Untersuchungen zu den Eigenschaften und Funktionen von Gangliosid-abbauenden Sialidasen verschiedener Zellkulturen
Kathrin Niemann
Dr. Med. Untersuchungen zu Eigenschaften und Funktion von Gangliosid-abbauenden Sialidasen verschiedener Zellkulturen Geboren am 28.12.1971 an der Universität Heidelberg Reifeprüfung am 29.05.1991 in Hildesheim Medizinische Fakultät Studiengang von WS 1991/92 bis WS 1997/98 Physik am 15.09.1993 an der Universität Saarland Klinische Studie in Heidelberg Praxisjahr in Menziken/Schweiz, Louisville/USA, Heidelberg State Examen am 11.11.1997 an der Universität Heidelberg Promotion: Doktorat: Prof. Dr. Med. Michael Cantz Ganglioside, Sialzurehaltige Glykolipide, sind in den Muttermembeln aller Vertebrata und höheren Invertebrata übertragen.
Der Gangliosidkatabolismus und damit auch die Regulierung des Gangliosidmusters
Es wird unter anderem über Gangliosid-spezifische Sialidase-Enzyme durchgeführt, die
Abspaltung von Sial-Säure-Resten von den Gangliosid-Oligysaccharidketten und deren Funktion
Das Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung von Gangliosid-GM3-Sialidasen.
Von HeLa-Zellen, von menschlichen Hautfibroblasten und von transformierten Mäusen
Eine weitere Charakterisierung von Fibroblasten und eine Beziehung zwischen
Das Ziel ist es, das Zellwachstum und die Aktivität von GM3-Sialidase zu untersuchen. In Fibroblasten konnte bereits früher mit unterschiedlichen Detergenten die Differenzierung zwischen lysosomalen und plasma-membran-gebundenen GM3-Sialidase durchgeführt werden.
Während dieser Zeit blieben beide Sialidase auf einem konstanten Aktivitätsniveau. Für die Messungen in HeLa-Zellen war es notwendig, die Methoden, die bereits zur Differenzierung der verschiedenen Gangliosid-GM3-Sialidase in Fibroblasten verwendet wurden, in HeLa-Zellen zu etablieren. Durch Cu-Ionen-Inhibition und Plasma-Membranisolation konnte gezeigt werden, dass der Detergen Triton X-100 speziell ein Plasma-Membran-gebundenes Enzym aktiviert. Dag konnte nachgewiesen werden, dass mit dem Detergen Glycodesoxycholat neben einem intelleulären, wahrscheinlich lysosomalen Enzym auch Plasma-Membran-gebundenes Aktivität gemessen werden kann.
Mit Hilfe der sensiblen Tests wurde eine Korrelation zwischen Zellwachstum und
Die Wachstumskinetik der HeLa-Behandlung wird untersucht, um die Aktivität von Plasmembran-Bindung von Sialidase zu untersuchen.
Zellen wurden auf den DNA-Gehalt festgesetzt.
Die Wachstumsphase konnte mit zunehmender Zelldichte einen Anstieg der Plasma-Membran-
Sie werden auf das Doppelte der Ausgangsaktivität gemessen, während die
Nucleotidase als Kontrollenzym für das Plasma-Membran in allen Wachstumsphasen eher
Die Inkubation von HeLa-Zellen in Anwesenheit von
Sialidase-Inhibitoren 2-Desoxy-2,3-Dehydro-N-Acetylneuramisäure (NeuAc2en) reduzierten
Die Zellen, die behandelt wurden, wuchsen deutlich.
Sialidase-Inhibition eine Veränderung der Morphologie der HeLa-Zellen beobachtet, die
durch eine fibroblastische Form mit
Neuritenähnliche
Das ist eine sehr gute Weiterentwicklung.
Erläuterung der Frage, ob NeuAc2en Differenzierungsprozesse in HeLa-Zellen induzieren kann,
Die Ausdrucksweise des Differenzierungsmarkers Keratin in NeuAc2en wurde untersucht.
Zellen mit der Keratinexpression von dbcAMP- und BrdU-behandelten Zellen verglichen. Bei der West-Blot konnte festgestellt werden, dass NeuAc2en das Muster der ausgedrückten Keratine anders verändert als die Differenzierungsinduktoren dbcAMP und BrdU. Welche molekularen Prozesse zu diesem Phänomen führen, blieb unklar und könnte das Ziel weiterer Forschung sein.
Insgesamt deuten die vorliegenden Ergebnisse darauf hin, dass die Gangliosid-spezifischen
Plasmamembran-Sialidase-Aktivität der HeLa-Zellen Einfluss auf die Proliferation und
Bei Sialidase-Bestimmungen in transformierten Maus-Fibroblasten und nicht-transformierten menschlichen Fibroblasten konnte kein signifikanter Zusammenhang zwischen der Höhe der Plasmamembran-Sialidase-Aktivität und der Transformation nachgewiesen werden, während die lysosomale Sialidase-Aktivität nach der Transformation deutlich niedriger war als die der nicht-transformierten Zellen.