TRABAJOS ORIGINALES DE LA FACULTAD
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.�.
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DEPARTAMENTO DE MIOROBIOLOGIA
MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS PARA EL ESTUDIO DE LA
FORMACION DE CRISTALES POR LOS MICROORGANISMOS'
po
A. RAMOS-CORMENZANA, M.a CARMEN PERE,z-MIRANDA y E. BOQUET *
RESUMEN
En el p esen e abajo se ensayan dieciseis medios de cul i o p� a
de e mina la o mación de c is ales. Ee desc ibe ¡:o p ime a ez el que
la es onciani a, pueda se o iginada biológicamen e.
En e los medios desc i os has a el momen o ·pa a la o mación de
COsCa se conside a como más idóneo un medio sencillo (BRC) a base
de ex ac o de le adu a y clo u o cál :!ico.
RESUME
Dans le p ésen a ail on essayen seize milieus de cul u e' pou de
e mine la o ma ion de c is als. On déc i e pou la p emie e ois, qui
la 'Is onciani e" elle peu e e mo i ée biologiquemen .
En e les milieus déc i s enco e le momen- pou la o ma ibn' de
C03Ca on considé c comme le plus ap e, un milieu (BRe) conposé pou
Ex ai de le u e e chlo u e de ca}.cium.
SUMMARY
Six een cul u e media we e used o de e mine c is al o ma ion.
Amóng he cul u e media used o s udy calGium ca bona e o ma ion, i
was concluded ha a medium (BRC) wi h yeas ex ac and calcium
chlo ide was be e and wi h sa is ac o y esul s. .
I was i s ime epo ed ha "s onciani e" casld be o med
biologi,cally.
... Cá ed a de Mic obiologia. Fa·cnl ad de Fa macia. Uni . de 'Ba celona.
A s Pha maceu i a. Tomo XVI. Núm. 3, 1975.
336 ARS PHARMACEUTICA
INTRODUCCION
La exis encia de mic oo ganismos capaces de o ma c is ales
en su ambien e ecológico, es un hecho conocido; en alguno de cu
yos p ocesos pueden llega a o igina se g andes acumula'ciones en
la na u aleza como las de C03Ca desc i as en la G an Bahama (1).
Recien emen e se ha inc emen ado el es udio de la o mación
de c is ales de C03Ca po los mic oo ganismos (2,3). La o mación
de c is ales en los medios de cul i o sólidos ha demos ado se una
buena écnica de es udio (2). En el p esen e abajo, se p e ende es
udia compa a i amen e alguno de los medios has a el momen o
elabo ados, y o os no desc i os en la bibliog a ía cien í ica, 'con la
inalidad de pode de e mina la in luencia de de e minados nu
ien es en la o mación de c is ales y selecciona aquellos medios
que puedan se i en pos e io es in es igaciones.
MATERIAL Y METODOS
a) Medios de cul i o
Los medios u ilizados se encuen an de allados en la alla 1, a
odos ellos se les adicionaba aga pu i icado al 1.6%.
Cuando el medio de cul i o lle aba glucosa es a se es e ilizaba
po sepa ado. El pH inal an e.s de la es e ilización, se ajus aba a
8.0; aunque se ensaya on algunos medios a pH 7.0, y 6.0.
b) Mic oo ganismos:
Como cepas bases pa a una in es igación elemen al de u ina
se u iliza on el Mic ococcus lu eus y el Se a ia ma cescens mic o
o ganismos ácilmen e o mado es de c is ales.
Pa a es udios numé icos se ensaya on di e en es especies bac
e ianas aisladas del suelo, y o as co espondien es a la colección
de cul i os exis en es en nues o labo a o io.
c) Ob ención de c is ales:
La sepa ación y pu i icación de c is ales se p ac icó en la o 
ma desc i a en an e io es abajos (2,4).
RESULTADOS
En las ablas n y In an indicados los esul ados ob enidos
espec o a la o mación de c is ales. En la abla n se exponen los
c is ales que han sido de e minados po di acción de ayos X y la
Tabla I.- Composición de los dis ín os medios de cul i o ensayados ( can idades exp esadas en g/mI).
I ng edlen es ll l3 l4 l_ l7 lE l12 l15 l16 l17 l18 l19 l20 lK5
"
Glucosa 6.0 1.0 10.0 5.0
Ex ac o le adu a 2.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 1.0
Glic o o a o Ca 4.0 1. O 10.0
Ace a o de Na 2.5 2.5 2.5 2.5
Ace a o Ca 2.5 2.5 2.0 1. 45
Ace a o Mg 2.4 1.3
NO,K 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.5
0.5 0.5
N03NII4 2.0
C12Ca. 1/2 H 20 0.1 1.8 1.8 1.8
Ci a o Na 2.0
Lac a o Na 2.0
S04Ng 0.2
C12S 2.0
Cl3Fe 0.01
Cl2Ba 1.9
CI Na ,0.1
--
-
-
lKe lKl
4.0 4.0
2.0
1.8
I
Si
Jl
�
�
O
I
C..:>
C..:>
-.:1
,338 ARS PHARMACEUTICA
TABLA H.-CRISTALES ENCONTRADOS EN LOS DIFERENTES MEDIOS
�NSAYADOS POR DIFRACCION DE RAYOS X
MEDIO
B - 1
B- 4
B - 8
B -18
B -19
BRC
BR5
TIPO DE CRISTALES
Ta a o cálcico hid a ado
Ca bona o cálcico ( ipo calci a)
Ca bona o cálcico ( ipo calci a)
Sul a o de ba io
Ca bona o de es oncio ( ipo ex ün,�ionl o)
Ca bona o Cálcico ( ipo calci a)
Ca bona o Cálcico ( ipo calci a)
TABLA HI.-COMP ARACION DE LA FORMACION DE CRISTALES EN
B-4 Y BRC A DISTINTOS TIPOS DE INCUBACION
Núm. de mic oo ganismos que o man c is ales (de 75 ensayados) a las:
Medio 24 h. 2 días 3 días 4 días 5 días 7 días 10 días 21 días
B - 4
BRC
34
52
42
54
48
56
48
57
50
57
52
57
55
58
59
64
abla III se co esponde con un es udio compa a i o de la o ma
ción de c is ales de COaCa en dos de los medios desc i os has a el
, momen o en la bibliog a ía el B-4 (3) Y el BRC (4).
DISCUSION
De acue do Con los esul ados ob enidos con M. lu eus y S. ma 
cescens en los medios B-3 y B-5 puede deduci se que la p esencia
de NOaK que e a u ilizada en los abajos de Me Callum y Guha
haku a (1) no, es imp escindible pa a la o mación de c is ales.
A di e encia de los esul ados ob enidos an e io men e po Boque
(2) noso os ambién ob u imos c is ales en medios a pH ácido.
La mayo pa e de los medios ensayados iban di igidos a la
búsqueda de C03Ca, po €� a mejo desc i o en la bibliog a ía
cien í ica y se ela i amen e ácil su o mación; sin emba go al
modi ica los componen es me álicos del medio de cul i o se han
ob enido da os dignos de señala como la o mación de ca bona o
de es oncio en el medio de cul i o BJ9 lo que sugie e, den o del
campo especula i o que una adecuada modi icación de los cons i-
ARS PHARMACEUTICA 339
uyen es del medio de cul i o pod ía da luga a la o mación mi
c obiana de o os mine ales, cuyo o igen biológico aún ni ha sido
conside ado.
Como se obse a en las igu as 1, 2 Y 3 la o mación de c is ales
puede se pe ec amen e de ec ada po mé odos de obse ación ma
c oscópica; aunque pa a e ec ua una lec u a ápida se deba acu
di a la obse ación mic oscópica ( igu as 4, 5, 6 Y 7).
Fig. 1 Aislamien o de bac e ias o mado as de c is ales en el medio B-4.
En apa iencia los c is ales ob enidos al modi ica pa cialmen
e la composición del medio de cul i o son dis in os como, ádlmen
e puede ap ecia se de la obse ación de las igu as 4, 5 Y 6; sin
emba go al e ec ua la de e minación po di a ome Ía de ayos X
se ap ecia que se co esponden con C03Ca. En algunos casos es a
o mación de c is ales es in ensa ( ig. 6) y en o os son menos nu
me osas, quedando como supe icies c is alinas sob e la colonia
( ig. 5).
Como hecho, e dade amen e cu ioso puede des aca se el que
se ob u ie an c is ales de sul a o de ba io, en un medio en el que
espe ábamos ob ne c is ales del ipo de los ca bona os.

340 ARS PHARMACEUTICA
Fig. 2 Colonia o mado a de c is ales en el medio B-lo
Fig. 3 Colonia o mado a de c is ales sob e el medio de cul i o B-4.
ARS PHARMACEUTICA 341
Fig. 4 Obse ación de c is ales mic oscópicamen e en B-4.
Fig. 5 Obse ación de c is ales mic oscópicamen e en BRC (escasos).
342 ARS PHARMACEUTICA
Fig. 6 Obse ación de c is ales mi,c oscópicamen e en BRC (nume osas).
Fig. 7 De alle de los c is ales o mados in acolonialmen e en BRC.
ARS PHARMACEUTICA 343
BIBLIOGRAFIA
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2. BOQUET, E.-La o mación de c is ales po las bac e ias en medios só
lidos. Tesis doc o al. Uni . Ba celona (1973).
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menon. Na u e 246, 527 (1973).
4. RAMOS-CORMENFANA, A.-Fo ma ion o Calci e c ys als by Bac e ia o
he genus Bacillus. Mic obios (pendien e de publicación, 1975).