mic oglial cells. Howe e , in ch onic (aging)
and acu e (LPS) pe iphe al in lamma ion, he exp ession o AT2
ecep o s is educed, which leads o an inc ease in he exp ession o
AT1 ecep o s, hus p omo ing neu oin lamma ion p ocesses ha can
be e e sed by AT1 ecep o an agonis s. In addi ion, mic oglia om
emale mice exhibi s highe exp ession o he AT2 ecep o han
mic oglia om males, independen o ci cula ing emale ho mones.
Ch onic pe iphe al in lamma ion associa ed wi h he me abolic
synd ome, o ch onic adminis a ion o AT1 ecep o agonis ic
au oan ibodies (AT1-AA), cause an inc ease in p o-in lamma o y
ecep o exp ession and a dec ease in an i-in lamma o y ecep o
exp ession o b ain RAS. Addi ionally, bo h ch onic pe iphe al
in lamma ion models inc ease dopamine gic neu onal dea h and
mic oglial in lamma o y esponse in animal models o PD, which a e
VII
e e sed by he ea men wi h he AT1 ecep o an agonis ,
candesa an.
Finally, RAS is also implica ed in he acu e pe iphe al in lamma ion
igge ed by COVID-19. The ACE2 enzyme was iden i ied as he
unc ional en y ecep o o he SARS-CoV-2 i us. The e o e, a majo
ques ion was gene a ed abou whe he he use o modula ing ea men s
o RAS ecep o s was ha m ul o bene icial, especially in pa ien s
ulne able o se e e COVID-19 (aging and me abolic synd ome). The
esul s sugges ha ea men wi h AT1 ecep o an agonis s
(candesa an), wi h ACE enzyme inhibi o s (cap op il) o wi h indi ec
modula o s o he RAS ecep o s (ibup o en) inc eases he exp ession
o RAS an i-in lamma o y ecep o s (AT2 and Mas) and ACE2 enzyme
a he pulmona y le el. This e ec was pa icula ly p onounced in
ch onic pe iphe al in lamma ion models (aging and me abolic
synd ome). The inc ease in ACE2 exp ession was con i med a he
cellula le el in ype II human pneumocy e cul u es. Fu he mo e,
possible up- egula ion o i al en y by he inc ease in exp ession o
ansmemb ane ACE2 induced by RAS modula ing ea men s is
coun e ac ed by addi ional mechanisms, pa icula ly by ea men s-
induced inhibi ion o ac i i y o p o eases in ol ed in he i al en y o
SARS-CoV-2 (ADAM17 and TMPRSS2).
VIII
ARTÍCULOS DERIVADOS DE LA TESIS
Ped osa MA, Labandei a CM, Valenzuela R, Quijano A, Sanchez-
And ade M, Sua ez-Quin anilla JA, Lanciego JL, Labandei a-
Ga cia JL, Rod iguez-Pe ez AI. AT1 ecep o au oan ibodies
media e e ec s o Me abolic synd ome on dopamine gic
ulne abili y. 2022. B ain, Beha iou , and Immuni y, en
p ime a e isión. IF(2021): 19,227; Q1.
Ga ido-Gil P*, Ped osa MA*, Ga cia-Ga o e M, Pequeño-Val ie a
A, Rod iguez-Cas o J, Ga cia-Sou o D, Rod iguez-Pe ez AI,
Labandei a-Ga cia JL. Mic oglial angio ensin ype 2 ecep o s
media e sex-speci ic exp ession o in lamma o y cy okines
independen ly o ci cula ing es ogen. 2022 *Ga ido-Gil P y
Ped osa MA con ibuye on igualmen e a es e abajo. Glia:
1-33. DOI: 10.1002/glia.24255. IF(2021): 8,073; Q1.
Valenzuela R*, Ped osa MA*, Ga ido-Gil P, Labandei a CM,
Na a o G, F anco R, Rod iguez-Pe ez AI, Labandei a-Ga cia
JL. In e ac ions be ween ibup o en, ACE2, enin-angio ensin
sys em, and spike p o ein in he lung. Implica ions o COVID-
19. 2021 *Valenzuela R y Ped osa MA con ibuye on
igualmen e a es e abajo. Clinical and T ansla ional
Medicine: 4-11, pp. e371. DOI: 10.1002/CTM2.371. IF(2021):
8,554; Q1.
Ped osa MA, Valenzuela R, Ga ido-Gil P, Labandei a CM, Na a o
G, F anco R, Labandei a-Ga cia JL, Rod iguez-Pe ez AI.
Expe imen al da a using candesa an and cap op il indica e no
double-edged swo d e ec in COVID-19. 2021. Clinical
Science: 135-3, pp. 465-481. DOI: 10.1042/CS20201511.
IF(2021): 6,876; Q1.
XIII
inglés e e se ansc ip ase polyme ase
chain eac ion
SARS-CoV-2: co ona i us de ipo 2
causan e del sínd ome espi a o io agudo
se e o 2
SEM: e o es ánda de la media, del
inglés s anda d E o o he Mean
SIRT1: si uina ipo 1
SIRT3: si uina ipo 3
SNC: sis ema ne ioso cen al
SNpc / SN: sus ancia neg a pa s compac a
SNp : sus ancia neg a pa s e iculada
SO: supe óxido
SRA: Sis ema Renina-Angio ensina
ST: núcleo es iado
TELM: elmisa án
TG2: ansglu aminasa 2
TGF-β: ac o de c ecimien o
ans o mado de ipo β
TH: i oxina hid oxilasa
TH-i : inmuno eac i a pa a TH
TLR4: ecep o oll like ipo 4
TMPRSS2: p o easa ansmemb ana
se ina 2, del inglés ansmemb ane
p o ease se ine 2
TNF-α: ac o de nec osis umo al
TNFSF14/LIGHT: miemb o 14 de la
supe amilia del ac o de nec osis umo al
VEGF: ac o de c ecimien o ascula
endo elial
WB: Wes e n Blo
WT: o ma sal aje, del inglés wild ype
UFR: unidad de luo escencia ela i a
ZD: ZD-7155

INTRODUCCIÓN
1
1. INTRODUCCIÓN
1.1.SISTEMA RENINA-ANGIOTENSINA. RECEPTORES.
El Sis ema Renina-Angio ensina (SRA) se conoce clásicamen e como
un sis ema ho monal ci culan e enca gado de egula la p esión a e ial
y la homeos asis del sodio y el agua. El p ecu so inicial de es e sis ema
es el Angio ensinógeno (ANG), el cual se ans o ma en Angio ensina
I (Ang I), un pép ido inac i o, po acción del enzima Renina. La Ang I
puede ans o ma se, a a és de la acción del enzima con e so a de
angio ensina (ECA), en Angio ensina II (Ang II), la cual se conside a
el pép ido e ec o más impo an e del SRA (Spa ks e al., 2014). La Ang
II ac úa a a és de dos ecep o es p incipales: el ecep o de
angio ensina ipo 1 (AT1) y el ecep o de angio ensina ipo 2 (AT2)
(Unge e al., 1996).
Además, se han obse ado nue os componen es y ecep o es del SRA
como el enzima con e so a de angio ensina II (ECA2) y nue os
pép idos como Angio ensina (1-7) (Ang(1-7)), Angio ensina III (Ang
III) y Angio ensina IV (Ang IV) en di e en es células y ejidos.
También se ha iden i icado un ecep o especí ico pa a el enzima enina
y su p ecu so p o- enina, el ecep o PRR, que desencadena su p opia
ía de señalización (Figu a 1) (Nguyen, 2010).
La sín esis y unción de los di e en es componen es del SRA se
desc iben a con inuación:
-Renina: es una p o easa que ca aliza la escisión del ex emo N-
e minal del ANG pa a o ma Ang I. La p incipal uen e de enina en
la ci culación es el iñón, donde su exp esión y sec eción se encuen an
eguladas po cambios en la p esión a e ial y el equilib io de sal
(Lo enz e al., 1993; Bell e al., 2003). La can idad de enina p esen e
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
2
en el o en e sanguíneo es la que limi a los ni eles de Ang II y, po lo
an o, la ac i idad del SRA (Spa ks e al., 2014).
-ECA: es una pep idasa que ca aliza la escisión del ex emo C- e minal
del p ecu so inac i o Ang I pa a o ma Ang II. Su exp esión es
es icula y somá ica, siendo és a úl ima abundan e en la supe icie de
células endo eliales de odo el cue po, p incipalmen e pulmón,
in es ino, plexo co oideo, placen a y iñón. Además, exis e una o ma
soluble en plasma o mada po la escisión de su dominio
ansmemb ana (Belden e al., 1993).
-Ang II: es un pép ido asoac i o que, clásicamen e, egula la p esión
a e ial. Las acciones biológicas de Ang II es án mediadas po
ecep o es de la supe icie celula que pe enecen a la supe amilia de
ecep o es acoplados a p o eína G de sie e hélices ansmemb ana
(Spa ks e al., 2014). Los dos ecep o es p incipales de Ang II son:
-Recep o es AT1: los es udios sugie en que la mayo ía de las
unciones clásicamen e econocidas del SRA es án mediadas
po los ecep o es AT1. En a ón (Sasamu a e al., 1992) y a a
(Iwai e Inagami, 1992), se han iden i icado dos sub ipos de es e
ecep o , denominados AT1a y AT1b; ambos compa en el 95%
de la secuencia aminoacídica, sin emba go, di ie en en su
dis ibución, localización c omosómica y egulación
ansc ipcional. No se ha con i mado la exis encia de AT1b en
humanos, siendo el AT1a mu ino el homólogo más ce cano
(Spa ks e al., 2014).
La Ang II se une al ecep o AT1, ac i ando la ía de
señalización mediada po os olipasa C que p o oca la hid ólisis
del os a idilinosi ol bi os a o o mando inosi ol i os a o (IP3),
el cual p o oca la libe ación de Ca++ de los depósi os
in acelula es, y diacilglice ol (DAG), el cual ac i a la p o eína
quinasa C (PKC). Además, la acción de es e ecep o se ha
elacionado con o as ías de señalización como la quinasa
Janus (JAK), la p o eína quinasa ac i ada po mi ógenos
(MAPK) y la quinasa egulada po señales ex acelula es
(ERK), así como con ías dependien es de β-a es ina
INTRODUCCIÓN
3
(He icho a y Szan oo a, 2013; Fo es e e al., 2018). Es as
u as molecula es ienen un e ec o di ec o en la p omoción del
c ecimien o en mioci os ca díacos, ib oblas os y células de
músculo liso ascula , que causa emodelación ca dio ascula .
Además, o o mecanismo impo an e mediado po el eje Ang
II/AT1 es la p oducción de especies eac i as de oxígeno (ROS,
del inglés Reac i e Oxygen Species) median e el aumen o de
exp esión y de ac i ación del enzima nico inamida adenina
dinucleó ido os a o oxidasa (NOX / NADPH-oxidasa), cuyo
e ec o da luga a di e sos p ocesos isiopa ológicos, que
incluyen asocons icción, ib osis, aumen o de la abso ción
enal de sodio, libe ación de aldos e ona y a ginina asop esina
e in lamación (He icho a y Szan oo a, 2013; de Mo ais e al.,
2018).
Sin emba go, la unción de los ecep o es AT1 es más compleja.
Los ecep o es pueden o ma homodíme os y he e odíme os
p o ocando cambios impo an es en sus e ec os isiológicos.
Así, se ha demos ado la o mación de díme os con el ecep o
AT2, con el ecep o de endo elina B, con el ecep o Mas, con
ad enocep o es ipo B1 y B2 y con b adiquina B2 en e o os
(Fo es e e al., 2018).
-Recep o es AT2: es os ecep o es se exp esan en g an can idad
du an e el desa ollo e al (Spa ks e al., 2014) y sus ni eles de
exp esión pueden se modulados po Ang II y cie os ac o es de
c ecimien o (Ichiki e al., 1995). Asimismo, se ha suge ido que
su exp esión puede inc emen a se en es ados pa ológicos, ya
que se ha obse ado su implicación en la modulación de la
p oli e ación y di e enciación celula (Rod iguez-Palla es e al.,
2004) y p ocesos de egene ación y apop osis (Labandei a-
Ga cia e al., 2011).
Los mecanismos de señalización del ecep o AT2 aún son
especula i os en compa ación con los desc i os pa a el ecep o
AT1. Los ecep o es AT2 pa ecen emi i señales median e el
acoplamien o a las p o eínas Gαi2 y Gαi3, y es án elacionadas
con la ac i ación de os a asas pa a MAPK y ERK. Además, se
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
4
ha suge ido que la ac i ación de es os ecep o es es imula la
p oducción de b adicinina, óxido ní ico (NO, del inglés ni ic
oxide) y guanosín mono os a o cíclico (GMPc), p omo iendo la
na iu esis y la disminución de la p esión a e ial en el sis ema
ca dio ascula . De es a mane a, la es imulación del ecep o
AT2 con a es a la cons icción inducida po el ecep o AT1
en la ascula u a (Spa ks e al., 2014; Fo es e e al., 2018).
-Nue os componen es del SRA: la Ang II se conside a el e ec o más
impo an e del SRA, pe o ac ualmen e se conoce que no es el único
componen e bioac i o.
La Angio ensina (1-12) es un pép ido p esen e en plasma, co azón,
iñón y o os ejidos. Se o ma a pa i del ANG po una escisión
independien e de enina, y ac úa como p ecu so de la o mación de
Ang II (Fe a io e al., 2019); La Ang III es un pép ido o mado a pa i
de Ang II po la acción de la aminopep idasa A (Yugandha y Cla k,
2013). La Angio ensina A es o o pép ido de i ado de Ang II y que solo
se di e encia de és a en el p ime aminoácido de su secuencia (Cou inho
e al., 2014). Es os es ipos de angio ensinas ienen acciones muy
simila es a la Ang II, po lo que causan asocons icción y p oli e ación
de células de músculo liso median e la ac i ación del ecep o AT1
(Hussain y Awan, 2018). A ni el pe i é ico, Ang III induce na iu esis
y diu esis al ac ua sob e el ecep o AT2 (Kemp e al., 2019).
O os pép idos como Ang IV, Ang(1-7), Angio ensina (1-9) y
alamandina eje cen e ec os p o ec o es, opues os a los demos ados po
la Ang II/AT1. La Ang(1-7) se puede o ma a pa i de a ias ías. Una
de ellas es a pa i de la Ang II po acción del enzima ECA2 (San os e
al., 2018). Ang(1-7) ac úa sob e el ecep o Mas (MasR) en a ios
ejidos, pa icipando en p ocesos isiológicos y pa ológicos como el
eclu amien o e in lamación de leucoci os, emodelación ca díaca,
unción enal y al e ación ascula (Chappell, 2007; Simoes e Sil a e
al., 2013). Además, algunos es udios ecien es sugie en que la Ang(1-
7) puede p omo e su señalización a a és de o os ecep o es como el
ecep o acoplado a p o eína G elacionado con Mas (M gD),
p omo iendo la p oducción de ácido a aquidónico (Ka nik e al., 2017).
M gD ambién unciona como ecep o de alamandina, es imulando la

INTRODUCCIÓN
5
p oducción de NO pa icipando en espues as an i-hipe ensi as
(Lau ne e al., 2013).
De o ma gene al, ECA2 es un enzima que egula nega i amen e la
unción sis émica del SRA. Además de la gene ación de Ang(1-7),
ECA2 limi a la p oducción de Ang II y puede ac ua sob e o os
pép idos asoac i os con unciones impo an es en la egulación de la
p esión a e ial (Kuba e al., 2013). Recien emen e, el ECA2 ha cob ado
mucha a ención, ya que es e enzima es el ecep o uncional del i us
que p o oca el sínd ome espi a o io agudo se e o del co ona i us 2
(SARS-CoV-2), el agen e e iológico de la en e medad po co ona i us
2019 (COVID-19; Zhu e al., 2020); po lo que su egulación se ha
elacionado con la unción pulmona , ce eb al, ca dio ascula y enal.
Ac ualmen e, y eniendo en cuen a odos los componen es y ecep o es,
el SRA se de ine como un sis ema cons i uido po dos b azos de acción
opues a (Figu a 1). El b azo p eso es á compues o po el eje Ang
II/AT1, que media los e ec os asocons ic o , p oli e a i o,
hipe ensi o, oxida i o, p oin lama o io y p o ib ó ico del SRA
(Labandei a e al., 2017, 2021). El b azo dep eso es á compues o
p incipalmen e po el eje Ang(1-7)/MasR que ac úa como mediado de
los e ec os dep eso es, asodila ado es, an ip oli e a i os,
an ioxidan es, an i-in lama o ios y an i ib ó icos, y po el eje Ang
II/AT2, que se opone a los e ec os mediados po la ac i ación del
ecep o AT1 (Labandei a e al., 2017, 2021; San os e al., 2019).
Ambos ejes uncionan de o ma conjun a, de mane a que el equilib io
en la exp esión de los di e en es componen es y ecep o es ga an iza el
co ec o uncionamien o del SRA. La al e ación de la exp esión de
cualquie a de los componen es p o oca un desequilib io del SRA que
se ha elacionado con g an di e sidad de e en os pa ológicos
(Labandei a-Ga cia e al., 2011, 2013, 2017, 2021).
Además del SRA humo al o sis émico, se ha demos ado la exis encia
de un SRA local o isula que p esen a una egulación independien e
del sis émico (Sigmund e al., 2017). Los componen es del SRA isula
se han demos ado en di e en es ejidos y ó ganos, como co azón, iñón,
pulmón, hígado, e ina y ce eb o (Ma shall, 2003; Ola e al., 2013;
Labandei a-Ga cia e al., 2017; Sigmund e al., 2017). El SRA local
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
6
egula la supe i encia y di e enciación celula , así como los p ocesos
in lama o ios a ni el celula y, po an o, especí icos de ejido. Así, los
a amien os modulado es del SRA, como los an agonis as del ecep o
AT1 (ARAII), empleados en la p ác ica clínica habi ual como an i-
hipe ensi os, pueden desencadena e ec os especí icos de ejidos, más
allá de su e ec o sis émico sob e la p esión a e ial y o os e en os
ca dio ascula es (Zaman e al., 2002). En los úl imos años, se ha
des acado la impo ancia de es udia los posibles e ec os p o ec o es y
an i-in lama o ios en ejidos especí icos, como pueden se a ni el
ce eb al (Labandei a-Ga cia e al., 2021) o pulmona (Tan e al., 2018).
Figu a 1. Esquema de los p incipales pép idos, enzimas y ecep o es iden i icados en la
señalización del Sis ema Renina-Angio ensina (SRA). La P o- enina y la Renina se unen al
ecep o PRR mien as que la Angio ensina I (Ang I) es escindida po el enzima con e so a de
angio ensina (ECA) y da luga a la Angio ensina II (Ang II), que puede es imula los ecep o es
de angio ensina ipo 1 (AT1), o mándose el eje p eso del SRA. Po o o lado, en el eje dep eso
del SRA, la Ang II ambién puede es imula los ecep o es de angio ensina ipo 2 (AT2), Ang I
puede se escindido a Ang (1-9) y ac ua sob e los ecep o es AT2. Además, Ang II puede
con e i se en Ang(1-7) median e la acción del enzima con e so a de angio ensina II (ECA2)
o en Ang III median e la acción de una aminopep idasa. Se ha demos ado que la Ang(1-7) se
une a los ecep o es AT2, Mas y M gD, además puede o ma alamandina que es un ligando
pa a el ecep o M gD. La Ang III se puede uni an o a los ecep o es AT1 como a los AT2, y
se puede escindi o mando Ang IV que se une p incipalmen e al ecep o de angio ensina ipo
4 (AT4). Esquema de elabo ación p opia con www.bio ende .com
INTRODUCCIÓN
7
1.1.1. T a amien os modulado es del SRA y sus ecep o es
Los p incipales a amien os que modulan el SRA y sus ecep o es
se cen an en bloquea los componen es del b azo p eso del sis ema,
como son los inhibido es de ECA (IECAs) y los an agonis as o
bloquean es del ecep o AT1 (ARAII). Es os á macos p esen an una
g an impo ancia en el a amien o de la hipe ensión, así como en la
insu iciencia y emodelación ca díaca pos e io es al in a o de
mioca dio (Zaman e al., 2002).
Los p incipales a amien os que egulan la exp esión y ac i idad
del SRA y sus ecep o es son:
-IECAs: se han desa ollado di e en es ipos pa a uso clínico, en e
los que se encuen an el benazep il, cap op il, enalap il, osinop il, en e
los más u ilizados. Todos ellos ienen el mismo e ec o a macológico,
es deci , ac úan uniéndose al si io ac i o de ECA e in e ie en en la
capacidad del enzima pa a uni se y escindi sus sus a os, como la Ang
I, disminuyendo, po an o, la uen e de sín esis de Ang II. Los
di e en es á macos di ie en en la du ación de la inhibición de ECA, en
la abso ción, ida media y disponibilidad me abólica (Zaman e al.,
2002).
En su adminis ación c ónica, se ha obse ado que los IECAs no
inhiben comple amen e la gene ación de Ang II, enómeno conocido
como escape de Ang II, a pesa de que se man iene su e ec o an i-
hipe ensi o. Los mecanismos que subyacen a es e e en o aún no han
sido desc i os, pe o se ha suge ido un aumen o de la ansc ipción de
ECA, así como un aumen o de su ac i idad ca alí ica en células
endo eliales as el a amien o c ónico de un IECA (King y Opa il,
1992). Así mismo, el e ec o p o ec o de los IECAs puede e se
aumen ado po la b adiquinina. ECA ca aliza la hid ólisis de
b adiquinina en p oduc os biológicamen e ac i os, po lo que sus
inhibido es conducen a la acumulación de b adiquinina la cual es imula
la libe ación de p os aglandinas asodila ado as y de NO, con e ec os
an ioxidan es y an i-hipe ensi os (Zaman e al., 2002).
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
8
-ARAII: son los a amien os an i-hipe ensi os más u ilizados en
hipe ensión y as o nos ca dio ascula es. Son al amen e e ec i os y
bien ole ados po los pacien es. Se han desa ollado di e en es ipos
en e los que se encuen an el losa án, alsa án, i besa an,
candesa án, elmisa án, en e los más u ilizados. Todos ellos son
compues os no pep ídicos que bloquean especí icamen e la unión de
Ang II al ecep o AT1 ocupando el espacio en e las sie e hélices
ansmemb ana del ecep o , y sin ac ua sob e los ecep o es AT2
(Zaman e al., 2002).
Además, muchos es udios han demos ado que los ARAII
p esen an dobles mecanismos con e ec os impo an es.
Especí icamen e el elmisa án ambién unciona como agonis a de los
ecep o es ac i ados po p oli e ado es pe oxisomales ipo γ (PPAR-γ,
del inglés pe oxisome p oli e a o -ac i a ed ecep o s γ), los cuales se
ca ac e izan po ene e ec os an i-in lama o ios (Ga ido-Gil e al.,
2012).
Po di e sas azones, en e las que se encuen an la al a de
biodisponibilidad o al, la a iabilidad en la e icacia an i-hipe ensi a y
la e icacia e apéu ica de los IECAs y ARAII, el desa ollo a amien os
clínicos sob e o as dianas del SRA se ha is o educido (Zaman e al.,
2002; Se a Pessoa e al., 2013). Po ejemplo, los agonis as del ecep o
AT2, como el Compues o 21 (C21) y el CGP-42112 (CG), han sido
ampliamen e es udiados. Sin emba go, el e ec o p o ec o de C21,
disminuyendo mediado es p o-in lama o ios y ac i ando la cascada
NO/GMPc, se ha demos ado sólo en células enales (Ve donk e al.,
2012) mien as que, el compues o CG sólo ha mediado e ec os
hipo enso es al combina se con a amien os bloquean es del ecep o
AT1 (Tanaka e al., 1999). Los inhibido es de ecep o es Mas, como el
A779, han demos ado el impo an e papel p o ec o que p esen an
es os ecep o es (Zimpelmann y Bu ns, 2009).
1.2.SISTEMA RENINA-ANGIOTENSINA CEREBRAL
El Sis ema Ne ioso Cen al (SNC) se encuen a p o egido po la
ba e a hema oence álica (BHE) que e i a el paso de la mayo ía de los
componen es ci culan es del SRA sis émico. Sin emba go, se ha
INTRODUCCIÓN
15
p omue en la apop osis de neu onas, oligodend oci os y as oci os,
a o eciendo la degene ación celula (Lee e al., 2009; Sanchez-
Guaja do e al., 2010).
La pola ización hacia el es ado an i-in lama o io de la
mic oglía no malmen e se inicia median e la es imulación de IL-4 o
in e leucina 13 (IL-13), que son sec e adas po las células Th2 (Ghosh
e al., 2016). Con es e eno ipo, la mic oglía p oduce ci oquinas an i-
in lama o ias como la A ginasa-1 (ARG-1), la in e leucina ipo 10 (IL-
10) y el ac o de c ecimien o ans o mado de ipo β (TGF-β),
quimioquinas (TARC y MDC) y ac o es de c ecimien o que sup imen
las espues as p o-in lama o ias y con ibuyen a la epa ación y
emodelación neu onal (Da id y K one , 2011).
Po lo an o, el eno ipo mic oglial puede ene e ec os
con apues os en los p ocesos que desencadenan la neu odegene ación
(Joe s e al., 2017). En e e encia a la EP, se ha demos ado que la SNpc
es una egión muy densa en células mic ogliales y se ca ac e iza po la
p esencia de neu onas dopaminé gicas al amen e ulne ables a las
espues as p o-in lama o ias (Picca e al., 2021). Múl iples es udios han
demos ado la exis encia de una espues a in lama o ia mic oglial en
SN y ST de pacien es con EP (Sanchez-Guaja do e al., 2010; Joe s e
al., 2017). Sin emba go, la p esencia de mic oglía eac i a po sí sola
no de ine su unción, bene iciosa o p ejudicial, en la neu odegene ación
de la EP. La e aluación de los ac o es solubles, como las ci oquinas,
an o en el ejido ce eb al como en el líquido ce alo aquídeo (LCR) y
plasma, puede p opo ciona da os sob e el eno ipo mic oglial y, po
an o, el e ec o de la espues a in lama o ia mic oglial en el inicio y
p og esión de la en e medad (Joe s e al., 2017).
Además de la espues a in lama o ia mic oglial, la exis encia
de as oci os eac i os en el pa énquima ce eb al ambién es una
ca ac e ís ica de la neu oin lamación (Ransoho y Pe y, 2009). La
as ogliosis se ca ac e iza po el aumen o de los ni eles de exp esión de
la p o eína ácida ib ila glial (GFAP, del inglés an i-glial ib illa y
acidic p o ein) y la hipe o ia del cue po celula y de las ex ensiones
celula es en espues a a es ímulos in lama o ios, como el
lipopolisacá ido (LPS), IL-1β y TNF-α (Wang e al., 2015a). En

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
16
consecuencia, los as oci os p oducen mediado es in lama o ios,
aunque en es adios más a díos que la mic oglía, ampli icando la
neu oin lamación. La espues a in lama o ia as oglial se ha obse ado
en egiones ce eb ales a ec adas en pacien es de EP, así como en
modelos animales y celula es (Yamada e al., 1992; Fellne e al., 2013;
Wang e al., 2015a).
La implicación de la espues a in lama o ia mic oglial y los
enómenos de neu oin lamación en el inicio y p og esión de la EP ha
sido desc i a (Joe s e al., 2017). Sin emba go, los mecanismos po los
cuales con ibuyen a la pa ología de dicha en e medad no han sido
comple amen e dilucidados y equie en de es udios más p o undos.
 Implicación de la mic oglía en modelos de EP
Los modelos animales de EP ac uales sólo ep oducen
pa cialmen e la en e medad, debido a que aún no se conocen odas las
causas que inician y man ienen la neu odegene ación dopaminé gica
(Falkenbu ge e al., 2016). Sin emba go, la neu oin lamación y la
espues a in lama o ia mic oglial han sido de ec adas en di e sos
modelos de la en e medad.
Los modelos animales basados en neu o oxinas son los más
ampliamen e u ilizados en EP, ya que pe mi en ob ene una mue e
celula selec i a de las neu onas dopaminé gicas y son capaces de
gene a un es ado de es és oxida i o e in lamación en la SNpc y/o en
el ST (Blesa e al., 2012; Beza d e al., 2013). Las p incipales
neu o oxinas u ilizadas son:
-6-Hid oxidopamina (6-OHDA): se a a de una molécula
que se di e encia de la DA po la p esencia de un g upo
hid oxilo, lo que la con ie e en una molécula óxica pa a las
neu onas dopaminé gicas. Debido a que la 6-OHDA es un
p oduc o p opio del me abolismo endógeno de la DA, y
p oduce lesiones especí icas en la u a nig oes ia al, se
conside a un buen candida o pa a el desa ollo de modelos
animales de EP (Rod iguez-Palla es e al., 2007, 2008; Blesa
e al., 2012; Jackson-Lewis e al., 2012).
INTRODUCCIÓN
17
-1-me il-4- enil-1,2,3,6- e ahid opi idina (MPTP): es a
molécula es ans o mada, po la acción del enzima
monoamino oxidasa B ce eb al, en su me aboli o ac i o
(MPP+), el cual es cap ado po el anspo ado de DA. El
MPP+ in acelula se concen a en las mi ocond ias, donde
inhibe el complejo I de la cadena de anspo e de elec ones
(Tip on y Singe , 1993) p oduciendo una educción en la
gene ación de adenosín i os a o (ATP) y un aumen o en la
p oducción de adicales lib es (Chan e al., 1991), lo que
conduce a la mue e de neu onas dopaminé gicas.
Los modelos inducidos po las mencionadas neu o oxinas
cu san con una ele ada espues a in lama o ia mic oglial ho as después
de su adminis ación, y an es de que se p oduzca una mue e neu onal
dopaminé gica signi ica i a (Blandini e al., 2008; Boyd e al., 2022).
El aumen o de exp esión de ci oquinas p o-in lama o ias ambién se ha
encon ado en es os modelos, aunque exis e a iabilidad en cuan o al
ipo de ci oquinas. P obablemen e es as di e encias se encuen en
asociadas a di e en es dosis y iempos u ilizados en el modelo
desa ollado, así como el luga de la inyección (Depino e al., 2003).
Además, o os es udios han demos ado que la adminis ación
a dosis no neu o óxica de la oxina in lama o ia LPS aumen a la
degene ación neu onal inducida po 6-OHDA (Kop ich e al., 2008), lo
que sugie e una elación en e la in lamación pe i é ica con la mue e
neu onal dopaminé gica. Po lo an o, la inhibición de la eacción glial
y los p ocesos in lama o ios puede ep esen a un en oque e apéu ico
impo an e pa a e asa la p og esión de la EP (Lee e al., 2009). Sin
emba go, aún se encuen an esul ados con adic o ios sob e los e ec os
neu op o ec o es de los a amien os con e ec os an i-in lama o ios.
Es o puede debe se a que los modelos animales basados en
neu o oxinas no ep oducen ielmen e la pa o isiología de la EP,
especialmen e en lo que a sinucleinopa ía se e ie e (Sa ka e al., 2016;
Visanji e al., 2016; Kop ich e al., 2017). Es impo an e des aca , que
en los úl imos años se ha desc i o una impo an e elación en e la
neu oin lamación y espues a in lama o ia mic oglial con la oxicidad
gene ada po la p o eína α-syn (Zhang e al., 2017). En consecuencia,
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
18
se es á a anzando ápidamen e hacia la implemen ación de modelos
animales basados en sinucleinopa ía (Faja do-Se ano e al., 2021).
Así, se han desa ollado a ios modelos de animales
ansgénicos que sob eexp esan el ipo sal aje (WT, del inglés Wild
ype) o o mas mu adas de α-syn humana (A30P, E36K, A53T) con el
obje i o de es udia los e ec os de la acumulación y ag egación de α-
syn en la mue e de neu onas dopaminé gicas (Magen y Chessele ,
2010). Los a ones ansgénicos que sob eexp esan α-syn desa ollan
neu odegene ación, pé dida de DA es ia al, dis unción locomo o a e
inclusiones ci oplasmá icas, aunque és as no con o man una es uc u a
ib ila que se asemeje a los cue pos de Lewy con exac i ud (Chia e al.,
2020). Sin emba go, la pé dida neu onal suele se débil o en egiones
no elacionas con EP, po lo que la p incipal limi ación de es os
modelos es que no imi a la exp esión espacio empo al de α-syn que se
mues a en pacien es de EP (Visanji e al., 2016; Volpicelli-Daley,
2017).
Pa a co egi es as limi aciones, ac ualmen e se es án
desa ollando modelos que inducen la sob eexp esión de α-syn
u ilizando ec o es i ales, en pa icula ec o es i ales
adenoasociados (AAV) (Bey e al., 2020), los cuales, g acias a la
inco po ación de p omo o es especí icos, pe mi en una ansducción y
sob eexp esión de α-syn en egiones y/o ipos celula es elacionados
con la isiopa ología de la EP humana. De o ma gene al, se han
encon ado 12 se o ipos de AAV di e en es, siendo el se o ipo 9
(AAV9) uno de los únicos capaz de a a esa la BHE y el que ha
demos ado mayo e icacia de ansducción en el SNC (Bey e al.,
2020). Di e sos es udios han demos ado que la sob eexp esión de α-
syn humana mediada po ec o es AAV ep oduce dis in as e apas de
p og esión de la en e medad que coinciden con las e apas p e-
sin omá icas, sin omá icas emp anas y a anzadas obse adas en
pacien es con EP (Dec essac e al., 2012; Volpicelli-Daley, 2017).
En modelos con sob eexp esión de α-syn se ha demos ado una
in ensa espues a neu oin lama o ia (Sanchez-Guaja do e al., 2010;
Ba khol e al., 2012). Di e sos es udios han obse ado que la
mic ogliosis gene ada en es os modelos se p oduce en e apas iniciales
INTRODUCCIÓN
19
en las que la mue e neu onal dopaminé gica oda ía no es signi ica i a.
Po an o, se ha suge ido que los ag egados p o eicos de α-syn libe an
señales que inducen mic ogliosis e in lamación, p o ocando que un
núme o c ecien e de células mic ogliales eaccionen y mig en al si io
de la lesión pa a de ende la p og esi a mue e neu onal (Cha a ia e
al., 2022). Es e e en o di ige a la ac i ación de la mic oglía con
eno ipo p o-in lama o io, enca gado de la agoci osis de α-syn y,
pos e io men e, a la ac i ación de di e en es e en os p o-in lama o ios
jun o con una libe ación ele ada de ci oquinas, lo que po encia la
pé dida de neu onas dopaminé gicas y un es ado de in lamación
ce eb al c ónica en EP (Su e al., 2008; Lee e al., 2010). Sin emba go,
los di e en es modelos de α-syn siguen mos ando esul ados
con adic o ios. Las di e en es o mas de α-syn exhiben di e en es
e ec os sob e la agoci osis mic oglial y la espues a in lama o ia. Po
ejemplo, la p o eína mu ada α-syn-A53T desencadena una espues a
mic oglial p o-in lama o ia exace bada y al e a la agoci osis (Hoenen
e al., 2016).
Hay que ene en cuen a que los modelos animales no son los
únicos disponibles pa a es udia p ocesos de neu oin lamación que
anscu en du an e la p og esión de la neu odegene ación. Los
modelos celula es son una o ma ápida, menos cos osa que los modelos
animales, y que o ecen la posibilidad de es udia e ec os y espues as
de di e en es ipos de células de o ma indi idual (Falkenbu ge e al.,
2016). Los esul ados in i o han demos ado el e ec o
neu oinmunomodulado de la mic oglía a a és de la libe ación de
sus ancias ci o óxicas (ROS, NO, ácido a aquidónico, ci oquinas)
(Ha y y K a , 2008). Gene almen e, la es imulación del eno ipo
neu o óxico se induce po el a amien o con LPS o el in e e ón ipo γ
(IFN-γ) (Melchio e al., 2006).
Los expe imen os in i o más u ilizados son aquellos que
u ilizan líneas celula es inmo alizadas de i adas de poblaciones
celula es de un o ganismo celula (Lopes e al., 2017), siendo las más
u ilizadas pa a mic oglía: N9, BV2 (ambas de linaje de a ón), HAPI,
MLS-9 (ambas de linaje de a a), CHME-5 y HMO6 (ambas de linaje
humano) (Timme man e al., 2018). Los cul i os p ima ios, ambién
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
20
muy u ilizados en modelos celula es, es án cons i uidos po uno o más
ipos celula es que han sido aislados de un ejido, gene almen e
emb iona io (Lopes e al., 2017). En el caso de la mic oglía, los cul i os
p ima ios gene almen e de i an del ejido ce eb al de animales
neona os (Timme man e al., 2018). Hay que ene en cuen a que
di e sos es udios han e elado di e encias impo an es en e las líneas
mic ogliales de oedo es y la mic oglía p ima ia (Ho a h e al., 2008),
po lo que los esul ados ob enidos deben ex apola se con p ecaución.
Además, ambién exis en di e encias en e la mic oglía in i o e in
i o, a ibuidas p incipalmen e a la di icul ad de cul i a mic oglía en
un es ado de eposo inac i o (Ha y y K a , 2008).
Las células mic ogliales pueden co-cul i a se con o os ipos
celula es, como las neu onas, o ealiza cul i os p ima ios
mesence álicos en los que se encuen an di e sos ipos celula es. En
es os cul i os mul icelula es pueden ealiza se es udios de la
neu oin lamación de la EP median e el uso de neu o oxinas (6-OHDA,
MPTP) o α-syn (Lopes e al., 2017).
1.2.2. Recep o es de angio ensina en la isiopa ología de la
en e medad de Pa kinson
La exp esión de di e en es componen es y ecep o es del SRA se
ha demos ado en las es uc u as ce eb ales elacionadas con la EP. En
la SNpc se han obse ado ecep o es AT1 y AT2 en neu onas
dopaminé gicas, as oci os y mic oglía de a as (Rod iguez-Palla es e
al., 2008), a ones (Jogla e al., 2009), p ima es no humanos
(Valenzuela e al., 2010; Ga ido-Gil e al., 2013, 2017) y ce eb os
humanos (Ga ido-Gil e al., 2013). Además, es os ecep o es ambién
se obse a on en neu onas dopaminé gicas y células gliales de cul i os
de células p ima ias de la egión mesence álica y a ias líneas celula es
neu onales y gliales (Rod iguez-Palla es e al., 2004, 2008; Jogla e
al., 2009; Rod iguez-Pe ez e al., 2015).
La elación en e el SRA y la EP ue de inida po p ime a ez po
Allen e al. (1992). A día de hoy, son nume osos los es udios en los que
se ha demos ado el papel de e minan e del SRA en di e sos p ocesos
pa ológicos implicados en la p og esión de la EP (G amma opoulos e

INTRODUCCIÓN
21
al., 2007; Zawada e al., 2011; Labandei a-Ga cia e al., 2017), como
son el en ejecimien o, el es és oxida i o y la neu oin lamación. O os
mecanismos impo an es que subyacen en la EP, como son los cambios
en el sis ema dopaminé gico nig oes ia al y la implicación de
ho monas sexuales, como los es ógenos, ambién se encuen an
es echamen e elacionados con el SRA ce eb al (Villa -Cheda e al.,
2010, 2014; Rod iguez-Pe ez e al., 2012).
 Es és oxida i o y neu oin lamación
El SRA ce eb al se ha elacionado, an o con p ocesos de es és
oxida i o y gene ación de ROS, como con la neu oin lamación en el
SNC.
La gene ación de ROS es esencial pa a el uncionamien o celula
pe o, una excesi a p oducción puede conduci a un es ado de es és
oxida i o (Li e al., 2013), que cons i uye un ac o p incipal de la
mue e neu onal dopaminé gica que cu sa en la EP (W igh e al.,
2012). En las neu onas, la ac i ación de los ejes Ang II/AT1 y
(P o) enina/PRR media p opiedades p o-oxida i as y p o-
in lama o ias, mien as que la ac i ación de los ejes Ang II/AT2 y
ECA2/Ang(1-7)/MasR media e ec os an i-in lama o ios (Cos a-Besada
e al., 2018). Las e idencias acumuladas sugie en que la ac i ación del
eje Ang II/AT1 inc emen e la p oducción de ROS, a a és del complejo
enzimá ico NOX. Se ha demos ado que NOX p oduce supe óxido
(SO), el cual ac i a las ías del ac o nuclea po enciado de las
cadenas lige as kappa de las células B ac i adas (NF-kB) y RhoA/Rho
quinasa (ROCK) (Jogla e al., 2009; Bo ajo e al., 2014b; Rod iguez-
Pe ez e al., 2015; Lopez-Lopez e al., 2021). Es impo an e des aca
que la ac i ación de los ecep o es AT1 nuclea es egula la exp esión
génica y desencadena a ios mecanismos que p o egen a las células
con a el es és oxida i o. En neu onas, el SRA nuclea aumen a la
exp esión del ecep o AT2 y del ANG, y ac i a los ejes Ang II/AT2 y
ECA2/Ang(1-7)/MasR pa a con a es a los e ec os p o-oxida i os de
la es imulación de los ecep o es AT1 (Villa -Cheda e al., 2017; Cos a-
Besada e al., 2018). En células mic ogliales es a elación es á menos
es udiada.
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
22
Di e sos es udios han demos ado que la ac i idad y exp esión de
los componen es y ecep o es del SRA desempeñan un papel
inmuno egulado , debido a que a ec a a la unción y eno ipo
mic oglial median e la ac i ación de los ecep o es AT1, AT2 y MasR
en mi ocond ias, núcleos y memb anas celula es (Ga ido-Gil e al.,
2013; Regenha d e al., 2013; Cos a-Besada e al., 2018). La espues a
p o-in lama o ia mediada po la es imulación del ecep o AT1 es un
mecanismo que exace ba la mue e neu onal e in lamación; mien as
que la espues a an i-in lama o ia, mediada po la es imulación del
ecep o AT2, conduce a la p oducción de ci oquinas an i-in lama o ias
y a la egulación posi i a de los ecep o es agocí icos que ayudan al
acla amien o sináp ico (Rod iguez-Palla es e al., 2008; Regenha d e
al., 2013; Fouda e al., 2017). La egulación de la exp esión de los
ecep o es de Ang II, en células mic ogliales es compleja, y puede
al e a se en e en os pa ológicos e in lama o ios, po lo que se necesi an
más es udios pa a escla ece los mecanismos que in e ienen en es a
compleja egulación.
 En ejecimien o
Muchos es udios han demos ado que los ni eles de los di e en es
componen es y ecep o es del SRA cambian a lo la go de la edad
acele ando la senescencia celula y dis unción de ejidos y ó ganos
median e mecanismos de es és oxida i o, in lamación, apop osis y
cambios ascula es (Cosa de elioglu e al., 2020). En el SRA ce eb al,
los ni eles de exp esión del ecep o AT1 es án egulados al alza en el
en ejecimien o (Abadi , 2011). También se obse ó que la exp esión
del eje Ang(1–7)/MasR disminuyó en a as en ejecidas (Cos a-Besada
e al., 2018). De mane a simila , di e sos es udios demos a on que la
sob eac i ación del eje Ang II/AT1/NOX ce eb al conduce a una mayo
ulne abilidad celula al es és oxida i o, debido a una disminución de
los ni eles de si uina ipo 3 (SIRT3), y que, además, los ejes de si uina
ipo 1 (SIRT1), y Ang II/AT1 se encuen an al e ados en animales
en ejecidos (Diaz-Ruiz e al., 2015; 2020).
INTRODUCCIÓN
23
 Sis ema dopaminé gico nig o-es ia al
Las in e acciones en e la DA y Ang II, an o en el ST como en la
SN de oedo es, se han demos ado en di e sos es udios (Villa -Cheda
e al., 2010, 2014). Pa icula men e, se ha obse ado que exis e una
egulación in e sa en e los ecep o es de Ang II y de DA. Una
disminución de los ni eles de DA conduce a un aumen o en la exp esión
de ecep o es AT1 en la SN y ST, lo que po encia la espues a
in lama o ia mic oglial y con ibuye a la mue e de neu onas
dopaminé gicas. Además, la DA ambién iene unción
inmunomodulado a, ya que se encuen a p esen e en células
inmuni a ias, an o en el SNC como en ejidos pe i é icos (A eola e
al., 2016). Es udios p e ios demues an que la DA desempeña un papel
an i-in lama o io a a és de la inhibición del SRA ce eb al, y que la
disminución de los ni eles de DA en las p ime as e apas de la EP y en
el en ejecimien o pueden p omo e la neu oin lamación y la
p og esión de la degene ación neu onal a a és de la hipe ac i ación
del eje p o-in lama o io del SRA median e los ecep o es AT1
(Dominguez-Meijide e al., 2017).
 Dimo ismo sexual y e ec o de las ho monas sexuales.
Di e sos es udios han mos ado la exis encia de un dimo ismo
sexual en el SRA ce eb al, lo que puede epe cu i en las espues as
in lama o ias mic ogliales y en p og esión de la EP. En los úl imos años
se ha demos ado que la pé dida de es ógenos puede conduci a la
ac i ación del eje p o-oxida i o del SRA y al aumen o de la
ulne abilidad de la mue e de neu onas dopaminé gicas en la SN de
oedo es (Rod iguez-Pe ez e al., 2010; 2011, 2012; Labandei a-Ga cia
e al., 2016). Se sabe que los e ec os an i-in lama o ios de los
es ógenos cons i uyen un mecanismo impo an e de neu op o ección
(Vege o e al., 2008). En consonancia con es o, di e sos es udios han
demos ado que el sis ema nig oes ia al de las a as macho mues a una
mayo ac i idad del eje p o-oxida i o del SRA en compa ación con las
a as hemb a (Rod iguez-Pe ez e al., 2011). Cu iosamen e, el
a amien o con un bloquean e del ecep o AT1 (ARAII),
especí icamen e con candesa án, educe signi ica i amen e la pé dida
de neu onas dopaminé gicas en a as menopáusicas o a iec omizadas
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
24
(Rod iguez-Pe ez e al., 2012), des acándose la impo ancia del
ecep o AT1 en las di e encias de sexo. La implicación de o os
componen es del SRA es á menos es udiado.
1.2.2.1.T a amien os modulado es de los ecep o es del SRA:
E ec o en neu oin lamación y degene ación
dopaminé gica
Ac ualmen e, las e apias a macológicas disponibles pa a la
EP se cen an en compensa la ausencia de señalización de DA en los
núcleos basales y esca a los sín omas mo o es ca dinales (Valdes y
Schneide , 2016; Kim e al., 2021), ya sea po la adminis ación de un
á maco, como el p ecu so de la DA, L-3,4-dihid oxi enilalanina (L-
DOPA) (Ca lsson e al., 1957; Bi kmaye y Ho nykiewicz, 1998), o po
la in e ención qui ú gica de la es imulación ce eb al p o unda (La son,
2014). Es as e apias son exclusi amen e sin omá icas, incapaces de
ena la pé dida p og esi a de neu onas dopaminé gicas y, aunque
p opo cionan bene icios de mejo a en los sín omas mo o es de EP a
co o plazo, la e apia c ónica puede da luga a luc uaciones mo o as
y discinesias (Kim e al., 2021). Se hace e iden e, po an o, la
necesidad de desa olla nue as e apias neu op o ec o as (Dong e al.,
2016).
En los úl imos años, la asa de descub imien o de á macos
pa a las en e medades neu odegene a i as ha sido in e io a la asa
media ob enida pa a o as indicaciones e apéu icas (Wong e al.,
2019). Una de las azones de es a al a de éxi o puede a ibui se a la
complejidad e iológica y a las nume osas ías biológicas implicadas en
la neu odegene ación (Kim e al., 2021). Así, la búsqueda de
bioma cado es emp anos de la en e medad y, de una diana e apéu ica
común de la mayo ía de los e en os pa ológicos que ocu en en la EP,
pod ía se una buena es a egia pa a el desa ollo de e apias
neu op o ec o as.
En apa ados an e io es se ha de inido que el en ejecimien o,
el es és oxida i o y la neu oin lamación son ac o es de e minan es en
el desa ollo y p og esión de la mue e neu onal dopaminé gica que
cu sa la EP, y se ha desc i o como odos es os ac o es son egulados
INTRODUCCIÓN
31
es udios han demos ado que los AT1-AA p oducen libe ación de Ca++
en células endo eliales del músculo liso, lo que conduce a al e aciones
ascula es (Sun e al., 2008). Además, el e ec o de los AT1-AA es
bloqueado po el uso de ARAII como el alsa án (Wang e al., 2017)
e i besa án (Wenzel e al., 2011).
La causa que o igina la p oducción de AT1-AA no ha sido del odo
dilucidada. Sin emba go, la in lamación pe i é ica pa ece se un
mecanismo implicado en la libe ación de an ígenos pa a la p oducción
de los au oan icue pos (LaMa ca e al., 2009; Pa ish e al., 2010;
Mis y y Kaplan, 2017). Di e en es es udios han demos ado que la
in usión de ci oquinas ci culan es, como el miemb o 14 de la
supe amilia del ac o de nec osis umo al (TNFSF14 / LIGHT) (Luo
e al., 2016) e IL-17 (Dhillion e al., 2012) son es imulado es de la
p oducción de AT1-AA en modelos animales.
Cu iosamen e en Me S se ha demos ado un aumen o en
mediado es p o-in lama o ios sé icos (Whi on, 2007; Ha lid e al.,
2017), mien as que o os es udios demues an que una die a ica en
g asa p omue e la p oducción de AA en animales de expe imen ación
(A ai e al., 2013). Además, es udios ecien es, mues an que el Me S
conduce a in lamación e hipe ac i ación del SRA an o del ejido
adiposo como del ci culan e (Ramkuma y Kohan, 2019; Schu en e
al., 2017). O o es udio demos ó que el desa ollo de obesidad en un
modelo animal induce un aumen o en los ni eles de Ang II ci culan e y
un aumen o en los ni eles sé icos de LIGHT (Ha lid e al., 2017), el
cual es capaz de ac i a el enzima ansglu aminasa 2 (TG2). Es e
enzima se ha is o implicada en mecanismos de glicosilación del
ecep o AT1, lo que pod ía p omo e la p oducción de neoan ígenos
pa a p oduci AT1-AA (Liu e al., 2017a).
Sin emba go, los ni eles de AA en e a ecep o es del SRA no se
han es udiado de o ma especí ica en modelos animales de Me S, y aún
se desconoce has a qué pun o es as espues as inmuni a ias pe i é icas
con ibuyen a la al e ación de los ecep o es del SRA ce eb al, así como
al inicio y p og esión de la EP.

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
32
Además, la p og esión y la g a edad de a ios p ocesos
elacionados con la in lamación pe i é ica se han asociado con la
p esencia de au oan icue pos en e a o os componen es del SRA,
como los au oan icue pos en e al enzima ECA2 (ACE2-AA). Su
unción se ha elacionado con la inhibición de la unción ca alí ica del
enzima ECA2, lo que p o oca una disminución en la sín esis de Ang(1-
7) y, po an o, una disminución del eje an i-in lama o io del SRA
(Takahashi e al., 2010). Sin emba go, la causa y mecanismos de su
p oducción aún no es á de inida.
1.3.2. In lamación pe i é ica aguda y ecep o es de
angio ensina: COVID-19
En el úl imo año se ha des acado la elación en e el SRA y el
SARS-CoV-2, debido a que el ECA2 de la memb ana celula se ha
iden i icado como el ecep o uncional de en ada del i us (Wan e al.,
2020; Xu e al., 2020).
Uno de los e en os isiopa ológicos asociados a la in ección de
SARS-CoV-2 y que, aumen a la g a edad de la COVID-19, es la
espues a in lama o ia sis émica aguda conocida como o men a de
ci oquinas (Po ales e al., 2022). La en ada del SARS-CoV a la célula
media la libe ación, isula y sé ica, de di e en es ipos de ci oquinas
p o-in lama o ias, es ableciendo un es ado de in lamación pe i é ica
aguda en el o ganismo (Cheung e al., 2005; Jiang e al., 2005; Chen e
al., 2010). En apa ados an e io es, se de ine que la in lamación
pe i é ica c ónica asociada al en ejecimien o puede p o oca cambios
en la exp esión del ECA2, y o os ecep o es del SRA, en células
ce eb ales (Labandei a-Ga cia e al., 2011; Cos a-Besada e al., 2018;
Diaz e al., 2020). Po an o, la in lamación pe i é ica aguda asociada a
la COVID-19 pod ía p omo e cambios en la exp esión de di e en es
ecep o es y componen es del SRA pulmona , lo cual a su ez, pod ía
p omo e una mayo se e idad en la p og esión de es a en e medad.
1.4.SISTEMA RENINA-ANGIOTENSINA PULMONAR Y SARS-COV-2
En los úl imos años, la in ección de SARS-CoV-2 ha gene ado una
pandemia esponsable de más de 600 millones de casos de in ección y
INTRODUCCIÓN
33
más de 6 millones de mue es acumuladas según la O ganización
Mundial de la Salud.
Los p incipales sín omas de COVID-19 son espi a o ios, sin emba go,
los al os ni eles de ci oquinas asociados a la in ección i al p o ocan
sínd ome de di icul ad espi a o ia aguda, insu iciencia o gánica y
coagulopa ía diseminada, lesiones ca díacas y enales agudas, a i mias,
anomalías de la unción in es inal y hepá ica, así como complicaciones
neu ológicas (Gheblawi e al., 2020; Guo e al., 2020; Sulze e al.,
2020; Mascolo e al., 2021).
El mecanismo de en ada del i us SARS-CoV-2 se ealiza median e
una p o eína de su supe icie celula denominada p o eína Spike, que es
esponsable de uni se al ECA2 de memb ana. Especí icamen e, la
p o eína Spike o ma un íme o y cada monóme o albe ga un dominio
de unión al ecep o (RBD, del inglés Recep o Binding Domain) que
in e ac úa con el ECA2 p esen e en la supe icie celula (Xu e al.,
2020), o mando un complejo de unión dis in o del si io ca alí ico de
ECA2 (Gheblawi e al., 2020; Bian y Li, 2021). Además, el SARSCoV-
2 ha e olucionado pa a u iliza una amplia gama de p o easas del
huésped celula que incluyen ca epsina L, ca epsina B, ipsina, ac o
X, elas asa, u ina y TMPRSS2 (p o easa ansmemb ana se ina 2 del
inglés ansmemb ane p o ease se ine 2) pa a p epa a a la p o eína
Spike, así como a su ecep o ECA2, y acili a su en ada a la célula
(Mille y Whi ake , 2015; Gheblawi e al., 2020).
1.4.1. Enzima con e so a de Angio ensina II (ECA2) como
ecep o de SARS-CoV-2
La exp esión del ácido ibonucleico mensaje o (ARNm) de ECA2
se ha demos ado p ác icamen e en odos los ó ganos (Ha me e al.,
2002). En el ac o espi a o io, la mayo ía (ap oximadamen e el 83%)
de las células que exp esan ECA2 son células del epi elio al eola ipo
II (Zou e al., 2020). Sin emba go, ECA2 ambién se exp esa en o os
ejidos, incluidos el co azón, el iñón, el endo elio, el in es ino delgado
y ce eb o (C ackowe e al., 2002; Hamming e al., 2004; Danilczyk e
al., 2006; Cos a-Besada e al., 2018). El ECA2 desempeña un papel
cla e en el equilib io de los componen es y ecep o es del SRA, una
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
34
disminución en sus ni eles de exp esión puede p o oca un es ado p o-
in lama o io y p o-oxida i o, que puede conduci al desa ollo de
di e sas en e medades como la insu iciencia ca díaca, in a o de
mioca dio, hipe ensión y en e medad pulmona (Gheblawi e al.,
2020). La in ección de SARS-CoV-2 p oduce una disminución en la
exp esión de ECA2 a a és de dos ías: po la ía endocí ica y po la
ía p o eolí ica:
-Endoci osis mediada po ecep o : el i us se in oduce en el
ci oplasma celula median e la o mación de un endosoma, que
con iene ambién el ecep o de memb ana ECA2. La p incipal ía
endocí ica pa a SARS-CoV es la dependien e de cla ina (Inoue e
al., 2007). Además, se encon ó endoci osis dependien e de balsas
lipídicas como una nue a ía de en ada especializada de SARS-
CoV (Lu e al., 2008).
-Fusión de memb ana: la usión di ec a de la memb ana plasmá ica
es á mediada po TMPRSS2, y a di e encia de la endoci osis
mediada po ecep o , el ECA2 pa icipa sólo en la de ención y
ijación del i us en la supe icie, mien as que TMPRSS2 es la
enca gada de induci la usión de la memb ana en e el i us y la
célula huésped (Ho mann e al., 2020).
Sin emba go, odos los mecanismos de en ada de SARS-CoV-2 se
es án iendo suje os a una al a a iabilidad en los esul ados de
in es igación. Resul a e iden e la necesidad de más ensayos
expe imen ales que ayuden a de e mina los di e en es mecanismos y
qué papel ienen las di e en es p o eínas asociadas al mecanismos de
en ada del i us en di e en es ipos celula es.
Además de la o ma ansmemb ana, ECA2 ambién se ha
encon ado en o ma soluble en plasma y o ina (Shal ou e al., 2007).
Es a o ma se p oduce p incipalemen e po la acción de dos p o easas
(dominio 17 de desin eg ina y me alopep idasa (ADAM17) y
TMPRSS2, que ealizan una escisión p o eolí ica del dominio
ex acelula de ECA2, p oceso conocido como desp endimien o
(Lambe e al., 2005). Los e ec os de la ECA2 soluble aún p esen an
con o e sia, pe o se sugie e que el enzima pie de la ac i idad
INTRODUCCIÓN
35
ca alí ica. Especí icamen e, la ac i idad de ADAM17 se egula al alza
as la unión del SARS-CoV-2 y ECA2, acili ando la en ada i al (Liu
e al., 2020), así como la pé dida de exp esión de ECA2 de memb ana.
Es a pé dida p omue e la acumulación de Ang II, lo que se ha
co obo ado con es udios que demues an un aumen o signi ica i o en
los ni eles de Ang II en mues as de plasma de pacien es in ec ados con
SARS-CoV-2 (Liu e al., 2020), y és os ni eles se co elaciona on con
la ca ga i al y la lesión pulmona (Bian y Li, 2021). El aumen o de
Ang II, con la consecuen e ac i ación del ecep o AT1, desencadena
una cascada de señalización que ac i a MAPK y p oduce la
os o ilación de ADAM17 po la o mación de ROS inducidas po
NOX (Sco e al., 2011). Es a os o ilación aumen a la ac i idad de la
p o easa, es ableciéndose una e oalimen ación posi i a en la que los
ecep o es del SRA ienen un papel cla e.
La exp esión y ac i idad del enzima ECA2 ambién puede e se
al e ada po o os mecanismos independien es de la in ección de SARS-
CoV-2, y, que de o ma indi ec a pueden a ec a a su en ada celula .
Algunos ac o es implicados en la inac i ación ca alí ica de ECA2 son
la p esencia de ci oquinas p o-in lama o ias (Chen e al., 2020) y la
acción de la aldos e ona a a és de la ía NOX (Keida e al., 2005).
Recien emen e, se ha demos ado la in e acción del ECA2 de
memb ana con ecep o es acoplados a p o eínas G del SRA en ejido
pulmona de a ón adul o (F anco e al., 2020). Se ha demos ado que
la in e acción de ECA2 con el ecep o AT1 conduce a una disminución
de la exp esión de ECA2 de memb ana, mien as que la in e acción con
AT2 conduce a un aumen o de exp esión de ECA2 (F anco e al., 2020).
Po ello, la exp esión de o os ecep o es del SRA ambién ienen un
papel ele an e en la in ección de SARS-CoV-2. Se sugie e que los
cambios en los ni eles de exp esión son compensa o ios en luga de
causales, ya que el SRA puede cambia su equilib io pa a es au a la
homeos asis y e i a el daño isula , es ableciéndose una egulación
dinámica (Sma e al., 2020).
Así mismo, la exp esión de los di e en es ecep o es del SRA se e
al e ada con el uso de a amien os modulado es del SRA y sus
ecep o es, y que, además, son ampliamen e u ilizados, como los an i-
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
36
in lama o ios no es e oideos (ibup o eno), los bloquean es del ecep o
AT1 (ARAII) y los inhibido es de ECA (IECAs). Po ello, se ha
gene ado una g an con o e sia sob e si el uso de IECAs o ARAII
puede aumen a el iesgo de in ección i al, y, si los pacien es
hipe ensos, deben sus i ui es os a amien os an i-hipe ensi os (Bian
y Li, 2021).
1.4.1.1.E ec o del bloqueo de ecep o es de angio ensina o de
ECA sob e ECA2
Aunque el ECA2 no es la diana celula di ec a de los ARAII,
an o su ansc ipción, aducción y ac i idad ca alí ica se en
modi icadas po el uso de es os a amien os debido a la in e conec ada
na u aleza del SRA (Gheblawi e al., 2020; Labandei a-Ga cia e al.,
2022). El uso de IECA y ARAII, inhibe el eje ECA/Ang II/AT1
po enciando los e ec os del ECA2 como con a egulado endógeno del
SRA (Gheblawi e al., 2020; Labandei a-Ga cia e al., 2022).
Ac ualmen e, exis e una al a con o e sia sob e cómo a ec an es os
a amien os a la exp esión de ECA2. Es udios ecien es han
demos ado que los ARAII aumen an de mane a cons an e la exp esión
de ARNm, los ni eles de p o eína y la ac i idad ca alí ica de ECA2 en
co azón, iñón y ao a o ácica, pe o los ni eles en la exp esión y en la
ac i idad di ie en en e los modelos expe imen ales (Gheblawi e al.,
2020). O os es udios demos a on que los IECAs, lisinop il y enalap il,
pueden aumen a la exp esión del ARNm de ECA2 en co azón de un
modelo de hipe ensión (Jessup e al., 2006) y de un modelo de in a o
de mioca dio (Oca anza e al., 2006) en a as. Además, o o es udio
demos ó que el IECA pe indop il ue capaz de aumen a la exp esión
hepá ica de ECA2 en condiciones de ib osis hepá ica en un modelo de
a a (Huang e al., 2010). Sin emba go, o o es udio demos ó que el
IECA amip il no aumen ó la exp esión de ECA2 después de un in a o
de mioca dio en un modelo de a a (Bu chill e al., 2012). La
con o e sia en los di e en es es udios puede debe se a a ias azones.
Una de ellas es la egulación especí ica a ni el isula de ECA2, ya que
se ha demos ado que los ni eles de ARNm más al os se encuen an en
el co azón mien as que su ac i idad ca alí ica es más al a en iñón
(Gemba d e al., 2005). O a azón puede debe se a las di e en es dosis

INTRODUCCIÓN
37
y iempos de a amien os u ilizados en los di e en es es udios, así como
los di e en es modelos de in lamación u ilizados. Resul a e iden e que
la egulación de la exp esión y de la ac i idad de ECA2 po inhibido es
del SRA equie e una ca ac e ización adicional, sob e odo en ejidos
p incipalmen e a ec ados po la in ección de SARS-CoV-2, como es el
caso del pulmón, pa a pode conclui su e ec o, ad e so o bene icioso,
en los pacien es in ec ados po SARS-CoV-2 (Labandei a-Ga cia e al.,
2022).
1.4.1.2.E ec o de modulado es indi ec os de ecep o es de
angio ensina sob e ECA2. An i-in lama o ios no
es e oideos
Además de las posibles consecuencias de la adminis ación de
á macos inhibido es/bloquean es de ecep o es del SRA a pacien es
con COVID-19, la segu idad de los an i-in lama o ios no es e oideos,
en pa icula el ibup o eno, ambién ha sido ampliamen e cues ionada
(Moo e e al., 2020). Muchos es udios han discu ido si el ibup o eno
aumen a o disminuye la exp esión de ECA2 en pulmón y, po an o, si
a ec a a la en ada del SARS-CoV-2 (Labandei a-Ga cia e al., 2022).
El p incipal mecanismo de acción del ibup o eno es la
inhibición del enzima COX-2. Es udios p e ios mues an in e acciones
en e COX-2 y ecep o es del SRA en a ios ejidos (Wu e al., 2005).
Po un lado, se ha demos ado que COX-2 aumen a la libe ación de
enina y la o mación de Ang II, lo que p o oca un aumen o en la
p esión a e ial po la ac i ación del ecep o AT1 (Quad i e al., 2016).
Po o o lado, la ac i ación del eje Ang II/AT1 conduce a la p oducción
de mediado es in lama o ios en e los que se encuen a COX-2 (Suzuki
e al., 2003). En es e caso, el ibup o eno puede mejo a la espues a del
eje p o ec o ECA2/Ang(1-7)/MasR al inhibi la espues a de los
ecep o es del eje p o-in lama o io del SRA (Sma e al., 2020).
Los an i-in lama o ios no es e oideos ambién pa icipan en la
inhibición de la ac i idad de NF-kβ du an e un es ado de in lamación.
El ac o de ansc ipción NF-kβ con ola la exp esión de COX-2, en e
una g an can idad de o os mediado es in lama o ios, y iene múl iples
implicaciones en la pa ogénesis de la in ección po SARS-CoV-2. En
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
38
p ime luga , se obse a que la inhibición de NF-kβ e i a la
sob eexp esión enal del ecep o AT1 en un modelo animal de a as
obesas (Luo e al., 2015). En segundo luga , o o es udio, u ilizando
células endo eliales pulmona es, se ha obse ado que NF-kβ es
u ilizado po el i us SARS-CoV pa a egula al alza el mic o-ARN-
200c-3p, esponsable de egula a la baja la ECA2 (Liu e al., 2017b).
Po an o, la segu idad del uso de ibup o eno en la in ección po SARS-
CoV-2 se ha cues ionado debido a su capacidad de egula al alza la
exp esión de ECA2 en di e en es modelos animales, como, po
ejemplo, en ib osis miocá dica de a as diabé icas (Qiao e al., 2015).
Sin emba go, el mecanismo di ec o po el que lle a a cabo es e p oceso
aún es desconocido.
Po an o, di e sos es udios pos ulan, que el aumen o de ECA2
en el ejido pulmona , ya sea po el a amien o de an i-in lama o ios no
es e oideos como el ibup o eno, de bloquean es del ecep o AT1
(ARAII) o de inhibido es de ECA (IECAs), conduci ía a una mayo
suscep ibilidad a la in ección i al po SARS-CoV-2, aumen ando la
g a edad de la in ección y conduciendo a un peo p onós ico. Sin
emba go, muchos o os es udios han demos ado que un aumen o en la
ac i idad de ECA2 es esencial pa a equilib a el SRA hacia la espues a
an i-in lama o ia y, po an o, inhibi espues as p o-in lama o ias. Así,
a ios es udios p e ios han demos ado e ec os p o ec o es de la
ac i ación del eje ECA2/Ang(1-7) en modelos expe imen ales de
lesiones pulmona es (Rockx e al., 2009; Klein e al.,2013; Sa zani e
al., 2020). Po an o, se necesi an más es udios pa a es ablece los
mecanismos de egulación del ECA2, y o os ecep o es del SRA, po
pa e de dichos a amien os, así como su in luencia, bene iciosa o
pe judicial, en la in ección e in lamación ocasionada po SARS-CoV-2
(Figu a 3).
INTRODUCCIÓN
39
Figu a 3: Rep esen ación esquemá ica de la doble unción de ECA2 en la in lamación
pulmona inducida po la in ección po SARS-CoV-2. El enzima ECA2 (enzima con e so a
de angio ensina II) es esponsable de la con e sión de Ang II (angio ensina II) en
Angio ensina(1-7) y, po an o, de egula el SRA (Sis ema Renina-Angio ensina) hacia el eje
an i-in lama o io, disminuyendo la ac i idad del eje p o-in lama o io mediado po Ang II/AT1
( ecep o es de angio ensina ipo1) (1). Po o o lado, el ECA2 es el ecep o de en ada celula
del i us SARS-CoV-2 (co ona i us de ipo 2 causan e del sínd ome espi a o io agudo se e o
2), po lo que su exp esión puede asocia se con una mayo suscep ibilidad y un aumen o en la
g a edad de la in ección que desemboca en un inc emen o de la in lamación pulmona (2).

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
44
co espondien e de la Uni e sidad de San iago de Compos ela. Los
p ocedimien os ue on desa ollados en el cen o usua io au o izado de
la Facul ad de Medicina de la Uni e sidad de San iago de Compos ela,
bajo el egis o REGA: ES150780263401 y en el Cen o de
Biomedicina Expe imen al de la Uni e sidad de San iago de
Compos ela (CEBEGA), enma cados en el p oyec o au o izado pa a
expe imen ación animal con los códigos 15005/15/002 y
5012/2021/012. Los animales dispusie on de un pe íodo mínimo de
aclima ación de 7 días an es del comienzo de los expe imen os y
ninguno ue some ido a es udios p e ios.
Pa a el es udio se u iliza on un o al de 220 a as macho adul as que
se di idie on alea o iamen e en es g andes g upos (ANEXO I, Tabla
I):
-G upo A: o mado po a as lesionadas median e la inyección
es e eo áxica unila e al en el mesencé alo de echo y sac i icadas a la
semana de la lesión (Expe imen o I). Los animales del g upo A (n =
50) ue on dis ibuidos en es subg upos:
-G upo A1: o mado po a as lesionadas con AAV9-α-syn-WT
(n = 5) y un g upo de a as lesionadas a adas simul áneamen e
con candesa án (n = 5) o elmisa án (n = 5), desde 1 semana
an es de la lesión has a el sac i icio.
-G upo A2: o mado po a as lesionadas con AAV9-α-syn-
A53T (n = 5) y un g upo de a as lesionadas a adas
simul áneamen e con candesa án (n = 5) o elmisa án (n = 5),
desde 1 semana an es de la lesión has a el sac i icio.
-G upo A3: o mado po a as con ol (sin lesión es e eo áxica;
n = 5) y po a as lesionadas en el mesencé alo de echo median e
la inyección es e eo áxica de solución salina (n = 5), o de
ec o es AAV9 neu oespecí icos acíos (Ф) (AAV9- acío; n =
5), o de AAV9 neu oespecí icos que exp esan p o eína e de
luo escen e (GFP) humana (n = 5), desde 1 semana an es de la
lesión has a el sac i icio.
MATERIAL Y MÉTODOS
45
-G upo B: o mado po a as lesionadas median e la inyección
es e eo áxica unila e al en el mesencé alo de echo y sac i icadas a las
cua o semanas pos -lesión (Expe imen o II). Los animales del g upo
B (n = 170) ue on dis ibuidos en es subg upos:
-G upo B1: o mado po (1) a as lesionadas con AAV9-α-syn-
WT (n = 21), (2) a as lesionadas a adas simul áneamen e con
candesa án (n = 18) o elmisa án (n = 18).
- G upo B2: o mado po (1) a as lesionadas con AAV9-α-syn-
A53T (n = 21); (2) a as lesionadas a adas simul áneamen e
con candesa án (n=18) ó (3) elmisa án (n = 18).
-G upo B3: o mado po (1) a as con ol (sin lesión
es e eo áxica; n = 15); (2) a as lesionadas en el mesencé alo
de echo median e la inyección es e eo áxica de solución salina
(n = 15), ó (3) de ec o es AAV9 neu oespecí icos acíos (Ф)
(AAV9- acío; n = 14), ó (4) de AAV9 neu oespecí icos que
exp esan p o eína e de luo escen e (GFP) humana (n = 12).
Los a amien os con los bloquean es del ecep o AT1,
candesa án o elmisa án, de los g upos de animales A y B se
adminis a on po ía o al, dispe sos en la mínima can idad
necesa ia de c ema de a ellanas (“Nocilla”; Nu expa,
Ba celona, España). Los a amien os se inicia on una semana
an es de la inyección es e eo áxica y se man u ie on has a el
sac i icio de los animales con una dosis de 1mg/Kg/día pa a
ambos á macos, seleccionadas en base a esul ados p e ios
ob enidos en nues o labo a o io (Ga ido-Gil e al., 2012;
Rod iguez-Pe ez e al., 2012). Los animales del g upo con ol
A3 y B3 ecibie on únicamen e la c ema de a ellanas. Los
a amien os ue on adminis ados en e las 9:00-10:00h de cada
día.
Pa a el sac i icio, los animales ue on anes esiados con la
combinación de ke amina (50mg/kg) / mede omidina (0,4mg/kg)
inyec ada in ape i onealmen e.
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
46
Una pa e de las a as de los di e en es g upos se pe undió con el
in de ealiza los es udios his ológicos, en los que se analizó la
sob eexp esión de α-syn o GFP o α-syn os o ilada en las neu onas
dopaminé gicas, en las células mic ogliales y en as oci os de la SNpc
median e doble inmuno luo escencia y mic oscopía con ocal de ba ido
láse . También se ealizó inmunohis oquímica pa a de e mina la
mue e de células dopaminé gicas (jun o con una inción Nissl) o la
espues a in lama o ia mic oglial.
O a pa e de las a as de los di e en es g upos ue u ilizada pa a
de e mina los ni eles de exp esión de ecep o es del SRA y
ma cado es de ac i idad mic oglial, así como medidas de ac i idad
enzimá ica. Pa a ello, los ce eb os ue on ex aídos, la egión de la
SNpc disecada y congelada inmedia amen e en ni ógeno líquido y
pos e io men e, almacenada en -80ºC. Sob e es e ma e ial se ealiza on
de e minaciones de RT-qPCR ( eacción en cadena de la polime asa con
ansc ip asa in e sa, del inglés e e se ansc ip ase polyme ase chain
eac ion), WB (Wes e n Blo ) y ensayos enzimá icos pa a de e mina
la exp esión del ecep o AT1, ac i idad NOX, ma cado es de ac i idad
agocí ica (CD68, clus e de di e enciación 68), y ma cado es de
mic oglía con eno ipo p o-oxidan e como iNOS (óxido ní ico sin asa
inducible), TNF-α, IL- 1β e IL-6 y an i-oxidan e(ARG-1).
3.1.2. Modelo de lesión con AAV9-α-syn-WT y AAV9-α-syn-
A53T en a as
El modelo de EP basado en la sob eexp esión de la p o eína α-syn
humana se ealizó median e la inyección es e eo áxica unila e al de los
AAV9-α-syn-WT o AAV9-α-syn-A53T (G upos A y B) y salino,
AAV9- acío o AAV9-GFP (G upo C).
Todos los ec o es i ales u ilizados en el p esen e modelo ue on
sin e izados y diseñados en el labo a o io de Neu oana omía de los
Ganglios Basales del D . José Luis Lanciego, en el Cen o de
In es igación Médica Aplicada de la Uni e sidad de Na a a, España.
Pa a ealiza la ci ugía, los animales ue on anes esiados con una
inyección in ape i oneal de una combinación de ke amina (50mg/kg) /
mede omidina (0,4mg/kg) y ue on colocados en el apa a o de
MATERIAL Y MÉTODOS
47
es e eo axia (Kop Ins umen s) con la ba a den al a -2,3 mm. La
inyección se ealizó en el mesencé alo do sal de echo siguiendo las
coo denadas: -5,4 mm an e io al b egma, -1,9 mm a la de echa de la
línea media y -7,0 mm en al a la du amad e (Paxinos y Wa son,
1986). La solución se inyec ó usando una je inga Hamil on de 5μl
acoplada a un inyec o moni o izado (S oeling), a una elocidad de
0,5μl/min (2µl pa a el g upo AAV9-α-syn-WT y 1µl AAV9-α-syn-
A53T) y la aguja se man u o in si u en o no a 10 minu os una ez se
ealizó la inyección pa a e i a el e lujo del ec o i al a a és del
ac o de la inyección.
3.1.3. P uebas de compo amien o mo o del modelo de lesión
con α-syn
T as 4 semanas de lesión se ealiza on p uebas de compo amien o
animal pa a e alua la e icacia de la lesión dopaminé gica inducida po
la inyección de AAV9-α-syn-WT o AAV9-α-syn-A53T, así como el
e ec o neu op o ec o de los ARAII, candesa án y elmisa án. Todas
las p uebas mo o as se ealiza on du an e el pe íodo de oscu idad, en el
cual los animales se encuen an en su ase ac i a del ciclo.
-Tes del cilind o: se ealizó pa a e alua la acinesia de las
ex emidades an e io es (Schalle e al., 1997). Los animales se
coloca on indi idualmen e en un cilind o de id io de 20cm de
diáme o con dos espejos, pa a pe mi i la isualización desde
odas las di ecciones. Los animales ue on g abados en ideo y
se con ó el núme o de con ac os que ealizan con cada una de
sus ex emidades an e io es en la pa ed del cilind o, has a un
o al de 20 con ac os. Los da os se exp esa on como po cen aje
de con ac os con la ex emidad impedida en elación con el o al.
-Tes de ac i idad locomo o a: la ac i idad locomo o a global
de los animales se moni o izó au omá icamen e con un
analizado de mo imien o Videomex-X (Columbus
Ins umen s), el cual ealiza un ídeo que moni o iza la imagen
a iempo eal (20 o og amas po segundo; Rozas e al., 1996).
Con el p og ama de moni o ización de mo imien o múl iple se
es imó la ac i idad o al ( asa de mo imien o) que ep esen a la
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
48
can idad de cambios en la imagen de un o og ama a o o. De
es e modo, el p og ama cuen a el núme o de cambios de píxeles
causados po los mo imien os de cada animal. El ensayo se
lle ó a cabo en una caja abie a de pa edes y suelo neg os, con
las siguien es dimensiones: 70 x 75 x 40 cm. Cada animal se
aclima ó du an e, al menos, 10 minu os, y se moni o izó la
ac i idad locomo o a du an e 30 minu os.
-Tes del o a od: pe mi e una e aluación au oma izada de los
dé ici s mo o es gene ales ocasionados en modelos de EP y una
iden i icación de los cambios inducidos po a amien os
neu op o ec o es (Rozas e al., 1997). Se ealizó con una unidad
de o a od au oma izada de 4 ca iles (CR-1 Ro amex Sys em,
Columbus Ins umen s, Columbus, OH) aplicando un p o ocolo
de elocidad de o ación acele ada. Los animales ue on
colocados en la ba a gi a o ia, a una elocidad inicial de 4
e oluciones po minu o ( pm). A con inuación, se inc emen ó
la elocidad de la ba a has a 44 pm du an e 90 segundos, y se
egis ó el iempo o al de ca e a sob e la ba a. Los animales
ue on en enados 2 días consecu i os pa a alcanza un
endimien o es able en la p ueba, y los da os se oma on en los
3 días siguien es de o ma consecu i a. Los esul ados se
ob u ie on como la media de los 3 días pa a cada animal.
Finalmen e, se p esen a on los esul ados de cada animal como
el á ea bajo la cu a (AUC del inglés A ea Unde Cu e; Rozas
e al., 1997; Lundblad e al., 2003).
3.1.4. Técnicas de inmunohis oquímica e
inmuno luo escencia en el modelo de lesión con α-syn
La écnica de inmunohis oquímica se ealizó pa a con i ma la
lesión dopaminé gica median e el ma caje y con aje de células
inmuno eac i as al ma cado de i osina hid oxilasa (TH-i , jun o con
una inción de Nissl) y pa a es udia la espues a in lama o ia mic oglial
median e el ma caje y con aje de células inmuno eac i as pa a MHC
de clase II (OX-6-i ).

MATERIAL Y MÉTODOS
49
Los animales ue on anes esiados y pe undidos con 0,9% de salino
e inmedia amen e después con pa a o maldehído ío al 4% en 0,2M de
ampón os a o (0,162M de Na2HPO4 y 0,036M NaH2PO4), a pH 7,4.
T as la pe usión, los ce eb os ue on ex aídos, la ados y almacenados
du an e 48 ho as en una solución c iop o ec o a ( ampón os a o con
20% de saca osa) a 4ºC. A con inuación, el ejido ue co ado en
secciones de 40 μm usando un mic o omo de congelación y se
almacena on en una solución c iop o ec o a a -20ºC has a su
p ocesamien o.
En p ime luga , se selecciona on secciones a ni el de la SN y del
ST. Las secciones de ejido ue on incubadas 1 ho a a empe a u a
ambien e en una solución con 10% de sue o po cino no mal, 0,25% de
T i on X-100 en 20mM de PBS (bu e os a o salino) po ásico (KPBS)
que con enían 1% de BSA (se oalbúmina bo ina, del inglés bo ine
se um albumin) (KPBS-BSA). Pos e io men e las secciones ue on
incubadas a 4ºC du an e oda la noche con los an icue pos p ima ios
co espondien es (Tabla 2).
Ti osina hid oxilasa (TH): se a a del enzima limi an e en la
sín esis de DA, conside ándose un ma cado de neu onas
dopaminé gicas. Se u ilizó, po an o, un an icue po p ima io
an i-TH (1:10.000, T2928, Sigma; e Tabla 2)
MHC de clase II (OX-6): se a a de un complejo p o eico que
desempeña un papel impo an e an o en la espues a
inmuni a ia inna a como en la adap a i a, y se ha demos ado su
exp esión en mic oglía po inducción de α-syn en
expe imen ación in i o e in i o (Ha ms e al., 2013). Se
conside a un ma cado de mic oglía con espues a in lama o ia,
po lo que se u ilizó un an icue po an i-MHCII (1:50, MCA46G,
BioRad, e Tabla 2).
Todos los an icue pos p ima ios ue on diluidos en una solución
con 2% de sue o no mal de caballo, 0,25% de T i on X-100 en 20mM
de KPBS con un 1% de BSA. Al día siguien e, las secciones se
incuba on du an e 90 minu os en los co espondien es an icue pos
secunda ios bio inilados (caballo an i- a ón, 1:200, e Tabla 3) y, a
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
50
con inuación, se a a on du an e 90 minu os con un complejo a idina-
bio ina-pe oxidasa (1:50, Vec o , Bu lingame, CA) a empe a u a
ambien e. Finalmen e, las secciones se e ela on con 0,04% de
pe óxido de hid ogeno y 0,005 % de 3,3´-diaminobezidina (DAB). Pa a
in ensi ica la inción mic oglial (OX-6) se añadió 0,1% de níquel a la
solución del e elado. Pa a la inción de con ol nega i o, las secciones
se incuba on en solución, sin an icue pos p ima ios. Una ez e eladas,
las secciones se mon a on en po aobje os ecubie os de gela ina pa a
su isualización. Las mic o o og a ías ue on ealizadas empleando el
mic oscopio Eclipse, NIKON (139263, Japón).
Pa a con i ma la mue e de las células dopaminé gicas, y no sólo
la disminución de la ac i idad enzimá ica de TH, se ealizó una inción
de Nissl. Pa a ello se selecciona on secciones a ni el de SN, se
mon a on en po aobje os ecubie os con gela ina y se iñe on du an e
5 minu os con iole a de C esilo al 1% (C0775, Sigma) disuel o en agua
des ilada. A con inuación, las secciones eñidas se deshid a a on
median e e anol g aduado (100%, 95%, 70% y 50%), se acla a on en
xileno du an e 5 minu os, se mon a on con medio de mon aje DPX
(Pan eac Applichem, Ba celona, España) y se cub ie on con un
po aobje os pa a su pos e io isualización y con aje.
La écnica de inmuno luo escencia se ealizó pa a con i ma la
sob eexp esión y colocalización de α-syn, GFP o α-syn os o ilada en
las neu onas dopaminé gicas (TH-i ), las células mic ogliales (Iba-1-i ,
molécula adap ado a de unión a calcio ionizado 1, del inglés Ionized
calcium binding adap o molecule 1), y as oci os (GFAP-i , p o eína
ácida ib ila glial, del inglés an i-glial ib illa y acidic p o ein) en la
SNpc u ilizando mic oscopía con ocal de ba ido láse .
Los ce eb os ue on p ocesados como se ha desc i o an e io men e
y las secciones co espondien es al ni el de la SNpc ue on u ilizadas
pa a el es udio.
Pa a el análisis de exp esión de la p o eína α-syn humana en los
di e en es ipos celula es, se ealizó una ecupe ación an igénica en las
secciones. Pa a ello, las secciones ue on incubadas a 37ºC du an e 30
minu os en ampón ci a o de sodio (10 mM de ci a o de sodio, 0,05%
MATERIAL Y MÉTODOS
51
de Tween 20, pH 6,0). Pos e io men e, las secciones se incuba on en
solución salina amponada con KPBS-BSA y 5% de sue o po cino
no mal du an e 60 minu os a empe a u a ambien e. Finalmen e, se
incuba on a 4ºC du an e oda la noche con los an icue pos p ima ios
(Tabla 2).
Po un lado, se ealizó un ma caje de doble inmuno luo escencia
pa a iden i ica las células que exp esan GFP, α-syn o α-syn-
os o ilada. Po o o lado, los an icue pos con a α-syn se combina on
con TH, GFAP o Iba-1 pa a es udia su posible colocalización con los
ma cado es celula es pa a neu onas dopaminé gicas, as oci os y
mic oglía, espec i amen e (Tabla 2).
T as la incubación de los an icue pos p ima ios, la
inmuno eacción se isualizó con los co espondien es an icue pos
secunda ios luo escen es (Tabla 3). Po úl imo, las secciones se
incuba on du an e 30 minu os a empe a u a ambien e con el colo an e
de unión al ácido desoxi ibunuleico (ADN) Hoechs 33342 (10µg/ml;
3 x 10-5 M, sigma) en KPBS pa a la inción nuclea . Las secciones se
mon a on en po aobje os ecubie os de gela ina y se cub ie on con
Shandon Immu Moun (The mo Fishe Scien i ic, Wal ham, MA).
An ígeno
Especie
Tipo
Dilución
Casa Come cial
/Re e encia
TH
Ra ón
Monoclonal
1:10000
Sigma / T2928
OX-6
Ra ón
Monoclonal
1:50
BioRad / MCA46G
α-syn-WT
Ra ón
Monoclonal
1:500
Abcam / ab80627
α-syn-A53T
Ra ón
Monoclonal
1:200
In i ogen / 18-0215
α-syn-
os o ilada
Conejo
Monoclonal
1:1000
Abcam / ab51253
TH
Conejo
Policlonal
1:1000
Me ck Millipo e / ab152
GFAP
Ra ón
Monoclonal
1:500
Me ck Millipo e / MAB360
Iba-1
Conejo
Policlonal
1:500
Wako / 019-19741
Tabla 2: An icue pos p ima ios u ilizados en inmunohis oquímica e inmuno luo escencia
en el modelo de lesión con AAV9-α-syn. Ab e ia u as: TH, Ti oxina Hid oxilasa; OX-6,
MHC de clase II; α-syn, α-sinucleína; WT, o ma sal aje; GFAP. p o eína ácida ib ila glial;
Iba-1, molécula adap ado a de unión a calcio ionizado 1.
An ígeno
Especie
Dilución
Casa Come cial / Re e encia
IgG Ra ón
Caballo
1:200
Vec o Labo a o ies / BA2001
IgG
Conejo
Mono
1:200
Molecula P obes / A-21202 (Alexa Fluo 568)
IgG Ra ón
Bu o
1:200
Molecula P obes / A-10042 (Alexa Fluo 488)
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
52
IgG Ra ón
Cab a
1:200
Molecula P obes / A-11004 (Alexa Fluo 568)
Tabla 3: An icue pos secunda ios u ilizados en inmunohis oquímica e
inmuno luo escencia en el modelo de lesión con AAV9-α-syn. Ab e ia u as: IgG,
inmunoglobulina de ipo G
3.1.4.1.Cuan i icación es e eológica y densidad de e minales
es ia ales
El núme o o al de neu onas TH posi i as (TH-i ), de células
OX-6 posi i as (OX6-i ) y el núme o o al de neu onas de la SNpc se
es ima on median e el mé odo de es e eología impa cial ( accionado
óp ico) u ilizando un sis ema Olympus CAST–G id (Compu e Assi ed
S e eological Toolbox; Olympus, Balle up, Dinama ca). La
cuan i icación se ealizó en la SNpc de, al menos, seis secciones
elegidas al aza pa a cada uno de los g upos expe imen ales median e
una ejilla es e eológica ( accionado ), y se es imó el olumen de la
SNpc según el mé odo de Ca alie i (Gunde sen e al., 1988; Rey e al.,
2007).
La densidad de los e minales dopaminé gicos es ia ales se
es imó con la ayuda del so wa e de análisis de imágenes NIH-Image
1.55 (Na ional Ins i u es o Heal h, Be hesda, MD) en un o denado
acoplado a una ideocáma a (CCD-72, DAGE-MTI, INC, Michigan
Ci y, IND) y a una mesa de luz de iluminación cons an e (No he n
Ligh , S . Ca ha ines, Canadá). Se midie on, al menos, cua o secciones
del ST cen al y, pa a cada sección, se co igie on las densidades óp icas
median e la di e encia del ondo seleccionada en el cue po calloso.
3.1.4.2.Mic oscopia con ocal: análisis de colocalización
Las secciones de inmuno luo escencia se isualiza on con un
mic oscopio con ocal de ba ido láse (AOBS-SP5X; Leica
Mic osys ems Heidelbe g GmbH, Mannheim, Alemania). Pa a el
análisis de colocalización de GFP, α-syn o α-syn os o ilada con los
di e en es ipos celula es, se ob u ie on es imágenes de la SNpc po
animal en di e en es coo dinadas de su eje an e o-pos e io (-5’20, -
5’60 y -6’04 mm desde el b egma). Las imágenes se ob u ie on con el
obje i o 10x u ilizando pa áme os de mic oscopia cons an es y una
in ensidad de láse simila . Se delimi ó la SNpc en cada imagen y se
MATERIAL Y MÉTODOS
59
pé dida de neu onas dopaminé gicas en la SNpc en ausencia del
ecep o AT2.
-G upo 1D: o mado po a ones adul os AT2KO y WT (n=21)
y a as jó enes (n=6) y en ejecidas (n=6). Los animales ue on
u ilizados pa a con i ma los esul ados ob enidos en
expe imen os in i o ( e más adelan e) en e e encia a la
egulación del ecep o AT2 en la exp esión del ARNm del
ecep o AT1.
Pa a los es udios bioquímicos (g upos 1A y 1B), los a ones ue on
sac i icados, los ce eb os ue on ex aídos, se disecó la egión de la
SNpc y se congeló inmedia amen e en ni ógeno líquido y,
pos e io men e, almacenada en -80ºC. Además, se u iliza on
mi ocond ias pu as aisladas del ce eb o de a ón pa a e alua la
ac i idad de la ci oc omo C oxidasa (COX). Los animales del g upo 1D
se u iliza on pa a aisla la mic oglía y neu onas dopaminé gicas de los
ce eb os adul os, que se ob u ie on median e la clasi icación magné ica
de la mic oglía (u ilizando mic ope las an i CD11b) y la mic odisección
po cap u a láse , espec i amen e.
-G upo 2: se ealiza on expe imen os in i o pa a es udia los
mecanismos molecula es implicados en la egulación de los ecep o es
AT2 en células mic ogliales en es ado de in lamación y su implicación
en la mue e neu onal dopaminé gica (Expe imen o IV). Pa a ello se
emplea on dos subg upos:
-G upo 2A: Un p ime g upo de expe imen os se ealizó pa a
es udia el papel de la in e acción de los ecep o es AT1/AT2
mic ogliales en condiciones de in lamación mic oglial. Pa a
ello, se u iliza on cul i os de mic oglía p ima ia y la línea
celula mic oglial N9, a ados con LPS (10 nM; Sigma) o con
LPS y/o el agonis a pa a el ecep o AT2, CGP-42112 (CG, 200
nM; Sigma), o LPS y/o el an agonis a del ecep o AT1
(ARAII), ZD-7155 (1 μM; Sigma). Los agonis as y/o
an agonis as se adminis a on 30 minu os an es de añadi el
a amien o con LPS (n = 6, po g upo). Después de 24 ho as, se
ecogie on las células y/o el medio de cul i o pa a de e mina la

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
60
exp esión de ARNm y p o eínas de los ecep o es AT1 y AT2,
la ac i idad NOX, la libe ación de TNF-α y la ac i idad de
ROCK. Las dosis u ilizadas se selecciona on en unción de
es udios an e io es (Bo ajo e al., 2014a, 2014b; Dominguez-
Meijide e al., 2017). También se de e minó el e ec o de la
sup esión del ecep o AT2 en la exp esión del ecep o AT1
u ilizando mic oglía p ima ia de a ón AT2KO.
-G upo 2B: se u ilizó pa a in es iga los posibles mecanismos
implicados en la egulación de la exp esión del ecep o AT1
mediados po AT2 du an e la espues a in lama o ia mic oglial
inducida po LPS. Pa a ello se u iliza on cul i os de mic oglía
p ima ia y línea celula mic oglial N9 a adas con LPS (10nM)
y/o con el inhibido del enzima NOS, Nω-Ni o-L-a ginina
me il és e clo hid a o (L-NAME, 100 μM, Sigma), o el
inhibido especí ico pa a el enzima GMPc, 1H-[1,2,4]-
oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one (ODQ, 10 μM; Sigma), o el
inhibido especí ico del ac o de ansc ipción Sp1,
Mi amicina A (MMA, 400nM; Sigma) o el an agonis a del
ecep o Mas, A779 (1 μM; Bachem). Algunos cul i os ue on
a ados con LPS o LPS más CG pa a es udia posibles e ec os
de la ac i ación de AT2 en la ac i ación de los ac o es de
ansc ipción Sp1 y Sp3. Los dis in os inhibido es se
adminis a on 30 minu os an es de la adición del a amien o con
LPS (n = 6, po g upo), y se de e minó la exp esión del ARNm
y de la p o eína del ecep o AT1 o la ac i idad de los ac o es
de ansc ipción Sp1 o Sp3 24 h después. Las dosis u ilizadas en
los expe imen os se selecciona on en la base a es udios
an e io es con L- NAME y A779 (Cos a-Besada e al., 2018),
ODQ (Nimme oll e al., 2009) y MMA (Wang e al., 2014a).
Todos los da os p oceden es de los expe imen os de cul i os
celula es se ob u ie on de, al menos, es expe imen os independien es
con, al menos, n = 6, po g upo.
-G upo 3: se ealiza on expe imen os pa a es udia el dimo ismo
sexual en la exp esión del ecep o AT2 y su in luencia en la
MATERIAL Y MÉTODOS
61
neu oin lamación y gene ación de mediado es in lama o ios
(Expe imen o V). Pa a ello se ealiza on los siguien es subg upos:
-G upo 3A: se aisla on células mic ogliales adul as de ce eb os
de a ones WT machos (n = 14), hemb as (n = 14) y hemb as
o a iec omizadas (OVX) (n = 14) y se usa on pa a es udia el
e ec o del sexo y de los ni eles de es ógeno ci culan e sob e la
exp esión del ARNm del ecep o AT2 y de ci oquinas an i-
in lama o ias (IL-10) y p o-in lama o ias (IL-1β, IL-6). Se
usa on dos ce eb os de a ón pa a ob ene una mues a de células
mic ogliales. Un segundo g upo de a ones WT machos (n = 8)
y hemb as (n = 8) se pe undie on ápidamen e con solución
salina ía, se ex aje on los ce eb os y se p ocesa on pa a el
aislamien o mic oglial, como con oles pa a exclui cualquie
con aminación po células sanguíneas ci culan es. Se incluyó un
g upo adicional de a ones WT machos (n = 5) y hemb as (n =
10) pa a obse a la exp esión de ARNm de los ecep o es AT2
en células mic ogliales en secciones de ejido ce eb al que
con enían la SNpc median e hib idación in si u con RNAscope.
-G upo 3B: se aisla on células mic ogliales adul as de a ones
macho AT2KO (n = 14), a ones hemb a AT2KO (n = 14) y
a ones hemb a AT2KO o a iec omizados (n = 14) pa a e alua
el e ec o de la ausencia del ecep o AT2 en las di e encias
elacionadas con el sexo y los ni eles de es ógeno ci culan e en
la exp esión de ci oquinas p o y an i-in lama o ias.
-G upo 3C: se aisla on células mic ogliales adul as de a ones
hemb a WT (n = 8) y a ones hemb a AT2KO (n = 8) a ados
con LPS (5 mg/kg po inyección in ape i oneal) o con salino (n
= 8) y sac i icados 24 h más a de pa a obse a la espues a
in lama o ia pe i é ica aguda en p esencia y en ausencia del
ecep o AT2, y en e machos y hemb as.
-G upo 3D: se in es iga on o os posibles mecanismos
implicados en las di e encias de sexo obse adas en la exp esión
del ecep o AT2 mic oglial. En un p ime expe imen o, los
a ones WT macho ue on o quiec omizados bila e almen e (n =
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
62
10) pa a analiza los posibles e ec os de las ho monas gonadales
masculinas. En un segundo expe imen o, las c ías WT hemb a
(n = 12) se some ie on a masculinización ce eb al median e
inyecciones subcu áneas de benzoa o de es adiol.
3.2.2. P uebas de compo amien o mo o en un modelo de
en ejecimien o
Pa a es udia la implicación del ecep o AT2 en el
compo amien o mo o in luenciado po la in lamación pe i é ica
c ónica que cu sa el en ejecimien o, se ealiza on las p uebas de
compo amien o mo o : es de ac i idad locomo o a y es de o a od,
desc i as de o ma de allada en el apa ado an e io 3.1.3.P uebas de
compo amien o mo o del modelo de lesión con α-syn
3.2.3. Inmunohis oquímica de TH y análisis es e eológico
El e ec o de la ausencia del ecep o AT2 sob e la supe i encia de
neu onas dopaminé gicas ue es udiado median e el análisis
inmunohis oquímico del ma cado TH en la egión de la SNpc de
a ones WT y AT2KO, desc i o en el apa ado 3.1.4.Técnicas de
inmunohis oquímica e inmuno luo escencia en el modelo de lesión
con α-syn.
3.2.4. C oma og a ía de al o endimien o del sis ema
dopaminé gico
Con el in de es udia la in luencia del ecep o AT2 en el sis ema
dopaminé gico es ia al, se analiza on los ni eles de DA y su me aboli o
DOPAC en el es iado de a ones WT y AT2KO median e la écnica
HPLC desc i a en el apa ado 3.1.5. C oma og a ía de al o endimien o
pa a el modelo de lesión de α-syn.
3.2.5. Mic odisección po cap u a láse
La mic odisección po cap u a láse de las neu onas de la SN de
a ón ue ealizada siguiendo el p o ocolo desc i o p e iamen e po
Ga ido-Gil e al., (2017), con lige as modi icaciones. Los ce eb os
ue on ex aídos ápidamen e, congelados con ni ógeno líquido y
almacenados a -80ºC. Pos e io men e, se co a on secciones co onales
MATERIAL Y MÉTODOS
63
con un c ios a o (The mo Scien i ic) a un g oso de 20μm a ni el de la
SN. Dichas secciones se mon a on en un po aobje os de id io y ue on
eñidas con un p o ocolo aco ado pa a ojo neu o al 1% en agua
DEPC, du an e 2 minu os en ío. Finalmen e, las secciones de ejido
ue on deshid a adas con concen aciones c ecien es de e anol y se les
ealizó la mic odisección po cap u a láse usando el sis ema PALM
Mic oBeam (Zeiss) con olado po el so wa e Robo PALM.
Las neu onas dopaminé gicas de la SN se isualiza on bajo
mic oscopía de campo b illan e con un aumen o de 40x con la ayuda de
una cáma a AxioCam Icc (Zeiss). Se selecciona on g upos de células
(1000 neu onas po animal) usando el so wa e co espondien e, y
luego se co a on y ca apul a on median e pulsos de láse a una apa de
mic o ubo adhesi o (Zeiss). Los g upos de células se lisa on
inmedia amen e du an e 30 minu os a empe a u a ambien e en un
ampón de lisis (RNesy Mic oki , Qiagen) y se almacena on a -80ºC
has a la pos e io ex acción de ARNm.
3.2.6. Aislamien o de mi ocond ias ce eb ales y análisis de la
ac i idad del ci oc omo c oxidasa
En homogenados ce eb ales de a ones WT y AT2KO jó enes (2
meses), adul os (12 meses) y en ejecidos (18 meses) se midió la
ac i idad del complejo IV de la cadena espi a o ia mi ocond ial (COX
IV) como ma cado de la unción mi ocond ial y la p oducción de ROS,
ya que la dis unción mi ocond ial (es deci , la disminución de la
ac i idad del complejo IV) se ha asociado con el es és oxida i o
obse ado du an e el en ejecimien o (Payne y Chinne y, 2015). En
p ime luga , se aisla on las mi ocond ias ce eb ales. Pa a ello el ejido
ce eb al se la ó en bu e de aislamien o ío (0,32 M de saca osa, 1
mM y 10 mM de TRIS; pH 7,4), se diseccionó en ozos pequeños y se
ans i ió a un homogeneizado Dounce con solución Pe coll al 12%. A
con inuación, se homogeneizó el ejido en un mo e o de id io, se
colocó sob e un g adien e de Pe coll y se ul acen i ugó a 30.700g
du an e 5 minu os a 4 °C. La acción mi ocond ial en iquecida (en e
las capas de 26% y 40% de Pe coll), se e i ó cuidadosamen e, se la ó
con bu e de aislamien o y se cen i ugó a 16.700g du an e 10 minu os
a 4 °C. El pelle mi ocond ial pu o se esuspendió sua emen e en bu e
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
64
de aislamien o y se concen ó median e cen i ugación a 7300g du an e
10 min a 4 °C. Finalmen e, se de e minó el con enido p o eíco en las
mi ocond ias aisladas u ilizando el ki Pie ce BCA P o ein Assay
(The mo Scien i ic).
La ac i idad de COX se midió u ilizando el ensayo de ac i idad de
mi ocond ias, según las especi icaciones del ab ican e (KC310100;
Biochain). Pa a el ensayo se u iliza on 10 µg de p o eína de mi ocond ia
aislada con 0,1% de di io ei ol. Se añadió e oci oc omo c, un sus a o
de la COX, a cada mues a y se leyó inmedia amen e la abso bancia a
550 nm du an e 55 segundos. La ac i idad de COX (unidad/ml) de cada
mues a se es imó a pa i de la disminución de la abso bancia debida a
la oxidación enzimá ica del e oci oc omo c a e icin oc omo c.
3.2.7. Análisis de p o eínas median e wes e n blo
Los cambios de exp esión p o eica de di e en es componen es y
ecep o es del SRA ue on analizados po la écnica de WB. Las
acciones de ejido pe enecien es a la SN se homogeniza on con ayuda
de un poli ón en un ampón de adioinmunop ecipi ación que con enía
inhibido es de p o easas (P8340, Sigma), luo u o de
enilme ilsul onilo (P7626, Sigma) e inhibido es de os a asa (P5726,
Sigma). El homogenado esul an e se cen i ugó 20 minu os a 12.000 g
y se ecogió el sob enadan e.
Las concen aciones de p o eína se de e mina on median e el
ensayo BCA (Pie ce 23225). Las mues as se diluye on en bu e de
adioinmunop ecipi ación y ampón de ca ga, se desna u aliza on con
un choque é mico, calen ándolas du an e 4 minu os a 95ºC y se
p ocedió a la sepa ación de las p o eínas u ilizando una elec o o esis
discon inua con geles de poliac ilamida Bis-T is al 8%-12%. A
con inuación, se ealizó la ans e encia de las p o eínas desde el gel de
poliac ilamida a una memb ana de ni ocelulosa. Finalmen e, las
memb anas se incuba on con una solución de bloqueo (leche al 10%)
du an e una ho a a empe a u a ambien e y, a con inuación, se
incuba on du an e oda la noche a 4ºC con el an icue po p ima io
co espondien e. Los ni eles p o eicos de ANG y de los ecep o es AT1
y Mas ue on analizados en homogenados de ce eb os de a ones WT y

MATERIAL Y MÉTODOS
65
AT2KO u ilizando los an icue pos p ima ios co espondien es: ANG
(1:200, sc-7419), ecep o AT1 (1:200, sc-31181, San aC uz), ecep o
Mas (1:1000, AAR-013, Alomone labs). La exp esión p o eica del
ecep o AT1 ambién ue analizada en los di e en es a amien os de
las células mic ogliales N9 u ilizando el mismo an icue po AT1 (1:200,
sc-31181, San aC uz Bio echnology). Pa a el e elado se u iliza on los
an icue pos secunda ios HRP an i-conejo IgG (1:5000, sc-2004,
San aC uz Bio echnology) y an i-cab a IgG (1:3000, sc-2020,
San aC uz Bio echnology). Finalmen e, las memb anas ue on
incubadas con el con ol de ca ga GADPH (1:25.000, G9545, Sigma).
El ni el de exp esión de las p o eínas se cuan i icó po densi ome ía de
cada una de las bandas usando el so wa e Quan i y One y se exp esó
en elación con el alo de la banda con ol de GAPDH. Los da os se
no maliza on con espec o a los alo es del g upo con ol de la misma
memb ana (es deci , se exp esa on en elación con el alo ob enido
pa a el g upo con ol, 100%) y se exp esa on como medias ± SEM.
3.2.8. Ex acción de ARN, RT-QPCR y Q-PCR
La exp esión del ARNm de los componen es y ecep o es del SRA
(ANG, ecep o es AT1, AT2, Mas), del sis ema dopaminé gico
( ecep o es D1, D2) y de di e en es mediado es de in lamación (IL-1β,
IL-6, NFkβ, p47 phox) ue on analizados median e RT-PCR y Q-PCR
p e iamen e desc i a 3.1.7. Ex acción de ARN, RT-PCR y Q-PCR del
modelo de lesión con α-syn u ilizando la secuencia de cebado es
co espondien e (Tabla 4).
3.2.9. Modelos in i o
3.2.9.1.Cul i os p ima ios de mic oglía
Los cul i os p ima ios de mic oglía se ealiza on a pa i de
ce eb os de neona os P1-P3 de a as Sp ague-Dawley o de a ones WT
o AT2KO. Pa a cada expe imen o se u iliza on un mínimo de 20
neona os. Los ce eb os se ex aje on en condiciones de es e ilidad bajo
la llama de un meche o bunsen e inmedia amen e después se la a on en
una solución ía (4ºC) de glucosalino y penicilina/es ep omicina al
1%. Seguidamen e, con la ayuda de un bis u í, se elimina on las
meninges, plexos co oides y los es os de médula espinal. A
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
66
con inuación, en el in e io de una campana de lujo lamina , se lle ó a
cabo la disociación mecánica con un bis u í y se ealizó la il ación de
los agmen os median e un il o de nylon de amaño de po o de 100
μm (Falcon). La suspensión celula ob enida se cen i ugó a
empe a u a ambien e du an e 10 minu os a 2.000 pm y se eliminó el
sob enadan e. El pelle celula se esuspendió en el olumen de medio
eque ido pa a cada expe imen o (10 ml de medio po ce eb o aislado)
y ue semb ado en ascos de 75 cm2 (BD Falcon, 2,5x107
células/ asco). La siemb a se ealizó con medio de cul i o DMEM
comple ado con 10% sue o e al bo ino, 1% de
penicilina/es ep omicina (Sigma) y 1% de an o e icina B (Sigma). Las
células en cul i o se man u ie on en una incubado a 37ºC, 5% de CO2
y humedad al 95% has a que llega on a su máxima con luencia
(ap oximadamen e 12-15 días). El p ime cambio de medio se ealizó
cua o días después de la siemb a inicial y, pos e io men e, se cambió
cada cua o días. Una ez llega on a la máxima con luencia, los ascos
se agi a on du an e 4 ho as a 180 pm en una incubado a 37ºC, 5% de
CO2 y humedad al 95%, con el obje i o de ex ae la mic oglía. T as la
agi ación, se ecogió el medio de cul i o, se cen i ugó a 2.000 pm
du an e 10 minu os a empe a u a ambien e y el pelle ob enido se
esuspendió en medio de cul i o al olumen de siemb a eque ido. La
cuan i icación de células iables se ealizó en una cáma a de Neubauhe
sob e una suspensión en azul de ipano. Las células mic ogliales ue on
semb adas en placas de 35mm (Falcon) a adas con poli-L-lisina
(Sigma; 10mg/ml) a una concen ación ap oximada de 1x106
células/ml. Una ho a después de la siemb a se cambió el medio, pa a
elimina las células no adhe idas y, inalmen e, los cul i os ue on
man enidos en condiciones de cul i o 24 ho as an es de ealiza el
ensayo, pa a e i a el es ado ac i ado de las células mic ogliales as la
agi ación. Median e es a écnica de aislamien o se consigue una pu eza
de células posi i as pa a el ma cado mic oglial OX-42 de más del 95%
(Dominguez-Meijide e al., 2017).
3.2.9.2.Línea celula mic oglial (N9)
La línea mic oglial mu ina N9 ue p opo cionada po la D a.
Paola Riccia di-Cas agnoli (Red de Inmunología de Singapu , Agencia
MATERIAL Y MÉTODOS
67
de Ciencia, Tecnología e In es igación, Singapu ). Las células se
man u ie on en condiciones de cul i o en una incubado a 37ºC, 5% de
CO2 y humedad al 95%, y se cul i a on en medio de Roswell Pa k
Memo ial Ins i u e (RPMI 1640; In i ogen) comple ado con 10% de
sue o e al bo ino, 2mM de L-glu amina (Sigma) y un 1% de
penicilina/es ep omicina. Pa a ealiza los ensayos las células se
cuan i ica on y se semb a on a una densidad de 0,5x106 células/pocillo
en placas de 12 pocillos (Falcon).
3.2.10. Análisis de in lamación po ac i idad enzimá ica y
ELISA en células mic ogliales
Pa a es udia la in lamación mediada po los ecep o es de
angio ensina en las células mic ogliales (cul i os p ima ios de
mic oglía y línea celula N9) se cuan i ica on los ni eles de ac i idad
enzimá ica NOX y ROCK, así como los ni eles de exp esión de TNF-
α median e ki ELISA.
-Ac i idad enzimá ica de NOX: se midió median e
quimioluminiscencia po enciada po lucigenina en un lec o de
placas mul ipocillo In ini e M200 (TECAN). Las células o el
ejido ue on homogenizados en un ampón de lisis (10-1 mol/L
de K2HPO4, 10-3 mol/L luo u o de enilme ilsul onilo, 0.2%
T i on X-100) y cen i ugados a 12.000g du an e 30 minu os a
4ºC. A con inuación, se ecogie on los sob enadan es y se les
analizó la concen ación de p o eína con un ki de ensayo de
p o eínas BCA de Pie ce (The mo Scien i ic, F emon , CA). La
ac i idad de NOX se midió en los sob enadan es en p esencia
de su sus a o NADPH (10-4 mol/L; Sigma) y lucigenina (5x10-
6 mol/L; Sigma). La eacción se ealizó con 10-20µl de células
o ejido homogenizado que con enía en e 20-50µg de p o eína
(G iendling e al., 2000; Hong e al., 2006). La
quimioluminiscencia se exp esó como unidades de luz ela i as
(ULR/mg de p o eína x min).
-Ac i idad enzimá ica de ROCK: la ac i idad de ROCK se
midió con un ki de ensayo de ac i idad de ROCK (STA-416;
Cell Biolabs, San Diego, CA) según las ins ucciones del
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
68
ab ican e. En uncionamien o de es e ki se basa en un
inmunoensayo enzimá ico desa ollado pa a la de ección de la
os o ilación especí ica de la subunidad 1 de la miosina
os a asa en Th 696 mediada po el enzima ROCK. Las células
p ima ias de mic oglía y N9 se homogeneiza on en un bu e de
lisis (50 mM T is-HCl pH7’5, 150 mM NaCl, 1 mM 2-
glice o os a o, 1% T i on X-100, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA y
1 mM Na3VO4) que con enía un cóc el de inhibido es de
p o easas (P8340; Sigma). A con inuación, se midió la
concen ación de p o eínas en los ex ac os con un ki de ensayo
de p o eínas BCA de Pie ce (The mo Scien i ic, F emon , CA).
La eacción se ealizó con una can idad inal de p o eína de 5
μg/pocillo y la os o ilación se e aluó midiendo la abso bancia
a 450 nm en un lec o de placas mul ipocillo In ini e M200
(TECAN).
-De e minación de TNF-α: los ni eles de TNF-α libe ados al
medio en los cul i os celula es de mic oglía (mic oglía p ima ia
y línea celula mic oglial N9) ue on de e minados median e ki
ELISA (TNF-α de a a de Diaclone 865.000.96, Gen-P obe
Diaclone SAS, Besançon, F ancia) siguiendo las ins ucciones
del ab ican e y usando un lec o de placas mul ipocillo In ini e
M200 (TECAN). El con enido de TNF-α se ob u o en pg/mL de
p o eína y se exp esó como po cen aje del con enido en las
mues as del g upo de con ol.
3.2.11. Análisis de ac o es de ansc ipción en células
mic ogliales
La ac i ación de los ac o es de ansc ipción Sp1 y Sp3,
implicados en la egulación de la exp esión del ecep o AT1, en células
de mic oglía p ima ia se ealizó con un ki T ansAM (Ac i e Mo i ,
Ca lsland) basado en un ensayo inmunoenzimá ico de unión al ADN.
Se incuba on 10µg/pocillo de ex ac o nuclea aislado de los cul i os
celula es siguiendo las ins ucciones del ab ican e. Finalmen e, se
midió la abso bancia a 450 nm en un lec o de placas mul ipocillo
In ini e M200 (TECAN).
MATERIAL Y MÉTODOS
75
3.3.RECEPTORES DE ANGIOTENSINA EN INFLAMACIÓN
PERIFÉRICA CRÓNICA DE SÍNDROME METABÓLICO.
IMPLICACIÓN EN LA NEURODEGENERACIÓN
DOPAMINÉRGICA
3.3.1. Diseño expe imen al
En el p esen e apa ado de la esis se ealiza on los siguien es
expe imen os in i o con a as macho de la cepa Sp ague-Dawley (2-3
meses de edad) pa a es udia el papel de los ecep o es del SRA ce eb al
en modelos de in lamación pe i é ica c ónica del Me S, y su posible
implicación en la neu odegene ación dopaminé gica (Obje i o 3). Pa a
ello se u iliza on los siguien es animales dis ibuidos de o ma alea o ia
en los g upos expe imen ales (ANEXO I, Tabla III):
-G upo A: pa a es udia la implicación de la in lamación pe i é ica
c ónica del Me S (obesidad, aumen o de la p esión a e ial e
hipe glucemia) en los componen es y ecep o es del SRA ce eb al,
in lamación y mue e neu onal dopaminé gica (Expe imen o VI). Se
u iliza on los siguien es g upos expe imen ales:
-G upo A1: o mado po a as con ol (n = 6) y a as con Me S
(n =6). Es e g upo ue u ilizado pa a la ca ac e ización del
modelo de Me S inducido po una die a al a en g asa du an e 18
semanas, median e cuan i icación de peso, p esión a e ial y
ni eles sé icos de iglicé idos, coles e ol y glucosa.
T anscu idas 18 semanas, el LCR y sue o ue on ex aídos pa a
el análisis de AT1-AA, ACE2-AA, mediado es p o-
in lama o ios y 27-hid oxicoles e ol (27-OHC).
-G upo A2: o mado po a as con ol (n = 12), a as con Me S
(n = 12) y a as con Me S a adas con el bloquean e del ecep o
AT1, candesa án (n = 12). El candesa án se adminis ó po ía
o al (1 mg/kg/día du an e al menos 2 semanas; en e las 9:00-
10:00h de cada día) mezclado con c ema de a ellanas “Nocilla”
(Nu expa, Ba celona, España), as 18 semanas de die a al a en
g asa. A los animales no a ados con candesa án, se les
adminis ó únicamen e c ema de a ellanas “Nocilla”. La mi ad
de los animales de cada g upo ue u ilizada pa a analiza los

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
76
componen es y ecep o es del SRA, mediado es p o-
in lama o ios y ma cado es de es és oxida i o en ce eb o,
mien as que la o a mi ad de los g upos ue u ilizada pa a el
análisis de pe meabilidad de la BHE. El peso, el sue o y la
medición de la p esión a e ial (an es del a amien o con
candesa án) de los animales de es e g upo, se u iliza on además,
pa a aumen a el amaño mues al pa a la ca ac e ización del
modelo de Me S (G upo A1).
-G upo A3: se u ilizó pa a es udia la implicación del Me S en
la p og esión de la mue e neu onal dopaminé gica. Es aba
compues o po a as con ol (n = 5), a as lesionadas con 6-
OHDA (n = 5), a as con Me S y lesionadas con 6-OHDA (n =
5) y a as con Me S, lesionadas con 6-OHDA y a adas con el
bloquean e del ecep o AT1, candesa án (n = 5). T as 18
semanas de die a al a en g asa los animales ue on lesionados
median e inyección es e eo áxica de la neu o oxina 6-OHDA.
El candesa án ue adminis ado desde una semana an es de la
lesión es e eo áxica (1 mg/kg/día) has a el sac i icio (4 semanas
después de la lesión con la neu o oxina). Finalmen e, los
animales ue on sac i icados y el ce eb o ue p ocesado pa a los
es udios inmunohis oquímicos de mue e neu onal
dopaminé gica.
-G upo B: des inado a es udia la implicación de los AT1-AA en
la exp esión de los componen es y ecep o es del SRA ce eb al,
espues a in lama o ia mic oglial y mue e neu onal dopaminé gica
(Expe imen o VII). Pa a ello se u iliza on los siguien es g upos
expe imen ales:
-G upo B1: o mado po a as con ol (n = 6), a as con
adminis ación in ape i oneal de 0,25 µg/µl de AT1-AA
humanos (n = 6), a as con adminis ación de 0,15 µg/µl de
AT1-AA humanos (n = 12). Se des inó a ca ac e iza el e ec o
en la p esión a e ial y los ni eles de IgG humanos en LCR y
sue o du an e 1 y 2 semanas después de la adminis ación de
au oan icue pos.
MATERIAL Y MÉTODOS
77
-G upo B2: o mado po a as con ol (n = 5), a as con
adminis ación in ape i oneal de AT1-AA (0.15 µg/µl, n = 5) y
a as con adminis ación de AT1-AA y a adas con el
bloquean e del ecep o AT1 candesa án, (1 mg/Kg/día du an e
al menos 2 semanas; adminis ados en e las 9:00-10:00h de
cada día). Quince días después de la adminis ación de AT1-
AA, los animales ue on sac i icados y u ilizados pa a analiza
los componen es y ecep o es del SRA, mediado es p o-
in lama o ios y ma cado es de es és oxida i o a ni el de la
SNpc.
-G upo B3: des inado a es udia la implicación de los AT1-AA
en la p og esión de la mue e neu onal dopaminé gica se
u iliza on a as con ol (n = 6), a as lesionadas con AAV9-α-
syn-A53T (n = 6), a as in undidas con AT1-AA y lesionadas
con AAV9-α-syn-A53T (n = 6) y a as lesionadas con AAV9-
α-syn-A53T, in undidas con AT1-AA y a adas con el
bloquean e del ecep o AT1, candesa án (n = 6). La
adminis ación de los AT1-AA se ealizó median e la
implan ación in ape i oneal de mini-bombas osmó icas
(modelo x, Alze ) que con enían 200 µl de una disolución de
AT1-AA con una concen ación de 0,15 µg/µl, du an e 6
semanas (1 semana an es de la inyección con AAV9-α-syn-
A53T). El a amien o con candesa án (1mg/kg/día) se inició 1
semana an es de la adminis ación de AT1-AA y se con inuó
has a el momen o del sac i icio (4 semanas después de la lesión
con AAV9-α-syn-A53T) as el cual el ce eb o ue p ocesado
pa a los es udios inmunohis oquímicos de mue e neu onal
dopaminé gica e in lamación mic oglial.
3.3.2. Desa ollo de un modelo de sínd ome me abólico en
a a
El desa ollo de un modelo de Me S (obesidad, aumen o de la
p esión a e ial e hipe glucemia) se ealizó en a as macho de 150-200g
que ecibie on ad libi um una die a al a en g asa (D18042603; Resea ch
Die s, U.S.A.) du an e un pe iodo de 18 semanas. La inco po ación de
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
78
es a die a en edad emp ana acili a y homogeniza el desa ollo del
Me S en e los di e en es indi iduos (Sha ma y Taliyan, 2018).
Mensualmen e, a los animales se les ex ajo sang e po la ena
la e al de la cola, que ue u ilizada pa a la de e minación de los ni eles
sé icos de iglicé idos, coles e ol y glucosa u ilizando ki s enzimá icos
colo imé icos come ciales (1001093; 1001314; 1001191; Spin eac ,
España, espec i amen e), siguiendo las ins ucciones del ab ican e.
Además, a los animales se les hizo un seguimien o mensual del aumen o
de peso y medición de la p esión a e ial u ilizando un sis ema de
p esión no in asi a MRBP (IITC Li e Science, Cali o nia, EE.UU.).
3.3.3. Modelo de lesión con 6-OHDA en a as con sínd ome
me abólico
El es udio de la implicación de la in lamación pe i é ica inducida
po Me S en la p og esión de la mue e neu onal dopaminé gica se
ealizó en un modelo animal de EP basado en la inyección es e eo áxica
de la neu o oxina 6-OHDA.
En p ime luga , a los animales se les indujo Me S median e la
adminis ación de una die a al a en g asa du an e 18 semanas. Una ez
desa ollado el Me S, se les inyec ó, unila e almen e po es e eo axia,
la neu o oxina 6-OHDA en el es iado de echo.
Pa a ealiza la ci ugía, los animales ue on anes esiados con una
inyección in ape i oneal de una combinación de ke amina (50mg/kg) /
mede omidina (0,4mg/kg) y ue on colocados en el apa a o de
es e eo axia (Kop Ins umen s) con la ba a den al a -3,3mm. Con un
bis u í se ealizó una incisión en la línea media y se calcula on las
coo denadas c aneomé icas en base al b egma co espondien es al ST
de echo: 1,0mm an e io , 3mm la e al a la línea media y 5,5mm en al
a la du amad e (Paxinos y Wa son, 1986).
A con inuación, se epanó el c áneo pa a inyec a 7,5μg de 6-
OHDA disuel os en 3μl de solución salina es é il con 0,2% de ácido
ascó bico (Sigma, EE.UU.). La solución se inyec ó usando una je inga
Hamil on de 10μl acoplada a un inyec o moni o izado (S oeling), a una
elocidad de 0,5μl/min y la aguja se man u o in si u 5 minu os, una ez
MATERIAL Y MÉTODOS
79
ealizada la inyección, a in de e i a el e lujo de la oxina. A los
animales u ilizados como con ol salino, se les ealizó la misma ci ugía
inyec ando únicamen e solución salina. T anscu idas 4 semanas as
lesión, los animales ue on sac i icados.
3.3.4. Modelo de in usión sis émica de AT1-AA humanos en
a a
Los AT1-AA humanos se ob u ie on de mues as de sue o de
muje es emba azadas que su ie on p eeclampsia. Es as muje es e an
pacien es del Se icio de Obs e icia del Complejo hospi ala io
Uni e si a io de San iago de Compos ela, odas ue on in o madas del
p opósi o y p o ocolo del es udio y i ma on un consen imien o
in o mado. Es e es udio ob u o la ap obación del Comi é É ico de
In es igación en Medicamen os de Galicia (CEIm-G), p o ocolo
2017/618, y la in es igación se lle ó a cabo de acue do con los
p incipios de la Decla ación de Helsinki.
El aislamien o de AT1-AA de sue o humano se ealizó median e
c oma og a ía de a inidad y se cuan i icó u ilizando ELISA (LaMa ca
e al., 2011). Un ml de sue o ue pasado po una columna de
pu i icación pa a IgG, y se ob u o la acción de IgG especí ica de AT1-
AA median e la unión del epí opo a la secuencia co espondien e del
segundo bucle ex acelula del ecep o AT1 (SC1208; sín esis química
de pép idos) unido co alen emen e al gel ac i ado po Sepha ose 4B
CNB (GE17-0430- 01; Sigma-Ald ich). La acción de IgG no unida
se eliminó po la ado y la IgG unida (AT1-AA) se eluyó con ampón
de glicina 200 mM. La acción de IgG eluida se man u o en ampón
de neu alización (3M TRIS-HCl y 3M KCl). Finalmen e, la
concen ación inal de AT1-AA se cuan i icó en un espec o o óme o
Nanod op 252 (The mo Fishe Scien i ic).
Pa a la in usión de AT1-AA humanos en a a se u iliza on
minibombas osmó icas (Alze Model 2002, Du ec Co p, Cupe ino,
CA), que se p epa a on con 200ul de AT1-AA diluidos
(concen aciones; 0,15µg/µl ó 0,25µg/µl) siguiendo las ins ucciones
del ab ican e. Pos e io men e, las minibombas se inse a on po ía
in ape i oneal, en a as anes esiadas como se desc ibió an e io men e
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
80
(Cunningham e al., 2016). La adminis ación in ape i oneal median e
el empleo de minibombas, pe mi e la in usión con inua y cons an e de
AT1-AA du an e dos semanas.
La dosis de 0,15 µg/µl se calculó inicialmen e como la dosis más
baja que inducía un lige o, pe o signi ica i o aumen o, de la p esión
a e ial, lo que demos aba la uncionalidad de los AT1-AA pu i icados.
3.3.5. Modelo de lesión con AAV9-α-syn-A53T en a as con
in usión de AT1-AA humanos
El es udio de la implicación de la in usión sis émica de AT1-AA
en la p og esión de la neu odegene ación dopaminé gica y
neu oin lamación ue es udiada en un modelo de EP basado en la
sob eexp esión de la p o eína α-syn humana mu ada AAV9-α-syn-
A53T.
En p ime luga , a a as macho adul as se les ealizó la in usión de
AT1-AA humanos al y como se desc ibe en el apa ado an e io 3.3.4.
Modelo de in usión sis émica de AT1-AA humanos en a a.
Una semana después de la implan ación de las bombas
miniosmó icas, a las a as se les ealizó una inyección es e eo áxica
unila e al de AAV9-α-syn-A53T, que se desc ibe de alladamen e en el
apa ado 3.1.3.Modelo de lesión con AAV9-α-syn-WT y AAV9-α-syn-
A53T en a as.
3.3.6. Ex acción de líquido ce alo aquídeo y sang e en
modelo de a a
La ex acción de LCR se ealizó siguiendo el mé odo desc i o
an e io men e (Pegg e al., 2010). Las a as ue on anes esiadas con una
inyección in ape i oneal de una combinación anes ésica de ke amina
(50mg/kg) / mede omidina (0,4mg/kg) y colocadas en el apa a o de
es e eo axia (Kop Ins umen s) con la cabeza lexionada 45º hacia
abajo. Seguidamen e, con un bis u í se ealizó una incisión en la pa e
en al de la cabeza y las capas de músculos supe iciales y subyacen es
se sepa a on a lo la go de la línea media median e disección oma y
has a la exposición de la du amad e de la cis e na magna.

MATERIAL Y MÉTODOS
81
Inmedia amen e después, el LCR ue ex aído con una aguja de 30G
acoplada a una je inga de 1ml inse ada en un ángulo de 30º con
espec o a la supe icie de la du amad e. El LCR se almacenó
inmedia amen e a -80ºC has a su p ocesado.
Pa a la ob ención del sue o, se p ocedió a la ex acción de sang e
po decan ación as la decapi ación del animal, p e iamen e
anes esiado. La sang e ecogida se cen i ugó a 2000g du an e 10min.
Finalmen e, se ecogió el sob enadan e, que co esponde a la mues a
de sue o, y se almacenó a -80ºC has a su p ocesamien o.
3.3.7. De e minación de au oan icue pos en líquido
ce alo aquídeo y sue o de a a
Los ni eles de AT1-AA y ACE2-AA ue on medidos usando ki
ELISA humano con lige as modi icaciones p e iamen e desc i as
(Zhang e al., 2010). Se u ilizó un an icue po secunda io HRP-
conjugado de cab a an i-IgG de a a (1:2500, ab97057, abcam), la
inmuno eacción se de ec ó con un ki de quimioluminiscencia HRP
(170-5044; Bio-Rad, He cules, CA, USA) y la señal de luminiscencia
ULR se midió con un lec o de placas mul ipocillo In ini e M200
(TECAN).
3.3.8. Análisis de pe meabilidad de la ba e a
hema oence álica en un modelo de sínd ome me abólico
Pa a es udia la pe meabilidad de la BHE en un modelo de Me S y
la implicación del bloqueo del ecep o AT1 se ealizó la in usión de
colo an e E ans Blue (E2129, Sigma-Ald ich). El colo an e se inyec ó
en una sola inyección (solución salina al 4 % a 2 ml/kg) a a és de la
ena emo al. Dos ho as después de la inyección, los animales ue on
pe undidos con solución salina al 0,9% pa a elimina el exceso de
colo an e. Pos e io men e, los animales ue on decapi ados, el ejido
ce eb al aislado y se disecciona on las egiones co espondien es a
co eza, ST y SN. Los ejidos ce eb ales ecogidos se suspendie on en
1:1 peso (mg): olumen (ml) de ácido iclo oacé ico al 50 % (T6399;
Sigma-Ald ich) y se homogeneiza on con poli ón. Los
homogeneizados se cen i uga on a 10. 000 g du an e 20 min y los
sob enadan es se some ie on a de ección espec omé ica a 620 nm en
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
82
un olumen 1:4 de e anol al 95 % u ilizando un lec o de placas
mul ipocillo In ini e M200 (TECAN). Pa a la cuan i icación, se
p epa a on cu as de colo an e E ans Blue es ánda pa alelas po
duplicado (Wang y Lai, 2014).
3.3.9. Análisis inmunohis oquímico de TH y OX-6
Cua o semanas después de la lesión es e eo áxica con 6-OHDA en
a as con Me S o con AAV9-α-syn-A53T en a as in undidas con AT1-
AA humanos, los animales ue on pe undidos y p ocesados pa a el
análisis inmunohis oquímico p e iamen e desc i o en el apa ado
3.1.4.Técnicas de inmunohis oquímica e inmuno luo escencia en el
modelo de lesión con α-syn.
3.3.10. Análisis de exp esión de los componen es y ecep o es
del SRA ce eb al
El e ec o de la in lamación pe i é ica inducida po el Me S o la
adminis ación sis émica de AT1-AA sob e la exp esión de los
componen es y ecep o es del SRA ce eb al (ECA2 y ecep o es PRR,
AT1, AT2 y Mas) ue analizada en los homogenados de la egión de la
SN.
Los ni eles de exp esión p o eica se es udia on median e la écnica
de WB desc i a de alladamen e en el apa ado an e io 3.2.7.Análisis de
p o eínas median e wes e n blo .
Las memb anas se incuba on con los an icue pos p ima ios: ECA2
(ab108252; Abcam; 1:1000), AT1 (sc-31181; San a C uz; 1:200), AT2
(sc-9040; San a C uz; 1:200), Mas (AAR-013; Alomone labs; 1:1000)
y (p o)- enina (ab40790; Abcam; 1:3000). La especi icidad de odos los
an icue pos p ima ios u ilizados se e aluó en nues o labo a o io
median e la aplicación de di e en es écnicas (Valenzuela e al., 2010,
2016; Labandei a-Ga cia e al., 2017).
Se usa on los siguien es an icue pos secunda ios conjugados con
pe oxidasa de ábano (HRP, del inglés ho se adish pe oxidase): cab a
an i-HRP de conejo y cab a an i-HRP de a ón (San a C uz
Bio echnology; 1:2500).
MATERIAL Y MÉTODOS
83
Los ni eles de exp esión de los ansc i os de ARNm de los
componen es y ecep o es del SRA ce eb al se es udia on median e la
écnica RT-QPCR y Q-PCR desc i a de alladamen e en el apa ado
an e io 3.2.8.Ex acción de ARN, RT-QPCR y Q-PCR.
La secuencia de los cebado es pa a ECA2 y ecep o es AT1, AT2,
PRR y Mas de a a se especi ican en la Tabla 4.
3.3.11. Análisis de in lamación y es és oxida i o po ac i idad
enzimá ica y ELISA
En los homogenados de SN de a a con Me S se midie on los
ma cado es p o-in lama o ios, pa icula men e elacionados con la
degene ación dopaminé gica como el TNF-α (ELISA, 865.000.96;
Gen-P obe Diaclone), y ma cado es de es és oxida i o, como la NOX,
median e quimioluminiscencia po enciada po lucigenina.
En sue o de a a con Me S se midie on los ni eles de in e leucinas
p o-in lama o ias: in e leucina ipo 17 (IL-17), IL-6; LIGHT, TNF-α e
IL-1β y del 27-OHC con ki s de ensayo inmunoabso ben e ligado a
enzimas especí icos pa a a as de acue do con las ins ucciones del
ab ican e (MBS2503506 pa a IL-17; MBS701221 pa a IL-6;
MBS2021982 pa a LIGHT; MBS284210 pa a IL-1β; MBS9712719
pa a 27-OHC; de MyBioSou ce y KRC3011 pa a TNF-α de
In i ogen).
3.4.RECEPTORES DE ANGIOTENSINA E INFLAMACIÓN
PERIFÉRICA AGUDA. INFLAMACIÓN PULMONAR EN
COVID-19.
3.4.1. Diseño expe imen al
En la úl ima pa e de es a esis se es udia on los e ec os de los
a amien os con bloquean es del ecep o AT1 (candesa án),
inhibido es de ECA (cap op il) y modulado es indi ec os de los
ecep o es del SRA (AINEs; ibup o eno) sob e la exp esión pulmona
de ECA2 y demás ecep o es del SRA pulmona en a as adul as
jó enes y en modelos animales de indi iduos ulne ables a COVID-19
g a e (Me S y en ejecimien o). Usando un modelo in i o, se
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
84
es udia on los e ec os de es os mismos a amien os en (1) cambios
inducidos po la p o eína i al en los ni eles de ECA2 ansmemb ana;
(2) en los ni eles de in e nalización de la p o eína í ica y (3) en la
espues a in lama o ia aguda asociada al a amien o de la p o eína i al
(IL-6, TNF-α y CCL-2 (ligando de quimiocina 2, del inglés chemokine
(C-C mo i ) ligand 2)) (Obje i o 4). Pa a ello, se u iliza on un o al de
98 animales y una línea celula del endo elio pulmona dis ibuidos en
dos g andes g upos (ANEXO I, Tabla IV):
-G upo 1: en el que se abo dó el es udio del e ec o de los
a amien os de ARAII (candesa án) e IECA (cap op il) en la exp esión
de los p incipales ecep o es del SRA pulmona (Expe imen o VIII).
Pa a ello, se u iliza on un o al de 68 animales dis ibuidos de o ma
alea o ia, y una línea celula di ididos en dos subg upos:
-G upo 1A: en es e p ime g upo de expe imen os se u iliza on
a as macho adul as jó enes de 10 semanas de edad (n = 30; n =
6 po g upo) pa a comp oba el e ec o del a amien o con
candesa án (1 o 10 mg/Kg/día; As aZeneca) o cap op il (5 o
40 mg/Kg/día; C4042; Sigma) sob e la exp esión del ECA2 y
los p incipales ecep o es del SRA pulmona .
En un segundo g upo de expe imen os, se u iliza on modelos
animales de ulne abilidad al COVID-19 g a e po in ección
po SARS-CoV-2: a as macho con Me S (n = 20; n = 6 po
g upo) a adas con las dosis al as de candesa án (10 mg/kg/día)
y cap op il (40 mg/Kg/día) du an e es semanas; a as
en ejecidas de 18-20 meses de edad (n = 18; n = 5 po g upo)
a adas con candesa án (1 mg/Kg/día) du an e es semanas.
Los a amien os ue on adminis ados po ía o al, mezclados
con c ema de a ellanas (“Nocilla”; Nu expa, Ba celona,
España) du an e de 3 semanas. Los animales del g upo con ol
ecibie on únicamen e la c ema de a ellanas. Las dosis se
es ablecie on en base a expe imen os p elimina es y es udios in
i o an e io es (Inada e al., 1999; Zhu e al., 2000; A umugam
e al., 2012; Abdel-Wahab e al., 2014). Los a amien os ue on
adminis ados en e las 9:00-10:00h de cada día. T as el
MATERIAL Y MÉTODOS
91
3.4.6. C oma og a ía de al o endimien o pa a ni eles de
angio ensina pulmona
Pa a es udia el e ec o del a amien o con ibup o eno en el
me abolismo de la angio ensina pulmona , se midie on los ni eles de
Ang II y Ang(1-7), sus a o y p oduc o de la ac i idad de ECA2
espec i amen e, median e HPLC seguido de un inmunoensayo
enzimá ico (B osnihan y Chappell, 2017). Inicialmen e, el ejido ue
homogenizado, u ilizando un poli ón, en una solución de ácido (HCl)-
e anol con EDTA y un cóc el de inhibido es de p o easas (P8340,
Sigma). Seguidamen e, las mues as se cen i uga on, se incuba on a -
20ºC y se acidi ica on con una solución de ácido hep a luo obu í ico.
Pos e io men e, los sob enadan es se pasa on po unas columnas de
ex acción en ase sólida (Sep-Pak C18, Oasis HLB 1cc, WAT094225,
Wa e s Ch oma og aphy Eu ope BV; E en-Leu , Países Bajos) y los
pép idos de angio ensina se eludie on con una solución de ácido
hep a luo obu í ico-me anol. El eluyen e se deshid a ó en Sa an
(ISS110, The mo Scien i ic; Massachuse s, EE. UU.), sin aplicación
de calo y, inalmen e, el sedimen o se esuspendió en una solución de
ace oni ilo al 12% con ácido hep a luo obu í ico al 0,015% y se
inyec ó en el sis ema de HPLC. Los pép idos de angio ensina se
sepa a on usando un g adien e de cua o pasos con ace oni ilo
acidi icado (0.1% de ácido hep a luo obu í ico; g adien e lineal al 12-
32%, condiciones isoc á icas al 32%, g adien e lineal al 32-12% y
condiciones isoc á icas al 12%) en una columna de ase in e sa
(Symme y300 C18, Wa e s Ch oma og aphy Eu ope BV; E en-Leu ,
Países Bajos). La elocidad de inyección ue de 0’35 ml po minu o a
una empe a u a de 25ºC.
Las acciones de angio ensina se con ola on a 220 nm con un
de ec o UV-VIS (SPD-20 AV, Shimadzu Co po a ion; Kyo o, Japón),
se ecogie on en un colec o de acciones (FRC-10A, Shimadzu
Co po a ion; Kyo o, Japón) y se seca on en Sa an . El sedimen o se
esuspendió y inalmen e se de e mina on los ni eles de Ang II y
Ang(1-7) median e inmunoensayo enzimá ico (LS-F10589, LSBio;
Washing on, EE.UU.), siguiendo las ins ucciones del ab ican e. Los
da os se exp esa on como mol po g amo de ejido húmedo.

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
92
3.4.7. Análisis de ac i idad enzimá ica pa a la dinámica
celula de ECA2
El e ec o de los a amien os con candesa án, cap op il e
ibup o eno en la ac i idad enzimá ica de ECA2 pulmona , así como en
la ac i idad enzimá ica de las p o easas enca gadas del desp endimien o
de ECA2 ue on medidas con ki especí icos de ac i idad enzimá ica.
-Ac i idad enzimá ica de ECA2: se midió u ilizando un ki
come cial de ac i idad de ECA2 (Anaspec, AS-72086)
siguiendo las ins ucciones del ab ican e. El uncionamien o
del ki se basa en el pép ido de ans e encia de ene gía po
esonancia de luo escencia (FRET) ace ilo 7-Me oxicuma ina-
4-il (Mca, del inglés 7-Me hoxycouma in-4-yl ace yl) / 2,4-
dini o enilo (Dnp, del inglés 2,4-dini ophenyl) (10 μM).
Especí icamen e, el ki con iene un pép ido FRET, cuya
luo escencia de Mca es inhibida po Dnp. Sin emba go, cuando
se p oduce una escisión del sus a o, p o ocada po la acción del
enzima ECA2, és e p oduce una sepa ación en dos agmen os,
de modo que la luo escencia de la Mca deja de es a inhibida y
puede medi se en el ango de exci ación/emisión a 330/390 nm
u ilizando un lec o de placas mul ipocillo In ini e M200
(TECAN). La ac i idad de ECA2 se midió en 20 μg de ejido
pulmona de a a o en 5 μg de lisado celula de A549, y se
con i mó con el inhibido especí ico de ECA2, DX600 (1 μM),
incluido como con ol en el mismo ki (AnaSpec, AS-72086).
La luo escencia se exp esó como ULR (unidades de
luminiscencia ela i as).
-Ac i idad enzimá ica de ADAM17: se midió u ilizando un ki
come cial de ac i idad ADAM17 (AnaSpec, AS-72085)
siguiendo las ins ucciones del ab ican e. El uncionamien o
del ki se basa en el pép ido de ans e encia de ene gía po
esonancia de luo escencia (FRET) basado en 5-FAM/QXL®
520 (1 μM). Especí icamen e, el ki con iene un pép ido FRET,
cuya luo escencia de la 5-FAM es inhibida po el QXL® 520.
Sin emba go, cuando se p oduce la escisión del sus a o,
p o ocada po la acción enzimá ica de ADAM17, és e p oduce
MATERIAL Y MÉTODOS
93
una sepa ación en dos agmen os, así que la luo escencia de 5-
FAM se puede medi en ango de exci ación/emisión a 490/520
nm u ilizando un lec o de placas mul ipocillo In ini e M200
(TECAN). La ac i idad de ADAM17 se midió en 20 μg de
lisado de celula de A549, y se con i mó con el inhibido de
ADAM17, TAPI-0 (10 μM), incluido como con ol en el mismo
ki .
-Ac i idad enzimá ica de TMPRSS2: se midió u ilizando un
ki come cial de p o easas (AS-71124, AnaSpec; Cali o nia,
EE.UU.), siguiendo las ins ucciones del ab ican e. El
uncionamien o del ki se basa en la escisión p o eolí ica,
median e la acción de enzimas p o easas, de la caseína-HiLy e
Flou 488 lo que da luga a una luo escencia que se puede medi
en el ango de exci ación/emisión a 488/520 nm en una placa
mul ipocillo u ilizando un equipo In ini e M200 (TECAN
GmbH; G ödig, Aus ia). La ac i idad de TMPRSS2 se midió
en 125 μg de lisado celula de A549 homogenizado en ampón
os a o de sodio 20 mM, pH 8. La ac i idad especí ica pa a
TMPRSS2 se midió es ando la ac i idad o al de p o easas
menos la ac i idad inhibida po un inhibido especí ico pa a
TMPRSS2 (mesila o de Camos a , 100 μM, SML0057, Me ck
KGaA; Da ms ad , Alemania; Desho els e al., 2014). La
luo escencia se exp esó como ULR/mg de p o eína.
3.4.8. Análisis de mediado es in lama o ios en células A549
median e ELISA
El análisis de la libe ación de ma cado es p o-in lama o ios po la
línea A549 se lle ó a cabo en los sob enadan es del cul i o celula ,
después de los co espondien es a amien os. Los sob enadan es ue on
ecogidos y cen i ugados a 2.000 g du an e 10 min pa a elimina los
es os celula es. Las concen aciones de los di e en es ma cado es se
cuan i ica on u ilizando ki s ELISA, siguiendo las ins ucciones del
ab ican e: TNF-α (BMS223HS, In i ogen), CCL-2 (ab179886,
Abcam), IL-6 (BMS213HS, In i ogen).
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
94
Las densidades óp icas se midie on con un lec o de placas
mul ipocillo In ini e M200 (TECAN) y se cuan i ica on las
concen aciones de cada ci oquina u ilizando la cu a es ánda
especí ica de cada ki come cial (ajus e de cu a 4PL).
3.5.ANÁLISIS ESTADÍSTICOS Y REPRESENTACIÓN
GRÁFICA
Todos los da os ue on ob enidos de al menos es expe imen os
independien es y se exp esa on como la media ± SEM.
El núme o mínimo de animales po g upo ue es imado eniendo en
cuen a el p incipio de las es e es, emplazamien o, e inamien o y
educción (RRR), empleando la he amien a calculado a es adís ica en
la página h ps://www.imim.ca /o e adese eis/so wa e-
public/g anmo/ del Ins i u o Hospi al del Ma de in es igaciones
Médicas del Pa que de In es igaciones Biomédicas de Ba celona. Los
análisis es adís icos ue on ealizados únicamen e en es udios donde el
amaño mues al e a igual o supe io a cinco.
La no malidad de odos los conjun os de da os se comp obó con la
p ueba de Kolmogo o -Smi no . Si el conjun o de da os supe aba la
p ueba de no malidad, se u iliza on p uebas pa amé icas: la p ueba
de S uden pa a las compa aciones de dos g upos y el análisis de la
a ianza (ANOVA, del inglés analysis o a iance) de una ía seguido
de la p ueba pos -hoc de S uden -Newman-Keuls pa a las
compa aciones múl iples. Si el conjun o de da os no supe aba la p ueba
de no malidad, se u iliza on p uebas no pa amé icas: las
compa aciones de dos g upos se ealiza on median e la p ueba de suma
de angos de Mann-Whi ney y las compa aciones múl iples, median e
el análisis unidi eccional de a ianza de K uskal-Wallis seguido de la
p ueba pos hoc S uden -Newman-Keuls o Dunn’s. Las di e encias se
conside a on es adís icamen e signi ica i as cuando p˂0,05.
Todos los análisis es adís icos ue on ealizados con el p og ama
SigmaPlo 3.0 ó 11.0 (Jandel Scien i ic, Sys a So wa e, Inc., CA,
EE.UU). Pa a la ep esen ación g á ica de los esul ados se emplea on
los so wa es SigmaPlo y G aphPad P ism 8 (G aph Pad Inc., San
Diego, CA, EE.UU).
RESULTADOS
95
4. RESULTADOS
4.1.RECEPTORES AT1 CEREBRALES E INFLAMACIÓN:
NEUROINFLAMACIÓN Y DEGENERACIÓN
DOPAMINÉRGICA EN UN MODELO DE PARKINSON
BASADO EN SINUCLEINOPATÍA.
Pa a es udia la implicación del ecep o AT1 en la neu oin lamación y
mue e neu onal dopaminé gica que cu san en la EP, se desa olló un
modelo basado en la sob eexp esión de la p o eína α-syn humana con
el obje i o de ep esen a más ielmen e la sinucleinopa ía con la que
cu san los pacien es de EP.
4.1.1. Sob eexp esión de la p o eína α-syn median e la
inyección es e eo áxica de AAV9
En p ime luga , pa a p oba la e icacia de la lesión, se demos ó la
sob eexp esión de dos o mas de la p o eína α-syn, la o ma WT y la
o ma mu ada A53T, en las neu onas TH-i de la SNpc, inducida as la
inyección es e eo áxica de ec o es AAV9-α-syn-WT y AAV9-α-syn-
A53T, espec i amen e, compa ada con la inyección de AAV9-GFP
u ilizada como g upo con ol. Pa a ello se ealiza on análisis de
inmuno luo escencia en secciones mesence álicas y se es udió la
colocalización de los ma cado es de di e en es ipos celula es y la
p o eína α-syn.
Las imágenes de mic oscopía láse con ocal con doble
inmuno luo escencia e ela on que la inyección del ec o AAV9
inducía una sob eexp esión de GFP o α-syn en neu onas
dopaminé gicas, pe o no en las células mic ogliales ni as oci os de la
SNpc de a a. Una semana después de la inyección del ec o AAV9,
se obse ó una exp esión gene alizada de GFP o α-syn que colocalizó
con el ma cado TH mos ando una e icien e ansducción en las
neu onas dopaminé gicas de la SNpc (Figu a 4a, d, g, j). En
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
96
consonancia con es udios p e ios (Pigna a o e al., 2018), no se
encon ó señal de colocalización signi ica i a en e α-syn o GFP y el
ma cado de población mic oglial Iba-1 (Figu a 4b, e, h, k) o el
ma cado de as oci os GFAP (Figu a 4c, , i, l). Además, se obse ó
colocalización en neu onas nega i as pa a TH, es deci , no
dopaminé gicas.
Figu a 4. Doble inmuno luo escencia del ma cado neu onal dopaminé gico TH (a, d, g, j), o el
ma cado mic oglial Iba-1 (b, e, h, k), o el ma cado as ocí ico (c, , i, l) ( ojo) y di e en es
ansgenes (GFP: a- ; α-syn-A53T: g-l) en la egión de la sus ancia neg a 1 semana después de
la inyección del ec o AAV9 que exp esan GFP humano o α-syn-A53T humana,
espec i amen e ( e de). Las imágenes de mic oscopia láse con ocal mues an la

RESULTADOS
97
colocalización (ama illo) de GFP o α-syn-A53T con el ma cado neu onal dopaminé gico TH
(a, d, g, j). Sin emba go, GFP o α-syn-A53T no se exp esan en células mic ogliales ni as oci os
(b, c, e, , h, i, k, l). Las á eas cuad adas en (a-c) y (g-i) se amplían en (d- ) y (j-l),
espec i amen e. Ba as de escala = 75 μm (a-c, g-i), 25 μm (d) y 7,5 μm (e- , j-l). Ab e ia u as:
TH, i oxina hid oxilasa; GFAP, p o eína ácida ib ila glial; Iba-1, molécula adap ado a de
unión a calcio ionizado 1; GFP, p o eína e de luo escende; α-syn, α-sinucleína. Es a igu a
ha sido aducida de Rod iguez-Pe ez e al., 2018; y se dis ibuye bajo los é minos de C ea i e
Commons A ibu ion 4.0 In e na ional License (h p://c ea i ecommons.o g/licenses/by/4.0/).
Cua o semanas después de la inyección, se obse ó una cla a
pé dida de células dopaminé gicas TH-i en la SNpc de los g upos
lesionados con ambos ec o es de α-syn. A pesa de la in ensa eacción
mic oglial obse ada en la zona en al del mesencé alo ipsila e al a la
lesión ( éase más adelan e), la exp esión de α-syn se localizó
exclusi amen e en neu onas (Figu a 5a- ). Sin emba go, se obse a on
algunas células mic ogliales agocí icas en ol iendo a neu onas que
exp esaban α-syn (Figu a 5g-k).
La asa de colocalización de las neu onas dopaminé gicas ue
simila en los ec o es de α-syn-WT y α-syn-A53T. Además, se
de e minó un ma caje in enso de la p o eína la α-syn os o ilada en las
neu onas dopaminé gicas supe i ien es en los g upos lesionados
(Figu a 6b-g; j-l). Los esul ados ob enidos po WB demues an la
exp esión de la p o eína α-syn anscu ida una semana pos -lesión. Sin
emba go, 4 semanas as la lesión se obse a un aumen o de exp esión
de α-syn os o ilada en se ina p129, la cual no ue obse ada en la
p ime a semana de lesión (Figu a 6h-i).
Pa a es udia si los an agonis as del ecep o AT1 es án implicados
en la os o ilación de la p o eína α-syn, se analizó la asa de
os o ilación de α-syn/TH en a as a adas con candesa án o
elmisa án. Los esul ados mues an que la asa de os o ilación no
disminuyó en a as a adas con bloquean es del ecep o AT1, en
compa ación con a as no a adas, lo que sugie e que la disminución de
la exp esión y de la os o ilación de la p o eína α-syn no es una
mecanismo esponsable de los e ec os neu op o ec o es de candesa án
y elmisa án desc i os en los siguien es apa ados (Figu a 6b, c).
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
98
Figu a 5. Doble y iple inmuno luo escencia del ma cado neu onal dopaminé gico TH (a, d),
o el ma cado as ocí ico GFAP (c, ), o el ma cado mic oglial Iba-1 (b, e, g-k) ( ojo), o el
ma cado nuclea Hoechs 33342 (i-k; azul), y di e en es ansgenes (α-syn-WT: a- ; α-syn-
A53T: g-k) ( e de) en la egión de la sus ancia neg a 4 semanas después de la inyección de
AAV9 que exp esa α-syn-WT humana (a- ) o α-syn-A53T humana (g-k), espec i amen e. Las
imágenes de mic oscopia láse con ocal mues an la colocalización (ama illo) de α-syn-WT con
el ma cado neu onal dopaminé gico TH (a, d). Sin emba go, α-syn-WT no se exp esa en la
mic oglía ni en los as oci os. Las á eas cuad adas en (a-c) se amplían en (d- ). En (b, e) se
obse a una in ensa espues a in lama o ia mic oglial. En (g, k) se mues a una célula mic oglial
en ol iendo a una neu ona que exp esa α-syn-A53T ( lecha). Ba as de escala = 75 μm (a-c),
7,5 μm (d), 5 μm (e- ), y 10 μm (g-k). Ab e ia u as: TH, i oxina hid oxilasa; GFAP, p o eína
ácida ib ila glial; Iba-1, molécula adap ado a de unión a calcio ionizado 1; α-syn, α-sinucleína.
RESULTADOS
99
Es a igu a ha sido aducida de Rod iguez-Pe ez e al., 2018 y se dis ibuye bajo los é minos
de C ea i e Commons A ibu ion 4.0 In e na ional License
(h p://c ea i ecommons.o g/licenses/by/4.0/).
Figu a 6. Exp esión de α-syn (a, h) y α-syn os o ilada (pS129-α-syn) (b-g, i-l) a 1 semana (a,
h) y a 4 semanas (b-g, i-l) después de la inyección de ec o es AAV9. La asa de exp esión de
α-syn en neu onas dopaminé gicas (TH-i ) de a as inyec adas con AAV9-α-syn-WT o AAV9-
α-syn-A53T se mues a en (a). La asa de exp esión de α-syn os o ilada en neu onas
dopaminé gicas (TH-i ) de a as inyec adas con AAV9-α-syn-WT o AAV9-α-syn-A53T y
a adas o no con candesa án (CAND) o elmisa án (TELM) se mues a en (b, c). La
colocalización (ama illo) de α-syn os o ilada ( oja) y neu onas dopaminé gicas ( e de) en los
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
100
di e en es g upos expe imen ales se ilus a en (d, g) y se amplía en (j, l). La exp esión de α-syn
1 semana después de la inyección (h) y α-syn os o ilada en la egión nig al (es deci , células
dopaminé gicas y no dopaminé gicas) 1 y 4 semanas después de la inyección (i) se con i mó
median e WB. Los da os se ep esen an como la media ± SEM. *p< 0,05 en elación con el
g upo inyec ado con solución salina; #p < 0,05 en elación con el g upo inyec ado con AAV9-
Ф. ANOVA de una ía seguido de la p ueba pos hoc de Holm-Sidak. Ba as de escala = 250
μm (d-g) y 25 μm (j-l). Ab e ia u as: TH, i oxina hid oxilasa; GFP, p o eína e de
luo escende; α-syn, α-sinucleína; AAV9, ec o i al adenoasociado ipo 9; CAND,
candesa án; TELM, elmisa án; WT, o ma sal aje. Es a igu a ha sido aducida de
Rod iguez-Pe ez e al., 2018 y se dis ibuye bajo los é minos de C ea i e Commons A ibu ion
4.0 In e na ional License (h p://c ea i ecommons.o g/licenses/by/4.0/).
4.1.2. Pé dida de neu onas dopaminé gicas en un modelo de
Pa kinson basado en sinucleinopa ía. E ec o
neu op o ec o de los bloquean es del ecep o AT1
Pa a comp oba la mue e neu onal dopaminé gica y la pé dida de
densidad de los e minales es ia ales que ca ac e iza a los modelos
animales de EP se ealizó un análisis inmunohis oquímico del ma cado
TH en la SNpc y en el ST, espec i amen e. En elación con es udios
an e io es en los que u ilizan modelos animales simila es (Dec essac e
al., 2012, Van de Pe en e al., 2015), no se p odujo una pé dida
ap eciable de la iabilidad de neu onas dopaminé gicas (Figu a 7a) una
semana después de la inyección. Además, no se obse a on cambios
signi ica i os en las células TH-i del es iado, lo que sugie e que no se
p odujo una pé dida signi ica i a de e minales dopaminé gicos
es ia ales (Figu a 8a).
Cua o semanas después de la inyección, median e cuan i icación
es e eológica, se demos ó que el núme o de las neu onas TH-i en la
SNpc ipsila e al a la lesión de a as inyec adas con solución salina no
ue signi ica i amen e di e en e del cuan i icado en los animales con
inyección de ec o es acíos. Sin emba go, la inyección de AAV9-α-
syn-WT o AAV9-α-syn-A53T indujo una pé dida de neu onas TH-i
p óxima al 57% con espec o a los g upos con ol (Figu a 7b- ). La
pé dida de neu onas en la SNpc se con i mó median e el ecuen o
celula de secciones con inción de Nissl. Además, la pé dida de
e minales es ia ales dopaminé gicos se con i mó median e análisis de
densidad óp ica de TH-i es ia al, an o en las a as inyec adas con
AAV9-α-syn-WT, como en las inyec adas con AAV9-α-syn-A53T, que
RESULTADOS
107
pa a la ac i idad locomo o a (c, ). Las mediciones mues an educciones signi ica i as del
endimien o mo o en las a as lesionadas en elación con los con oles (solución salina y
ec o es acíos), que mejo a on signi ica i amen e con el a amien o con candesa án o
elmisa án. Los da os se p esen an como la media ± SEM. *p< 0,05 en elación con el g upo
inyec ado con solución salina; #p < 0,05 en elación con el g upo inyec ado con AAV9-Ф; &p
< 0,05 en elación con el g upo inyec ado con AAV9-α-syn-WT humana (a-c) o AAV9-α-syn-
A53T humana (d- ). ANOVA de una ía seguido de la p ueba pos hoc de Holm-Sidak.
Ab e ia u as: WT, o ma sal aje; α-syn, α-sinucleína; CAND, candesa án; TELM,
elmisa án; AAV9, ec o i al adenoasociado ipo 9; AUC, á ea bajo la cu a. Es a igu a ha
sido aducida de Rod iguez-Pe ez e al., 2018 y se dis ibuye bajo los é minos de C ea i e
Commons A ibu ion 4.0 In e na ional License (h p://c ea i ecommons.o g/licenses/by/4.0/).
4.1.3. Implicación del ecep o AT1 en la neu oin lamación
mediada po la sob eexp esión de α-syn
Es udios p e ios han demos ado una impo an e elación en e la
sinucleinopa ía y la espues a in lama o ia mic oglial. O os es udios
han obse ado una es echa elación en e la hipe ac i ación del eje p o-
oxida i o del SRA, Ang II/AT1/NOX, y la neu oin lamación. Po ello,
se es udió si el uso de an agonis as del ecep o AT1 pod ían ene un
e ec o bene icioso en la in lamación mediada po la sob eexp esión de
α-syn. Pa a ello, se lle a on a cabo análisis de inmuno luo escencia e
inmunohis oquímica de mic oglía eac i a. Además, se es udió la
exp esión del ARNm de las p incipales ci oquinas de eno ipo
mic oglial p o-in lama o io/p o-oxidan e (TNF-α, IL-6, IL-1β, iNOS) y
eno ipo an i-in lama o io/an i-oxidan e (ARG-1).
En las imágenes de luo escencia, se obse ó que 1 semana después
de la inyección de AAV9-α-syn se p odujo un aumen o en la densidad
de células Iba-1-i en la SNpc (Figu a 4h, k). Sin emba go, los eno ipos
agocí icos, así como, la mic oglía agocí ica que en ol ía las neu onas
que sob eexp esaban α-syn e an poco abundan es. Cua o semanas
después de la inyección de los ec o es i ales, se obse ó un ma cado
aumen o de la espues a mic oglial, acompañada de un abundan e
eno ipo de mic oglía ac i ada y un al o núme o de células mic ogliales
en ol iendo las neu onas posi i as pa a α-syn (Figu a 5b, e g-k).
Po o o lado, el ele ado núme o de eno ipos mo ológicos de
mic oglía clásicamen e ac i ada se con i mó con inmunohis oquímica
y cuan i icación es e ológica de OX-6 en la SNpc. Las a as inyec adas
con AAV9-α-syn-WT o AAV9-α-syn-A53T mos a on un núme o

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
108
signi ica i amen e mayo de células OX6-i que las inyec adas con
salino o con ec o es acíos cua o semanas después de la inyección.
Sin emba go, los e ec os de la α-syn en la espues a mic oglial ue on
signi ica i amen e meno es en las a as a adas con los an agonis as del
ecep o AT1, candesa án o elmisa án (Figu a 11).
Figu a 11. Células mic ogliales inmuno eac i as a OX6 en la sus ancia neg a a las 4 semanas
después de la inyección de solución salina, o ec o es AAV9 acíos (AAV9-Ф), o AAV9-α-
syn-WT, o AAV9-α-syn-A53T en a as no a adas o a adas con el an agonis a AT1
candesa án (CAND) o elmisa án (TELM). En (C-I) se mues an o omic og a ías
ep esen a i as de la sus ancia neg a compac a de di e en es g upos de a as. El núme o
es imado de células posi i as pa a OX6 en la sus ancia neg a de los di e en es g upos
expe imen ales se mues a en (A, B). Las células mic ogliales se mues an como po cen ajes de
las obse adas en los con oles (es deci , a as inyec adas con solución salina), y los da os son
ep esen ados como la media ± SEM. *p < 0,05 en elación con el g upo a ado con solución
salina, #p < 0,05 en elación con el g upo inyec ado con AAV9-Ф-, &p < 0,05 en elación con
el g upo inyec ado con AAV9 exp esando α-syn-WT humana (A) o exp esando α-syn-A53T
humana (B). ANOVA de una ía y p ueba pos hoc de Holm-Sidak. Ba a de escala = 100 μm.
RESULTADOS
109
Ab e ia u as: WT, o ma sal aje; α-syn, α-sinucleína; DA, dopamina; DOPAC, ácido 3,4-
dihid oxi enilacé ico; HVA, ácido homo anílico; AAV9, ec o i al adenoasociado ipo 9;
OX6-i , inmuno eac i as a OX-6; CAND, candesa án; TELM, elmisa án. Es a igu a ha sido
aducida de Rod iguez-Pe ez e al., 2018 y se dis ibuye bajo los é minos de C ea i e
Commons A ibu ion 4.0 In e na ional License (h p://c ea i ecommons.o g/licenses/by/4.0/).
T as los esul ados ob enidos, se es udió si la sob eexp esión de α-
syn pod ía p o oca un aumen o del eje p o-oxida i o del SRA, al y
como se ha demos ado en o os modelos de EP (Labandei a-Ga cia e
al., 2021). Pa a ello, se es udió la exp esión del ARNm del ecep o
AT1 median e RT-QPCR y la ac i idad de NOX en homogenado de
SNpc de a as inyec adas con AAV9-α-syn y AAV9-∅. Los esul ados
mos a on que los animales que sob eexp esaban α-syn enían
inc emen ada la exp esión de los ecep o es AT1 y de la ac i idad NOX
en la egión nig al en compa ación con las a as con ol inyec adas con
ec o es acíos (Figu a 12a, b, d). Es a hipe ac i ación del eje p o-
oxida i o del SRA pod ía inhibi se con el uso de an agonis as del
ecep o de AT1 (ARAII). Po ello, se a a on animales inyec ados con
AAV9-α-syn-WT ó AAV9-α-syn-A53T con an agonis as de AT1,
candesa án y elmisa án. El uso de ambos a amien os demos ó una
disminución de la hipe ac i ación del eje p o-oxida i o del SRA,
disminuyendo así, la exp esión del ARNm del AT1 y la ac i idad de
NOX, con espec o a a as inyec adas con AAV9-α-syn sin a amien o
(Figu a 12a, b, d).
En consonancia con es os esul ados, las a as inyec adas con
AAV9-α-syn mos a on un aumen o signi ica i o de la exp esión del
ma cado de ac i idad agocí ica CD68 (Figu a 12c) y de los
ma cado es del eno ipo mic oglial p o-in lama o io (iNOS, TNF-α, IL-
1β e IL-6) (Figu a 13a-e) y una disminución signi ica i a de la
exp esión del ma cado del eno ipo mic oglial an i-in lama o io ARG-
1 (Figu a 13 ). Es os cambios en los ma cado es de espues a
in lama o ias mic ogliales ue on inhibidos po el a amien o
simul áneo con los an agonis as de AT1, candesa án o elmisa án
(Figu a 13a- ).
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
110
Figu a 12. E ec o de los ec o es AAV9 acíos (AAV9-Ф) o AAV9-α-syn sob e la exp esión
del ARNm del ecep o AT1, la ac i idad NOX y los ma cado es de ac i idad agocí ica (CD68)
en a as no a adas o a adas con el an agonis a AT1, candesa án (CAND) o elmisa án
(TELM). AAV9-α-syn-WT indujo un aumen o signi ica i o de la exp esión del ARNm del
ecep o AT1 (a), de la ac i idad NOX (b) y de CD68 (c). En (d) se mues a un aumen o
signi ica i o de la ac i idad NOX inducido po AAV9-α-syn-A53T. Es os cambios ue on
inhibidos po el a amien o simul áneo con los an agonis as de AT1, candesa án o elmisa án
(a-d). En (a, c), los esul ados se no maliza on con espec o a los alo es del g upo de con ol.
Pa a la RT-QPCR, se u ilizó el mé odo de alo es umb al de ciclo compa a i o (2-ΔΔC ). La
exp esión de ARNm se midió en elación con la de los ansc i os de man enimien o (β-ac ina).
La ac i idad de NOX se exp esó como unidades de luminiscencia ela i as (ULR/min/mg de
p o eína). Los da os son ep esen ados como la media ± SEM. *p < 0,05 en elación con el
g upo inyec ado con AAV9-Ф; #p < 0,05 en elación con el g upo inyec ado con AAV9 que
exp esa α-syn humana. ANOVA de una ía seguido de la p ueba pos hoc de Holm-Sidak.
Ab e ia u as: WT, o ma sal aje; α-syn, α-sinucleína; AAV9, ec o i al adenoasociado ipo
9; CAND, candesa án; TELM, elmisa án; AT1, ecep o de angio ensina ipo 1; CD68, clus e
de di e enciación 68. Es a igu a ha sido aducida de Rod iguez-Pe ez e al., 2018 y se
dis ibuye bajo los é minos de C ea i e Commons A ibu ion 4.0 In e na ional License
(h p://c ea i ecommons.o g/licenses/by/4.0/).
RESULTADOS
111
Figu a 13. E ec o de los ec o es AAV9 acíos (AAV9-Ф) o AAV9-α-syn humana sob e la
exp esión de ma cado es del eno ipo mic oglial en a as no a adas o a adas con el
an agonis a AT1, candesa án (CAND) o elmisa án (TELM). El AAV9-α-syn-WT indujo un
aumen o signi ica i o de la exp esión de ma cado es del eno ipo p o-oxidan e (IL-1β, IL-6,
iNOS y TNF-α) (a-d). El ma cado aumen o de la exp esión de TNF-α inducido po AAV9-α-
syn-A53T se mues a en (e). Sin emba go, se obse ó una disminución de la exp esión del
ma cado del eno ipo de epa ación/ egene ación an i-in lama o io ARG-1 ( ). Es os cambios
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
112
ue on inhibidos po el a amien o simul áneo con los an agonis as de AT1, candesa án
(CAND) o elmisa án (TELM) (a- ). Los esul ados se no maliza on con espec o a los alo es
del g upo de con ol. Pa a la RT-PCR, se u ilizó el mé odo de alo es umb ales de ciclo
compa a i o (2-ΔΔC ). Se midió la exp esión ARNm en elación con el de los ansc i os de
man enimien o (β-ac ina). Los ni eles de TNF-α se cuan i ica on con ki s de ensayo
inmunoenzimá ico (ELISA) especí icos pa a a as en picog amos po milili o po milig amo
de p o eína y se exp esa on como po cen ajes del con enido en las mues as del g upo de
con ol. Los da os se ep esen an como la media ± SEM. *p < 0,05 en elación con el g upo
inyec ado con AAV9-Ф; #p < 0,05 en elación con el g upo inyec ado con AAV9 que exp esa
α-syn humana. ANOVA de una ía seguido de la p ueba pos hoc de Holm-Sidak. Ab e ia u as:
Ab e ia u as: WT, o ma sal aje; α-syn, α-sinucleína; CAND, candesa án; TELM,
elmisa án; AAV9, ec o i al adenoasociado ipo 9; IL-1β, in e leucina 1β; IL-6, in e leucina
6; iNOS, óxido ní ico sin asa inducible; TNF-α, ac o de nec osis umo al. Es a igu a ha sido
aducida de Rod iguez-Pe ez e al., 2018 y se dis ibuye bajo los é minos de C ea i e
Commons A ibu ion 4.0 In e na ional License (h p://c ea i ecommons.o g/licenses/by/4.0/).
En esumen, los esul ados ob enidos mues an un impo an e papel
de los ecep o es AT1 en la neu oin lamación mediada po la
sob eexp esión de la p o eína α-syn humana en un modelo de a a. El
a amien o con bloquean es del ecep o AT1, candesa án y
elmisa án, disminuyó la espues a mic oglial in lama o ia
p omo iendo así, un e ec o neu op o ec o en la mue e neu onal
dopaminé gica en la SNpc esul ando en un mejo endimien o del
compo amien o mo o .
4.2.RECEPTORES AT2 CEREBRALES E INFLAMACIÓN
Los esul ados an e io men e p esen ados mues an un impo an e papel
del ecep o AT1 en la neu oin lamación y espues a mic oglial de un
modelo de neu odegene ación dopaminé gica. Sin emba go, la
implicación del ecep o AT2 en dichos p ocesos ha sido menos
es udiada. Es po ello que, el siguien e obje i o de la esis se cen ó en
es udia el papel del ecep o AT2, bajo si uaciones de in lamación
pe i é ica c ónica, y su posible implicación en la degene ación
dopaminé gica con la que cu sa la EP.
4.2.1. Recep o es AT2 ce eb ales en in lamación pe i é ica
c ónica (en ejecimien o) y aguda (LPS)
El en ejecimien o es un p oceso isiológico que desemboca en
di e sos mecanismos p o-oxida i os que p omue en un es ado de
in lamación c ónica en el o ganismo. Es e es ado de in lamación pod ía

RESULTADOS
113
in lui en la exp esión del ecep o AT2 ce eb al. Pa a es udia la
exp esión del ecep o AT2 en el en ejecimien o se compa a on a ones
WT jó enes (2m), adul os (12m) y en ejecidos (18m). Los análisis de
RT-QPCR e ela on que, en el homogenizado de la SN, la exp esión de
ARNm del ecep o AT2 mos aba una ma cada disminución con el
en ejecimien o (Figu a 14A).
Seguidamen e, se analizó cómo pod ía in lui la disminución de la
exp esión del ecep o AT2 obse ada en el en ejecimien o sob e o os
componen es y ecep o es del SRA ce eb al. Pa a ello se u iliza on
a ones AT2KO jó enes y en ejecidos, y a ones WT jó enes y
en ejecidos, y se ealiza on análisis de ansc i os median e RT-QPCR
y análisis de exp esión de p o eínas median e WB.
Los esul ados mues an que, en el homogenado de SN, la
exp esión de ARNm del ecep o AT1 mos ó un ma cado aumen o en
a ones en ejecidos (Figu a 14B). Cu iosamen e, los ni eles al os de
exp esión de ARNm del ecep o AT1 ya e a signi ica i os en a ones
AT2KO jó enes con espec o a WT jó enes (2m), y no cambia on
signi ica i amen e con el en ejecimien o (12m y 18m) (Figu a 14B).
Los esul ados ob enidos ambién mues an una disminución
signi ica i a en la exp esión de ARNm del MasR en ausencia de AT2
en compa ación con a ones WT jó enes. En a ones WT, la exp esión
del ecep o MasR disminuyó con el en ejecimien o y no hubo
di e encias signi ica i as en la exp esión del ecep o Mas en e los
a ones WT adul os y en ejecidos y los a ones AT2 KO (Figu a 14C).
Además del aumen o de la exp esión de AT1, los a ones AT2KO de
di e en es edades (2m, 12m, 18m) mos a on un aumen o signi ica i o
en la exp esión de ARNm y de p o eína del ANG en elación con los
con oles WT co espondien es (Figu a 14D). Po úl imo, los cambios
impo an es obse ados en la exp esión de ARNm en a ones AT2KO
jó enes se con i ma on a ni el de p o eína median e WB (Figu a 14E-
G).
Todos es os esul ados indican un ma cado desequilib io en la
exp esión de componen es y ecep o es del SRA ce eb al hacia el eje
p o-in lama o io y p o-oxida i o en a ones AT2KO y WT en ejecidos.
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
114
Es e desequilib io pod ía desemboca en un inc emen o de la espues a
in lama o ia ce eb al. Po ello se es udió la exp esión de ARNm de
di e en es ma cado es p o-in lama o ios. Los esul ados mos a on un
aumen o en la exp esión de ma cado es p o-in lama o ios como IL-1β,
NF-kB e IL-6 en animales en ejecidos WT, que ya se encon aba
inc emen ada en los a ones AT2KO (Figu a 15A, B, C). También se
obse ó un aumen o de la exp esión de ARNm de ma cado es de es és
oxida i o como la subunidad p47 de NOX (p47 agoci o oxidasa) y una
disminución de la ac i idad COX en la SNpc de a ones AT2KO con
espec o a a ones WT (Figu a 15D-E). Cu iosamen e, se obse ó un
aumen o simila en la exp esión de los ma cado es p o-oxida i os en
a ones WT en ejecidos (Figu a 15D-E).
RESULTADOS
115
Figu a 14. Cambios en los componen es y ecep o es del SRA con el en ejecimien o en la
egión de la SNpc en a ones WT y en a ones AT2KO. Los a ones WT mos a on una
disminución p og esi a de la exp esión del ARNm del ecep o AT2 (A) y del MasR (C) y un
aumen o del ARNm del ecep o AT1 (B) y del ANG (D; es adís icamen e no signi ica i o) con
el en ejecimien o, que ya se obse a en los a ones AT2KO jó enes (B-D). Los p incipales
cambios en la exp esión del ARNm de los ecep o es AT1 y Mas y del ANG se con i ma on a
ni el p o eico median e un análisis de WB (E-G). La exp esión p o eica se midió en elación
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
116
con la banda de la p o eína de man enimien o GAPDH y la exp esión de ARNm se midió en
elación con la de los ansc i os de man enimien o (β-Ac ina). Los alo es de las p o eínas
ue on no malizados a los alo es de los con oles (100%). Pa a el ARNm se u ilizó el mé odo
de los alo es umb ales del ciclo compa a i o (2-ΔΔC ). Los da os son ep esen ados como la
media ± SEM. *p < 0,05 en compa ación con el con ol WT co espondien e, #p < 0,05 en
compa ación con el g upo jo en (2m) WT o jo en (2m) AT2KO, $p < 0,05 en compa ación
con el g upo adul o (12m) WT. ANOVA de una ía (A) o ANOVA de dos ías (B-D) seguido
de la p ueba pos hoc de S uden -Newman-Keuls, y p ueba de S uden (E-G). Ab e ia u as:
WT, o ma sal aje; AT2, ecep o de angio ensina ipo 2; AT1, ecep o de angio ensina ipo 1;
ANG, angio ensinógeno; AT2KO, Knock-Ou pa a el ecep o AT2. Es a igu a ha sido
aducida de Rod iguez-Pe ez e al., 2019 (con au o ización de Else ie ).
Con el obje i o de es udia la espues a a es ímulos p o-
in lama o ios pe i é icos agudos en ausencia de los ecep o es AT2, a
un g upo de a ones jó enes AT2KO se les inyec ó LPS pa a induci
una espues a in lama o ia pe i é ica aguda. Con es e modelo se
obse ó que la exp esión de ARNm de ma cado es p o-in lama o ios
(IL-6, IL-1β) mos ó un aumen o adicional as la inyección de LPS.
Sin emba go, no se obse ó (al menos con la dosis 5mg/kg y al iempo
u ilizado, 24 h) un aumen o adicional en la exp esión del ARNm del
ecep o AT1 (Figu a 15F). Es os esul ados es án en consonancia con
lo obse ado en a ones AT2KO (Figu as 14B y 15A–C), ya que el
en ejecimien o induce un aumen o adicional de los ma cado es p o-
in lama o ios pe o no un aumen o adicional de la exp esión del ARNm
de AT1 en animales AT2KO.
BIBLIOGRAFÍA
217
angio ensin ecep o (AT1) in pa ien s wi h hype ension. J Hype ens 18, 945-953,
doi:10.1097/00004872-200018070-00017
Gandhi, C. K., Holmes, R., Gewolb, I. H. & Uhal, B. D. (2019) Deg ada ion o Lung P o ec i e
Angio ensin Con e ing Enzyme-2 by Meconium in Human Al eola Epi helial
Cells: A Po en ial Pa hogenic Mechanism in Meconium Aspi a ion Synd ome. Lung
197, 227-233, doi:10.1007/s00408-019-00201-y
Gao, Q., Ou, Z., Jiang, T., Tian, Y. Y., Zhou, J. S., Wu, L., Shi, J. Q. & Zhang, Y. D. (2017)
Azilsa an amelio a es apop osis o dopamine gic neu ons and escues cha ac e is ic
pa kinsonian beha io s in a a model o Pa kinson's disease. Onco a ge 8, 24099-
24109, doi:10.18632/onco a ge .15732
Ga ido-Gil, P., Jogla , B., Rod iguez-Pe ez, A. I., Gue a, M. J. & Labandei a-Ga cia, J. L.
(2012) In ol emen o PPAR-gamma in he neu op o ec i e and an i-in lamma o y
e ec s o angio ensin ype 1 ecep o inhibi ion: e ec s o he ecep o an agonis
elmisa an and ecep o dele ion in a mouse MPTP model o Pa kinson's disease. J
Neu oin lamma ion 9, 38, doi:10.1186/1742-2094-9-38
Ga ido-Gil, P., Rod iguez-Pe ez, A. I., Dominguez-Meijide, A., Gue a, M. J. & Labandei a-
Ga cia, J. L. (2018) Bidi ec ional Neu al In e ac ion Be ween Cen al Dopamine gic
and Gu Lesions in Pa kinson's Disease Models. Mol Neu obiol 55, 7297-7316,
doi:10.1007/s12035-018-0937-8
Ga ido-Gil, P., Rod iguez-Pe ez, A. I., Fe nandez-Rod iguez, P., Lanciego, J. L. &
Labandei a-Ga cia, J. L. (2017) Exp ession o angio ensinogen and ecep o s o
angio ensin and p o enin in he a and monkey s ia al neu ons and glial cells. B ain
S uc Func 222, 2559-2571, doi:10.1007/s00429-016-1357-z
Ga ido-Gil, P., Rod iguez-Pe ez, A. I., Lage, L. & Labandei a-Ga cia, J. L. (2021) Es ogen
De iciency and Colonic Func ion: Su gical Menopause and Sex Di e ences in
Angio ensin and Dopamine Recep o In e ac ion. J Ge on ol A Biol Sci Med Sci 76,
1533-1541, doi:10.1093/ge ona/glaa244
Ga ido-Gil, P., Valenzuela, R., Villa -Cheda, B., Lanciego, J. L. & Labandei a-Ga cia, J. L.
(2013) Exp ession o angio ensinogen and ecep o s o angio ensin and p o enin in
he monkey and human subs an ia nig a: an in acellula enin-angio ensin sys em in
he nig a. B ain S uc Func 218, 373-388, doi:10.1007/s00429-012-0402-9
Gau he on, J., Go es, G. J. & Rod igues, C. M. P. (2020) Ly ic cell dea h in me abolic li e
disease. J Hepa ol 73, 394-408, doi:10.1016/j.jhep.2020.04.001
Gemba d , F., S e ne -Kock, A., Imboden, H., Spal eholz, M., Reibi z, F., Schul heiss, H. P.,
Siems, W. E. & Wal he , T. (2005) O gan-speci ic dis ibu ion o ACE2 mRNA and
co ela ing pep idase ac i i y in oden s. Pep ides 26, 1270-1277,
doi:10.1016/j.pep ides.2005.01.009
Gheblawi, M., Wang, K., Vi ei os, A., Nguyen, Q., Zhong, J. C., Tu ne , A. J., Raizada, M. K.,
G an , M. B. & Oudi , G. Y. (2020) Angio ensin-Con e ing Enzyme 2: SARS-CoV-
2 Recep o and Regula o o he Renin-Angio ensin Sys em: Celeb a ing he 20 h
Anni e sa y o he Disco e y o ACE2. Ci c Res 126, 1456-1474,
doi:10.1161/CIRCRESAHA.120.317015
Ghosh, M., Xu, Y. & Pea se, D. D. (2016) Cyclic AMP is a key egula o o M1 o M2a
pheno ypic con e sion o mic oglia in he p esence o Th2 cy okines. J
Neu oin lamma ion 13, 9, doi:10.1186/s12974-015-0463-9
Gildea, J. J. (2009) Dopamine and angio ensin as enal coun e egula o y sys ems con olling
sodium balance. Cu Opin Neph ol Hype ens 18, 28-32,
doi:10.1097/MNH.0b013e32831a9e0b

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
218
Gildea, J. J., Xu, P., Kemp, B. A., Ca ey, R. M., Jose, P. A. & Felde , R. A. (2019) The
Dopamine D1 Recep o and Angio ensin II Type-2 Recep o a e Requi ed o
Inhibi ion o Sodium T anspo Th ough a P o ein Phospha ase 2A Pa hway.
Hype ension 73, 1258-1265, doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.119.12705
Gohlke, P., Von Kugelgen, S., Ju gensen, T., Kox, T., Rasche , W., Culman, J. & Unge , T.
(2002) E ec s o o ally applied candesa an cilexe il on cen al esponses o
angio ensin II in conscious a s. J Hype ens 20, 909-918, doi:10.1097/00004872-
200205000-00026
G amma opoulos, T. N., Jones, S. M., Ahmadi, F. A., Hoo e , B. R., Snell, L. D., Skoch, J.,
Jha e i, V. V., Poczobu , A. M., Weyhenmeye , J. A. & Zawada, W. M. (2007)
Angio ensin ype 1 ecep o an agonis losa an, educes MPTP-induced degene a ion
o dopamine gic neu ons in subs an ia nig a. Mol Neu odegene 2, 1,
doi:10.1186/1750-1326-2-1
G ay, M. T. & Woul e, J. M. (2015) S ia al blood-b ain ba ie pe meabili y in Pa kinson's
disease. J Ce eb Blood Flow Me ab 35, 747-750, doi:10.1038/jcb m.2015.32
G eenhill, C. J., Jones, G. W., Nowell, M. A., New on, Z., Ha ey, A. K., Moideen, A. N.,
Collins, F. L., Bloom, A. C., Coll, R. C., Robe son, A. A., Coope , M. A., Rosas, M.,
Taylo , P. R., O'Neill, L. A., Humph eys, I. R., Williams, A. S. & Jones, S. A. (2014)
In e leukin-10 egula es he in lammasome-d i en augmen a ion o in lamma o y
a h i is and join des uc ion. A h i is Res The 16, 419, doi:10.1186/s13075-014-
0419-y
G iendling, K. K., So escu, D. & Ushio-Fukai, M. (2000) NAD(P)H oxidase: ole in
ca dio ascula biology and disease. Ci c Res 86, 494-501,
doi:10.1161/01. es.86.5.494
G obe, J. L., Xu, D. & Sigmund, C. D. (2008) An in acellula enin-angio ensin sys em in
neu ons: ac , hypo hesis, o an asy. Physiology (Be hesda) 23, 187-193,
doi:10.1152/physiol.00002.2008
Guan, W. J., Liang, W. H., Zhao, Y., Liang, H. R., Chen, Z. S., Li, Y. M., Liu, X. Q., Chen, R.
C., Tang, C. L., Wang, T., Ou, C. Q., Li, L., Chen, P. Y., Sang, L., Wang, W., Li, J.
F., Li, C. C., Ou, L. M., Cheng, B., Xiong, S., Ni, Z. Y., Xiang, J., Hu, Y., Liu, L.,
Shan, H., Lei, C. L., Peng, Y. X., Wei, L., Liu, Y., Hu, Y. H., Peng, P., Wang, J. M.,
Liu, J. Y., Chen, Z., Li, G., Zheng, Z. J., Qiu, S. Q., Luo, J., Ye, C. J., Zhu, S. Y.,
Cheng, L. L., Ye, F., Li, S. Y., Zheng, J. P., Zhang, N. F., Zhong, N. S., He, J. X. &
China Medical T ea men Expe G oup o , C. (2020) Como bidi y and i s impac on
1590 pa ien s wi h COVID-19 in China: a na ionwide analysis. Eu Respi J 55,
doi:10.1183/13993003.00547-2020
Gunde sen, H. J., Bend sen, T. F., Ko bo, L., Ma cussen, N., Molle , A., Nielsen, K.,
Nyengaa d, J. R., Pakkenbe g, B., So ensen, F. B., Ves e by, A. & e al. (1988) Some
new, simple and e icien s e eological me hods and hei use in pa hological esea ch
and diagnosis. APMIS 96, 379-394, doi:10.1111/j.1699-0463.1988. b05320.x
Gun he , J., Kill, A., Becke , M. O., Heidecke, H., Rademache , J., Siege , E., Radic, M.,
Bu mes e , G. R., D agun, D. & Riemekas en, G. (2014) Angio ensin ecep o ype 1
and endo helin ecep o ype A on immune cells media e mig a ion and he exp ession
o IL-8 and CCL18 when s imula ed by au oan ibodies om sys emic scle osis
pa ien s. A h i is Res The 16, R65, doi:10.1186/a 4503
Guo, Y. R., Cao, Q. D., Hong, Z. S., Tan, Y. Y., Chen, S. D., Jin, H. J., Tan, K. S., Wang, D.
Y. & Yan, Y. (2020) The o igin, ansmission and clinical he apies on co ona i us
disease 2019 (COVID-19) ou b eak - an upda e on he s a us. Mil Med Res 7, 11,
doi:10.1186/s40779-020-00240-0
BIBLIOGRAFÍA
219
Gu wi z, D. (2020) Angio ensin ecep o blocke s as en a i e SARS-CoV-2 he apeu ics. D ug
De Res 81, 537-540, doi:10.1002/dd .21656
Habib, P. & Beye , C. (2015) Regula ion o b ain mic oglia by emale gonadal s e oids. J
S e oid Biochem Mol Biol 146, 3-14, doi:10.1016/j.jsbmb.2014.02.018
Haga, S., Naga a, N., Okamu a, T., Yamamo o, N., Sa a, T., Yamamo o, N., Sasazuki, T. &
Ishizaka, Y. (2010) TACE an agonis s blocking ACE2 shedding caused by he spike
p o ein o SARS-CoV a e candida e an i i al compounds. An i i al Res 85, 551-555,
doi:10.1016/j.an i i al.2009.12.001
Haga, S., Yamamo o, N., Nakai-Mu akami, C., Osawa, Y., Tokunaga, K., Sa a, T., Yamamo o,
N., Sasazuki, T. & Ishizaka, Y. (2008) Modula ion o TNF-alpha-con e ing enzyme
by he spike p o ein o SARS-CoV and ACE2 induces TNF-alpha p oduc ion and
acili a es i al en y. P oc Na l Acad Sci U S A 105, 7809-7814,
doi:10.1073/pnas.0711241105
Hamel, E., Royea, J., Ongali, B. & Tong, X. K. (2016) Neu o ascula and Cogni i e ailu e in
Alzheime 's Disease: Bene i s o Ca dio ascula The apy. Cell Mol Neu obiol 36,
219-232, doi:10.1007/s10571-015-0285-4
Hamming, I., Timens, W., Bul huis, M. L., Lely, A. T., Na is, G. & an Goo , H. (2004) Tissue
dis ibu ion o ACE2 p o ein, he unc ional ecep o o SARS co ona i us. A i s
s ep in unde s anding SARS pa hogenesis. J Pa hol 203, 631-637,
doi:10.1002/pa h.1570
Han, J., Fan, Y., Zhou, K., Blomg en, K. & Ha is, R. A. (2021) Unco e ing sex di e ences o
oden mic oglia. J Neu oin lamma ion 18, 74, doi:10.1186/s12974-021-02124-z
Hanamsaga , R., Al e , M. D., Block, C. S., Sulli an, H., Bol on, J. L. & Bilbo, S. D. (2017)
Gene a ion o a mic oglial de elopmen al index in mice and in humans e eals a sex
di e ence in ma u a ion and immune eac i i y. Glia 65, 1504-1520,
doi:10.1002/glia.23176
Hansen, C. & Li, J. Y. (2012) Beyond alpha-synuclein ans e : pa hology p opaga ion in
Pa kinson's disease. T ends Mol Med 18, 248-255,
doi:10.1016/j.molmed.2012.03.002
Ha aguchi, T., Iwasaki, K., Takasaki, K., Uchida, K., Nai o, T., Nogami, A., Kubo a, K.,
Shindo, T., Uchida, N., Ka su abayashi, S., Mishima, K., Nishimu a, R. & Fujiwa a,
M. (2010) Telmisa an, a pa ial agonis o pe oxisome p oli e a o -ac i a ed ecep o
gamma, imp o es impai men o spa ial memo y and hippocampal apop osis in a s
ea ed wi h epea ed ce eb al ischemia. B ain Res 1353, 125-132,
doi:10.1016/j.b ain es.2010.07.017
Ha lid, S., My e, R. & Van Guelpen, B. (2017) The Me abolic Synd ome, In lamma ion, and
Colo ec al Cance Risk: An E alua ion o La ge Panels o Plasma P o ein Ma ke s
Using Repea ed, P ediagnos ic Samples. Media o s In lamm 2017, 4803156,
doi:10.1155/2017/4803156
Ha me , D., Gilbe , M., Bo man, R. & Cla k, K. L. (2002) Quan i a i e mRNA exp ession
p o iling o ACE 2, a no el homologue o angio ensin con e ing enzyme. FEBS Le
532, 107-110, doi:10.1016/s0014-5793(02)03640-2
Ha ms, A. S., Cao, S., Rowse, A. L., Thome, A. D., Li, X., Mangie i, L. R., C on, R. Q., Shacka,
J. J., Raman, C. & S andae , D. G. (2013) MHCII is equi ed o alpha-synuclein-
induced ac i a ion o mic oglia, CD4 T cell p oli e a ion, and dopamine gic
neu odegene a ion. J Neu osci 33, 9592-9600, doi:10.1523/JNEUROSCI.5610-
12.2013
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
220
Ha ms, A. S., Fe ei a, S. A. & Rome o-Ramos, M. (2021) Pe iphe y and b ain, inna e and
adap i e immuni y in Pa kinson's disease. Ac a Neu opa hol 141, 527-545,
doi:10.1007/s00401-021-02268-5
Ha y, G. J. & K a , A. D. (2008) Neu oin lamma ion and mic oglia: conside a ions and
app oaches o neu o oxici y assessmen . Expe Opin D ug Me ab Toxicol 4, 1265-
1277, doi:10.1517/17425255.4.10.1265
Ha l, D., He, C. H., Kolle , B., Da Sil a, C. A., Home , R., Lee, C. G. & Elias, J. A. (2008)
Acidic mammalian chi inase is sec e ed ia an ADAM17/epide mal g ow h ac o
ecep o -dependen pa hway and s imula es chemokine p oduc ion by pulmona y
epi helial cells. J Biol Chem 283, 33472-33482, doi:10.1074/jbc.M805574200
Hein, L., Ba sh, G. S., P a , R. E., Dzau, V. J. & Kobilka, B. K. (1995) Beha iou al and
ca dio ascula e ec s o dis up ing he angio ensin II ype-2 ecep o in mice. Na u e
377, 744-747, doi:10.1038/377744a0
He be , K. E., Mis y, Y., Has ings, R., Poolman, T., Niklason, L. & Williams, B. (2008)
Angio ensin II-media ed oxida i e DNA damage accele a es cellula senescence in
cul u ed human ascula smoo h muscle cells ia elome e-dependen and
independen pa hways. Ci c Res 102, 201-208,
doi:10.1161/CIRCRESAHA.107.158626
He icho a, I. & Szan oo a, K. (2013) Renin-angio ensin sys em: upg ade o ecen knowledge
and pe spec i es. Endoc Regul 47, 39-52, doi:10.4149/endo_2013_01_39
He o, R. & C o , M. (2016) The con ol o issue ib osis by he in lamma o y molecule
LIGHT (TNF Supe amily membe 14). Pha macol Res 104, 151-155,
doi:10.1016/j.ph s.2015.12.018
Hi awa, N., Ueha a, Y., Kawaba a, Y., Numabe, A., Gomi, T., Ikeda, T., Suzuki, T., Go o, A.,
Toyo-oka, T. & Oma a, M. (1999) Long- e m inhibi ion o enin-angio ensin sys em
sus ains memo y unc ion in aged Dahl a s. Hype ension 34, 496-502,
doi:10.1161/01.hyp.34.3.496
Hoenen, C., Gus in, A., Bi ck, C., Ki chmeye , M., Beaume, N., Fel en, P., G andba be, L.,
Heuschling, P. & Heu aux, T. (2016) Alpha-Synuclein P o eins P omo e P o-
In lamma o y Cascades in Mic oglia: S onge E ec s o he A53T Mu an . PLoS
One 11, e0162717, doi:10.1371/jou nal.pone.0162717
Ho mann, M., Kleine-Webe , H., Sch oede , S., K uge , N., He le , T., E ichsen, S.,
Schie gens, T. S., He le , G., Wu, N. H., Ni sche, A., Mulle , M. A., D os en, C. &
Pohlmann, S. (2020) SARS-CoV-2 Cell En y Depends on ACE2 and TMPRSS2 and
Is Blocked by a Clinically P o en P o ease Inhibi o . Cell 181, 271-280 e278,
doi:10.1016/j.cell.2020.02.052
Hong, H., Zeng, J. S., K eulen, D. L., Kau man, D. I. & Chen, A. F. (2006) A o as a in p o ec s
agains ce eb al in a c ion ia inhibi ion o NADPH oxidase-de i ed supe oxide in
ischemic s oke. Am J Physiol Hea Ci c Physiol 291, H2210-2215,
doi:10.1152/ajphea .01270.2005
Hong, S., Xin, Y., HaiQin, W., GuiLian, Z., Ru, Z., ShuQin, Z., HuQing, W., Li, Y. & Yun, D.
(2012) The PPARgamma agonis osigli azone p e en s cogni i e impai men by
inhibi ing as ocy e ac i a ion and oxida i e s ess ollowing piloca pine-induced
s a us epilep icus. Neu ol Sci 33, 559-566, doi:10.1007/s10072-011-0774-2
Ho a h, R. J., Nu ile-McMenemy, N., Alkai is, M. S. & Deleo, J. A. (2008) Di e en ial
mig a ion, LPS-induced cy okine, chemokine, and NO exp ession in immo alized
BV-2 and HAPI cell lines and p ima y mic oglial cul u es. J Neu ochem 107, 557-
569, doi:10.1111/j.1471-4159.2008.05633.x
BIBLIOGRAFÍA
221
Hu, G., An ikainen, R., Jousilah i, P., Ki ipel o, M. & Tuomileh o, J. (2008) To al choles e ol
and he isk o Pa kinson disease. Neu ology 70, 1972-1979,
doi:10.1212/01.wnl.0000312511.62699.a8
Hu, G., Jousilah i, P., Nissinen, A., An ikainen, R., Ki ipel o, M. & Tuomileh o, J. (2006) Body
mass index and he isk o Pa kinson disease. Neu ology 67, 1955-1959,
doi:10.1212/01.wnl.0000247052.18422.e5
Huang, M. L., Li, X., Meng, Y., Xiao, B., Ma, Q., Ying, S. S., Wu, P. S. & Zhang, Z. S. (2010)
Up egula ion o angio ensin-con e ing enzyme (ACE) 2 in hepa ic ib osis by ACE
inhibi o s. Clin Exp Pha macol Physiol 37, e1-6, doi:10.1111/j.1440-
1681.2009.05302.x
Hubel, C. A., Walluka , G., Wol , M., He se, F., Rajakuma , A., Robe s, J. M., Ma ko ic, N.,
Thadhani, R., Lu , F. C. & Dechend, R. (2007) Agonis ic angio ensin II ype 1
ecep o au oan ibodies in pos pa um women wi h a his o y o p eeclampsia.
Hype ension 49, 612-617, doi:10.1161/01.HYP.0000256565.20983.d4
Hussain, M. & Awan, F. R. (2018) Hype ension egula ing angio ensin pep ides in he
pa hobiology o ca dio ascula disease. Clin Exp Hype ens 40, 344-352,
doi:10.1080/10641963.2017.1377218
Ichiki, T., Kambayashi, Y. & Inagami, T. (1995) Mul iple g ow h ac o s modula e mRNA
exp ession o angio ensin II ype-2 ecep o in R3T3 cells. Ci c Res 77, 1070-1076,
doi:10.1161/01. es.77.6.1070
Inada, Y., Ojima, M., Kanagawa, R., Misumi, Y., Nishikawa, K. & Naka, T. (1999)
Pha macologic p ope ies o candesa an cilexe il--possible mechanisms o long-
ac ing an ihype ensi e ac ion. J Hum Hype ens 13 Suppl 1, S75-80,
doi:10.1038/sj.jhh.1000749
Inoue, Y., Tanaka, N., Tanaka, Y., Inoue, S., Mo i a, K., Zhuang, M., Ha o i, T. & Sugamu a,
K. (2007) Cla h in-dependen en y o se e e acu e espi a o y synd ome co ona i us
in o a ge cells exp essing ACE2 wi h he cy oplasmic ail dele ed. J Vi ol 81, 8722-
8729, doi:10.1128/JVI.00253-07
Io ino, L., T emblay, M. E. & Ci ie o, L. (2020) Glu ama e-induced exci o oxici y in
Pa kinson's disease: The ole o glial cells. J Pha macol Sci 144, 151-164,
doi:10.1016/j.jphs.2020.07.011
I ani, R. A., Zhang, Y., Zhou, C. C., Blackwell, S. C., Hicks, M. J., Ramin, S. M., Kellems, R.
E. & Xia, Y. (2010) Au oan ibody-media ed angio ensin ecep o ac i a ion
con ibu es o p eeclampsia h ough umo nec osis ac o -alpha signaling.
Hype ension 55, 1246-1253, doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.110.150540
Iwai, N. & Inagami, T. (1992) Iden i ica ion o wo sub ypes in he a ype I angio ensin II
ecep o . FEBS Le 298, 257-260, doi:10.1016/0014-5793(92)80071-n
Iwanami, J., Mogi, M., Tsukuda, K., Min, L. J., Saka a, A., Jing, F., Iwai, M. & Ho iuchi, M.
(2010) Low dose o elmisa an p e en s ischemic b ain damage wi h pe oxisome
p oli e a o -ac i a ed ecep o -gamma ac i a ion in diabe ic mice. J Hype ens 28,
1730-1737, doi:10.1097/HJH.0b013e32833a551a
Izco, M., Blesa, J., Ve ona, G., Coope , J. M. & Al a ez-E i i, L. (2021) Glial ac i a ion
p ecedes alpha-synuclein pa hology in a mouse model o Pa kinson's disease.
Neu osci Res 170, 330-340, doi:10.1016/j.neu es.2020.11.004
Jackson, L., Eldahshan, W., Fagan, S. C. & E gul, A. (2018) Wi hin he B ain: The Renin
Angio ensin Sys em. In J Mol Sci 19, doi:10.3390/ijms19030876
Jackson-Lewis, V., Blesa, J. & P zedbo ski, S. (2012) Animal models o Pa kinson's disease.
Pa kinsonism Rela Diso d 18 Suppl 1, S183-185, doi:10.1016/S1353-
8020(11)70057-8
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
222
Jessup, J. A., Gallaghe , P. E., A e ill, D. B., B osnihan, K. B., Tallan , E. A., Chappell, M. C.
& Fe a io, C. M. (2006) E ec o angio ensin II blockade on a new congenic model
o hype ension de i ed om ansgenic Ren-2 a s. Am J Physiol Hea Ci c Physiol
291, H2166-2172, doi:10.1152/ajphea .00061.2006
Jia, C., Keasey, M. P., Malone, H. M., Lo ins, C. & Hagg, T. (2020) Vi onec in mi iga es
s oke-inc eased neu ogenesis only in emale mice and h ough FAK- egula ed IL-6.
Exp Neu ol 323, 113088, doi:10.1016/j.expneu ol.2019.113088
Jia, H. P., Look, D. C., Tan, P., Shi, L., Hickey, M., Gakha , L., Chappell, M. C., Wohl o d-
Lenane, C. & McC ay, P. B., J . (2009) Ec odomain shedding o angio ensin
con e ing enzyme 2 in human ai way epi helia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol
297, L84-96, doi:10.1152/ajplung.00071.2009
Jiang, T., Gao, L., Lu, J. & Zhang, Y. D. (2013) ACE2-Ang-(1-7)-Mas Axis in B ain: A
Po en ial Ta ge o P e en ion and T ea men o Ischemic S oke. Cu
Neu opha macol 11, 209-217, doi:10.2174/1570159X11311020007
Jiang, T., Hoeks a, J., Heng, X., Kang, W., Ding, J., Liu, J., Chen, S. & Zhang, J. (2015) P2X7
ecep o is c i ical in alpha-synuclein--media ed mic oglial NADPH oxidase
ac i a ion. Neu obiol Aging 36, 2304-2318,
doi:10.1016/j.neu obiolaging.2015.03.015
Jiang, Y., Xu, J., Zhou, C., Wu, Z., Zhong, S., Liu, J., Luo, W., Chen, T., Qin, Q. & Deng, P.
(2005) Cha ac e iza ion o cy okine/chemokine p o iles o se e e acu e espi a o y
synd ome. Am J Respi C i Ca e Med 171, 850-857, doi:10.1164/ ccm.200407-
857OC
Jo, Y., Kim, S., Ye, B. S., Lee, E. & Yu, Y. M. (2022) P o ec i e E ec o Renin-Angio ensin
Sys em Inhibi o s on Pa kinson's Disease: A Na ionwide Coho S udy. F on
Pha macol 13, 837890, doi:10.3389/ pha .2022.837890
Joe s, V., Tansey, M. G., Mulas, G. & Ca a, A. R. (2017) Mic oglial pheno ypes in Pa kinson's
disease and animal models o he disease. P og Neu obiol 155, 57-75,
doi:10.1016/j.pneu obio.2016.04.006
Jogla , B., Rod iguez-Palla es, J., Rod iguez-Pe ez, A. I., Rey, P., Gue a, M. J. & Labandei a-
Ga cia, J. L. (2009) The in lamma o y esponse in he MPTP model o Pa kinson's
disease is media ed by b ain angio ensin: ele ance o p og ession o he disease. J
Neu ochem 109, 656-669, doi:10.1111/j.1471-4159.2009.05999.x
Kama h, T., Abdul aou , A., Bu is, S. J., Langlieb, J., Gazes ani, V., Nada , N. M., Balde ama,
K., Vande bu g, C. & Macosko, E. Z. (2022) Single-cell genomic p o iling o human
dopamine neu ons iden i ies a popula ion ha selec i ely degene a es in Pa kinson's
disease. Na Neu osci 25, 588-595, doi:10.1038/s41593-022-01061-1
Ka nik, S. S., Singh, K. D., Ti upula, K. & Unal, H. (2017) Signi icance o angio ensin 1-7
coupling wi h MAS1 ecep o and o he GPCRs o he enin-angio ensin sys em:
IUPHAR Re iew 22. B J Pha macol 174, 737-753, doi:10.1111/bph.13742
Kashiwagi, E., Shio a, M., Yokomizo, A., Inokuchi, J., Uchiumi, T. & Nai o, S. (2014) EP2
signaling media es supp essi e e ec s o celecoxib on and ogen ecep o exp ession
and cell p oli e a ion in p os a e cance . P os a e Cance P os a ic Dis 17, 10-17,
doi:10.1038/pcan.2013.53
Keida , S., Gamliel-Laza o ich, A., Kaplan, M., Pa lo zky, E., Hamoud, S., Hayek, T., Ka y,
R. & Abassi, Z. (2005) Mine aloco icoid ecep o blocke inc eases angio ensin-
con e ing enzyme 2 ac i i y in conges i e hea ailu e pa ien s. Ci c Res 97, 946-
953, doi:10.1161/01.RES.0000187500.24964.7A
Kemp, B. A., Howell, N. L., Kelle , S. R., Gildea, J. J., Shao, W., Na a , L. G. & Ca ey, R. M.
(2019) De ec i e Renal Angio ensin III and AT2 Recep o Signaling in

BIBLIOGRAFÍA
223
P ehype ensi e Spon aneously Hype ensi e Ra s. J Am Hea Assoc 8, e012016,
doi:10.1161/JAHA.119.012016
Kempu aj, D., Thanga el, R., Na e u, P. A., Sel akuma , G. P., Saeed, D., Zahoo , H., Zahee ,
S., Iye , S. S. & Zahee , A. (2016) Neu oin lamma ion Induces Neu odegene a ion.
J Neu ol Neu osu g Spine 1
Ke , N., Die ich, D. W., B amle , H. M. & Ra al, A. P. (2019) Sexually dimo phic mic oglia
and ischemic s oke. CNS Neu osci The 25, 1308-1317, doi:10.1111/cns.13267
Kho ooshi, R., To e-Hansen, E. U., Tygesen, C., Mon anana-Rosell, R., Limbu g, H. L.,
Ma czynska, J., Asga i, N., S eckelings, U. M. & Owens, T. (2020) Angio ensin AT2
ecep o -induced in e leukin-10 a enua es neu omyeli is op ica spec um diso de -
like pa hology. Mul Scle 26, 1187-1196, doi:10.1177/1352458519860327
Kim, C. & Lee, S. J. (2008) Con olling he mass ac ion o alpha-synuclein in Pa kinson's
disease. J Neu ochem 107, 303-316, doi:10.1111/j.1471-4159.2008.05612.x
Kim, G. J., Mo, H., Liu, H., Wu, Z., Chen, S., Zheng, J., Zhao, X., Nucum, D., Sho land, J.,
Peng, L., Elepano, M., Tang, B., Olson, S., Pa as, N., Li, H., Renslo, A. R., A kin,
M. R., Huang, B., Lu, B., Si o a, M. & Guo, S. (2021) A zeb a ish sc een e eals
Renin-angio ensin sys em inhibi o s as neu op o ec i e ia mi ochond ial es o a ion
in dopamine neu ons. Eli e 10, doi:10.7554/eLi e.69795
King, S. J. & Opa il, S. (1992) Con e ing-enzyme inhibi o s inc ease con e ing-enzyme
mRNA and ac i i y in endo helial cells. Am J Physiol 263, C743-749,
doi:10.1152/ajpcell.1992.263.4.C743
Kishi, T., Hi ooka, Y. & Sunagawa, K. (2012) Telmisa an p o ec s agains cogni i e decline
ia up- egula ion o b ain-de i ed neu o ophic ac o / opomyosin- ela ed kinase B
in hippocampus o hype ensi e a s. J Ca diol 60, 489-494,
doi:10.1016/j.jjcc.2012.08.004
Klein, N., Gemba d , F., Supe, S., Kaes le, S. M., Nickles, H., E inanda, L., Lei, X., Yin, J.,
Wang, L., Me ens, M., Szaszi, K., Wal he , T. & Kueble , W. M. (2013)
Angio ensin-(1-7) p o ec s om expe imen al acu e lung inju y. C i Ca e Med 41,
e334-343, doi:10.1097/CCM.0b013e31828a6688
Kononchik, J., I eland, J., Zou, Z., Segu a, J., Holzap el, G., Chas ain, A., Wang, R., Spence ,
M., He, B., S u zman, N., Kano, D., A hos, J., Fische , E., Chun, T. W., Moi , S. &
Sun, P. (2018) HIV-1 a ge s L-selec in o adhesion and induces i s shedding o
i al elease. Na Commun 9, 2825, doi:10.1038/s41467-018-05197-2
Kop ich, J. B., Kalia, L. V. & B o chie, J. M. (2017) Animal models o alpha-synucleinopa hy
o Pa kinson disease d ug de elopmen . Na Re Neu osci 18, 515-529,
doi:10.1038/n n.2017.75
Kop ich, J. B., Reske-Nielsen, C., Mi hal, P. & Isacson, O. (2008) Neu oin lamma ion media ed
by IL-1be a inc eases suscep ibili y o dopamine neu ons o degene a ion in an
animal model o Pa kinson's disease. J Neu oin lamma ion 5, 8, doi:10.1186/1742-
2094-5-8
Ko en, G., No on, G., Radinsky, K. & Shale , V. (2019) Ch onic Use o be a-Blocke s and he
Risk o Pa kinson's Disease. Clin D ug In es ig 39, 463-468, doi:10.1007/s40261-
019-00771-y
Kuba, K., Imai, Y. & Penninge , J. M. (2013) Mul iple unc ions o angio ensin-con e ing
enzyme 2 and i s ele ance in ca dio ascula diseases. Ci c J 77, 301-308,
doi:10.1253/ci cj.cj-12-1544
Labandei a, C. M., F aga-Bau, A., A ias Ron, D., Munoz, A., Alonso-Losada, G., Koukoulis,
A., Rome o-Lopez, J. & Rod iguez-Pe ez, A. I. (2021) Diabe es, insulin and new
he apeu ic s a egies o Pa kinson's disease: Focus on glucagon-like pep ide-1
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
224
ecep o agonis s. F on Neu oendoc inol 62, 100914,
doi:10.1016/j.y ne.2021.100914
Labandei a-Ga cia, J. L., Labandei a, C. M., Valenzuela, R., Ped osa, M. A., Quijano, A. &
Rod iguez-Pe ez, A. I. (2022) D ugs Modula ing Renin-Angio ensin Sys em in
COVID-19 T ea men . Biomedicines 10, doi:10.3390/biomedicines10020502
Labandei a-Ga cia, J. L. & Pa ga, J. A. (2022) Nig al Neu ons Degene a ing in Pa kinson's
Disease Exp ess he Angio ensin Recep o Type 1 Gene. Mo Diso d,
doi:10.1002/mds.29137
Labandei a-Ga cia, J. L., Rod iguez-Palla es, J., Dominguez-Meijide, A., Valenzuela, R.,
Villa -Cheda, B. & Rod iguez-Pe ez, A. I. (2013) Dopamine-angio ensin in e ac ions
in he basal ganglia and hei ele ance o Pa kinson's disease. Mo Diso d 28, 1337-
1342, doi:10.1002/mds.25614
Labandei a-Ga cia, J. L., Rod iguez-Palla es, J., Villa -Cheda, B., Rod iguez-Pe ez, A. I.,
Ga ido-Gil, P. & Gue a, M. J. (2011) Aging, Angio ensin sys em and dopamine gic
degene a ion in he subs an ia nig a. Aging Dis 2, 257-274
Labandei a-Ga cia, J. L., Rod iguez-Pe ez, A. I., Ga ido-Gil, P., Rod iguez-Palla es, J.,
Lanciego, J. L. & Gue a, M. J. (2017) B ain Renin-Angio ensin Sys em and
Mic oglial Pola iza ion: Implica ions o Aging and Neu odegene a ion. F on Aging
Neu osci 9, 129, doi:10.3389/ nagi.2017.00129
Labandei a-Ga cia, J. L., Rod iguez-Pe ez, A. I., Valenzuela, R., Cos a-Besada, M. A. &
Gue a, M. J. (2016) Menopause and Pa kinson's disease. In e ac ion be ween
es ogens and b ain enin-angio ensin sys em in dopamine gic degene a ion. F on
Neu oendoc inol 43, 44-59, doi:10.1016/j.y ne.2016.09.003
Labandei a-Ga cia, J. L., Valenzuela, R., Cos a-Besada, M. A., Villa -Cheda, B. & Rod iguez-
Pe ez, A. I. (2021) The in acellula enin-angio ensin sys em: F iend o oe. Some
ligh om he dopamine gic neu ons. P og Neu obiol 199, 101919,
doi:10.1016/j.pneu obio.2020.101919
LaMa ca, B., Pa ish, M., Ray, L. F., Mu phy, S. R., Robe s, L., Glo e , P., Walluka , G.,
Wenzel, K., Cock ell, K., Ma in, J. N., J ., Ryan, M. J. & Dechend, R. (2009)
Hype ension in esponse o au oan ibodies o he angio ensin II ype I ecep o (AT1-
AA) in p egnan a s: ole o endo helin-1. Hype ension 54, 905-909,
doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.109.137935
LaMa ca, B., Wallace, K. & G ange , J. (2011) Role o angio ensin II ype I ecep o agonis ic
au oan ibodies (AT1-AA) in p eeclampsia. Cu Opin Pha macol 11, 175-179,
doi:10.1016/j.coph.2011.01.003
LaMa ca, B., Walluka , G., Llinas, M., He se, F., Dechend, R. & G ange , J. P. (2008)
Au oan ibodies o he angio ensin ype I ecep o in esponse o placen al ischemia
and umo nec osis ac o alpha in p egnan a s. Hype ension 52, 1168-1172,
doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.108.120576
Lambe , D. W., Ya ski, M., Wa ne , F. J., Tho nhill, P., Pa kin, E. T., Smi h, A. I., Hoope , N.
M. & Tu ne , A. J. (2005) Tumo nec osis ac o -alpha con e ase (ADAM17)
media es egula ed ec odomain shedding o he se e e-acu e espi a o y synd ome-
co ona i us (SARS-CoV) ecep o , angio ensin-con e ing enzyme-2 (ACE2). J Biol
Chem 280, 30113-30119, doi:10.1074/jbc.M505111200
Lan anco, M. F., Mocche i, I., Bu ns, M. P. & Villapol, S. (2017) Glial- and Neu onal-Speci ic
Exp ession o CCL5 mRNA in he Ra B ain. F on Neu oana 11, 137,
doi:10.3389/ nana.2017.00137
La son, P. S. (2014) Deep b ain s imula ion o mo emen diso de s. Neu o he apeu ics 11,
465-474, doi:10.1007/s13311-014-0274-1
BIBLIOGRAFÍA
225
Laudisio, A., Lo Monaco, M. R., Sil e i, M. C., Ben i oglio, A. R., Ve ano, D. L., Piscio a,
M. S., B andi, V., Be nabei, R. & Zuccala, G. (2017) Use o ACE-inhibi o s and alls
in pa ien s wi h Pa kinson's disease. Gai Pos u e 54, 39-44,
doi:10.1016/j.gai pos .2017.02.007
Lau ne , R. Q., Villela, D. C., F aga-Sil a, R. A., Sil a, N., Ve ano-B aga, T., Cos a-F aga, F.,
Jankowski, J., Jankowski, V., Sousa, F., Alzamo a, A., Soa es, E., Ba bosa, C.,
Kjeldsen, F., Oli ei a, A., B aga, J., Sa e gnini, S., Maia, G., Peluso, A. B., Passos-
Sil a, D., Fe ei a, A., Al es, F., Ma ins, A., Raizada, M., Paula, R., Mo a-San os,
D., Klempin, F., Pimen a, A., Alenina, N., Sinis e a, R., Bade , M., Campagnole-
San os, M. J. & San os, R. A. (2013) Disco e y and cha ac e iza ion o alamandine:
a no el componen o he enin-angio ensin sys em. Ci c Res 112, 1104-1111,
doi:10.1161/CIRCRESAHA.113.301077
Lee, E. J., Woo, M. S., Moon, P. G., Baek, M. C., Choi, I. Y., Kim, W. K., Junn, E. & Kim, H.
S. (2010) Alpha-synuclein ac i a es mic oglia by inducing he exp essions o ma ix
me allop o einases and he subsequen ac i a ion o p o ease-ac i a ed ecep o -1. J
Immunol 185, 615-623, doi:10.4049/jimmunol.0903480
Lee, J. K., T an, T. & Tansey, M. G. (2009) Neu oin lamma ion in Pa kinson's disease. J
Neu oimmune Pha macol 4, 419-429, doi:10.1007/s11481-009-9176-0
Lee, J. W., Chun, W., Lee, H. J., Kim, S. M., Min, J. H., Kim, D. Y., Kim, M. O., Ryu, H. W.
& Lee, S. U. (2021) The Role o Mic oglia in he De elopmen o Neu odegene a i e
Diseases. Biomedicines 9, doi:10.3390/biomedicines9101449
Lee, Y. C., Lin, C. H., Wu, R. M., Lin, J. W., Chang, C. H. & Lai, M. S. (2014) An ihype ensi e
agen s and isk o Pa kinson's disease: a na ionwide coho s udy. PLoS One 9,
e98961, doi:10.1371/jou nal.pone.0098961
Leehey, M., Luo, S., Sha ma, S., Wills, A. A., Bainb idge, J. L., Wong, P. S., Simon, D. K.,
Schneide , J., Zhang, Y., Pe ez, A., Dhall, R., Ch is ine, C. W., Singe , C., Cambi, F.
& Boyd, J. T. (2017) Associa ion o me abolic synd ome and change in Uni ied
Pa kinson's Disease Ra ing Scale sco es. Neu ology 89, 1789-1794,
doi:10.1212/WNL.0000000000004572
Li, H., Ho ke, S. & Fo s e mann, U. (2013) Oxida i e s ess in ascula disease and i s
pha macological p e en ion. T ends Pha macol Sci 34, 313-319,
doi:10.1016/j. ips.2013.03.007
Lin, H. C., Tseng, Y. F., Shen, A. L., Chao, J. C., Hsu, C. Y. & Lin, H. L. (2022) Associa ion
o Angio ensin Recep o Blocke s wi h Inciden Pa kinson Disease in Pa ien s wi h
Hype ension: A Re ospec i e Coho S udy. Am J Med,
doi:10.1016/j.amjmed.2022.04.029
Liu, C., Kellems, R. E. & Xia, Y. (2017a) In lamma ion, Au oimmuni y, and Hype ension:
The Essen ial Role o Tissue T ansglu aminase. Am J Hype ens 30, 756-764,
doi:10.1093/ajh/hpx027
Liu, C., Luo, R., Ellio , S. E., Wang, W., Pa chim, N. F., I iyama, T., Daughe y, P. S.,
Blackwell, S. C., Sibai, B. M., Kellems, R. E. & Xia, Y. (2015) Ele a ed
T ansglu aminase Ac i i y T igge s Angio ensin Recep o Ac i a ing Au oan ibody
P oduc ion and Pa hophysiology o P eeclampsia. J Am Hea Assoc 4,
doi:10.1161/JAHA.115.002323
Liu, C., Luo, R., Wang, W., Peng, Z., Johnson, G. V. W., Kellems, R. E. & Xia, Y. (2019)
Tissue T ansglu aminase-Media ed AT1 Recep o Sensi iza ion Unde lies P o-
in lamma o y Cy okine LIGHT-Induced Hype ension. Am J Hype ens 32, 476-485,
doi:10.1093/ajh/hpz018
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
226
Liu, Q., Du, J., Yu, X., Xu, J., Huang, F., Li, X., Zhang, C., Li, X., Chang, J., Shang, D., Zhao,
Y., Tian, M., Lu, H., Xu, J., Li, C., Zhu, H., Jin, N. & Jiang, C. (2017b) miRNA-
200c-3p is c ucial in acu e espi a o y dis ess synd ome. Cell Disco 3, 17021,
doi:10.1038/celldisc.2017.21
Liu, Y., Yang, Y., Zhang, C., Huang, F., Wang, F., Yuan, J., Wang, Z., Li, J., Li, J., Feng, C.,
Zhang, Z., Wang, L., Peng, L., Chen, L., Qin, Y., Zhao, D., Tan, S., Yin, L., Xu, J.,
Zhou, C., Jiang, C. & Liu, L. (2020) Clinical and biochemical indexes om 2019-
nCoV in ec ed pa ien s linked o i al loads and lung inju y. Sci China Li e Sci 63,
364-374, doi:10.1007/s11427-020-1643-8
Li ak, K. J. & Schmi gen, T. D. (2001) Analysis o ela i e gene exp ession da a using eal-
ime quan i a i e PCR and he 2(-Del a Del a C(T)) Me hod. Me hods 25, 402-408,
doi:10.1006/me h.2001.1262
Lobo-Sil a, D., Ca iche, G. M., Cas o, A. G., Roque, S. & Sa ai a, M. (2016) Balancing he
immune esponse in he b ain: IL-10 and i s egula ion. J Neu oin lamma ion 13, 297,
doi:10.1186/s12974-016-0763-8
Loe a-Valencia, R., Goikolea, J., Pa ado-Fe nandez, C., Me ino-Se ais, P. & Maioli, S.
(2019) Al e a ions in choles e ol me abolism as a isk ac o o de eloping
Alzheime 's disease: Po en ial no el a ge s o ea men . J S e oid Biochem Mol Biol
190, 104-114, doi:10.1016/j.jsbmb.2019.03.003
Lopes, F. M., B is o , I. J., da Mo a, L. L., Pa sons, R. B. & Klam , F. (2017) Mimicking
Pa kinson's Disease in a Dish: Me i s and Pi alls o he Mos Commonly used
Dopamine gic In Vi o Models. Neu omolecula Med 19, 241-255,
doi:10.1007/s12017-017-8454-x
Lopez-Lopez, A., Villa -Cheda, B., Quijano, A., Ga ido-Gil, P., Ga cia-Ga o e, M., Diaz-
Ruiz, C., Munoz, A. & Labandei a-Ga cia, J. L. (2021) NADPH-Oxidase, Rho-
Kinase and Au ophagy Media e he (P o) enin-Induced P o-In lamma o y Mic oglial
Response and Enhancemen o Dopamine gic Neu on Dea h. An ioxidan s (Basel)
10, doi:10.3390/an iox10091340
Lopez-Real, A., Rey, P., So o-O e o, R., Mendez-Al a ez, E. & Labandei a-Ga cia, J. L. (2005)
Angio ensin-con e ing enzyme inhibi ion educes oxida i e s ess and p o ec s
dopamine gic neu ons in a 6-hyd oxydopamine a model o Pa kinsonism. J
Neu osci Res 81, 865-873, doi:10.1002/jn .20598
Lo enz, J. N., Weihp ech , H., He, X. R., Sko , O., B iggs, J. P. & Schne mann, J. (1993)
E ec s o adenosine and angio ensin on macula densa-s imula ed enin sec e ion. Am
J Physiol 265, F187-194, doi:10.1152/ajp enal.1993.265.2.F187
Lu, J., Sun, F., Ma, H., Qing, H. & Deng, Y. (2015) Compa ison be ween alpha-synuclein wild-
ype and A53T mu a ion in a p og essi e Pa kinson's disease model. Biochem
Biophys Res Commun 464, 988-993, doi:10.1016/j.bb c.2015.07.007
Lu, Y., Liu, D. X. & Tam, J. P. (2008) Lipid a s a e in ol ed in SARS-CoV en y in o Ve o
E6 cells. Biochem Biophys Res Commun 369, 344-349,
doi:10.1016/j.bb c.2008.02.023
Ludwig, R. J., Vanhoo elbeke, K., Leypold , F., Kaya, Z., Biebe , K., McLachlan, S. M.,
Komo owski, L., Luo, J., Cab al-Ma ques, O., Hamme s, C. M., Linds om, J. M.,
Lamp ech , P., Fische , A., Riemekas en, G., Te s eeg, C., Sonde mann, P., Rapopo ,
B., Wandinge , K. P., P obs , C., El Beidaq, A., Schmid , E., Ve kman, A., Manz, R.
A. & Nimme jahn, F. (2017) Mechanisms o Au oan ibody-Induced Pa hology. F on
Immunol 8, 603, doi:10.3389/ immu.2017.00603
BIBLIOGRAFÍA
233
Au oan ibodies agains ACE2 and angio ensin ype-1 ecep o s inc ease se e i y o
COVID-19. J Au oimmun 122, 102683, doi:10.1016/j.jau .2021.102683
Rod iguez-Pe ez, A. I., Valenzuela, R., Jogla , B., Ga ido-Gil, P., Gue a, M. J. & Labandei a-
Ga cia, J. L. (2011) Renin angio ensin sys em and gende di e ences in
dopamine gic degene a ion. Mol Neu odegene 6, 58, doi:10.1186/1750-1326-6-58
Rod iguez-Pe ez, A. I., Valenzuela, R., Villa -Cheda, B., Gue a, M. J. & Labandei a-Ga cia,
J. L. (2012) Dopamine gic neu op o ec ion o ho monal eplacemen he apy in
young and aged menopausal a s: ole o he b ain angio ensin sys em. B ain 135,
124-138, doi:10.1093/b ain/aw 320
Rod iguez-Pe ez, A. I., Valenzuela, R., Villa -Cheda, B., Gue a, M. J., Lanciego, J. L. &
Labandei a-Ga cia, J. L. (2010) Es ogen and angio ensin in e ac ion in he subs an ia
nig a. Rele ance o pos menopausal Pa kinson's disease. Exp Neu ol 224, 517-526,
doi:10.1016/j.expneu ol.2010.05.015
Rood eld , C., Lab ado -Ga ido, A., Gonzalez-Rey, E., Lachaud, C. C., Guilliams, T.,
Fe nandez-Mon esinos, R., Beni ez-Rondan, A., Robledo, G., Hmadcha, A.,
Delgado, M., Dobson, C. M. & Pozo, D. (2013) P econdi ioning o mic oglia by
alpha-synuclein s ongly a ec s he esponse induced by oll-like ecep o (TLR)
s imula ion. PLoS One 8, e79160, doi:10.1371/jou nal.pone.0079160
Ross, M. T., G a ham, D. V., Co ey, A. J., Sche e , S., McLay, K., Muzny, D., Pla ze , M.,
Howell, G. R., Bu ows, C., Bi d, C. P., F ankish, A., Lo ell, F. L., Howe, K. L.,
Ashu s , J. L., Ful on, R. S., Sudb ak, R., Wen, G., Jones, M. C., Hu les, M. E.,
And ews, T. D., Sco , C. E., Sea le, S., Ramse , J., Whi ake , A., Deadman, R.,
Ca e , N. P., Hun , S. E., Chen, R., C ee, A., Guna a ne, P., Ha lak, P., Hodgson,
A., Me zke , M. L., Richa ds, S., Sco , G., S e en, D., Sode g en, E., Wheele , D.
A., Wo ley, K. C., Ainscough, R., Amb ose, K. D., Ansa i-La i, M. A., A adhya, S.,
Ashwell, R. I., Babbage, A. K., Bagguley, C. L., Ballabio, A., Bane jee, R., Ba ke ,
G. E., Ba low, K. F., Ba e , I. P., Ba es, K. N., Bea e, D. M., Beasley, H., Beasley,
O., Beck, A., Be hel, G., Blechschmid , K., B ady, N., B ay-Allen, S., B idgeman, A.
M., B own, A. J., B own, M. J., Bonnin, D., B u o d, E. A., Buhay, C., Bu ch, P.,
Bu o d, D., Bu gess, J., Bu ill, W., Bu on, J., Bye, J. M., Ca de , C., Ca el, L.,
Chako, J., Chapman, J. C., Cha ez, D., Chen, E., Chen, G., Chen, Y., Chen, Z.,
Chinaul , C., Ciccodicola, A., Cla k, S. Y., Cla ke, G., Clee, C. M., Clegg, S., Cle c-
Blankenbu g, K., Cli o d, K., Cobley, V., Cole, C. G., Conque , J. S., Co by, N.,
Conno , R. E., Da id, R., Da ies, J., Da is, C., Da is, J., Delgado, O., Deshazo, D.,
Dhami, P., Ding, Y., Dinh, H., Dodswo h, S., D ape , H., Dugan-Rocha, S., Dunham,
A., Dunn, M., Du bin, K. J., Du a, I., Eades, T., Ellwood, M., Eme y-Cohen, A.,
E ing on, H., E ans, K. L., Faulkne , L., F ancis, F., F ankland, J., F ase , A. E.,
Galgoczy, P., Gilbe , J., Gill, R., Glockne , G., G ego y, S. G., G ibble, S., G i i hs,
C., G ocock, R., Gu, Y., Gwilliam, R., Hamil on, C., Ha , E. A., Hawes, A., Hea h,
P. D., Hei mann, K., Hennig, S., He nandez, J., Hinzmann, B., Ho, S., Ho s, M.,
Howden, P. J., Huckle, E. J., Hume, J., Hun , P. J., Hun , A. R., Ishe wood, J., Jacob,
L., Johnson, D., Jones, S., de Jong, P. J., Joseph, S. S., Keenan, S., Kelly, S., Ke shaw,
J. K., Khan, Z., Kioschis, P., Klages, S., Knigh s, A. J., Kosiu a, A., Ko a -Smi h,
C., Lai d, G. K., Lang o d, C., Lawlo , S., Le e sha, M., Lewis, L., Liu, W., Lloyd,
C., Lloyd, D. M., Loulseged, H., Lo eland, J. E., Lo ell, J. D., Lozado, R., Lu, J.,
Lyne, R., Ma, J., Maheshwa i, M., Ma hews, L. H., McDowall, J., McLa en, S.,
McMu ay, A., Meidl, P., Mei inge , T., Milne, S., Mine , G., Mis y, S. L., Mo gan,
M., Mo is, S., Mulle , I., Mullikin, J. C., Nguyen, N., No dsiek, G., Nyaka u a, G.,
O'Dell, C. N., Okwuonu, G., Palme , S., Pandian, R., Pa ke , D., Pa ish, J.,

MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
234
Pas e nak, S., Pa el, D., Pea ce, A. V., Pea son, D. M., Pelan, S. E., Pe ez, L., Po e ,
K. M., Ramsey, Y., Reichwald, K., Rhodes, S., Ridle , K. A., Schlessinge , D.,
Schuele , M. G., Seh a, H. K., Shaw-Smi h, C., Shen, H., She idan, E. M.,
Shownkeen, R., Skuce, C. D., Smi h, M. L., So he an, E. C., S eing ube , H. E.,
S ewa d, C. A., S o ey, R., Swann, R. M., Swa b eck, D., Tabo , P. E., Taudien, S.,
Taylo , T., Teague, B., Thomas, K., Tho pe, A., Timms, K., T acey, A., T e anion,
S., T omans, A. C., d'U so, M., Ve duzco, D., Villasana, D., Wald on, L., Wall, M.,
Wang, Q., Wa en, J., Wa y, G. L., Wei, X., Wes , A., Whi ehead, S. L., Whi eley,
M. N., Wilkinson, J. E., Willey, D. L., Williams, G., Williams, L., Williamson, A.,
Williamson, H., Wilming, L., Woodmansey, R. L., W ay, P. W., Yen, J., Zhang, J.,
Zhou, J., Zoghbi, H., Zo illa, S., Buck, D., Reinha d , R., Pous ka, A., Rosen hal, A.,
Leh ach, H., Meindl, A., Minx, P. J., Hillie , L. W., Willa d, H. F., Wilson, R. K.,
Wa e s on, R. H., Rice, C. M., Vaudin, M., Coulson, A., Nelson, D. L., Weins ock,
G., Suls on, J. E., Du bin, R., Hubba d, T., Gibbs, R. A., Beck, S., Roge s, J. &
Ben ley, D. R. (2005) The DNA sequence o he human X ch omosome. Na u e 434,
325-337, doi:10.1038/na u e03440
Rozas, G., Gue a, M. J. & Labandei a-Ga cia, J. L. (1997) An au oma ed o a od me hod o
quan i a i e d ug- ee e alua ion o o e all mo o de ici s in a models o
pa kinsonism. B ain Res B ain Res P o oc 2, 75-84, doi:10.1016/s1385-
299x(97)00034-2
Rozas, G., Lis e, I., Lopez-Ma in, E., Gue a, M. J., Kokaia, M. & Labandei a-Ga cia, J. L.
(1996) In a halamic implan s o GABA- eleasing polyme ma ices educe mo o
impai men s in a s wi h exci o oxically lesioned s ia a. Exp Neu ol 142, 323-330,
doi:10.1006/exn .1996.0201
Saaksja i, K., Knek , P., Mannis o, S., Lyy inen, J. & Helio aa a, M. (2015) P ospec i e s udy
on he componen s o me abolic synd ome and he incidence o Pa kinson's disease.
Pa kinsonism Rela Diso d 21, 1148-1155, doi:10.1016/j.pa k eldis.2015.07.017
Sanchez-Guaja do, V., Febb a o, F., Ki ik, D. & Rome o-Ramos, M. (2010) Mic oglia acqui e
dis inc ac i a ion p o iles depending on he deg ee o alpha-synuclein
neu opa hology in a AAV based model o Pa kinson's disease. PLoS One 5, e8784,
doi:10.1371/jou nal.pone.0008784
San os, R. A. S., Oudi , G. Y., Ve ano-B aga, T., Can a, G., S eckelings, U. M. & Bade , M.
(2019) The enin-angio ensin sys em: going beyond he classical pa adigms. Am J
Physiol Hea Ci c Physiol 316, H958-H970, doi:10.1152/ajphea .00723.2018
San os, R. A. S., Sampaio, W. O., Alzamo a, A. C., Mo a-San os, D., Alenina, N., Bade , M.
& Campagnole-San os, M. J. (2018) The ACE2/Angio ensin-(1-7)/MAS Axis o he
Renin-Angio ensin Sys em: Focus on Angio ensin-(1-7). Physiol Re 98, 505-553,
doi:10.1152/phys e .00023.2016
Sa ka , S., Raymick, J. & Imam, S. (2016) Neu op o ec i e and The apeu ic S a egies agains
Pa kinson's Disease: Recen Pe spec i es. In J Mol Sci 17,
doi:10.3390/ijms17060904
Sa zani, R., Giulie i, F., Di Pen ima, C., Gio dano, P. & Spannella, F. (2020) Disequilib ium
be ween he classic enin-angio ensin sys em and i s opposing a m in SARS-CoV-2-
ela ed lung inju y. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 319, L325-L336,
doi:10.1152/ajplung.00189.2020
Sasamu a, H., Hein, L., K iege , J. E., P a , R. E., Kobilka, B. K. & Dzau, V. J. (1992) Cloning,
cha ac e iza ion, and exp ession o wo angio ensin ecep o (AT-1) iso o ms om
he mouse genome. Biochem Biophys Res Commun 185, 253-259,
doi:10.1016/s0006-291x(05)80983-0
BIBLIOGRAFÍA
235
Sa hiya, S., Ranju, V., Kalai ani, P., P iya, R. J., Suma hy, H., Sunil, A. G. & Babu, C. S.
(2013) Telmisa an a enua es MPTP induced dopamine gic degene a ion and mo o
dys unc ion h ough egula ion o alpha-synuclein and neu o ophic ac o s (BDNF
and GDNF) exp ession in C57BL/6J mice. Neu opha macology 73, 98-110,
doi:10.1016/j.neu opha m.2013.05.025
Sa ou, R., Pen ose, H. & Na a , L. G. (2018) In lamma ion as a Regula o o he Renin-
Angio ensin Sys em and Blood P essu e. Cu Hype ens Rep 20, 100,
doi:10.1007/s11906-018-0900-0
Schalle , T., Kozlowski, D. A., Humm, J. L. & Cocke, R. R. (1997) Use-dependen s uc u al
e en s in eco e y o unc ion. Ad Neu ol 73, 229-238
Schu en, M. T., Houben, A. J., de Leeuw, P. W. & S ehouwe , C. D. (2017) The Link Be ween
Adipose Tissue Renin-Angio ensin-Aldos e one Sys em Signaling and Obesi y-
Associa ed Hype ension. Physiology (Be hesda) 32, 197-209,
doi:10.1152/physiol.00037.2016
Schwab, A. D., Thu s on, M. J., Machhi, J., Olson, K. E., Namminga, K. L., Gendelman, H. E.
& Mosley, R. L. (2020) Immuno he apy o Pa kinson's disease. Neu obiol Dis 137,
104760, doi:10.1016/j.nbd.2020.104760
Sco , A. J., O'Dea, K. P., O'Callaghan, D., Williams, L., Dokpesi, J. O., Ta on, L., Handy, J.
M., Hogg, P. J. & Taka a, M. (2011) Reac i e oxygen species and p38 mi ogen-
ac i a ed p o ein kinase media e umo nec osis ac o alpha-con e ing enzyme
(TACE/ADAM-17) ac i a ion in p ima y human monocy es. J Biol Chem 286,
35466-35476, doi:10.1074/jbc.M111.277434
Seka , S., Mani, S., Rajamani, B., Mani asagam, T., Thenmozhi, A. J., Bha , A., Ray, B., Essa,
M. M., Guillemin, G. J. & Chidamba am, S. B. (2018) Telmisa an Amelio a es
As oglial and Dopamine gic Func ions in a Mouse Model o Ch onic Pa kinsonism.
Neu o ox Res 34, 597-612, doi:10.1007/s12640-018-9921-3
Selemidis, S., Dus ing, G. J., Pesha a iya, H., Kemp-Ha pe , B. K. & D ummond, G. R. (2007)
Ni ic oxide supp esses NADPH oxidase-dependen supe oxide p oduc ion by S-
ni osyla ion in human endo helial cells. Ca dio asc Res 75, 349-358,
doi:10.1016/j.ca dio es.2007.03.030
Sellak, H., Yang, X., Cao, X., Co nwell, T., So , G. A. & Lincoln, T. (2002) Sp1 ansc ip ion
ac o as a molecula a ge o ni ic oxide-- and cyclic nucleo ide--media ed
supp ession o cGMP-dependen p o ein kinase-Ialpha exp ession in ascula smoo h
muscle cells. Ci c Res 90, 405-412, doi:10.1161/hh0402.105898
Se iadi, A., Ko im, W. S., Elsaa ien, K. & Yao, S. T. (2018) The ole o he blood-b ain ba ie
in hype ension. Exp Physiol 103, 337-342, doi:10.1113/EP086434
Se a Pessoa, B., an de Lubbe, N., Ve donk, K., Roks, A. J., Hoo n, E. J. & Danse , A. H.
(2013) Key de elopmen s in enin-angio ensin-aldos e one sys em inhibi ion. Na
Re Neph ol 9, 26-36, doi:10.1038/n neph.2012.249
Shal ou , H. A., Wes wood, B. M., A e ill, D. B., Fe a io, C. M., Figue oa, J. P., Diz, D. I.,
Rose, J. C. & Chappell, M. C. (2007) Angio ensin me abolism in enal p oximal
ubules, u ine, and se um o sheep: e idence o ACE2-dependen p ocessing o
angio ensin II. Am J Physiol Renal Physiol 292, F82-91,
doi:10.1152/ajp enal.00139.2006
Shang, F., Wang, J., Liu, X., Li, J., Zheng, Q., Xue, Y. & Zhao, L. (2012) In ol emen o
eac i e oxygen species and JNK in inc eased exp ession o MCP-1 and in il a ion
o in lamma o y cells in p essu e-o e loaded a hea s. Mol Med Rep 5, 1491-1496,
doi:10.3892/mm .2012.852
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
236
Sha ma, S. & Taliyan, R. (2018) High a die eeding induced insulin esis ance exace ba es 6-
OHDA media ed neu o oxici y and beha io al abno mali ies in a s. Beha B ain Res
351, 17-23, doi:10.1016/j.bb .2018.05.025
Sigmund, C. D., Diz, D. I. & Chappell, M. C. (2017) No B ain Renin-Angio ensin Sys em: Deja
u All O e Again? Hype ension 69, 1007-1010,
doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.117.09167
Simoes e Sil a, A. C., Sil ei a, K. D., Fe ei a, A. J. & Teixei a, M. M. (2013) ACE2,
angio ensin-(1-7) and Mas ecep o axis in in lamma ion and ib osis. B J
Pha macol 169, 477-492, doi:10.1111/bph.12159
Sma , L., Fawkes, N., Goggin, P., Pennick, G., Rains o d, K. D., Cha leswo h, B. & Shah, N.
(2020) A na a i e e iew o he po en ial pha macological in luence and sa e y o
ibup o en on co ona i us disease 19 (COVID-19), ACE2, and he immune sys em: a
dicho omy o expec a ion and eali y. In lammopha macology 28, 1141-1152,
doi:10.1007/s10787-020-00745-z
Soldne , F., S elze , Y., Shi alila, C. S., Ab aham, B. J., La ou elle, J. C., Ba asa, M. I.,
Goldmann, J., Mye s, R. H., Young, R. A. & Jaenisch, R. (2016) Pa kinson-
associa ed isk a ian in dis al enhance o alpha-synuclein modula es a ge gene
exp ession. Na u e 533, 95-99, doi:10.1038/na u e17939
Somme s ein, R., Kochen, M. M., Messe li, F. H. & G ani, C. (2020) Co ona i us Disease 2019
(COVID-19): Do Angio ensin-Con e ing Enzyme Inhibi o s/Angio ensin Recep o
Blocke s Ha e a Biphasic E ec ? J Am Hea Assoc 9, e016509,
doi:10.1161/JAHA.120.016509
Soni, R. & Shah, J. (2022) Deciphe ing In e wined Molecula Pa hways Unde lying Me abolic
Synd ome Leading o Pa kinson's Disease. ACS Chem Neu osci 13, 2240-2251,
doi:10.1021/acschemneu o.2c00165
Sonsalla, P. K., Coleman, C., Wong, L. Y., Ha is, S. L., Richa dson, J. R., Gadad, B. S., Li,
W. & Ge man, D. C. (2013) The angio ensin con e ing enzyme inhibi o cap op il
p o ec s nig os ia al dopamine neu ons in animal models o pa kinsonism. Exp
Neu ol 250, 376-383, doi:10.1016/j.expneu ol.2013.10.014
Sou h, A. M., Tomlinson, L., Edmons on, D., Hi ema h, S. & Spa ks, M. A. (2020)
Con o e sies o enin-angio ensin sys em inhibi ion du ing he COVID-19
pandemic. Na Re Neph ol 16, 305-307, doi:10.1038/s41581-020-0279-4
Souza, V. R., Mendes, E., Casa o, M., An io io, A., Oli ei a, F. A. & Fe ei a, C. M. (2019)
Desc ip ion o O a iec omy P o ocol in Mice. Me hods Mol Biol 1916, 303-309,
doi:10.1007/978-1-4939-8994-2_29
Spa ks, M. A., C owley, S. D., Gu ley, S. B., Mi o sou, M. & Co man, T. M. (2014) Classical
Renin-Angio ensin sys em in kidney physiology. Comp Physiol 4, 1201-1228,
doi:10.1002/cphy.c130040
S eckelings, U. M., Kaschina, E. & Unge , T. (2005) The AT2 ecep o --a ma e o lo e and
ha e. Pep ides 26, 1401-1409, doi:10.1016/j.pep ides.2005.03.010
S egbaue , J., Lee, D. H., Seube , S., Ell ichmann, G., Manzel, A., K akan, H., Mulle , D. N.,
Gaupp, S., Rump, L. C., Gold, R. & Linke , R. A. (2009) Role o he enin-
angio ensin sys em in au oimmune in lamma ion o he cen al ne ous sys em. P oc
Na l Acad Sci U S A 106, 14942-14947, doi:10.1073/pnas.0903602106
Su, H., Yang, M., Wan, C., Yi, L. X., Tang, F., Zhu, H. Y., Yi, F., Yang, H. C., Fogo, A. B.,
Nie, X. & Zhang, C. (2020) Renal his opa hological analysis o 26 pos mo em
indings o pa ien s wi h COVID-19 in China. Kidney In 98, 219-227,
doi:10.1016/j.kin .2020.04.003
BIBLIOGRAFÍA
237
Su, X., Magui e-Zeiss, K. A., Giuliano, R., P i i, L., Venka esh, K. & Fede o , H. J. (2008)
Synuclein ac i a es mic oglia in a model o Pa kinson's disease. Neu obiol Aging 29,
1690-1701, doi:10.1016/j.neu obiolaging.2007.04.006
Sucunza, D., Rico, A. J., Roda, E., Collan es, M., Gonzalez-Aseguinolaza, G., Rod iguez-
Pe ez, A. I., Penuelas, I., Vazquez, A., Labandei a-Ga cia, J. L., B occoli, V. &
Lanciego, J. L. (2021) Glucoce eb osidase Gene The apy Induces Alpha-Synuclein
Clea ance and Neu op o ec ion o Midb ain Dopamine gic Neu ons in Mice and
Macaques. In J Mol Sci 22, doi:10.3390/ijms22094825
Sulze , D., An onini, A., Le a, V., No d ig, A., Smeyne, R. J., Goldman, J. E., Al-Dalahmah,
O., Zecca, L., Se e, A., Bubacco, L., Meucci, O., Mo o, E., Ha ms, A. S., Xu, Y.,
Fahn, S. & Ray Chaudhu i, K. (2020) COVID-19 and possible links wi h Pa kinson's
disease and pa kinsonism: om bench o bedside. NPJ Pa kinsons Dis 6, 18,
doi:10.1038/s41531-020-00123-0
Sun, B., Rambe ge , M., O'Conno , K. C., Bash o d-Roge s, R. J. M. & I ani, S. R. (2020) The
B cell immunobiology ha unde lies CNS au oan ibody-media ed diseases. Na Re
Neu ol 16, 481-492, doi:10.1038/s41582-020-0381-z
Sun, Y. X., Zhang, H. Y., Wei, Y. M., Zhu, F., Wang, M. & Liao, Y. H. (2008) The mechanism
o signal ansduc ion du ing ascula smoo h muscle cell p oli e a ion induced by
au oan ibodies agains angio ensin AT1 ecep o om hype ension. Chin Med J
(Engl) 121, 43-48
Suzuki, Y., Ruiz-O ega, M., Lo enzo, O., Rupe ez, M., Es eban, V. & Egido, J. (2003)
In lamma ion and angio ensin II. In J Biochem Cell Biol 35, 881-900,
doi:10.1016/s1357-2725(02)00271-6
Sy e , C. M. & Angue a, M. C. (2019) When he balance is b oken: X-linked gene dosage om
wo X ch omosomes and emale-biased au oimmuni y. J Leukoc Biol 106, 919-932,
doi:10.1002/JLB.6RI0319-094R
Takahashi, Y., Haga, S., Ishizaka, Y. & Mimo i, A. (2010) Au oan ibodies o angio ensin-
con e ing enzyme 2 in pa ien s wi h connec i e issue diseases. A h i is Res The
12, R85, doi:10.1186/a 3012
Takeda, S., Sa o, N., Takeuchi, D., Ku inami, H., Shinoha a, M., Niisa o, K., Kano, M.,
Ogiha a, T., Rakugi, H. & Mo ishi a, R. (2009) Angio ensin ecep o blocke
p e en ed be a-amyloid-induced cogni i e impai men associa ed wi h eco e y o
neu o ascula coupling. Hype ension 54, 1345-1352,
doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.109.138586
Tan, W. S. D., Liao, W., Zhou, S., Mei, D. & Wong, W. F. (2018) Ta ge ing he enin-
angio ensin sys em as no el he apeu ic s a egy o pulmona y diseases. Cu Opin
Pha macol 40, 9-17, doi:10.1016/j.coph.2017.12.002
Tanaka, M., Tsuchida, S., Imai, T., Fujii, N., Miyazaki, H., Ichiki, T., Na use, M. & Inagami,
T. (1999) Vascula esponse o angio ensin II is exagge a ed h ough an up egula ion
o AT1 ecep o in AT2 knockou mice. Biochem Biophys Res Commun 258, 194-
198, doi:10.1006/bb c.1999.0500
Tang, Y. & Le, W. (2016) Di e en ial Roles o M1 and M2 Mic oglia in Neu odegene a i e
Diseases. Mol Neu obiol 53, 1181-1194, doi:10.1007/s12035-014-9070-5
Tian, M., Zhu, D., Xie, W. & Shi, J. (2012) Cen al angio ensin II-induced Alzheime -like au
phospho yla ion in no mal a b ains. FEBS Le 586, 3737-3745,
doi:10.1016/j. ebsle .2012.09.004
Tikellis, C., Be na di, S. & Bu ns, W. C. (2011) Angio ensin-con e ing enzyme 2 is a key
modula o o he enin-angio ensin sys em in ca dio ascula and enal disease. Cu
Opin Neph ol Hype ens 20, 62-68, doi:10.1097/MNH.0b013e328341164a
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
238
Timme man, R., Bu m, S. M. & Baj amo ic, J. J. (2018) An O e iew o in i o Me hods o
S udy Mic oglia. F on Cell Neu osci 12, 242, doi:10.3389/ ncel.2018.00242
Tip on, K. F. & Singe , T. P. (1993) Ad ances in ou unde s anding o he mechanisms o he
neu o oxici y o MPTP and ela ed compounds. J Neu ochem 61, 1191-1206,
doi:10.1111/j.1471-4159.1993. b13610.x
Tong, Q., Wu, L., Jiang, T., Ou, Z., Zhang, Y. & Zhu, D. (2016) Inhibi ion o endoplasmic
e iculum s ess-ac i a ed IRE1alpha-TRAF2-caspase-12 apop o ic pa hway is
in ol ed in he neu op o ec i e e ec s o elmisa an in he o enone a model o
Pa kinson's disease. Eu J Pha macol 776, 106-115,
doi:10.1016/j.ejpha .2016.02.042
To ika, N., As a , K., Danon, A., Ap e, R. N. & Fleishe -Be ko ich, S. (2016) Telmisa an
Modula es Glial Ac i a ion: In Vi o and In Vi o S udies. PLoS One 11, e0155823,
doi:10.1371/jou nal.pone.0155823
Townsend, A. (2020) Au oimmuni y o ACE2 as a possible cause o issue in lamma ion in
Co id-19. Med Hypo heses 144, 110043, doi:10.1016/j.mehy.2020.110043
T acy, H. A., J ., Wayne , M. J. & A ms ong, D. L. (1997) Losa an imp o es he pe o mance
o e hanol-in oxica ed a s in an eigh -a m adial maze. Alcohol 14, 511-517,
doi:10.1016/s0741-8329(97)00041-4
Tukiainen, T., Villani, A. C., Yen, A., Ri as, M. A., Ma shall, J. L., Sa ija, R., Agui e, M.,
Gau hie , L., Fleha y, M., Ki by, A., Cummings, B. B., Cas el, S. E., Ka czewski, K.
J., Ague , F., By nes, A., Conso ium, G. T., Labo a o y, D. A., Coo dina ing Cen e
-Analysis Wo king, G., S a is ical Me hods g oups-Analysis Wo king, G.,
Enhancing, G. g., Fund, N. I. H. C., Nih/Nci, Nih/Nhg i, Nih/Nimh, Nih/Nida,
Biospecimen Collec ion Sou ce Si e, N., Biospecimen Collec ion Sou ce Si e, R.,
Biospecimen Co e Resou ce, V., B ain Bank Reposi o y-Uni e si y o Miami B ain
Endowmen , B., Leidos Biomedical-P ojec , M., S udy, E., Genome B owse Da a,
I., Visualiza ion, E. B. I., Genome B owse Da a, I., Visualiza ion-Ucsc Genomics
Ins i u e, U. o. C. S. C., Lappalainen, T., Rege , A., A dlie, K. G., Hacohen, N. &
MacA hu , D. G. (2017) Landscape o X ch omosome inac i a ion ac oss human
issues. Na u e 550, 244-248, doi:10.1038/na u e24265
Tulisiak, C. T., Me cado, G., Peelae s, W., B undin, L. & B undin, P. (2019) Can in ec ions
igge alpha-synucleinopa hies? P og Mol Biol T ansl Sci 168, 299-322,
doi:10.1016/bs.pmb s.2019.06.002
Uhal, B. D., Gidea, C., Ba gou , R., Bi e o, A., Iba a-Sunga, O., Papp, M., Flynn, K. &
Filippa os, G. (1998) Cap op il inhibi s apop osis in human lung epi helial cells: a
po en ial an i ib o ic mechanism. Am J Physiol 275, L1013-1017,
doi:10.1152/ajplung.1998.275.5.L1013
Unge , T. (2003) Inhibi ing angio ensin ecep o s in he b ain: possible he apeu ic
implica ions. Cu Med Res Opin 19, 449-451, doi:10.1185/030079903125001974
Unge , T., Chung, O., Csikos, T., Culman, J., Gallina , S., Gohlke, P., Hohle, S., Me e , S.,
S oll, M., S o h, U. & Zhu, Y. Z. (1996) Angio ensin ecep o s. J Hype ens Suppl
14, S95-103
Valdes, P. & Schneide , B. L. (2016) Gene The apy: A P omising App oach o
Neu op o ec ion in Pa kinson's Disease? F on Neu oana 10, 123,
doi:10.3389/ nana.2016.00123
Valenzuela, R., Ba oso-Chinea, P., Villa -Cheda, B., Jogla , B., Munoz, A., Lanciego, J. L. &
Labandei a-Ga cia, J. L. (2010) Loca ion o p o enin ecep o s in p ima e subs an ia
nig a: e ec s on dopamine gic cell dea h. J Neu opa hol Exp Neu ol 69, 1130-1142,
doi:10.1097/NEN.0b013e3181 a0308

BIBLIOGRAFÍA
239
Valenzuela, R., Cos a-Besada, M. A., Iglesias-Gonzalez, J., Pe ez-Cos as, E., Villa -Cheda, B.,
Ga ido-Gil, P., Melendez-Fe o, M., So o-O e o, R., Lanciego, J. L., Hen ion, D.,
F anco, R. & Labandei a-Ga cia, J. L. (2016) Mi ochond ial angio ensin ecep o s in
dopamine gic neu ons. Role in cell p o ec ion and aging- ela ed ulne abili y o
neu odegene a ion. Cell Dea h Dis 7, e2427, doi:10.1038/cddis.2016.327
Valenzuela, R., Rod iguez-Pe ez, A. I., Cos a-Besada, M. A., Ri as-San is eban, R., Ga ido-
Gil, P., Lopez-Lopez, A., Na a o, G., Lanciego, J. L., F anco, R. & Labandei a-
Ga cia, J. L. (2021) An ACE2/Mas- ela ed ecep o M gE axis in dopamine gic
neu on mi ochond ia. Redox Biol 46, 102078, doi:10.1016/j. edox.2021.102078
Van de Pe en, A., Toelen, J., Cas eels, C., Macchi, F., Van Rompuy, A. S., Sa e, S., Casadei,
N., Nube , S., Himmel eich, U., Oso io Ga cia, M. I., Micho e, Y., D'Hooge, R.,
Bo mans, G., Van Lae e, K., Gijsbe s, R., Van den Hau e, C., Debyse , Z. &
Baekeland , V. (2015) Longi udinal ollow-up and cha ac e iza ion o a obus a
model o Pa kinson's disease based on o e exp ession o alpha-synuclein wi h
adeno-associa ed i al ec o s. Neu obiol Aging 36, 1543-1558,
doi:10.1016/j.neu obiolaging.2014.11.015
Van Dyken, P. & Lacos e, B. (2018) Impac o Me abolic Synd ome on Neu oin lamma ion
and he Blood-B ain Ba ie . F on Neu osci 12, 930, doi:10.3389/ nins.2018.00930
Va a ha aj, A. & Galea, I. (2017) The blood-b ain ba ie in sys emic in lamma ion. B ain
Beha Immun 60, 1-12, doi:10.1016/j.bbi.2016.03.010
Vege o, E., Benedusi, V. & Maggi, A. (2008) Es ogen an i-in lamma o y ac i i y in b ain: a
he apeu ic oppo uni y o menopause and neu odegene a i e diseases. F on
Neu oendoc inol 29, 507-519, doi:10.1016/j.y ne.2008.04.001
Ve donk, K., Danse , A. H. & an Esch, J. H. (2012) Angio ensin II ype 2 ecep o agonis s:
whe e should hey be applied? Expe Opin In es ig D ugs 21, 501-513,
doi:10.1517/13543784.2012.664131
Villa, A., Gelosa, P., Cas iglioni, L., Cimino, M., Rizzi, N., Pepe, G., Lolli, F., Ma cello, E.,
Si oni, L., Vege o, E. & Maggi, A. (2018) Sex-Speci ic Fea u es o Mic oglia om
Adul Mice. Cell Rep 23, 3501-3511, doi:10.1016/j.cel ep.2018.05.048
Villa, A., Vege o, E., Pole i, A. & Maggi, A. (2016) Es ogens, Neu oin lamma ion, and
Neu odegene a ion. Endoc Re 37, 372-402, doi:10.1210/e .2016-1007
Villapol, S., Loane, D. J. & Bu ns, M. P. (2017) Sexual dimo phism in he in lamma o y
esponse o auma ic b ain inju y. Glia 65, 1423-1438, doi:10.1002/glia.23171
Villa -Cheda, B., Cos a-Besada, M. A., Valenzuela, R., Pe ez-Cos as, E., Melendez-Fe o, M.
& Labandei a-Ga cia, J. L. (2017) The in acellula angio ensin sys em bu e s
dele e ious e ec s o he ex acellula pa ac ine sys em. Cell Dea h Dis 8, e3044,
doi:10.1038/cddis.2017.439
Villa -Cheda, B., Dominguez-Meijide, A., Valenzuela, R., G anado, N., Mo a alla, R. &
Labandei a-Ga cia, J. L. (2014) Aging- ela ed dys egula ion o dopamine and
angio ensin ecep o in e ac ion. Neu obiol Aging 35, 1726-1738,
doi:10.1016/j.neu obiolaging.2014.01.017
Villa -Cheda, B., Rod iguez-Palla es, J., Valenzuela, R., Munoz, A., Gue a, M. J., Bal a u, O.
C. & Labandei a-Ga cia, J. L. (2010) Nig al and s ia al egula ion o angio ensin
ecep o exp ession by dopamine and angio ensin in oden s: implica ions o
p og ession o Pa kinson's disease. Eu J Neu osci 32, 1695-1706,
doi:10.1111/j.1460-9568.2010.07448.x
Villa -Cheda, B., Sousa-Ribei o, D., Rod iguez-Palla es, J., Rod iguez-Pe ez, A. I., Gue a, M.
J. & Labandei a-Ga cia, J. L. (2009) Aging and seden a ism dec ease ascula iza ion
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
240
and VEGF le els in he a subs an ia nig a. Implica ions o Pa kinson's disease. J
Ce eb Blood Flow Me ab 29, 230-234, doi:10.1038/jcb m.2008.127
Villa -Cheda, B., Valenzuela, R., Rod iguez-Pe ez, A. I., Gue a, M. J. & Labandei a-Ga cia,
J. L. (2012) Aging- ela ed changes in he nig al angio ensin sys em enhances
p oin lamma o y and p o-oxida i e ma ke s and 6-OHDA-induced dopamine gic
degene a ion. Neu obiol Aging 33, 204 e201-211,
doi:10.1016/j.neu obiolaging.2010.08.006
Visanji, N. P., B o chie, J. M., Kalia, L. V., Kop ich, J. B., Tandon, A., Wa s, J. C. & Lang, A.
E. (2016) alpha-Synuclein-Based Animal Models o Pa kinson's Disease: Challenges
and Oppo uni ies in a New E a. T ends Neu osci 39, 750-762,
doi:10.1016/j. ins.2016.09.003
Visanji, N. P., Madan, P., Lacos e, A. M. B., Buleje, I., Han, Y., Spangle , S., Kalia, L. V.,
Hensley Al o d, S. & Ma as, C. (2021) Using a i icial in elligence o iden i y an i-
hype ensi es as possible disease modi ying agen s in Pa kinson's disease.
Pha macoepidemiol D ug Sa 30, 201-209, doi:10.1002/pds.5176
Volpicelli-Daley, L. A. (2017) E ec s o alpha-synuclein on axonal anspo . Neu obiol Dis
105, 321-327, doi:10.1016/j.nbd.2016.12.008
Walluka , G., Homu h, V., Fische , T., Lindschau, C., Ho s kamp, B., Jupne , A., Bau , E.,
Nissen, E., Ve e , K., Neichel, D., Dudenhausen, J. W., Halle , H. & Lu , F. C.
(1999) Pa ien s wi h p eeclampsia de elop agonis ic au oan ibodies agains he
angio ensin AT1 ecep o . J Clin In es 103, 945-952, doi:10.1172/JCI4106
Wan, Y., Shang, J., G aham, R., Ba ic, R. S. & Li, F. (2020) Recep o Recogni ion by he No el
Co ona i us om Wuhan: an Analysis Based on Decade-Long S uc u al S udies o
SARS Co ona i us. J Vi ol 94, doi:10.1128/JVI.00127-20
Wang, B., Rao, Y. H., Inoue, M., Hao, R., Lai, C. H., Chen, D., McDonald, S. L., Choi, M. C.,
Wang, Q., Shinoha a, M. L. & Yao, T. P. (2014a) Mic o ubule ace yla ion ampli ies
p38 kinase signalling and an i-in lamma o y IL-10 p oduc ion. Na Commun 5, 3479,
doi:10.1038/ncomms4479
Wang, H., Yang, P., Liu, K., Guo, F., Zhang, Y., Zhang, G. & Jiang, C. (2008a) SARS
co ona i us en y in o hos cells h ough a no el cla h in- and ca eolae-independen
endocy ic pa hway. Cell Res 18, 290-301, doi:10.1038/c .2008.15
Wang, H. L. & Lai, T. W. (2014) Op imiza ion o E ans blue quan i a ion in limi ed a issue
samples. Sci Rep 4, 6588, doi:10.1038/s ep06588
Wang, J., Ho, L., Chen, L., Zhao, Z., Zhao, W., Qian, X., Humala, N., Se o , I., Ba holomew,
S., Rosendo , C. & Pasine i, G. M. (2007) Valsa an lowe s b ain be a-amyloid
p o ein le els and imp o es spa ial lea ning in a mouse model o Alzheime disease.
J Clin In es 117, 3393-3402, doi:10.1172/JCI31547
Wang, J., Pang, T., Ha ko, R., Benicky, J., Sanchez-Lemus, E. & Saa ed a, J. M. (2014b)
Telmisa an amelio a es glu ama e-induced neu o oxici y: oles o AT(1) ecep o
blockade and PPARgamma ac i a ion. Neu opha macology 79, 249-261,
doi:10.1016/j.neu opha m.2013.11.022
Wang, K., Gheblawi, M. & Oudi , G. Y. (2020) Angio ensin Con e ing Enzyme 2: A Double-
Edged Swo d. Ci cula ion 142, 426-428,
doi:10.1161/CIRCULATIONAHA.120.047049
Wang, Q., Liu, Y. & Zhou, J. (2015a) Neu oin lamma ion in Pa kinson's disease and i s
po en ial as he apeu ic a ge . T ansl Neu odegene 4, 19, doi:10.1186/s40035-015-
0042-0
Wang, S., Chu, C. H., S ewa , T., Ginghina, C., Wang, Y., Nie, H., Guo, M., Wilson, B., Hong,
J. S. & Zhang, J. (2015b) alpha-Synuclein, a chemoa ac an , di ec s mic oglial
BIBLIOGRAFÍA
241
mig a ion ia H2O2-dependen Lyn phospho yla ion. P oc Na l Acad Sci U S A 112,
E1926-1935, doi:10.1073/pnas.1417883112
Wang, S., Guo, F., Liu, K., Wang, H., Rao, S., Yang, P. & Jiang, C. (2008b) Endocy osis o he
ecep o -binding domain o SARS-CoV spike p o ein oge he wi h i us ecep o
ACE2. Vi us Res 136, 8-15, doi:10.1016/j. i us es.2008.03.004
Wang, Z. C., Qi, J., Liu, L. M., Li, J., Xu, H. Y., Liang, B. & Li, B. (2017) Valsa an educes
AT1-AA-induced apop osis h ough supp ession oxida i e s ess media ed ER s ess
in endo helial p ogeni o cells. Eu Re Med Pha macol Sci 21, 1159-1168
Wenzel, K., Rajakuma , A., Haase, H., Geusens, N., Hubne , N., Schulz, H., B ewe , J.,
Robe s, L., Hubel, C. A., He se, F., He ing, L., Qad i, F., Lindschau, C., Walluka ,
G., Pijnenbo g, R., Heidecke, H., Riemekas en, G., Lu , F. C., Mulle , D. N.,
Lama ca, B. & Dechend, R. (2011) Angio ensin II ype 1 ecep o an ibodies and
inc eased angio ensin II sensi i i y in p egnan a s. Hype ension 58, 77-84,
doi:10.1161/HYPERTENSIONAHA.111.171348
Whi on, P. S. (2007) In lamma ion as a causa i e ac o in he ae iology o Pa kinson's disease.
B J Pha macol 150, 963-976, doi:10.1038/sj.bjp.0707167
Wincewicz, D. & B aszko, J. J. (2014) Telmisa an a enua es cogni i e impai men caused by
ch onic s ess in a s. Pha macol Rep 66, 436-441, doi:10.1016/j.pha ep.2013.11.002
Wincewicz, D. & B aszko, J. J. (2015) Angio ensin II AT1 ecep o blockade by elmisa an
educes impai men o spa ial maze pe o mance induced by bo h acu e and ch onic
s ess. J Renin Angio ensin Aldos e one Sys 16, 495-505,
doi:10.1177/1470320314526269
Wol , G., Bohlende , J., Bonde a, T., Roge , T., Thaiss, F. & Wenzel, U. O. (2006) Angio ensin
II up egula es oll-like ecep o 4 on mesangial cells. J Am Soc Neph ol 17, 1585-
1593, doi:10.1681/ASN.2005070699
Wong, C. H., Siah, K. W. & Lo, A. W. (2019) Es ima ion o clinical ial success a es and
ela ed pa ame e s. Bios a is ics 20, 273-286, doi:10.1093/bios a is ics/kxx069
W igh , J. W., Mizu ani, S. & Ha ding, J. W. (2012) Focus on B ain Angio ensin III and
Aminopep idase A in he Con ol o Hype ension. In J Hype ens 2012, 124758,
doi:10.1155/2012/124758
Wu, J., Deng, W., Li, S. & Yang, X. (2021) Ad ances in esea ch on ACE2 as a ecep o o
2019-nCoV. Cell Mol Li e Sci 78, 531-544, doi:10.1007/s00018-020-03611-x
Wu, L., Tian, Y. Y., Shi, J. P., Xie, W., Shi, J. Q., Lu, J. & Zhang, Y. D. (2013) Inhibi ion o
endoplasmic e iculum s ess is in ol ed in he neu op o ec i e e ec s o candesa an
cilexi il in he o enone a model o Pa kinson's disease. Neu osci Le 548, 50-55,
doi:10.1016/j.neule .2013.06.008
Wu, R., Laplan e, M. A. & de Champlain, J. (2005) Cyclooxygenase-2 inhibi o s a enua e
angio ensin II-induced oxida i e s ess, hype ension, and ca diac hype ophy in a s.
Hype ension 45, 1139-1144, doi:10.1161/01.HYP.0000164572.92049.29
Xu, J., Muke jee, S., Sil a-Al es, C. R., Ca alho-Gal ao, A., C uz, J. C., Bala ini, C. M.,
B aga, V. A., Laza igues, E. & F anca-Sil a, M. S. (2016) A Disin eg in and
Me allop o ease 17 in he Ca dio ascula and Cen al Ne ous Sys ems. F on
Physiol 7, 469, doi:10.3389/ phys.2016.00469
Xu, J., S i amula, S., Xia, H., Mo eno-Wal on, L., Culicchia, F., Domenig, O., Pogli sch, M. &
Laza igues, E. (2017) Clinical Rele ance and Role o Neu onal AT1 Recep o s in
ADAM17-Media ed ACE2 Shedding in Neu ogenic Hype ension. Ci c Res 121, 43-
55, doi:10.1161/CIRCRESAHA.116.310509
Xu, X., Chen, P., Wang, J., Feng, J., Zhou, H., Li, X., Zhong, W. & Hao, P. (2020) E olu ion
o he no el co ona i us om he ongoing Wuhan ou b eak and modeling o i s spike
MARÍA A PEDROSA SÁNCHEZ
242
p o ein o isk o human ansmission. Sci China Li e Sci 63, 457-460,
doi:10.1007/s11427-020-1637-5
Xu, Y., Xu, Y., Wang, Y., Wang, Y., He, L., Jiang, Z., Huang, Z., Liao, H., Li, J., Saa ed a, J.
M., Zhang, L. & Pang, T. (2015) Telmisa an p e en ion o LPS-induced mic oglia
ac i a ion in ol es M2 mic oglia pola iza ion ia CaMKKbe a-dependen AMPK
ac i a ion. B ain Beha Immun 50, 298-313, doi:10.1016/j.bbi.2015.07.015
Yamada, K. & Iwa subo, T. (2018) Ex acellula alpha-synuclein le els a e egula ed by
neu onal ac i i y. Mol Neu odegene 13, 9, doi:10.1186/s13024-018-0241-0
Yamada, T., Kawama a, T., Walke , D. G. & McGee , P. L. (1992) Vimen in immuno eac i i y
in no mal and pa hological human b ain issue. Ac a Neu opa hol 84, 157-162,
doi:10.1007/BF00311389
Yan, C., Kim, D., Aizawa, T. & Be k, B. C. (2003) Func ional in e play be ween angio ensin
II and ni ic oxide: cyclic GMP as a key media o . A e ioscle Th omb Vasc Biol 23,
26-36, doi:10.1161/01.a .0000046231.17365.9d
Yan, T., Xiao, R. & Lin, G. (2020) Angio ensin-con e ing enzyme 2 in se e e acu e espi a o y
synd ome co ona i us and SARS-CoV-2: A double-edged swo d? FASEB J 34,
6017-6026, doi:10.1096/ j.202000782
Yan, Y., Jiang, W., Liu, L., Wang, X., Ding, C., Tian, Z. & Zhou, R. (2015) Dopamine con ols
sys emic in lamma ion h ough inhibi ion o NLRP3 in lammasome. Cell 160, 62-
73, doi:10.1016/j.cell.2014.11.047
Yang, J., Zheng, Y., Gou, X., Pu, K., Chen, Z., Guo, Q., Ji, R., Wang, H., Wang, Y. & Zhou,
Y. (2020) P e alence o como bidi ies and i s e ec s in pa ien s in ec ed wi h SARS-
CoV-2: a sys ema ic e iew and me a-analysis. In J In ec Dis 94, 91-95,
doi:10.1016/j.ijid.2020.03.017
Yugandha , V. G. & Cla k, M. A. (2013) Angio ensin III: a physiological ele an pep ide o
he enin angio ensin sys em. Pep ides 46, 26-32, doi:10.1016/j.pep ides.2013.04.014
Zalba, G., San Jose, G., Mo eno, M. U., Fo uno, M. A., Fo uno, A., Beaumon , F. J. & Diez,
J. (2001) Oxida i e s ess in a e ial hype ension: ole o NAD(P)H oxidase.
Hype ension 38, 1395-1399, doi:10.1161/hy1201.099611
Zaman, M. A., Opa il, S. & Calhoun, D. A. (2002) D ugs a ge ing he enin-angio ensin-
aldos e one sys em. Na Re D ug Disco 1, 621-636, doi:10.1038/n d873
Zawada, W. M., Banninge , G. P., Tho n on, J., Ma io , B., Can u, D., Rachubinski, A. L.,
Das, M., G i in, W. S. & Jones, S. M. (2011) Gene a ion o eac i e oxygen species
in 1-me hyl-4-phenylpy idinium (MPP+) ea ed dopamine gic neu ons occu s as an
NADPH oxidase-dependen wo-wa e cascade. J Neu oin lamma ion 8, 129,
doi:10.1186/1742-2094-8-129
Zhang, J., Wu, J., Sun, X., Xue, H., Shao, J., Cai, W., Jing, Y., Yue, M. & Dong, C. (2020a)
Associa ion o hype ension wi h he se e i y and a ali y o SARS-CoV-2 in ec ion:
A me a-analysis. Epidemiol In ec 148, e106, doi:10.1017/S095026882000117X
Zhang, P. & Tian, B. (2014) Me abolic synd ome: an impo an isk ac o o Pa kinson's
disease. Oxid Med Cell Longe 2014, 729194, doi:10.1155/2014/729194
Zhang, P., Zhu, L., Cai, J., Lei, F., Qin, J. J., Xie, J., Liu, Y. M., Zhao, Y. C., Huang, X., Lin,
L., Xia, M., Chen, M. M., Cheng, X., Zhang, X., Guo, D., Peng, Y., Ji, Y. X., Chen,
J., She, Z. G., Wang, Y., Xu, Q., Tan, R., Wang, H., Lin, J., Luo, P., Fu, S., Cai, H.,
Ye, P., Xiao, B., Mao, W., Liu, L., Yan, Y., Liu, M., Chen, M., Zhang, X. J., Wang,
X., Touyz, R. M., Xia, J., Zhang, B. H., Huang, X., Yuan, Y., Loomba, R., Liu, P. P.
& Li, H. (2020b) Associa ion o Inpa ien Use o Angio ensin-Con e ing Enzyme
Inhibi o s and Angio ensin II Recep o Blocke s Wi h Mo ali y Among Pa ien s
249
ANEXO II
DECLARACIÓN DE CONFLICTOS DE INTERÉS.
La doc o anda, Ma ía A Ped osa Sánchez, decla a no ene ningún
con lic o de in e és en elación con la p esen e esis doc o al.

250
FINANCIACIÓN
 Minis e io de Sanidad (PI20/00345; PI17/00828,
RD16/0011/0016, Cen o de In es igación Biomédica en Red
En e medades Neu odegene a i as, CIBERNED).
 Minis e io de Economía y Compe i i idad (BFU2015-70523;
BFU2017-82407-R; RTI2018-098830-B-I00; RTI2018-094204-
B-I00).
 Gobie no de Galicia (Xun a de Galicia, Conseje ía de
Educación; GRC2014/002; ED431C 2018/10; ED431G/05;
IN845D 2020/20). Cen o de In es igación en Medicina Molecula
y En e medades C ónicas, CIMUS (2016-PG013; ED431G/05).
Ayudas de apoyo a la e apa p edoc o al (ED481A-2017).
 Gobie no de Na a a (Depa amen o de Salud; 046-2017).
 Fondo Eu opeo de Desa ollo Regional (FEDER).

Xe a u a Te i o ial
Sº de Ganda ía
Edi icio adminis a i o Monelos, 4º anda
Rúa Vicen e Fe e , Nº 2
15008 A Co uña
T no.: 981 184 565
Co eo elec ónico: se [email p o ec ed]
RESOLUCIÓN DE AUTORIZACIÓN DE PROXECTO DE EXPERIMENTACIÓN ANIMAL
Expedien e núm.: 15012/2021/012 Da a de inicio do expedien e: 16.4.2021
Pe soa solici an e: Anxo Vidal Figue oa P ocedemen o: esolución de au o ización
Fo ma de inicio: solici ude da pe soa in e esada
ANTECEDENTES
A pe soa solici an e p esen ou con da a 16.4.2021 unha solici ude pa a a ealización do
p oxec o de expe imen ación animal (en ada no Rexis o elec ónico da Xun a de Galicia
2021/880369), cuxos da os se de allan a con inuación:
Denominación do p oxec o: Es udos de no as e apias en modelos de en e midade de
Pa kinson e ou as en e midades neu odexene a i as
Nome do cen o usua io: Cen o de Biomedicina Expe imen al (CEBEGA) da Uni e sidade de
San iago de Compos ela
Pe soa esponsable do p oxec o: José Luis Labandei a Ga cía
Es ablecemen o onde se ealiza án os p ocedemen os do p oxec o (ou luga xeog á ico no
caso de aballos de campo): Cen o de Biomedicina Expe imen al (CEBEGA)
Clasi icación do p oxec o : Tipo I Tipo II Tipo III
CONSIDERACIÓNS LEGAIS E TÉCNICAS
1 O Real dec e o 53/2013, de 1 de eb ei o (BOE 34, do 8 de eb ei o), polo que se es ablecen
as no mas básicas aplicables pa a a p o ección dos animais u ilizados en expe imen ación e
ou os ins cien í icos, incluíndo a docencia, es ablece no seu a igo 33 as condicións de
au o izacións dos p oxec os con animais de expe imen ación.
2 O a igo 88 da Lei 39/2015, de 1 de ou ub o, do p ocedemen o adminis a i o común das
adminis acións públicas (BOE 236, do 2 de ou ub o de 2015) es ablece que a esolución que
poña in o p ocedemen o decidi á odas as cues ións expos as polos in e esados e aquelas
ou as de i adas des e.
X
CVE: 7O1XzUVA62
Ve i icación: h ps://sede.xun a.gal/c e
Xe a u a Te i o ial
Sº de Ganda ía
Edi icio adminis a i o Monelos, 4º anda
Rúa Vicen e Fe e , Nº 2
15008 A Co uña
T no.: 981 184 565
Co eo elec ónico: se [email p o ec ed]
3 O Se izo de Ganda ía da Co uña e isou a documen ación achegada na solici ude e o
esul ado a o able da a aliación do p oxec o ealizada polo ó gano habili ado, a Sección de
Expe imen ación Animal do Comi é de Bioé ica da Uni e sidade de San iago de Compos ela.
Es a xe a u a e i o ial é compe en e pa a di a unha esolución, de con o midade co Dec e o
149/2018, do 5 de decemb o, polo que se es ablece a es u u a o gánica da Conselle ía do
Medio Ru al e se modi ica pa cialmen e o Dec e o 177/2016, do 15 de decemb o, polo que se
ixa a es u u a o gánica da Vicep esidencia e das conselle ías da Xun a de Galicia (DOG 235,
do 11 de no emb o).
De aco do con odo o indicado, RESOLVO:
1 Au o iza o p oxec o solici ado.
2 O p oxec o non p ecisa some e se a unha a aliación e ospec i a.
3 A au o ización des e p oxec o e á unha du ación de cinco anos e unha ez ansco ido es e
empo, debe á se eno ada.
A ci ada au o ización é unicamen e álida nas condicións que igu an no expedien e. An e
calque a cambio signi ica i o no p oxec o que poida e e ec os nega i os sob e o benes a dos
animais, debe á solici a a con i mación da au o ización ao Se izo P o incial de Ganda ía.
Es a au o ización pode á se suspendida no caso de que o p oxec o non se le e a cabo de
aco do coas condicións de au o ización e e i ala, p e io expedien e ami ado ao que se lle
da á audiencia.
Con a a p esen e esolución, que non pon in á ía adminis a i a, pode á in e poñe un
ecu so de alzada an e o consellei o de Medio Ru al. O p azo comeza á a con a dende o día
seguin e ao da ecepción des a esolución. Todo is o, segundo o dispos o nos a igos 121 e 122
da ci ada Lei 39/2015.
Median e es e esc i o no i ícaselle a Anxo Vidal Figue oa es a esolución segundo o esixido no
a igo 40.1 da an edi a Lei 39/2015.
CVE: 7O1XzUVA62
Ve i icación: h ps://sede.xun a.gal/c e Asinado po : SANTOS MANEIRO, JOSE MANUEL
Ca go: Xe e Te i o ial
Da a e ho a: 30/04/2021 14:32:23
Sec
e a ia Técnica
Com
i é Au onómico de É ica da In es igación de Galicia
Sec
e a ia Xe al. Conselle ía de Sanidade
Edi icio Adminis a i o San Láza o
15703 SANTIAGO DE COMPOSTELA
Te
l: 881546425. Co eo-e: ce
ic@
s
e g
as.es
Sec
e a ia Técnica
Com
i é Au onómico de É ica da In es igación de Galicia
Sec
e a ia Xe al. Conselle ía de Sanidade
Edi icio Adminis a i o San Láza o
15703 SANTIAGO DE COMPOSTELA
Te
l: 881546425. Co eo-e: ce
ic@
s
e g
as.es
DICTAMENDELCOMITÉDEÉTICADELAINVESTIGACIÓNDESANTIAGOLUGO

Guille moJoséP adaRamallal,Sec e a iodelComi édeÉ icadelaIn es igacióndeSan iagoLugo,

CERTIFICA:
Quees eComi ée aluóensu eunióndeldía18deene ode2018eles udio:

Tí ulo:Ob ención,pu i icacióny concen acióndeAu oan icue pos en eal ecep o de
Angio ensina ipo1apa i demues assanguíneasdepacien esconp eeclampsia
P omo o :AnaIsabelRod íguezPé ez
Tipodees udio:Ou os
Ve sión: e siónnº2de3deene ode2018
CódigodelP omo o :AIRPRVAAAT1201801
CódigodeRegis o:2017/618

Y, omandoenconside aciónlassiguien escues iones:
- Lape inenciadeles udio, eniendoencuen aelconocimien odisponible,asícomolos
equisi oslegalesaplicables,yenpa icula laLey14/2007,dein es igaciónbiomédica,el
RealDec e o1716/2011,de18deno iemb e,po elquesees ablecenlos equisi osbásicos
deau o izacióny uncionamien odelosbiobancoscon inesdein es igaciónbiomédicaydel
a amien odelasmues asbiológicasdeo igenhumana,yse egulael uncionamien oy
o ganizacióndelRegis oNacionaldeBiobancospa ain es igaciónbiomédica,laORDEN
SAS/3470/2009,de16dediciemb e,po laquesepublicanlasDi ec icessob ees udios
Pos au o izacióndeTipoObse acionalpa amedicamen osdeusohumano,ylaCi cula nº
07/2004,dein es igacionesclínicasconp oduc ossani a ios.
- Laidoneidaddelp o ocoloen elaciónconlosobje i osdeles udio,jus i icacióndelos
iesgosymoles iasp e isiblespa aelsuje o,asícomolosbene iciosespe ados.
- Losp incipiosé icosdaDecla acióndeHelsinki igen e.
- LosP ocedimien osNo malizadosdeT abajodelComi é.

Emi eundic amenFAVORABLEpa ala ealizacióndeles udiopo el/lain es igado /adel
cen o:

Cen osIn es i
gad
o esP inci
p
ales
CIMUS.Uni e sidadedeSan iagodeCompos ela
(
USC
)

AnaIsabelRod íguezPé ez
 


EnSan iagodeCompos ela,a23deene o2018.

ElSec e a iodelComi éTe i o ialdeÉ icadelaIn es igacióndeSan iagoLugo,



Guille moJoséP adaRamallal 
[email p o ec ed]
2018.01.24 11:11:26 +02'00'
Sec
e a ia Técnica
Com
i é Au onómico de É ica da In es igación de Galicia
Sec
e a ia Xe al. Conselle ía de Sanidade
Edi icio Adminis a i o San Láza o
15703 SANTIAGO DE COMPOSTELA
Te
l: 881546425. Co eo-e: ce
ic@
s
e g
as.es
Sec
e a ia Técnica
Com
i é Au onómico de É ica da In es igación de Galicia
Sec
e a ia Xe al. Conselle ía de Sanidade
Edi icio Adminis a i o San Láza o
15703 SANTIAGO DE COMPOSTELA
Te
l: 881546425. Co eo-e: ce
ic@
s
e g
as.es
Guille moJoséP adaRamallal,Sec e a iodelComi édeÉ icadelaIn es igacióndeSan iagoLugo,

HACECONSTARQUE:

1. ElComi éTe i o ialdeÉ icadelaIn es igacióndeSan iagoLugocumple an oensu
composicióncomoensusPNTslos equisi oslegales igen es(RD1090/2015deensayosclínicos,y
laLey14/2007deIn es igaciónBiomédica).
2.Lacomposiciónac ualdelComi éTe i o ialdeÉ icadelaIn es igacióndeSan iagoLugoes:
 JuanManuelVázquezLago(P esiden e).Médicoespecialis aenMedicinaP e en i ay
SaludPública.Á eadeGes iónIn eg adadeSan iago.
 Pila Rod íguezLedo(Vicep esiden a).Médicoespecialis aenMedicinaFamilia y
Comuni a ia.Á eadeGes iónIn eg adadeLugo.
 Guille moJoséP adaRamallal(Sec e a io).Médicoespecialis aenFa macologíaClínica.
Á eadeGes iónIn eg adadeSan iago.FundaciónRamónDomínguez.
Lo enzoA men e os delOlmo(Vicesec e a io). Médicoespecialis a enMedicinaFamilia
yComuni a ia.Á eadeGes iónIn eg adadeLugo.
 F anciscoCamposPé ez.Biólogo.Ins i u odeIn es igaciónSani a iadeSan iagode
Compos ela.
 RosanaCas eloDomínguez.Fa macéu icadeA enciónP ima ia.Á eadeGes iónIn eg ada
deSan iago.
 Rica doGa cíaMa ínez.LicenciadoenDe echo.Á eadeGes iónIn eg adadeLugo.
 JaimeGulínDá ila.Fa macéu icoespecialis aenFa maciaHospi ala ia.Á eadeGes ión
In eg adadeLugo.
 Vic o He ánCa ei a.Pacien e.ADILAsociacióndeDiabé icosLucense.
 Ma íaJesúsLamasDíaz.Fa macéu icaespecialis aenFa maciaHospi ala ia.Á eade
Ges iónIn eg adadeSan iago.
 Ca losRod íguezMo eno.Médicoespecialis aenFa macologíaClínica.Á eadeGes ión
In eg adadeSan iago.
 Ra aelCa losVidalPé ez.Médicoespecialis aenCa diología.Á eadeGes iónIn eg adade
Lugo.
 Ma íaJesúsWandosellPica os e.En e me a.Á eadeGes iónIn eg adadeSan iago.

Pa aquecons edondep oceda,yape icióndelp omo o /in es igado ,enSan iagodeCompos ela,
a23deene ode2018.

ElSec e a iodelComi éTe i o ialdeÉ icadelaIn es igacióndeSan iagoLugo,



Guille moJoséP adaRamallal

[email p o ec ed]
2018.01.24 11:11:28 +02'00'