CLINICA VETERINARIA
DE PEQUEÑOS ANIMALES
Volumen 12
Núme o 4
Oc ub e/Diciemb e 1992
A ículo O iginal
R. Pisa
M. Po ús
M. Gállego
D.
Valls
MJ. Aisa
Labo a o i de Pa asi ología. Facul ad de Fa macia,
A da. Diagonal,
sIn
08028 Ba celona
El diagnós ico se ológico
de la leishmaniosis canina
en la coma ca del P io a
(Ta agona).
33
RESUMEN
Se in es iga la p esencia de an icue pos an i-
Leúhmania median e una écnica de «Do -
ELISA» en
1.
3
2
8 mues as de sang e
p oceden es de 902 pe os de la coma ca del
P io a (Ca aluña), impo an e oco de
leishmaniosis canina. El umb al de posi i idad
pa a la mencionada écnica (11800) se es ablece
a pa i de los da os ob enidos al ealiza en
pa alelo cul i o y se ología.
Los esul ados se ológicos ob enidos pe mi en
obse a una asa de p e alencia de la in ección
de 10,2
%.
Tan sólo el 49,8
%
de los sue os
es udiados son o almen e nega i os. Al 40
%
es an e se le de ec a an icue pos an i-
Leúhmania a í ulos in e io es al umb al
es ablecido cuyo posible signi icado se discu e.
PALABRAS CLAVE
Leishmaniosis; Pe o; Diagnós ico se ológico.
SUMMARY
The p esence o an i-Leishmania an ibodies
is
s udied in
1328
blood samples om 902 dogs
om he P io a egion (Ca a/onia), an
impo an ocus o canine leúhmaniosú, by a
Do -ELISA echnique. The cu -o (1/800)
is
es ablúhed h ough he da a ob ained by
se ology and cul u e in pa allel.
The p e alence o se oposi i es obse ed was
10,2
%.
Only
49,8
%
o se a we e comple ely
nega i e. The emaining
40
%
had an i-
Leishmania an ibodies a i es below he cu -
o , he possible signijicance o which
is
dúcused.
KEY WORDS
Leúhmaniosú; Dog; Se ologic dzagnos ic.
231
R. Fisa
M. Po ús
M.
Gallego
D.
Valls
MJ.
Aisa
INTRODUCCIÓN
34
La leish naniosis canina es una en e medad p e-
sen e con ele ada p e alencia en nues o en o no.
Es udios ealizados du an e los úl imos años en dis-
in os pun os de la geog a ía ca alana han mos-
ado que los índices de se op e alencia son muy
di e sos en las dis in as
zo as'? y
13).
Ello es com-
p ensible si enemos en cuen a que las leishma-
niosis e olucionan en ocos na u ales, limi ados
geog á ica y clima ológicamen e, donde
Leishma-
nia
es capaz de ci cula g acias a la p esencia de
los elemen os necesa ios pa a segui su ciclo bio-
lógico, el ec o
(Phlebo omus
sp.) y el ese o io
(cánidos).
En nues as la i udes, el pe o es conside ado
el ese o io p incipal del pa ási o, a pesa de que
o os animales pueden ambién, ocasionalmen e,
halla se pa asi ados po
Leishmania
(zo os, a-
as)(7·
10
y
14).
El homb e se conside a que en a en
la cadena epidemiológica de modo acciden al.
El diagnós ico
se ológico
de la leishmaniosis ca-
nina es en la ac ualidad una impo an e he a-
mien a:
a) en es udios epidemiológicos, pa a alo a el al-
cance de la enzoo ía canina, en los que se necesi-
a de écnicas de c ibado de ejecución sencilla.
b) en clínica e e ina ia, dada la no able di e si-
dad en el cuad o clínico que p esen an los anima-
les leishmaniósicos, la poca sensibilidad de las éc-
nicas de examen di ec o y la di icul ad de ealiza
écnicas de cul i o en la mayo pa e de las con-
sul as e e ina ias.
Al igual que pa a la mayo ía de en e medades
in ecciosas, las p uebas se ológicas pa a el diagnós-
ico de una leishmaniosis pueden da luga a al-
sas in e p e aciones, debidas an o a espues as hu-
mo ales ano males del hospedado como a p oble-
mas inhe en es al mé odo se ológico que se es á
empleando, in ínsecos de la écnica o de i ados
de los eac i os u ilizados (an ígeno, conjugado,
subs a o, e c).
En es e abajo se exponen los esul ados se o-
lógicos ob enidos en el anscu so de las encues as
caninas ealizadas en la coma ca del P io a (Ta-
agona), impo an e oco de leishmaniosis cani-
na, y su alo ación den o de su con ex o clínico-
epidemiológico.
232
El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis
canina en la coma ca del P io a (Ta agona).
MATERIAL Y MÉTODOS
Se han es udiado 902 pe os, en e los años
1987-1990, que p ocedían de 26 localidades de la
coma ca del P io a (Ta agona).
Las ex acciones de sang e se ealiza on en el
anscu so de las campañas de acunación an i-
ábica, que se e ec úan habi ualmen e en p ima-
e a y p incipios de e ano. Se omó mues a de
odos los animales que acudie on a la misma con
excepción de los nacidos du an e el in ie no o de
aquellos o os pa a los que el dueño no au o izó
la ex acción.
Ello ha supues o el análisis se ológico de 1.328
mues as de sang e, ya que de algunos animales
se ealiza on di e sos con oles en el iempo pa a
segui su e olución. Las mues as de sang e se e-
cogie on sob e papel de il o (Wha man 3) po
la acilidad que ep esen a an o pa a la oma de
mues a, como pa a su pos e io aslado y alma-
cenaje, siendo los esul ados o almen e compa-
ables a los ob enidos con mues as de sue o'?
y
16).
Pa alelamen e a la oma de mues as se ealizó
un examen clínico, isual, del animal, ano ando
en la icha co espondien e, jun o a los da os de
iliación, las obse aciones pa ológicas ealizadas
(lesiones cu áneas, descamación, pé dida de pelo,
conjun i i is, onicog iposis, delgadez, e c) o aque-
llos que ela aba el dueño (as enía, ano exia, e c).
En base a dichos da os, y siguiendo el c i e io
de Mancian i y col(9) se ag upa on los animales
en asin omá icos, oligosin omá icos y sin omá i-
cos.
La p ueba se ológica u ilizada ha sido el «Do -
ELISA», desc i o y es anda izado inicialmen e po
Pappas y col(12)pa a el diagnós ico de la leishma-
niosis isce al en el Viejo Mundo. Es una écnica
inmunoenzimá ica, de lec u a isual, que p ecisa
pequeños olúmenes de an ígeno ijados sob e una
memb ana de ni ocelulosa y un subs a o c omo-
génico p ecipi able. La écnica ha sido obje o de
di e sas modi icaciones po nues a pa e y adap-
ada al es udio del ese o io canino u ilizando
como an ígeno una suspensión de p omas igo es
de la cepa de
L.
in an um
au óc ona, aislada en
pe o, MCAN/ES/84/BCN-3 ZMüN-1 y como
conjugado la P o eína-A unida al enzima pe oxi-
dasa, capaz de uni se con g an a inidad a las in-
R. Fisa
M. Po ús
M. Gallego
D. Valls
MJ.
Aisa
36
• Fijación del amígeno a la ni ocelulosa.
Go as de
I
ui de una suspensión de p o nas igo es a una
concen ación de 108/ml en PBS ( ampón os a o pH: 7,2)
o mol 1,5 %.
• Bloqueo de la placa con TS (T is-salino pH: 7,6)-leche
desc emada 5 %.
(Las
memb anas sensibilizadas pueden
gua da se congeladas a-40°
C).
• Incubación de
la
mues a (sue o o sang e eluida) a las
diluciones de abajo 11100, 11200, ... en TST (Tnssalino-
Tween 20 al 0,05 %)-leche desc emada
I
%. 30 min a
37°
C.
T es la ados de la memb ana en TST, un la ado en
TS.
• Incubación del conjugado-P o eína A-pe oxidasa (Sigma)
al1l2000 en TST-leche desc emada
i
%.30 min a 37°
C.
T es la ados en TST
y
un la ado en TS.
• Re elada con 4 clo o-l- ia ol (Me ck).
Tabla
I.
Pau a de abajo pa a la écnica «Do -ELISA»
:
'"
'-
:I:
el
."
m
O
n
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•
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o
•
o
•
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••
•
"' oO
O••
."3200
•
CI
•
118400
.-1
G á ica
l.
Placa
.Doc-ELISA.
e elada.
munoglobulinas de ipo IgG del pe o'!". (Tabla
I, G á ica 1).
El diagnós ico e iológico se ha ealizado, gene al-
men e, en animales con í ulos ele ados de an i-
cue pos o con
sin oma ología
sospechosa, pa a con-
i ma la pa asi ación. Se ha basado en el examen
di ec o y en el cul i o, en medio NNN, de mues-
as omadas de ganglio poplí eo.
La p e alencia de la en e medad en la coma ca se
ha calculado eniendo en cuen a los esul ados se-
234
El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis
canina en la coma ca del P io a (Ta agona).
ológicos hallados du an e
los
años 1988-1989-1990
(1.169 sue os es udiados), donde se engloban la
mayo pa e de los animales es udiados, ya que se
acep a que los ocos de leishmaniosis canina pe -
manecen cons an es du an e la go
iempo'> y
8).
-De aquellos animales en los que, po una u o a
causa, se ealizó más de una de e minación se o-
lógica en un mismo año an sólo se u o en cuen-
a la que dio el í ulo más ele ado. Se omi ie on,
pa a el cálculo de la p e alencia, los 'sue os ob e-
nidos de pe os seleccionados en unción de los e-
sul ados se ológicos ob enidos con an e io idad.
RESULTADOS
En la Tabla II se indica la elación exis en e en-
e los es pa áme os es udiados: esul ados se-
ológicos «Do -ELISA», exp esados en í ulos, sin-
oma ología que p esen aba el animal en el mo-
men o del análisis y esul ados de los cul i os
gangliona es. La abla esume los da os ob enidos
de cada pe o, du an e los di e sos años, conside-
ándolos como independien es.
La ecuencia de aislamien os de
Leishmania
de
mues as omadas de ganglio poplí eo se ha man-
enido p ác icamen e cons an e a í ulos >= 1/800,
oscilando al ededo del 50
%
de posi i idad, sin
obse a se inc emen os impo an es al aumen a
el í ulo se ológico e independien emen e de la
sin oma ología que p esen ase el animal. Des aca
el 12
%
de posi i idad hallado en animales con
í ulo se ológico 1/400 y el po cen aje nulo de po-
si i idad hallado en e los animales con í ulo
=
<
1/200.
Po ello se ha conside ado como í ulo diagnós-
ico ( í ulo in e io que de ec a una leishmaniosis
e olu i a) el í ulo 11800, acep ando la pé dida de
un bajo núme o de posi i os a í ulos in e io es,
con especial impo ancia a 11400.
En la Tabla III se indican las ecuencias de los
í ulos se ológicos ob enidos en la coma ca. Pue-
de obse a se que se de ec a un 10,2
%
de ani-
males se oposi i os con í ulo> = 11800, que e-
p esen a la p e alencia hallada en la coma ca, jun o
aun 40
%
de animales con se ologías bajas y un
49,8
%
de animales se onega i os.
Uni e si a Au ónoma de Ba celona
Se ei de Biblio eques
Biblio eca de 'e'",nnà l..
CLINICA VETERINARIA
DE PEQUEÑOS ANIMALES
Volumen 12
Núme o 4
Oc ub e/Diciemb e 1992
El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis
canina en la coma ca del P io a (Ta agona).
Ti ulas Sin oma ología
«Do -ELISA"
O
+++
To al
N°
Cleul.
N°
Cieu/.
N°
Cieu/.
N
Cieu/.
o/o
neg 560 0/3 39 0/1 5
O/O
604 0/4
O
1/100 247 0/5 31 0/3 8
O/O
286 0/8
O
1/200 141 0/6 28 0/5 8 0/3 177 0/14
O
1/400 59 2/5 34 0/14 12 1/6 105 3/25 12
1/800 29 1/2 32 3/12 16 4/6 77 8/20 40
1/1600 70/1 82/4 15 6/8 30 8/13 62
1/3200 31/1 8 2/3 8 1/4 19 4/8 50
>=1/6400 81/2 6 1/3 16 6/10 30 8/15 53
To ales 1.054 5/25 186 8/45 88 18/37 1.328 311107
37
N°:
núme o de pe os; C/cul.: cepas de
Leishmania
aisladas/cul i os gangliona es ealizados;
O:
asin o ná ico;
+:
oligosin omá ico;
++:
sin omá ico;
%:
ecuencia de aislamien os.
Tabla IT. Resul ados se ológicos «Do -ELISA», sin oma ología
y
esul ados de los cul i os
«Do -ELISA" ( í ulo) neg
11100 11200 11400 11800 111600 113200 >116400
N° sue os (1.169) 582 257 149 62 51 27 15 26
F ecuencia (%) 49,8 22 12,7 5,3 4,4 2,3 1,3 2,2
Tablaill. TI ulas de an icue pos
an i-Leishmania
ob enidos en
el
P io a . Tabla de ecuencias
DISCUSIÓN
El «Do -ELISA» se ha mos ado como una éc-
nica sensible al acep a como í ulo diagnós ico el
alo 1/800 (sensibilidad 90,3
%).
Su especi ici-
dad es o almen e compa able a la es imada pa a
la inmuno luo escencia indi ec a (IFI), écnica am-
pliamen e u ilizada y es anda izada pa a el es u-
dio de la leishmaniosis canina y humana'?
y
8),
lo
cual con ie e al Do -ELISA en un ins umen o
diagnós ico muy ú il dada su acilidad de ejecu-
ción.
La écnica ha pe mi ido ealiza el c ibado se-
ológico de un g an núme o de animales, que ha
pues o de mani ies o la impo ancia eal de la en-
e medad en la zona es udiada (se op e alencia:
10,2
%).
Des aca el bajo po cen aje de animales
sin omá icos de ec ado en e los animales a ec os
(35 %),
jun o a un po cen aje ele ado
(65 %)
de
animales oligosin omá icos y asin omá icos.
Resal a, además, el ele ado po cen aje (40
%)
de animales con í ulos se ológicos bajos que no
alcanzan el umb al diagnós ico. Es os alo es no
han sido hallados en o os luga es, donde la leish-
maniosis no es una en e medad endémica, u ili-
zando
la
misma écnica se ológica. En e ec o, en
la isla de Meno ca, donde la o alidad de pe os
leishmaniósicos de ec ados p ocedían de o as is-
las de las Balea es o de luga es de la Península Ibé-
ica donde la en e medad es endémica, an sólo
se ob u o 1-2
%
de animales con í ulos que no
alcanzaban el umb al de posi i idad'!". Algo pa-
ecido ocu e en la ciudad de Ba celona donde de
146 animales ecogidos po el Se icio de Zoono-
sis Municipal an sólo
5
die on se ología dudo-
sa(5).Debe señala se en es e caso que, aun cuan-
do el á ea de Ba celona cons i uye un impo an e
oco endémico de leishmaniosis, la en e medad no
alcanza el cen o u bano po no da se en él las con-
diciones
ecológicas
necesa ias pa a
la
supe i en-
cia de los lebo omos y, po lo an o, pa a la ans-
misión y man enimien o del ciclo del pa ási o.
Es os esul ados se ológicos con í ulos dudosos,
poco signi ica i os de una leishmaniosis e olu i-
a, en cambio, pa ecen ecuen es en los ocos ac-
i os de la
en e medad'? y
2).
Pueden co esponde
235
R. Fisa
M. Po ús
M.
Gallego
D.
Valls
MJ. Aisa
38
a animales que se hallan en
la
ase p epa en e de
la in ección, a los in ec ados que desa ollan una
mala espues a humo al, a aquellos que p esen-
an í ulos de ecue do de una leishmaniosis au o-
limi ada y aquellos o os con asas bajas de an i-
cue pos p oducidos como consecuencia de inocu-
laciones epe idas de p omas igo es po pa e de
los lebo omos sin que log a a asen a se una in-
ección e dade a. El seguimien o empo al de di-
chos animales ha pe mi ido comp oba que en e
un
10-20
%
de ellos desa ollan una leishmanio-
sis pa en e y ealizan una se ocon e sión, quedando
en los demás la asa de an icue pos más o menos
es able en el
iempo ".
Po odo ello conside amos que la écnica se o-
El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis
canina en la coma ca del P io a (Ta agona).
lógica desc i a, «Do -ELISA», es un ins umen o
sumamen e e icaz pa a ealiza un diagnós ico á-
pido, sencillo y especí ico, máxime cuando los a-
lo es hallados son í ulos ex emos. Como en oda
écnica se ológica debe, po o o lado, alo a se con
ex ema cau ela los í ulos in e medios, en cuya
in e p e ación debe á ene se siemp e en cuen a
la clínica y la epidemiología.
Ag adecimien os
Los au o es desean ag adece la ines imable colabo ación p es ada po
odos los habi an es de la coma ca del P io a y muy especialmen e la
de sus ue e ina ios, sin la cual el abajo no hab ía podido ealiza se.
El es udio ha sido sub encionado po la CICYT a a és de los p oyec-
os PB86-0546 y SAL90-0960-C02. Pa e del abajo se ha bene iciado
ambién de una ayuda de la CEE, a a és del con a o TS2M-0058-F
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