DEP ART AMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA y SOCIAL,
HIGIENE Y SANIDAD AMBIENTAL.
DISTRIBUCION DE LAS RESISTENCIAS DE ORIGEN PLASMIDICO
A ANTIBIOTICOS 3 -LACT AMICOS EN ENTEROBACTERIAS.
A. Ma is� La ubia, M. Espiga es Ga cía, J. A. Pé ez López, A. Cue o Espina y D. Ju ado
Chacón.
RESUMEN
Se es udia la p esencia de 3 -lac amasas en las en e o bac e ias que se ais
lan en el Se icio de Mic obiología del Hospi al Uni e si a io de G anada. Se
de ec a on es ipos de enzimas, TEM (71,72 OJo), SHV (12,04 OJo) y OXA
(16,23 OJo), cuyas p opo ciones ela i as coinciden con las ob enidas po o os
au o es. El in e és epidemiológico de la de ección de 3 -lac amasas se discu e
en el úl imo apa ado de es e abajo.
SUMMARY
En e obac e iaceas s ains isola ed in he Myc obiology Depa men o
he Uni e si a y Hospi al in G anade (Spain) con aining 3 -lac amases de e 
mina ed by plasmids R we e s udied. Th ee ypes o hese enzymes, TEM
(71,72 OJo), SHV (12,04 OJo) and OXA (16,23 OJo), has been iden i ied and hei s
ela i es pe cen ages we e simila o he o he wo ke s. Epidemiological in e
es o he 3 -lac amases clasi ica ions a e discussed in he las pa o his a i
ele.
INTRODUCCION
La de e minación de los mecanismos bioquímicos de la esis encia bac e
iana a los an ibió icos p opo ciona da os mucho más obje i os sob e el es a
do de las esis encias que los apo ados po el an ibiog ama (1). Además, la
mo ilidad del ma e ial gené ico, pIásmidos, ansposones e incluso del ADN
c omosómico, hacen necesa io busca nue os mé odos en el es udio de las e
sis encias que p opo cionen un mayo in e és clínico y u ilidad con ines epi
demiológicos (2 y 3).
A s Phu muceu icu. Tomo XXVIII. Núm. 1, 1987
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En es e abajo se analiza la p esencia de {3 -lac amasas de o igen plasmí
dico en una mues a ep esen a i a de las en e o bac e ias aisladas en el Hospi
al Uni e si a io de G anada. La iden i icación de las {3 -lac amasas p esen es
en es as cepas p opo ciona no solamen e un da o de in e és clínico al p edeci
un mayo núme o de esis encias que el an ibiog ama, sino que pe mi e ade
más conoce más es echamen e los mecanismos esponsables del man eni
mien o de las esis encias en nues o hospi al.
MATERIAL Y METODOS
Mic oo ganismos. Sob e un conjun o de 695 cepas de en e obac e ias ais
ladas du an e el pe íodo de nues o es udio, se selecciona on 177 po p esen
a esis encia a an ibió icos en el cual se incluye an al menos la esis encia a
algún {3-lac ámico. El pe íodo de es udio ue de un año y las cepas es udiadas
se ecogie on un único día de cada semana en el in e alo ci ado. Se p e endía
de es a o ma que la mues a elegida de mane a alea o ia ue a ep esen a i a
de la población de en e o bac e ias exis en es en nues o es udio.
Sensibilidad a an ibió icos. El pa ón de esis encias de cada cepa se de
e minó po el mé odo del an ibiog ama disco-placa u ilizando aga Muelle 
Hin on (Oxoid) y un inóculo de 107-108 u c/ml (4). Los discos de an ibió icos
u ilizados p oceden es de la i ma BBL ue on los siguien es: ampicilina, ca 
benicilina, ce alo idina, ce alo ina, ce amandol, ce oxi ina, cloxacilina y me
icilina.
Técnicas gené icas. La de e minación del o igen gené ico de las esis en
cias a {3-lac ámicos se e ec uó en p ime a ins ancia median e ans e encia del
ma e ial gené ico po conjugación de cada una de las cepas aisladas con la ce
pa ecep o a Esche icha coli K12 162 na/o En caso de no ob ene se conjugan
es, es a ans e encia de ma e ial gené ico se e ec uó median e ans o ma
ción, aislando el ADN plasmídico según se ha desc i o p e iamen e (5) y u ili
zando como cepa ecep o a Esche ichia coli HB101. Las écnicas de conjuga
ción y ans o mación se ealiza on siguiendo mé odos ya desc i os (6). Los
an ibió icos u ilizados en el aislamien o de ansconjugan es y ans o man es
en las placas selec o as ue on: ampicilina (30 Il g/mI), Ca benicilina (125
Il g/mI), ce alospo ina C (30 Il g/mI) y ce amandol (10 Il g/mI), ob enidos de
Sigma. En la conjugación se añadió además a cada placa selec o a ácido nali
díxico (250 Il g/mI) de S e wing Española.
Técnicas enzimá icas. La iden i icación de las {3 -lac amasas p esen es en
las cepas esis en es se ealizó a pa i de ex ac os celula es u ilizando una éc
nica biológica basada en la u ilización de di e sos inhibido es de
{3 -lac amasas, conc e amen e p-clo ome cu ibenzoa o 0,5 mM, CINa 100
mM y Cloxacilina 0,1 mM. (7). Pa a la ob ención de los ex ac os celula es se
u ilizó un Sonica o Cell Dis up o W-375 a 100 W en impulsos de 50 OJo de
segundo du an e 4,5 minu os.
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RESULTADOS
En la abla I se indica la o alidad de mic oo ganismos aislados en nues
o pe íodo de es udio. De las 695 aislados, 177 cepas (25,46 OJo) p esen a on
esis encia a algún an ibió ico de ipo 3 -lac ámico. Como se indica en la abla
11, la dis ibución de es as esis encias ue de 171 (96,61 OJo) cepas esis en es a
algún ipo de penicilinas y 39 (22,03 OJo) esis en es a alguna de las celalospo i
nas ensayadas, si bien 33 de es as ue on esis en es simul áneamen e a penici
linas. La p esencia de 3 -lac amasas de e minadas po plásmidos se de ec ó en
163 cepás de las 177 aisladas esis en es a 3 -lac ámicos. El ipo de enzima y el
núme o de cepas en que se iden i ica on, bien de o ma indi idual o con más
de una enzima po cepa se exp esa en la abla 111. La. (3 -lac a masa más e
cuen e ue del ipo TEM de ec adas en 137 cepas, enzimas de ipo OXA se p e
sen a on en 31 cepas y de ipo SHV en 23. La dis ibución de 3-1ac amasas se
gún el mic oo ganismo de o igen se indica en la abla IV así como po po cen
ajes ela i os de cada uno de ellos.
TABLA 1.
Mic oo ganismos aislados
Especie cepas OJo
E. coli 264 37,9
K. pneumoniae 113 16,3
P. mi abilis 92 13,2
E. c/oacae
33
4,7
S. ma cescens 32 4,6
Salmonella sp. 28 4,0
E. ae ogenes 25 3,6
Shigella sp. 19 2,7
Ci obac e sp. 18 2,6
M. mo ganii 18 2,6
P. e ge i 13 1,9
E. alkalescens 12 1,7
P. ulga is 12 1,7
E. coli in e medio 11 1,6
K. oxy oca 5 0,7
TOTAL 695
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TABLA 11
Mic oo ganismos esis en es a 3 -lac ámicos
Mic oo ganismo Cepas esis en es al
Penicilinas Ce alospo inas ambos
Esche ichia 92 O 8
Klebsiella 20 2 4
Shigel/a 10 O O
Salmonella 7 O O
P o eus 4 1 2
Ci obac e 2 O 1
Se a ia 2 O 10
En e obac e 3 8
1 Se indica el núme o de cepas esis en es a algún an ibió ico de los g upos ci ados o a ambos g u
pos.
TABLA III
3 -lac amasas de e minadas po plásmidos
3 -lac amasas N.o de OJo
cepas
TEM 114 69,94
SHV 18 11,04
OXA 3 1,84
TEM Y OXA 23 14,11
SHV y OXA 5 3,07
TOTAL 163
DISCUSION
La mues a de mic oo ganismos analizada ue ep esen a i a an o en nú
me o como en dis ibución po especies del pe íodo de iempo en que se eali
zó es e es udio en nues o hospi al. El aislamien o, iden i icación y an ibiog a
na de cada mic oo ganismo se ealizó según el p o ocolo seguido en el Se i
cio de Mic obiología de dicho cen o dependiendo de cada ipo de mues a.
En la de ección del o igen gené ico de las esis encias, la ans e encia median
e ans o mación únicamen e hubo que ealiza la con 22 cepas de las que no
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se habían ob enido ansconjugan es esis en es a 3 -lac ámicos. De es as 22
cepas se ob u ie on ans o man es con es as esis encias en 8 casos no pu
diéndose asocia en las es an es dichas esis encias·con la p esencia de plásmi
dos. Los esul ados de la ans e encia ue on no obs an e supe io es a los ob
enidos po Mi suhashi (8) ambién con mic oo ganismos de o igen clínico.
TABLA IV
O igen y dis ibución de las 3 -lac amasas codi icadas po plásmidos
Tipo de 3 -lac amasa
Mic oo ganismo cepas TEM SHV OXA
N.O OJo N.o OJo N.o OJo
Esche ichia 98 92 93,1 6 6,1 3 3,1
K/ebsiel/a 24 10 41,6 14 58,3 5 20,8
En e obac e 10 9 90 O 7 70
P o eus 5 3 60 2 40 4 80
Sa/monel/a 7 7 100 O O
Shige//a 3 3 100 O O
Se aNa 13 12 92,3 O 11 84,6
Ci obac e 3 33,3 1 33,3 33,3
No a: Los po cen ajes es án hechos con elación al o al de cepas de cada géne o que p esen a on
3 -Iac amasas de o igen plasmídico.
El mé odo biológico seguido pa a la iden i icación de las 3
-lac amasas
basado en eacciones de inhibición median e 3 sus a os solamen e esul a
aplicable con enzimas de o igen plasmídico y una ez que los plásmidos es
ponsables se ans ie en, como en nues o es udio, a cepas bien conocidas ge
no ípicamen e y ca ac e izadas po no p oduci ningún ipo de 3 -lac amasas
de ipo c omosó nico o plasmídico. Se u ilizó es a écnica en luga de o as
más especí icas (9) debido a su simplicidad y acilidad de e aluación de g an
núme o de mues as. No equie e ma e ial cos oso ni so is icado, puede eali
za se po pe sonal no especializado y pe mi e di e encia las 3 -lac amasas de
o igen plasmídico en aquellos g upos de enzimas ca ac e izados po su a ini
dad de sus a os y con un in e és clínico común pa a la polí ica de an ibió icos
de un cen o hospi ala io (10).
En e los mic oo ganismos aislados (695) indicados en la abla 1 se de ec
ó esis encia a 3-lac ámicos en 177 cepas según se demues a en la abla n.
Como puede obse a se la mayo p opo ción de esis encias ue sob e odo a

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an ibió icos del ipo de las penicilinas (165 cepas) de las cuales 33 ue on ade
más esis en es a ce alospo inas. Solamen e 6 cepas ue on esis en es única
men e a ce alospo inas. La u ilización indisc iminada de an ibió icos como la
ampicilina an o en el medio in a como ex ahospi ala io puede explica nos el
man enimien o de las esis encias a penicilinas en un ni el an al o, en compa
ación con las es icciones que se aplican sob e el segundo ipo de an ibió icos
ci ados en nues o medio.
De los 177 mic oo ganismos ci ados en 163 se de ec ó la p esencia de
plásmidos de esis encia a 3 -lac ámicos median e su ans e encia a la cepa
ecep o a espec i a según se a ase de la conjugación o ans o mación. Co
mo se desp ende de la abla 111, se de ec a on 31 cepas con enzimas de ipo
OXA esponsables de las esis encias a ce alospo inas p incipalmen e y 160 en
zimas de los ipos TEM y SHV que hid olizan con una mayo asa an ibió i
cos del ipo de las penicilinas. En 5 cepas esis en es a penicilinas y en 9 a ce a
lospo inas, es as esis encias no se pudie on asocia con la p esencia de plás
midas con las écnicas empleadas, conjugación y ans o mación, y aunque
es a posibilidad no puede desca a se, los indicios apun an hacia o os meca
nismos de esis encia posiblemen e de o igen c omosómico (11).
Al analiza la dis ibución de las 3 -lac amasas según el mic oo ganismo
de o igen, podemos ap ecia la desigual dis ibución con a ia a la g an mo i
lidad de los gené icos esponsables. Es a endencia de de e minadas
3 -lac amasas po localiza se en especies bac e ianas conc e as ienen igual
men e un g an alo epidemiológico y nos induce a pensa en la implicación en
dicha dis ibución de componen es gené icos, posiblemen e elacionados con
la incompa ibilidad de plásmidos o de ans e encia de ma e ial gené ico (12).
En cuan o a la p opo ción de los di e en es enzimas po géne os bac e ianos,
la obse ada en nues o es udio esul a simila a la de ec ada po o os au o es
en di e en es pa es del mundo, indicando una g an homogeneidad en su dis
ibución a ni el mundial (13 y 14).
En esumen, la incidencia de plásmidos de esis encia a 3 -lac ámicos
p esen a unos alo es bas an e al os en nues o hospi al, lo cual puede expli
ca nos las di icul ades obse adas cuando a a és de la polí ica de an ibió i
cos en nues o hospi al, se ha p e endido disminui el ni el de es as esis en
cias median e la acionalización del uso de es os an ibió icos. La e adicación
de es as esis encias únicamen e se pod á acome e cuando se comp endan los
ac o es que pe mi en su man enimien o. C eemos que la epidemiología basa
da en los mecanismos gené icos de las esis encias y los ac o es esponsables
de su p oli e ación es el mejo mé odo que puede p opo ciona nos da os su i
cien es pa a el con ol de es e g a e p oblema clínico.
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