Ma ía Piñei o Va ela
Facul ad de Ve e ina ia
G ado en Ve e ina ia
Año 2024
Modalidad del T abajo: Expe imen al
T abajo de
Fin de G ado
Pues a a pun o y alidación
de una écnica económica,
ápida y sencilla pa a la
es imación de la edad en
odon oce os
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Licencia
Es a ob a pe enece a Ma ía Piñei o Va ela y es á suje a a una licencia Reconocimien o-
Compa i Igual 4.0 In e nacional de C ea i e Commons. Pa a e una copia de es a licencia,
isi e: h ps://c ea i ecommons.o g/licenses/by-sa/4.0/
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Resumen
La es imación de la edad en animales sal ajes es una he amien a esencial pa a el es udio de la
es uc u a de las poblaciones, la in e p e ación de de e minados da os biológicos y la ges ión de
los p og amas de conse ación de especies amenazadas. Exis en a ias o mas de es ima la
edad de los animales, siendo la écnica más común el con aje de g upos de capas de c ecimien o
(GLG) en la den ina, un ecuen o que se puede lle a a cabo empleando di e en es mé odos. En
es e abajo se ha op ado po es ima la edad en odon oce os median e el con aje de GLG en
secciones de dien es lijadas y pulidas, u ilizando un es e eomic oscopio y un mic oscopio
óp ico. Pa a alida el p ocedimien o, se compa a on los esul ados con los ob enidos en
secciones descalci icadas de los mismos dien es empleando mic oscopía óp ica, mic oscopía
elec ónica de ba ido y mic o omog a ía compu a izada. La Coo dinado a pa a o Es udo dos
Mamí e os Ma iños (CEMMA) p opo cionó dien es de 34 animales pe enecien es a las cua o
especies de odon oce os con mayo núme o de a amien os en la cos a gallega: del ín común de
hocico co o (Delphinus delphis), ma sopa común (Phocoena phocoena), del ín lis ado (S enella
coe uleoalba) y del ín mula (Tu siops unca us). Los mejo es esul ados, an o pa a la
iden i icación de las es uc u as den ales como pa a el con aje de GLG, se ob u ie on con el
mic oscopio elec ónico de ba ido en los dien es de del ín común, del ín lis ado y del ín mula .
Sin emba go, la mic oscopía óp ica en secciones no a adas ambién demos ó se una écnica
e icaz pa a la de e minación de la edad en odas las especies, mien as que el p oceso de
descalci icación solamen e mejo ó la de inición de los GLG en las secciones de dien es de
del ín mula , po se las de mayo amaño. La mic o omog a ía compu a izada pe mi ió
iden i ica algunos GLG, pe o no se consiguió comple a el con aje en los dien es de del ín
mula con la ca idad pulpa más ce ada. En de ini i a, es a me odología ha pe mi ido pone a
pun o en la Facul ad de Ve e ina ia de la USC una écnica económica, ápida y sencilla pa a la
es imación de la edad en odon oce os median e el con aje de GLG en secciones de dien es
lijadas y pulidas, écnica que se ha alidado compa ando los esul ados con los ob enidos en
secciones descalci icadas de los mismos dien es empleando mic oscopía óp ica, mic oscopía
elec ónica de ba ido y mic o omog a ía compu a izada.
Palab as cla e: es imación de la edad, g upos de capas de c ecimien o, GLG, ce áceos,
odon oce os, dien es, mic oscopía óp ica, es e eomic oscopía, mic oscopía elec ónica de
ba ido, mic o omog a ía compu a izada.
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Resumo
A es imación da idade en animais sal axes é unha e amen a esencial pa a o es udo da es u u a
das poboacións, a in e p e ación de de e minados da os biolóxicos e a xes ión dos p og amas de
conse ación de especies ameazadas. Exis en a ias o mas de es ima a idade dos animais,
sendo a écnica máis común a con a de g upos de capas de c ecemen o (GLG) na den ina, un
econ o que se pode le a a cabo emp egando di e en es mé odos. Nes e aballo op ouse po
es ima a idade en odon oce os median e a con a de GLG en seccións de den es lixadas e
pulidas, u ilizando un es e eomic oscopio e un mic oscopio óp ico. Pa a alida o
p ocedemen o, compa á onse os esul ados cos ob idos en seccións descalci icadas dos mesmos
den es emp egando mic oscopia óp ica, mic oscopia elec ónica de a ido e mic o omog a ía
compu a izada. Pa a is o, a Coo dinado a pa a o Es udo dos Mamí e os Ma iños (CEMMA)
p opo cionou den es de 34 animais pe encen es ás ca o especies de odon oce os con maio
núme o de a amen os na cos a galega: gol iño común (Delphinus delphis), oniña (Phocoena
phocoena), gol iño iscado (S enella coe uleoalba) e a oaz (Tu siops unca us). Os mello es
esul ados, an o pa a a iden i icación das es u u as den ais como pa a a con a de GLG,
ob i é onse co mic oscopio elec ónico de a ido pa a os den es de gol iño común, gol iño
iscado e a oaz. Po én, a mic oscopia óp ica en seccións non a adas amén amosou se unha
écnica e icaz pa a a de e minación da idade en odas as especies, men es que o p oceso de
descalci icación soamen e mello ou a de inición dos GLG nas seccións de den es de a oaz, po
se as de maio amaño. A mic o omog a ía compu a izada pe mi iu iden i ica algúns GLG,
pe o non se conseguiu comple a a con a nos den es de a oaz coa ca idade polpa máis
pechada. En de ini i a, es a me odoloxía pe mi iu poñe a pun o na Facul ade de Ve e ina ia da
USC unha écnica económica, ápida e sinxela pa a a es imación da idade en odon oce os
median e a con a de GLG en seccións de den es lixadas e pulidas, écnica que se alidou
compa ando os esul ados cos ob idos en seccións descalci icadas dos mesmos den es
emp egando mic oscopia óp ica, mic oscopia elec ónica de a ido e mic o omog a ía
compu a izada.
Palab as cha e: es imación da idade, g upos de capas de c ecemen o, GLG, ce áceos,
odon oce os, den es, mic oscopia óp ica, es e eomic oscopia, mic oscopia elec ónica de
a ido, mic o omog a ía compu a izada.
5
Abs ac
Age es ima ion in wild animals is an essen ial ool o he s udy o popula ions s uc u e, he
in e p e a ion o ce ain biological da a and he managemen o conse a ion p og ammes o
endange ed species. The e a e se e al ways o es ima e he age o animals, being he mos
common echnique he coun ing o g ow h laye g oups (GLGs) in den ine, which can be ca ied
ou using di e en me hods. In his wo k, he age o odon oce es has been es ima ed by coun ing
GLGs in g ound and polished ee h sec ions, using a s e eomic oscope and a ligh mic oscope.
Besides, he p ocedu e has been alida ed by compa ing he esul s wi h hose ob ained on
decalci ied sec ions om he same ee h using ligh mic oscopy, scanning elec on mic oscopy
and mic ocompu ed omog aphy. Fo his pu pose, he Coo dinado a pa a o Es udo dos
Mamí e os Ma iños (CEMMA) p o ided ee h om 34 animals belonging o he ou species o
odon oce es wi h he highes numbe o s andings on he Galician coas : sho -beaked common
dolphin (Delphinus delphis), ha bou po poise (Phocoena phocoena), s iped dolphin (S enella
coe uleoalba) and bo lenose dolphin (Tu siops unca us). The bes esul s, bo h o he
iden i ica ion o den al s uc u es and o GLGs coun , we e ob ained wi h scanning elec on
mic oscopy in common dolphin, s iped dolphin and bo lenose dolphin ee h. Howe e , ligh
mic oscopy on un ea ed sec ions was also p o ed o be an e ec i e echnique o age
de e mina ion in all species, while he decalci ica ion p ocess only imp o ed he de ini ion o
GLGs in he bo lenose dolphin ee h sec ions, as hey we e he la ges . Mic ocompu ed
omog aphy allowed he iden i ica ion o some GLGs, bu i was no possible o comple e he
coun in bo lenose dolphin ee h wi h a mo e closed pulp ca i y. In sho , his me hodology has
made i possible o de elop an economical, as and simple echnique a he Facul y o
Ve e ina y Medicine o he USC o he es ima ion o age in odon oce es by coun ing GLGs in
sanded and polished ee h sec ions, a echnique ha has been alida ed by compa ing he esul s
wi h hose ob ained in decalci ied sec ions o he same ee h using ligh mic oscopy, scanning
elec on mic oscopy and mic ocompu ed omog aphy.
Keywo ds: age es ima ion, g ow h laye g oups, GLG, ce aceans, odon oce es, ee h, ligh
mic oscopy, s e eomic oscopy, scanning elec on mic oscopy, mic ocompu ed omog aphy.
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ABREVIACIONES
CEMMA: Coo dinado a pa a o Es udo dos Mamí e os Ma iños
DDE: Delphinus delphis (Del ín común de hocico co o)
EDTA: Ácido e ilendiamino e aacé ico
GLG: G upos de capas de c ecimien o (del inglés, g ow h laye g oups)
LT: Longi ud o al (en cm), medida desde el ex emo más os al de la ca a has a a hendidu a
en e los lóbulos de la ale a caudal
MEB: Mic oscopía elec ónica de ba ido; mic oscopio elec ónico de ba ido
Mic o-TC: Mic og a ía compu a izada
ONG: O ganización no gube namen al
PPH: Phocoena phocoena (Ma sopa común)
RDO: Rapid Decalci ica ion Solu ion
.p.m.: Re oluciones po minu o
SCO: S enella coe uleoalba (Del ín lis ado)
TTR: Tu siops unca us (Del ín mula )
7
ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN ............................................................................................................... 8
1.1. Mé odos pa a la es imación de la edad absolu a ........................................................... 9
1.1.1. Mo ología de los dien es .......................................................................................... 10
1.1.2. Mé odos pa a la de e minación de los g upos de capas de c ecimien o (GLG) ........ 12
1.1.3. O os mé odos pa a la es imación de la edad absolu a en ce áceos ........................... 14
1.2. Mé odos pa a la es imación de la edad ela i a ....................................................... 15
1.3. Desc ipción de los odon oce os es udiados ............................................................... 16
1.3.1. Del ín común de hocico co o (Delphinus delphis) ................................................... 16
1.3.2. Del ín mula (Tu siops unca us) ............................................................................. 17
1.3.4. Del ín lis ado (S enella coe uleoalba) ...................................................................... 18
1.3.5. Ma sopa común (Phocoena phocoena) ..................................................................... 18
2. OBJETIVOS ...................................................................................................................... 20
3. MATERIAL Y MÉTODOS .............................................................................................. 21
3.1. Toma de mues as ....................................................................................................... 21
3.2. Lijado y pulido ............................................................................................................ 23
3.3. Descalci icación ........................................................................................................... 24
3.4. Mic oscopía elec ónica de ba ido (MEB) .............................................................. 24
3.5. Mic o omog a ía compu a izada (mic o-TC) .......................................................... 24
4. RESULTADOS .................................................................................................................. 26
4.1. Almacenamien o de los dien es .................................................................................. 26
4.2. Ob ención de las secciones ......................................................................................... 26
4.3. Descalci icación ........................................................................................................... 26
4.4. Es uc u a den al ........................................................................................................ 26
4.5. Con aje de GLG .......................................................................................................... 28
4.6. Con aje de GLG en secciones lijadas y pulidas ........................................................ 29
4.7. Con aje de GLG en secciones descalci icadas .......................................................... 31
4.8. Con aje de GLG en el mic oscopio elec ónico de ba ido ..................................... 32
4.9. Con aje de GLG con mic o omog a ía compu a izada .......................................... 34
5. DISCUSIÓN ....................................................................................................................... 36
6. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 41
7. BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................... 42
8
1. INTRODUCCIÓN
La es imación de la edad en animales sal ajes apo a in o mación undamen al pa a el es udio
de la biología de las especies, an o a ni el indi idual como pa a comp ende los modelos
dinámicos poblacionales. Es os modelos desc iben y p edicen las a iaciones en el amaño y la
es uc u a de las poblaciones a lo la go del iempo (Hohn, 2018; Olson e al., 2022; Read e al.,
2018).
El conocimien o de la edad de los indi iduos pe mi e de ini la longe idad y las asas de
na alidad y mo alidad de una especie, lo que posibili a p oyec a la ayec o ia de las
poblaciones en el iempo (Campana y S ewa , 2014; Mbizah e al., 2016; Mu phy e al., 2014;
Rouby e al., 2020). Po o o lado, es ima el momen o de madu ación sexual p opo ciona
in o mación ace ca del ciclo ep oduc i o de una especie, del po encial ep oduc i o de una
población y, po an o, de su capacidad de ecupe ación (Kessel ing e al., 2017; Schwacke e
al., 2022).
Además del uso adicional pa a es udia la es uc u a de las poblaciones, la es imación de la
edad ambién puede emplea se pa a in e p e a los e ec os de la bioacumulación de oxinas y
sus ancias con aminan es en la salud de los animales (Hohn, 2018; Read e al., 2018).
Adicionalmen e, algunas de las mues as empleadas pa a la de e minación de la edad, como los
dien es, ambién apo an in o mación ace ca de la salud, la madu ez, el sexo, la his o ia
ep oduc i a y la in luencia de ac o es ambien ales en el es ado gene al de los indi iduos
(Lockye , 1995).
Los mamí e os ma inos, y más especí icamen e los ce áceos, son mo i o de p eocupación desde
hace décadas debido a su baja asa ep oduc i a y a su ulne abilidad an e las ag esiones
an ópicas de i adas undamen almen e de la ac i idad pesque a, uno de los p incipales ac o es
que in luyen en la incidencia de a amien os (Aguila e al., 2009; Saa ed a e al., 2017). Po
an o, además de lo mencionado an e io men e, es ima la edad en es as especies es esencial
pa a conoce la epe cusión que dichas ac i idades humanas gene an sob e ellas con el obje i o
de mejo a las es a egias de mi igación (Hen iksen e al., 2024).
Las aguas que bañan los ap oximadamen e 1500 km de cos a gallega son muy icas en
nu ien es debido al enómeno del a lo amien o: ascenso es acional de agua p o unda ica en
nu ien es ce ca de la cos a (López, 2018). Es a iqueza nu i i a explica la ele ada
biodi e sidad que sus en a, con abilizándose has a 24 especies de ce áceos, pe o ambién la
in ensa ac i idad pesque a que se desa olla en es a á ea; u o de es a coexis encia, las cos as
gallegas son el escena io de nume osos a amien os de ce áceos mue os, en e mos o
apa en emen e sanos (López e al., 2015; Saa ed a e al., 2017). En 2023 se alcanzó la ci a
éco d de 592 ce áceos a ados en un solo año en Galicia (del ín común de hocico co o,
9
Delphinus delphis: 433 indi iduos; del ín mula , Tu siops unca us: 42 indi iduos; del ín
lis ado, S enella coe uleoalba: 20 indi iduos; ma sopa común, Phocoena phocoena: 14
indi iduos; y a ias especies de ballenas: 12 indi iduos). De los ce áceos a ados en buen
es ado como pa a se alo ados, el 42,3% mos aban indicios cla os de habe mue o
consecuencia de in e acciones con a es de pesca (Rede de Va amen os de Galicia
[REVARGAL], 2023). En los a amien os de animales i os la in o mación sob e su edad
pe mi e oma decisiones ace ca de su libe ación, ehabili ación o eu anasia. Po o o lado, la
de e minación de los g upos demog á icos a ec ados en a amien os masi os o e en os de
mo alidad inusuales puede ayuda a comp ende los ac o es subyacen es y las posibles
consecuencias pa a las poblaciones (Calzada e al., 1994; Moo e e al., 2007).
Sin emba go, la es imación de la edad en mamí e os ma inos puede supone un e dade o
desa ío debido a sus hábi a s di ícilmen e accesibles y a su na u aleza esqui a, po lo que las
opo unidades de adqui i in o mación su icien e o de lle a a cabo la oma de mues as son
limi adas (He man e al., 2020). Además, en el caso de los ce áceos, la ausencia de asgos
eno ípicos ex e nos asociados a la edad una ez alcanzado el amaño adul o, las g andes
dimensiones de las poblaciones y los compo amien os mig a o ios di icul an oda ía más la
a ea (Ba e e al., 2024). Es po ello que en la mayo ía de los casos se abaja con
es imaciones de edad ela i a o ca egó ica clasi icando a los animales en g upos de edades
(como neona o, ju enil y adul o), una clasi icación que, aunque simple, apo a in o mación
aliosa en múl iples campos de in es igación y de e minados aspec os de su medicina. Sin
emba go, exis en a ias écnicas pa a es ima la edad c onológica o absolu a de los especímenes
que p opo cionan unidades medibles (no malmen e en años) (He man e al., 2020; Hohn, 2018;
Laws, 1952).
1.1. Mé odos pa a la es imación de la edad absolu a
El mé odo más ex endido pa a la es imación de la edad absolu a de los indi iduos es el con aje
de g upos de capas de c ecimien o (g ow h laye g oups, GLG) que, según Pe in y My ick
(1980), son “"pa ones epe i i os o semi epe i i os de g upos adyacen es de capas de
c ecimien o inc emen al den o de la den ina, cemen o o hueso que se de inen como una unidad
con able. Dicha unidad debe in oluc a como mínimo un cambio: de anspa en e a opaco, de
oscu o a cla o, de c es a a su co o de más a menos eñido". Nume osos es udios han concluido
que la asa de depósi o de es os GLG en los dien es de odon oce os es anual (Hohn e al., 1989;
My ick e al., 1984; Pe in y My ick, 1980).
Los ac o es que gobie nan la o mación de GLG son desconocidos, pe o es p obable que la asa
de depósi o se ea in luenciada po cambios es acionales, nu i i os, la asa de c ecimien o y el
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edad (Ca on y Smi h, 1990), de e minación de pa ones de p opo ciones de isó opos de ca bono
es ables (Lube kin e al., 2008), adiome ía de la bulla impánica pa a de e mina el
desequilib io en e el 210Pb y el 226Ra (Kas elle e al., 2003), medición del peso del c is alino
(Baue e al., 1964) y análisis mo omé icos (Blundell y Pendle on, 2008).
En es e abajo se ha lle ado a cabo la es imación de la edad c onológica en a ias especies de
odon oce os median e el con aje de GLG en den ina compa ando los esul ados ob enidos con
di e en es écnicas: es e eomic oscopía, mic oscopía óp ica, mic oscopía elec ónica de ba ido
y mic o omog a ía compu a izada. Pa a ello se ha con ado con dien es p oceden es de
indi iduos de del ín común de hocico co o (Delphinus delphis), del ín mula (Tu siops
unca us), del ín lis ado (S enella coe uleoalba) y ma sopa común (Phocoena phocoena), las
cua o especies que más a an en las cos as de Galicia (REVARGAL, 2023).
Es os cua o odon oce os pe enecen al O den A iodac yla, In ao den Ce acea, Pa o den
Odon oce i. Las es especies de del ines pe enecen a la Familia Delphinidae, mien as que la
ma sopa común se incluye en la Familia Phocoenidae (Rosel e al., 2023). Dado que las
especies obje o de es e abajo no se encuen an en e las es udiadas habi ualmen e en el G ado
en Ve e ina ia, con iene ealiza una b e e desc ipción mo ológica de cada una de ellas.
1.3. Desc ipción de los odon oce os es udiados
1.3.1. Del ín común de hocico co o (Delphinus delphis)
El del ín común de hocico co o o gol iño común es la especie que a a más ecuen emen e en
oda la cos a de Galicia. Su hábi a se localiza p incipalmen e en e los 100 y 200 m de
p o undidad, no malmen e ue a de las Rías (López, 2003 y 2018).
P esen a el do so de colo neg o o mando un iángulo in e ido a ni el de la ale a do sal, el
cos ado es ama illen o en la pa e an e io y g is en la mi ad pos e io , mien as que la zona
en al es de colo blanco. Mues a un pico p onunciado, ale as pec o ales la gas y a iladas y
una ale a do sal al a y en o ma de medialuna (Figu a 2). En cuan o a la den adu a, p esen a de
40 a 60 dien es cónicos de 2,5-3 mm de diáme o en cada hemia cada (López 2003, 2018; López
e al., 2015).
El amaño de los indi iduos neona os en Galicia es de ap oximadamen e 100 cm. En o no a los
8-9 años los machos alcanzan la edad de madu ez sexual con una longi ud supe io a los 205-
208 cm, mien as que las hemb as madu an sexualmen e a los 5-7 años p esen ando un amaño
supe io a los 188 cm (López, 2003 y 2018). Su espe anza de ida es de 25-30 años (López e
al., 2015).
Es á conside ada como una especie de p eocupación meno po la Lis a Roja de la Unión
In e nacional pa a la Conse ación de la Na u aleza (UICN) (Geno , 2023) y pe enece al
17
Lis ado de Especies Sil es es en Régimen de P o ección Especial (LESRPE) del Ca álogo
Nacional de Especies Amenazadas (Minis e io pa a la T ansición Ecológica y el Re o
Demog á ico [MITECO], 2023).
1.3.2. Del ín mula (Tu siops unca us)
Es una especia ampliamen e dis ibuida po aguas empladas y opicales, an o cos e as como
p o undas (U ia e e al., 2021). En Galicia es más ecuen e en la cos a occiden al en zonas de
menos de 20 m de p o undidad, siendo ambién habi ual en las Rías (López, 2003 y 2018).
Mues an una colo ación g isácea, más oscu a en el á ea del lomo y más cla a en el ien e
(López e al., 2015). Son animales obus os, con el pico co o, las ale as pec o ales la gas y
a iladas y la ale a do sal con o ma de medialuna (López, 2003 y 2018) (Figu a 3). P esen an de
21 a 26 dien es cónicos y pun iagudos de 5-7,5 mm de diáme o en cada hemia cada (López e
al., 2015).
La longi ud de los neona os se encuen a en e los 100-120 cm. Los machos alcanzan la
madu ación sexual sob e los 9-14 años con una longi ud ap oximada de 300 cm, llegando a
alcanza un amaño máximo de 338 cm; en las hemb as la madu ez sexual se alcanza en e los
Figu a 2. Mo ología ex e na del del ín común de hocico co o (Delphinus delphis). Se mues a un ejempla adul o. Fuen e:
cedida po Al edo López
(Tokio Ilus ación).
Figu a 3. Mo ología ex e na del del ín mula (Tu siops unca us). Se mues a un ejempla adul o. Fuen e: cedida po Al edo
López (Tokio Ilus ación).
18
5-13 años con 277 cm de longi ud, pudiendo llega a medi 331 cm. Tienen una espe anza de
ida de 30-40 años (López, 2003; López e al., 2015; U ia e e al., 2021).
Se conside a una especie en p eocupación meno po la Lis a Roja de la UICN (Wells e al.,
2019) y ulne able en el Ca álogo Nacional de Especies Amenazadas (MITECO, 2023).
1.3.4. Del ín lis ado (S enella coe uleoalba)
El del ín lis ado o gol iño iscado es una especie ampliamen e dis ibuida po las aguas
empladas de los océanos Pací ico y A lán ico, pe o poco ecuen e en la cos a gallega (López,
2003; López e al., 2015).
Son animales esbel os, con el pico la go, la ale a do sal iangula y las pec o ales co as. El
do so es de colo azulado y es á a a esado po una anja más cla a en o ma de hoz. La pa e
en al es de colo blanquecino y mues a a ias líneas blancas y neg as po odo el cue po
(Figu a 4). P esen an de 40 a 50 dien es en cada hemia cada, con mo ología cónica y de 2,5
mm de diáme o (López e al., 2015).
Las c ías nacen con 90 cm de longi ud (López e al., 2015). Los machos madu an sexualmen e
en o no a los 9 años con un amaño comp endido en e los 195 y 220 cm (Pe in y Reilly, 1984,
como se ci ó en López, 2003). La madu ación sexual en las hemb as ocu e en e los 3 y los 10
años, al alcanza una longi ud o al media de 200 cm. La longe idad es imada de es a especie es
de 30 años (López, 2003; López e al., 2015).
Pe enece al Lis ado de Especies Sil es es en Régimen de P o ección Especial (LESRPE) del
Ca álogo Nacional de Especies Amenazada (MITECO, 2023) y es conside ada como una
especie de p eocupación meno po la Lis a Roja de la UICN (B aulik, 2019).
1.3.5. Ma sopa común (Phocoena phocoena)
La ma sopa común se dis ibuye po odo el hemis e io no e. En la cos a gallega se denomina
oniña y es poco ecuen e, siendo más abundan e en el á ea su occiden al (López, 2003; López
e al., 2015).
Figu a 4. Mo ología ex e na del del ín lis ado (S enella coe uleoalba). Se mues a un ejempla adul o. Fuen e: cedida po
Al edo López (Tokio Ilus ación).
19
P esen a una colo ación neg a en el do so y blanca en almen e, con la ale a do sal iangula y
las ale as pec o ales neg as y con el ex emo edondeado. Su cue po es obus o y ca ece de pico
(Figu a 5). Tiene de 40 a 60 dien es po hemia cada, de 3 mm de diáme o y mo ología
espa ulada (López e al., 2015).
Al nacimien o, las c ías p esen an un amaño de 80 cm. Los machos alcanzan la madu ación
sexual al ededo de los 5 años con 155 cm de longi ud, mien as que en las hemb as sucede a los
3 años con 166 cm, supe ando el amaño de los machos pudiendo llega a medi 202 cm. Se
es ima que pueden i i más de 25 años (López, 2003; López e al., 2015).
Como especie global, la Lis a Roja de la UICN la ca aloga en el g upo de especies conside adas
de p eocupación meno (B aulik e al., 2020). Sin emba go, la población que asien a en aguas
de Galicia ya ue decla ada en 2007 como “ ulne able” (Dec e o 88/2007), cali icación que
alcanzó en 2011 en el es o del es ado español (Real Dec e o 139/2011), pasando a se
ecali icada como “en pelig o de ex inción” en 2020 (O den TED/1126/2020, de 20 de
no iemb e).
Figu a 5.
Mo ología ex e na de la ma sopa común (Phocoena phocoena). Se mues a un ejempla adul o y una c ía. Fuen e:
cedida po Al edo López (Tokio Ilus ación).
20
2. OBJETIVOS
Con la ealización de es e abajo se p e enden alcanza dos obje i os:
1. Pone a pun o en la Facul ad de Ve e ina ia de la USC una écnica económica, ápida y
sencilla pa a la es imación de la edad en odon oce os median e el con aje de g upos de
capas de c ecimien o (GLG) en secciones de dien es lijadas y pulidas u ilizando un
mic oscopio óp ico y un es e eomic oscopio.
2. Comp oba la alidez de la écnica compa ando los esul ados con los que se ob engan
en las mismas mues as descalci icadas empleando mic oscopía óp ica, mic oscopía
elec ónica de ba ido y mic o omog a ía compu a izada.
21
3. MATERIAL Y MÉTODOS
Pa a lle a a cabo la es imación de la edad c onológica en odon oce os median e el con aje de
GLG en den ina, se han u ilizado dien es p oceden es de cua o especies de ce áceos: del ín
común de hocico co o (Delphinus delphis), ma sopa común (Phocoena phocoena), del ín
lis ado (S enella coe uleoalba) y del ín mula (Tu siops unca us). A pa i de es os dien es se
ob u ie on secciones longi udinales que se analiza on empleando es e eomic oscopía,
mic oscopía óp ica, mic oscopía elec ónica de ba ido (MEB) y mic o omog a ía
compu a izada (mic o-TC).
3.1. Toma de mues as
Las mues as u ilizadas en la elabo ación de es e abajo ue on acili adas po la Coo dinado a
pa a o Es udo dos Mamí e os Ma iños (CEMMA), ONG que desde 1999 es la esponsable de la
Red de Va amien os de Galicia con la colabo ación económica de la Xun a de Galicia
(Conselle ía de Medio Ambien e, Te i o io e Vi enda).
En o al se emplea on dien es p oceden es de 34 animales a ados en e los años 2009-2024 en
dis in os pun os de la cos a gallega: 7 ejempla es de del ín común de hocico co o (DDE), 7
ejempla es de ma sopa común (PPH), 9 ejempla es de del ín lis ado (SCO) y 11 ejempla es de
del ín mula (TTR).
La Figu a 6 mues a la mo ología ex e na de los dien es de los odon oce os es udiados. Los
dien es de los del ínidos son a ilados, cónicos, cónca os en la ca a lingual y con exos en la
es ibula ; los dien es de ma sopa común p esen an una co ona espa ulada, con bo de a ilado,
aplanada en el plano es íbulo-lingual y es án más cu ados en la aíz, siendo cónca a la ca a
lingual y con exa la es ibula .
La Tabla 1 ecoge los da os ace ca de especie, sexo, longi ud o al (LT) en cm, echa y luga de
a amien o de odos los indi iduos cuyos dien es ue on analizados. La mayo ía de los dien es
es aban almacenados en alcohol de 70º o en o mol amponado al 10%, solamen e los
p oceden es del ejempla de DDE “sin da os1”, de la hemb a de PPH de 187 cm y de la hemb a
de TTR de 159 cm se ob u ie on ya secos a pa i de p epa aciones museís icas.
La ex acción de los dien es de la hemb a de del ín mula de 256 cm se ealizó en la Sala de
Disección del Pabellón III de la Facul ad de Ve e ina ia de la USC a pa i de su cabeza,
conse ada en congelación desde la echa de a amien o y descongelada du an e dos días en
e ige ación. Se emplea on pinzas, bis u í y cuchillos de hoja co a pa a e i a cinco piezas
den ales de la po ción media de la hemia cada mandibula izquie da. Es e ejempla p esen aba
una mal o mación a ni el de la columna e eb al (ci oescoliosis), po lo que su LT es á
subes imada.
22
Tabla 1. Da os de especie, sexo, longi ud, echa y luga de a amien o y medio de conse ación de los dien es u ilizados en es e
abajo.
ESPECIE
SEXO LT (cm) FECHA LUGAR MEDIO DE
CONSERVACIÓN
DDE
Hemb a
97,5
Sin da os
Sin da os
Alcohol
DDE
Macho
151*
23/11/2017
Sanxenxo
Fo mol
DDE
Macho
156
01/02/2017
Sanxenxo
Alcohol
DDE
Macho
187
23/11/2017
Po o do Son
Fo mol
DDE
Macho
214
20/01/2017
Ca ballo
Alcohol
DDE
Sin da os
1
Sin
da os
1
Sin da os
1
Sin da os
1
En seco
DDE
Sin da os
2
Sin da os
2
Sin da os
2
Sin da os
2
Alcohol
PPH
Macho
95
15/12/2022
Vigo
Alcohol
PPH
Macho
118,5
24/07/2017
Ca no a
Alcohol
PPH
Macho
139
28/02/2014
Fe ol
Alcohol
PPH
Macho
143,5
17/04/2021
Ba ei os
Alcohol
PPH
Macho
167
11/09/2017
O G o e
Alcohol
PPH
Macho
172
27/08/2021
San
Cip ián
Alcohol
PPH
Hemb a
187
03/03/2024
A eixo
En seco
SCO
Hemb a
110
21/08/2023
Foz
Alcohol
SCO
Macho
112
19/07/2014
Sin da os
Alcohol
SCO
Hemb a
152
29/03/2024
Foz
Alcohol
SCO
Hemb a
158
29/04/2024
Foz
Alcohol
Figu a 6. Dien es de los odon oce os es udiados. A, Dien es de DDE, mo ológicamen e indi e enciables de los de SCO; B
, Dien es
de un indi iduo neona o de PPH; C, Dien es de TTR; D
, Cabeza del ejempla de TTR hemb a de 256 cm donde se ap ecia la
disposición y mo ología de los dien es en la ca idad o al. La unidad de medida es 1 cm.
23
SCO
Hemb a
160
29/06/2017
Fe ol
Alcohol
SCO
Hemb a
169
Sin da os
Sin da os
Alcohol
SCO
Macho
202
20/06/2020
San
Cip ián
Alcohol
SCO
Macho
215
02/06/2021
O Vicedo
Alcohol
SCO
Macho
216
05/08/2017
Foz
Alcohol
TTR
Hemb a
159
2021
Pon edeume
En seco
TTR
Macho
162
06/07/2017
Cangas
Alcohol
TTR
Hemb a
236
23/01/2024
Mu os
Alcohol
TTR**
Hemb a
256
16/02/2022
Po o do Son
Alcohol
TTR
Hemb a
270
06/11/2016
A eixo
Alcohol
TTR
Macho
271
23/11/2016
Ribei a
Alcohol
TTR
Macho
274
15/12/2017
Mu os
Alcohol
TTR
Hemb a
280
01/05/2009
A eixo
Alcohol
TTR
Macho
284
15/06/2023
Ribei a
Alcohol
TTR
Hemb a
304
10/12/2016
Ca no a
Alcohol
TTR
Hemb a
318
31/08/2023
Po o do Son
Alcohol
DDE, del ín común; LT, longi ud o al; PPH, ma sopa común; SCO, del ín lis ado; TTR, del ín mula . * Indi iduo con el pedúnculo
caudal co ado. ** Indi iduo con una mal o mación a ni el de la columna e eb al.
An es del p ocesamien o de los dien es, se e i a on con un bis u í los es os de encía y de
ligamen o pe iodon al adhe idos a la aíz y se deja on seca al ai e.
3.2. Lijado y pulido
Se p epa ó como mínimo una sección de un dien e de cada animal pa a ealiza el con aje de
GLG con un es e eomic oscopio binocula Olympus SZX16 acoplado a una cáma a digi al
Olympus EP50 y un o omic oscopio óp ico Olympus DP74. En los indi iduos de los que se
disponía de más de una pieza den al, se p epa a on has a 3 secciones.
Todos los dien es se lija on con una amolado a (MD 125/150 CG) a 2950 .p.m. en el plano
es íbulo-lingual, has a que la ca idad pulpa quedó expues a po ambos lados de la mues a,
ob eniendo una sección de en e 1-2,5 mm de g oso . Un dien e del indi iduo de PPH hemb a
de 187 cm ambién se lijó en el plano mesio-dis al has a la línea media y un dien e del ejempla
de DDE “sin da os1” en el plano ans e sal.
Las secciones se con inua on lijando con los discos de una mul ihe amien a Dex e Powe DM-
130b-1 o Pa kside PFBS 12 B2 o con papel de lija de g ano 120 o 180, has a que se ap ecia on
los GLG en el mic oscopio óp ico. Todas las mues as se pulie on con los discos de pulido de la
mul ihe amien a Pa kside PFBS 12 B2.
Finalmen e se ob u ie on secciones de en e 0,2-1 mm de g oso de los dien es de DDE, PPH y
SCO y secciones de 0,4-2,3 mm de los dien es de TTR.
El con aje de los GLG en den ina de cada una de las secciones ue lle ado a cabo po dos
lec o as empleando el es e eomic oscopio y el o omic oscopio óp ico con los obje i os 4x y
10x.
24
3.3. Descalci icación
T as se obse adas al es e eomic oscopio y al o omic oscopio óp ico, odas las secciones
p e iamen e lijadas y pulidas se descalci ica on in oduciéndolas en ácido ó mico al 5%
du an e 2 ho as pa a las mues as de DDE, PPH y SCO y du an e 3 ho as en el caso de los
dien es de TTR. Pasado es e iempo se ex aje on, se la a on con agua des ilada dos eces
du an e 5 minu os y se deja on seca al ai e.
Las mismas dos lec o as ealiza on de nue o el con aje de GLG en den ina empleando el
o omic oscopio óp ico Olympus DP74 con el obje i o 4x.
3.4. Mic oscopía elec ónica de ba ido (MEB)
Todas las secciones de dien es p e iamen e lijadas y descalci icadas con ácido ó mico al 5% se
p epa a on pa a el MEB, excep uando los dien es de los ejempla es de DDE hemb a de 97,5 cm,
PPH macho de 95 cm, TTR hemb a de 159 cm y TTR macho de 162 cm, que no ue on
analizados con es a écnica.
Cada una de las secciones se colocó en un po amues as debidamen e iden i icado adhi iéndola
con una cin a de ca bono de doble ca a. Las mues as se in oduje on en un me alizado (BAL-
TEC SCD 005 Cool Spu e Coa e ) pa a cub i las con una capa de o o y se obse a on con el
mic oscopio elec ónico de ba ido (JEOL JSM-6360LV).
Las mic og a ías ue on omadas con una dis ancia de abajo de 44-49 mm a 20 kV, con una
magni icación desde 8x (pa a secciones más g andes) has a 75x (pa a los de alles) y ue on
in e p e adas po una obse ado a.
3.5. Mic o omog a ía compu a izada (mic o-TC)
Los dien es de es ejempla es de del ín mula (TTR hemb a de 236 cm, TTR hemb a de 280 cm
y TTR hemb a de 318 cm) ue on escaneados con un mic o-TC SkyScan 1172 (B uke ,
Bélgica).
Se ob u o una sección de 1,5 mm de cada uno de los dien es con una sie a de diaman e (Exak
300). El co e se ealizó longi udinalmen e a ni el de la línea media en el plano es íbulo-
lingual, ijando p e iamen e el dien e a un po aobje os con una esina a base de me ac ila o
(Techno i 4000).
Una ez ob enidas las secciones, se descalci ica on sume giéndolas en ácido ó mico al 5%
du an e 2 ho as. A con inuación se ex aje on, se in oduje on en ace ona du an e 30 minu os y
inalmen e se la a on con agua des ilada.
Cada sección se colocó di ec amen e sob e el po amues as y se ealizó la cap u a con un
ol aje de 55 kV, una po encia de 10 W y una in ensidad de 181 µA. Se colocó un il o de
25
aluminio de 0,5 mm de espeso en la ayec o ia del haz. La mues a ue escaneada en 180º con
0,2º de paso de o ación y la esolución se es ableció en un amaño de píxel de 2,5 µm. Con
es os pa áme os cada escaneo u o una du ación p omedio de 5 ho as y 40 minu os.
La econs ucción de las mic o omog a ías se ealizó u ilizando el so wa e N Recon (B uke )
basándose en el algo i mo de Feldkamp e al. (1984). Pa a el análisis de las imágenes se
emplea on los p og amas Da aViewe , que pe mi ió la obse ación de la sección en dos
dimensiones y en una escala de g ises; y CT ox, que o eció una imagen idimensional del
dien e con di e en es pa ones de colo es.
32
acceso ias, conduciendo a ecuen os más ele ados, como en el caso de la hemb a TTR de 280
cm; o bien a una subes imación de la edad en secciones demasiado delgadas (de menos de 0,3
mm de g oso ) que su ie on una descalci icación excesi a, lo que p o ocó de o maciones de
las mues as y la pé dida de de inición de los GLG, impidiendo el con aje en el caso del
ejempla DDE macho de -151 cm y en un dien e del indi iduo DDE macho de 214 cm.
Solamen e en la sección ans e sal del dien e del indi iduo DDE “sin da os1” la
descalci icación acili ó la isualización de los p ime os GLG.
En los dien es de TTR el p oceso de descalci icación sí mejo ó la de inición de los GLG,
especialmen e en los ejempla es TTR macho de 284 cm, pe mi iendo en es e caso ealiza la
es imación de la edad, y TTR hemb a de 304 cm, en el que aun así no se pudo comple a el
ecuen o.
4.8. Con aje de GLG en el mic oscopio elec ónico de ba ido
En el MEB la línea neona al se iden i icó como una c es a a con inuación de la den ina p ena al
y en cada GLG se di e encia on una c es a y un su co adyacen e (Figu a 14).
Figu a 14. Con aje de GLG con el MEB. A, Dien e de DDE “sin da os
1
” (20x), se cuen an 7 GLG; B
, Dien e de TTR hemb a de
280 cm (8x), se cuen an 7 GLG; C, Dien e de SCO macho de 152 cm (19x), se cuen an 8 GLG; C, cemen o; CP, ca idad pulpa ; D
1
,
den ina p ena al; E, esmal e; LNN, línea neona al; PD, pulpa den al.
33
El con aje de los GLG en secciones de dien es de DDE, SCO y TTR ue más sencillo con es a
écnica que con los mé odos an e io es, ya que acili ó su iden i icación y pe mi ió
di e encia los de las capas acceso ias. Sin emba go, en los dien es de PPH el MEB empeo ó la
de inición de los GLG, po lo que no se ob u ie on buenos esul ados, especialmen e en los
indi iduos de mayo longi ud o al.
En los dien es pe enecien es a los ejempla es de mayo amaño y con la ca idad pulpa ce ada
se obse ó una pé dida de de inición de los úl imos GLG deposi ados, po lo que no se pudo
comple a el con aje y solamen e se es imó una edad mínima.
La Tabla 2 ecoge el con aje de GLG y, po an o, la edad en años es imada pa a cada indi iduo
empleando las es écnicas an e io es.
Tabla 2. Con aje de GLG/ edad en años es imada pa a cada uno de los indi iduos empleando secciones de dien es sin
descalci ica obse adas con el es e eomic oscopio y el mic oscopio óp ico, y secciones descalci icadas is as con el mic oscopio
óp ico y el mic oscopio elec ónico de ba ido.
ESPECIE SEXO LT
(cm)
NÚMERO DE GLG/ EDAD ESTIMADA EN AÑOS
Secciones sin descalci ica Secciones descalci icadas
Mic oscopio
óp ico Es e eomic oscopio Mic oscopio
óp ico MEB
DDE
Hemb a
97,5
0
0
0
-
DDE**
Macho
-
151
1
1
No alo able
0
DDE
Macho
156
3
3
3
3
DDE*
Macho
187
+7
No alo able
+7
+10
DDE*
Macho
214
7
6
6
7
DDE
SD
1
SD
1
7
7
7
7
DDE
SD
2
SD
2
2
2
No alo able
2
PPH
Macho
95
0
0
0
-
PPH
Macho
118,5
2
2
1
1
PPH
Macho
139
+8
+7
+7
2
PPH*
Macho
143,5
+10
+10
+10
+9
PPH*
Macho
167
No alo able
No alo able
No alo able
No alo able
PPH
Macho
172
6
6
6
4
PPH*
Hemb a
187
+15
No alo able
+12
+7
SCO
Hemb a
110
0
0
0
-
SCO
Macho
112
0
0
0
-
SCO
Hemb a
152
2
2
2
2
SCO
Hemb a
158
2
2
2
2
SCO
Hemb a
160
3
2
2
3
SCO
Hemb a
169
2
2
2
1
SCO
Macho
202
8
8
8
No alo able
SCO*
Macho
215
+10
+10
+10
+10
SCO*
Macho
216
+20
+11
+20
+20
TTR
Hemb a
159
0
0
0
-
TTR
Macho
162
0
0
0
-
TTR
Hemb a
236
2
2
2
1
TTR*
**
Hemb a
256
+16
No alo able
+15
+15
TTR
Hemb a
270
6
6
8
7
TTR
Macho
271
4
3
+6
5
TTR
Macho
274
8
7
8
+7
TTR
Hemb a
280
7
7
10
7
TTR
Macho
284
No alo able
No alo able
7
6
34
Las di e encias en el con aje de GLG en e las dis in as écnicas ue on más signi ica i as en los
animales de mayo amaño con la ca idad pulpa ce ada, mien as que en los ejempla es de
meno longi ud las es imaciones de la edad se ap oxima on más en e sí. Pa a un mismo
indi iduo, los esul ados ob enidos en el ecuen o de GLG ue on simila es en los cua o
mé odos. El MEB ue la écnica que o eció unos esul ados más a iables con espec o al es o.
4.9. Con aje de GLG con mic o omog a ía compu a izada
Las imágenes bidimensionales ob enidas con el p og ama Da aViewe mos a on la línea
neona al como una capa hipomine alizada y cada GLG como un conjun o de dos capas de
di e en e mine alización en una escala de g ises (Figu a 15). Las imágenes idimensionales
isualizadas con el p og ama CT ox pe mi ie on iden i ica las es uc u as den ales empleando
di e en es pa ones de colo es (Figu a 16).
A pesa de que con es a écnica se pudo di e encia el pa ón de GLG en odas las secciones,
solamen e se comple ó el con aje en el indi iduo TTR hemb a de 236 cm, ob eniendo un
esul ado de 1 GLG (Figu as 15 y 16). En los ejempla es TTR hemb a de 280 cm y de 318 cm
no se consiguie on iden i ica odas las capas de c ecimien o ya que, al a a se de indi iduos de
más edad y, po an o, con la ca idad pulpa más ce ada, los pa áme os seleccionados pa a
escanea la mues a no pe mi ie on ob ene una imagen que incluyese un á ea su icien e de la
co ona y la ca idad pulpa pa a ealiza el con aje comple o de GLG. Además, al igual que en
écnicas an e io es, a medida que a anzaba el cie e de la ca idad pulpa , los GLG se
ap oximaban y pe dían de inición.
TTR*
Hemb a
304
No alo able
No alo able
No alo able
No alo able
TTR*
Hemb a
318
+8
No alo able
+8
+20
DDE, del ín común; LT, longi ud o al; PPH, ma sopa común; SCO, del ín lis ado; SD, sin da os; TTR, del ín mula . * Indi iduos
con la ca idad pulpa muy ce ada di icul ando el con aje; ** indi iduo con el pedúnculo caudal co ado; *** indi iduo con
ci oescoliosis y con la ca idad pulpa muy ce ada.
Figu a 15. Con aje de GLG en secciones de dien es escaneadas con el mic o-TC y isualizadas con el p og ama Da aViewe . A,
Co e en 2D de un dien e del ejempla TTR hemb a de 236 cm, se cuen a 1 GLG; B, Co e en 2D
de un dien e del ejempla TTR
hemb a de 318 cm, cada lecha señala un GLG, pe o no se puede comple a el con aje. CP, ca idad pulpa ; D1, den ina p ena al;
E,
esmal e; LNN, línea neona al.
35
Figu a 16. Con aje de GLG en secciones de dien es escaneadas con el mic o-TC y isualizadas con el p og ama CT ox. A, Co e en
2D de un dien e del ejempla TTR hemb a de 236 cm, se cuen a 1 GLG; B, Co e en 2D
de un dien e del ejempla TTR hemb a de
318 cm, cada lecha señala un GLG, pe o no se puede comple a el con aje. CP, ca idad pulpa ; D1, den ina p ena al;
E, esmal e;
LNN, línea neona al.
A
B
36
5. DISCUSIÓN
La elabo ación de es e TFG ha pe mi ido implemen a en la Facul ad de Ve e ina ia de la USC
la écnica de es imación de la edad en odon oce os median e el con aje de g upos de capas de
c ecimien o (GLG) en secciones de dien es lijadas y pulidas, u ilizando es e eomic oscopía y
mic oscopía óp ica. Pa a ello se ha seguido el mé odo desc i o po Hen iksen e al. (2024) pa a
la ma sopa común, un mé odo que o ece una al e na i a económica, ápida y sencilla a o as
écnicas como el ecuen o de GLG en secciones de dien es incluidos en pa a ina (Luque e al.,
2009), pues a a pun o en la Facul ad de Ve e ina ia de la USC po Ál a ez (2018). Además, se
con i mó su alidez compa ando los esul ados con los ob enidos en las mismas secciones
descalci icadas empleando mic oscopía óp ica, mic oscopía elec ónica de ba ido (MEB)
(siguiendo el modelo de Hohn, 1980b), y mic o omog a ía compu a izada (mic o-TC) (según el
mé odo desc i o po Baie -S egmaie e al., 2023).
Pa a lle a a cabo las écnicas an e io es se con ó con dien es p oceden es de 34 indi iduos de
las cua o especies de odon oce os que más a an en la cos a gallega (REVARGAL, 2023):
del ín común de hocico co o (Delphinus delphis) (DDE), ma sopa común (Phocoena
phocoena) (PPH), del ín lis ado (S enella coe uleoalba) (SCO) y del ín mula (Tu siops
unca us) (TTR).
El mé odo que o eció mejo es esul ados, an o pa a la iden i icación de las es uc u as den ales
como pa a lle a a cabo el con aje de GLG en los dien es de DDE, SCO y TTR, ue la MEB.
Es a écnica pe mi ió dis ingui con cla idad las capas acceso ias, que son el esul ado de
al e aciones en el pa ón de depósi o de los GLG debidas a ac o es ex ínsecos, como cambios
ambien ales, o in ínsecos, como modi icaciones en el o ganismo del animal que a ec an al
c ecimien o de los dien es (Hohn, 1980b). La MEB no ue igual de e icaz en los dien es de PPH,
posiblemen e debido a que en es a especie los dien es p esen an muchas anomalías mo ológicas
que di icul an la lec u a de los GLG, p obablemen e de i adas de si uaciones de es és asociadas
a a iaciones ambien ales, al cambio climá ico o a de e minados e en os a lo la go de su his o ia
i al (Read e al., 2010).
Hohn (1980b) y P ibanic (2000) u iliza on la MEB pa a la es imación de la edad en dien es de
TTR. A pesa de que o os au o es han usado la MEB pa a el es udio de la es uc u a de los
dien es en di e en es especies de ce áceos ósiles (Loch e al., 2015; Viglino e al., 2023), el
nues o es el p ime abajo en el que se emplea la MEB pa a es ima la edad en dien es de
DDE, PPH o SCO. En cuan o a la me odología, Hohn (1980b) y P ibanic (2000) u iliza on
secciones de 1-2,5 mm de g oso , co adas con una sie a de diaman e y descalci icadas; en
nues o abajo se emplea on secciones más delgadas, ob enidas median e el lijado de los dien es
con una amolado a y una mul ihe amien a (los g oso es ue on de 0,2-1 mm pa a los dien es de
37
DDE, PPH y SCO y de 0,8-2,3 mm pa a los dien es de TTR), consiguiendo igualmen e buenos
esul ados.
El mé odo de con aje de GLG median e mic oscopía óp ica a pa i de secciones no a adas y
secciones descalci icadas es menos labo ioso que la MEB, aunque pa a algunos au o es menos
iable pa a lle a a cabo el ecuen o de los GLG con p ecisión (Hohn, 1980b). Lockye e al.
(2010) y My ick e al. (1980) ecomiendan u iliza secciones descalci icadas, ob enidas con
c ios a o y eñidas pa a lle a a cabo el con aje de GLG, pues a i man que el mayo cos e y
iempo necesa ios pa a la p epa ación de dichas secciones se compensan con una mejo
esolución de los GLG y de o as es uc u as den ales. Es os au o es conside an que usa solo
secciones descalci icadas, sin eñi , es un buen mé odo en dien es de g an amaño, como los de
TTR, y como úl ima p e e encia es a ían las secciones sin a a , en cuyo caso ecomiendan
ealiza el con aje con mic oscopios de al a calidad y luz pola izada. Pa a Hen iksen e al.
(2024), sin emba go, la écnica más sencilla pa a p epa a los dien es es igualmen e álida.
Es os au o es compa a on los con ajes de GLG ob enidos obse ando al mic oscopio óp ico
secciones lijadas y pulidas y secciones descalci icadas de dien es de PPH, concluyendo que la
es imación de la edad en secciones de dien es no a adas e a una al e na i a iable a la
descalci icación, además de se más simple, más ápida y necesi a de menos ma e ial.
En nues o abajo la mic oscopía óp ica en secciones no a adas pe mi ió la es imación de la
edad en odas las especies, esul ando más sencilla la iden i icación de los GLG que con
es e eomic oscopía. El p oceso de descalci icación ampoco supuso ninguna en aja en cuan o a
la esolución y acilidad de con aje de los GLG, ob eniéndose esul ados simila es en las dos
écnicas pa a los dien es de PPH, SCO y DDE. La descalci icación sí acili ó la esolución de
los GLG en los dien es de TTR, p obablemen e debido a su mayo amaño (My ick e al., 1980).
Pa a la descalci icación de los dien es se siguió el mé odo desc i o po Hohn (1980b),
sume giendo las secciones en ácido ó mico al 5% du an e 3 h en el caso del TTR y du an e 2 h
pa a los dien es de DDE, PPH y SCO, la ándolos después con agua des ilada. Como el iempo
necesa io pa a la descalci icación depende del amaño y la densidad de cada dien e (Lockye e
al., 2010), se edujo la du ación del p oceso de descalci icación pa a los dien es de DDE, PPH y
SCO, ya que su amaño es meno que el de los dien es de TTR.
Po o o lado, el escaneo de los dien es de TTR median e mic o-TC pe mi ió di e encia las
dis in as es uc u as den ales e iden i ica algunos GLG como capas al e nas de ejidos hipo- e
hipe mine alizados en la den ina pos na al (Hohn, 1980b). Sin emba go, como los pa áme os
seleccionados no pe mi ie on escanea el dien e comple o, la es imación de la edad solamen e
pudo ealiza se en el ejempla TTR hemb a de 236 cm, pues al a a se del indi iduo más jo en
y, po an o, con la ca idad pulpa más g ande, se pudo comple a el con aje de GLG. En los
ejempla es TTR hemb a de 280 y 318 cm, a pesa de que la écnica esal ó algunos GLG, no se
38
pudo de e mina la edad ya que la imagen ob enida no pe mi ió isualiza oda la den ina
pos na al. Pa a ealiza el escaneo se emplea on secciones de dien es de 1,5 mm ob enidas con
una sie a de diaman e y descalci icadas. La p incipal en aja del mic o-TC es que se a a de
una écnica no in asi a pa a la de e minación de la edad que no necesi a de la p epa ación de
las secciones, po lo que es muy ú il en piezas de museo que necesi an se p ese adas (Als up
e al., 2017; Baie -S egmaie e al., 2023; Loch e al., 2013). Po an o, en u u os abajos
pod ían escanea se dien es en e os, educiendo el iempo del p oceso al p escindi del co e y
descalci icación de las secciones.
Los p ime os au o es en emplea el mic o-TC pa a la es imación de la edad en odon oce os
(Als up e al., 2017; Loch e al., 2013) acasa on en isualiza los GLG en la den ina, pe o sí
apo a on in o mación ace ca de la ana omía del dien e. Baie -S egmaie e al. (2023)
publica on el p ime es udio exi oso pa a la de e minación de la edad en ca ní o os y
odon oce os median e el escaneo de los dien es con un mic o-TC, ob eniendo esul ados
compa ables con los mé odos adicionales. Las di e encias con nues o abajo pod ían debe se
a que el mic o-TC empleado en su es udio pe mi ió u iliza una po encia de 15 W, mien as que
el equipo que noso os empleamos abaja con una po encia máxima de 10 W.
El con aje de GLG u ilizando es e eomic oscopía, mic oscopía óp ica, MEB y mic o-TC esul ó
más sencillo en indi iduos jó enes con la ca idad pulpa de g an amaño. A medida que la
ca idad pulpa se ce aba, la pé dida de de inición y ap oximación de los úl imos GLG
deposi ados di icul ó el p oceso. Es o ocu ió en los ejempla es PPH macho de 139 y 143,5 cm,
PPH hemb a de 187 cm, SCO macho de 215 y 216 cm y TTR hemb a de 318 cm, en los que no
se pudo comple a el con aje de GLG y solo se es imó una edad mínima. O os abajos
coinciden en que la es imación de la edad median e el con aje de GLG es más sencilla en
indi iduos jó enes. En animales iejos el cie e de la ca idad pulpa di icul a el p oceso, ya que
los GLG se uel en más inos y di íciles de lee (Gallo-Reynoso e al., 2014; Hen iksen e al.,
2024).
Además de la mo ología de los dien es, la p esencia de pied as pulpa es ambién condiciona la
iden i icación de GLG. Las pied as pulpa es son cen os secunda ios de depósi o de den ina que
se o man en una egión de la ca idad pulpa y en ocasiones pueden causa comp esiones de los
GLG que conducen a e o es en el ecuen o (Hohn e al., 1989; Mead e al., 1980). En las
secciones de los dien es de TTR hemb a de 280 cm y TTR hemb a de 318 cm isualizadas al
mic oscopio óp ico y al es e eomic oscopio se encon a on pied as pulpa es; es e hallazgo
di icul ó el con aje en el caso del ejempla TTR hemb a de 318 cm, pe o no en el indi iduo TTR
hemb a de 280 cm.
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Un esul ado llama i o de nues o es udio ue encon a a iaciones en el con aje de GLG en e
di e en es dien es de un mismo indi iduo y en e las dos ca as de una misma sección, an o
empleando una misma écnica como en e écnicas dis in as. Po ejemplo, pa a el ejempla
hemb a de TTR de 236 cm se es ima on dos años con es e eomic oscopía y mic oscopía óp ica,
mien as que con MEB y mic o-TC solamen e se con ó un GLG. Es as a iaciones indi iduales
en la es imación de la edad pod ían se debidas a al e aciones en el depósi o de los GLG, cuyas
causas son oda ía desconocidas, pe o es p obable que se ea in luenciado po cambios
es acionales, nu i i os, la asa de c ecimien o y el es ado gene al de salud de cada animal
(Ba a clough e al., 2023; Hohn, 1989). Además de su posible elación con p ocesos
isiológicos, las luc uaciones en el con aje pa a un mismo indi iduo ambién pueden se el
esul ado de e o es de los lec o es po una iden i icación de icien e de los GLG. Es os e o es
son p incipalmen e causados po una p epa ación inadecuada de las secciones, lo que esul a en
una exposición incomple a de la ca idad pulpa , un exceso de lijado, una descalci icación
insu icien e o excesi a y la o u a de los dien es du an e su p epa ación (Hen iksen e al., 2024;
Hohn, 1989, 2018).
En es e abajo, las secciones que ue on lijadas en exceso y alcanza on un g oso in e io a los
0,4 mm o ecie on peo es esul ados al se isualizadas con el es e eomic oscopio y el
mic oscopio óp ico; las que supe a on los 2 mm de g oso , como en el caso de TTR macho de
284 cm y TTR hemb a de 304 cm, ampoco mos a on una buena esolución de los GLG y no
pe mi ie on ealiza el con aje. En cuan o a la descalci icación, como la du ación del p oceso
ue independien e del g oso de la sección, aquellas secciones con un g oso in e io a 0,3 mm
(como los dien es de los ejempla es de DDE macho de -151 cm y de 214 cm) su ie on una
descalci icación excesi a, pe diéndose la de inición de los GLG al mic oscopio óp ico. En el
caso de la sección del dien e de TTR hemb a de 304 cm, el iempo de descalci icación no ue
su icien e ya que as el p oceso no mejo ó la esolución de los GLG. Po an o, es impo an e
abaja con secciones de igual g oso pa a pode es anda iza la du ación de la descalci icación.
Po o o lado, los dien es desgas ados o con mo ologías ano males, como en el caso del
indi iduo PPH macho de 167 cm, impiden una co ec a p epa ación de la sección ya que
di icul an ealiza el lijado has a la línea media, po lo que la ca idad pulpa no queda
comple amen e expues a y no se puede lle a a cabo el con aje de GLG. Po odo lo desc i o
an e io men e, es undamen al dispone de 3-5 piezas den ales de un mismo ejempla pa a pode
p epa a a ias secciones po si en alguna de ellas los GLG no son alo ables (Hen iksen e al.,
2024; Hohn, 1989).
La longi ud o al de los animales ambién se puede u iliza pa a es ima la edad de los
indi iduos. Los ce áceos c ecen ápidamen e as el nacimien o y después su en una
disminución g adual de la asa de c ecimien o has a alcanza el amaño asin ó ico adul o
40
(He man e al., 2020; Read e al., 1993). Po lo an o, eniendo ambién en cuen a los amaños
al nacimien o y las longi udes máximas pa a cada especie (López e al., 2015), en un p incipio
supusimos que los indi iduos de meno amaño se ían los más jó enes y, po ende, aquellos con
un meno núme o de GLG, mien as que los indi iduos con una longi ud o al mayo debe ían
se los más iejos y p esen a un con aje de GLG más ele ado. Sin emba go, es a p edicción
solamen e se cumplió en el caso de los animales de meno longi ud o al. A medida que los
indi iduos se ap oximaban a la longi ud adul a, los esul ados ue on más a iables,
encon ando den o de una misma especie animales de g an amaño con menos GLG que o os
de meno longi ud. Po ejemplo, en el indi iduo de PPH macho de 143,5 cm se es imó una edad
mínima de 9 años, mien as que en el ejempla macho de 172 cm de la misma especie solamen e
se iden i ica on 4 GLG con el MEB. Es as incohe encias se deben a que la asa de c ecimien o
y, po an o, la longi ud de los indi iduos se en in luenciadas po di e sos ac o es como la
nu ición, el hábi a , el es ado de salud gene al, el sexo o la es ación, de o ma que pa a una
misma edad se obse an amplios angos de longi ud, incluso en indi iduos jó enes. Además, el
amaño es menos in o ma i o cuando los del ines se ap oximan a la longi ud asin ó ica, es deci ,
cuando la asa de c ecimien o se ap oxima a 0. Po an o, la longi ud no se conside a un índice
p eciso pa a la es imación de la edad en odon oce os (McFee e al., 2012; Read e al., 1993;
Schwa z, 2009, ci ado po He man e al., 2020).
Pa a comple a la alidación de los esul ados ob enidos en es e abajo, además de la
compa ación en e las dis in as écnicas, se ía in e esan e pode con a con indi iduos de
his o ia o edad conocida como en o os es udios (Baie -S egmaie e al., 2023; Hen iksen e al.,
2024), pe o ese ipo de mues as son muy di íciles o imposibles de consegui en indi iduos
sal ajes. Además, se ha u ilizado una mues a pequeña y dis ibuida de mane a desigual en e
las di e en es ca ego ías de edad y sexo, po lo que en el u u o debe ían inclui se en el es udio
dien es de más indi iduos que cub iesen odos los g upos de edad.
41
6. CONCLUSIONES
Con es e TFG se ha pues o a pun o en la Facul ad de Ve e ina ia de la USC una écnica
económica, ápida y sencilla pa a la es imación de la edad en odon oce os median e el con aje
de g upos de capas de c ecimien o (GLG) en secciones de dien es lijadas y pulidas, u ilizando
es e eomic oscopía y mic oscopía óp ica. Además, se ha alidado la écnica compa ando los
esul ados con los ob enidos en secciones descalci icadas de los mismos dien es empleando
mic oscopía óp ica, mic oscopía elec ónica de ba ido y mic o omog a ía compu a izada.
Aunque la mic oscopía óp ica en secciones no a adas ha demos ado se una écnica aliosa
pa a la es imación de la edad en odas las especies, los mejo es esul ados an o pa a la
iden i icación de las es uc u as den ales como pa a el con aje de GLG en los dien es se
ob u ie on con el mic oscopio elec ónico de ba ido.
El con aje de GLG en odas las écnicas esul ó más sencillo en animales jó enes con la ca idad
pulpa de mayo amaño, pues a medida que se cie a la ca idad pulpa los GLG es án más
p óximos y son más delgados, empeo ando su de inición y di icul ando el ecuen o.
Pa a ob ene unos buenos esul ados es undamen al con a con 3-5 dien es de cada ejempla y
ealiza una buena p epa ación de las secciones, de un g oso adecuado, exponiendo
comple amen e la ca idad pulpa y e i ando el exceso o la al a de descalci icación.
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