Sviluppo e valutazione di un metodo di diagnosi diretta di Helicobacter pylori da campioni di stufa mediante polymerase chain reaction (PCR)
Udo Kronberg
Dr. med. Sviluppo e valutazione di un metodo di diagnosi diretta per Helicobacter pylori da campioni di stufa mediante la reazione a catena di polimerasi (PCR) nato il 24 ottobre 1970 in Stage di maturità di prova il 9 maggio 1990 a Ettlingen corso di studio della facoltà di medicina dal WS 1991/92 al SS 1998 Fisica il 30 agosto 1993 studio clinico a Heidelberg
Questo dovrebbe essere fatto con una reazione a catena polimerasi da campioni di stoffa di pazienti infetti.
Successivamente alla selezione di coppie di primari sensibili (nel protocollo finale vengono utilizzati primari rivolti al gene 16S-rRNA di Helicobacter pylori) è stato difficile trovare un metodo appropriato per preparare e purificare il DNA batterico dalla sospensione di stoffa in modo da rimuovere in modo sufficiente gli inibitori PCR abbondanti presenti nella sospensione di stoffa.
Dopo numerosi tentativi di modificare il metodo con diversi altri
Il protocollo definitivo si è rivelato un processo di pulizia che comprende una serie di processi di pulizia.
Pre-purificazione della sospensione della sedia con centrifugazione a bassa velocità
Sostanze di solvente, il successivo arricchimento dei batteri nell'interfase di
Centrifugation a due fasi che permette ai germi di separarsi bene dal resto della sospensione della sedia
la preparazione del DNA con un set di colonne spin commerciali (QIAamp)
"Blood Kit", Fa. QIAGEN, Hilden) con successiva pulizia del DNA con CTAB. Questo metodo permette di rilevare, nel caso più conveniente, 10 batteri in 100 mg di seta, che è considerato soddisfacente. Nel corso di un ulteriore percorso, il nuovo metodo è stato valutato rispetto ad altri metodi diagnostici, come l'esame di biopsie gastriche con cultura e PCR, nonché l'esame serologico del paziente per gli anticorpi di Helicobacter pylori. Sono stati esaminati campioni complessivi di 41 pazienti, di cui 17 erano positivi per Helicobacter pylori.