Cathepsine B provenant de tumeurs pulmonaires humaines: caractérisation cinétique et moléculaire - régulation et signification clinique

Bernd Werle

Je vous en prie, monsieur le docteur. Cathepsine B provenant de tumeurs pulmonaires humaines: caractérisation cinétique et moléculaire - régulation et signification clinique Né le 18 janvier 1963 à Heidelberg Examen de maturité le 7 juin 1983 à Heidelberg nat. W. Ebert La participation de la cystéptidease cathepsine B dans le processus d'invasion et de métastasis tumorales peut aujourd'hui être considérée comme sûre. La microscopie au laser confocale a montré que la peptidase lysosomale Cathepsine B est également présente dans les cellules tumorales, principalement dans les phylopodes, liées à la membrane cellulaire. Cela donne lieu à supposer que la cathepsine B peut exister sous plusieurs formes moléculaires à la fois, et d'autre part, une partie de ces formes est catalytique même à un pH physiologique tel qu'il règne dans l'environnement de la membrane cellulaire.

Afin de confirmer ces dernières hypothèses, des expériences de base ont été menées pour étudier l'activité et la stabilité de la cathepsine B en fonction du pH. En plus de l'activité maximale à pH 6,0 à 6,5 deux épaules ont été observées à pH 4,5 à 5,5 et à pH 7,0 à 7.5.

Il est remarquable de constater une augmentation de l'activité de la cathepsine B dans le pH acide dans les tissus tumoraux. La vérification de la stabilité de la cathepsine B après incubation au pH de 7.5 a révélé une conservation de l'activité de l'enzyme de 82% à 100% des valeurs de base au pH de 5.0 à 5.5, alors que dans la gamme de pH de 5.5 à 7.4 l'activité a considérablement diminué à 26 à 42%. Cependant, à pH 7.5, une activité de 20 à 34% de cathepsine B était toujours présente. Cette activité a été significativement augmentée par rapport à la parenchyme pulmonaire normale dans les tissus tumoraux. La question se pose inévitablement de savoir dans quelle mesure la dépendance du pH modifié démontrée est due à des changements structurels conformes dans une espèce de cathepsine B ou si des isomères de cathepsine associés à la tumeur sont réellement cachés. La sécrétion géloélectrophorétique associée à l'analyse de Western Blood a révélé que la cathepsine B, à la fois tumorale et pulmonaire, avait des formes à double chaîne et à double chaîne de 31/32 kDa, 26/5 et 27/5 kDa respectivement. C'est simple ou pas.

Une double chaîne est attachée à la chaîne lourde de la cathepsine B par un oligosaccharide de 1 kDa de type "highmannose" N-glycosidic. Une différence de masse moléculaire n'a pas pu être constatée sur la base de ces analyses entre les tumeurs et les tissus pulmonaires. À la recherche de différences structurelles beaucoup plus discrètes, la cathepsine B a été analysée à l'aide de la technique de gélectrophoresse 2D. Cathepsine B est présente sous forme de 1 à 3 chaînes singulières avec une masse moléculaire de 32 kDa et des points isoélectriques correspondants de 4,98; 5,21 et 5,32 dans la parénchymie pulmonaire normale. En outre, on a pu trouver les chaînes 1 à 2 lourdes des formes à double chaîne avec une masse moléculaire de 32 kDa et des points isoélectriques de 5,21 et 5,29. En revanche, dans le tissu cancéreux pulmonaire, 3 à 7 formes à chaîne unique de la cathepsine B avec une masse moléculaire de 32 kDa ont été identifiées avec des points isoélectriques correspondants de 4,98; 5,07; 5,21; 5,28; 5,32; 5,40; 5,50. Les deux à trois chaînes lourdes détectables de la forme double chaîne d'une masse de 27 kDa ont pu être attribuées à des points isoélectriques de 5,21; 5,29 et 5,40. Ces résultats montrent un plus grand nombre d' isomères de la cathepsine B dans les tissus cancéreux pulmonaires par rapport à

Il s'agit d'une parénchymie pulmonaire normale. Il est encore remarquable qu'il y ait un plus grand nombre de formes à chaîne simple avec une masse de 32 kDa dans les tissus tumoraux. On a pu détecter 91 paires de tissus, car la fraction B de la cathepsine stable était significativement augmentée dans les tumeurs pulmonaires à un pH de 7.5. La question se pose inévitablement de savoir si cette fraction de cathepsine B associée à la tumeur est liée à des facteurs de pronostic classiques. Cependant, l'étude a révélé que l'expression de l'activité de la cathepsine B à pH 7,5 n'était pas correlative avec l'histologie et le stade tumoral (stades TNM) ni avec des facteurs secondaires de pronostic tels que le sexe, l'âge ou le comportement de fumer. Étant donné que cette fraction de cathepsine B est néanmoins associée à la croissance maligne, le fait que les patients atteints de cancers des plaquettes et d'activités de cathepsine B avec plus de 292 [@EU/mg] aient présenté une durée de vie post-opératoire significativement plus courte (p< 0,05) que ceux atteints d'activités enzymatiques inférieures à cette limite.

La détermination du taux de conversion du substrat objectivée par le K

- Wert ergab 0,4 mM für die

Forme à chaîne unique et 0,2 mM pour la forme à chaîne double de Cathepsine B. Des différences dans les valeurs K de Cathepsine B dans les tissus tumoraux et pulmonaires n'ont pas été observées. Néanmoins, nous constatons une conversion plus rapide de la forme simple en chaîne à la forme double en chaîne de la cathepsine B provenant des tissus tumoraux par rapport à l'enzyme pulmonaire correspondante.