Medios de cultivo sólidos para el estudio de la formación de cristales por los microorganismos

TRABAJOS ORIGINALES DE LA FACULTAD --- .�. --- DEPARTAMENTO DE MIOROBIOLOGIA MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS PARA EL ESTUDIO DE LA FORMACION DE CRISTALES POR LOS MICROORGANISMOS' po A. RAMOS-CORMENZANA, M.a CARMEN PERE,z-MIRANDA y E. BOQUET * RESUMEN En el p esen e abajo se ensayan dieciseis medios de cul i o p� a de e mina la o mación de c is ales. Ee desc ibe ¡:o p ime a ez el que la es onciani a, pueda se o iginada biológicamen e. En e los medios desc i os has a el momen o ·pa a la o mación de COsCa se conside a como más idóneo un medio sencillo (BRC) a base de ex ac o de le adu a y clo u o cál :!ico. RESUME Dans le p ésen a ail on essayen seize milieus de cul u e' pou de e mine la o ma ion de c is als. On déc i e pou la p emie e ois, qui la 'Is onciani e" elle peu e e mo i ée biologiquemen . En e les milieus déc i s enco e le momen- pou la o ma ibn' de C03Ca on considé c comme le plus ap e, un milieu (BRe) conposé pou Ex ai de le u e e chlo u e de ca}.cium. SUMMARY Six een cul u e media we e used o de e mine c is al o ma ion. Amóng he cul u e media used o s udy calGium ca bona e o ma ion, i was concluded ha a medium (BRC) wi h yeas ex ac and calcium chlo ide was be e and wi h sa is ac o y esul s. . I was i s ime epo ed ha "s onciani e" casld be o med biologi,cally. ... Cá ed a de Mic obiologia. Fa·cnl ad de Fa macia. Uni . de 'Ba celona. A s Pha maceu i a. Tomo XVI. Núm. 3, 1975. 336 ARS PHARMACEUTICA INTRODUCCION La exis encia de mic oo ganismos capaces de o ma c is ales en su ambien e ecológico, es un hecho conocido; en alguno de cu yos p ocesos pueden llega a o igina se g andes acumula'ciones en la na u aleza como las de C03Ca desc i as en la G an Bahama (1). Recien emen e se ha inc emen ado el es udio de la o mación de c is ales de C03Ca po los mic oo ganismos (2,3). La o mación de c is ales en los medios de cul i o sólidos ha demos ado se una buena écnica de es udio (2). En el p esen e abajo, se p e ende es udia compa a i amen e alguno de los medios has a el momen o elabo ados, y o os no desc i os en la bibliog a ía cien í ica, 'con la inalidad de pode de e mina la in luencia de de e minados nu ien es en la o mación de c is ales y selecciona aquellos medios que puedan se i en pos e io es in es igaciones. MATERIAL Y METODOS a) Medios de cul i o Los medios u ilizados se encuen an de allados en la alla 1, a odos ellos se les adicionaba aga pu i icado al 1.6%. Cuando el medio de cul i o lle aba glucosa es a se es e ilizaba po sepa ado. El pH inal an e.s de la es e ilización, se ajus aba a 8.0; aunque se ensaya on algunos medios a pH 7.0, y 6.0. b) Mic oo ganismos: Como cepas bases pa a una in es igación elemen al de u ina se u iliza on el Mic ococcus lu eus y el Se a ia ma cescens mic o o ganismos ácilmen e o mado es de c is ales. Pa a es udios numé icos se ensaya on di e en es especies bac e ianas aisladas del suelo, y o as co espondien es a la colección de cul i os exis en es en nues o labo a o io. c) Ob ención de c is ales: La sepa ación y pu i icación de c is ales se p ac icó en la o  ma desc i a en an e io es abajos (2,4). RESULTADOS En las ablas n y In an indicados los esul ados ob enidos espec o a la o mación de c is ales. En la abla n se exponen los c is ales que han sido de e minados po di acción de ayos X y la Tabla I.- Composición de los dis ín os medios de cul i o ensayados ( can idades exp esadas en g/mI). I ng edlen es ll l3 l4 l_ l7 lE l12 l15 l16 l17 l18 l19 l20 lK5 " Glucosa 6.0 1.0 10.0 5.0 Ex ac o le adu a 2.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 1.0 Glic o o a o Ca 4.0 1. O 10.0 Ace a o de Na 2.5 2.5 2.5 2.5 Ace a o Ca 2.5 2.5 2.0 1. 45 Ace a o Mg 2.4 1.3 NO,K 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 N03NII4 2.0 C12Ca. 1/2 H 20 0.1 1.8 1.8 1.8 Ci a o Na 2.0 Lac a o Na 2.0 S04Ng 0.2 C12S 2.0 Cl3Fe 0.01 Cl2Ba 1.9 CI Na ,0.1 -- - - lKe lKl 4.0 4.0 2.0 1.8 I Si Jl � � O I C..:> C..:> -.:1 ,338 ARS PHARMACEUTICA TABLA H.-CRISTALES ENCONTRADOS EN LOS DIFERENTES MEDIOS �NSAYADOS POR DIFRACCION DE RAYOS X MEDIO B - 1 B- 4 B - 8 B -18 B -19 BRC BR5 TIPO DE CRISTALES Ta a o cálcico hid a ado Ca bona o cálcico ( ipo calci a) Ca bona o cálcico ( ipo calci a) Sul a o de ba io Ca bona o de es oncio ( ipo ex ün,�ionl o) Ca bona o Cálcico ( ipo calci a) Ca bona o Cálcico ( ipo calci a) TABLA HI.-COMP ARACION DE LA FORMACION DE CRISTALES EN B-4 Y BRC A DISTINTOS TIPOS DE INCUBACION Núm. de mic oo ganismos que o man c is ales (de 75 ensayados) a las: Medio 24 h. 2 días 3 días 4 días 5 días 7 días 10 días 21 días B - 4 BRC 34 52 42 54 48 56 48 57 50 57 52 57 55 58 59 64 abla III se co esponde con un es udio compa a i o de la o ma ción de c is ales de COaCa en dos de los medios desc i os has a el , momen o en la bibliog a ía el B-4 (3) Y el BRC (4). DISCUSION De acue do Con los esul ados ob enidos con M. lu eus y S. ma  cescens en los medios B-3 y B-5 puede deduci se que la p esencia de NOaK que e a u ilizada en los abajos de Me Callum y Guha haku a (1) no, es imp escindible pa a la o mación de c is ales. A di e encia de los esul ados ob enidos an e io men e po Boque (2) noso os ambién ob u imos c is ales en medios a pH ácido. La mayo pa e de los medios ensayados iban di igidos a la búsqueda de C03Ca, po €� a mejo desc i o en la bibliog a ía cien í ica y se ela i amen e ácil su o mación; sin emba go al modi ica los componen es me álicos del medio de cul i o se han ob enido da os dignos de señala como la o mación de ca bona o de es oncio en el medio de cul i o BJ9 lo que sugie e, den o del campo especula i o que una adecuada modi icación de los cons i- ARS PHARMACEUTICA 339 uyen es del medio de cul i o pod ía da luga a la o mación mi c obiana de o os mine ales, cuyo o igen biológico aún ni ha sido conside ado. Como se obse a en las igu as 1, 2 Y 3 la o mación de c is ales puede se pe ec amen e de ec ada po mé odos de obse ación ma c oscópica; aunque pa a e ec ua una lec u a ápida se deba acu di a la obse ación mic oscópica ( igu as 4, 5, 6 Y 7). Fig. 1 Aislamien o de bac e ias o mado as de c is ales en el medio B-4. En apa iencia los c is ales ob enidos al modi ica pa cialmen e la composición del medio de cul i o son dis in os como, ádlmen e puede ap ecia se de la obse ación de las igu as 4, 5 Y 6; sin emba go al e ec ua la de e minación po di a ome Ía de ayos X se ap ecia que se co esponden con C03Ca. En algunos casos es a o mación de c is ales es in ensa ( ig. 6) y en o os son menos nu me osas, quedando como supe icies c is alinas sob e la colonia ( ig. 5). Como hecho, e dade amen e cu ioso puede des aca se el que se ob u ie an c is ales de sul a o de ba io, en un medio en el que espe ábamos ob ne c is ales del ipo de los ca bona os. 340 ARS PHARMACEUTICA Fig. 2 Colonia o mado a de c is ales en el medio B-lo Fig. 3 Colonia o mado a de c is ales sob e el medio de cul i o B-4. ARS PHARMACEUTICA 341 Fig. 4 Obse ación de c is ales mic oscópicamen e en B-4. Fig. 5 Obse ación de c is ales mic oscópicamen e en BRC (escasos). 342 ARS PHARMACEUTICA Fig. 6 Obse ación de c is ales mi,c oscópicamen e en BRC (nume osas). Fig. 7 De alle de los c is ales o mados in acolonialmen e en BRC. ARS PHARMACEUTICA 343 BIBLIOGRAFIA 1. Mc CALLUM, M. F. and GUHATHAKURTA, K-The p ecipi a ion o calcium ca bona e om sea wa e by bac e ia isola ed om Bahama Bank sedimen s. J. Appl. Bac . 33, 649 (1970). 2. BOQUET, E.-La o mación de c is ales po las bac e ias en medios só lidos. Tesis doc o al. Uni . Ba celona (1973). 3. 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