El diagnóstico serológico de la leishmaniosis canina en la comarca del Priorat (Tarragona)

CLINICA VETERINARIA DE PEQUEÑOS ANIMALES Volumen 12 Núme o 4 Oc ub e/Diciemb e 1992 A ículo O iginal R. Pisa M. Po ús M. Gállego D. Valls MJ. Aisa Labo a o i de Pa asi ología. Facul ad de Fa macia, A da. Diagonal, sIn 08028 Ba celona El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis canina en la coma ca del P io a (Ta agona). 33 RESUMEN Se in es iga la p esencia de an icue pos an i- Leúhmania median e una écnica de «Do - ELISA» en 1. 3 2 8 mues as de sang e p oceden es de 902 pe os de la coma ca del P io a (Ca aluña), impo an e oco de leishmaniosis canina. El umb al de posi i idad pa a la mencionada écnica (11800) se es ablece a pa i de los da os ob enidos al ealiza en pa alelo cul i o y se ología. Los esul ados se ológicos ob enidos pe mi en obse a una asa de p e alencia de la in ección de 10,2 %. Tan sólo el 49,8 % de los sue os es udiados son o almen e nega i os. Al 40 % es an e se le de ec a an icue pos an i- Leúhmania a í ulos in e io es al umb al es ablecido cuyo posible signi icado se discu e. PALABRAS CLAVE Leishmaniosis; Pe o; Diagnós ico se ológico. SUMMARY The p esence o an i-Leishmania an ibodies is s udied in 1328 blood samples om 902 dogs om he P io a egion (Ca a/onia), an impo an ocus o canine leúhmaniosú, by a Do -ELISA echnique. The cu -o (1/800) is es ablúhed h ough he da a ob ained by se ology and cul u e in pa allel. The p e alence o se oposi i es obse ed was 10,2 %. Only 49,8 % o se a we e comple ely nega i e. The emaining 40 % had an i- Leishmania an ibodies a i es below he cu - o , he possible signijicance o which is dúcused. KEY WORDS Leúhmaniosú; Dog; Se ologic dzagnos ic. 231 R. Fisa M. Po ús M. Gallego D. Valls MJ. Aisa INTRODUCCIÓN 34 La leish naniosis canina es una en e medad p e- sen e con ele ada p e alencia en nues o en o no. Es udios ealizados du an e los úl imos años en dis- in os pun os de la geog a ía ca alana han mos- ado que los índices de se op e alencia son muy di e sos en las dis in as zo as'? y 13). Ello es com- p ensible si enemos en cuen a que las leishma- niosis e olucionan en ocos na u ales, limi ados geog á ica y clima ológicamen e, donde Leishma- nia es capaz de ci cula g acias a la p esencia de los elemen os necesa ios pa a segui su ciclo bio- lógico, el ec o (Phlebo omus sp.) y el ese o io (cánidos). En nues as la i udes, el pe o es conside ado el ese o io p incipal del pa ási o, a pesa de que o os animales pueden ambién, ocasionalmen e, halla se pa asi ados po Leishmania (zo os, a- as)(7· 10 y 14). El homb e se conside a que en a en la cadena epidemiológica de modo acciden al. El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis ca- nina es en la ac ualidad una impo an e he a- mien a: a) en es udios epidemiológicos, pa a alo a el al- cance de la enzoo ía canina, en los que se necesi- a de écnicas de c ibado de ejecución sencilla. b) en clínica e e ina ia, dada la no able di e si- dad en el cuad o clínico que p esen an los anima- les leishmaniósicos, la poca sensibilidad de las éc- nicas de examen di ec o y la di icul ad de ealiza écnicas de cul i o en la mayo pa e de las con- sul as e e ina ias. Al igual que pa a la mayo ía de en e medades in ecciosas, las p uebas se ológicas pa a el diagnós- ico de una leishmaniosis pueden da luga a al- sas in e p e aciones, debidas an o a espues as hu- mo ales ano males del hospedado como a p oble- mas inhe en es al mé odo se ológico que se es á empleando, in ínsecos de la écnica o de i ados de los eac i os u ilizados (an ígeno, conjugado, subs a o, e c). En es e abajo se exponen los esul ados se o- lógicos ob enidos en el anscu so de las encues as caninas ealizadas en la coma ca del P io a (Ta- agona), impo an e oco de leishmaniosis cani- na, y su alo ación den o de su con ex o clínico- epidemiológico. 232 El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis canina en la coma ca del P io a (Ta agona). MATERIAL Y MÉTODOS Se han es udiado 902 pe os, en e los años 1987-1990, que p ocedían de 26 localidades de la coma ca del P io a (Ta agona). Las ex acciones de sang e se ealiza on en el anscu so de las campañas de acunación an i- ábica, que se e ec úan habi ualmen e en p ima- e a y p incipios de e ano. Se omó mues a de odos los animales que acudie on a la misma con excepción de los nacidos du an e el in ie no o de aquellos o os pa a los que el dueño no au o izó la ex acción. Ello ha supues o el análisis se ológico de 1.328 mues as de sang e, ya que de algunos animales se ealiza on di e sos con oles en el iempo pa a segui su e olución. Las mues as de sang e se e- cogie on sob e papel de il o (Wha man 3) po la acilidad que ep esen a an o pa a la oma de mues a, como pa a su pos e io aslado y alma- cenaje, siendo los esul ados o almen e compa- ables a los ob enidos con mues as de sue o'? y 16). Pa alelamen e a la oma de mues as se ealizó un examen clínico, isual, del animal, ano ando en la icha co espondien e, jun o a los da os de iliación, las obse aciones pa ológicas ealizadas (lesiones cu áneas, descamación, pé dida de pelo, conjun i i is, onicog iposis, delgadez, e c) o aque- llos que ela aba el dueño (as enía, ano exia, e c). En base a dichos da os, y siguiendo el c i e io de Mancian i y col(9) se ag upa on los animales en asin omá icos, oligosin omá icos y sin omá i- cos. La p ueba se ológica u ilizada ha sido el «Do - ELISA», desc i o y es anda izado inicialmen e po Pappas y col(12)pa a el diagnós ico de la leishma- niosis isce al en el Viejo Mundo. Es una écnica inmunoenzimá ica, de lec u a isual, que p ecisa pequeños olúmenes de an ígeno ijados sob e una memb ana de ni ocelulosa y un subs a o c omo- génico p ecipi able. La écnica ha sido obje o de di e sas modi icaciones po nues a pa e y adap- ada al es udio del ese o io canino u ilizando como an ígeno una suspensión de p omas igo es de la cepa de L. in an um au óc ona, aislada en pe o, MCAN/ES/84/BCN-3 ZMüN-1 y como conjugado la P o eína-A unida al enzima pe oxi- dasa, capaz de uni se con g an a inidad a las in- R. Fisa M. Po ús M. Gallego D. Valls MJ. Aisa 36 • Fijación del amígeno a la ni ocelulosa. Go as de I ui de una suspensión de p o nas igo es a una concen ación de 108/ml en PBS ( ampón os a o pH: 7,2) o mol 1,5 %. • Bloqueo de la placa con TS (T is-salino pH: 7,6)-leche desc emada 5 %. (Las memb anas sensibilizadas pueden gua da se congeladas a-40° C). • Incubación de la mues a (sue o o sang e eluida) a las diluciones de abajo 11100, 11200, ... en TST (Tnssalino- Tween 20 al 0,05 %)-leche desc emada I %. 30 min a 37° C. T es la ados de la memb ana en TST, un la ado en TS. • Incubación del conjugado-P o eína A-pe oxidasa (Sigma) al1l2000 en TST-leche desc emada i %.30 min a 37° C. T es la ados en TST y un la ado en TS. • Re elada con 4 clo o-l- ia ol (Me ck). Tabla I. Pau a de abajo pa a la écnica «Do -ELISA» : '" '- :I: el ." m O n lli » B " , " 1I l»o •• • ''200 " • e • "400 o • o • "lOO •• • "' oO O•• ."3200 • CI • 118400 .-1 G á ica l. Placa .Doc-ELISA. e elada. munoglobulinas de ipo IgG del pe o'!". (Tabla I, G á ica 1). El diagnós ico e iológico se ha ealizado, gene al- men e, en animales con í ulos ele ados de an i- cue pos o con sin oma ología sospechosa, pa a con- i ma la pa asi ación. Se ha basado en el examen di ec o y en el cul i o, en medio NNN, de mues- as omadas de ganglio poplí eo. La p e alencia de la en e medad en la coma ca se ha calculado eniendo en cuen a los esul ados se- 234 El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis canina en la coma ca del P io a (Ta agona). ológicos hallados du an e los años 1988-1989-1990 (1.169 sue os es udiados), donde se engloban la mayo pa e de los animales es udiados, ya que se acep a que los ocos de leishmaniosis canina pe - manecen cons an es du an e la go iempo'> y 8). -De aquellos animales en los que, po una u o a causa, se ealizó más de una de e minación se o- lógica en un mismo año an sólo se u o en cuen- a la que dio el í ulo más ele ado. Se omi ie on, pa a el cálculo de la p e alencia, los 'sue os ob e- nidos de pe os seleccionados en unción de los e- sul ados se ológicos ob enidos con an e io idad. RESULTADOS En la Tabla II se indica la elación exis en e en- e los es pa áme os es udiados: esul ados se- ológicos «Do -ELISA», exp esados en í ulos, sin- oma ología que p esen aba el animal en el mo- men o del análisis y esul ados de los cul i os gangliona es. La abla esume los da os ob enidos de cada pe o, du an e los di e sos años, conside- ándolos como independien es. La ecuencia de aislamien os de Leishmania de mues as omadas de ganglio poplí eo se ha man- enido p ác icamen e cons an e a í ulos >= 1/800, oscilando al ededo del 50 % de posi i idad, sin obse a se inc emen os impo an es al aumen a el í ulo se ológico e independien emen e de la sin oma ología que p esen ase el animal. Des aca el 12 % de posi i idad hallado en animales con í ulo se ológico 1/400 y el po cen aje nulo de po- si i idad hallado en e los animales con í ulo = < 1/200. Po ello se ha conside ado como í ulo diagnós- ico ( í ulo in e io que de ec a una leishmaniosis e olu i a) el í ulo 11800, acep ando la pé dida de un bajo núme o de posi i os a í ulos in e io es, con especial impo ancia a 11400. En la Tabla III se indican las ecuencias de los í ulos se ológicos ob enidos en la coma ca. Pue- de obse a se que se de ec a un 10,2 % de ani- males se oposi i os con í ulo> = 11800, que e- p esen a la p e alencia hallada en la coma ca, jun o aun 40 % de animales con se ologías bajas y un 49,8 % de animales se onega i os. Uni e si a Au ónoma de Ba celona Se ei de Biblio eques Biblio eca de 'e'",nnà l.. CLINICA VETERINARIA DE PEQUEÑOS ANIMALES Volumen 12 Núme o 4 Oc ub e/Diciemb e 1992 El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis canina en la coma ca del P io a (Ta agona). Ti ulas Sin oma ología «Do -ELISA" O +++ To al N° Cleul. N° Cieu/. N° Cieu/. N Cieu/. o/o neg 560 0/3 39 0/1 5 O/O 604 0/4 O 1/100 247 0/5 31 0/3 8 O/O 286 0/8 O 1/200 141 0/6 28 0/5 8 0/3 177 0/14 O 1/400 59 2/5 34 0/14 12 1/6 105 3/25 12 1/800 29 1/2 32 3/12 16 4/6 77 8/20 40 1/1600 70/1 82/4 15 6/8 30 8/13 62 1/3200 31/1 8 2/3 8 1/4 19 4/8 50 >=1/6400 81/2 6 1/3 16 6/10 30 8/15 53 To ales 1.054 5/25 186 8/45 88 18/37 1.328 311107 37 N°: núme o de pe os; C/cul.: cepas de Leishmania aisladas/cul i os gangliona es ealizados; O: asin o ná ico; +: oligosin omá ico; ++: sin omá ico; %: ecuencia de aislamien os. Tabla IT. Resul ados se ológicos «Do -ELISA», sin oma ología y esul ados de los cul i os «Do -ELISA" ( í ulo) neg 11100 11200 11400 11800 111600 113200 >116400 N° sue os (1.169) 582 257 149 62 51 27 15 26 F ecuencia (%) 49,8 22 12,7 5,3 4,4 2,3 1,3 2,2 Tablaill. TI ulas de an icue pos an i-Leishmania ob enidos en el P io a . Tabla de ecuencias DISCUSIÓN El «Do -ELISA» se ha mos ado como una éc- nica sensible al acep a como í ulo diagnós ico el alo 1/800 (sensibilidad 90,3 %). Su especi ici- dad es o almen e compa able a la es imada pa a la inmuno luo escencia indi ec a (IFI), écnica am- pliamen e u ilizada y es anda izada pa a el es u- dio de la leishmaniosis canina y humana'? y 8), lo cual con ie e al Do -ELISA en un ins umen o diagnós ico muy ú il dada su acilidad de ejecu- ción. La écnica ha pe mi ido ealiza el c ibado se- ológico de un g an núme o de animales, que ha pues o de mani ies o la impo ancia eal de la en- e medad en la zona es udiada (se op e alencia: 10,2 %). Des aca el bajo po cen aje de animales sin omá icos de ec ado en e los animales a ec os (35 %), jun o a un po cen aje ele ado (65 %) de animales oligosin omá icos y asin omá icos. Resal a, además, el ele ado po cen aje (40 %) de animales con í ulos se ológicos bajos que no alcanzan el umb al diagnós ico. Es os alo es no han sido hallados en o os luga es, donde la leish- maniosis no es una en e medad endémica, u ili- zando la misma écnica se ológica. En e ec o, en la isla de Meno ca, donde la o alidad de pe os leishmaniósicos de ec ados p ocedían de o as is- las de las Balea es o de luga es de la Península Ibé- ica donde la en e medad es endémica, an sólo se ob u o 1-2 % de animales con í ulos que no alcanzaban el umb al de posi i idad'!". Algo pa- ecido ocu e en la ciudad de Ba celona donde de 146 animales ecogidos po el Se icio de Zoono- sis Municipal an sólo 5 die on se ología dudo- sa(5).Debe señala se en es e caso que, aun cuan- do el á ea de Ba celona cons i uye un impo an e oco endémico de leishmaniosis, la en e medad no alcanza el cen o u bano po no da se en él las con- diciones ecológicas necesa ias pa a la supe i en- cia de los lebo omos y, po lo an o, pa a la ans- misión y man enimien o del ciclo del pa ási o. Es os esul ados se ológicos con í ulos dudosos, poco signi ica i os de una leishmaniosis e olu i- a, en cambio, pa ecen ecuen es en los ocos ac- i os de la en e medad'? y 2). Pueden co esponde 235 R. Fisa M. Po ús M. Gallego D. Valls MJ. Aisa 38 a animales que se hallan en la ase p epa en e de la in ección, a los in ec ados que desa ollan una mala espues a humo al, a aquellos que p esen- an í ulos de ecue do de una leishmaniosis au o- limi ada y aquellos o os con asas bajas de an i- cue pos p oducidos como consecuencia de inocu- laciones epe idas de p omas igo es po pa e de los lebo omos sin que log a a asen a se una in- ección e dade a. El seguimien o empo al de di- chos animales ha pe mi ido comp oba que en e un 10-20 % de ellos desa ollan una leishmanio- sis pa en e y ealizan una se ocon e sión, quedando en los demás la asa de an icue pos más o menos es able en el iempo ". Po odo ello conside amos que la écnica se o- El diagnós ico se ológico de la leishmaniosis canina en la coma ca del P io a (Ta agona). lógica desc i a, «Do -ELISA», es un ins umen o sumamen e e icaz pa a ealiza un diagnós ico á- pido, sencillo y especí ico, máxime cuando los a- lo es hallados son í ulos ex emos. Como en oda écnica se ológica debe, po o o lado, alo a se con ex ema cau ela los í ulos in e medios, en cuya in e p e ación debe á ene se siemp e en cuen a la clínica y la epidemiología. Ag adecimien os Los au o es desean ag adece la ines imable colabo ación p es ada po odos los habi an es de la coma ca del P io a y muy especialmen e la de sus ue e ina ios, sin la cual el abajo no hab ía podido ealiza se. El es udio ha sido sub encionado po la CICYT a a és de los p oyec- os PB86-0546 y SAL90-0960-C02. Pa e del abajo se ha bene iciado ambién de una ayuda de la CEE, a a és del con a o TS2M-0058-F BIBLIOGRAFÍA 1. 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