G2-Arest und G2-Verlagerung in Fanconi-Anämie-Zellen durch Fluoreszenz-In-Situ-Hybridisierung
Carola Rohrbeck
Dr. med. -Arrest und G -Verlösung in Fanconi-Anschmie-Zellen, dargestellt mit Fluoreszenz-in-Situ-Hybridisierung am 07.11.1971 in Hamburg geboren Reifepr fung am 21.06.1991 in Hamburg Studiengang des Fachbereichs Medizin von SS 1992 bis SS 1998 Physik am 15.03.1994 an der Universität Heidelberg Klinische Studie in Heidelberg Praxisjahr in Ludwigsburg und in Z richtige staatliche Untersuchungen am 09.11.98 an der Universität Heidelberg Doktorat: Hirngenie Doktorat: Prof. Dr. med. C. R. Bartram Fancomi-Anschmie ist eine psychisch-essive Erkrankung, die sich meist schon im Kindereich TŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠ ŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠ ŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠ ŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠ ŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠŠ
In dieser Arbeit wurde die FISH-Analyse (Fluoreszenz-in-Situ-Hybridisierung) eingesetzt,
Fanconi-Anschmie-Patienten, um Abweichungen des Zellzyklus zu messen.
Zwei diagnostische Methoden: der DEB-Test und die Durchflusszytometrie
gegen
FISH ermöglicht es, die Kerne einer Blutkultur, die sich in der G-Phase des Zellzyklus befindet, quantitativ zu bestimmen. Eine G-Verringerung von Fanconi-Anschmie-Zellen erfolgt in einem erhöhten G-Phase-Teil.
Für die Fanconi-Anschmie-Diagnostik mit dem FISH wird empfohlen, eine
Sie werden in der letzten S-Phase auf eine DNA-Sequenz repliziert, die sich auf eine DNA-Sequenz hybridiert, die sich repliziert.
Um die Replikationszeit dieses sogenannten SpŠt-Replikationssonden zu bestimmen
Es wurden DNA-Einbau-Studien mit Chlor- und Jod-Uridin ermittelt.
Durchschnitt
Die Ergebnisse zeigten, daß die
Cosmid für die Diagnose
In dieser Studie wurden 35 Personen, von denen 15 an Fanconi-Anschmie vermutet wurden, der FISH-Analyse unterzogen. Der Test ergab 15 positive und 20 negative Patienten. Alle 35 Personen wurden ebenfalls einem DEB-Test und zum Teil auch einem Durchflusszytometrischen Test unterzogen.
Auf einer EBV-transformierten Fanconi-Zelle wurde durch die gleiche DNA
Die Einbautechnik wurde festgestellt, da es innerhalb einer Kultur von Fanconi-AnSmie-Zellen eine
Es gibt eine Population, die einen normalen Zellzyklus durchläuft, und eine andere Population, die
ein deutliches G
Diese Bevölkerung befindet sich unter den
Ruhige (inaktive) Zellen, die keine gekennzeichneten Nukleotide einbauen, weil sie die S-Phase
Sie werden nicht durchlaufen.
R die Diagnose auf gekennzeichneten Preparaten nur die
Das Ergebnis bei Fanconi-AnSmie-
Patienten haben im Durchschnitt ein Dreifaches der
Anteil der Kernstoffe mit
Doppelpunktssignale (35,5%) gegenüber
Die FISH-Analyse auf unmarkierten Kernen zeigt einen 1,4fachen höheren Anteil an Kernen mit Doppelpunkten in Fanconi-Anschmie-Patienten (41,9%) gegenüber dem gleichen Anteil in gesunden Patienten (35,9%).
Bei der Auswertung der FISH auf dem Fluoreszenzmikroskop fiel neben den einzelnen und
Doppelpunktssignale auch fadenf
Es wurde eine Reihe von Hybridisierungssignalen aufgenommen.
Die Frage ist, wie sie interpretiert werden sollen und ob sie in einer bestimmten Zellzyklusphase entstehen. Durch die Einbindung von Chlor und Jod uridin in die DNA konnte gezeigt werden, da diese Hybridisierungssignale typischerweise in Kernen zu sehen sind, die gerade die S-Phase durchlaufen. Dies ist ein Hinweis darauf, da es sich um Replikationsfiguren handelt.
Obwohl die Zellzyklusbestimmungen in dieser Arbeit keine Fehldiagnosen lieferten,
Es wird erwartet, dass bei einigen Fälle eine falsch-negative Diagnose gestellt wird, wenn
Patienten mit Mosaik, die in der Literatur beschrieben wurden
sind schlechte und leukologische Patienten, die aufgrund von
in der Vergangenheit
Proliferationsrate nicht G
- mehr Verringerung aufweisen,
Mit den Fischen und auch
mit allen anderen Methoden, die eine G
Seit der Klonierung zweier Fanconi-Anämie-Gene (FAA und FAC) ist es ähnlich, FA-Patienten, die durch Mutationen in diesen beiden Genen charakterisiert sind, auch mit molekularen genetischen Verfahren zu diagnostizieren. Diese Verfahren bieten eine hohe Sicherheit. Auch eine genetische Therapie setzt den Nachweis des molekularen Defekts voraus. Trotz aller Vorteile der molekularen Verfahren werden die Funktionsprüfungen für die Fanconi-Anämie-Diagnostik, für die auch die FISH-Analyse verwendet wird, ihre Anwendung finden.